CN109528735A - 积雪草苷在制备治疗皮肤癌药物中的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明首次公开了积雪草苷在制备治疗皮肤癌药物中的应用。DMBA/TPA两步化学诱导的小鼠皮肤癌模型考察结果显示：积雪草苷对皮肤癌的治疗效果明显优于治疗疤痕的药物、其他AMPK激动剂、临床上治疗其他癌症的药物以及结构相似的药物。本发明为皮肤癌的临床治疗提供了新的药物选择。

Description

积雪草苷在制备治疗皮肤癌药物中的新用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及积雪草苷制备治疗皮肤癌药物中的新用途。

背景技术

皮肤癌是发生于皮肤的恶性肿瘤，临床上主要分为恶性黑色素瘤(Malignantmelanoma，MM)和非黑色素瘤性皮肤癌(Non-melanoma skin cancer，NMSC)，后者主要包括基底细胞癌(Basal cell carcinoma，BCC)和鳞状细胞癌(Squamous cell carcinoma，SCC)。现代医学治疗皮肤癌的首选治疗方法为外科手术。早期、较小的、分化良好的皮肤癌可以使用物理治疗，包括冷冻、电疗及激光治疗。放疗对临床早期皮肤癌，特别是基底细胞癌的治愈率可达95％，适合有手术禁忌症或手术切除有困难的患者。在药物治疗方面，由于大部分皮肤癌对化疗药物不敏感，只能用于手术后的辅助治疗或晚期皮肤癌的姑息治疗。

目前传统的局部药物治疗包括5-氟尿嘧啶，咪喹莫特，博来霉素，维甲酸等。但是这些药物治疗效果差，局部反应如红斑，灼热，溃疡，结痂等明显。因此，寻找效果好，副作用小的局部治疗药物成为目前皮肤癌临床治疗的一个需要重点解决的问题

积雪草为伞形科积雪草属植物积雪草的干燥全草，为多年生匍匐草本，性甘、辛、凉，具有清热利湿、解毒消肿、活血止血的功效。积雪草苷(结构式如下所示)是积雪草提取物三萜皂甙的主要成分之一，现代药理研究证实积雪草苷具有抑制疤痕形成、促进创伤愈合、抗肿瘤、神经保护、抗焦虑、免疫调节等作用。目前尚无积雪草苷在皮肤癌治疗方面的报道。

发明内容

本发明公开了一种积雪草苷的新用途，可用于制备治疗皮肤癌的药物，为皮肤癌的临床药物治疗提供了新的选择。

本发明具体技术方案如下：

积雪草苷在制备治疗皮肤癌药物中的应用。

优选的，所述皮肤癌为鳞状细胞癌。

本发明所述药物为外用剂型，选自软膏剂、贴膏剂、散剂、酊剂、搽剂、涂膜剂、喷雾剂等，优选乳膏剂。

优选的，乳膏剂中的积雪草苷的质量百分比为0.5-10％，更优选4％(W/W)。

本发明另一目的在于提供一种治疗皮肤癌的药物，药物活性成分为积雪草苷。

本发明优点：

(1)本发明首次公开了积雪草苷在制备治疗皮肤癌药物中的应用。DMBA/TPA两步化学诱导的小鼠皮肤癌模型考察结果显示：在皮肤癌的治疗上，积雪草苷的治疗效果明显优于治疗疤痕的药物(芦荟提取物)、其他AMPK激动剂(苯乙双胍)、临床上治疗其他癌症的药物：奥沙利铂(治疗胃癌、肠癌的药物)，卡培他滨、他莫昔芬(治疗乳腺癌的药物)，多西环素(治疗口腔癌的药物)以及结构相似的药物(齐墩果酸)，为皮肤癌的临床治疗提供了新的药物选择。

(2)本发明实验结果表明积雪草苷对结肠癌并无明显的治疗效果，提示积雪草苷对肿瘤治疗有选择性。

附图说明

图1是皮肤癌模型小鼠皮肤癌体积变化折线图。

图2是结肠癌模型小鼠结肠癌体积柱状图。

图3是结肠癌模型小鼠结肠癌重量柱状图。

具体实施方式

以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。

在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体实例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。

实施例1积雪草苷软膏的制备

本实施例提供一种4％(W/W)积雪草苷的外用乳膏，由下述原料组分制成：

积雪草苷400重量份，硬脂酸1000重量份，硬脂酸甘油酯200重量份,蜂蜡200重量份，棕榈油600重量份，丁二醇600重量份,乙醇200重量份,水4800重量份，卡波姆3重量份，三乙醇胺2重量份。

按上述原料组分，制备本发明的中药外用乳膏：

(1)按比例称取硬脂酸，硬脂酸甘油酯，蜂蜡，棕榈油，水浴加热至熔化后过滤，70-80℃恒温保存；

(2)按比例称取丁二醇，乙醇，水，卡波姆，三乙醇胺加入到上述溶液中并水浴加热搅拌，保温乳化10-20min；

(3)加入称取好的积雪草苷原料，边加边搅拌至溶液冷凝成乳膏状，得到4％(W/W)积雪草苷的外用乳膏。

实施例2积雪草苷对小鼠皮肤原位肿瘤的抑制作用

1.实验动物

SPF级ICR小鼠，雄性，6周龄，体重16-18g，购自青龙山实验动物养殖中心。单笼饲养，提供充足的饲料和饮水，保持12h光照，12h黑暗的昼夜节律，温度25±2℃，湿度50％-70％，实验过程遵循动物伦理。

2.主要试剂

7,12-二甲基苯蒽(DMBA)：Sigma，美国。

佛波酯(TPA)：Sigma，美国。

丙酮：国药集团化学试剂有限公司。

生理盐水：安徽双鹤药业有限责任公司。

水合氯醛：上海凌峰化学试剂有限公司。

卡培他滨,齐墩果酸、苯乙双胍剂、他莫昔芬、多西他赛、奥沙利铂：大连美仑生物技术有限公司。

参照实施例1积雪草苷软膏的方法制备得到：0.5％(W/W)卡培他滨乳膏剂、4％(W/W)齐墩果酸乳膏剂、4％(W/W)，苯乙双胍乳膏剂、4％(W/W)芦荟提取物软膏、0.5％(W/W)他莫昔芬乳膏剂、0.5％(W/W)多西他赛乳膏剂、0.5％(W/W)奥沙利铂乳膏剂。

3.化学诱导法建立小鼠皮肤肿瘤模型

(1)原理

DMBA/TPA两步化学诱导法系常用的小鼠皮肤癌模型建立方法，这一模型模拟的系鳞状细胞癌的发生。其中，DMBA为启动剂，可使致癌基因Ha-ras发生不可逆特异性突变，导致皮肤癌的初始化。而TPA是一种高效的肿瘤促进剂，可引起炎症反应，导致氧化失衡，诱导表皮细胞过度增殖，使表皮增厚，真皮部位的巨噬细胞和噬中性粒细胞浸润，释放细胞因子，促进小鼠皮肤肿瘤的形成。DMBA/TPA两步化学诱导的皮肤肿瘤多为乳头状肿瘤。

(2)操作

小鼠适应环境后，使用小动物剃毛器和脱毛膏对其进行脱毛，暴露其背部2cm×2cm皮肤。具体操作如下：将小鼠放于笼盖上，左手抓住其尾部向后轻轻拖拽，使其身体绷直，右手持剃毛器逆毛方向推动，随后均匀涂抹脱毛膏，3-5min后，用棉球蘸少量温水，将脱毛膏轻柔擦拭干净，再用干燥的棉球将小鼠背部擦干。各组小鼠均在第1周于暴露皮肤部位涂抹DMBA丙酮溶液100μg/200μl/只，共计2次，间隔为3天。

从第二周开始，涂抹TPA丙酮溶液5μg/200μl/只，每周2次，间隔为3天，持续20周。所有小鼠均在给予造模剂的前一天脱毛，每周脱毛两次。

4.抗肿瘤药物治疗

造模开始后6个月时，从成模小鼠中选取适合进行下一步实验的个体，判断标准为：荷有1-3个体积介于100mm³-200mm³肿瘤的，为适宜进行实验的小鼠。

(1)实验分组：

将符合条件的小鼠随机分为以下两组，并进行编号：

Control组，即仅给予不含药乳膏剂

积雪草苷给药组，即给予含4％(W/W)积雪草苷的乳膏剂。

卡培他滨给药组：即给予0.5％(W/W)卡培他滨的乳膏剂。

芦荟提取物给药组：即给予含4％(W/W)芦荟提取物的乳膏剂。

齐墩果酸给药组：即给予含4％(W/W)齐墩果酸的乳膏剂。

苯乙双胍给药组：即给予含4％(W/W)苯乙双胍的乳膏剂。

他莫昔芬给药组：即给予含0.5％(W/W)他莫昔芬的乳膏剂。

多西他赛给药组：即给予含0.5％(W/W)多西他赛的乳膏剂。

奥沙利铂给药组：即给予含0.5％(W/W)奥沙利铂的乳膏剂。

(2)给药及数据记录：

根据预实验结果显示，卡培他滨，他莫昔芬，多西他赛和奥沙利铂给药组的药物剂量高于0.5％(W/W)时，小鼠会出现皮肤溃烂和体重减轻的现象，最终导致小鼠死亡，因此选择使用药物剂量为0.5％(W/W)。

每天取定量药物均匀涂抹于瘤体表面，Control组涂抹不含药物的膏剂；分别测量每个肿瘤的长径(a)，短径(b)和高度(h)，并计算肿瘤体积，结果如表1和图1。肿瘤的体积＝(a×b×h)×6/π。视情况对小鼠进行脱毛，持续给药和记录数据，直至某组的小鼠全部因肿瘤死亡。

生存率实验共持续67天，肿瘤抑制实验持续54天，其后的时间因Control组小鼠死亡过多，数据不再具有统计学意义，故未予列出。

表1

(3)结果分析：

如表1和图1所示，积雪草苷给药组的皮肤癌肿瘤体积相较于对照组均有明显下降。芦荟提取物给药组，齐墩果酸给药组，苯乙双胍给药组的肿瘤体积较对照组没有明显差别，卡培他滨给药组，他莫昔芬给药组，多西他赛给药组，奥沙利铂给药组肿瘤体积较对照组稍有下降，但没有显著性。(积雪草苷组跟Control组相比*P<0.05**P<0.01***P<0.001。)

实施例3积雪草苷对小鼠结肠癌的抑制作用

1.实验动物：近交系NOD/SCID小鼠，雌性，6周龄，体重16-18g，购自北京维通利华。单笼饲养，提供充足的饲料和饮水，保持12h光照，12h黑暗的昼夜节律，温度25±2℃，湿度50％-70％，实验过程遵循动物伦理。

2.实验过程

(1)将人结肠癌细胞株HT29细胞经复苏传代后，当细胞达到稳定的生长状态后，进入下一步实验。

(2)细胞接种液的配制

吸去细胞上清液，将细胞转移至离心管中，1000rpm离心5min；去上清，用PBS将细胞团块重悬，计数，将细胞密度调整到1×10⁷cells/mL，将细胞混匀，取100μL细胞混悬液，加入等体积基质胶，充分混匀。

(3)细胞接种用1mL无菌注射器吸取充分混匀的细胞接种液，排气泡，放在冰上备用；捉持NOD/SCID小鼠，拉紧其颈背部皮肤，用剃毛器将右侧腋窝部位的毛发剃去，用酒精棉擦拭其右侧腋窝部位，向该部位进针，将细胞接种液接种于腋下，缓慢旋转出针，防止漏液。每只老鼠使用的细胞接种液为0.2mL。最初7天观察老鼠成瘤情况

(4)动物分组及给药

观察肿瘤生长情况，每天用游标卡尺测量瘤体长径、短径，并根据以下公式计算瘤体积：

V＝(L×W²)/2

L和W分别是瘤体的长径和短径。

当检测到肿瘤体积到达200mm³时，根据瘤体积将老鼠均匀分为2组(Control组、积雪草苷组)。Control组每天瘤内注射生理盐水，积雪草苷每天瘤内注25μg/kg积雪草苷，对动物体重及瘤体积监测。结果如表2和图2所示，从表中可以看出，积雪草苷对人结肠癌细胞株HT29细胞的皮下移植瘤模型小鼠的肿瘤体积没有影响，说明积雪草苷对肿瘤类型有选择性，对人结肠癌没有治疗作用，而对皮肤癌有显著治疗作用。

表2

(5)瘤体重量的测定

在植瘤后第21天将NOD/SCID小鼠颈椎脱臼处死，解剖小鼠，快速切取肿瘤，称量并记录瘤体质量，结果如表3和图3所示。从表3中可以看出，积雪草苷对人结肠癌细胞株HT29细胞的皮下移植瘤模型小鼠的肿瘤重量没有影响，说明积雪草苷对人结肠癌没有治疗作用。

表3。

Claims (7)

1.积雪草苷在制备治疗皮肤癌药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述皮肤癌为鳞状细胞癌。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物为外用剂型。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述药物选自软膏剂、贴膏剂、散剂、酊剂、搽剂、涂膜剂、喷雾剂。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述药物中的积雪草苷的质量百分比为0.5-10％。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述药物中的积雪草苷的质量百分比为4％。

7.一种治疗皮肤癌的药物，其特征在于药物活性成分为积雪草苷。