CN109548786A - 一种抑制肺炎克雷伯氏菌的灭菌剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种可以显著抑制肺炎克雷伯氏菌生长繁殖的灭菌剂，其主要成分是利普司他汀。包括下列成分：利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH和纯净水；利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH的质量分数分别是：5‑13%、0.5‑2%和0.5‑2%。本发明提供了一种抑制肺炎克雷伯氏菌生长繁殖的灭菌剂，可以用于室内消毒使用，特别是医院等肺炎克雷伯氏菌容易引起传播的公共场所，对抑制肺炎克雷伯氏菌的生长繁殖具有很好效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种抑制肺炎克雷伯氏菌的灭菌剂。
背景技术
克雷伯氏菌属(Klebsiella)为肠杆菌科中一类有荚膜的革兰氏阴性杆菌，其中肺炎克雷伯氏菌(又称肺炎杆菌)、臭鼻克雷伯氏杆菌和鼻硬结克雷伯氏菌与人类关系密切，特别是肺炎克雷伯氏菌，其所致疾病占克雷伯氏菌属感染的95％以上，为呼吸道感染的重要病原体，常引起重症肺炎，还可引起泌尿道感染、胆道感染、败血症和化脓性脑膜炎等严重疾病，是重要的条件致病菌和医源性感染菌之一。
克雷伯氏菌为较短粗的杆菌，大小0.5～0.8×1～2um,单独、成双或短链状排列。无芽胞，无鞭毛，有较厚的荚膜，多数有菌毛。营养要求不高，有普通琼脂培养基上形成较大的灰白色粘液菌落，以接种环挑之，易拉成丝，有助鉴别。在肠道杆菌选择性培养基上能发酵乳糖，呈现有色菌落。具有O抗原与K抗原，后者用以分型。利用荚膜肿胀试验，本属K抗原可分为82型。肺炎克氏菌大多属3型和12型；臭鼻克氏菌主要属4型，少数为5型或6型；鼻硬结克氏菌一般属3型，但并非所有3型均为该菌。
肺炎克雷伯氏菌广泛分布于自然界的土壤、水和农产品及林产品中，在人和动物的肠道及呼吸道内也常见，是典型的条件致病菌，常于动物抵抗力下降时引起暴发性流行，如奶牛的乳房炎、家兔的肠炎、肺炎，雏鸡腹泻，绵羊的传染性口炎，大熊猫的腹泻、肝炎，猪腹泻，貂肺炎和豚鼠肺炎等。以奶牛为例，肺炎克雷伯氏菌感染可引起奶牛乳房炎，造成产奶量下降，牛奶品质降低，而且病原菌还具有通过食物链(奶产品)传递给人类的风险，从而对人类健康造成潜在危害。
青霉素类、头孢类和碳青霉烯类等β-内酰胺类药物是防治肺炎克雷伯氏菌感染最主要的药物，其中青霉素类和头孢类药物在治疗肺炎克雷伯氏菌感染中广泛使用，但由于长期的药物选择性压力，病原菌表现出了对这些药物严重的耐药性。近年来，出现了多重耐药(MDR)菌株并在全球蔓延，而对此的治疗方法有限。单克隆抗体可能代表新的治疗方法。尽管如此，考虑到屏蔽大多数表面抗原的体积庞大的荚膜多糖，肺炎克雷伯氏菌表面上可接近的分子靶标非常有限。另一方面，容易接近的荚膜多糖显示出高度的结构变异性和因此显示出高度的抗原变异性，使其对广谱抗菌方法不具有吸引力。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种抑制肺炎克雷伯氏菌的灭菌剂。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
本发明提供了一种可以显著抑制肺炎克雷伯氏菌生长繁殖的灭菌剂，其主要成分是利普司他汀。
利普司他汀是由毒三素链霉菌经发酵产生的代谢产物，其四氢衍生物为奥利司他，是一种减肥药（赛尼可）。
申请人在实践科研过程中，发现毒三素链霉菌可以抑制肺炎克雷伯氏菌的生长繁殖，进一步研究发现，其毒三素链霉菌经发酵产生的代谢产物利普司他汀可以显著抑制肺炎克雷伯氏菌。
本发明提供一种抑制肺炎克雷伯氏菌的灭菌剂，主要活性成分是利普司他汀。优选的，利普司他汀的质量分数在0.1-30%之间。
本发明还提供一种抑制肺炎克雷伯氏菌灭菌剂，其特征在于，包括下列成分：利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH和纯净水；利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH的质量分数分别是：5-13%、0.5-2%和0.5-2%。
本发明的有益效果：
青霉素类、头孢类和碳青霉烯类等β-内酰胺类药物是防治肺炎克雷伯氏菌感染最主要的药物，其中青霉素类和头孢类药物在治疗肺炎克雷伯氏菌感染中广泛使用，但由于长期的药物选择性压力，病原菌表现出了对这些药物严重的耐药性。
本发明提供了一种抑制肺炎克雷伯氏菌生长繁殖的灭菌剂，可以用于室内消毒使用，特别是医院等肺炎克雷伯氏菌容易引起传播的公共场所，对抑制肺炎克雷伯氏菌的生长繁殖具有很好效果。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供一种抑制肺炎克雷伯氏菌灭菌剂，其特征在于，包括下列成分：利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH和纯净水；利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH的质量分数分别是：13%、2%和2%。
实施例2
本实施例提供一种抑制肺炎克雷伯氏菌灭菌剂，其特征在于，包括下列成分：利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH和纯净水；利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH的质量分数分别是：5%、0.5%和0.5%。
实施例3
本实施例提供一种抑制肺炎克雷伯氏菌灭菌剂，其特征在于，包括下列成分：利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH和纯净水；利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH的质量分数分别是：8%、1%和1%。
实施例4 抑菌圈法测定利普司他汀的抑菌效果
（1）抑菌剂配置：用纯净水配置质量分数为1、5、10、15%的利普司他汀抑菌溶液，
（2）平板培养基：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCL10g/L，琼脂粉20g/L。
（3）方法：
菌种的活化及菌液的制备：将冷冻保存的肺炎克雷伯氏菌菌种划线接种至平板培养基，37℃培养24h；挑单菌落接种至100mL液体培养基，37℃、200r/min摇床培养过夜，菌液备用。
菌株来自青岛疾病预防控制中心。
试验平板的制备：
预加菌液倾注平板法：往已冷却至50℃左右的平板培养基中注入一定量的菌液，混合均匀，倾注平板（约20mL/平板），使得试验平板中菌体浓度在1×10^5-1×10^6CFU/mL之间，水平静置凝固后备用。
试验平板抑菌操作：将灭菌后的圆片滤纸（直径2cm）放入不同质量分数的抑菌液中浸渍片刻，取出置于试验平板的中央，然后将试验平板放入37℃的恒温培养箱中培养24h。
当抑菌剂含量一定时，抑菌圈的大小跟菌体浓度有很大关系，如果菌体浓度过大，会拮抗抑菌剂的作用，导致抑菌圈偏小。因此，本实验只是初步验证利普司他汀的肺炎克雷伯氏菌抑菌效果，
本实验同时用无菌的生理盐水作为对比，验证不同质量分数的利普司他汀溶液的抑菌效果。其抑菌圈的大小如下：
| 抑菌液 | 无菌的生理盐水 | 1 | 5 | 10 | 15 |
| 抑菌圈直径（cm） | 0 | 0.3 | 2.9 | 6.4 | 9.2 |
实施例5 实施例1-3的杀菌效果实验
取实施例1-3配置的灭菌剂溶液各1mL装于灭菌试管(每个实施例做3次平行实验)内，然后分别取实施例4中培养的菌液，各1mL加入盛有1mL灭菌剂的试管内，充分摇匀。作用10-15min后，各吸0.5mL混合液放入灭菌平板培养基内，将平皿放于37℃培养24h计算菌落总数，为消毒后菌数。
按下列公式计算杀菌率：
杀菌率(%)=（消毒前菌数－消毒后菌数）/消毒前菌数
上述实验设置对照组，选用无菌生理盐水。
结果如下：
对照组的平板培养基中，长满菌落，实施例1-3灭菌剂处理过的菌液中，平板培养基中均无菌落生长。
Claims (4)
1.一种抑制肺炎克雷伯氏菌的灭菌剂，主要活性成分是利普司他汀。
2.根据权利要求1所述的灭菌剂，其特征在于，利普司他汀的质量分数在0.1-30%之间。
3.一种抑制肺炎克雷伯氏菌灭菌剂，其特征在于，包括下列成分：利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH和纯净水。
4.根据权利要求4所述的灭菌剂，其特征在于，利普司他汀、EDTA二钠盐、NaOH的质量分数分别是：5-13%、0.5-2%和0.5-2%。
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