CN109518508A - 一种蔗髓纤维素及其在儿童直肠植物源护理液中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种儿童直肠植物源护理液中的应用。所述儿童直肠植物源护理液中的应用的中药原料包括厚朴、黄芩、黄连、蒲公英、五倍子、桔梗、艾叶、鱼腥草。本发明所述儿童直肠植物源护理液中的应用,减少了直肠给药后儿童便秘和排泄的概率,不会减轻直肠给药药力,有助于直肠给药活性成分的吸收,且不具有副作用,少有其他不良反应。
Description
技术领域
本发明涉及一种蔗髓纤维素及其在儿童直肠植物源护理液中的应用。
背景技术
儿童生病后,打针服药是家长最发愁的事情。改变用药途径,减轻宝宝的痛苦,是众多医务工作者的心愿。根据小儿的解剖生理特点,结合药物的理化特性,终于在90年代后期研发出直肠注入给药的新途径,它是继口服和注射之外的第三种给药方法,让儿童在没有疼痛的状态下快乐就医。
直肠注入法是根据患儿的病情选择药物配置好药方,加温到35~40℃,通过直肠注入器械进入直肠,保留5~20分钟。
其原理是:现代医学研究表明,小儿直肠粘膜血液循环旺盛,吸收能力很强,药物可以通过三条途径进入血液循环。
(1)通过直肠上静脉经门静脉主色进入肝脏代谢后循环全身。
(2)通过直肠中静脉、下静脉及肛门静脉绕过肝脏后直接进入大循环。
(3)通过直肠淋巴系统吸收后,经乳迷池,胸导管进入血液循环。
直肠给药具有以下特点:
1、直肠给药方便、快捷,减轻了家长的心理负担,减少孩子的痛苦。
2、近几年的实践证明,直肠给药与静脉输入给药疗效及显效速度无明显差异,且直肠给药的生物利用率是口服给药的2倍。
3、直肠给药可以将中西药同时应用,既增强了治疗效果,又避免多种西药同时应用所产生的副作用。
直肠给药具有以下优点:
1、肠道给药简便易行,又安全有效,提高了给药的顺应性;
2、减少了打针住院的时间,节约了有限的卫生资源;
3、直肠给药可“减打针之痛、免吃药之苦”。对于不易接受注射和口服给药的婴幼儿患者,便于给药。
4、直肠给药吸收不规则,在直肠空虚时用药效果较好;腹泻患者必须补足液体量后直肠给药效果好。
纤维素具有生物相容性好,无毒、价廉易得等优点,它不会被人体胃酸、胃蛋白酶降解,也不能被小肠吸收,然而可以在结肠中大量的微生物,尤其是Bacteroides细菌的作用下,被特异性地降解成小分子寡糖、短链脂肪酸和二氧化碳等物质。因此,将蔗髓纤维素应用于儿童直肠植物源护理液十分有前景。
发明内容
本发明的目的之一在于公开一种蔗髓纤维素,并应用于儿童直肠植物源护理液中;可以减少直肠给药后儿童便秘和排泄的概率,但不会减轻直肠给药药力,能够加强直肠给药活性成分的吸收,且不具有副作用,少有其他不良反应。
具体技术方案如下:
一种蔗髓纤维素,通过以下方法得到:将蔗髓筛分,加入硫酸镁、氢氧化钠和去离子水混合均匀,充氧加压、密封、于100~120℃反应2~4小时,快速冷却至20~30℃;继续加入EDTA、蔥醌、过氧化氢、氢氧化钠和去离子水混合均匀,充氧加压、密封、于100~120℃反应2~4小时,收集沉淀物,用去离子水将沉淀物洗涤至洗液呈中性,干燥,获得蔗髓纤维素。
作为其中一种技术方案,一种蔗髓纤维素,通过以下方法得到:将蔗髓筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将12~15g筛分后的蔗髓、0.1~0.5g硫酸镁、20~30g氢氧化钠和40~70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至20~30℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.3~0.5g EDTA、0.1~0.3g蔥醌、10~15g过氧化氢、20~25g氢氧化钠和80~100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,干燥,获得蔗髓纤维素。
另一技术方案,一种蔗髓纤维素,通过以下方法得到:将蔗髓筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将筛分后的蔗髓浸入23~25℃的水中浸泡12~28小时,筛分后的蔗髓和水的固液比为1:(800~1000)g/mL,离心,收集沉淀,干燥,得到预处理后的蔗髓;将12g预处理后的蔗髓、0.1~0.5g硫酸镁、20~30g氢氧化钠和40~70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至20~30℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.3~0.5gEDTA、0.1~0.3g蔥醌、10~15g过氧化氢、20~25g氢氧化钠和80~100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,干燥,获得蔗髓纤维素。
优选的一种技术方案,一种蔗髓纤维素,通过以下方法得到:
(1)将蔗髓筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将筛分后的蔗髓浸入23~25℃的水中浸泡12~28小时,筛分后的蔗髓和水的固液比为1:(800~1000)g/mL,离心,收集沉淀,干燥,得到预处理后的蔗髓;将12g预处理后的蔗髓、0.1~0.5g硫酸镁、20~30g氢氧化钠和40~70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至20~30℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.3~0.5gEDTA、0.1~0.3g蔥醌、10~15g过氧化氢、20~25g氢氧化钠和80~100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,干燥,获得固体C;
(2)取10~20g固体C,以玛瑙球为介质,以150~250转/分钟球磨1~10小时,过60~300目筛,得到微体化预处理的固体C;取10~20g微体化预处理的固体C,用涤纶布包裹后放入液氮罐中快速冷冻10~30分钟,取出,继续以玛瑙球为介质,以150~250转/分钟球磨1~2小时;重复上述冻磨处理步骤3~10次后,收集冻磨处理后的固体C;称取冻磨处理的固体C10~15g,加入pH4.8的质量分数0.6~0.7%的纤维素酶液30~50mL,然后加入pH4.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液20~30mL,在45~50℃酶解48~72小时,冷冻干燥,得到蔗髓纤维素。
本发明还公开了上述的蔗髓纤维素在儿童直肠植物源护理液中的应用。
具体应用如下:
所述儿童直肠植物源护理液采用以下步骤制备得到:
(1)按重量份称取以下中药原料:厚朴2~5重量份、黄芩2~5重量份、黄连0.2~1重量份、蒲公英8~10重量份、五倍子1~3重量份、桔梗2~5重量份、艾叶1~2重量份、鱼腥草0.7~3重量份;
(2)对中药原料进行粉碎,过筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入水,在超声提取30~60分钟,收集中药提取液;
(3)将黑曲霉菌接种至斜面培养基上,培养3~4天;取斜面培养基上生长的黑曲霉孢子,加入蒸馏水,振荡培养0.5~1.5小时,得到浓度3×106~3×107cfu/mL的孢子悬液;将孢子悬液接入孢子悬液体积10~15倍的发酵产酶培养基中,振荡培养5~7天,收集发酵液;将发酵液过滤,收集滤液,离心20~30分钟,收集上清液即为粗酶液;所述斜面培养基的组成为:马铃薯20wt%,葡萄糖2wt%,琼脂1.5wt%,余量为水;所述发酵产酶培养基的组成为:麸皮4wt%,尿素0.4wt%,磷酸二氢钾0.5wt%,七水合硫酸镁0.04wt%,氯化钡0.16wt%,氯化钙0.05wt%,余量为水;
(4)将粗酶液和中药提取液以体积比1:(1~10)混合,于50~70℃搅拌5~30分钟后,于100~110℃加热5~10分钟,自然冷却至20~30℃,添加中药提取液重量0.005~0.01倍上述的蔗髓纤维素和中药提取液重量0.01~0.1倍的乳糖,充分混匀,得到所述儿童直肠植物源护理液。
儿童直肠植物源护理液中的应用儿童直肠植物源护理液中的应用儿童直肠植物源护理液中的应用儿童直肠植物源护理液中的应用儿童直肠植物源护理液中的应用儿童直肠植物源护理液中的应用儿童直肠植物源护理液中的应用儿童直肠植物源护理液中的应用本发明相对于现有技术具有以下优点:
1、蔗髓中含有大量的薄壁细胞、导管和微细纤维,通过将蔗髓与过氧化氢等物质在碱性条件下进行反应,去除蔗髓原料中的木质素和半纤维素,得到纯度和清洁度相对较高的蔗髓纤维素。经过试验发现,通过在儿童直肠植物源护理液中添加纤维素,特别是蔗髓纤维素,可以显著提高儿童直肠植物源护理液的使用效果和免疫性能。
2、在蔗髓纤维素制备的过程中,用水浸泡处理,可以去除原料中一些水溶性的杂质,提高蔗髓纤维素的洁净度。另外,通过对蔗髓纤维素进行糖化处理,提高蔗髓纤维素和中药液相容性的同时,改善生物体对蔗髓纤维素的利用率。
儿童直肠植物源护理液中的应用儿童直肠植物源护理液中的应用
本发明的含蔗髓纤维素的儿童直肠植物源护理液,减少了直肠给药后儿童便秘和排泄的概率,不会减轻直肠给药药力,有助于直肠给药活性成分的吸收,且不具有副作用,少有其他不良反应。
具体实施方式
实施例中原料介绍如下:
厚朴,原产地安徽,亳州市承辉药业销售有限公司提供。
黄芩,原产地安徽,亳州市继午药业有限公司提供。
黄连,原产地四川,亳州市百川药业有限公司提供。
蒲公英,原产地河南,河南省祥云药业有限公司提供。
五倍子,原产地四川,亳州市百川药业有限公司提供。
桔梗,原产地安徽,亳州市真源芙蓉汤中药材批发商行提供。
艾叶,原产地河南,南阳兴宛堂艾草制品有限公司提供。
鱼腥草,原产地湖北,亳州市惠民百草药业销售有限公司提供。
黑曲霉菌,南京乐诊生物技术有限公司提供,活菌个数为100亿/mL。
小麦纤维素,湖州巴克生物科技有限公司提供。
乳糖,河南金润食品添加剂有限公司提供,100目。
蔗髓,武鸣县鑫来顺农产品废弃物经营部提供。
EDTA,CAS号:60-00-4。
蔥醌,参考湖北造纸2009年01期《蒸煮助剂蔥醌的制备及在制浆中的应用》贾建民自行制备。
纤维素酶,食品级,南京东恒华道生物科技有限公司提供,酶活力1万/g。
pH4.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,由9.2mL摩尔浓度0.1mol/L的柠檬酸溶液和10.8mL摩尔浓度0.1mol/L的柠檬酸钠溶液混合得到。
实施例1
所述儿童直肠植物源护理液的中药原料包括厚朴、黄芩、黄连、蒲公英、五倍子、桔梗、艾叶、鱼腥草。所述儿童直肠植物源护理液采用以下方法制备得到:
(1)按重量份称取以下原料:厚朴2重量份、黄芩2重量份、黄连0.7重量份、蒲公英10重量份、五倍子1重量份、桔梗5重量份、艾叶2重量份、鱼腥草0.9重量份;
(2)用中药粉碎机对中药进行粉碎,过40目筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入中药粉末重量15倍的水,于80℃提取2小时,收集中药提取液,得到所述儿童直肠植物源护理液。
实施例2
所述儿童直肠植物源护理液的中药原料包括厚朴、黄芩、黄连、蒲公英、五倍子、桔梗、艾叶、鱼腥草。所述儿童直肠植物源护理液采用以下方法制备得到:
(1)按重量份称取以下原料:厚朴2重量份、黄芩2重量份、黄连0.7重量份、蒲公英10重量份、五倍子1重量份、桔梗5重量份、艾叶2重量份、鱼腥草0.9重量份;
(2)用中药粉碎机对中药进行粉碎,过40目筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入中药粉末重量15倍的水,在超声功率360W的条件下于80℃提取40分钟,收集中药提取液,得到所述儿童直肠植物源护理液。
实施例3
所述儿童直肠植物源护理液的中药原料包括厚朴、黄芩、黄连、蒲公英、五倍子、桔梗、艾叶、鱼腥草。所述儿童直肠植物源护理液采用以下方法制备得到:
(1)按重量份称取以下原料:厚朴2重量份、黄芩2重量份、黄连0.7重量份、蒲公英10重量份、五倍子1重量份、桔梗5重量份、艾叶2重量份、鱼腥草0.9重量份;
(2)用中药粉碎机对中药进行粉碎,过40目筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入中药粉末重量15倍的水,在超声功率360W的条件下于80℃提取40分钟,收集中药提取液;
(3)将黑曲霉菌以2%(体积/体积)的接种量接种至斜面培养基上,于30℃培养3天;取斜面培养基上生长的黑曲霉孢子,加入蒸馏水,以220转/分钟振荡培养1小时,得到浓度3×106cfu/mL的孢子悬液;将孢子悬液接入孢子悬液体积10倍的发酵产酶培养基中,于30℃以220转/分钟振荡培养5天,收集发酵液;将发酵液用100目纱布过滤,收集滤液,以3800转/分钟离心20分钟,收集上清液即为粗酶液;所述斜面培养基的组成为:马铃薯20wt%,葡萄糖2wt%,琼脂1.5wt%,余量为水;将斜面培养基的所有组分混合均匀即得所述斜面培养基;所述发酵产酶培养基的组成为:麸皮4wt%,尿素0.4wt%,磷酸二氢钾0.5wt%,七水合硫酸镁0.04wt%,氯化钡0.16%wt,氯化钙0.05wt%,余量为水;将发酵产酶培养基的所有组分混合均匀即得所述发酵产酶培养基;
(4)将粗酶液和中药提取液以体积比1:1混合,于50℃以80转/分钟搅拌30分钟后,于100℃加热5分钟,自然冷却至26℃,得到所述儿童直肠植物源护理液。
实施例4
所述儿童直肠植物源护理液的中药原料包括厚朴、黄芩、黄连、蒲公英、五倍子、桔梗、艾叶、鱼腥草。所述儿童直肠植物源护理液采用以下方法制备得到:
(1)按重量份称取以下原料:厚朴2重量份、黄芩2重量份、黄连0.7重量份、蒲公英10重量份、五倍子1重量份、桔梗5重量份、艾叶2重量份、鱼腥草0.9重量份;
(2)用中药粉碎机对中药进行粉碎,过40目筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入中药粉末重量15倍的水,在超声功率360W的条件下于80℃提取40分钟,收集中药提取液;
(3)将黑曲霉菌以2%(体积/体积)的接种量接种至斜面培养基上,于30℃培养3天;取斜面培养基上生长的黑曲霉孢子,加入蒸馏水,以220转/分钟振荡培养1小时,得到浓度3×106cfu/mL的孢子悬液;将孢子悬液接入孢子悬液体积10倍的发酵产酶培养基中,于30℃以220转/分钟振荡培养5天,收集发酵液;将发酵液用100目纱布过滤,收集滤液,以3800转/分钟离心20分钟,收集上清液即为粗酶液;所述斜面培养基的组成为:马铃薯20wt%,葡萄糖2wt%,琼脂1.5wt%,余量为水;将斜面培养基的所有组分混合均匀即得所述斜面培养基;所述发酵产酶培养基的组成为:麸皮4wt%,尿素0.4wt%,磷酸二氢钾0.5wt%,七水合硫酸镁0.04wt%,氯化钡0.16%wt,氯化钙0.05wt%,余量为水;将发酵产酶培养基的所有组分混合均匀即得所述发酵产酶培养基;
(4)将粗酶液和中药提取液以体积比1:1混合,于50℃以80转/分钟搅拌30分钟后,于100℃加热5分钟,自然冷却至26℃,添加中药提取液重量0.01倍的小麦纤维素和中药提取液重量0.05倍的乳糖,充分混匀,得到所述儿童直肠植物源护理液。
实施例5
所述儿童直肠植物源护理液的中药原料包括厚朴、黄芩、黄连、蒲公英、五倍子、桔梗、艾叶、鱼腥草。所述儿童直肠植物源护理液采用以下方法制备得到:
(1)按重量份称取以下原料:厚朴2重量份、黄芩2重量份、黄连0.7重量份、蒲公英10重量份、五倍子1重量份、桔梗5重量份、艾叶2重量份、鱼腥草0.9重量份;
(2)用中药粉碎机对中药进行粉碎,过40目筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入中药粉末重量15倍的水,在超声功率360W的条件下于80℃提取40分钟,收集中药提取液;
(3)将黑曲霉菌以2%(体积/体积)的接种量接种至斜面培养基上,于30℃培养3天;取斜面培养基上生长的黑曲霉孢子,加入蒸馏水,以220转/分钟振荡培养1小时,得到浓度3×106cfu/mL的孢子悬液;将孢子悬液接入孢子悬液体积10倍的发酵产酶培养基中,于30℃以220转/分钟振荡培养5天,收集发酵液;将发酵液用100目纱布过滤,收集滤液,以3800转/分钟离心20分钟,收集上清液即为粗酶液;所述斜面培养基的组成为:马铃薯20wt%,葡萄糖2wt%,琼脂1.5wt%,余量为水;将斜面培养基的所有组分混合均匀即得所述斜面培养基;所述发酵产酶培养基的组成为:麸皮4wt%,尿素0.4wt%,磷酸二氢钾0.5wt%,七水合硫酸镁0.04wt%,氯化钡0.16%wt,氯化钙0.05wt%,余量为水;将发酵产酶培养基的所有组分混合均匀即得所述发酵产酶培养基;
(4)将粗酶液和中药提取液以体积比1:1混合,于50℃以80转/分钟搅拌30分钟后,于100℃加热5分钟,自然冷却至26℃,添加中药提取液重量0.01倍的蔗髓纤维素和中药提取液重量0.05倍的乳糖,充分混匀,得到所述儿童直肠植物源护理液。
所述蔗髓纤维素通过以下方法得到:将蔗髓通过孔径5mm的竹筛筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将12g筛分后的蔗髓、0.5g硫酸镁、20g氢氧化钠和70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.6Mpa,密封,在硅油浴中于110℃反应2小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至26℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.5gEDTA、0.3g蔥醌、15g过氧化氢、25g氢氧化钠和100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.6Mpa,密封,在硅油浴中于110℃反应2小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,于50℃、绝对压强0.03MPa的条件下干燥至恒重,获得蔗髓纤维素。
实施例6
所述儿童直肠植物源护理液的中药原料包括厚朴、黄芩、黄连、蒲公英、五倍子、桔梗、艾叶、鱼腥草。所述儿童直肠植物源护理液采用以下方法制备得到:
(1)按重量份称取以下原料:厚朴2重量份、黄芩2重量份、黄连0.7重量份、蒲公英10重量份、五倍子1重量份、桔梗5重量份、艾叶2重量份、鱼腥草0.9重量份;
(2)用中药粉碎机对中药进行粉碎,过40目筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入中药粉末重量15倍的水,在超声功率360W的条件下于80℃提取40分钟,收集中药提取液;
(3)将黑曲霉菌以2%(体积/体积)的接种量接种至斜面培养基上,于30℃培养3天;取斜面培养基上生长的黑曲霉孢子,加入蒸馏水,以220转/分钟振荡培养1小时,得到浓度3×106cfu/mL的孢子悬液;将孢子悬液接入孢子悬液体积10倍的发酵产酶培养基中,于30℃以220转/分钟振荡培养5天,收集发酵液;将发酵液用100目纱布过滤,收集滤液,以3800转/分钟离心20分钟,收集上清液即为粗酶液;所述斜面培养基的组成为:马铃薯20wt%,葡萄糖2wt%,琼脂1.5wt%,余量为水;将斜面培养基的所有组分混合均匀即得所述斜面培养基;所述发酵产酶培养基的组成为:麸皮4wt%,尿素0.4wt%,磷酸二氢钾0.5wt%,七水合硫酸镁0.04wt%,氯化钡0.16%wt,氯化钙0.05wt%,余量为水;将发酵产酶培养基的所有组分混合均匀即得所述发酵产酶培养基;
(4)将粗酶液和中药提取液以体积比1:1混合,于50℃以80转/分钟搅拌30分钟后,于100℃加热5分钟,自然冷却至26℃,添加中药提取液重量0.01倍的蔗髓纤维素和中药提取液重量0.05倍的乳糖,充分混匀,得到所述儿童直肠植物源护理液。
所述蔗髓纤维素通过以下方法得到:将蔗髓通过孔径5mm的竹筛筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将筛分后的蔗髓浸入23℃的水中浸泡28小时,筛分后的蔗髓和水的固液比为1:1000g/mL,以4000转/分钟离心15分钟,收集沉淀,于50℃、绝对压强0.03MPa的条件下干燥至恒重,得到预处理后的蔗髓;将12g预处理后的蔗髓、0.5g硫酸镁、20g氢氧化钠和70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.6Mpa,密封,在硅油浴中于110℃反应2小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至26℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.5gEDTA、0.3g蔥醌、15g过氧化氢、25g氢氧化钠和100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.6Mpa,密封,在硅油浴中于110℃反应2小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,于50℃、绝对压强0.03MPa的条件下干燥至恒重,获得蔗髓纤维素。
实施例7
所述儿童直肠植物源护理液的中药原料包括厚朴、黄芩、黄连、蒲公英、五倍子、桔梗、艾叶、鱼腥草。所述儿童直肠植物源护理液采用以下方法制备得到:
(1)按重量份称取以下原料:厚朴2重量份、黄芩2重量份、黄连0.7重量份、蒲公英10重量份、五倍子1重量份、桔梗5重量份、艾叶2重量份、鱼腥草0.9重量份;
(2)用中药粉碎机对中药进行粉碎,过40目筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入中药粉末重量15倍的水,在超声功率360W的条件下于80℃提取40分钟,收集中药提取液;
(3)将黑曲霉菌以2%(体积/体积)的接种量接种至斜面培养基上,于30℃培养3天;取斜面培养基上生长的黑曲霉孢子,加入蒸馏水,以220转/分钟振荡培养1小时,得到浓度3×106cfu/mL的孢子悬液;将孢子悬液接入孢子悬液体积10倍的发酵产酶培养基中,于30℃以220转/分钟振荡培养5天,收集发酵液;将发酵液用100目纱布过滤,收集滤液,以3800转/分钟离心20分钟,收集上清液即为粗酶液;所述斜面培养基的组成为:马铃薯20wt%,葡萄糖2wt%,琼脂1.5wt%,余量为水;将斜面培养基的所有组分混合均匀即得所述斜面培养基;所述发酵产酶培养基的组成为:麸皮4wt%,尿素0.4wt%,磷酸二氢钾0.5wt%,七水合硫酸镁0.04wt%,氯化钡0.16%wt,氯化钙0.05wt%,余量为水;将发酵产酶培养基的所有组分混合均匀即得所述发酵产酶培养基;
(4)将粗酶液和中药提取液以体积比1:1混合,于50℃以80转/分钟搅拌30分钟后,于100℃加热5分钟,自然冷却至26℃,添加中药提取液重量0.01倍的蔗髓纤维素和中药提取液重量0.05倍的乳糖,充分混匀,得到所述儿童直肠植物源护理液。
蔗髓纤维素通过以下方法得到:
(1)将蔗髓通过孔径5mm的竹筛筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将筛分后的蔗髓浸入23℃的水中浸泡28小时,筛分后的蔗髓和水的固液比为1:1000g/mL,以4000转/分钟离心15分钟,收集沉淀,于50℃、绝对压强0.03MPa的条件下干燥至恒重,得到预处理后的蔗髓;将12g预处理后的蔗髓、0.5g硫酸镁、20g氢氧化钠和70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.6Mpa,密封,在硅油浴中于110℃反应2小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至26℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.5gEDTA、0.3g蔥醌、15g过氧化氢、25g氢氧化钠和100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.6Mpa,密封,在硅油浴中于110℃反应2小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,于50℃、绝对压强0.03MPa的条件下干燥至恒重,得到固体C。
(2)取10g固体C,以玛瑙球为介质,以200转/分钟球磨1小时,过300目筛,得到微体化预处理的固体C;取10g微体化预处理的固体C,用涤纶布包裹后放入液氮罐中快速冷冻15分钟,取出,继续以玛瑙球为介质,以200转/分钟球磨1小时;重复上述冻磨处理步骤10次后,收集冻磨处理后的固体C;称取冻磨处理的固体C10g,加入pH4.8的质量分数0.6%的纤维素酶液30mL,然后加入pH4.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液20mL,在45℃酶解72小时,冷冻干燥,得到蔗髓纤维素。
实施例8
所述儿童直肠植物源护理液的中药原料包括厚朴、黄芩、黄连、蒲公英、五倍子、桔梗、艾叶、鱼腥草。所述儿童直肠植物源护理液采用以下方法制备得到:
(1)按重量份称取以下原料:厚朴2重量份、黄芩2重量份、黄连0.7重量份、蒲公英10重量份、五倍子1重量份、桔梗5重量份、艾叶2重量份、鱼腥草0.9重量份;
(2)用中药粉碎机对中药进行粉碎,过40目筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入中药粉末重量15倍的水,在超声功率360W的条件下于80℃提取40分钟,收集中药提取液;
(3)将黑曲霉菌以2%(体积/体积)的接种量接种至斜面培养基上,于30℃培养3天;取斜面培养基上生长的黑曲霉孢子,加入蒸馏水,以220转/分钟振荡培养1小时,得到浓度3×106cfu/mL的孢子悬液;将孢子悬液接入孢子悬液体积10倍的发酵产酶培养基中,于30℃以220转/分钟振荡培养5天,收集发酵液;将发酵液用100目纱布过滤,收集滤液,以3800转/分钟离心20分钟,收集上清液即为粗酶液;所述斜面培养基的组成为:马铃薯20wt%,葡萄糖2wt%,琼脂1.5wt%,余量为水;将斜面培养基的所有组分混合均匀即得所述斜面培养基;所述发酵产酶培养基的组成为:麸皮4wt%,尿素0.4wt%,磷酸二氢钾0.5wt%,七水合硫酸镁0.04wt%,氯化钡0.16%wt,氯化钙0.05wt%,余量为水;将发酵产酶培养基的所有组分混合均匀即得所述发酵产酶培养基;
(4)将粗酶液和中药提取液以体积比1:1混合,于50℃以80转/分钟搅拌30分钟后,于100℃加热5分钟,自然冷却至26℃,添加中药提取液重量0.002倍的小麦纤维素、中药提取液重量0.008倍的蔗髓纤维素和中药提取液重量0.05倍的乳糖,充分混匀,得到所述儿童直肠植物源护理液。
蔗髓纤维素通过以下方法得到:
(1)将蔗髓通过孔径5mm的竹筛筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将筛分后的蔗髓浸入23℃的水中浸泡28小时,筛分后的蔗髓和水的固液比为1:1000g/mL,以4000转/分钟离心15分钟,收集沉淀,于50℃、绝对压强0.03MPa的条件下干燥至恒重,得到预处理后的蔗髓;将12g预处理后的蔗髓、0.5g硫酸镁、20g氢氧化钠和70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.6Mpa,密封,在硅油浴中于110℃反应2小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至26℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.5gEDTA、0.3g蔥醌、15g过氧化氢、25g氢氧化钠和100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.6Mpa,密封,在硅油浴中于110℃反应2小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,于50℃、绝对压强0.03MPa的条件下干燥至恒重,得到固体C。
(2)取10g固体C,以玛瑙球为介质,以200转/分钟球磨1小时,过300目筛,得到微体化预处理的固体C;取10g微体化预处理的固体C,用涤纶布包裹后放入液氮罐中快速冷冻15分钟,取出,继续以玛瑙球为介质,以200转/分钟球磨1小时;重复上述冻磨处理步骤10次后,收集冻磨处理后的固体C;称取冻磨处理的固体C10g,加入pH4.8的质量分数0.6%的纤维素酶液30mL,然后加入pH4.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液20mL,在45℃酶解72小时,冷冻干燥,得到蔗髓纤维素。
测试例1
对实施例1~8的儿童直肠植物源护理液的使用效果进行测定。
选择儿科消化专科门诊以便秘为主并符合罗马Ⅲ诊断标准的8~15岁的患者作为受试者。受试者1周内没有使用其他或者治疗便秘或者促进肠道动力的药物。告知监护人所有药物的不良反应,并获得监护人及患儿的知情同意。
将患者随机分为8组,各组患者的平均年龄为11~12岁,体质量36~38kg,身高141~144cm。将实施例1~8的儿童直肠给药用清积液装入管中,直肠给药,每天2次,每次30mL。
观察指标:收集患者接受治疗后2周的随访资料,记录并比较三组患儿的疗效。
疗效判定标准:排便次数>3次/周,大便性状Bristo1分型4~6型(4型:似腊肠或蛇,光滑柔软;5型:软团,边缘清楚;6型:绒状物,边缘不清,糊状便)判定为正常大便。排便次数、大便性状完全符合上述标准,腹痛完全缓解判定为治愈;大便性状正常率超过50%,每周腹痛次数减少50%以上为显效;大便性状正常率低于50%,每周腹痛次数减少低于50%为无效。总有效率=治愈率+显效率。
在治疗及观察期间,各组均未发生严重不良反应。具体总有效率见表1。
表1使用效果测试结果表
测试例2
对实施例1~8的儿童直肠植物源护理液的免疫功能进行测定。
将1日龄的雏公鸡(嘉祥县鲁东养殖专业合作社提供)随机分为8组,每组50只,并且各组的雏鸡初始体重差异不显著。每组每天饲喂基础日粮,并按照400mg/kg的剂量灌胃儿童直肠植物源护理液中的应用。各组雏鸡在相同条件下进行常规饲养和管理,于试验第42天分别从每组中随机取10只鸡采血并剖杀。
a、总蛋白含量的测定
于第42天,各组随机抽取10只鸡,进行颈静脉采血;静置10分钟,以3000转/分钟离心10分钟,制备血清;于-20℃冰箱保存。用半自动生化分析仪测定血清中的总蛋白,具体方法详见试剂盒说明书(关东化学株式会社生产,产品编号09000243495)。
表2总蛋白含量测试结果
b、血清溶菌酶含量的测定
在20~30℃的条件下解冻血清,解冻后将血清与菌液反应,测定透光度(T)值,计算血清溶菌酶含量,计算公式为:血清溶菌酶含量(μg/mL)=(T测定管-T空白管透光度)/(T标准管-T空白管)。具体操作方法见血清溶菌酶试剂盒说明书(上海钰博生物科技有限公司提供,货号YB-60061)。
表3血清溶菌酶含量测试结果
c、碳廓清指数的测定
方法如下:随机从各试验组中抽10只雏鸡,生理盐水做稀释液,对印度墨汁进行3倍稀释,将稀释后的印度墨汁按照2mL/kg的剂量注入雏鸡一的翅静脉,注射后立即计时,在2分钟和10分钟后分别从对侧的翅静脉中吸取20μL血液加入到2mL的0.1%Na2CO3溶液中,用分光光度计在600nm波长条件下,测定OD值(分别以OD2和OD10表示2分钟和10分钟时血液吸光值),以0.1%Na2CO3溶液做空白对照,然后将雏鸡处死,称取肝脏和脾重量,按如下公式计算碳廓清指数K值:碳廓清指数K==lg(OD2-lg(OD10)/8。
表3碳廓清指数测试结果
从表2~表4可以看出,实施例3~8相较于实施例1~2,无论是总蛋白含量,还是血清溶菌酶含量以及碳廓清指数,都有所上升。这说明,通过将粗酶液和中药提取液反应获得的童直肠给药中药护理液,加速机体免疫成分合成,从而促进机体的免疫功能。
本发明相对于现有技术具有以下优点:
1、蔗髓中含有大量的薄壁细胞、导管和微细纤维,通过将蔗髓与过氧化氢等物质在碱性条件下进行反应,去除蔗髓原料中的木质素和半纤维素,得到纯度和清洁度相对较高的蔗髓纤维素。经过试验发现,通过在儿童直肠植物源护理液中添加纤维素,特别是蔗髓纤维素,可以显著提高儿童直肠植物源护理液的使用效果和免疫性能。
2、在蔗髓纤维素制备的过程中,用水浸泡处理,可以去除原料中一些水溶性的杂质,提高蔗髓纤维素的洁净度。另外,通过对蔗髓纤维素进行糖化处理,提高糖化纤维素和中药液相容性的同时,改善生物体对蔗髓纤维素的利用率。
应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为了清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (6)
1.一种蔗髓纤维素,其特征在于,所述蔗髓纤维素通过以下方法得到:将蔗髓筛分,加入硫酸镁、氢氧化钠和去离子水混合均匀,充氧加压、密封、于100~120℃反应2~4小时,快速冷却至20~30℃;继续加入EDTA、蔥醌、过氧化氢、氢氧化钠和去离子水混合均匀,充氧加压、密封、于100~120℃反应2~4小时,收集沉淀物,用去离子水将沉淀物洗涤至洗液呈中性,干燥,获得蔗髓纤维素。
2.如权利要求1所述的蔗髓纤维素,其特征在于,所述蔗髓纤维素通过以下方法得到:将蔗髓筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将12~15g筛分后的蔗髓、0.1~0.5g硫酸镁、20~30g氢氧化钠和40~70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至20~30℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.3~0.5g EDTA、0.1~0.3g蔥醌、10~15g过氧化氢、20~25g氢氧化钠和80~100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,干燥,获得蔗髓纤维素。
3.如权利要求1所述的蔗髓纤维素,其特征在于,所述蔗髓纤维素通过以下方法得到:将蔗髓筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将筛分后的蔗髓浸入23~25℃的水中浸泡12~28小时,筛分后的蔗髓和水的固液比为1:(800~1000)g/mL,离心,收集沉淀,干燥,得到预处理后的蔗髓;将12g预处理后的蔗髓、0.1~0.5g硫酸镁、20~30g氢氧化钠和40~70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至20~30℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.3~0.5gEDTA、0.1~0.3g蔥醌、10~15g过氧化氢、20~25g氢氧化钠和80~100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,干燥,获得蔗髓纤维素。
4.如权利要求1所述的蔗髓纤维素,其特征在于,所述蔗髓纤维素通过以下方法得到:
(1)将蔗髓筛分,去除蔗髓原料中长纤维皮部及灰尘等杂质;将筛分后的蔗髓浸入23~25℃的水中浸泡12~28小时,筛分后的蔗髓和水的固液比为1:(800~1000)g/mL,离心,收集沉淀,干燥,得到预处理后的蔗髓;将12g预处理后的蔗髓、0.1~0.5g硫酸镁、20~30g氢氧化钠和40~70g去离子水混合均匀,投入反应装置中,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应结束后,在冰水浴中快速冷却至20~30℃,收集反应产物A;打开反应装置,在反应产物A中继续加入0.3~0.5gEDTA、0.1~0.3g蔥醌、10~15g过氧化氢、20~25g氢氧化钠和80~100g去离子水混合均匀,充入氧气使反应装置内气压达到0.4~0.6Mpa,密封,于100~120℃反应2~4小时;反应完毕后,收集反应产物B,用去离子水将反应产物B洗涤至洗液呈中性,干燥,获得固体C;
(2)取10~20g固体C,以玛瑙球为介质,以150~250转/分钟球磨1~10小时,过60~300目筛,得到微体化预处理的固体C;取10~20g微体化预处理的固体C,用涤纶布包裹后放入液氮罐中快速冷冻10~30分钟,取出,继续以玛瑙球为介质,以150~250转/分钟球磨1~2小时;重复上述冻磨处理步骤3~10次后,收集冻磨处理后的固体C;称取冻磨处理的固体C10~15g,加入pH4.8的质量分数0.6~0.7%的纤维素酶液30~50mL,然后加入pH4.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液20~30mL,在45~50℃酶解48~72小时,冷冻干燥,得到蔗髓纤维素。
5.如权利要求1~4任一项所述的蔗髓纤维素在儿童直肠植物源护理液中的应用。
6.如权利要求5所述的蔗髓纤维素在儿童直肠植物源护理液中的应用,其特征在于,所述儿童直肠植物源护理液采用以下步骤制备得到:
(1)按重量份称取以下中药原料:厚朴2~5重量份、黄芩2~5重量份、黄连0.2~1重量份、蒲公英8~10重量份、五倍子1~3重量份、桔梗2~5重量份、艾叶1~2重量份、鱼腥草0.7~3重量份;
(2)对中药原料进行粉碎,过筛,充分混匀,得到中药粉末;向中药粉末中加入水,在超声提取30~60分钟,收集中药提取液;
(3)将黑曲霉菌接种至斜面培养基上,培养3~4天;取斜面培养基上生长的黑曲霉孢子,加入蒸馏水,振荡培养0.5~1.5小时,得到浓度3×106~3×107cfu/mL的孢子悬液;将孢子悬液接入孢子悬液体积10~15倍的发酵产酶培养基中,振荡培养5~7天,收集发酵液;将发酵液过滤,收集滤液,离心20~30分钟,收集上清液即为粗酶液;所述斜面培养基的组成为:马铃薯20wt%,葡萄糖2wt%,琼脂1.5wt%,余量为水;所述发酵产酶培养基的组成为:麸皮4wt%,尿素0.4wt%,磷酸二氢钾0.5wt%,七水合硫酸镁0.04wt%,氯化钡0.16wt%,氯化钙0.05wt%,余量为水;
(4)将粗酶液和中药提取液以体积比1:(1~10)混合,于50~70℃搅拌5~30分钟后,于100~110℃加热5~10分钟,自然冷却至20~30℃,添加中药提取液重量0.005~0.01倍的如权利要求1~4任一项所述的蔗髓纤维素和中药提取液重量0.01~0.1倍的乳糖,充分混匀,得到所述儿童直肠植物源护理液。
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