CN109485537A - 四苯基乙烯微晶、制备方法及应用 - Google Patents

四苯基乙烯微晶、制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种四苯基乙烯微晶(TPE MCs)的制备方法及应用，该种四苯基乙烯微晶呈现出聚集增强的电致化学发光(ECL)信号，有效地解决了传统有机发光体ECL聚集猝灭的问题，极大地扩宽了其在生物检测中的分析应用。基于此TPE MCs构建的传感器具有特异性好，灵敏度高及稳定性好等优点，能够有效地实现对目标物粘蛋白1(MUC1)的灵敏检测分析。

Description

四苯基乙烯微晶、制备方法及应用
技术领域
本发明属于生物传感技术领域，涉及四苯基乙烯微晶、制备方法及应用。
背景技术
近年来，各种疾病标志物的灵敏检测一直是基础研究与临床诊断中的关注热点。在众多的检测方法中，由于电致化学发光(ECL)分析技术具有背景信号低、检测范围宽、灵敏度高及设备简单等固有优点，因此其通常被作为一种极具潜力的技术手段用于生物传感、食品安全和环境检测等研究领域。经典的ECL发光体主要包括鲁米诺及其衍生物、联吡啶钌极其衍生物、多环芳烃、量子点及过硫酸根。其中，多环芳烃(9,10-二苯基蒽、苝和红荧烯)具备易得、结构可控及优秀的光电特性等优点，故多环芳烃作为ECL发光体吸引了众多学者的研究兴趣。
目前，在ECL分析中，分散在稀溶液中也就是以单分子状态存在的多环芳烃展现出强的发光信号。当将多环芳烃分散在浓溶液中或以聚集状态存在时，ECL信号通常会严重削弱或猝灭，这就在一定程度上限制了多环芳烃的进一步应用。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种四苯基乙烯微晶、制备方法及应用。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
四苯基乙烯微晶(TPE MCs)，是四苯基乙烯(TPE)通过表面活性剂辅助自组装而得。
优选的，所述表面活性剂为十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)。
上述四苯基乙烯微晶的制备方法，具体步骤如下：TPE粉末溶于有机溶剂中制成溶液，将溶液注入表面活性剂水溶液中并搅拌，离心取沉淀，洗涤，真空干燥，即得。
优选的，所述有机溶剂为四氢呋喃，所述表面活性剂溶液为CTAB水溶液。
优选的，具体步骤如下：TPE粉末溶于四氢呋喃中制成溶液，将溶液注入CTAB水溶液中并搅拌，离心取沉淀，洗涤，真空干燥，即得；其中，CTAB水溶液的浓度为10mmol/L，TPE粉末、四氢呋喃、CTAB水溶液的体积比为3mg：1mL：10mL。
进一步优选的，溶液的制备方法为：将TPE粉末加入四氢呋喃中，超声5分钟使其充分溶解。
进一步优选的，溶液注入CTAB中搅拌时间为20分钟。
进一步优选的，离心的工艺条件为：11000rpm，15分钟，4℃。
进一步优选的，利用超纯水洗涤。
进一步优选的，真空干燥条件为：70℃。
上述四苯基乙烯微晶在电致化学发光传感器中的应用，所述生物传感器用于肿瘤标志物检测。
优选的，所述肿瘤标志物为粘蛋白1(MUC1)。
一种用于肿瘤标志物检测的电致化学发光传感器，其以上述四苯基乙烯微晶为ECL发光体。
优选的，是以上述四苯基乙烯微晶作为ECL发光体结合DNA酶剪切驱动的双腿步行器构建而得。
上述一种电致化学发光传感器的构建方法，包括步骤：
(1)将四苯基乙烯微晶(TPE MCs)分散到超纯水中，制成TPE MCs水溶液。
(2)在干净的玻碳电极表面上滴加TPE MCs水溶液，自然晾干后通过静电吸附作用组装上钯纳米颗粒(PdNPs)，得到修饰有PdNPs/TPE MCs的玻碳电极；
(3)5'和3'分别修饰猝灭物质二茂铁和巯基的底物链S3通过配位键组装在已修饰有PdNPs/TPE MCs的玻碳电极表面(ECL信号呈“off”状态)；
(4)用巯基己烷(HT)封闭电极界面的非特异性吸附位点，储存于4℃冰箱中备用；
S3的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
S3：5'-Fc-TAGTAGCAGrAGCCCTGGATCGTTTT(CH2)6-SH-3'，如SEQ ID NO.4所示。
优选的，步骤(1)中，将获得的四苯基乙烯微晶(TPE MCs)分散到10mL超纯水中。
优选的，步骤(2)中，玻碳电极的清洗方法如下：将玻碳电极(GCE,Φ＝4mm)依次经过0.3μm和0.05μm的三氧化二铝粉末抛光后用超纯水冲洗干净，再分别在超纯水、乙醇、超纯水中超声洗涤，洗净的电极置于室温下晾干，备用。
优选的，步骤(2)的具体方法是：在干净的玻碳电极表面上滴加10μL TPE MCs，自然晾干后，滴加10μL PdNPs通过静电吸附作用将PdNPs组装到电极表面。
优选的，步骤(2)中，PdNPs的制备方法如下：
(2-1)将10mL十六烷基三甲基氯化铵(CTAC,0.1mol/L)溶液和0.05mL四氯钯酸钾(K2PdCl4,0.05mol/L)溶液在室温下混合均匀；
(2-2)在搅拌的条件下，将0.1mL新制的硼氢化钠(NaBH4,0.1mol/L)冰水溶液快速地注入上述溶液中，接着在暗处陈化3小时得到Pd晶种；
(2-3)取0.1mL新制备的Pd晶种溶液于烧杯中，在搅拌的情况下向其中依次注入5mL CTAC溶液(0.01mol/L)和3mL K2PdCl4溶液(1mmol/L)混匀；
(2-4)将0.1mL新制的抗坏血酸溶液(AA，0.1mol/L)加入(2-3)溶液中并在室温下搅拌15分钟；
(2-5)最后，产物用超纯水离心、洗涤3次再分散到5mL超纯水中备用。
进一步优选的，步骤(3)中，底物链S3的用量为10μL，2μmol/L，配位组装在4℃冰箱中8h，然后用0.1mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液淌洗。
进一步优选的，步骤(4)中，用10μL巯基己烷(HT,1mmol/L)溶液室温下孵育1小时，封闭电极界面的非特异性吸附位点。
上述一种电致化学发光传感器的使用方法，将上述制备的电致化学发光传感器与获得的不同浓度目标物诱导的酶促循环放大产物DNA双腿步行器S1/S2以及Pb2+溶液(Pb(NO3)2溶液)在37℃条件下孵育90分钟，然后在去离子水中淌洗；然后进行电致化学发光检测即可。在辅酶因子Pb2+存在的情况下，DNA双腿步行器S1/S2的双腿与底物链S3互补并完成S3的剪切，从而释放出猝灭物质二茂铁，实现ECL信号的恢复(“on”状态)。
优选的，所述目标物为MUC1。该过程中，ECL信号恢复程度与目标物MUC1的浓度成正比，故此传感器能够成功地用于MUC1检测。
优选的，DNA双腿步行器S1/S2与Pb2+溶液的体积比为5：1，其中Pb2+溶液的浓度为6mmol/L。
优选的，DNA双腿步行器S1/S2的制备方法如下：首先制备三链DNA复合结构S0-S1/S2-S0，即将MUC1的DNA适体链S0、DNA酶链S1和DNA酶链S2溶液按比例混合使复合结构S0-S1/S2-S0浓度为1μmol/L，加热到95℃并保持10分钟，冷却至室温；然后在微型离心管内进行不同浓度目标物MUC1引导的酶链放大反应，获得不同浓度DNA双腿步行器S1/S2；
S0、S1、S2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。
S0：5'-AGTAGCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGGATCG-3'，如SEQ ID NO.1；
S1：
5'-CGATCCAGGGTCCGAGCCGGTCGAACTGCTACTAT15CGCACAGAGGAGGGCCGTAAGTTAGTTGGAG-3'，如SEQ ID NO.2所示；
S2：
5'-CGATCCAGGGTCCGAGCCGGTCGAACTGCTACTAT15CTCCAACTAACTTACGGCCCTCCTCTGTGCG-3'，如SEQ ID NO.3所示。
进一步优选的，将100μL包含S0-S1/S2-S0、不同浓度MUC1和外切酶I(Exo I)反应缓冲溶液置于37℃条件下孵育90分钟，接着在80℃水浴中加热20分钟使酶失活以终止反应；反应缓冲溶液中，S0-S1/S2-S0的浓度为1μmol/L，Exo I浓度为1U/μL，MUC1浓度(1fg/mL到1ng/mL)。
优选的，电致化学发光检测采用传统的三电极体系，GCE作为工作电极，铂丝电极作为对电极，Ag/AgCl电极(饱和KCl溶液)作为参比电极。在含有20mM三乙胺(TEA)的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中对工作电极进行连续ECL扫描，并记录下稳定扫描得到的ECL响应信号值。扫描电压范围为0～1.6V(vs.Ag/AgCl)，电位扫描速度为300mV/s，光电倍增高压管设为800V。传感器的ECL信号随着MUC1浓度的增加而增加，并且和MUC1浓度的对数值成正比。其线性响应范围为1fg/mL到1ng/mL。
本发明的有益效果在于：
本发明针对多环芳烃这种有机发光体的不足——聚集诱导猝灭，发现并合成了一种分子内运动受限驱动ECL发射的四苯基乙烯微晶。与聚集诱导猝灭现象恰恰相反，本发明中的四苯基乙烯微晶呈现出聚集增强的ECL信号。通过荧光、ECL光谱等表征手段对四苯基乙烯微晶的ECL机理进行了详细的研究。本发明有效地解决了传统有机发光体ECL聚集猝灭的问题，极大地扩宽了其在生物检测中的分析应用。因此，TPE MCs可以作为一种理想的固态发光平台，用于电致化学发光传感器的构建。
本发明基于TPE MCs作为新型ECL发光体并结合DNA酶剪切驱动的双腿步行器构建了一个ECL生物传感器用于肿瘤标志物MUC1的高灵敏检测。
综上所述，本发明的TPE MCs展现出强而稳定的ECL信号，基于此构建的传感器具有特异性好，灵敏度高及稳定性好等优点，能够有效地实现对目标物MUC1的灵敏检测分析。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1为传感器的检测结果，其中，A为ECL响应值与MUC1浓度的对数值的标准曲线；B为该传感器的选择性；
图2为TPE MCs的SEM表征；
图3为TPE MCs荧光、ECL光谱；
图4为传感器的稳定性检测结果。
具体实施方式
下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
本申请中S0、S1、S2、S3均为人工合成，由生工生物工程(上海)股份有限公司提供。
实施例
将3mg TPE粉末加入四氢呋喃中，超声5分钟使其充分溶解得到溶液，然后，将上述溶液迅速注入10mL CTAB溶液(10mmol/L)中并搅拌20分钟，离心(11000rpm，15分钟，4℃)取沉淀，去离子水洗涤，真空干燥得到TPE MCs(其SEM谱图见图2，荧光、ECL光谱见图3)，将TPEMCs分散到10mL超纯水中备用。
将10mL CTAC溶液(0.1mol/L)和0.05mL K2PdCl4溶液(0.05mol/L)在室温下混合均匀。然后，在搅拌的条件下，将0.1mL新制的NaBH4(0.1mol/L)冰水溶液快速地注入上述溶液中，接着在暗处陈化3小时得到Pd晶种。接下来，取0.1mL新制备的Pd晶种溶液于烧杯中，并向其中依次注入5mL CTAC溶液(0.01mol/L)和3mL K2PdCl4溶液(1mmol/L)混匀。随即，将0.1mL新制的AA(0.1mol/L)溶液加入并在室温下搅拌15分钟。最后，产物用超纯水离心、洗涤3次再分散到5mL超纯水中，得到PdNPs。
将GCE依次经过0.3μm和0.05μm的三氧化二铝粉末抛光后用超纯水冲洗干净，再分别在超纯水、乙醇、超纯水中超声洗涤，洗净的电极置于室温下晾干，备用。首先，在干净的GCE表面上滴加TPE MCs，自然晾干后通过静电吸附作用层层组装上PdNPs。紧接着，5'和3'分别修饰猝灭物质二茂铁和巯基的底物链S3通过配位键组装在修饰有PdNPs/TPE MCs的玻碳电极界面(ECL信号呈“off”状态)。此时，需用HT溶液封闭电极界面的非特异性吸附位点，然后淌洗并储存在4℃的冰箱中，制得传感器。
试验例
采用本发明所述的基于TPE MCs新型ECL发光体构建的传感器可进行但不限于下述检测：
1、采用该传感器对MUC1的标准溶液进行了检测，具体方法如下：
DNA双腿步行器(S1/S2)的产生：首先制备三链DNA复合结构(S0-S1/S2-S0)，即将MUC1的DNA适体链S0、DNA酶链S1和S2溶液按比例混合使最终浓度为1μmol/L，然后加热到95℃并保持10分钟，退火，冷却至室温。之后，在微型离心管中进行不同浓度目标物MUC1引导的酶链放大反应得到不同浓度DNA双腿步行器S1/S2。简要地讲，将100μL包含S0-S1/S2-S0(1μmol/L)、不同浓度MUC1(1fg/mL到1ng/mL)和外切酶I(Exo I,1U/μL)的反应缓冲溶液置于37℃条件下孵育90分钟，接着在80℃水浴中加热20分钟使酶失活以终止反应。
在制备好的传感器表面滴加不同浓度10μL DNA双腿步行器S1/S2以及2μL 6mmol/L的Pb2+溶液在37℃条件下孵育90分钟，然后在去离子水中淌洗。
电致化学发光检测采用传统的三电极体系，GCE作为工作电极，铂丝电极作为对电极，Ag/AgCl电极(饱和KCl溶液)作为参比电极。在含有三乙胺(TEA)的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中对制备得到的工作电极进行连续ECL扫描，并记录下稳定扫描得到的ECL响应值。电位扫描速度为300mV/s，光电倍增高压管设为800V，扫描电压范围为0～1.6V(vs.Ag/AgCl)。
传感器的ECL信号随着MUC1浓度的增加而增加，并且和MUC1浓度的对数值成正比。其线性响应范围为1fg/mL到1ng/mL。
其中，磷酸盐缓冲溶液(PBS,pH 7.4)的配置
由0.1mol/L K2HPO4，0.1mol/L NaH2PO4和0.1mol/L KCl的混合溶液制得。
2、该传感器的选择性检测
DNA双腿步行器S1/S2的产生过程中，用1ng/mL的干扰蛋白(癌胚抗原(CEA)或甲胎蛋白(AFP))代替MUC1。然后，将输出产物10μL和2μL 6mmol/L的Pb2+溶液与制备好的传感器在37℃条件下孵育90分钟，反应完成后用去超纯水淌洗。
DNA双腿步行器S1/S2的产生过程中，用目标物MUC1浓度为100pg/mL，然后，将输出产物10μL和2μL 6mmol/L的Pb2+溶液与制备好的传感器在37℃条件下孵育90分钟，反应完成后用去超纯水清洗。
在DNA双腿步行器S1/S2的产生过程中，用混合蛋白(混合后目标蛋白MUC1、CEA、AFP的浓度分别为100pg/mL，1ng/mL，1ng/mL)引导酶链放大反应。然后，将输出产物10μL和2μL 6mmol/L的Pb2+溶液与制备好的传感器在37℃条件下孵育90分钟，反应完成后用去超纯水淌洗。
电致化学发光检测采用三电极体系，GCE作为工作电极，铂丝电极作为对电极，Ag/AgCl电极(饱和KCl溶液)作为参比电极。在含有TEA的PBS中对工作电极进行连续ECL扫描，并记录下稳定扫描得到的ECL响应值。电位扫描速度为300mV/s，光电倍增高压管设为800V，扫描电压范围为0～1.6V(vs.Ag/AgCl)。
各种干扰蛋白的ECL信号分别被测定，将三次ECL信号强度求平均值，对照100pg/mL MUC1的ECL强度，具体结果见图1中B。
3、该传感器的稳定性检测
DNA双腿步行器S1/S2的产生过程中，将100μL包含S0-S1/S2-S0(1μmol/L)、MUC1(1ng/mL)和外切酶I(Exo I,1U/μL)的反应缓冲溶液置于37℃条件下孵育90分钟，接着在80℃水浴中加热20分钟使酶失活以终止反应。
在制备好的传感器表面滴加10μL上述DNA双腿步行器S1/S2以及2μL 6mmol/L的Pb2+溶液在37℃条件下孵育90分钟，然后在去离子水中淌洗。
电致化学发光检测采用三电极体系，GCE作为工作电极，铂丝电极作为对电极，Ag/AgCl电极(饱和KCl溶液)作为参比电极。在含有20mM TEA的0.1M pH 7.4PBS中对工作电极进行连续ECL扫描15圈，并记录下稳定扫描得到的ECL响应值。电位扫描速度为300mV/s，光电倍增高压管设为800V，扫描电压范围为0～1.6V(vs.Ag/AgCl)。结果见图4。
3、该传感器的加标回收检测
用PBS将人血清稀释50倍后用于人血清样品中不同浓度MUC1溶液的配置，后续步骤与前述的检测过程一致。
电致化学发光检测采用三电极体系，GCE作为工作电极，铂丝电极作为对电极，Ag/AgCl电极(饱和KCl溶液)作为参比电极。在含有20mM TEA的0.1M pH 7.4PBS中对工作电极进行连续ECL扫描，并记录下稳定扫描得到的ECL响应值。电位扫描速度为300mV/s，光电倍增高压管设为800V，扫描电压范围为0～1.6V(vs.Ag/AgCl)。
将三次ECL连续扫描得到的稳定ECL强度值求平均值，对照MUC1标准曲线(图1中A)可计算出对应的MUC1浓度和回收率，具体结果见表1。由表1的回收率结果表明该传感器的灵敏度高，能够较好的用于实际样品检测分析。
表1.加标回收检测结果
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 西南大学
<120> 四苯基乙烯微晶、制备方法及应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agtagcagtt gatcctttgg ataccctgga tcg 33
<210> 2
<211> 80
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cgatccaggg tccgagccgg tcgaactgct actatttttt tttttttttc gcacagagga 60
gggccgtaag ttagttggag 80
<210> 3
<211> 80
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cgatccaggg tccgagccgg tcgaactgct actatttttt tttttttttc tccaactaac 60
ttacggccct cctctgtgcg 80
<210> 4
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tagtagcagr agccctggat cgtttt 26

Claims (10)

1.四苯基乙烯微晶，其特征在于，是四苯基乙烯粉末通过表面活性剂辅助自组装而得。
2.权利要求1所述四苯基乙烯微晶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：TPE粉末溶于有机溶剂中制成溶液，将溶液注入表面活性剂水溶液中并搅拌，离心取沉淀，洗涤，真空干燥，即得。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：TPE粉末溶于四氢呋喃中制成溶液，将溶液注入十六烷基三甲基溴化铵溶液中并搅拌，离心取沉淀，洗涤，真空干燥，即得；其中，CTAB溶液的浓度为10mmol/L，TPE粉末、四氢呋喃、CTAB水溶液的质量体积比为3mg：1mL：10mL。
4.权利要求1所述四苯基乙烯微晶在电致化学发光传感器中的应用，其特征在于，所述生物传感器用于肿瘤标志物检测。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肿瘤标志物为粘蛋白1。
6.一种用于肿瘤标志物检测的电致化学发光传感器，其特征在于，其以权利要求1所述四苯基乙烯微晶为ECL发光体。
7.权利要求6所述一种电致化学发光传感器的构建方法，其特征在于，包括步骤：
(1)将四苯基乙烯微晶分散到超纯水中，制成TPE MCs水溶液。
(2)在干净的玻碳电极表面上滴加TPE MCs水溶液，自然晾干后通过静电吸附作用组装上钯纳米颗粒；
(3)5'和3'分别修饰猝灭物质二茂铁和巯基的底物链S3通过配位键组装在已修饰有PdNPs/TPE MCs的玻碳电极表面；
(4)用巯基己烷封闭电极界面的非特异性吸附位点，储存于4℃冰箱中备用。
8.权利要求6所述一种电致化学发光传感器的使用方法，其特征在于，将权利要求6所述电致化学发光传感器与目标物诱导的酶促循环放大产物DNA双腿步行器S1/S2以及固定浓度的Pb2+溶液在37℃条件下孵育90分钟，之后在去离子水中淌洗；然后进行电致化学发光检测即可。
9.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述目标物为MUC1。
10.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于，DNA双腿步行器S1/S2的制备方法如下：首先制备三链DNA复合结构S0-S1/S2-S0，即将MUC1的DNA适体链S0、DNA酶链S1和DNA酶链S2溶液，按比例混合使复合结构S0-S1/S2-S0浓度为1μmol/L，加热到95℃并保持10分钟，冷却至室温；然后在微型离心管内进行不同浓度目标物MUC1引导的酶链放大反应。
CN201811392743.2A 2018-11-21 2018-11-21 四苯基乙烯微晶、制备方法及应用 Active CN109485537B (zh)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110542714A (zh) * 2019-06-17 2019-12-06 济南大学 一种dna步行器的制备及其在传感分析中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012185041A (ja) * 2011-03-04 2012-09-27 Saitama Univ ウィルス、微生物類及び毒素の検出方法
CN105492891A (zh) * 2013-08-05 2016-04-13 香港科技大学 聚集诱导发光材料的合成物及其合成方法
CN105524441A (zh) * 2016-01-28 2016-04-27 华南理工大学 一种含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡及其制法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012185041A (ja) * 2011-03-04 2012-09-27 Saitama Univ ウィルス、微生物類及び毒素の検出方法
CN105492891A (zh) * 2013-08-05 2016-04-13 香港科技大学 聚集诱导发光材料的合成物及其合成方法
CN105524441A (zh) * 2016-01-28 2016-04-27 华南理工大学 一种含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡及其制法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YING ZHOU,ET AL.: "Programmable Modulation of Copper Nanoclusters Electrochemiluminescence via DNA Nanocranes for Ultrasensitive Detection of microRNA", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》 *
蒋欣亚，柴雅琴: "电致化学发光生物传感器中信号输出模式的研究进展", 《化学传感器》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110542714A (zh) * 2019-06-17 2019-12-06 济南大学 一种dna步行器的制备及其在传感分析中的应用

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