CN109568594A - 聚阳离子大分子前药用于基因传递、纳米复合体系的制备及应用 - Google Patents

聚阳离子大分子前药用于基因传递、纳米复合体系的制备及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一类聚阳离子大分子前药用于基因靶向传递的纳米复合体系的制备及应用。所述复合体系为由聚阳离子等高分子材料、靶向基团、抗肿瘤药物和目的基因组成纳米复合体系。本发明综合纳米给药系统和大分子前药的优势，将抗肿瘤药物、靶向基团借助化学键偶联到聚阳离子，合成大分子前药，再采用自组装法制备出大分子前药纳米体系。自组装过程中包裹目的基因，给予目的基因有效的保护，避免基因被酶降解。本发明以聚阳离子大分子前药作为基因载体，实现药物与基因共传递，综合了基因治疗与化学治疗的优点，在肿瘤治疗方面具有良好的应用前景。

Description

聚阳离子大分子前药用于基因传递、纳米复合体系的制备及 应用
技术领域
本发明属于纳米材料生物医学领域。本发明涉及一种靶向递送基因/药物纳米复合物，具体、涉及一种用于靶向性治疗肿瘤的大分子前药包裹肿瘤抑制功能基因的纳米复合物的制备方法和应用。
背景技术
大分子前药，是指通过共价键将低分子药物连接到合适的大分子上，这种大分子前药在体内经酶解或水解释放出活性药物而发挥药效的化合物。大分子前药能延长药物的释放时间，减少用量，降低毒副作用；可以使溶解性较低或者不溶于水的药物的水溶性增加，能够改善药物的动力学，能够减小多药耐药性。
基因治疗是指是现代医学研究的重要领域，其中转基因载体是关键之一。发展基因释放系统是21世纪最重要的生物技术挑战之一。其中靶向性、安全性和效率是关键。转基因载体主要分为病毒载体系统和非病毒载体系统。病毒载体，有先天性感染细胞的机制，是转染的主要手段，但病毒载体包装容量有限、制备复杂、有免疫原性(体内不能反复应用)和潜在的安全危险以及非导向性。所以，人们研究替代性的非病毒转基因载体。其中，聚离子复合物纳米载体胶束也是近年来非病毒载体以及纳米自组装领域研究的一个热点。它是由两种带相反电荷的聚合物或者生物大分子通过静电作用复合而成的纳米微球。作为纳米载体,聚离子复合物胶束除了具有传统聚合物胶束的特点外,还有其独特的优势：(1)药用范围广泛,既可以通过静电作用或氢键作用负载亲水性药物,也可以负载基因类药物；(2)纳米载体形成过程基本在水溶液中进行，条件温和，制备方法简单，并且避免了有机溶剂的使用，可以消除溶剂残留引发的毒副作用。
非病毒载体通常利用阳离子多聚物或脂质体来包裹质粒DNA，通过被动内吞或受体介导内吞进入细胞。报道用于转基因的阳离子多聚物有多聚赖氨酸、鱼精蛋白、多聚精氨酸、聚乙酞亚胺、壳聚糖、多胺树突状物、聚丙烯亚胺树突状物、多聚组氨酸、组氨酸赖氨酸分枝状聚合物等。
发明内容
本发明的目的是提供一种一类聚阳离子大分子前药用于基因靶向传递的纳米复合体系的制备及应用，本发明综合纳米给药系统和大分子前药的优势，将抗肿瘤药物、靶向基团借助化学键偶联到聚阳离子，合成大分子前药，再采用自组装法制备出大分子前药纳米体系。自组装过程中包裹目的基因，给予目的基因有效的保护，避免基因被酶降解。该复合体系具有制备过程安全快捷简单，纳米粒径均匀，表面电位合适，基因包载效率高，基因递送效果好，基因治疗效果显著等优点。
本发明的第一个方面在于提供：
一种基因和药物共递送的纳米体系，由抗肿瘤药物和靶向基团与阳离子聚合物载体以偶联的方式形成聚合物前药，然后该聚合物前药再与目的基因自组装形成共递送的纳米体系；
所述抗肿瘤药物选自含羧基或羟基的抗肿瘤药及其衍生物，抗肿瘤化合物及其衍生物的羧基或羟基部位通过与阳离子聚合物的氨基发生缩合反应，进而结合到阳离子聚合物中，
优选为5-氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇、吉西他滨、阿糖胞苷、阿扎胞苷、克拉屈滨、氟达拉滨、柔红霉素、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、放线菌素D、丝裂霉素、光辉霉素、更生霉素、多西他赛、喜树碱、羟基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨、长春花碱；
所述靶向基团是指能够靶向特定组织或受体的基团，例如靶向肝癌细胞，靶向基团优选为核酸适配体、乳糖残基、半乳糖残基、叶酸残基、α-环糊精残基、β-环糊精残基、γ-环糊精残基；
所述聚阳离子载体选自常用于基因传递的聚阳离子离子载体，例如壳聚糖、聚乙烯亚胺、多聚赖氨酸、鱼精蛋白、多聚精氨酸、聚乙酞亚胺、多胺树突状物、聚丙烯亚胺树突状物、多聚组氨酸、组氨酸赖氨酸分枝状聚合物；
所述目的基因是指具有抗肿瘤活性的基因片段，优选为核酸适配体、 microRNA-122、microRNA-34、P53、shAkt1或PDCD4。
优选的，所述聚合物前药的结构式为：
其中：
x、y、m和n各自独立地为正整数；
Drug是指抗肿瘤化合物及其衍生物的残基，抗肿瘤化合物及其衍生物的羧基或羟基部位通过与阳离子聚合物的氨基发生缩合反应，进而结合到阳离子聚合物中，所述抗肿瘤化合物优选为5-氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇、吉西他滨、阿糖胞苷、阿扎胞苷、克拉屈滨、氟达拉滨、柔红霉素、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、放线菌素D、丝裂霉素、光辉霉素、更生霉素、多西他赛、喜树碱、羟基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨、长春花碱及其衍生物，更优选为5-氟脲嘧啶-1- 乙酰基、阿霉素残基；
R1为靶向基团，其能够靶向特定组织或受体的基团，例如靶向肝癌细胞，其各自独立地选自核酸适配体、乳糖残基、叶酸残基、半乳糖残基、α-环糊精残基、β-环糊精残基、γ-环糊精残基；
R2各自独立地选自氢、乳糖残基、叶酸残基、半乳糖残基、α-环糊精残基、β-环糊精残基、γ-环糊精残基。
上述基因和药物共递送的纳米体系中，所述聚合物前药的结构式为：
其中：x、y、m和n各自独立地为正整数。
本发明制备的纳米粒子呈球形，大小较均匀，大小在50～500nm，优选在 110～200nm；
本发明采用的阳离子聚合物的分子量在500-50000，优选在40000-50000。
本发明的另一个方面在于提供一种制备前述共递送纳米体系的方法：将抗肿瘤药物、靶向基团借助化学键偶联到聚阳离子，合成聚合物前药，再将其制备成聚合物前药纳米体系，最后向该纳米体系中加入目的基因，采用自组装法制备得到共递送纳米体系。
更进一步的，所述方法采用下列步骤进行：
将抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)与乳糖酸、壳聚糖共价结合，制得大分子前药半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶偶合物(GC-FUA)，再采用离子交联法制备得到 GC-FUA纳米体系，然后向GC-FUA纳米体系中加入miRNA-122，经自组装制备得到GC-FUA/miRNA-122纳米体系；
或
将抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)与乳糖酸、壳聚糖共价结合，制得大分子前药半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶偶合物(GC-FUA)，再与叶酸酰胺或叶酸活性酯缩合，然后采用离子交联法制备得到GC-FUA-FA纳米体系，然后向 GC-FUA-FA纳米体系中加入p53基因片段，经自组装制备得到GC-FUA-FA/p53 纳米体系；
或
将抗肿瘤药物阿霉素(DOX)与聚乙烯亚胺(PEI)、β-环糊精共价结合，制得大分子前药β-环糊精-聚乙烯亚胺偶合物(PC-DOX)，再采用离子交联法制备出PC-DOX纳米体系，然后向PC-DOX纳米体系中加入含P53基因片段的质粒，经自组装制备得到PC-DOX/p53纳米体系。
以GC-FUA/microRNA-122为例，本发明包裹microRNA的半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶偶合物(GC-FUA)纳米给药体系,是由GC-FUA和microRNA-122 两个组分按照一定的质量比，通过电荷结合，自组装形成多聚离子复合物。
优选的，上述的半乳糖，具有靶向肝细胞及肝肿瘤细胞表面的ASGPR，可特异识别去唾液酸糖蛋白的半乳糖残基而将其内吞清除，microRNA为肝脏组织中高表达，肝癌中低表达的，具有抑制肝癌发生和发展的miR-122，其序列为：
miR-122:Sense:GATCCTGGAGTGTGACAATGGTGTTTGA
Antisense:AGCTTCAAACACCATTGTCACACTCCAG
一种包载肿瘤抑制功能microRNA-122的半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶偶合物纳米复合载体的制备方法，包括以下步骤：
1.GC-FUA的合成
GC-FUA用于microRNA-122传递肝靶向纳米体系的构建
称取LA 1.1g溶于25mLTEMED/HCl的缓冲溶液(pH4.7)中，加入0.3g EDC·HCl，磁力搅拌20min进行活化，再加入0.07gNHS和1.1g壳聚糖，在室温下磁力搅拌反应72h，装入透析袋中透析2d，冷冻干燥，即得到浅黄色固体样品GC。
在装有回流冷凝装置的三颈瓶中，加入KOH 10.0g，30mL双蒸水，搅拌溶解。再加入5-Fu 4.0g，40℃水浴中保温搅拌30min。然后再缓慢滴加6.25g 溴乙酸溶液10mL，滴加超过30min。缓慢升温至60℃，并在此温度下反应6h。冷却至室温，用浓HCl调节pH至5.5，放入冰箱中，冷藏过夜，如有沉淀析出，滤除，收集滤液，再将其pH调至2.0，有大量白色固体析出，冷却12h，过滤，沉淀物用蒸馏水洗涤3次，收集白色固体，烘干得产物5-氟尿嘧啶-1-基乙酸(FUA)。
取45mg FUA溶于20mL50mmol·L的盐酸溶液，加入EDC·HCl 0.1g，磁力搅拌20min进行活化，再加入0.0025gNHS和40mg GC，40℃水浴中保温反应3d，透析2d，冷冻干燥48h，得到黄棕色固体GC-FUA。将适量GC-FUA 固体粉末溶解于1％的醋酸水溶液中，搅拌过夜使其充分溶胀，用氢氧化钠调节其pH至4～7；将GC-FUA溶液过0.22μm的滤膜备用。
2.GC-FUA/microRNA-122纳米体系的构建
1ug miR-122溶于100μL DEPC水中。根据质荷比取相应的GC-FUA溶液，均匀混合。搅拌混合溶液20min，让二者的充分的相互作用并且稳定形成的纳米体系。之后将得到的混合溶液以13000rpm的离心速度离心30min，去除上清液，得到离心后留下的纳米颗粒。将最终得到的离心产物冻干，称重，与加入的原材料质量进行比较计算，得到纳米颗粒。
本发明的另一方面在于提供一种药物组合物，其包含如前所述的纳米体系和药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本发明的另一方面在于提供本发明所述的共递送纳米体系在制备抗癌药物中的应用。
根据所述应用，优选的，所述抗癌药物为靶向药物，所述癌症选自肝癌、肺癌、乳腺癌、白血病、子宫癌、宫颈癌、皮肤癌、甲状腺癌、口腔癌，更优选为肝癌。
同时所述共递送纳米体系用于控制抗癌活性成分的释放、对抗癌活性成分进行靶向传递、将抗肿瘤药物和抗肿瘤基因片段进行共传递。
此外，本发明提供用于预防和/或治疗癌症和/或肿瘤的方法，所述方法包括向有此需要的患者给予治疗有效量的本发明化合物。
定义
本发明所述的“衍生物”是指对化合物进行改性，引入新的反应位点和/ 或活性基团，例如5-氟脲嘧啶衍生物可以是5-氟尿嘧啶-1-基乙酸。
本发明所述的“残基”是指与阳离子聚合物发生共价结合之后残余的基团、分子片段和/或原子簇。例如“乳糖酸残基”是指乳糖酸与阳离子聚合物(如壳聚糖)发生缩合反应之后，乳糖酸的羧基脱去-OH残余的基团。类似的，半乳糖酸残基、叶酸残基、α-环糊精残基、β-环糊精残基、γ-环糊精残基具有相似的含义。
本发明中，选择大分子前药/基因纳米复合体系分别具有一定的靶向性，同时，载体具有良好的生物相容性，对正常细胞毒性较小。能通过自组装方式形成纳米颗粒，具有合适的理化性质，较好的稳定性，制备方法简单，可重复性高，作为纳米载体可保护基因免受降解，又能结合纳米材料特有的尺寸效应，是良好的基因/药物共传输体系。
另一方面，本发明提供了一种用于肿瘤基因/药物双重治疗的新型靶向给药方式，以解决肿瘤治疗特别是肝癌的靶向治疗中的难题。其中载体壳聚糖、PEI (聚乙烯亚胺)、PLL(多聚赖氨酸)起到桥梁作用，它们具有良好生物相容性，半乳糖残基、叶酸具有识别靶向细胞表面特异性受体ASGPR和叶酸受体的作用，而所载药物5-Fu、阿霉素、紫杉醇是经典的抗肿瘤药物，携带的microRNA-122、 microRNA-34、P53则可以起到基因治疗的作用，所以该类新型靶向纳米给药体系可以靶向识别肿瘤细胞并且同时实现化学治疗和基因治疗双重肿瘤治疗的作用。
本发明相对于现有技术，具有如下优点：
(1)本发明采用的原料—聚阳离子聚合物如壳聚糖、PEI、PLL，来源易得，具有优良生物相容性，生物可降解性，安全无毒。
(2)本发明制备条件温和、方法简单、操作简便、易于实施，最终制剂不涉及增溶剂和有机溶剂，安全可靠。
(3)本发明所制备的大分子前药与基因的结合为电荷结合，包裹肿瘤抑制功能的基因，可特异性针对各种疾病的基因，可以通过静脉注射的方式，进行疾病特别是癌症的治疗。反应简便。
(4)本发明制备的纳米粒子呈球形，大小较均匀，大小在110～200nm，可以通过EPR效应选择性的浓集与肿瘤组织，因而可以增加抗肿瘤药物的治疗指数。同时，给予目的基因有效的保护，避免目的基团被体内RNA酶降解。
(5)本发明提供的共递送纳米体系具有一定的靶向性，尤其是对于肝细胞具有特异性识别能力，因而能够使药物在癌细胞周围集中，进而减少对正常细胞的毒副作用。
(6)本发明通过将抗癌化学药与具有抗癌活性的基因片段进行结合，从而实现化学治疗和基因治疗的双重作用，具有更好的抗癌活性。
附图说明
图1为半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶偶合物合成示意图
图2为半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶纳米体系合成示意图
图3为半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶的红外图谱分析
图4为半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶的核磁共振谱分析(图4a为GC的1H-NMR图；图4b为GC-FUA(b)的1H-NMR图)
图5为GC-FUA/microRNA-122体系粒径图
图6为GC-FUA/microRNA-122TEM电镜图
图7为GC-FUA体外释放曲线
图8为GC-FUA/microRNA-122的琼脂糖凝胶电泳图
图9为GC-FUA/microRNA-122纳米体系对细胞增殖的抑制的结果图。
图10是GC-FUA/microRNA-122纳米复合体系对细胞迁移和侵袭能力影响的结果图。
图11是GC-FUA/microRNA-122纳米复合体系对细胞中靶蛋白ADAM17 和凋亡关键蛋白Bcl-2的抑制效果图。
具体实施方式
1.结构表征
FUA、GC和GC-FUA的核磁共振谱采用BruckerAdvance300核磁共振仪， D2O/CF3COOD作溶剂。
FUA、GC和GC-FUA的红外光谱采用Brucker Vector-22型红外光谱仪，扫描次数16次每秒，扫描范围为400cm-1～4000cm-1，分辨率4cm-1。
2.GC-FUA/miR-122纳米复合体系的评估
采用CCK8法检测GC-FUA/miR-122复合纳米体系对肝癌细胞的增殖抑制作用，采用细胞划痕法和Tanswell检测纳米复合体系对肝癌细胞迁移能力和侵袭能力的影响。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
GC-FUA用于microRNA-122传递肝靶向纳米体系的构建
称取LA1.1g溶于25mL TEMED/HCl的缓冲溶液(pH4.7)中，加入0.3g EDC·HCl，磁力搅拌20min进行活化，再加入0.07gNHS和1.1g壳聚糖，在室温下磁力搅拌反应72h，装入透析袋中透析2d，冷冻干燥，即得到浅黄色固体样品GC。
在装有回流冷凝装置的三颈瓶中，加入KOH10.0g，30mL双蒸水，搅拌溶解。再加入5-Fu 4.0g，40℃水浴中保温搅拌30min。然后再缓慢滴加6.25g溴乙酸溶液10mL，滴加超过30min。缓慢升温至60℃，并在此温度下反应6h。冷却至室温，用浓HCl调节pH至5.5，放入冰箱中，冷藏过夜，如有沉淀析出，滤除，收集滤液，再将其pH调至2.0，有大量白色固体析出，冷却12h，过滤，沉淀物用蒸馏水洗涤3次，收集白色固体，烘干得产物5-氟尿嘧啶-1-基乙酸(FUA)。收率约为85-95％。
取45mg FUA溶于20mL50mmol·L的盐酸溶液，加入EDC·HCl 0.1g，磁力搅拌20min进行活化，再加入0.0025gNHS和40mgGC，40℃水浴中保温反应3d，透析2d，冷冻干燥48h，得到黄棕色固体GC-FUA。收率约为70-80％. 将适量GC-FUA固体粉末溶解于1％的醋酸水溶液中，搅拌过夜使其充分溶胀，用氢氧化钠调节其pH至4～7；将GC-FUA溶液过0.22μm的滤膜。10ug miR-122 溶于1ml无DEPC水中。根据质荷比取相应的GC-FUA纳米粒子溶液，均匀混合。搅拌混合溶液20min，让二者的充分的相互作用并且稳定形成的纳米体系。之后将得到的混合溶液以13000rpm的离心速度离心15min，去除上清液，得到离心后留下的纳米颗粒。将最终得到的离心产物冻干，称重，与加入的原材料质量进行比较计算，得到纳米颗粒。
实施例2
双靶头大分子前药GC-FUA-FA用于p53传递的肝肿瘤靶向纳米体系的构建
(1)GC-FUA合成的实施同实施例1。
(2)GC-FUA-FA的制备：称取半乳糖化壳聚糖的0.5g，溶解于5ml醋酸-醋酸钠缓冲液中，磁力搅拌条件下缓慢加入叶酸活性酯的DMSO溶液，30℃下避光反应16h，然后用NaOH调pH至8.0-10.0。混合液在在蒸馏水溶液中透析7d。最后冷冻干燥的黄色粉末GC-FUA-FA。
(3)表征方法和转染方法同实施例1。
实施例3
双靶头GC-FA-DOX用于核酸适配体传递的肝肿瘤靶向纳米体系的构建
(1)GC合成同实施例1。
(2)FA500mg溶于25mlDMSO中，搅拌至完全溶解，加入0.4g EDC，继续搅拌，加入预先用醋酸-醋酸钠溶解好的GC溶液，避光搅拌1天，透析48h，冷冻干燥得GC-FA。醋酸溶液配制2mg/ml的GC-FA溶液，预先配制TPP和DOX 溶液并混合，将DOX、TPP混合溶液逐滴加入到GC-FA溶液中。搅拌24h，透析48h，旋转蒸发得GC-FA-DOX。
表征方法和转染方法同实施例1。
实施例4
PC-DOX用于p53传递的肿瘤靶向纳米体系的构建
将适量β-CyD与CDI与分别溶于DMSO中，在氮气保护下搅拌，将CDI 溶液缓慢加入β-CyD溶液中，然后加入少量Et3N，继续避光搅拌至完全被活化。取PEI适量溶于DMSO中，揽拌下逐滴加入到已活化的的溶液β-CyD溶液中，滴注时间在3小时左右，继续在氮气保护避光条件下搅拌过夜，生成产物PC。
流动纯水透析2天，再将透析袋中的溶液冷冻干燥24小时，得白色絮状物PC。分别取DOX和CDI溶于DMSO中，氮气保护搅拌，至反应完全。适量 PC加入到上述溶液中，搅拌过夜，生成产物PC-DOX，透析2天，冷冻干燥24 小时得PC-DOX。将PC-DOX溶于PBS中制备成10mg/ml的PC-DOX溶液，过 0.22μm滤膜待用，将1ug的质粒溶于100ul的DEPC水中，按合适的比例加入适量的PC溶液制备PC-DOX/p53纳米体系。
生物活性测试
1.CCK8检测GC-FUA/miR-122共传递纳米体系对肝癌细胞的增殖抑制作用
将HepG2细胞用新鲜配制好的DMEM高糖培养液终止其细胞消化并重新制成细胞悬液。用细胞计数板算好细胞浓度后，在96孔板中接种每孔细胞密度为5×103个细胞约接种200ul，在96孔板边缘一圈的复孔用PBS缓冲溶液填充。种板完成后用酒精棉球擦拭其表面后，继续培养24h。取出放在倒置显微镜下观察，等到细胞单层长满约孔底的80％-90％，小心吸取孔内旧培养基弃掉，用已高压灭菌好的PBS缓冲溶液清洗3遍，分别加入GC-FUA/miR-122、 GC-FUA、GC/miR-122、5-Fu溶液。设浓度为1、0.5、0.1、0.05、0.01mg/mL (5-Fu浓度为等效浓度)，每组设置5个复孔。继续培养24h。等到达相应的时间点后，从培养箱中取出96孔板，每孔加入10ul CCK-8后继续放入培养箱中培养2-4h。到时间后取出96孔板。采用酶联免疫检测仪检查的每孔在波长450nm 处的光吸收值(OD值)。按照下列公式计算出每组药物浓度的抑制率：抑制率％＝ (对照组OD值-给药组OD值)/对照组×100％。测试结果如说明书附图9和表1所示。
表1：CCK8检测GC-FUA/miR-122共传递纳米体系对肝癌细胞的增殖抑制作用
由图9和表1可知，随着浓度的增加，各处理组对细胞的生长抑制作用都增强。与游离5-Fu相比，GC-FUA/miR-122-NPs对HepG2细胞的增殖抑制效果明显增强，##P<0.01。同时，分别与GC-FUA-NPs、GC/miR-122-NPs， GC-FUA/miR-122共传递纳米体系的抑制效果优于基因传递组 (GC/miR-122-NPs)、大分子前药组(GC-FUA-NPs)，&P<0.05，*P<0.05。说明GC-FUA/miR-122-NPs对HepG2细胞的增殖抑制有协同效果。
2.对细胞迁移和侵袭能力的影响
细胞划痕实验检测细胞迁移能力：用Mark笔在6孔板背后划横线，横穿过孔。每孔至少穿过3条线。制备HepG2细胞悬液，每孔加入约5×105个细胞，次日培养至100％融合。用200uL枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。375％CO2条件下培养。按0h，12h，24h取样，拍照。
Transwell法检测细胞侵袭能力：1.准备基质胶：将matrigel(冻存于-20℃冰箱)放到4℃过夜，使其变成液态；2.用预冷的Tip头、移液管，将液态的 BD Matrigel，用4℃的无血清培养基以1:8稀释，混匀。在Transwell上室均匀铺 40μL稀释的Matrigel，放入5％CO2、37℃培养箱中，孵育2h，使之形成一层均匀的薄层凝胶；3.用培养基(无血清)轻洗薄层凝胶；4.细胞悬液制备：培养基(无血清)洗细胞3次，0.25％胰酶消化细胞，细胞计数，用无血清培养基 (含0.1％BSA)配成细胞悬液(1×106个/mL)；5.在Transwell下室中加入500 μL含有10％小牛血清的RPMI-1640液，上室每孔加入100μL细胞悬液，放置于配套的24孔板上；6.将Transwell放置于5％CO2、37℃培养箱中，培养24h；7.取出transwell，用棉签轻轻擦尽上室面的Matrigel和非侵袭细胞，下室面用 4％多聚甲醛固定，室温15min。移去24孔板，将transwell小室倒置，风干；8.在 24孔板中加入500μL 0.1％结晶紫，将小室置于其中，使膜浸没在结晶紫中，染色15min，PBS洗2遍。晾干，将小室正置于载玻片上，在倒置显微镜下观察。随机取5个高倍镜视野，照相、计数。计数小室下室面的细胞数即反映肿瘤细胞迁移能力的高低，取平均数作为实验结果。
测试结果如说明书附图10、表2所示。
表2细胞迁移和侵袭能力检测
由图10和表2可知，GC-FUA/miR-122可以阻滞高迁移细胞HepG2细胞的迁移，而游离5-Fu对细胞的迁移无明显的阻滞作用。同时，tanswell侵袭试验也表明GC-FUA/miR-122可以阻滞HepG2细胞的侵袭，而游离5-Fu对细胞的侵袭无明显的阻滞作用，说明miR-122的传递可以阻滞miR-122细胞的迁移和侵袭。
3.细胞中miR-122靶蛋白ADAM17和凋亡关键蛋白Bcl-2的抑制
Western Blot检测miR-122相关靶蛋白的表达，测试结果如说明书附图11 和表3所示。
由图11和表3可知，western blot实验检测miR-122靶基因Bcl-2、Adam17 的表达，结果验证GC-FUA/miR-122可以下调Bcl-2、Adam17的表达，与流式检测凋亡实验结果及迁移和侵袭能力检测实验结果一致。
最后所应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案,均落在本发明要求的保护范围。

Claims (11)

1.一种大分子前药作为基因载体以完成基因和药物共递送的纳米体系，由抗肿瘤药物和靶向基团与阳离子聚合物载体以偶联的方式形成聚合物前药，然后该聚合物前药再与目的基因自组装形成共递送的纳米体系。
2.根据权利要求1所述的基因和药物共递送的纳米体系，其特征在于：
所述抗肿瘤药物选自含羧基或羟基的抗肿瘤药及其衍生物，抗肿瘤化合物及其衍生物的羧基或羟基部位通过与阳离子聚合物的氨基发生缩合反应，进而结合到阳离子聚合物中；
所述靶向基团是指能够靶向特定组织或受体的基团；
所述聚阳离子载体选自常用于基因传递的聚阳离子离子载体；
所述目的基因指具有抗肿瘤活性的基因片段。
3.根据权利要求1-2任一项所述的基因和药物共递送的纳米体系，其特征在于：所述抗肿瘤药物选自5-氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇、吉西他滨、阿糖胞苷、阿扎胞苷、克拉屈滨、氟达拉滨、柔红霉素、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、放线菌素D、丝裂霉素、光辉霉素、更生霉素、多西他赛、喜树碱、羟基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨、长春花碱，及其相应的衍生物；
所述靶向基团能够靶向肝癌细胞，所述靶向基团优选为核酸适配体、乳糖残基、半乳糖残基、叶酸残基、α-环糊精残基、β-环糊精残基、γ-环糊精残基；
所述聚阳离子载体选自壳聚糖、聚乙烯亚胺、多聚赖氨酸、鱼精蛋白、多聚精氨酸、聚乙酞亚胺、多胺树突状物、聚丙烯亚胺树突状物、多聚组氨酸、组氨酸赖氨酸分枝状聚合物；
所述目的基因优选为核酸适配体、microRNA-122、microRNA-34、P53、shAkt1或PDCD4。
4.根据权利要求1-3任一项所述的基因和药物共递送的纳米体系，所述聚合物前药的结构式为：
其中：
x、y、m和n各自独立地为正整数；
Drug是指抗肿瘤化合物及其衍生物的残基，抗肿瘤化合物及其衍生物的羧基或羟基部位通过与阳离子聚合物的氨基发生缩合反应，进而结合到阳离子聚合物中，所述抗肿瘤化合物优选为5-氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇、吉西他滨、阿糖胞苷、阿扎胞苷、克拉屈滨、氟达拉滨、柔红霉素、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、放线菌素D、丝裂霉素、光辉霉素、更生霉素、多西他赛、喜树碱、羟基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨、长春花碱及其衍生物，更优选为5-氟脲嘧啶-1-乙酰基、阿霉素残基，；
R1为靶向基团，其能够靶向特定组织或受体的基团，例如靶向肝癌细胞，靶向基团优选为核酸适配体、乳糖残基、叶酸残基、半乳糖残基、α-环糊精残基、β-环糊精残基、γ-环糊精残基；
R2各自独立地选自氢、乳糖残基、叶酸残基、半乳糖残基、α-环糊精残基、β-环糊精残基、γ-环糊精残基。
5.根据权利要求1所述的基因和药物共递送的纳米体系，所述聚合物前药的结构式为：
其中：x、y、m和n各自独立地为正整数。
6.一种制备如权利要求1-5任一项所述的共递送纳米体系的方法，其特征在于：将抗肿瘤药物、靶向基团借助化学键偶联到聚阳离子，合成聚合物前药，再将其制备成聚合物前药纳米体系，最后向该纳米体系中加入目的基因，采用自组装法制备得到共递送纳米体系。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：
将抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)与乳糖酸、壳聚糖共价结合，制得大分子前药半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶偶合物(GC-FUA)，再采用离子交联法制备得到GC-FUA纳米体系，然后向GC-FUA纳米体系中加入miRNA-122，经自组装制备得到GC-FUA/miRNA-122纳米体系；
或
将抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)与乳糖酸、壳聚糖共价结合，制得大分子前药半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶偶合物(GC-FUA)，再与叶酸酰胺或叶酸活性酯缩合，然后采用离子交联法制备得到GC-FUA-FA纳米体系，然后向GC-FUA-FA纳米体系中加入p53基因片段，经自组装制备得到GC-FUA-FA/p53纳米体系；
或
将抗肿瘤药物阿霉素(DOX)与聚乙烯亚胺(PEI)、β-环糊精共价结合，制得大分子前药β-环糊精-聚乙烯亚胺偶合物(PC-DOX)，再采用离子交联法制备出PC-DOX纳米体系，然后向PC-DOX纳米体系中加入含P53基因片段的质粒，经自组装制备得到PC-DOX/p53纳米体系。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)称取乳糖酸(LA)1.1g溶于25mL TEMED/HCl的缓冲溶液(pH4.7)中，加入0.3g EDC·HCl，磁力搅拌20min进行活化，再加入0.07g NHS和1.1g壳聚糖，在室温下磁力搅拌反应72h，装入透析袋中透析2d，冷冻干燥，即得到浅黄色固体样品GC；
(2)在装有回流冷凝装置的三颈瓶中，加入KOH 10.0g，30mL双蒸水，搅拌溶解。
9.再加入5-氟尿嘧啶(5-Fu)4.0g，40℃水浴中保温搅拌30min；然后再缓慢滴加6.25g溴乙酸溶液10mL，滴加超过30min；缓慢升温至60℃，并在此温度下反应6h；冷却至室温，用浓HCl调节pH至5.5，放入冰箱中，冷藏过夜，如有沉淀析出，滤除，收集滤液，再将其pH调至2.0，有大量白色固体析出，冷却12h，过滤，沉淀物用蒸馏水洗涤3次，收集白色固体，烘干得产物5-氟尿嘧啶-1-基乙酸(FUA)；
(3)取45mg FUA溶于20mL50mmol·L的盐酸溶液，加入EDC·HCl 0.1g，磁力搅拌20min进行活化，再加入0.0025g NHS和40mg GC，40℃水浴中保温反应3d，透析2d，冷冻干燥48h，得到黄棕色固体GC-FUA；将适量GC-FUA固体粉末溶解于1％的醋酸水溶液中，搅拌过夜使其充分溶胀，用氢氧化钠调节其pH至4～7；将GC-FUA溶液过0.22μm的滤膜；
(4)10ug miR-122溶于1ml无DEPC水中，根据质荷比取相应的GC-FUA纳米粒子溶液，均匀混合，搅拌混合溶液20min，让二者的充分的相互作用并且稳定形成的纳米体系，之后将得到的混合溶液以13000rpm的离心速度离心15min，去除上清液，得到离心后留下的纳米颗粒，将最终得到的离心产物冻干得目标产物。
10.一种药物组合物，其包含权利要求1-3任一项所述的纳米体系和药学上可接受的载体和/或赋形剂。
11.根据权利要求1-3任一项所述的共递送纳米体系在制备抗癌药物中的应用：所述抗癌药物为优选为靶向药物；
所述癌症选自肝癌、肺癌、乳腺癌、白血病、子宫癌、宫颈癌、皮肤癌、甲状腺癌、口腔癌，更优选为肝癌；
根据权利要求10所述的应用，其特征在于：所述共递送纳米体系用于控制抗癌活性成分的释放、对抗癌活性成分进行靶向传递、将抗肿瘤药物和抗肿瘤基因片段进行共传递。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110115765A (zh) * 2019-05-30 2019-08-13 福州大学 兼具分子靶向/基因/光热治疗的纳米复合物的制备方法
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CN114470237A (zh) * 2022-03-21 2022-05-13 中国科学院长春应用化学研究所 一种类病毒结构基因载体、药物递送系统、其制备方法及其应用
EP4077677A4 (en) * 2019-12-20 2024-01-24 Ohio State Innovation Foundation RNA NANOPARTICLE FOR THE TREATMENT OF LIVER CANCER

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110115765A (zh) * 2019-05-30 2019-08-13 福州大学 兼具分子靶向/基因/光热治疗的纳米复合物的制备方法
CN110772646A (zh) * 2019-10-15 2020-02-11 天津大学 共载多烯紫杉醇与crispr/cas9脂质体及应用
EP4077677A4 (en) * 2019-12-20 2024-01-24 Ohio State Innovation Foundation RNA NANOPARTICLE FOR THE TREATMENT OF LIVER CANCER
CN112402394A (zh) * 2020-11-25 2021-02-26 天津医科大学第二医院 利用正负电荷特性吸附了纳米药物载体的卡介苗复合体及其制备方法
CN113181421A (zh) * 2021-05-12 2021-07-30 广州贝奥吉因生物科技股份有限公司 一种具有抗菌和免疫调节功能的水凝胶伤口敷料及制备方法
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CN114470237B (zh) * 2022-03-21 2023-12-19 中国科学院长春应用化学研究所 一种类病毒结构基因载体、药物递送系统、其制备方法及其应用

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