CN109540846B - 一种测量糖化的蛋白质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种测量糖化的蛋白质的方法，所述方法基于羟基硼基化合物结合糖化蛋白质而不结合非糖化蛋白质的原理，在原有技术上进行改进，仅采用一种缓冲液，即可得到血样中的糖化血红蛋白百分比，因而可以明显简化测试操作流程，使得测试过程变得便捷迅速，并使得未经过专门培训的糖尿病患者在家中自行进行糖化血红蛋白检测成为可能，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种测量糖化的蛋白质的方法。
背景技术
根据最新的流行病学调查统计，糖尿病在全球有3.7亿患者，在中国有1.1亿患者，市场规模巨大，且增长迅速。而且据研究，我国糖尿病人中只有1/3得到了及时诊断，在所有已诊断病人中，又只有1/3得到了有效的治疗，使血糖得到了良好控制。糖尿病对我国公众的健康造成巨大威胁，给医保支出带来沉重负担，目前糖尿病及其并发症所耗费的医疗费用已经占到医疗总支出的约20％。
血液中的蛋白质，包括血浆中的白蛋白，红细胞中的血红蛋白等，会和血液中的葡萄糖缓慢的发生非酶促反应，生成糖化的蛋白质。糖化的蛋白质的比例与血液中的葡萄糖浓度相关，因此可以测量血液样本，包括全血，血浆或者血清中的糖化的蛋白质的比例，来对糖尿病进行诊断和监测。例如，糖化血红蛋白就是临床针对糖尿病进行诊断、监测、疗效评估和用药指导的“金标准”。糖化血红蛋白是血液中的葡萄糖与血红蛋白缓慢进行非酶促反应生产的产物，糖化血红蛋白有多种形式，其中最主要的是葡萄糖分子与血红蛋白alpha亚基N末端结合生成的产物HbA1c，HbA1c约占总糖化血红蛋白的80％，除HbA1c外，还存在其他形式的糖化血红蛋白。临床检验实践中上，测定糖化血红蛋白时一般报告HbA1c占总血红蛋白的比例。
CN1489693B提供了用于量化生物样品中糖化的蛋白质定的方法，所述方法包括：(a)使含有带负电荷的基团和羟基硼基化合物并具有一定的测量区域的固体载体基质与足以覆盖所述测量区域的生物样品接触；(b)使所述固体载体基质与一份足以洗去未结合的蛋白质的第一缓冲液接触，其中所述第一缓冲液具有经过选择以使糖化的和非糖化的蛋白质都结合在所述的固体载体基质上的pH值；(c)利用对所述蛋白质被选性质的测量来量化结合到所述测量区域的蛋白质以得到第一结合蛋白质读数；(d)使所述固体载体基质与一份足以洗去未结合的蛋白质的第二缓冲液接触，其中所述的第二缓冲液具有经过选择以使糖化的蛋白质结合在所述固体载体基质上，而非糖化的蛋白质基本上不结合在所述固体载体基质上的pH值；(e)利用对步骤(c)所测性质的测量来量化结合到所述的测量区域的蛋白质以得到第二结合蛋白质读数；(f)用所述第一和第二结合蛋白质读数计算糖化的蛋白质的百分数。该技术需要在测试过程中加入两种不同pH值的缓冲液，实际测试过程中，添加两种不同缓冲液增加了检验人员的操作步骤，加大了操作的难度和复杂性，延长了测试时间，并且带来额外的操作错误风险，例如检验人员不小心按照错误的顺序加入缓冲液，即先加入第二缓冲液再加入第一缓冲液，从而造成测试错误。
因此，对现有技术进行优化和改进，研发一种一步测量糖化蛋白的方法，简化操作步骤和反应时间，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。
发明内容
针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供一种测量糖化的蛋白质的方法，所述方法仅采用一种缓冲液，即可得到血样中的糖化血红蛋白百分比，明显简化测试操作流程，使得测试过程变得便捷迅速，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种测量糖化的蛋白质的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)将足以洗脱未结合的蛋白质的缓冲液滴加至含有羟基硼基化合物并具有测量区域的固体载体基质的加样端，所述缓冲液具有经过选择以使糖化的蛋白质结合在所述固体载体基质上，而非糖化的蛋白质不结合在所述固体载体基质上的pH值；
(2)向步骤(1)滴加了缓冲液的固体载体基质的加样端加入生物样品，进行层析；
(3)测量过程持续对测量区域发出测量光线，并检测反射回的光强，收集反射率并计算得到测量结果。
本发明中，发明人在长期的生产实践中，发现现有技术(CN1489693)在测量糖化蛋白质的过程中，即需要在测试过程中加入两种不同pH值的缓冲液。实际测试过程中，添加两种不同缓冲液增加了检验人员的操作步骤，加大了操作的难度和复杂性，延长了测试时间，并且带来额外的操作错误风险，例如检验人员不小心按照错误的顺序加入缓冲液，即先加入第二缓冲液再加入第一缓冲液，从而造成测试错误；因此，通过设计复杂实验并反复摸索，简化了实验步骤和试剂，发现了不同时间的反射率与蛋白浓度的相关性，解决在运用上述原理测试血样中的糖化血红蛋白百分比时，需要添加两种缓冲液的问题，依照本方案，在测试中只需要加入一种缓冲液即可得到血样中的糖化血红蛋白百分比，因而可以明显简化测试操作流程，使得测试过程变得便捷迅速，并使得未经过专门培训的糖尿病患者在家中自行进行糖化血红蛋白检测成为可能。
优选地，步骤(1)所述糖化的蛋白质包括糖化血红蛋白和/或糖化白蛋白。
优选地，步骤(1)所述缓冲液的pH值为7-10，例如可以是7、7.5、8、8.5、9、9.5或10，优选为8-8.5。
优选地，步骤(1)所述缓冲液包括磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes-Na缓冲液、Taurine缓冲液或Tris-HCl缓冲液中的任意一种或至少两种的组合，优选为Tris-HCl缓冲液。
优选地，步骤(1)所述缓冲液的浓度为50-200mM/L，例如可以是50mM/L、60mM/L、70mM/L、80mM/L、90mM/L、100mM/L、120mM/L、140mM/L、150mM/L、160mM/L、180mM/L、190mM/L或200mM/L，优选为80-120mM/L。
优选地，步骤(1)所述缓冲液还包括表面活性剂。
优选地，所述表面活性剂包括Tween 20、DM、DDM或Triton X-100中的任意一种或至少两种的组合，优选为Tween 20。
优选地，步骤(1)所述羟基硼基化合物为二羟基硼基化合物，包括硼酸、苯硼酸或乙烯基本硼酸中的任意一种或至少两种的组合，优选为硼酸。
优选地，步骤(1)所述固体载体基质包括包括聚乙烯、聚丙烯或聚苯乙烯中的任意一种或至少两种的组合，优选为聚丙烯。
优选地，步骤(2)所述生物样品包括全血、血清或血浆中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，步骤(3)所述测量光线的波长为280-430nM，例如可以是280nM、300nM、320nM、340nM、360nM、380nM、400nM或430nM。
优选地，步骤(3)所述反射的部件包括反射片和/或反射膜，优选为反射膜。
优选地，步骤(3)所述收集的方法为：分别收集步骤(1)加入缓冲液时的反射率稳定值2-Wet、步骤(2)加入生物样品后的反射率最低值3-THb以及步骤(2)层析后的反射率稳定值4-GHb。
优选地，步骤(3)所述计算的方法包括：计算(3-THb/2-Wet)/(4-GHb/2-Wet)的值，根据蛋白浓度与反射率的标准曲线，计算得到糖化的蛋白质占总蛋白的比例。
优选地，步骤(3)所述技术的方法还包括：计算(2-Wet-4-GHb)/(2-Wet-3-THb)的值，根据该值与HbA1c值的线性函数关系，计算得到糖化的蛋白质占总蛋白的比例。
作为优选技术方案，一种测量糖化的蛋白质的方法，具体包括如下步骤：
(1)将足以洗脱未结合的蛋白质的pH值为7-10的缓冲液滴加至含有硼酸并具有测量区域的固体载体基质的加样端，所述缓冲液具有经过选择以使糖化的蛋白质结合在所述固体载体基质上，而非糖化的蛋白质不结合在所述固体载体基质上的pH值；
(2)向步骤(1)滴加了缓冲液的固体载体基质的加样端加入生物样品，生物样品随着缓冲液流经测量区域，从加样端向吸水纸进行层析；
所述生物样品包括全血、血清或血浆中的任意一种或至少两种的组合；
(3)测量过程持续对测量区域发出280-430nm的测量光线，并检测反射膜和/或反射片反射回的光强，分别收集步骤(1)加入缓冲液时的反射率稳定值2-Wet、步骤(2)加入生物样品后的反射率最低值3-THb以及步骤(2)层析后的反射率稳定值4-GHb，并计算得到测量结果；
计算的方法包括：计算(3-THb/2-Wet)/(4-GHb/2-Wet)的值，根据蛋白浓度与反射率的标准曲线，计算得到糖化的蛋白质占总蛋白的比例，或者计算(2-Wet-4-GHb)/(2-Wet-3-THb)的值，根据该值与HbA1c值的线性函数关系，计算得到糖化的蛋白质占总蛋白的比例。
在本发明提出的技术方案中，发明人仅采用一种缓冲液，该缓冲液的允许pH值范围为7-10，优选为8-8.5之间，在这种缓冲液中，血样中的糖化血红蛋白能够与层析膜上的硼酸基团结合，而非糖化血红蛋白将随缓冲液一起沿层析膜层析而最终被洗脱；血样中总血红蛋白的含量与反射率曲线所能达到的最低值相关，因而能够通过测量该最低值得到总血红蛋白浓度；而反射率数值最终会稳定在某个水平上，该稳定值与血样中糖化血红蛋白的浓度相关，血样中糖化血红蛋白浓度越高，则反射率将稳定在一个较低的值，血样中糖化血红蛋白浓度越低，则反射率将稳定在一个较高的值，因而可以通过测量该稳定值来计算血样中糖化血红蛋白的浓度，计算得到总血红蛋白浓度和糖化血红蛋白浓度后，便能得到血样中糖化血红蛋白的比例。
第二方面，本发明提供一种测量糖化的蛋白质的装置，所述装置采用如第一方面所述的方法测量糖化的蛋白质。
优选地，所述装置包括如下部件：含有羟基硼基化合物并具有测量区域的固体载体基质、吸收材料。
优选地，所述装置还包括底卡，所述底卡位于固体载体基质的底部；
优选地，所述固体载体基质为层析膜；
优选地，所述吸收材料为吸水纸。
第三方面，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包括第二方面所述的装置、第一方面所述方法的缓冲液。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的方法仅采用一种缓冲液，操作简便快捷，节省时间，不易出错，降低操作错误的风险，提高效率，直接用原始的反射率值构建方程进行计算，并将得到的值与血样中的HbA1c值关联起来，结果准确稳定，关联性强，明显简化测试操作流程，使得测试过程变得便捷迅速，并使得未经过专门培训的糖尿病患者在家中自行进行糖化血红蛋白检测成为可能。
附图说明
图1为本发明的装置图；
图2为本发明的一步法反射率曲线图；
图3为本发明的血红蛋白浓度与反射率的标准曲线图；
图4为本发明的实施例4的线性回归分析图；
图5为本发明的实施例5的线性函数关系图；
图6为本发明的两步法反射率曲线图。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
实施例1制备装置
本发明制备的装置为糖化血红蛋白测试试纸，具体结构如图1所示；
糖化血红蛋白检测试纸由底卡(PET Card)，层析膜(membrane)，吸水纸(Sink)与反射膜(reflector)组成；在底卡上正对反射膜的部位有一个圆孔，作为检测光学反射值的检测孔；层析膜上结合有在pH 5-7的溶液环境中带负电荷的基团如羧基等，以及硼酸基团；关于层析膜的特征，在专利“用于量化糖化的蛋白质的方法和装置”(专利号：CN02804372)中已有详细描述。
本发明的测量方法由糖化血红蛋白检测仪和糖化血红蛋白检测试纸共同完成。
实施例2
采用本发明提供的方法检测糖化的蛋白质，采用一种缓冲液，该缓冲液的允许pH值范围为7-10，优选为8-8.5之间，在这种缓冲液中，血样中的糖化血红蛋白能够与层析膜上的硼酸基团结合，而非糖化血红蛋白将随缓冲液一起沿层析膜层析而最终被洗脱；血样中总血红蛋白的含量与反射率曲线所能达到的最低值相关，因而能够通过测量该最低值得到总血红蛋白浓度；而反射率数值最终会稳定在某个水平上，该稳定值与血样中糖化血红蛋白的浓度相关，血样中糖化血红蛋白浓度越高，则反射率将稳定在一个较低的值，血样中糖化血红蛋白浓度越低，则反射率将稳定在一个较高的值，因而可以通过测量该稳定值来计算血样中糖化血红蛋白的浓度；计算得到总血红蛋白浓度和糖化血红蛋白浓度后，便能得到血样中糖化血红蛋白的比例，典型的反射率曲线如图2所示；
由图2可知，曲线的开始段为一个小平台，编号为1-Dry，表示干条值；加入缓冲液后，反射率降低到一个较低的平台，编号为2-Wet，表示湿条值；加入血样后，反射率将迅速下降至最低点3-THb，此时的反射率与血样中总血红蛋白浓度(Total HemoglobinConcentration，包括糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白)有关；随着缓冲液继续层析，所有的非糖化血红蛋白被洗脱，只留下糖化血红蛋白结合在层析膜上，反射率值稳定在平台4-GHb，对应的是层析膜上糖化血红蛋白(GlycoHemoglobin)的浓度；
层析膜上的血红蛋白浓度与反射率的标准曲线如图3所示；
图3可知，横坐标为反射率百分比(％)值，指的是反射率最低点3-THb和平台4-GHb与湿条值2-Wet的相对比值，即3-THb/2-Wet与4-GHb/2-Wet的值，而不是3-THb与4-GHb的值；通过计算3-THb/2-Wet与4-GHb/2-Wet的值，并在上述曲线中找到对应的总血红蛋白浓度及糖化血红蛋白浓度，即可以求得血样中的糖化血红蛋白的比例ratio。
实施例3
选取两个血样，糖化血红蛋白的值分别为5.2％和11.6％，利用实施例2的一步法分别测试6次，测试使用的缓冲液为50mM Tris-HCl，100mM NaCl,1％Tween 20，pH为8.5，得到的结果为：
糖化血红蛋白值为5.2％的血样的测试值见表1和表2；
表1糖化血红蛋白值为5.2％的血样的测试值
| 2-Wet | 3-THb | 4-GHb | Conc-THb | Conc-GHb | Ratio | |
| 1 | 77.92 | 24.16 | 59.22 | 1.038 | 0.065 | 0.0626 |
| 2 | 78.53 | 24.74 | 58.90 | 1.031 | 0.066 | 0.0640 |
| 3 | 77.34 | 26.30 | 59.17 | 1.005 | 0.065 | 0.0647 |
| 4 | 77.75 | 24.88 | 58.00 | 1.029 | 0.068 | 0.0661 |
| 5 | 76.94 | 23.77 | 60.01 | 1.044 | 0.062 | 0.0594 |
| 6 | 77.92 | 24.94 | 59.22 | 1.026 | 0.065 | 0.0634 |
表2糖化血红蛋白为11.6％的血样的测试值
| 2-Wet | 3-THb | 4-GHb | Conc-THb | Conc-GHb | Ratio | |
| 1 | 76.91 | 23.36 | 48.57 | 1.068 | 0.164 | 0.1536 |
| 2 | 78.98 | 22.79 | 47.42 | 1.091 | 0.176 | 0.1613 |
| 3 | 78.23 | 22.03 | 47.63 | 1.097 | 0.172 | 0.1568 |
| 4 | 76.52 | 24.29 | 48.57 | 1.056 | 0.162 | 0.1534 |
| 5 | 78.40 | 24.31 | 49.45 | 1.063 | 0.164 | 0.1543 |
| 6 | 76.52 | 22.23 | 46.99 | 1.09 | 0.169 | 0.1550 |
由表1和表2可知，对于高低值血样，Ratio值的变异系数(Coefficient ofVariance，CV)分别为3.6％和1.9％，表明用该一步法能够获得良好的测试重复性。
实验表明，所用的缓冲液并不局限为Tris-HCl缓冲液，多种缓冲范围为pH7-10的缓冲液，均可以用于该原理的测试，这些缓冲液包括磷酸缓冲液，甘氨酸缓冲液，Hepes-Na缓冲液，Taurine缓冲液等，缓冲液中的表面活性剂也不仅仅限于Tween 20，还包括DM，DDM，Triton X-100等表面活性剂。
实施例4
选取糖化血红蛋白值为4.5，5.5，6.7，7.8，8.5，9.9，10.6和11.1的八个血样，使用100mM Glycine，100NaCl，1％Triton X-100进行测试，每个血样测试两次，得到的Ratio值如下表3所示；
表3
对上表数据的线性回归分析见图4；
线性回归分析的结果表明，在HbA1c值在4.5-11.1的范围内，该一步法的信号值，即Ratio值，与血样的HbA1c的靶值之间存在着良好的线性关系，相关系数达到0.99以上，也证明该一步法用于临床实际测试的潜力。
实施例5
上述实施例3和4中，我们均是先得到反射率曲线最低点3-THb和平台4-GHb与湿条值2-Wet的相对比值，即3-THb/2-Wet与4-GHb/2-Wet的值，再根据反射率与层析膜上血红蛋白浓度的关系得到总血红蛋白浓度及糖化血红蛋白浓度值，从而得到糖化血红蛋白浓度占总血红蛋白浓度的比例，即Ratio值。
更为简单的一种算法是直接用(2-Wet-4-GHb)/(2-Wet-3-THb)，发明人发现这个比值与血糖的HbA1c值同样成一定的线性函数关系，选取糖化血红蛋白值为4.5，5.5，6.7，7.8，8.5，9.9，10.6和11.1的八个血样，使用100mM Glycine，100NaCl，1％Triton X-100进行测试，每个血样测试6次，得到的(2-Wet-4-GHb)/(2-Wet-3THb)的值如下表4所示，线性函数关系见图5：
表4
结果表明，在实际进行测量时，可以不用进行反射率与层析膜上血红蛋白浓度的关系曲线的测定，而直接用原始的反射率值构建方程进行计算，并将得到的值与血样中的HbA1c值关联起来。
对比例1两步法
采用实施例1制备的装置和糖化血红蛋白检测仪，具体如下：
在测试的第一阶段，先在层析膜上加上pH值为5-7的第一缓冲液，再在层析膜上加上人全血样本，血样将随第一缓冲液一起，从样品添加处沿层析膜向吸水纸一端层析；血样中的血红蛋白，包括糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白，在pH5-7的第一缓冲液中均带正电荷，从而与层析膜上的负电荷基团想结合，第一缓冲液层析完成后，糖化血红蛋白测试仪测试糖化血红蛋白检测试纸检测孔处层析膜上结合的总血红蛋白(包括非糖化血红蛋白和糖化血红蛋白)的反射值。
在测试的第二阶段，在层析膜上加入pH值为8-10的第二缓冲液，由于血红蛋白在pH 8-10的环境下也带负电荷，因此在加入第二缓冲液后，血红蛋白将从层析膜上的负电荷基团上解离下来，此时糖化血红蛋白能够依靠自身结合的葡萄糖上的顺式二羟基与层析膜上的硼酸基团结合，而非糖化血红蛋白则被第二缓冲液冲洗到吸水纸上。第二缓冲液层析完成后，糖化血红蛋白测试仪再次检测检测孔处结合的糖化血红蛋白的反射值。
反射值与层析膜上结合的血红蛋白的分子数目相关，通过将第一阶段和第二阶段测得的反射值转换成血红蛋白浓度，便可以得到样本中糖化血红蛋白占总血红蛋白的比例。
在运用上述的两步法测试血样中的糖化血红蛋白比例时，先往试纸上加入第一缓冲液，第一缓冲液通过扩散作用开始沿层析膜层析，再加入血样，血样将跟随第一缓冲液层析，血红蛋白通过电荷相互作用结合在层析膜上。第一缓冲液层析完成后加入第二缓冲液，第二缓冲液能够将层析膜上结合的非糖化血红蛋白洗脱下来，而糖化血红蛋白则通过其结合的葡萄糖分子与层析膜上的硼酸基团结合在一起，第二缓冲液层析完毕后，层析膜上结合的均为糖化血红蛋白。测试的整个过程中，测试仪一直向测试卡上测试孔内发出一定波长和强度的光，并实施测量被层析膜反射回的光的强度的值，得到反射率。测试过程中典型的反射率曲线如图6所示；
由图6可知，阶段1所示为测试卡未加缓冲液时的反射率，此时测试卡层析膜为干燥状态，因此又将此时测得的反射率值称为干条反射率值，简称干条值；
阶段2所示为加入第一缓冲液后测得的反射率，此时测试卡层析膜为被第一缓冲液润湿的状态，因此又将此时测得的反射率值称为湿条反射率值，简称湿条值；
阶段3所示为加入血样后测得的反射率，由于在这个阶段，血红蛋白结合在层析膜上，血红蛋白对测试仪发出的光有吸收作用，因此在这个阶段反射率降低至一个较低的平台；
阶段4所示为加入第二缓冲液后测得的反射率，在这个阶段，非糖化血红蛋白被从层析膜上洗脱，只留下糖化血红蛋白，因此反射率曲线上升到一个较高的平台。
由实验步骤可知，两步法的操作过程繁琐复杂，错误率高，费时费力。
综上所述，本发明提供了一种测量糖化的蛋白质的方法，所述方法基于羟基硼基化合物结合糖化蛋白质而不结合非糖化蛋白质的原理，在原有技术上进行改进，仅采用一种缓冲液，即可得到血样中的糖化血红蛋白百分比，因而可以明显简化测试操作流程，使得测试过程变得便捷迅速，并使得未经过专门培训的糖尿病患者在家中自行进行糖化血红蛋白检测成为可能，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (12)
1.一种测量糖化的蛋白质的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)将足以洗脱未结合的蛋白质的缓冲液滴加至含有羟基硼基化合物并具有测量区域的固体载体基质的加样端，所述缓冲液具有经过选择以使糖化的蛋白质结合在所述固体载体基质上，而非糖化的蛋白质不结合在所述固体载体基质上的pH值；
(2)向步骤(1)滴加了缓冲液的固体载体基质的加样端加入生物样品，进行层析；
(3)测量过程持续对测量区域发出测量光线，并检测反射回的光强，收集反射率并计算得到测量结果；
步骤(1)所述缓冲液的pH值为8-8.5；
步骤(1)所述缓冲液包括磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes-Na缓冲液、Taurine缓冲液或Tris-HCl缓冲液中的任意一种或至少两种的组合；
步骤(1)所述缓冲液的浓度为50-200mM；
步骤(1)所述羟基硼基化合物为二羟基硼基化合物，包括硼酸、苯硼酸或乙烯基苯硼酸中的任意一种或至少两种的组合；
步骤(1)所述固体载体基质材质包括聚乙烯、聚丙烯或聚苯乙烯中的任意一种或至少两种的组合；
步骤(3)所述测量光线的波长为280-430nm；
步骤(3)所述反射的部件包括反射膜和/或反射片；
步骤(3)所述收集的方法为：分别收集步骤(1)加入缓冲液时的反射率稳定值2-Wet、步骤(2)加入生物样品后的反射率最低值3-THb以及步骤(2)层析后的反射率稳定值4-GHb；
步骤(3)所述计算的方法包括：计算(3-THb/2-Wet)/(4-GHb/2-Wet)的值，根据蛋白浓度与反射率的标准曲线，计算得到糖化的蛋白质占总蛋白的比例；或，计算(2-Wet-4-GHb)/(2-Wet-3-THb)的值，根据该值与HbA1c值的线性函数关系，计算得到糖化的蛋白质占总蛋白的比例。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述糖化的蛋白质包括糖化血红蛋白和/或糖化白蛋白。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述缓冲液为Tris-HCl缓冲液；
步骤(1)所述缓冲液的浓度为80-120mM。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述缓冲液还包括表面活性剂；
所述表面活性剂包括Tween 20、DM、DDM或Triton X-100中的任意一种或至少两种的组合。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述表面活性剂为Tween20。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述羟基硼基化合物为硼酸；
步骤(1)所述固体载体基质材质为聚丙烯。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述生物样品包括全血、血清或血浆中的任意一种或至少两种的组合。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述反射的部件为反射膜。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(1)将足以洗脱未结合的蛋白质的pH值为8-8.5的缓冲液滴加至含有硼酸并具有测量区域的固体载体基质的加样端；
(2)向步骤(1)滴加了缓冲液的固体载体基质的加样端加入生物样品，生物样品随着缓冲液流经测量区域，从加样端向吸收材料进行层析；
所述生物样品包括全血、血清或血浆中的任意一种或至少两种的组合；
(3)测量过程持续对测量区域发出280-430nm的测量光线，并检测反射膜和/或反射片反射回的光强，分别收集步骤(1)加入缓冲液时的反射率稳定值2-Wet、步骤(2)加入生物样品后的反射率最低值3-THb以及步骤(2)层析后的反射率稳定值4-GHb，并计算得到测量结果；
计算的方法包括：计算(3-THb/2-Wet)/(4-GHb/2-Wet)的值，根据蛋白浓度与反射率的标准曲线，计算得到糖化的蛋白质占总蛋白的比例，或者计算(2-Wet-4-GHb)/(2-Wet-3-THb)的值，根据该值与HbA1c值的线性函数关系，计算得到糖化的蛋白质占总蛋白的比例。
10.一种测量糖化的蛋白质的装置，其特征在于，所述装置采用如权利要求1-9中任一项所述的方法测量糖化的蛋白质。
11.根据权利要求10所述的装置，其特征在于，所述装置包括如下部件：含有羟基硼基化合物并具有测量区域的固体载体基质、吸收材料；
所述装置还包括底卡，所述底卡位于固体载体基质的底部；
所述吸收材料为吸水纸。
12.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求10或11所述的装置以及权利要求1-9中任一项所述方法的缓冲液。
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