CN109580925A - 一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，属于反应促进剂技术领域，成分包括：溴化己二甲铵、聚乙二醇、葡聚糖、Brij35或曲拉通‑405中一种以及氯化镁或氯化铁中一种，所述溴化己二甲铵的含量为0.05％‑0.4％(w/v)，所述聚乙二醇为聚乙二醇2000‑8000且含量为0.2‑8g/L，所述葡聚糖为葡聚糖4000‑12000且含量为0.2‑6g/L，所述Brij35或曲拉通‑405的含量为1g/L‑25g/L，所述氯化镁或氯化铁的含量为10‑80mmol/L。本发明可以改善检测试剂盒的稳定性、重复性、准确度、检测灵敏度等，提高在临床检测方面的应用性。

Description

一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂

技术领域

本发明属于反应促进剂技术领域，具体涉及一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂。

背景技术

反应促进剂是可以提高反应率的一类用量很少的物质，常与表面活性剂或者催化剂联用进而发挥作用。反应促进剂种类繁多，包括噻唑类、秋兰姆类、次磺酰胺类、胍类、醛胺类等。

诊断试剂是指采用免疫学、微生物学、分子生物学等原理或方法制备的、在体外用于对人类疾病的诊断、检测及流行病学调查等的诊断试剂。诊断试剂可分为体内诊断试剂和体外诊断试剂两大类。除用于诊断的如旧结核菌素、布氏菌素、锡克氏毒素等皮内用的体内诊断试剂等外，大部分为体外诊断制品，其定量检测是通过试剂中的有效组分与待测样本发生反应而获得。

目前，体外诊断试剂盒在临床检测方面仍然面临如何提高试剂盒稳定性、精确性等一些问题，亟待解决，所以，怎样保证试剂与样本二者之间的充分反应，提高测定的准确性是目前关键所在。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，通过中和电荷、助溶、加速等作用原理，可以改善检测试剂盒的稳定性、重复性、准确度、检测灵敏度等，提高在临床检测方面的应用性。

本发明提供了如下的技术方案：

一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，成分包括：溴化己二甲铵、聚乙二醇、葡聚糖、Brij35或曲拉通-405中一种以及氯化镁或氯化铁中一种，所述溴化己二甲铵的含量为0.05％-0.4％(w/v)，所述聚乙二醇为聚乙二醇2000-8000且含量为0.2-8g/L，所述葡聚糖为葡聚糖4000-12000且含量为0.2-6g/L，所述Brij35或曲拉通-405的含量为1g/L-25g/L，所述氯化镁或氯化铁的含量为10-80mmol/L。

优选的，所述溴化己二甲铵的含量为0.05％-0.35％(w/v)，所述聚乙二醇为聚乙二醇2000-6000且含量为0.5-6g/L，所述葡聚糖为葡聚糖4000-6000且含量为0.5-4g/L，所述曲拉通-405的含量为3g/L-20g/L，所述氯化镁的含量为15-50mmol/L。

优选的，成分包括：0.20％(w/v)的溴化己二甲铵、1g/L的聚乙二醇6000、0.8g/L的葡聚糖4000、15g/L的曲拉通-405和15mmol/L的氯化镁。

优选的，成分包括：0.35％(w/v)的溴化己二甲铵、2g/L的聚乙二醇6000、1g/L的葡聚糖4000、18g/L的曲拉通-405和20mmol/L的氯化镁。

优选的，成分包括：0.15％(w/v)的溴化己二甲铵、0.5g/L的聚乙二醇6000、0.5g/L的葡聚糖4000、10g/L的曲拉通-405和10.5mmol/L的氯化镁。

一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂的制备方法是：聚乙二醇与葡聚糖分别加去离子水溶解，待完全溶解后，得混合液，然后，将其余各组分充分溶解，并加入至混合液中，混匀后即可。

本发明的有益效果是：

(1)本发明中的溴化己二甲铵又名聚凝胺，是一种带有高价阳离子的聚合物，溶解后能产生大量正电荷，可有效中和试剂中的负电荷，使得静电斥力减弱，利于试剂与样本二者之间的相互作用。

(2)本发明中的葡聚糖是以葡萄糖为单糖组成的同型多糖，具有较高的分子量；聚乙二醇(PEG)是一种ph中性、水溶性较高的亲水聚合物，根据平均分子量的不同，分为PEG300至PEG6000等；聚乙二醇、葡聚糖都是一类高分子量物质，能够促进试剂中各组分溶解，并且加速反应进程。

(3)本发明中的Brij35或曲拉通-405是一类表面活性剂，通过降低水的表面张力，提高试剂中各组分的可溶性。

(4)本发明中的镁离子或铁离子是多种酶系统的辅因子和激活剂，提高反应体系中酶的活性，加快反应进程。

(5)本发明的复合反应促进剂通过中和电荷、助溶、加速等作用原理，可以改善检测试剂盒的稳定性、重复性、准确度、检测灵敏度等，提高在临床检测方面的应用性。

具体实施方式

实施例1

一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，成分包括：0.20％(w/v)的溴化己二甲铵、1g/L的聚乙二醇6000、0.8g/L的葡聚糖4000、15g/L的曲拉通-405和15mmol/L的氯化镁。

实施例2

一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，成分包括：0.35％(w/v)的溴化己二甲铵、2g/L的聚乙二醇6000、1g/L的葡聚糖4000、18g/L的曲拉通-405和20mmol/L的氯化镁。

实施例3

一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，成分包括：0.15％(w/v)的溴化己二甲铵、0.5g/L的聚乙二醇6000、0.5g/L的葡聚糖4000、10g/L的曲拉通-405和10.5mmol/L的氯化镁。

以上实施例1-实施例3中的用于体外诊断试剂的复合反应促进剂的制备方法是:聚乙二醇与葡聚糖分别加去离子水溶解，待完全溶解后，得混合液，然后，将其余各组分充分溶解，并加入至混合液中，混匀后即可。另外作用原理如下：

溴化己二甲铵又名聚凝胺，是一种带有高价阳离子的聚合物，溶解后能产生大量正电荷，可有效中和试剂中的负电荷，使得静电斥力减弱，利于试剂与样本二者之间的相互作用。葡聚糖是以葡萄糖为单糖组成的同型多糖，具有较高的分子量；聚乙二醇(PEG)是一种ph中性、水溶性较高的亲水聚合物，根据平均分子量的不同，分为PEG300至PEG6000等；聚乙二醇、葡聚糖都是一类高分子量物质，能够促进试剂中各组分溶解，并且加速反应进程。曲拉通-405(可以使用Brij35代替)是一类表面活性剂，通过降低水的表面张力，提高试剂中各组分的可溶性。镁离子(可以使用铁离子代替)是多种酶系统的辅因子和激活剂，提高反应体系中酶的活性，加快反应进程。所以，本发明的复合反应促进剂通过中和电荷、助溶、加速等作用原理，可以改善检测试剂盒的稳定性、重复性、准确度、检测灵敏度等，提高在临床检测方面的应用性。

实验例

以同型半胱氨酸(HCY)检测试剂盒为例，以东软威特曼生物科技(南京)有限公司的HCY检测试剂盒为对照试剂盒，本公司试剂盒为包含试剂1(R1)、试剂2(R2)的双试剂试剂盒，R1主要组成成分为乳酸脱氢酶35KU/L、L-丝氨酸(L-Serine)0.76mmol/L、还原型辅酶Ⅰ0.47mmol/L、三(2羟乙基)磷氯化氢0.5mmol/L，R2主要组成成分为胱硫醚-β-合成酶20KU/L、胱硫醚-β-裂解酶10KU/L。

另取本公司相同的HCY检测试剂盒在原配方的基础上在实际1(R1)中添加实施例1中获得的复合反应促进剂为测试试剂盒(试剂1与复合反应促进剂体积比为148:1)，根据相关技术要求进行分析性能测试，测试结果如下：

实验例1--准确度测试

以高值、中值、低值质控品为样本，对测试试剂盒(测试组)与对照试剂盒(对照组)进行测试，重复3次，计算均值和相对偏差，测定结果如下表1：

表1准确度测试结果

根据《同型半胱氨酸体外诊断试剂技术要求》，相对偏差应不超过±10％，对照组和测试组结果都能满足要求，但测试组测试相对偏差较小，准确度更高。

实验例2--重复性测试

在重复性条件下，用低值和高值样本，测试对照试剂盒(对照组)与测试组试剂盒(测试组)，重复测定10次，计算平均值和标准差，测定结果如下表2：

表2重复性测试结果

结果可以看出，测试组测试变异系数低于对照组，且满足《同型半胱氨酸体外诊断试剂技术要求》的变异系数(CV)≤10％，说明测试组的重复性更优。

实验例3--灵敏度测试

对照组(采用对照试剂盒)与测试组(采用测试试剂盒)分别对5个不同浓度的样本进行测定，记录对比测定结果，如表3所示：

表3灵敏度测试结果

理论浓度umol/L	对照组umol/L	测试组umol/L
			0	0.02	0
15	7.23	15.23
			20	20.13	20.35
25	24.78	25.21
			30	31.04	30.34

由结果可以看出，对照组对低浓度样本测定结果不准确，最低检测浓度为20umol/L；测试组检测结果较好，最低检测浓度可达15umol/L，由此可见测试组分析灵敏度较高，也就是本发明的复合反应促进剂达到了提高试剂盒灵敏度的作用。

实验例4--稳定性测试

2-8度开盖稳定性测试：采用测试试剂盒一瓶，打开试剂瓶瓶盖，2-8度保存，每隔一周测定质控品，连续一个月，并记录数据如表4所示：

表4稳定性测试结果

结果表明，本试剂盒在开封后，2-8度开盖保存条件下，一个月内准确度保持良好，说明稳定性较好。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，其特征在于，成分包括：溴化己二甲铵、聚乙二醇、葡聚糖、Brij35或曲拉通-405中一种以及氯化镁或氯化铁中一种，所述溴化己二甲铵的含量为0.05％-0.4％(w/v)，所述聚乙二醇为聚乙二醇2000-8000且含量为0.2-8g/L，所述葡聚糖为葡聚糖4000-12000且含量为0.2-6g/L，所述Brij35或曲拉通-405的含量为1g/L-25g/L，所述氯化镁或氯化铁的含量为10-80mmol/L。

2.根据权利要求1所述的一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，其特征在于，所述溴化己二甲铵的含量为0.05％-0.35％(w/v)，所述聚乙二醇为聚乙二醇2000-6000且含量为0.5-6g/L，所述葡聚糖为葡聚糖4000-6000且含量为0.5-4g/L，所述曲拉通-405的含量为3g/L-20g/L，所述氯化镁的含量为15-50mmol/L。

3.根据权利要求2所述的一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，其特征在于，成分包括：0.20％(w/v)的溴化己二甲铵、1g/L的聚乙二醇6000、0.8g/L的葡聚糖4000、15g/L的曲拉通-405和15mmol/L的氯化镁。

4.根据权利要求2所述的一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，其特征在于，成分包括：0.35％(w/v)的溴化己二甲铵、2g/L的聚乙二醇6000、1g/L的葡聚糖4000、18g/L的曲拉通-405和20mmol/L的氯化镁。

5.根据权利要求1所述的一种用于体外诊断试剂的复合反应促进剂，其特征在于，成分包括：0.15％(w/v)的溴化己二甲铵、0.5g/L的聚乙二醇6000、0.5g/L的葡聚糖4000、10g/L的曲拉通-405和10.5mmol/L的氯化镁。