CN105021823A - 免疫层析分析装置、免疫层析分析方法以及免疫层析分析试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明的课题在于提供一种免疫层析分析装置,其中无需繁杂的测定准备以及操作,可以在短测定时间内高效地测定血液、尿等多种检体中所含的各种成分,通过这样的免疫层析分析装置解决上述课题,在所述样本添加部中含有阴离子型表面活性剂,所述免疫层析分析装置用于展开用检体稀释液稀释含有被检测物质的检体而得到的检体含有液。
Description
技术领域
本发明涉及免疫层析分析装置、免疫层析分析方法以及免疫层析分析试剂盒。
背景技术
测定血液、尿等检体中所含的各种成分临床上在把握患者的健康状态方面极其重要,一直以来,对应该成分采用了各种测定方法。作为其一,已知通过免疫反应使检体中所含的被检出物质发色,并确认该发色信号的免疫层析分析装置以及分析方法。
另一方面,2011年世界的糖尿病患者数存在3亿6600万人,据预测,2030年将达到5亿5200万人(成人人口的约10%)。另外,据认为所谓的糖尿病预备军也在其同等以上。
一直以来,是通过测定血糖值来进行糖尿病的诊断,但是近年来,由于血中的血红蛋白上结合有糖的糖化血红蛋白(糖化ヘモグロビン)(糖化血红蛋白(グリコヘモグロビン))、特别是血红蛋白β链的N末端缬氨酸残基糖化的血红蛋白A1c(以下,称为“HbA1c”)相对于总血红蛋白量的浓度反映过去1至2个月的平均血糖值,因此正作为适于糖尿病的诊断或糖尿病的追踪观察的指标使用。
然而一直以来,HbA1c的测定通过HPLC法、毛细管电泳法、酶法、免疫学测定方法等来实施,但是因为这些方法需要针对特定的装置或分析的专业知识,因此存在这样的问题:在小规模的医院或家庭等中不能简单获知HbA1c的值。
另外,关于HbA1c的血中浓度,由于血中成分存在个人差异,因此通过同时测定HbA1c以外的血红蛋白并掌握HbA1c量相对于HbA1c和HbA1c以外的血红蛋白的总血红蛋白量的比率,来判断糖尿病的阴性或阳性。
但在此情况下还存在这样的问题:需要通过上述方法分别测定HbA1c和HbA1c以外的血红蛋白,因此测定的繁杂程度进一步恶化。
此处,(例如)专利文献1提出了一种简单测定HbA1c的方法。这里所使用的免疫层析分析装置如图3(a)的截面图、图3(b)的平面图所示,在塑料制粘合片a上沿装置的长度方向按顺序分别设置样品垫b、含有经标记物标记的颗粒标记抗体的垫c、抗体固定化膜f、吸水垫g,在抗体固定化膜f上分别设置涂布有抗HbA1c抗体的抗HbA1c抗体涂布部d、涂布有抗HbA0抗体的抗HbA0抗体涂布部e,从而构成免疫层析分析装置30。
测定HbA1c的血中浓度时,如图4的流程图所示,首先混合所采集的血液和使血红蛋白β链的N末端在蛋白质表面露出的成分(N末端露出剂(露出剤))(S401),静置几分钟,使HbA1c的抗原决定基在血红蛋白蛋白质的表面露出从而制备样本液(S402)。将适量的所得样本液滴在样品垫b上(S403)。
接着,进一步向样品垫b滴加适量的展开液(S404),使样本液通过毛细管现象在抗体固定化膜f上展开(S405)。在抗体固定化膜f上展开的样本液到达抗HbA1c抗体涂布部d,在这里仅有样本液中的HbA1c发生反应从而被检测(S406)。
接着,进一步在抗体固定化膜f上展开的样本液到达抗HbA0抗体涂布部e,仅有样本液中的HbA0发生反应,从而被检测(S407)。其他血红蛋白不反应从而移动至吸水垫g(S408)。由此,分别检测样本液中的HbA0和HbA1c。
[现有技术文献]
[专利文献]
[专利文献1]日本特开2012-251789号公报
发明内容
[发明要解决的课题]
然而,使用所述一直以来的免疫层析分析装置的情况下,因为具有将所采集的血液和使血红蛋白β链N末端在蛋白质表面露出的成分(N末端露出剂)混合的工序(S401)、静置几分钟从而制备样本液的工序(S402)、将样本液滴加在样品垫b上的工序(S403)、进一步另外准备展开液并将其滴加在样品垫上的工序(S404),因此存在这样的问题:需要样本液以及展开液2种液体,同时必须分别将它们滴加在样品垫b上,测定准备以及操作繁杂,另外耗费测定时间,效率性恶化。
因此,本发明的目的在于提供一种免疫层析分析装置、免疫层析分析方法以及免疫层析分析试剂盒,其能够解决上述一直以来的课题,无需繁杂的测定准备以及操作,可以在短测定时间内高效地测定血液、尿等多种检体中所含的各种成分。
[解决课题的手段]
本发明人经过深入研究,结果发现,通过使添加含有被检测物质的检体的样本添加部(样品垫)包含阴离子型表面活性剂,可以解决上述一直以来的课题,从而完成了本发明。
即,本发明如下所述。
1.一种免疫层析分析装置,其包括样本添加部、标记物保持部、担载有检测部的层析介质部和吸收部,
其中,在所述样本添加部中含有阴离子型表面活性剂,
所述免疫层析分析装置用于展开用检体稀释液稀释含有被检测物质的检体而得到的检体含有液。
2.前述1中记载的免疫层析分析装置,其中所述样本添加部为选自由玻璃纤维、纤维素以及聚对苯二甲酸乙二醇酯组成的组中的一种。
3.前述1或2中记载的免疫层析分析装置,其中在所述样本添加部中含有8~800μg的所述阴离子型表面活性剂。
4.前述1~3中任意一项记载的免疫层析分析装置,其中所述被检测物质为血液中的糖化蛋白质。
5.前述4中记载的免疫层析分析装置,其中所述血液中的糖化蛋白质为HbA1c。
6.前述1~5中任意一项记载的免疫层析分析装置,其中所述阴离子型表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS)。
7.一种免疫层析分析方法,其使用免疫层析分析装置来检测检体中所含的被检测物质,所述免疫层析分析装置包括含有阴离子型表面活性剂的样本添加部、标记物保持部、担载有检测部的层析介质部和吸收部,所述免疫层析分析方法包括以下工序(1)~(4):
(1)向样本添加部中添加用检体稀释液稀释检体而得到的检体含有液的工序;
(2)通过标记物保持部中所保持的标记物识别被检测物质的工序;
(3)将检体以及标记物作为移动相在层析介质部中展开的工序;
(4)用检测部检测展开后的移动相中的被检测物质的工序。
8.前述7所述的方法,其中在所述检体稀释液中含有非离子型表面活性剂。
9.前述8所述的方法,其特征在于,在所述检体稀释液中含有0.01~5质量%的所述非离子型表面活性剂。
10.前述7~9中任意一项记载的方法,其中所述样本添加部中含有8~800μg的所述阴离子型表面活性剂。
11.一种免疫层析分析试剂盒,其由免疫层析分析装置和用于稀释检体并将其展开的检体稀释液构成,所述免疫层析分析装置包括样本添加部、标记物保持部、担载有检测部的层析介质部和吸收部,其中
所述检体稀释液中含有非离子型表面活性剂,并且
所述样本添加部中含有阴离子型表面活性剂。
[发明的效果]
本发明的免疫层析分析装置、免疫层析分析方法以及免疫层析分析试剂盒由于在样本添加部中含有阴离子型表面活性剂,因此无需像一直以来那样的样本液以及展开液2种液体,仅仅将用检体稀释液稀释含有被检测物质的检体而得到的检体含有液一种液体滴加在样本添加部即可。
也就是说,在本发明中,由于在样本添加部中含有阴离子型表面活性剂,因此在将检体含有液加入到样本添加部之前,可以不包含使被检测物质的抗原决定基露出的工序。因此,根据本发明,无需繁杂的测定准备以及操作,并且可以在短测定时间内高效地测定血液、尿等多种检体中所含的各种成分。
附图简要说明
[图1]图1(a)以及图1(b)为用于说明本发明的免疫层析分析装置的例子的示意图,图1(a)为截面图、图1(b)为平面图。
[图2]图2为使用本发明的免疫层析分析试剂盒测定HbA1c相对于血中的总血红蛋白量的浓度时的流程图。
[图3]图3(a)以及图3(b)为用于说明常规技术的免疫层析分析装置的示意图,图3(a)为截面图、图3(b)为平面图。
[图4]图4为使用现有技术的免疫层析分析装置测定HbA1c相对于血中的总血红蛋白量的浓度时的流程图。
[符号说明]
1 免疫层析分析装置
11 塑料制粘合片
12 样本添加部
13 标记物保持部
14 层析介质部
15 吸收部
16 涂布有抗HbA1c抗体的抗HbA1c抗体涂布部
17 涂布有抗血红蛋白抗体的抗血红蛋白抗体涂布部
18 涂布有抗IgG抗体的抗IgG抗体涂布部
具体实施方式
下面,对本发明进一步详细说明。
本发明所用的检体可以列举:(例如)诸如血液、血浆、血清之类的血液样本、尿、唾液、脊髓液(髄液)、汗、泪、羊水、乳头分泌液、鼻涕、痰、鼻腔或咽拭子液、皮肤渗出液、组织或细胞以及粪便的提取物等。
作为本发明的被检测物质,可列举(例如)α-胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)等肿瘤标记物、铁蛋白、前列腺特异抗原(PSA)以及免疫球蛋白G(IgG)等血清蛋白质、类风湿因子、生长激素(GH)以及促肾上腺皮质激素(ACTH)等激素相关物质、流感病毒、腺病毒、衣原体抗原、A群溶血性链球菌抗原等细菌抗原、以及衍生自血红蛋白的蛋白质等。
作为本发明的被检测物质,优选血液中的被检测物质,可列举(例如)衍生自血红蛋白的蛋白质、血浆蛋白、脂蛋白、分泌蛋白、激素、补体、脂质、胆固醇、糖、其他生物体内成分、生物体内给药及其代谢产物等。
其中,从本发明的效果的观点出发,优选为血液中的糖化白蛋白或糖化血红蛋白等糖化蛋白质,更优选为HbA1c。以下将HbA1c作为被检测物质、将HbA1c以外的血红蛋白作为成为判定阴性或者阳性的基准的物质,以此为例进行说明,但本发明并不限于下述例子。
本发明的免疫层析分析装置包括样本添加部、标记物保持部、担载有检测部的层析介质部和吸收部。以下参照附图对本发明的层析分析装置进行说明。图1(a)以及图1(b)为用于说明本发明的免疫层析分析装置的例子的示意图,图1(a)为截面图、图1(b)为平面图。
如图1(a)以及图1(b)所示,免疫层析分析装置1中,在塑料制粘合片11上沿试剂盒的长度方向依次分别设置有:样本添加部12、含有经标记物标记的抗血红蛋白抗体的标记物保持部13、层析介质部14、吸收部15。
另外,在层析介质部14上分别设置有作为检测部的涂布有抗HbA1c抗体的抗HbA1c抗体涂布部16、涂布有抗血红蛋白抗体的抗血红蛋白抗体涂布部17、作为对照的涂布有抗IgG抗体的抗IgG抗体涂布部18。
塑料制粘合片11是构成免疫层析分析装置1的基材,并且通过在一面上涂布粘合剂或者粘附胶带而使一面变为粘合面,将下述的各构成部位的一部分或全部在该粘合面上紧贴。关于塑料制粘合片11的材质,适当选择对样本具有不透过性、非透湿性的材质即可。
样本添加部12可以由具有以下性质的多孔片构成:其能够迅速吸收下面所述的检体含有液,但保持力弱、检体含有液能够快速地移动至抗原抗体反应区域。
作为该多孔片,可列举由玻璃纤维、纤维素、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氨酯、聚醋酸酯、醋酸纤维素、硝化纤维、尼龙、棉布等构成的垫、纤维以及膜等。其中,优选使用选自由玻璃纤维、纤维素以及聚对苯二甲酸乙二醇酯组成的组中的一种构成样本添加部12。
样本添加部12含有阴离子型表面活性剂。作为阴离子型表面活性剂,可列举(例如)十二烷基硫酸钠(SDS)等烷基硫酸盐,聚氧乙烯月桂基醚硫酸钠等聚氧乙烯烷基醚硫酸盐,十二烷基苯磺酸钠等烷基苯磺酸盐,月桂酰基甲基丙氨酸、N-月桂酰基肌氨酸的钠盐等酰基氨基酸盐,二烷基磺基琥珀酸钠,β萘磺酸甲醛缩合物钠盐,以及特殊聚羧酸型高分子表面活性剂等。
在阴离子型表面活性剂中,从提高本发明的效果的观点出发,特别优选十二烷基硫酸钠(SDS)等烷基硫酸盐。
样本添加部12可含有(例如)8~800μg,优选含有10~500μg,更优选含有16~480μg的阴离子型表面活性剂。另外,样本添加部12可含有5~500μg/cm2的阴离子型表面活性剂,优选含有6~313μg/cm2,更优选含有10~300μg/cm2。
为了保持样本添加部12中阴离子型表面活性剂干燥,可适当采用冷冻干燥、热风干燥、自然干燥等手段。
阴离子型表面活性剂具有使所采集的血液中的HbA1c的抗原决定基在血红蛋白蛋白质的表面露出的功能。具体而言,阴离子型表面活性剂充当使血红蛋白β链N末端在蛋白质表面露出的成分(N末端露出剂)。
在本发明中,由于在样本添加部12中含有阴离子型表面活性剂,因此在将后述检体含有液加入到样本添加部之前,可以不包含使被检测物质的抗原决定基露出的工序。
此时,在使用选自由玻璃纤维、纤维素以及聚对苯二甲酸乙二醇酯组成的组中的一种作为构成样本添加部12的材料的情况下,HbA1c和阴离子型表面活性剂的接触效率变高,并且获得以下详细描述的、阴离子型表面活性剂作为N末端露出剂有效发挥作用的效果。
另外,根据需要,还可向样本添加部12中添加硫氰酸钠、胍盐酸盐或者EDTA等各种添加剂。
标记物保持部13保持(例如)经标记物标记的抗血红蛋白抗体。标记物保持部13中的抗血红蛋白抗体可以与检体含有液中的血红蛋白特异性地结合。作为这种抗体,可列举多克隆抗体、或单克隆抗体等。单克隆抗体以及多克隆抗体或者其片段是公知的且可以获得,并且可以通过公知的方法制备。
作为产生抗体的动物种类,可列举(例如)人、小鼠、大鼠、兔子、山羊等。作为免疫球蛋白,可以是IgG、IgM、IgA、IgE或者IgD的任意一者。
单克隆抗体可以这样获得:通过常规方法,将经抗原免疫的小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞杂交,选择产生目标抗体的杂交瘤,获得从该杂交瘤中产生的血红蛋白抗体(参照(例如)科勒(ケーラー)和米尔斯坦(ミルスタイン)的技术[Nature 256(1975)495-497])。
多克隆抗体可以这样获得:通过常规方法,利用抗原将产生动物(例如,人、小鼠、大鼠、兔子、山羊以及马等)进行免疫获得抗血清,从该抗血清中分离目标抗体而获得。
作为标记物,优选为可以通过视觉确认着色的有色物质,并且可以适当采用业界周知的标记物。可列举(例如)金属胶粒、非金属胶粒、着色乳胶以及酶标记等,从标记的稳定性的观点出发,优选为即使时间流逝也难以褪色的金属胶粒。
作为金属胶粒,除金、铂、铜、银、钯胶体以外,还可使用它们混合后的颗粒,特别是,由于在适当的粒径下金胶粒呈现红色,所以优选。
金属胶粒的平均粒径为(例如)1~500nm,从获得强烈色彩的方面考虑,优选为10nm~150nm、更优选为20~100nm的范围。作为非金属胶粒,可列举(例如)硒胶体等。可以通过常规方法制备金属胶粒以及非金属胶粒,此时,调节粒径以呈现所需色彩。另外,也可使用市售品。
关于着色乳胶,可列举(例如)利用使聚苯乙烯等高分子聚合物的颗粒呈现红色或蓝色的着色剂着色后的乳胶,并且可通过常规方法制备。作为酶标记,可列举(例如)过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶和半乳糖苷酶等。使用酶标记的情况下,使相对于该酶的基质以及根据需要的发色试剂反应,检测通过该反应产生的发色。
需要说明的是,可按照周知的手段制备经标记物标记的抗体。例如,作为在抗体上担载金胶粒的方法,可列举(例如)物理吸附或化学结合等周知的方法,具体而言,可以通过以下方法进行制备:向金颗粒以胶体状分散的溶液中加入抗体使之发生物理吸附,然后添加牛血清白蛋白溶液等封闭蛋白,将未结合抗体的颗粒表面封闭。另外,关于抗原抗体反应,可采用公知的夹心法、竞争法或将它们组合的方法。
作为标记物保持部13的材质,可列举(例如)玻璃纤维、纤维素、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氨酯、聚醋酸酯、尼龙以及棉布等。
层析介质部14只要是能够通过毛细管现象吸收样本检体并使之移动的物质即可,可由(例如)硝化纤维素、醋酸纤维素、尼龙、聚醚砜、聚乙烯醇、聚酯、玻璃纤维、聚烯烃、纤维素、以及它们的混合纤维等构成。
设置在层析介质部14上的抗HbA1c抗体涂布部16、抗血红蛋白抗体涂布部17、抗IgG抗体涂布部18可以由(例如)能够担载固定各自的抗体的材料构成,作为该材料可列举(例如)硝化纤维素等。
关于吸收部15,可列举具有迅速吸收过剩检体含有液的能力的材料,可使用纤维素纤维或者玻璃滤纸等。
接下来,对本发明的免疫层析分析方法进行说明。本发明的免疫层析分析方法是使用上述说明的免疫层析分析装置对检体中所含的被检测物质进行检测的分析方法,其包括以下工序(1)~(4):
(1)向样本添加部中添加用检体稀释液稀释检体而得到的检体含有液的工序;
(2)通过标记物保持部中所保持的标记物识别被检测物质的工序;
(3)将检体以及标记物作为移动相在层析介质部中展开的工序;
(4)用检测部检测展开后的移动相中的被检测物质的工序。
下面,对各工序进行说明。
在工序(1)中,首先制备用检体稀释液稀释检体而得到的检体含有液。检体稀释液可充当用于将工序(3)中的检体以及标记物作为移动相在层析介质部中展开的展开液。从展开性良好并且不阻碍抗原抗体的反应的观点出发,检体稀释液优选含有非离子型表面活性剂。
作为非离子型表面活性剂,可列举(例如)聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯/聚氧丙烯烷基醚、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯对叔辛基苯基醚、聚氧乙烯对叔壬基苯基醚、烷基多葡糖苷、脂肪酸二乙醇酰胺以及烷基单甘油醚等。
检体稀释液以(例如)水为溶剂,并且可含有比例为(例如)0.01~5质量%的非离子型表面活性剂,优选含有的比例为0.03~3.0质量%,更优选含有的比例为0.3~3.0质量%。另外,为了调整pH,还可适当添加缓冲液类、无机盐类等添加剂。
另外,从提高本发明的效果的观点出发,优选样本添加部12中含有的阴离子型表面活性剂与检体稀释液中含有的非离子型表面活性剂的百分比具有一定的比例,具体而言,该阴离子型表面活性剂:该非离子型表面活性剂(质量比)优选为9:1~1:90,更优选为3:1~1:60,进一步优选为1:2~1:50,最优选为1:2~1:34。
将如上所述获得的检体稀释液与从患者采集的血液混合,从而制备检体含有液,并将其滴在样本添加部12上。需要说明的是,从患者采集血液的位置可列举手指、牙龈、手臂静脉以及耳等。
通过样本添加部12中所含的阴离子型表面活性剂,血红蛋白β链N末端在蛋白质表面露出,检体含有液中所含的HbA1c通过毛细管现象到达标记物保持部13。
在工序(2)中,到达标记物保持部13的检体含有液中的血红蛋白与通过标记物标记的抗血红蛋白抗体发生抗原抗体反应,从而形成复合体。即,作为被检测物质的HbA1c也通过保持在标记物保持部13中的标记物而被识别。
在工序(3)中,将检体以及标记物,即检体含有液、抗血红蛋白抗体与血红蛋白的复合体作为移动相在层析介质部14中展开。此时,检体含有液中所含的非离子型表面活性剂使该展开的展开性优化,另外,如上所述,其发挥出不阻碍随后的抗原抗体反应的效果。
接着,在工序(4)中,在层析介质部14中展开的作为移动相中的被检测物质的HbA1c到达抗HbA1c抗体涂布部16,在通过那里时HbA1c与抗HbA1c抗体反应从而固定化。HbA1c以外的血红蛋白以及检体含有液不与抗HbA1c抗体涂布部16反应从而通过,但到达抗血红蛋白抗体涂布部17时,则HbA1c以外的血红蛋白与抗血红蛋白抗体反应从而固定化。
需要说明的是,未与抗原反应的标记物或者在抗体涂布部16以及17处未反应的标记物在抗IgG抗体涂布部18处与抗IgG抗体反应从而固定化,并且作为显示展开正常进行的对照而发色。
其它样本液成分不发生反应从而移动至吸收部15。由此,可确认各涂布部中由于HbA1c以及HbA1c以外的血红蛋白的存在所引起的发色信号。需要说明的是,抗HbA1c抗体以及抗血红蛋白抗体可以是如上所述的单克隆抗体、多克隆抗体的任意一者。
血中成分存在个人差异,如果只简单地通过使HbA1c发色而确认其强度的话,糖尿病的判定是困难的。因此,可以使HbA1c以及HbA1c以外的血红蛋白同时发色,从两者的发色程度的比较进行该判断。
具体而言,例如,比较HbA1c以及HbA1c以外的血红蛋白的发色信号,HbA1c的发色信号比HbA1c以外的血红蛋白的发色信号更强的情况下,即可判定为阳性。相反,HbA1c的发色信号与HbA1c以外的血红蛋白的发色信号相同或者比其更弱的情况下,即可判定为阴性。
本发明的免疫层析分析试剂盒由本发明的免疫层析分析装置以及检体稀释液构成,该免疫层析分析装置包括含有上述阴离子型表面活性剂的样本添加部12、标记物保持部13、担载有检测部的层析介质部14和吸收部15,所述检体稀释液用于将所述检体稀释并展开、并且含有非离子型表面活性剂。
图2为使用本发明的免疫层析分析试剂盒测定HbA1c相对于血中的总血红蛋白量的浓度时的流程图。
如图2的流程图所示,首先,混合所采集的血液和检体稀释液,从而制备检体含有液(S201)。将适量的所得检体含有液滴在样本添加部12上(S202)。接着,使检体含有液通过毛细管现象在标记物保持部13上展开(S203)。在标记物保持部13上展开的检体含有液到达层析介质部14上担载的抗HbA1c抗体涂布部16,在这里仅样本中的HbA1c发生反应从而被检测(S204)。
接着,在层析介质部14上进一步展开的检体含有液到达抗血红蛋白抗体涂布部17,检体含有液中在抗HbA1c抗体涂布部16处未反应的血红蛋白发生反应,从而被检测(S205)。其他样本液成分不反应从而移动至吸收部15(S206)。由此,分别检测样本液中的HbA1c以外的血红蛋白以及HbA1c。
本发明中,由于作为N末端露出剂的阴离子型表面活性剂包含在样本添加部12中,因此不需要像现有技术中那样,准备含有N末端露出剂的样本液以及展开液两种液体,并且将这两种液体分别向样本添加部12滴加。
因此,本发明中无需繁杂的测定准备以及操作,并且可以在短测定时间内高效地测定血液、尿等多种检体中所含的各种成分。
[实施例]
以下,通过实施例和比较例进一步说明本发明,但本发明并不限于下面例子。
实施例1
按照下面的顺序制作图1(a)以及图1(b)所示的免疫层析分析装置1。
(1)样本添加部12的制作
向玻璃纤维垫(ミリポア公司制,商品名:玻璃纤维结合垫(conjugate pad),尺寸纵向32mm(检体含有液展开方向)、横向150mm,厚度0.43mm)上,以60μg/cm2的比例均匀添加十二烷基硫酸钠(SDS),在50℃下干燥4小时,从而制作样本添加部12。
(2)抗HbA1c抗体涂布部16、抗血红蛋白抗体涂布部17、抗IgG抗体涂布部18的制作
作为膜,使用了由硝化纤维素制成的片材(ミリポア公司制,商品名:HF12、250mm×25mm)。用含有5质量%的蔗糖以及5质量%的异丙醇的10mM磷酸缓冲液(pH7.4)将抗HbA1c单克隆抗体、抗血红蛋白单克隆抗体或抗IgG单克隆抗体稀释成0.1mg/ml的浓度,通过抗体涂布机(BioDot公司制)将150μL该稀释后的溶液在膜上以1mm的宽度涂布至各自的位置,使之在50℃下干燥30分钟并在室温下干燥一晚,从而在层析介质部14上分别设置抗HbA1c抗体涂布部16、抗血红蛋白抗体涂布部17、抗IgG抗体涂布部18。
(3)标记物溶液的制备
向0.5mL金胶体悬浊液(田中贵金属工业株式会社制:平均粒径40nm)中,加入0.1mL用Tris缓冲液(pH8.5)稀释为0.1mg/mL浓度的抗血红蛋白单克隆抗体,室温下静置10分钟。然后,加入0.1ml的含有0.01质量%的PEG-SH(日本油脂株式会社制、商品名:SUNBRIGHT ME-200SH、分子量20000)的Tris缓冲液(pH8.5)(添加后的PEG-SH浓度:0.001质量%),室温下静置10分钟。然后,充分搅拌后,在8000×g下进行离心分离15分钟,除去上清液后,加入0.1ml的含有1质量%的牛血清白蛋白的磷酸缓冲液(pH7.4),从而制备标记物溶液。
(4)免疫层析分析装置1的制作
向220μl上述制备的标记物溶液中添加100μl的含有25质量%的海藻糖水溶液的磷酸缓冲液(pH9.0),将此溶液均匀地添加至8mm×100mm的玻璃纤维垫(ミリポア公司制)上以后,用真空干燥机使之干燥,从而制备了标记物保持部13。然后,向塑料制粘合片11上粘合上面制备的样本添加部12、经标记物标记的标记物保持部13、层析介质部14,进一步粘合通用的吸收部15,用切割机将宽度切为5mm,从而制作免疫层析分析装置1。此时,每个装置含有的SDS的量为96μg。
以下面的配方,搅拌各成分从而制备检体稀释液。
作为非离子型表面活性剂的TritonX-100(SIGMA公司制,商品名)与Tween20(和光纯药株式会社制、商品名)的质量比为1:5的混合物:1.2质量%
作为缓冲液的Bicine缓冲液:50mM
作为无机盐的氯化钾:0.6质量%
作为添加剂的酪蛋白钠:2.0质量%
余量:水
样品的采集
通过分别刺破健康成年男性以及糖尿病男性患者的指尖采集具有各种HbA1c浓度的血液。
检体含有液的制备
将上述血液和上述检体稀释液以前者∶后者(容量比)为1∶1000混合,从而制备检体含有液。
免疫层析分析的实施
向如上所述制作的免疫层析分析装置1的样本添加部12上供给110μl上述检体含有液,通过目视确定10分钟后的抗HbA1c抗体涂布部16的红色的发色信号。结果在表1中示出。
需要说明的是,表中的评价基准如下。
-:未能确认红色发色
±:虽然能够确认红色的发色,但颜色非常淡
+:能够确认红色发色
++:能够确认强的红色的发色
+++:能够确认非常强的红色的发色
实施例2
除了将实施例1中构成样本添加部12的材料从玻璃纤维垫变更为纤维素纤维垫(旭化成せんい公司制,商品名SR-601)以外,重复实施例1。结果在表1中示出。
实施例3
除了将实施例1中构成样本添加部12的材料从玻璃纤维垫变更为聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)垫(旭化成せんい公司制,商品名ベンリーゼA-01)以外,重复实施例1。结果在表1中示出。
实施例4
除了将实施例1中构成样本添加部12的材料从玻璃纤维垫变更为硝化纤维素膜(ミリポア公司制,商品名HF120)以外,重复实施例1。结果在表1中示出。
参考例1
除了在实施例1中,使用未添加SDS的样本添加部,并且分别向样本添加部12滴加10μl样本液和100μl的具有下述组成的展开液以外,重复实施例1,其中该样本液通过向具有下述组成的含有N末端露出剂的提取液中添加血液并静置2分钟而制备。结果在表1中示出。
(提取液的组成)
作为阴离子型表面活性剂的十二烷基硫酸钠:1.0质量%
作为添加剂的硫氰酸钠:100mM
作为添加剂的EDTA:5mM
余量:水
(展开液的组成)
作为非离子型表面活性剂的TritonX-100(SIGMA公司制,商品名)与Tween20(和光纯药株式会社制、商品名)的质量比为1:5的混合物:1.2质量%
作为缓冲液的Bicine缓冲液:50mM
作为无机盐的氯化钾:0.6质量%
作为添加剂的酪蛋白钠:2.0质量%
余量:水
参考例2
除了在参考例1中不使用提取液、并且向展开液中添加血液以外,重复参考例1。结果在表1中示出。
参考例3~5
除了在参考例1中不使用提取液、并且向展开液中添加表1所示浓度的SDS以及血液以外,重复参考例1。结果在表1中示出。
[表1]
实施例5~8
除了将实施例1中向样本添加部12添加的每一装置中的SDS含量以及检体稀释液中含有的非离子型表面活性剂的含有率变更为表2中记载的值以外,重复实施例1。结果在表2中示出。
[表2]
从表1以及表2的结果可知,通过使用本发明的免疫层析分析装置,无需现有技术的参考例1那样的样本液以及展开液两种液体,仅向样本添加部添加检体含有液一种液体即可,并且无需繁杂的测定准备以及操作,可以与现有技术的参考例1相同地在短测定时间内高效地测定血液、尿等多种检体中所含的各种成分。
参考例2为使用未添加SDS的样本添加部、并且仅使用了展开液的例子,因此即使HbA1c的浓度高,发色的程度也弱。
参考例3~5为使用未添加SDS的样本添加部、并且向展开液中添加SDS的例子,虽然与参考例2相比改善了发色的程度,但依然未能达到令人满意的水平。
使用特定的方式对本发明进行了详细说明,本领域技术人员显而易见的是,可以在不脱离本发明的意图和范围内进行各种变更和变形。需要说明的是,本申请以于2014年4月25日提交的日本专利申请(特愿2014-091510)为基础,其全部内容通过引用并入本文。
Claims (11)
1.一种免疫层析分析装置,其包括样本添加部、标记物保持部、担载有检测部的层析介质部和吸收部,其中
所述样本添加部中含有阴离子型表面活性剂,
所述免疫层析分析装置用于展开用检体稀释液稀释含有被检测物质的检体而得到的检体含有液。
2.根据权利要求1所述的免疫层析分析装置,其中所述样本添加部为选自由玻璃纤维、纤维素以及聚对苯二甲酸乙二醇酯组成的组中的一种。
3.根据权利要求1或2所述的免疫层析分析装置,其中所述样本添加部中含有8~800μg的所述阴离子型表面活性剂。
4.根据权利要求1~3中任意一项所述的免疫层析分析装置,其中所述被检测物质为血液中的糖化蛋白质。
5.根据权利要求4中所述的免疫层析分析装置,其中所述血液中的糖化蛋白质为HbA1c。
6.根据权利要求1~5中任意一项所述的免疫层析分析装置,其中所述阴离子型表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS)。
7.一种免疫层析分析方法,其使用免疫层析分析装置来检测检体中所含的被检测物质,所述免疫层析分析装置包括含有阴离子型表面活性剂的样本添加部、标记物保持部、担载有检测部的层析介质部和吸收部,所述免疫层析分析方法包括以下工序(1)~(4):
(1)向样本添加部中添加用检体稀释液稀释检体而得到的检体含有液的工序;
(2)通过标记物保持部中所保持的标记物识别被检测物质的工序;
(3)将检体以及标记物作为移动相在层析介质部中展开的工序;
(4)用检测部检测展开后的移动相中的被检测物质的工序。
8.根据权利要求7所述的方法,其中在所述检体稀释液中含有非离子型表面活性剂。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述检体稀释液中含有0.01~5质量%的所述非离子型表面活性剂。
10.根据权利要求7~9中任意一项所述的方法,其中所述样本添加部中含有8~800μg的所述阴离子型表面活性剂。
11.一种免疫层析分析试剂盒,其由免疫层析分析装置和用于稀释检体并将其展开的检体稀释液构成,所述免疫层析分析装置包括样本添加部、标记物保持部、担载有检测部的层析介质部和吸收部,其中
所述检体稀释液中含有非离子型表面活性剂,并且
所述样本添加部中含有阴离子型表面活性剂。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109540846A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-03-29 | 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 | 一种测量糖化的蛋白质的方法 |
CN111630383A (zh) * | 2018-01-11 | 2020-09-04 | 东洋纺株式会社 | 测定试样稀释液及试剂盒及测定方法 |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5775197B1 (ja) * | 2014-04-30 | 2015-09-09 | 田中貴金属工業株式会社 | 免疫クロマト分析キット及び免疫クロマト分析方法 |
JP6675834B2 (ja) * | 2015-05-21 | 2020-04-08 | デンカ生研株式会社 | イムノクロマト試験片及びそれを用いたイムノクロマト法 |
US11168349B2 (en) * | 2016-07-29 | 2021-11-09 | Hitachi Chemical Diagnostics Systems Co., Ltd. | Method for measuring glycated hemoglobin |
JP6865813B2 (ja) | 2017-04-06 | 2021-04-28 | 旭化成株式会社 | 親水化着色セルロース微粒子 |
JP7352831B2 (ja) * | 2018-01-09 | 2023-09-29 | 東洋紡株式会社 | イムノクロマト試験片および測定キットおよび測定方法 |
CN114280312B (zh) * | 2020-09-27 | 2023-09-15 | 河北特温特生物科技发展有限公司 | 一种用于免疫荧光层析检测的全血分离膜及其制备方法和应用 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1482460A (zh) * | 2002-03-19 | 2004-03-17 | ���µ�����ҵ��ʽ���� | 免疫学的测定方法、所用试验片以及免疫学的测定装置 |
US20060030050A1 (en) * | 2004-08-03 | 2006-02-09 | Axis-Shield Diagnostics Limited | Assay |
CN1795384A (zh) * | 2003-05-27 | 2006-06-28 | 株式会社三菱化学药得论 | 免疫色谱法 |
CN101622541A (zh) * | 2008-10-24 | 2010-01-06 | 韩国帕克特生物科技有限公司 | 糖化血红蛋白定量检测系统及使用该系统检测糖化血红蛋白含量的方法 |
CN101952722A (zh) * | 2008-03-06 | 2011-01-19 | 田中贵金属工业株式会社 | 免疫学测定法、试剂盒及展开溶剂 |
CN102246036A (zh) * | 2008-12-11 | 2011-11-16 | 积水医疗株式会社 | 含有糖化血红蛋白的试样的前处理方法 |
JP2012251789A (ja) * | 2011-05-31 | 2012-12-20 | Sekisui Medical Co Ltd | HbA1cの免疫学的測定方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003344397A (ja) * | 2002-03-19 | 2003-12-03 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫学的測定方法、それに用いる試験片、および免疫学的測定装置 |
WO2007061793A2 (en) * | 2005-11-18 | 2007-05-31 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SCIENCES, CENTERS FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION | Modified cardiolipin and uses therefor |
US20110160090A1 (en) * | 2008-05-05 | 2011-06-30 | Los Alamos National Laboratory | Nanocrystal-Based Lateral Flow Microarrays and Low-Voltage Signal Detection Systems |
JP5775197B1 (ja) * | 2014-04-30 | 2015-09-09 | 田中貴金属工業株式会社 | 免疫クロマト分析キット及び免疫クロマト分析方法 |
-
2014
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1482460A (zh) * | 2002-03-19 | 2004-03-17 | ���µ�����ҵ��ʽ���� | 免疫学的测定方法、所用试验片以及免疫学的测定装置 |
CN1795384A (zh) * | 2003-05-27 | 2006-06-28 | 株式会社三菱化学药得论 | 免疫色谱法 |
US20060030050A1 (en) * | 2004-08-03 | 2006-02-09 | Axis-Shield Diagnostics Limited | Assay |
CN101952722A (zh) * | 2008-03-06 | 2011-01-19 | 田中贵金属工业株式会社 | 免疫学测定法、试剂盒及展开溶剂 |
CN101622541A (zh) * | 2008-10-24 | 2010-01-06 | 韩国帕克特生物科技有限公司 | 糖化血红蛋白定量检测系统及使用该系统检测糖化血红蛋白含量的方法 |
CN102246036A (zh) * | 2008-12-11 | 2011-11-16 | 积水医疗株式会社 | 含有糖化血红蛋白的试样的前处理方法 |
JP2012251789A (ja) * | 2011-05-31 | 2012-12-20 | Sekisui Medical Co Ltd | HbA1cの免疫学的測定方法 |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111630383A (zh) * | 2018-01-11 | 2020-09-04 | 东洋纺株式会社 | 测定试样稀释液及试剂盒及测定方法 |
CN109540846A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-03-29 | 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 | 一种测量糖化的蛋白质的方法 |
CN109540846B (zh) * | 2019-01-04 | 2022-04-12 | 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 | 一种测量糖化的蛋白质的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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RU2016146092A (ru) | 2018-05-28 |
TW201541079A (zh) | 2015-11-01 |
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