CN109557038A - 一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法，包括以下步骤：1)供试品的预处理：在分液漏斗中加入乙酸乙酯，将待测水飞蓟宾葡甲胺加入分液漏斗中，将稀盐酸加入分液漏斗中，振摇萃取，静置，保留上层有机相；2)将上层有机相用水浴蒸馏或旋转蒸发器蒸干溶剂，得到粉末；3)将粉末用甲醇溶解定容后，采用紫外分光光度法，在288nm的波长处测定水飞蓟宾、待测水飞蓟宾葡甲胺的吸光度，通过计算得到水飞蓟宾葡甲胺的含量。本发明的优点是先采用萃取方法，将待测水飞蓟宾葡甲胺合成过程中多余的葡甲胺溶解至下层水相，后用紫外分光光度法测试吸光度，有效避免葡甲胺对水飞蓟宾葡甲胺吸光度的影响，保证紫外分光光度法的测试准确性。
Description
技术领域
本发明涉及药品检测方法领域，特别是涉及一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法。
背景技术
水飞蓟宾葡甲胺，适应症为用于急、慢性肝炎，初期肝硬化，中毒性肝损害的辅助治疗。
在生产过程中，需要对水飞蓟宾葡甲胺的含量进行检测，采用目前常规的检测方法，经常出现检测含量值与实际投料量偏差较大的问题，影响临床用药的准确性。
发明内容
发明目的：针对上述问题，本发明的目的是提供一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法，以解决检测含量值与实际投料量偏差较大的技术问题。
技术方案：
一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法，包括以下步骤：
1)供试品的预处理：在分液漏斗中加入乙酸乙酯，将待测水飞蓟宾葡甲胺加入分液漏斗中，后将稀盐酸加入分液漏斗中，振摇萃取，静置，保留上层有机相，去除下层水相；
2)将上层有机相用水浴蒸馏或旋转蒸发器蒸干溶剂，得到粉末；
3)将粉末用甲醇溶解定容后，采用紫外分光光度法，以水飞蓟宾为对照品，在288nm的波长处测定水飞蓟宾、待测水飞蓟宾葡甲胺的吸光度，通过计算得到水飞蓟宾葡甲胺的含量。由于先采用萃取方法，将待测水飞蓟宾葡甲胺合成过程中多余的葡甲胺溶解至下层水相，使有效成分水飞蓟宾葡甲胺溶于上层有机相内，后用紫外分光光度法测试吸光度，有效避免葡甲胺对水飞蓟宾葡甲胺吸光度的影响，保证紫外分光光度法的测试准确性，使检测含量值与实际投料量偏差较小，从而保证临床用药的准确性。
在其中一个实施例中，步骤1)中，乙酸乙酯的称取量为50～60mL，待测水飞蓟宾葡甲胺的称取量为15～20mg，稀盐酸的称取量为5～10mL，稀盐酸的浓度为0.01～0.05mol/L。
在其中一个实施例中，步骤2)中，当采用水浴蒸馏法将上层有机蒸干溶剂时，水浴温度为90～100℃。
在其中一个实施例中，步骤3)中，将粉末用甲醇溶剂定容包括以下步骤：将粉末放入容器中用甲醇溶解后，进行超声处理，超声处理时间为20～30min，超声过程中将容器进行振摇，将容器内壁上的粉末溶解，冷却，后补加甲醇进行定容。
在其中一个实施例中，水飞蓟宾经过预处理后作为对照品，预处理过程为：水飞蓟宾经过105℃干燥至恒重。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是由于先采用萃取方法，将待测水飞蓟宾葡甲胺合成过程中多余的葡甲胺溶解至下层水相，使有效成分水飞蓟宾葡甲胺溶于上层有机相内，后用紫外分光光度法测试吸光度，有效避免葡甲胺对水飞蓟宾葡甲胺吸光度的影响，保证紫外分光光度法的测试准确性，使检测含量值与实际投料量偏差较小，从而保证临床用药的准确性。
具体实施方式
下面通过具体实施例详细说明本发明，但不用于限制本发明。
本发明提供了一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法。
1.仪器及试剂
紫外分光光度计(UV-2600型号，日本岛津仪器有限公司)；超声波清洗器(KQ-250DB，昆山市超声仪器有限公司)；旋转蒸发仪(RE-2000A，上海亚荣生化仪器厂)。
水飞蓟宾葡甲胺(批号：161006、161008、161210、170102，江苏中兴药业有限公司)；水飞蓟宾对照品(批号110856-201506，含量96.3％，中国药品生物制品检定所)；乙酸乙酯(分析纯，成都科龙化工试剂厂)；甲醇(色谱纯，Omni Chem)；盐酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)。
2.测试方法
2.1标准曲线
精密称取适量水飞蓟宾对照品，加甲醇制成200μg/mL的对照品储备液。后用甲醇分别配制成1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL的对照品工作溶液。
上述各对照品工作溶液经全波长扫描后，用紫外分光光度计在288nm处分别测定各吸光度，绘制标准曲线。
2.2供试品及对照品的测定
供试品的测定：在分液漏斗中加入50mL的乙酸乙酯，精密称取待测水飞蓟宾葡甲胺15mg，将待测水飞蓟宾葡甲胺加入分液漏斗中，加入5mL 0.01mol/L的稀盐酸溶液，振摇萃取，静置，保留上层有机相，去除下层水相；将上层有机相用水浴蒸馏或旋转蒸发器蒸干溶剂，得到粉末；将粉末放入容器中用60mL甲醇溶解，超声处理20min，超声过程中将容器进行振摇，将容器内壁上的粉末溶解，冷却，转移至100mL容量瓶中，甲醇定容，摇匀。精密量取5mL至50mL容量瓶中，甲醇定容，摇匀，得到供试品溶液。用紫外分光光度计在288nm处测定待测水飞蓟宾葡甲胺的吸光度A样。
水飞蓟宾的预处理过程为：水飞蓟宾经过105℃干燥至恒重。
对照品的测定：称取10mg预处理后的水飞蓟宾两份，分别置于50mL容量瓶中，加入甲醇，超声处理20min，冷却，后用甲醇定容。测试时分别取5mL至100mL容量瓶中，甲醇定容，摇匀，得到对照品溶液。两个对照品分别为对照品1、对照品2，用紫外分光光度计在288nm处分别测定两个对照品的吸光度，分别为A1和A2。
按照下列公式计算，得到供试品待测水飞蓟宾葡甲胺的含量。
其中，A1为对照品1的吸光度，A2为对照品2的吸光度，W1为对照品1的称取质量，W2为对照品2的称取质量，A样为供试品的吸光度，W样为供试品的称取质量。
2.3方法学验证
2.3.1回收率
配制5份水飞蓟宾对照品溶液，分别在288nm处测定其吸光度，代入标准曲线中计算回收率。
其中，m测定量为通过测定的吸光度计算得到的水飞蓟宾对照品的质量，m称取量为水飞蓟宾对照品的实际称取量。
2.3.2精密度、稳定性试验
平行称取5份同一批号供试品，按照2.2项进行测定，计算精密度。
取3份同一批号供试品，按照2.2项进行测定，分别在供试品溶液制成0min、1h、12h及24h后测定吸光度，并计算供试品的含量，测试本发明的检测方法的稳定性。
3.测试结果
3.1标准曲线
精密称取水飞蓟宾对照品至50mL容量瓶中，加甲醇制成216μg/mL的对照品储备液。后用甲醇分别配制成1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL的对照品工作溶液。分别取上述对照品工作溶液在288nm处测试吸光度，测试结果如表1所示。
表1水飞蓟宾对照品标准曲线测定数据
通过表1中的数据，以吸光度为y轴，浓度(μg/mL)为x轴，绘制标准曲线，水飞蓟宾对照品的回归方程及线性范围为：y＝0.0449x+0.0148(1～40μg/mL，R2＝0.999)。
3.2供试品的测定
其中，水飞蓟宾对照品m1＝10.14mg，A1＝0.459，m2＝10.05mg，A2＝0.455，计算得到水飞蓟宾对照品的F＝0.04527。
分别精密称取多个批号的供试品，进行288nm处吸光度的测试，测试结果如表2所示。
表2不同批次供试品的测定结果
由表2可知，通过本发明的检测方法，检测得到的同一批号多个供试品的水飞蓟宾含量差距较小，说明本发明的检测方法检测结果较精准。
3.3方法学验证
3.3.1回收率
分别称取5份水飞蓟宾对照品，制成水飞蓟宾对照品溶液，在288nm处测定吸光度，通过代入标准曲线中，计算水飞蓟宾的测定量，从而计算回收率，测试数据如表3所示。
表3水飞蓟宾对照品的回收率测定结果
由表3可知，水飞蓟宾对照品的回收率较稳定，且RSD较低，说明本发明的水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法结果较准确，可靠性较好。
3.3.2精密度
其中，水飞蓟宾对照品m1＝10.00mg，A1＝0.454，m2＝10.04mg，A2＝0.456，计算得到水飞蓟宾对照品的F＝0.04541。
平行精确称取5份同一批次的供试品，在288nm处测定吸光度，以确定精密度，测试结果如表4所示。
表4精密度的测试结果
由表4可知，RSD＜2％，说明本发明的检测方法的精密度良好，测试结果较准确。
3.3.3稳定性
取3份同一批号供试品，分别在供试品溶液制成0min、1h、12h及24h后测定吸光度，并计算供试品的含量，测试本发明的检测方法的稳定性，测试结果如表5所示。
表5稳定性的测试结果
由表5可知，不同批号的多份供试品溶液进行不同时间后的吸光度测定，RSD＜2％，说明本发明的检测方法稳定性较好。
Claims (5)
1.一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)供试品的预处理：在分液漏斗中加入乙酸乙酯，将待测水飞蓟宾葡甲胺加入分液漏斗中，后将稀盐酸加入分液漏斗中，振摇萃取，静置，保留上层有机相，去除下层水相；
2)将上层有机相用水浴蒸馏或旋转蒸发器蒸干溶剂，得到粉末；
3)将粉末用甲醇溶解定容后，采用紫外分光光度法，以水飞蓟宾为对照品，在288nm的波长处测定水飞蓟宾、待测水飞蓟宾葡甲胺的吸光度，通过计算得到水飞蓟宾葡甲胺的含量。
2.根据权利要求1所述的一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法，其特征在于，步骤1)中，乙酸乙酯的称取量为50～60mL，待测水飞蓟宾葡甲胺的称取量为15～20mg，稀盐酸的称取量为5～10mL，稀盐酸的浓度为0.01～0.05mol/L。
3.根据权利要求1所述的一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法，其特征在于，步骤2)中，当采用水浴蒸馏法将上层有机蒸干溶剂时，水浴温度为90～100℃。
4.根据权利要求1所述的一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法，其特征在于，步骤3)中，将粉末用甲醇溶剂定容包括以下步骤：将粉末放入容器中用甲醇溶解后，进行超声处理，超声处理时间为20～30min，超声过程中将容器进行振摇，将容器内壁上的粉末溶解，冷却，后补加甲醇进行定容。
5.根据权利要求4所述的一种水飞蓟宾葡甲胺含量的检测方法，其特征在于，水飞蓟宾经过预处理后作为对照品，预处理过程为：水飞蓟宾经过105℃干燥至恒重。
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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