CN101556222A - 一种样本处理液及其配制方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种样本处理液，包括牛血清白蛋白和盐离子物质，牛血清白蛋白的浓度为1－50mg/ml，盐离子物质的浓度为5－200mg/ml。本发明的样本处理液中还可以包括表面活性剂。本发明能够使样本在检测前被充分预处理，排除影响检测反应的不利因素，降低流感检测的假阳性，提高检测的精确性。

Description

一种样本处理液及其配制方法和应用

技术领域

本发明涉及免疫检测用的样本处理液，尤其是用于流感病毒检测中的样本预处理。

背景技术

流行性感冒病毒简称流感病毒，是引起流感的病原体，流感是一种上呼吸道急性传染病，它传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高。已引起数次世界性大流行，对人类的生命健康危害极大。

随着流感实验技术的发展，流感快速诊断技术也不断进步，不仅实验方法更加敏感，实验时间也不断缩短：最传统的病毒分离培养法数天可报告实验结果，酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫荧光实验当天可报告实验结果。这些检测需要依赖于医院或精密的仪器，操作比较复杂。

目前市面上，有一种更为简单的检测工具，流感病毒胶体金法快速诊断试剂盒可以在更短时间内完成整个实验。然而由于流感病毒的样本，通常选用鼻涕，痰液或者咽喉擦拭液，当这些样本通过免疫的方法进行检测时，样本中存在的高粘性物质会堵塞多孔膜的孔。另外，这些高粘性物质还可能通过与人体脱落的上皮粘膜细胞结合在一起，进一步堵塞多孔膜，造成免疫检测的不精确甚至无法进行。

发明内容

为了克服以上现有技术存在的缺陷，进行了本发明。本发明较现有技术相比，能够使样本在检测前被充分预处理，排除影响检测反应的不利因素，降低流感检测的假阳性，提高检测的精确性。

本发明提供了一种样本处理液，包括牛血清白蛋白和盐离子物质，

优选的，所述的牛血清白蛋白的浓度为1-50mg/ml，所述的盐离子物质的浓度为5-200mg/ml。

优选的，所述的盐离子物质包括氯化钠或氯化钾。

更为优选的，所述的氯化钠的浓度为20-50mg/ml；所述的牛血清白蛋白浓度为5-20mg/ml。

在另一个实施方式中，所述的样本处理液包括表面活性剂。

优选的，所述的样本处理液包括两性表面活性剂。

同样优选的，所述的表面活性剂选自于聚氧乙烯月桂醇醚、乙烯基二元胺共聚物、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物、异丙胺烷基苯磺酸盐中的一种或几种。

在另一个实施方式中，所述的样本处理液还包括生物缓冲物和防腐剂。

优选的，所述的生物缓冲物选自于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸、二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷-丙烷中的一种或几种；所述的防腐剂选自于叠氮钠、庆大霉素、卡那霉素、硫柳汞钠、氨苄青霉素中的一种或述的叠氮化钠的浓度为0.1-1mg/ml。

本发明还提供一种配制样本处理液的方法，在溶剂中加入一定量的牛血清蛋白和盐离子物质。

优选的，所述的牛血清白蛋白的浓度为1-50mg/ml，所述的盐离子物质的浓度为5-200mg/ml。

本发明还提供一种检测试剂盒，包括可以快速检测样本中是否含有被分析物质的横向流动检测装置和样本处理液，所述的样本处理液包括牛血清白蛋白和盐离子物质。

优选的，所述的牛血清白蛋白的浓度为1-50mg/ml，所述的盐离子物质的浓度为5-200mg/ml。

本发明取得的有益效果是：能够使样本在检测前被充分预处理，排除影响检测反应的不利因素，降低流感检测的假阳性，提高检测的精确性。

具体实施方式

下面对本发明中所使用的技术术语做进一步的说明。

检测

检测表示化验或测试一种物质或材料是否存在，比如，但并不限于此，化学物质、有机化合物、无机化合物、新陈代谢产物、药物或者药物代谢物、有机组织或有机组织的代谢物、核酸、蛋白质或聚合物。另外，检测表示测试物质或材料的数量。进一步说，化验还包括免疫检测，化学检测、酶检测等。

样本

本发明所指的样本指那些可以用来检测、化验或诊断是否存在感兴趣的被分析物质的物质。样本可以是，例如，液体样本，液体样本可以包括血液、血浆、血清、尿液、唾液和各种分泌液，还可以包括固体样本和半固体样本经过预先处理后形成的液体溶液。收集来的样本可以用于免疫检测、化学检测、酶检测等方法来检测是否存在被分析物质。样本优选如鼻涕，痰液，咽喉擦拭液等。对于采集这些样本没有特别的限制，一般可以采用常规方法，比如可以用棉签采集，也可以用专用的收集器。

流感病毒

本发明的检测对象是样本中的物质，特别是流感病毒。流感病毒可以使通常定义下的，没有特别的限制。流感病毒属于正粘病毒科。流感病毒颗粒呈球形，由外膜和包围于其中的核衣壳组成。外膜的主要成份是脂质，其内表面为一层作为基质的蛋白质，外表面有血凝素和神经氨酸酶两种糖蛋白突起，这些糖蛋白突起是流感病毒抗原结构的主要成分，同时也是流感疫苗的重要组成部分。核衣壳由RNA(核糖核酸)、核蛋白以及多聚酶组成，依据核蛋白的抗原性，流感病毒分为甲、乙、丙三型。以甲型的流行规模最大，乙型次之，丙型极少引起流行，因而检测甲型和乙型流感显得尤为重要。

样本处理液

样本可以在检测前被预处理。预处理的溶液，可以包括牛血清白蛋白(BSA)和盐离子物质。

牛血清白蛋白(简称BSA)，是血液的主要成分(38g/100ml)，分子量68kD。等电点4.8。含氮量16％，含糖量0.08％，仅含己糖和己糖胺，含脂量只有0.2％。牛血清白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。在样本处理液中加入BSA，BSA的浓度可以是1-50mg/ml之间，优选的，BSA的浓度在5-20mg/ml之间。更为优选的，BSA的浓度为5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml或20mg/ml。BSA上有多个结合位点，可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。尤其可以和样本中的非特异性物质结合在一起，即封闭非特异性位点，可以避免样本和非特异性物质的结合，起到生理和机械保护作用，抵消由非特异性物质引起的假阳性现象。

盐离子物质，可以是还有无机盐离子的物质，比如氯化钠、氯化钾、氢氧化钠、氢氧化钾、EDTA钠盐、叠氮化钠中一种或者几种物质的组合。盐离子物质的浓度可以是5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、80mg/ml、100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml。优选的，盐离子的浓度为20-50mg/ml，如20mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml或50mg/ml。更为优选的，盐离子物质为氯化钠，浓度为20-50mg/ml。盐离子可以除去样本中，尤其是鼻涕，唾液或者咽喉擦拭液中的粘性物质，使粘性物质沉降，不影响样本在试剂条上的流动和渗透。

样本处理液还可以包括各类表面活性剂。表面活性剂能显著改变液体表面张力或两相之间的界面张力。本发明中的表面活性剂，可以采用非离子型的表面活性剂，如聚氧乙烯月桂醇醚(商品名ChemalLA-9)、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物(Pluronic)、异丙胺烷基苯磺酸盐(Ninate)、聚乙二醇辛基苯基醚(OP)脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚和聚乙二醇等，也可以采用离子型的表面活性剂，如十烷基三甲基氯化铵(DTMAC)、十二烷基三甲基氯化铵(DTAC)、十四烷基三甲基氯化铵(TTAC)、十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)、十八烷基三甲基氯化铵(OTAC)及十二烷基硫酸钠(SDS)等。优选的，样本处理液中还可以加入两性表面活性剂，比如乙烯基二元胺共聚物(商品名Tetronic)。以上表面活性剂均可使样本与预处理液混合均匀的作用。以上表面活性剂的浓度可以在0.1-15mg/ml之间。

本发明的样本处理液还可以包括生物缓冲物品，浓度在3-30mg/ml之间，如三羟甲基氨基甲烷(Trizma Base)、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris盐酸)、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸(MOPSO)、二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷-丙烷(BPT)等。

本发明的样本处理液还可以包括防腐剂，有效延长样本处理液的保质时间。防腐剂可是选自于山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、二氧化碳、硝酸盐、亚硝酸盐、亚硫酸等。优选的，防腐剂选自于叠氮钠，庆太霉素，卡那霉素，硫柳汞，氨苄青霉素等之一或其组合。优选的，叠氮钠浓度可以是0.1-1mg/ml，庆大霉素浓度可以是0.01-0.1mg/ml，卡那霉素浓度可以是0.01-0.1mg/ml，硫柳汞钠浓度可以是0.1-1mg/ml，氨苄青霉素浓度可以是0.01-0.1mg/ml。更优选的，叠氮钠浓度可以是0.2mg/ml，庆大霉素浓度可以是0.02mg/ml，卡那霉素浓度可以是0.05mg/ml，硫柳汞钠浓度可以是0.2mg/ml，氨苄青霉素浓度可以是0.05mg/ml。样本处理液中可以含有以上浓度的其中之一种防腐剂，也可以两两组合或者两种以上组合作为防腐剂存在。

本发明还提供一种配制以上所述样本处理液的方法，在水中加入一定量的牛血清蛋白和盐离子物质。优选的，牛血清白蛋白的浓度为1-50mg/ml，盐离子物质的浓度为5-200mg/ml。

本发明还提供一种检测试剂盒，包括可以快速检测样本中是否含有被分析物质的横向流动检测装置和如上所述的样本处理液，样本处理液包括牛血清白蛋白和盐离子物质。优选的，牛血清白蛋白的浓度为1-50mg/ml，盐离子物质的浓度为5-200mg/ml。优选的，这种检测试剂盒可以用于流感A型或者B型的检测。更为优选的，这种检测试剂盒可以同时用于检测感A型和流感B型。更为优选的，横向流动检测装置为流感病毒胶体金法快速诊断试剂装置。

下面结合具体实施例对本发明来进行详细的说明。这些具体的实施例子仅仅是在不违背本发明精神下的有限列举，并不排除本领域的一般技术人员把现有技术和本发明结合而产生的其他具体的实施方案。

实施例一

本实施例以检测流感病毒为对象，样本处理液的配方为不同浓度的BSA和NaCl，浓度单位为mg/ml。

1.样本处理液的配比。其中，BSA的浓度分别为5mg/ml、15mg/ml、25mg/ml、35mg/ml；NaCl的浓度分别为10mg/ml、25mg/ml、35mg/ml、45mg/ml和50mg/ml。根据不同浓度配比成不同的样本处理液。

2.选用流感检测中两种不同类型的流感的标准品溶液，如Flu A弱阳性标准品、Flu B弱阳性标准品、FluA强阳性标准品、Flu B强阳性标准品和Flu阴性标准品。

3.快速诊断检测。使用流感病毒胶体金法快速诊断试剂盒，包括流感病毒胶体金法快速诊断试剂条(Flu A+B)(IMI公司生产)。将各种样本使用不同的样本处理液进行预处理后，取一定量滴于快速诊断试剂条上，进行15分钟的免疫反应。

结果如表一所示，+-表示疑似，+表示阳性，-表示阴性，++表示强阳性。在完全不含有BSA和NaCl的情况下，反应结果比较模糊，处于阳性和阴性交界，很容易给检测者或者医生造成误读。采用不同浓度的BSA和NaCl，都可以读得准确良好的结果，很容易对流感A和流感B进行鉴定。

表一

BSA+NaCl	Flu A弱阳性标准品	Flu B弱阳性标准品	Flu A强阳性标准品	Flu B强阳性标准品	阴性标准品
						0+0	+-	+-	+	+	+-
5+10	+	+	++	++	-
						15+25	+	+	++	++	-
15+35	+	+	++	++	-
						25+25	+	+	++	++	-
25+45	+	+	++	++	-

35+50

+

+

++

++

-

实施例二

与实施例一不同的是，本实施例中采用三种物质配比得到样本处理液，分别是BSA，NaCl和聚氧乙烯月桂醇醚(Chemal LA-9)，·三者配比浓度如表二，浓度为mg/ml。在含有BSA，NaCl和Chemal LA-9的情况下，均可以读得准确良好的结果，很容易对流感A和流感B进行鉴定。

表二

BSA+NaCl+Chemal LA-9	Flu A弱阳性标准品	Flu B弱阳性标准品	Flu A强阳性标准品	Flu B强阳性标准品	阴性标准品
						25+25+1	+	+	++	++	-
25+35+1	+	+	++	++	-
						15+30+0.5	+	+	++	++	-
15+20+0.5	+	+	++	++	-
						5+30+1.5	+	+	++	++	-
5+40+1.5	+	+	++	++	-

实施例三

与实施例一不同的是，本实施例中采用三种物质配比得到样本处理液，分别是BSA，NaCl和乙烯基二元胺共聚物(Tetronic)，三者配比浓度如表二，浓度为mg/ml。在含有BSA，NaCl和Tetronic的情况下，均可以读得准确良好的结果，很容易对流感A和流感B进行鉴定。

表三

BSA+NaCl+

Flu A弱阳

Flu B弱阳

Flu A强阳

Flu B强阳

阴性标准

Tetronic	性标准品	性标准品	性标准品	性标准品	品
						25+25+1	+	+	++	++	-
25+35+1	+	+	++	++	-
						15+30+0.5	+	+	++	++	-
15+20+0.5	+	+	++	++	-
						5+30+1.5	+	+	++	++	-
5+40+1.5	+	+	++	++	-

实施例四

与实施例一不同的是，本实施例中采用五种物质配比得到样本处理液，分别是BSA，NaCl、Chemal LA-9、三羟甲基氨基甲烷(TrizmaBase)和叠氮钠(SodiumAzide)，三者配比浓度如表二，浓度为mg/ml。在含有BSA，NaCl、Chemal LA-9、Trizma Base和Sodium Azide的情况下，均可以读得准确良好的结果，很容易对流感A和流感B进行鉴定。

表四

BSA+NaCl+Chemal·LA-9+TrizmaBase+SodiumAzide	Flu A弱阳性标准品	Flu B弱阳性标准品	Flu A强阳性标准品	Flu B强阳性标准品	阴性标准品
						50+40+1+15+0.1	+	+	++	++	-
25+30+1+15+0.1	+	+	++	++	-
						25+20+1+15+0.2	+	+	++	++	-
15+25+1+15+0.2	+	+	++	++	-
						15+35+1+20+0.1	+	+	++	++	-
15+25+1+20+0.2	+	+	++	++	-
						5+35+1+20+0.1	+	+	++	++	-
5+40+1+20+0.2	+	+	++	++	-

Claims (15)

1.一种样本处理液，其特征在于，该样本处理液包括牛血清白蛋白和盐离子物质。

2.如权利要求1所述的样本处理液，其特征在于，所述的牛血清白蛋白的浓度为1-50mg/ml，所述的盐离子物质的浓度为5-200mg/ml。

3.如权利要求1所述的样本处理液，其特征在于，所述的盐离子物质包括氯化钠或氯化钾。

4.如权利要求3所述的样本处理液，其特征在于，所述的氯化钠的浓度为20-50mg/ml。

5.如权利要求1或2所述的样本处理液，其特征在于，所述的牛血清白蛋白浓度为5-20mg/ml。

6.如权利要求1所述的样本处理液，其特征在于，所述的样本处理液包括表面活性剂。

7.如权利要求6所述的样本处理液，其特征在于，所述的样本处理液包括两性表面活性剂。

8.如权利要求6所述的样本处理液，其特征在于，所述的表面活性剂选自于聚氧乙烯月桂醇醚、乙烯基二元胺共聚物、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物、异丙胺烷基苯磺酸盐中的一种或几种。

9.如权利要求1所述的样本处理液，其特征在于，所述的样本处理液还包括生物缓冲物和防腐剂。

10.如权利要求9所述的样本处理液，其特征在于，所述的生物缓冲物选自于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸、二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷-丙烷中的一种或几种；所述的防腐剂选自于叠氮钠、庆大霉素、卡那霉素、硫柳汞钠、氨苄青霉素的一种或几种。

11.如权利要求10所述的样本处理液，其特征在于，所述的三羟甲基氨基甲烷的浓度为3-30mg/ml；所述的叠氮化钠的浓度为0.1-1mg/ml。

12.一种配制如权利要求1所述的样本处理液的方法，其特征在于，在溶剂中加入一定量的牛血清蛋白和盐离子物质。

13.如权利要求12所述的配制样本处理液的方法，其特征在于，所述的牛血清白蛋白的浓度为1-50mg/ml，所述的盐离子物质的浓度为5-200mg/ml。

14.一种检测试剂盒，包括可以快速检测样本中是否含有被分析物质的横向流动检测装置和样本处理液，其特征在于，所述的样本处理液包括牛血清白蛋白和盐离子物质。

15.如权利要求14所述的样本处理液，其特征在于，所述的牛血清白蛋白的浓度为1-50mg/ml，所述的盐离子物质的浓度为5-200mg/ml。