CN109516984B - 一种2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及一种2‑巯基‑5‑氰基嘧啶类衍生物及其制备方法和应用。本发明提供的2‑巯基‑5‑氰基嘧啶类衍生物通过与DCN1蛋白结合，从而抑制了DCN1‑UBC12蛋白‑蛋白相互作用。实施例的结果显示，与化合物DI‑591相比，本发明提供的2‑巯基‑5‑氰基嘧啶类衍生物对DCN1‑UBC12蛋白‑蛋白相互作用具有较好的抑制活性。

Description

一种2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及一种2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病，目前已经上市的抗肿瘤药物大多含有一定的治疗局限性，比如容易产生耐药性、副作用大、半衰期短、生物利用率低、选择性不好等，因此，开发高效低毒、具有选择性的治疗肿瘤的药物十分迫切。
泛素化修饰通过参与蛋白质翻译后修饰从而调节细胞的多种生命过程。研究表明，泛素化过程异常会引发多种人类疾病，如帕金森病、阿尔茨海默症以及直肠癌、乳腺癌等。与泛素化修饰相类似的Neddylation修饰，是经过一系列酶促反应，来完成蛋白质修饰，进而调节细胞活动。Neddylation过程与肿瘤、免疫系统相关疾病有密切的关系，比如代谢综合征、肝癌、肺癌、胃癌等。在Neddylation调控过程中，其E3连接酶的DCN1在疾病进行发展过程中亦发挥重要的作用。而在结构上，DCN1可与E2偶联酶UBC12形成复合物，进而修饰Neddylation下游底物。因此，设计开发具有高生物活性、高选择性、低毒副作用的DCN1-UBC12蛋白-蛋白相互作用的小分子抑制剂已成为药物研究的热点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物及其制备方法和应用，本发明提供的对2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物对DCN1-UBC12蛋白-蛋白相互作用具有较好的抑制活性。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物，具有式I所示结构：
Figure BDA0001920382040000011
式I中，R1为
Figure BDA0001920382040000012
Figure BDA0001920382040000013
R2为
Figure BDA0001920382040000021
Figure BDA0001920382040000022
R3为
Figure BDA0001920382040000023
优选地，所述2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物包括
Figure BDA0001920382040000024
Figure BDA0001920382040000031
Figure BDA0001920382040000041
Figure BDA0001920382040000051
Figure BDA0001920382040000061
本发明提供了上述技术方案所述2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将氰基乙酸乙酯、硫脲、R3-CHO、碱试剂和溶剂I混合，进行环合反应，得到具有式Ⅱ所示结构的化合物；
将所述具有式Ⅱ所示结构的化合物、R1-R4与溶剂Ⅱ混合，进行取代反应I，得到具有式Ⅲ所示结构的化合物；所述R1-R4中R4包括-Br或-Cl；
将所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三氯氧磷与溶剂Ⅲ混合，进行取代反应Ⅱ，得到具有式IV所示结构的化合物；
将所述具有式IV所示结构的化合物、R2-H和溶剂IV混合，进行取代反应Ⅲ，得到具有式I所示结构的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物；
Figure BDA0001920382040000071
优选地，所述环合反应的温度为0～90℃。
优选地，所述取代反应I的温度为0～60℃。
优选地，所述取代反应Ⅱ的温度为0～120℃。
优选地，所述取代反应Ⅲ的温度为0～90℃。
优选地，所述溶剂I、溶剂Ⅱ、溶剂Ⅲ和溶剂Ⅳ独立地为有机溶剂，或者为有机溶剂和水的混合物；所述有机溶剂包括乙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、异丙醇、1,2-二氯乙烷、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或几种。
优选地，所述碱试剂为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钠、磷酸钾、碳酸氢钠和三乙胺中的一种或几种。
本发明提供了上述技术方案所述的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明提供了一种2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物，本发明提供的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物通过与DCN1蛋白结合，从而抑制了DCN1-UBC12蛋白-蛋白相互作用。实施例的结果显示，与化合物DI-591相比，本发明提供的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物对DCN1-UBC12蛋白-蛋白相互作用具有较好的抑制活性。
具体实施方式
本发明提供了一种2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物，具有式I所示结构：
Figure BDA0001920382040000072
式I中，R1为
Figure BDA0001920382040000073
Figure BDA0001920382040000074
Figure BDA0001920382040000075
优选为
Figure BDA0001920382040000076
Figure BDA0001920382040000077
更优选为
Figure BDA0001920382040000078
Figure BDA0001920382040000079
R2为
Figure BDA0001920382040000081
Figure BDA0001920382040000082
优选为
Figure BDA0001920382040000083
Figure BDA0001920382040000084
更优选为
Figure BDA0001920382040000085
Figure BDA0001920382040000086
R3为
Figure BDA0001920382040000087
优选为
Figure BDA0001920382040000088
更优选为
Figure BDA0001920382040000089
在本发明中，所述2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物优选包括
Figure BDA00019203820400000810
Figure BDA0001920382040000091
Figure BDA0001920382040000101
Figure BDA0001920382040000111
Figure BDA0001920382040000121
本发明提供了上述技术方案所述2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将氰基乙酸乙酯、硫脲、R3-CHO、碱试剂和溶剂I混合，进行环合反应，得到具有式Ⅱ所示结构的化合物；
将所述具有式Ⅱ所示结构的化合物、R1-R4与溶剂Ⅱ混合，进行取代反应I，得到具有式Ⅲ所示结构的化合物；所述R1-R4中R4包括-Br或-Cl；
将所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三氯氧磷与溶剂Ⅲ混合，进行取代反应Ⅱ，得到具有式IV所示结构的化合物；
将所述具有式IV所示结构的化合物、R2-H和溶剂IV混合，进行取代反应Ⅲ，得到具有式I所示结构的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物；
Figure BDA0001920382040000131
在本发明中，若无特殊说明，所有原料均为本领域技术人员所熟知的市售产品。
本发明将氰基乙酸乙酯、硫脲、R3-CHO、碱试剂和溶剂I混合，进行环合反应，得到具有式Ⅱ所示结构的化合物。在本发明中，所述碱试剂优选为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钠、磷酸钾、碳酸氢钠和三乙胺中的一种或几种，更优选为氢氧化钠或氢氧化钾，进一步优选氢氧化钾。在本发明中，所述溶剂I优选为有机溶剂，或者为有机溶剂和水的混合物；所述有机溶剂优选包括乙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、异丙醇、1,2-二氯乙烷、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或几种，更优选为乙醇、乙腈或1,4-二氧六环，进一步优选为乙醇；当所述溶剂I为上述具体溶剂中的两种以上时，本发明对各具体溶剂的比例没有任何特殊的限定，可按任意比例进行混合。在本发明中，所述溶剂I优选为AR级别。
在本发明中，所述氰基乙酸乙酯、硫脲、R3-CHO和碱试剂的摩尔比优选为(1.8～2.2)：(2.8～3.2)：(2.8～3.2)：(2.8～3.2)；所述氰基乙酸乙酯与溶剂I的用量比优选为(1.8～2.2)mmol：(4.8～5.2)mL。
在本发明中，所述氰基乙酸乙酯、硫脲、R3-CHO、碱试剂和溶剂I混合优选是将氰基乙酸乙酯、碱试剂和溶剂I混合，然后将所得物料与硫脲、R3-CHO混合。
在本发明中，当所述溶剂I为乙醇时，所述氰基乙酸乙酯、碱试剂和乙醇的混合温度优选为80～100℃，更优选为85～95℃。
在本发明中，所述环合反应的温度优选为0～90℃，更优选为80～90℃；本发明优选采用TLC跟踪所述环合反应的进程以确定反应结束时间，在本发明的实施例中，所述环合反应的时间优选为10～13h。
完成所述环合反应后，本发明优选将所得体系进行抽滤和重结晶，得到具有式Ⅱ所示结构的化合物。本发明对所述抽滤和重结晶没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员所熟知的抽滤和重结晶过程、并达到固液分离和净化产物的目的即可。
得到具有式Ⅱ所示结构的化合物后，将所述具有式Ⅱ所示结构的化合物、R1-R4与溶剂Ⅱ混合，进行取代反应I，得到具有式Ⅲ所示结构的化合物。在本发明中，所述溶剂Ⅱ优选为有机溶剂，或者为有机溶剂和水的混合物；所述有机溶剂优选包括乙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、异丙醇、1,2-二氯乙烷、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或几种，更优选为乙醇、乙腈或1,4-二氧六环，进一步优选为乙腈；当所述溶剂Ⅱ为上述具体溶剂中的两种以上时，本发明对各具体溶剂的比例没有任何特殊的限定，可按任意比例进行混合。在本发明中，所述溶剂Ⅱ优选为AR级别。
在本发明中，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物和R1-R4的摩尔比优选为(1.8～2.2)：(2.8～3.2)；所述具有式Ⅱ所示结构的化合物与溶剂Ⅱ的用量比优选为(1.8～2.2)mmol：(4.8～5.2)mL。
在本发明中，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物、R1-R4与溶剂Ⅱ混合优选是将所述具有式Ⅱ所示结构的化合物与溶剂Ⅱ混合，然后向所得物料中加入R1-R4；在本发明中，所述R1-R4的加入方式优选为滴加，更优选为逐滴加入。
在本发明中，所述取代反应I的温度优选为0～60℃，更优选为50～60℃；本发明优选采用TLC跟踪所述取代反应I的进程以确定反应结束时间，在本发明的实施例中，所述取代反应I的时间优选为3～7h，所述取代反应I的时间具体是以所述R1-R4加入完毕开始计。
完成所述取代反应I后，本发明优选将所得体系中溶剂蒸除，采用乙酸乙酯和水的混合物萃取剩余物，所得有机相进行色谱柱分离，得到具有式Ⅲ所示结构的化合物。在本发明中，所述乙酸乙酯和水的体积比优选为1：1。本发明对所述色谱柱分离没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员所熟知的色谱柱分离过程、并达到净化产物的目的即可。
得到具有式Ⅲ所示结构的化合物后，本发明将所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三氯氧磷与溶剂Ⅲ混合，进行取代反应Ⅱ，得到具有式IV所示结构的化合物。在本发明中，所述溶剂Ⅲ优选为有机溶剂，或者为有机溶剂和水的混合物；所述有机溶剂优选包括乙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、异丙醇、1,2-二氯乙烷、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或几种，更优选为乙醇、乙腈或1,4-二氧六环，进一步优选为1,4-二氧六环；当所述溶剂Ⅲ为上述具体溶剂中的两种以上时，本发明对各具体溶剂的比例没有任何特殊的限定，可按任意比例进行混合。在本发明中，所述溶剂Ⅲ优选为AR级别。
在本发明中，所述具有式Ⅲ所示结构的化合物与三氯氧磷的摩尔比优选为(1.8～2.2)：(2.8～3.2)；所述具有式Ⅲ所示结构的化合物与溶剂Ⅲ的用量比优选为(1.8～2.2)mmol：(4.8～5.2)mL。
在本发明中，所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三氯氧磷与溶剂Ⅲ混合优选是将具有式Ⅲ所示结构的化合物与溶剂Ⅲ混合，然后向所得物料中加入三氯氧磷；在本发明中，所述三氯氧磷的加入方式优选为滴加，更优选为逐滴加入。
在本发明中，所述取代反应Ⅱ的温度优选为0～120℃，更优选为50～90℃；本发明优选采用TLC跟踪所述取代反应Ⅱ的进程以确定反应结束时间，在本发明的实施例中，所述取代反应Ⅱ的时间优选为5～6h。
取代反应Ⅱ完成后，本发明优选将所得体系与冰水混合，析出固体后依次进行抽滤和柱层析分离，得到具有式IV所示结构的化合物。本发明对所述抽滤和柱层析分离没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员所熟知的抽滤和柱层析过程、并达到固液分离和净化产物的目的即可。
得到具有式IV所示结构的化合物后，本发明将所述具有式IV所示结构的化合物、R2-H和溶剂IV混合，进行取代反应Ⅲ，得到具有式I所示结构的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物。在本发明中，所述溶剂IV优选为有机溶剂，或者为有机溶剂和水的混合物；所述有机溶剂优选包括乙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、异丙醇、1,2-二氯乙烷、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或几种，更优选为乙醇、乙腈或1,4-二氧六环，进一步优选为乙醇；当所述溶剂IV为上述具体溶剂中的两种以上时，本发明对各具体溶剂的比例没有任何特殊的限定，可按任意比例进行混合。在本发明中，所述溶剂IV优选为AR级别。
在本发明中，所述具有式IV所示结构的化合物与R2-H的摩尔比优选为(0.8～1.2)：(1～2)，更优选为(0.9～1.1)：(1.4～1.6)；所述具有式IV所示结构的化合物与溶剂IV的用量比优选为1mmol:(18～22)mL，更优选为1mmol：(19～21)mL。
在本发明中，所述具有式IV所示结构的化合物、R2-H和溶剂IV的混合优选先将具有式IV所示结构的化合物和溶剂IV混合，然后将所得物料与R2-H混合。
在本发明中，所述取代反应Ⅲ的温度优选为0～90℃，更优选为50～90℃；本发明优选采用TLC跟踪所述取代反应Ⅲ的进程以确定反应结束时间，在本发明的实施例中，所述取代反应Ⅲ的时间优选为7～8h。
完成所述取代反应Ⅲ后，本发明优选将所得体系进行冷凝，析出固体后将所得固液混合物料依次抽滤和重结晶，得到具有式I所示结构的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物。本发明对所述冷凝、析出固体、抽滤和重结晶没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员所熟知的条件进行即可。
本发明还提供了上述技术方案所述2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。在本发明中，所述抗肿瘤药物具体是以DCN1-UBC12蛋白-蛋白相互作用为靶标。在本发明中，所述抗肿瘤药物中包括2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物和辅料；所述2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物的含量优选≥93wt％，更优选为94～96wt％；本发明对于所述辅料没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的药学上可接受的辅料即可。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
将氰基乙酸乙酯(20mmol)与氢氧化钾(30mmol)加入到乙醇(AR,50mL)中，90℃条件下搅拌溶解，再将硫脲(30mmol)和3,4,5-三甲氧基苯甲醛(30mmol)加入反应体系中，90℃条件下继续搅拌10h(TLC跟踪检测反应进程)；将所得体系进行抽滤和重结晶，得到具有式Ⅱ-1所示结构的化合物；
将具有式Ⅱ-1所示结构的化合物(20mmol)与乙腈(AR,50mL)混合，向所得溶液中逐滴加入间三氟甲基溴化苄(30mmol)，60℃条件下搅拌6h(TLC跟踪检测反应进程)；将所得体系中乙腈蒸除，采用乙酸乙酯和水的混合物(乙酸乙酯和水的体积比为1：1)萃取剩余物，所得有机相进行色谱柱分离，得到具有式Ⅲ-1所示结构的化合物；
将具有式Ⅲ-1所示结构的化合物(20mmol)与1,4-二氧六环(AR,50mL)混合，向所得溶液中逐滴加入三氯氧磷(30mmol)，90℃条件下搅拌5h(TLC跟踪检测反应进程)；将所得体系与冰水混合，搅拌，有固体析出，抽滤，将所得固体物料经柱层析分离，得到具有式IV-1所示结构的化合物；
将具有式IV-1所示结构的化合物(1mmol)加入50mL圆底烧瓶中，加入20mL乙醇，溶解后，加热至60℃，搅拌下加入1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基四唑(1.5mmol)，加热回流(90℃)反应5h(TLC跟踪检测反应进程)；将所得体系冷凝，析出固体，将所得固液混合物依次进行抽滤和重结晶，得到具有式I-1所示结构的化合物。
所述具有式I-1所示结构的化合物为白色固体，熔点为123～124℃，产率39％。
Figure BDA0001920382040000171
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69–7.48(m,4H,Ar-H),7.32(s,2H,Ar-H),4.53(t,J＝6.0Hz,2H,-CH2-),4.28(s,2H,-CH2-),3.81(d,J＝24.8Hz,9H,-CH3),2.68(t,J＝5.9Hz,2H,-CH2-),2.11(s,6H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C27H27F3N8O3S2,[M+H]+m/z:HMass:633.1678.found:633.1677。
实施例2
按照实施例1中方法制备得到式I-2所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为4-甲基溴化苄，将1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基四唑换为2-巯基噻唑；
所述式I-2所示结构的化合物为白色固体，熔点为106～107℃，产率为56％；
Figure BDA0001920382040000172
分析结果如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝3.0Hz,1H,Ar-H),7.62(d,J＝3.1Hz,1H,Ar-H),7.31(s,2H,Ar-H,7.10(s,4H,Ar-H),4.08(s,2H,-CH2-),3.93(d,J＝5.6Hz,9H,-CH3),2.32(s,3H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C25H22N4O3S3,[M+H]+m/z:H Mass:523.0932.found:523.0931。
实施例3
按照实施例1中方法制备得到式I-3所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为4-甲基溴化苄，将1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基四唑换为1-甲基-5-巯基-1H-四氮唑；
所述式I-3所示结构的化合物为白色固体，熔点为150～151℃，产率为58％；
Figure BDA0001920382040000181
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.29(s,2H,Ar-H),7.11(s,4H,Ar-H),4.08(s,3H,-CH3),4.03(s,2H,-CH2-),3.84(s,6H,-CH3),3.78(s,3H,-CH3),2.26(s,3H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C24H23N7O3S2,[M+H]+m/z:NaMass:544.1201.found:544.1201。
实施例4
按照实施例1中方法制备得到式I-4所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为4-甲基溴化苄；
所述式I-4所示结构的化合物为白色固体，熔点为121～122℃，产率为56％；
Figure BDA0001920382040000182
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.30(s,2H,Ar-H),7.17–7.06(m,4H,Ar-H),4.54(t,J＝5.9Hz,2H,-CH2-),4.05(s,2H,-CH2-),3.81(d,J＝25.2Hz,9H-CH3),2.69(t,J＝5.9Hz,2H,-CH2-),2.26(s,3H),2.13(s,6H-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C27H30N8O3S2,[M+H]+m/z:H Mass:579.1961.found:579.1962。
实施例5
按照实施例1中方法制备得到式I-5所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为3-甲基溴化苄；
所述式I-5所示结构的化合物为黄色固体，熔点为182～183℃，产率为51％；
Figure BDA0001920382040000191
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.33(s,2H,Ar-H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H,Ar-H),7.13–7.02(m,3H,Ar-H),4.96(t,J＝6.5Hz,2H,-CH2-),4.11(s,2H,-CH2-),3.82(d,J＝23.4Hz,9H,-CH3),3.65(s,2H,-CH2-),2.81(s,6H,-CH3),2.25(s,3H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C27H30N8O3S2,[M+H]+m/z:H Mass:579.1961.found:5579.1962。
实施例6
按照实施例1中方法制备得到式I-6所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为3-甲基溴化苄，将1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基四唑换为2-巯基噻唑；
所述式I-6所示结构的化合物为黄色固体，熔点为113～114℃，产率为58％；
Figure BDA0001920382040000192
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.17(d,J＝3.3Hz,1H,Ar-H),8.10(d,J＝3.3Hz,1H,Ar-H),7.36–7.27(m,2H,Ar-H),7.18(dd,J＝14.1,6.8Hz,1H,Ar-H),7.05(d,J＝7.4Hz,3H,Ar-H),4.20(s,2H,-CH2-),3.83(d,J＝5.5Hz,6H,-CH3),3.78(s,3H,-CH3),3.72(s,3H,-CH3),2.24(s,3H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C25H22N4O3S3,[M+H]+m/z:H Mass:523.0932.found:523.0931。
实施例7
按照实施例1中方法制备得到式I-7所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为3-甲基溴化苄，将1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基四唑换为1-甲基-5-巯基-1H-四氮唑；
所述式述I-7所示结构的化合物为白色固体，熔点为141～142℃，产率为58％；
Figure BDA0001920382040000201
分析结果如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(s,2H,Ar-H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H,Ar-H),7.06(dd,J＝16.9,8.1Hz,3H,Ar-H),4.04(s,2H,-CH2-),4.00(s,3H,-CH3),3.96(s,3H,-CH3),3.93(s,6H,-CH3),2.33(s,3H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C24H23N7O3S2,[M+H]+m/z:NaMass:544.1201.found:544.1201。
实施例8
按照实施例1中方法制备得到式I-8所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为2-萘甲基氯，将1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基四唑换为2-巯基噻唑；
所述式I-8所示结构的化合物为黄色固体，熔点为1270～128℃，产率为58％；
Figure BDA0001920382040000202
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.07(q,J＝3.3Hz,2H,Ar-H),8.02(d,J＝7.6Hz,1H,Ar-H),8.00–7.94(m,1H,Ar-H),7.91–7.85(m,1H,Ar-H),7.58(ddd,J＝7.3,5.3,1.6Hz,2H,Ar-H),7.42(d,J＝7.3Hz,2H,Ar-H),7.32(s,2H,Ar-H),4.72(s,2H,-CH2-),3.81(s,6H,-CH3),3.77(d,J＝4.1Hz,3H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C28H22N4O3S3,[M+H]+m/z:HMass:559.0932.found::559.0931。
实施例9
按照实施例1中方法制备得到式I-9所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为2-萘甲基氯，将1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基四唑换为1-甲基-5-巯基-1H-四氮唑；
所述式I-9所示结构的化合物为白色固体，熔点为128～129℃，产率为42％；
Figure BDA0001920382040000211
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.03–7.93(m,2H,Ar-H),7.89(dt,J＝7.0,3.6Hz,1H,Ar-H),7.61–7.52(m,2H,Ar-H),7.42(dd,J＝7.7,5.3Hz,2H,Ar-H),7.35–7.28(m,2H,Ar-H),4.57(s,2H,-CH2-),4.13(s,3H,-CH3),3.81(s,6H,-CH3),3.78(s,3H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C27H23N7O3S2,[M+H]+m/z:NaMass:580.1201.found:580.1202。
实施例10
按照实施例1中方法制备得到式I-10所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为2-萘甲基氯；
所述示式I-10所示结构的化合物为白色固体，熔点为141～142℃，产率为58％；
Figure BDA0001920382040000212
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.09–8.05(m,1H,Ar-H),8.02–7.93(m,2H,Ar-H),7.89(dd,J＝7.3,1.9Hz,1H,Ar-H),7.62–7.54(m,2H,Ar-H),7.45(d,J＝6.0Hz,1H,Ar-H),7.32(s,2H,Ar-H),4.66(s,2H,-CH2-),4.59(s,2H,-CH2-),3.81(s,6H,-CH3),3.77(d,J＝8.5Hz,3H,-CH3),2.77(d,J＝21.6Hz,2H,-CH2-),2.16(s,6H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C30H30N8O3S2,[M+H]+m/z:H Mass:615.1961.found:615.1961。
实施例11
按照实施例1中方法制备得到式I-11所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为2-氯甲基吡啶；
所述式I-11所示结构的化合物为白色固体，熔点为107～108℃，产率为38％；
Figure BDA0001920382040000221
分析结果如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝4.2Hz,1H,Ar-H),7.64(td,J＝7.7,1.8Hz,1H,Ar-H),7.35(s,2H,Ar-H),7.26–7.14(m,2H,Ar-H),4.44(t,J＝6.0Hz,2H,-CH2-),4.21(s,2H,-CH2-),3.94(d,J＝7.2Hz,9H,-CH3),2.79(t,J＝6.0Hz,2H,-CH2-),2.23(s,6H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C25H27N9O3S2,[M+H]+m/z:H Mass:566.1756.found:566.1755。
实施例12
按照实施例1中方法制备得到式I-12所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为对氯氯苄，将1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基四唑换为2-巯基噻唑；
所述式I-12所示结构的化合物为黄色固体，熔点为134～135℃，产率为54％；
Figure BDA0001920382040000222
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.17(d,J＝3.3Hz,1H,Ar-H),8.09(d,J＝3.3Hz,1H,Ar-H),7.39–7.21(m,6H,Ar-H),4.25(s,2H,-CH2-),3.84(s,6H,-CH3),3.78(s,3H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C24H19ClN4O3S3,[M+H]+m/z:H Mass:543.0386.found:543.0388。
实施例13
按照实施例1中方法制备得到式I-13所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为对氯氯苄，将1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基四唑换为1-甲基-5-巯基-1H-四氮唑；
所述式I-13所示结构的化合物为白色固体，熔点为140～141℃，产率为57％；
Figure BDA0001920382040000231
分析结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.36(d,J＝8.4Hz,2H,Ar-H),7.30(s,2H,Ar-H),7.26(d,J＝8.5Hz,2H,Ar-H),4.12(s,2H,-CH2-),4.08(s,3H,-CH3),3.84(s,6H,-CH3),3.79(s,3H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C23H20ClN7O3S2,[M+H]+m/z:H Mass:542.0836.found:542.0836。
实施例14
按照实施例1中方法制备得到式I-14所示结构的化合物，区别仅在于将间三氟甲基溴化苄换为对甲氧基苄氯；
所述式I-14所示结构的化合物为白色固体，熔点为145～147℃，产率为42％；
Figure BDA0001920382040000232
分析结果如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34(d,J＝7.1Hz,2H,Ar-H),7.15(d,J＝7.9Hz,2H,Ar-H),6.83(t,J＝7.7Hz,2H,Ar-H),4.41(d,J＝5.6Hz,2H,-CH2-),4.07–3.88(m,12H,-CH3),3.79(d,J＝7.1Hz,3H,-CH3),2.79(d,J＝6.0Hz,2H,-CH2-),2.24(d,J＝7.2Hz,6H,-CH3).HR-MS(ESI),calcd.C27H30N8O4S2,[M+H]+m/z:H Mass:595.1909.found:595.1909。
实验例
对实施例1～14制备的化合物进行DCN1-UBC12蛋白-蛋白相互作用的抑制活性测定，具体如下：
将蛋白质与荧光探针复合物在测定缓冲液(100mM磷酸缓冲液，pH＝6.5，添加0.02wt％吐温20)中进行预孵育，得到复合溶液；其中，所述蛋白质为DCN1蛋白，初始浓度为89μM，所述荧光探针复合物(FAM-tracer)的初始浓度为10μM，结构式如下所示：
Figure BDA0001920382040000241
将实施例1～14制备的化合物分别加入到二甲基亚砜(DMSO，1μL)中，然后将所得溶液分别与所述复合溶液(99μL)混合，得到混合溶液；将所述混合溶液加入测试平板，在室温下进行孵育30min并轻轻摇动，所得体系中荧光探针复合物的最终浓度为5nM，DCN1蛋白的最终浓度为5nM；同时按照相同条件对化合物DI-591进行处理以作为对照例；
每个测试平板含有阴性对照(仅含有蛋白质和荧光探针复合物)和阳性对照(仅含有游离荧光探针复合物)；通过Prism/GraphPad软件中的剂量响应抑制方程(四个参数，可变斜率)，使用竞争曲线的非线性回归拟合来确定IC50值；
试验结果如表1所示：
表1实施例1～14制备的化合物对DCN1-UBC12蛋白-蛋白相互作用的抑制活性数据
化合物 IC<sub>50</sub>(nM) 化合物 IC<sub>50</sub>(nM) 化合物 IC<sub>50</sub>(nM)
I-1 12.16±1.08 I-6 5.48±0.73 I-11 19.40±1.28
I-2 5.53±0.74 I-7 11.07±1.04 I-12 11.48±1.06
I-3 2.86±0.45 I-8 5.36±0.73 I-13 9.55±0.98
I-4 9.37±0.97 I-9 6.15±0.78 I-14 13.41±1.12
I-5 12.40±1.09 I-10 2.25±0.35 DI-591 20.82±1.24
由以上实验结果可知，与化合物DI-591相比，本发明提供的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物对DCN1-UBC12蛋白-蛋白相互作用具有较好的抑制活性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物，具有式I所示结构：
Figure FDA0003314075660000011
式I中，R1为
Figure FDA0003314075660000012
Figure FDA0003314075660000013
R2为
Figure FDA0003314075660000014
2.如权利要求1所述的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物，其特征在于，所述2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物为
Figure FDA0003314075660000015
Figure FDA0003314075660000021
3.权利要求1或2所述2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将氰基乙酸乙酯、硫脲、R3-CHO、碱试剂和溶剂I混合，进行环合反应，得到具有式Ⅱ所示结构的化合物；
将所述具有式Ⅱ所示结构的化合物、R1-R4与溶剂Ⅱ混合，进行取代反应I，得到具有式Ⅲ所示结构的化合物；所述R1-R4中R4为-Br或-Cl；
将所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三氯氧磷与溶剂Ⅲ混合，进行取代反应Ⅱ，得到具有式IV所示结构的化合物；
将所述具有式IV所示结构的化合物、R2-H和溶剂IV混合，进行取代反应Ⅲ，得到具有式I所示结构的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物；
Figure FDA0003314075660000022
R3为
Figure FDA0003314075660000023
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述环合反应的温度为0～90℃。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述取代反应I的温度为0～60℃。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述取代反应Ⅱ的温度为0～120℃。
7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述取代反应Ⅲ的温度为0～90℃。
8.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂I、溶剂Ⅱ、溶剂Ⅲ和溶剂Ⅳ独立地为有机溶剂，或者为有机溶剂和水的混合物；所述有机溶剂为乙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、异丙醇、1,2-二氯乙烷、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或几种。
9.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述碱试剂为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钠、磷酸钾、碳酸氢钠和三乙胺中的一种或几种。
10.权利要求1或2所述的2-巯基-5-氰基嘧啶类衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用；所述抗肿瘤药物以DCN1-UBC12蛋白-蛋白相互作用为靶标。
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