CN109535240B - 一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法 - Google Patents

一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 7.0‑10.0的处理液中进行透析，所述处理液包括150‑400 mmol/L的盐溶液、5‑25 mmol/L的氨基酸溶液，透析1‑3h；S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在70‑190 mmol/L；S4.继续透析11‑18h；S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。本发明的方法可以有效抑制肌球蛋白热变性聚集，并能抑制热处理对蛋白分子巯基的破坏作用，降低蛋白质分子间的疏水相互作用，由此抑制肌球蛋白热处理过程中的变性聚集，从而改善体系的热稳定性，可为今后罗非鱼蛋白的加工生产和高值化利用提供理论依据。

Description

一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法
技术领域
本发明属于水产品加工高值化技术领域，具体涉及一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，尤其是一种改善鱼肉肌球蛋白热稳定性和提高溶解性的方法。
背景技术
中国是世界上最大的罗非鱼养殖生产国家，产量约占全球罗非鱼产量的50%。罗非鱼鱼肉的蛋白含量较高，但其蛋白的稳定性差，在加工贮藏过程中极易变性。热处理是食品加工中最重要的工艺之一，也是常见的蛋白质变性方法，在热处理过程中蛋白质分子会产生变性，其分子结构展开，分子间的相互作用可导致分子的聚集和沉淀。
现有技术中，为了减少蛋白质热处理过程中分子间的相互作用和聚集，常尝试添加蛋白质保护剂。常用的有：SDS是具有双亲性结构的小分子表面活性剂，它可与蛋白质分子通过彼此疏水的相互作用而形成复合物，掩盖蛋白质分子所暴露的疏水位点，从而在蛋白质重折叠和恢复天然结构前起到抑制蛋白质聚集的作用。相关的研究显示，SDS可有效提高多种食物蛋白质的溶解性，尽管如此，但仍缺乏对其相关机理的解释。β-环糊精(β-CD)是一种环状低聚糖，由脱水葡萄糖单位以α－1，4－糖苷键首尾相连而成，在空间呈螺旋状结构，“内疏水，外亲水”的特殊分子结构使其容易包结不同的客体化合物而形成特殊结构的包结物，当向表面活性剂－蛋白质混合体系中加入β-CD时，环糊精会通过强烈的竞争性结合作用将表面活性剂从蛋白质分子的表面剥离，使分子恢复到天然构象。小分子表面活性剂和环糊精这种作用体系通常被称为人工分子伴侣(Artificial molecular chaperone)，目前它已被用于改善大豆蛋白、牛血清蛋白、溶菌酶等的稳定性。
由于肌球蛋白是构成鱼类肌肉蛋白的主要成分之一，因此研发一种可提高其热聚集变性抑制的方法，可为今后罗非鱼蛋白的加工生产和高值化利用提供理论依据。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，本发明的方法可以有效抑制肌球蛋白热变性聚集，并能抑制热处理对蛋白分子巯基的破坏作用，降低蛋白质分子间的疏水相互作用，由此抑制肌球蛋白热处理过程中的变性聚集，从而改善体系的热稳定性，可为今后罗非鱼蛋白的加工生产和高值化利用提供理论依据。
本发明的技术方案为：一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 7.0-10.0的处理液中进行透析，所述处理液包括150-400 mmol/L的盐溶液、5-25 mmol/L的氨基酸溶液，透析1-3h；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在70-190 mmol/L；
S4.继续透析11-18h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸 5-18、组氨酸 6-14、甘氨酸 3-10、精氨酸 8-19、甘油 3-7。本发明的氨基酸溶液，通过本申请发明人通过大量的创造性试验，将多种氨基酸复配，得到能够对鱼肉肌球蛋白有明显增溶效果的配方，本发明中，通过在氨基酸溶液中加入甘油，在存在一定乳剂的环境下，氨基酸的增溶效果明显提高，能够使得低浓度的氨基酸溶液具有很好的增溶效果。
进一步的，所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：丙二醇 5-13、橙皮素 9-20、酒石酸 1-4、甲基纤维素 6-13。特别的，所述丙二醇、橙皮素、酒石酸、甲基纤维素均为食品级。本发明中，采用橙皮素与甲基纤维素复配，在添加丙二醇的条件下，在溶液体系中形成胶束或类似结构，进而提高肌球蛋白的热稳定性，同时，在加入酒石酸后，溶液体系中的胶束态更趋于稳定平衡；分子伴侣是指能够结合和稳定另外一种蛋白质的不稳定构象并能通过有控制的结合和释放促进新生多肽的折叠、多聚体的装配或降解及细胞器蛋白的跨膜运输等的一类物质。本申请发明通过大量创造性试验，寻找到一种与SDS功效相似、可应用到鱼肉肌球蛋白的表面活性剂—丙二醇，丙二醇在本分子伴侣液的体系中，有效抑制热处理对肌球蛋白溶解度和浊度的影响，并能抑制热处理对蛋白分子巯基的破坏作用，降低蛋白质分子间的疏水相互作用，由此抑制肌球蛋白热处理过程中的变性聚集。
进一步的，所述盐溶液为KCl或NaCl中的任一种。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
本发明的方法可以有效抑制肌球蛋白热变性聚集，并能抑制热处理对蛋白分子巯基的破坏作用，降低蛋白质分子间的疏水相互作用，由此抑制肌球蛋白热处理过程中的变性聚集，从而改善体系的热稳定性，可为今后罗非鱼蛋白的加工生产和高值化利用提供理论依据。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 7.0的处理液中进行透析，所述处理液包括150 mmol/L的盐溶液、5mmol/L的氨基酸溶液，透析1h；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在70mmol/L；
S4.继续透析11h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸 5、组氨酸 6、甘氨酸 3、精氨酸 8、甘油 3。
进一步的，所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：丙二醇 5、橙皮素 9、酒石酸 1、甲基纤维素 6。特别的，所述丙二醇、橙皮素、酒石酸、甲基纤维素均为食品级。
进一步的，所述盐溶液为KCl。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
实施例2
一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 10.0的处理液中进行透析，所述处理液包括400 mmol/L的盐溶液、25 mmol/L的氨基酸溶液，透析3h；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在190 mmol/L；
S4.继续透析18h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸 18、组氨酸 14、甘氨酸 10、精氨酸 19、甘油 7。
进一步的，所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：丙二醇 13、橙皮素 20、酒石酸 4、甲基纤维素 13。特别的，所述丙二醇、橙皮素、酒石酸、甲基纤维素均为食品级。
进一步的，所述盐溶液为NaCl。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
实施例3
一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 7.8的处理液中进行透析，所述处理液包括220 mmol/L的盐溶液、12 mmol/L的氨基酸溶液，透析1.6h；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在110 mmol/L；
S4.继续透析13h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸 8、组氨酸 9、甘氨酸 6、精氨酸 10、甘油 4。
进一步的，所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：丙二醇 7、橙皮素 13、酒石酸 2、甲基纤维素 9。特别的，所述丙二醇、橙皮素、酒石酸、甲基纤维素均为食品级。
进一步的，所述盐溶液为KCl。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
实施例4
一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 8.2的处理液中进行透析，所述处理液包括360 mmol/L的盐溶液、21mmol/L的氨基酸溶液，透析2.4h；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在165 mmol/L；
S4.继续透析16h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸 16、组氨酸 12、甘氨酸 7、精氨酸 16、甘油 6。
进一步的，所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：丙二醇 11、橙皮素 17、酒石酸 2、甲基纤维素 10。特别的，所述丙二醇、橙皮素、酒石酸、甲基纤维素均为食品级。
进一步的，所述盐溶液为NaCl。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
实施例5
一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 8.0的处理液中进行透析，所述处理液包括300 mmol/L的盐溶液、16 mmol/L的氨基酸溶液，透析2h；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在140mmol/L；
S4.继续透析15h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸 11、组氨酸 8、甘氨酸 8、精氨酸 15、甘油 5。
进一步的，所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：丙二醇 9、橙皮素 16、酒石酸 3、甲基纤维素 9。特别的，所述丙二醇、橙皮素、酒石酸、甲基纤维素均为食品级。
进一步的，所述盐溶液为KCl。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
对比例1
一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 8.2的处理液中进行透析，所述处理液包括360 mmol/L的盐溶液、21mmol/L的氨基酸溶液，透析2.4h；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在165 mmol/L；
S4.继续透析16h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸 16、组氨酸 12、甘氨酸 7、精氨酸 16。
进一步的，所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：丙二醇 11、橙皮素 17、酒石酸 2、甲基纤维素 10。特别的，所述丙二醇、橙皮素、酒石酸、甲基纤维素均为食品级。
进一步的，所述盐溶液为NaCl。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
对比例2
一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 8.0的处理液中进行透析，所述处理液包括300 mmol/L的盐溶液，透析2h；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在140mmol/L；
S4.继续透析15h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：丙二醇 9、橙皮素 16、酒石酸 3、甲基纤维素 9。特别的，所述丙二醇、橙皮素、酒石酸、甲基纤维素均为食品级。
进一步的，所述盐溶液为KCl。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
对比例3
一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 8.2的处理液中进行透析，所述处理液包括360 mmol/L的盐溶液、21mmol/L的氨基酸溶液，透析2.4h；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在165 mmol/L；
S4.继续透析16h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸 16、组氨酸 12、甘氨酸 7、精氨酸 16、甘油 6。
进一步的，所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：酒石酸 2、甲基纤维素 10。特别的，所述酒石酸、甲基纤维素均为食品级。
进一步的，所述盐溶液为NaCl。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
对比例4
一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白,获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH 8.0的处理液中进行透析，所述处理液包括300 mmol/L的盐溶液、16 mmol/L的氨基酸溶液，透析2h；
S3.继续透析15h；
S4.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
进一步的，所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸 11、组氨酸 8、甘氨酸 8、精氨酸 15、甘油 5。
进一步的，所述盐溶液为KCl。
进一步的，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20 000 r/min高速匀浆30s，静置15 min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2 h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液。
特别的，所述溶液A包括20 mmol/L PBS、2 mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括 0.35 mol/L KCl、5 mmol/L ATP、7 mmol/L MgCl2、0.3 mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12 mol/L Tris-maleic acid、1.6 mol/L KCl、0.6 mmol/LDTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13 mol/L ATP、48 mmol/L MgCl2、5.5 mmol/L EGTA、pH 7.5；所述透析液E包括18 mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH 6.8。
实验测试
对实施例和对比例中制备的对肌球蛋白溶液进行热处理( 升温速率为1 ℃/min，30-80 ℃)。所有经热处理后的样品立即冷却至室温，经离心( 10000 g，10 min) 后，检测上清液中的可溶性蛋白含量、总巯基含量。可溶性蛋白含量采用现有技术的Folin酚测试法；采现有技术中方法测量可溶性肌球蛋白的总巯基含量，参考<Food Chemistry>2012(135) “Impact of zinc salts on heat-induced aggregation of natural actomyosinfrom yellow stripe trevally”一文，结果如下表所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。需注意的是，本发明中所未详细描述的技术特征，均可以通过任一现有技术实现。

Claims (3)

1.一种改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将鲜鱼宰杀，取其白肉部分，提取肌球蛋白，获取肌球蛋白原液；
S2.将肌球蛋白原液装入透析袋，放入在pH7.0-10.0的处理液中进行透析，所述处理液包括150-400mmol/L的盐溶液、5-25mmol/L的氨基酸溶液，透析1-3h；所述氨基酸溶液包括以下重量份数的组分：赖氨酸5-18、组氨酸6-14、甘氨酸3-10、精氨酸8-19、甘油3-7；
S3.向处理液中加入分子伴侣液，并使其终浓度在70-190mmol/L；所述分子伴侣液包括以下重量份数的组分：丙二醇5-13、橙皮素9-20、酒石酸1-4、甲基纤维素6-13；
S4.继续透析11-18h；
S5.将透析后的肌球蛋白原液倒出，自然冷却至室温。
2.根据权利要求1所述的改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，所述盐溶液为KCl或NaCl中的任一种。
3.根据权利要求1所述的改善鱼肉肌球蛋白性能的方法，其特征在于，所述肌球蛋白的提取方法为：取新鲜搅碎的鱼肉，加5倍鱼肉重量的溶液A在20000r/min高速匀浆30s，静置15min后离心取沉淀，重复上述过程3次；向所得沉淀中加入3倍重量的溶液B，搅拌均匀后离心；纱布过滤，取滤液用冰蒸馏水稀释，静置后离心得沉淀，向沉淀中加入1/5倍溶液C，混匀后放置2h，混合体系中添加1/10倍溶液D，搅拌1h；加入饱和硫酸铵至饱和度40%时离心取上清液，继续加饱和硫酸铵至饱和度45%时离心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至无SO4 2-检出，然后离心分离，所得上清液即为肌球蛋白溶液；
所述溶液A包括20mmol/L PBS、2mmol/L PMSF、0.02%叠氮钠，溶液pH为6.9；所述溶液B包括0.35mol/L KCl、5mmol/L ATP、7mmol/L MgCl2、0.3mmol/L DTT，溶液pH6.2；所述溶液C包括0.12mol/L Tris-maleic acid、1.6mol/L KCl、0.6mmol/L DTT，溶液pH为7.4；所述溶液D包括0.13mol/L ATP、48mmol/L MgCl2、5.5mmol/L EGTA、pH7.5；所述透析液E包括18mmol/L PBS、1mol/L NaCl，溶液pH6.8。
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