CN109576361A - 一种与缺血性心肌病发生发展相关的生物标志物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种与缺血性心肌病发生发展相关的生物标志物，所述基因为PCYOX1L，本发明通过高通量测序发现PCYOX1L基因在缺血性心肌病患者中表达上调，通过进一步验证证实PCYOX1L基因在缺血性心肌病患者中确实存在差异表达，提示PCYOX1L可作为生物标志物应用于缺血性心肌病的临床诊断。

Description

一种与缺血性心肌病发生发展相关的生物标志物

技术领域

本发明涉及生物医学领域，涉及一种与缺血性心肌病发生发展相关的生物标志物，所述生物标志物为PCYOX1L。

背景技术

缺血性心肌病(ischemic cardiomyophathy，ICM)是指由于心肌缺血而引发的以心力衰竭、心脏扩大为特征的临床症候群，病理特征主要表现为与缺氧相关的冬眠心肌、心肌萎缩、心肌弥漫性纤维化、多灶性心肌梗死等。临床症状上，缺血性心肌病与原发性扩张型心肌病(Dilated Cardiomyopathy，DCM)非常相似，但与DCM不同的是，缺血性心肌病通常有较为明确的病因。除极少数因血管痉挛、血管炎或血管栓塞而引起的心肌缺血外，绝大部分缺血性心肌病是由于冠状动脉粥样硬化所致。因此，缺血性心肌病被普遍认为是冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)末期阶段的一种心脏综合征。

缺血性心肌病是威胁人类生命和健康的头号杀手，也是引发心源性猝死(suddencardiac death,SCD)的首要原因。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)的相关数据显示：在2015年，全球范围内因缺血性心肌病(冠心病)死亡的人数高达740万，约占当年全球死亡人数的12.9％。心血管疾病逐步成为影响人类身心健康全球性的、严重的公共卫生问题，但是ICM作为一种常见的心血管疾病，其发病机制、病理诊断和法医学鉴定目前仍然面临着巨大的挑战。

大规模的流行病学研究显示，缺血性心肌病的发生发展是多种病理因素共同作用的结果。除了冠状动脉狭窄外，年龄、性别、体重指数、高血压病、慢性肾病、慢性呼吸道疾病、心室壁结构特点、酗酒行为等因素均可能对缺血性心肌病的病程产生不同程度的影响。另外，多种细胞因子和信号通路也可能参与其中。目前细胞因子在缺血性心肌病领域的研究仍处在起步阶段，因此探寻缺血性心肌病的分子基础对于缺血性心肌病的早期诊断和靶向治疗具有重要的意义。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供与缺血性心肌病发生发展相关的基因标志物，使用基因标志物来诊断疾病具有及时性、特异性和灵敏性，患者在缺血性心肌病早期就能知晓风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施，从而提高生活质量。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了检测PCYOX1L水平的试剂在制备诊断缺血性心肌病产品中的应用。

进一步，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术、蛋白免疫技术检测PCYOX1L水平的试剂。

进一步，所述试剂包括：

特异性识别PCYOX1L基因的探针；或

特异性扩增PCYOX1L基因的引物；或

特异性结合PCYOX1L编码的蛋白的抗体或配体。

进一步，所述特异性扩增PCYOX1L基因的引物序列对如SEQ IDNO.1和SEQ IDNO.2所示。

本发明提供了一种体外检测样本中PCYOX1L表达水平的产品，所述产品包括制剂、芯片或试剂盒；其中，所述产品通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术、蛋白免疫技术的方法检测PCYOX1L基因或蛋白的表达水平。“样本”是包含细胞或细胞物质的可从中获取核酸、多肽、或其它分析物的物质。

进一步，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片，其中基因芯片包括针对PCYOX1L的特异性引物或寡核苷酸探针，蛋白质芯片包括特异性结合PCYOX1L蛋白的抗体或配体。

进一步，所述试剂盒包括通过RT-PCR法、qRT-PCR法、生物芯片检测法、DNA印迹法、原位杂交法、免疫印迹法检测基因标志物表达水平的试剂。

进一步，所述用qRT-PCR法检测PCYOX1L基因表达水平的试剂包括如序列SEQ IDNO.1～2所示的特异性扩增PCYOX1L基因的引物。

进一步，所述用qRT-PCR法检测PCYOX1L基因表达水平的试剂还包含SYBR Green聚合酶链式反应体系、用于扩增管家基因的引物对；所述SYBR Green聚合酶链式反应体系包含：PCR缓冲液、dNTPs、SYBR Green荧光染料。

本发明提供了PCYOX1L在构建预测缺血性心肌病的计算模型中的应用。

本发明提供了PCYOX1L在制备治疗缺血性心肌病的药物组合物中的应用。

本发明的优点和有益效果：

本发明首次发现了PCYOX1L基因表达与缺血性心肌病相关，通过检测受试者中PCYOX1L的表达水平，可以判断受试者是否患有缺血性心肌病、或者判断受试者是否存在患有缺血性心肌病的风险，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。

本发明发现了一种缺血性心肌病的新的生物标志物-PCYOX1L，相比传统的检测手段，使用基因诊断更及时、更特异、更灵敏，能够实现缺血性心肌病的早期诊断，从而降低缺血性心肌病的死亡率。

附图说明

图1是利用QPCR检测PCYOX1L基因在缺血性心肌病患者中的表达情况图，其中图A是PCYOX1L在血液中的表达情况图；图B是PCYOX1L在组织中的表达情况图。

具体的实施方式

本发明经过广泛而深入的研究，通过高通量测序的方法，检测缺血性心肌病患者和正常人中的差异表达基因，探讨其与缺血性心肌病的发生之间的关系，从而为缺血性心肌病的早期检测提供标志物。通过筛选，本发明首次发现了缺血性心肌病患者中PCYOX1L显著性上调，提示PCYOX1L可作为检测指标应用于缺血性心肌病的临床诊断。

PCYOX1L基因和蛋白

PCYOX1L位于人5号染色体长臂3区2带，基因ID为78991，在本发明的上下文中，“PCYOX1L基因”包括人PCYOX1L基因以及人PCYOX1L基因的任何功能等同物的多核苷酸或蛋白。一种代表性的PCYOX1L基因的核苷酸序列如目前国际公共核酸数据库GeneBank中PCYOX1L基因(NM_001301054.1)所示。

本领域技术人员将认识到，本发明的实用性并不局限于对本发明的靶标基因的任何特定变体的基因表达进行定量。如果当核酸或其片段与其它核酸(或其互补链)最佳比对时(具有适当的核苷酸插入或缺失)，在至少大约60％的核苷酸碱基、通常至少大约70％、更通常至少大约80％、优选至少大约90％、及更优选至少大约95-98％核苷酸碱基中存在核苷酸序列相同性，则这两个序列是“基本同源的”(或者基本相似的)。

本发明的PCYOX1L基因可以是天然的或是人工合成的，或者使用可以表达PCYOX1L的DNA片段的载体转染细胞获得。所述载体所述载体包括病毒载体、真核表达载体。

病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)载体、甲病毒载体。

真核表达载体可以是任何适当的表达载体，包括但不限于pCMV-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA3.1表达载体、pEGFP表达载体、pEFBos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体、或者在公知表达载体的基础上经改造的载体，比如pBin438、pCAMBIA1301等。

在本发明的上下文中，“PCYOX1L蛋白”包括PCYOX1L蛋白以及PCYOX1L蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物包括PCYOX1L蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段，或其活性衍生物，等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧条件下能与人PCYOX1L的DNA杂交的DNA所编码的蛋白质。

检测技术

本发明的PCYOX1L使用本领域普通技术人员已知的多种核酸以及蛋白技术进行检测，这些技术包括但不限于：核酸测序、核酸杂交、核酸扩增技术、蛋白免疫技术。

本发明可在检测前或与检测同时地对核酸进行扩增。核酸扩增技术的示例性非限制性实例包括但不限于：聚合酶链式反应(PCR)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、转录介导的扩增(TMA)、连接酶链式反应(LCR)、链置换扩增(SDA)和基于核酸序列的扩增(NASBA)。本领域的普通技术人员将认识到，某些扩增技术(例如，PCR)需要在扩增前将RNA逆转录成DNA(例如，RT-PCR)，而其他扩增技术则直接扩增RNA(例如，TMA和NASBA)。

本发明中的核酸杂交技术包括但不限于原位杂交(ISH)、微阵列和Southern或Northern印迹。原位杂交(ISH)是一种使用标记的互补DNA或RNA链作为探针以定位组织一部分或切片(原位)或者如果组织足够小则为整个组织(全组织包埋ISH)中的特异性DNA或RNA序列的杂交。DNA ISH可用于确定染色体的结构。RNA ISH用于测量和定位组织切片或全组织包埋内的mRNA和其他转录本(例如，ncRNA)。通常对样本细胞和组织进行处理以原位固定靶转录本，并增加探针的进入。探针在高温下与靶序列杂交，然后将多余的探针洗掉。分别使用放射自显影、荧光显微术或免疫组织化学，对组织中用放射、荧光或抗原标记的碱基标记的探针进行定位和定量。ISH也可使用两种或更多种通过放射性或其他非放射性标记物标记的探针，以同时检测两种或更多种转录本。

将Southern和Northern印迹分别用于检测特异性DNA或RNA序列。使从样本中提取的DNA或RNA断裂，在基质凝胶上通过电泳分离，然后转移到膜滤器上。使滤器结合的DNA或RNA与和所关注的序列互补的标记探针杂交。检测结合到滤器的杂交探针。该程序的一种变化形式是反向Northern印迹，其中固定到膜的底物核酸为分离的DNA片段的集合，而探针是从组织提取并进行了标记的RNA。

本发明中非扩增或扩增的核酸可通过任何常规的手段检测。

蛋白免疫技术包括夹心免疫测定，例如夹心ELISA，其中使用识别生物标志物上不同表位的两种抗体进行该生物标志物的检测；放射免疫测定(RIA)、直接、间接或对比酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶免疫测定(EIA)、荧光免疫测定(FIA)、蛋白质印迹法、免疫沉淀法和基于任何颗粒的免疫测定(如使用金颗粒、银颗粒或乳胶颗粒、磁性颗粒或量子点)。可例如在微量滴定板或条的形式中实施免疫法。

根据本发明的免疫法可基于，例如，以下方法中的任一种。

免疫沉淀法是最简单的免疫测定方法；这种方法测量沉淀物的量，在试剂抗体已与样本一起孵育并与其中存在的靶抗原反应以形成不溶性团聚体之后形成所述沉淀。免疫沉淀反应可以是定性的或是定量的。

在颗粒免疫测定中，多种抗体与该颗粒连接，且所述颗粒能够同时结合很多抗原分子。这大大地加速了可见反应的速度。这允许生物标志物的快速且灵敏的检测。

在免疫比浊法(immunonephelometry)中，抗体和生物标志物上的靶抗原的相互作用引起免疫复合物的形成，所述免疫复合物太小而不能沉淀。但是，这些复合物将散射入射光，这可使用比浊计来测量。可在反应的几分钟之内测定抗原(即生物标志物)的浓度。

放射免疫测定(RIA)法使用放射性同位素例如I125来标记抗原或抗体。所使用的同位素发射γ射线，通常在除去非结合的(游离的)放射性标记之后测量所述射线。与其它的免疫测定相比较，RIA的主要优势在于更高的灵敏度、容易的信号检测和确认的、快速的测定。主要的劣势在于由放射物的使用引起的健康和安全风险和与维护许可放射物安全和处理程序相关的时间和费用。出于该原因，在常规临床实验室实践中，RIA已很大程度上被酶免疫测定所取代。

酶免疫测定(EIA)发展为放射免疫测定(RIA)的替代物。这些方法使用酶来标记抗体或靶抗原。EIA的灵敏度接近RIA的灵敏度，且不存在由放射性同位素引起的危险。用于检测的最广泛使用的EIA方法之一是酶联免疫吸附测定(ELISA)。ELISA方法可使用两种抗体，其一对于靶抗原是特异性的，而另一与酶偶联，酶底物的添加引起化学发光信号或荧光信号的产生。

荧光免疫测定(FIA)指使用荧光标记或酶标记的免疫测定，所述荧光标记或酶标记作用在底物上以形成荧光产物。荧光测量固有地比比色(分光光度法的)测量更加灵敏。因此，FIA方法具有比利用吸收(光密度)测量的EIA方法更高的分析灵敏度。

化学发光免疫测定使用化学发光标记，当其被化学能激发时产生光；使用光检测器测量发射。

因此，可使用熟知的方法进行根据本发明的免疫法。在本发明的生物标志物的检测中可使用任何直接(如使用传感器芯片)或间接的方法。

核酸膜条、芯片、试剂盒

在本发明中，核酸膜条包括基底和固定于所述基底上的寡核苷酸探针；所述基底可以是任何适于固定寡核苷酸探针的基底，例如尼龙膜、硝酸纤维素膜、聚丙烯膜、玻璃片、硅胶晶片、微缩磁珠等。

在本发明中芯片包括基因芯片、蛋白芯片；所述基因芯片包括固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针特异性地对应于PCYOX1L所示的部分或全部序列。所述蛋白芯片包括固相载体，以及固定在固相载体上的PCYOX1L编码的蛋白的特异性抗体或配体。

所述固相载体包括无机载体和有机载体，所述无机载体包括但不限于有硅载体、玻璃载体、陶瓷载体等；所述有机载体包括聚丙烯薄膜、尼龙膜等。

“探针”指能与另一分子的特定序列或亚序列或其它部分结合的分子。除非另有指出，术语“探针”通常指能通过互补碱基配对与另一多核苷酸(往往称为“靶多核苷酸”)结合的多核苷酸探针。根据杂交条件的严谨性，探针能和与该探针缺乏完全序列互补性的靶多核苷酸结合。探针可作直接或间接的标记，其范围包括引物。杂交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位杂交测定法。

本发明中的示例性探针包括PCR引物以及基因特异性DNA寡核苷酸探针，例如固定于微阵列基底上的微阵列探针、定量核酸酶保护检验探针、与分子条形码连接的探针、以及固定于珠上的探针。

本发明的配体可包含能够特异性结合PCYOX1L的肽、抗体或其片段、或适配体或寡核苷酸。抗体可为能够特异性结合该PCYOX1L的单克隆抗体、多克隆抗体或其片段。

本发明中所述PCYOX1L蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述PCYOX1L蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰，例如，嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)²、Fv等。只要所述片段能够保留与PCYOX1L蛋白的结合能力即可。用于检测蛋白质水平的抗体的制备是本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备所述抗体，如所述的片段可以通过化学法从头合成或利用重组DNA技术合成。

本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒可用于检测PCYOX1L基因或蛋白的表达水平，包含用于PCYOX1L检测和/或定量的本发明的配体、和/或芯片。任选的与试剂盒的说明书在一起。

试剂盒包括一种或多种无菌容器，这样的容器可以是盒、安瓿、瓶子、管形瓶、管、袋、小袋、泡罩包装、或本领域已知的其它合适的容器形式。这样的容器可以由塑料、玻璃、层压纸、金属箔、或适于容器药物的其它材料。

本发明中试剂盒或芯片可用于检测包括PCYOX1L基因在内的多个基因(例如，与缺血性心肌病相关的多个基因)的表达水平，将缺血性心肌病的多个标志物同时进行检测，可大大提高缺血性心肌病诊断的准确率。

在本发明中，术语“包括”用于指短语“包括但不限于”，并与短语“包括但不限于”可以互换使用。

在本发明中，“样本”是包含细胞或细胞物质的可从中获取核酸、多肽、或其它分析物的样本。生物样本的示例非限定性地包括：尿、血液、血清、血浆、脑脊髓液、胸膜液、支气管灌洗、痰、腹腔液、膀胱冲洗、口腔冲洗、分离细胞、组织样本、触碰准备物、以及细针穿刺物。在本发明的具体实施例中，所述样本为血液和组织。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1筛选与缺血性心肌病相关的基因标志物

1、样品收集

1)血液样本的收集

分别收集25例正常人血液和缺血性心肌病患者血液样本，EDTA抗凝管静置10min，离心分离血清，-20℃保存备用。

2)组织样本的收集

收集25例缺血性心肌病患者的左心室组织样本，和10例非心肌病死亡人员的左心室组织样本。

缺血性心肌病患者的入组标准：参照Burch(1972年)对ICM的诊断标准和美国纽约心脏病学会(NYHA)心功能分级标准来确定：(1)有明确的冠心病(心绞痛发作史、心肌梗死半年以上、心电图及酶学异常)证据；(2)明显的心脏扩大；(3)反复心力衰竭发作。

排除标准：合并其他类型心脏疾病，包括扩张型心肌病、肥厚型心肌病、限制型心肌病、克山病、病毒性心肌炎、先天性心脏病、风湿性心脏病、缩窄性心包炎和心脏淀粉样变性；合并冠心病并发症，包括室壁瘤、室间隔穿孔、乳头肌功能不全等。每组各取4例标本进行基因表达谱的检测分析，进行差异表达基因的筛选，并在各组全部样本中进行大样本验证实验。

2、RNA样品的制备及质量分析

利用QIAGEN的组织RNA提取试剂盒提取胎盘组织中的总RNA，具体步骤参考说明书。

将上述提取的RNA进行琼脂糖凝胶电泳，利用Nanodrop2000对所提RNA的浓度和纯度进行检测，琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，Agilent2100测定RIN值。单次建库要求RNA总量5μg，浓度≥200ng/μL，OD260/280介于1.8～2.2之间。

3、构建cDNA文库

使用Ribo-Zero试剂盒除去总RNA中的核糖体RNA，利用Illumina的TruseqRNAsample Prep Kit进行cDNA文库的构建，具体操作按说明书进行。

4、上机测序

使用Hiseq4000测序平台对cDNA文库进行测序，具体操作按说明书进行。

5、高通量转录组测序数据分析

对测序结果进行生物信息学分析，利用TopHat v1.3.1进行RNA-seq读段定位，通过Cufflinks v1.0.3将RNA-seq片段数目进行标准化计算转录本的相对丰度，采用metaMA包分析，当FDR<0.05时，认为mRNA显著差异表达。

6、结果

测序结果显示，与非缺血性心肌病的样本相比，PCYOX1L基因在缺血性心肌病患者组织中的表达量显著增加。

实施例2 QPCR测序验证PCYOX1L基因的差异表达

1、根据高通量测序的检测结果选择PCYOX1L基因进行大样本QPCR验证。

2、RNA提取

利用QIAGEN的组织RNA提取试剂盒提总RNA，血液RNA提取试剂盒提取血液的RNA，具体步骤参考说明书。

3、逆转录：

1)加入dNTP mixture1μl，Oligo dT primer 1μl，总RNA 2μg，加Rnase FreeddH₂O使总体积至10μl，在PCR仪上进行变性、退火反应，65℃，5min，反应完成后置于4℃。

2)构建20μl反应体系，继续加入5×Primer Script Buffer 4μl，RNaseInhibitor 0.5μl，Prime Script RTase 0.5μl，RNase Free ddH₂O 5.0μl，在PCR仪上按下列条件进行反转录反应：42℃15～30min，95℃5min，反应完成之后，置于冰上。

3)水浴锅中42℃加热15min，95℃加热3min，-20℃储存备用。

4、QPCR扩增

1)引物设计

根据Genebank中PCYOX1L基因和管家基因GAPDH基因的编码序列设计QPCR扩增引物，由生工合成。

PCYOX1L基因的引物对序列如下：

正向引物序列为5’-ACCTCAACTCGTCCTACTT-3’(SEQ ID NO.1)；

反向引物序列为5’-GGAAATCTGTGGTAAGGATGTT-3’(SEQ ID NO.2)。

GAPDH基因的引物序列对如下：

正向引物序列为5’-CTCTGGTAAAGTGGATATTGT-3’(SEQ ID NO.3)；

反向引物序列为5’-GGTGGAATCATATTGGAACA-3’(SEQ ID NO.4)。

2)PCR反应体系：正向引物和反向引物各1μl，SYBR Green PCR master mix 10μl，cDNA 1μl，ddH₂O 7μl。

3)PCR反应条件：95℃10min，(95℃10s，60℃30s，72℃15s)×40个循环，65℃～95℃，温度升高速度0.5℃/5s。在Bio-Rad iQ5荧光定量PCR仪上进行PCR反应，通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，ΔΔCT法进行相对定量。

5、统计学方法

以GAPDH为内参，计算缺血性心肌病与非缺血性心肌病样本中PCYOX1L的实验结果，使用SPSS18.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。

6、结果

结果如图1所示，与非缺血性心肌病相比，缺血性心肌病患者中PCYOX1L基因的表达显著上调，差异具有统计学意义，提示PCYOX1L基因可作为基因标志物应用于缺血性心肌病的早期诊断，从而早发现，早干预。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 河北医科大学第三医院

<120> 一种与缺血性心肌病发生发展相关的生物标志物

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

acctcaactc gtcctactt 19

<210> 2

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ggaaatctgt ggtaaggatg tt 22

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ctctggtaaa gtggatattg t 21

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ggtggaatca tattggaaca 20

Claims (10)

1.检测PCYOX1L的试剂在制备诊断缺血性心肌病产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术、蛋白免疫技术检测PCYOX1L水平的试剂。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括：

特异性识别PCYOX1L基因的探针；或

特异性扩增PCYOX1L基因的引物；或

特异性结合PCYOX1L编码的蛋白的抗体或配体。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述特异性扩增PCYOX1L基因的引物序列对如SEQ IDNO.1和SEQ IDNO.2所示。

5.一种体外检测样本中PCYOX1L表达水平的产品，其特征在于，所述产品包括制剂、核酸膜条、芯片或试剂盒。

6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片，其中基因芯片包括针对PCYOX1L的特异性引物或寡核苷酸探针，蛋白质芯片包括特异性结合PCYOX1L蛋白的抗体或配体。

7.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述试剂盒包括通过RT-PCR法、qRT-PCR法、生物芯片检测法、DNA印迹法、原位杂交法、免疫印迹法检测基因标志物表达水平的试剂。

8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述用qRT-PCR法检测PCYOX1L基因表达水平的试剂包括如序列SEQ ID NO.1～2所示的特异性扩增PCYOX1L基因的引物。

9.PCYOX1L在构建预测缺血性心肌病的计算模型中的应用。

10.PCYOX1L在制备治疗缺血性心肌病的药物组合物中的应用。