CN109481388B - 一种活性微藻护肤液及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种活性微藻护肤液，属于护肤品技术领域，其技术方案要点是包括微藻藻液，微藻藻液中包含多种呈活体状态的微藻，按微藻细胞个体数量计，所述微藻包括有蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）55‑95份、螺旋藻（Spirulina sp.）5‑45份，具有平微、增弹、改善肤色暗沉、消除痘印、祛斑的功效；本发明还提供了一种上述活性微藻护肤液的制备方法，包括有以下步骤：S1，分别扩大培殖蛋白核小球藻和螺旋藻，获得两种藻液；S2，将两种藻液混合获得微藻藻液；另外，本发明的活性微藻护肤液还可以与常规护肤品一同使用，或直接掺入常规护肤液中使用。

Description

一种活性微藻护肤液及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及护肤品技术领域，特别涉及一种活性微藻护肤液及其制备方法和应用。

背景技术

微藻是一类在陆地、海洋分布广泛，营养丰富、光合利用度高的自养植物，除了广泛应用于食品、医药、基因工程等领域以外，在化妆品领域同样具有很好的开发前景。

现有的可参考申请号为201310249599.8的中国专利申请，其公开了一种螺旋藻抗皱防衰老乳液，按重量百分比，产品配方如下：植物棕榈葡萄糖苷10.0-15.0、海藻萃取物6.0-8.0、螺旋藻提取物3.0-5.0、白芒花籽油1.0-2.0、神经酰胺0.5-1.0，添加天然柠檬酸调节pH至6.0，其余为玫瑰花水。该抗皱防衰老乳液采用螺旋藻提取物作为主要的抗皱防衰老组分，能够增加皮肤弹性、润肤保湿、除皱、祛斑等。

但是，上述乳液中，螺旋藻是以提取物的方式加入，螺旋藻已经死亡，能够提供的护肤营养成分有限，限制了乳液的功效。

此外，从清洁、保养到彩妆，只要是肌肤无法吸收与接受的产品成分，都可能造成负担与残留，这其中包括防晒剂、防腐剂、染料、色素与香精等不能被肌肤吸收从而残留在表面的物质。化妆品成分在肌肤表面过多残留，从而导致肌肤“消化不良”、“呼吸不畅”。长此以往，不仅会堵塞毛孔，影响皮质分泌，还会导致肌肤的过敏、暗沉和痘痘，引发一系列肌肤问题。

发明内容

针对现有技术不足，本发明的目的一：提供一种活性微藻护肤液，具有平微、增弹、改善肤色暗沉、消除痘印、祛斑的功效。

本发明的目的一是通过以下技术方案得以实现的：

一种活性微藻护肤液，包括微藻藻液，微藻藻液中包含多种呈活体状态的微藻，按微藻细胞个体数量计，所述微藻包括有蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)55-95份、螺旋藻(Spirulinasp.)5-45份。

较佳的，按微藻细胞个体数量计，所述微藻包括有蛋白核小球藻70-90份和螺旋藻10-30份。

较佳的，按微藻细胞个体数量计，所述微藻包括有蛋白核小球藻80份和螺旋藻20份。

通过采用上述方案，蛋白核小球藻属于绿藻，为一种真核生物，是一种球形单细胞淡水藻类，是地球上最早的生命之一，是一种高效的光合植物。蛋白核小球藻借助阳光、水和二氧化碳，每隔20h即可分裂出4个细胞，繁殖能力旺盛，不断转化太阳能量，产生高能营养物质，并在增殖中释放出大量氧气。蛋白核小球藻的植物性蛋白质含量在50％以上，脂肪含量为6-7％，其氨基酸组成亦极为优良，含有维生素、纤维质、叶酸、核酸、钙、镁、铁、锌等营养元素。蛋白核小球藻能够促进DNA的合成，加强细胞的新陈代谢，增加细胞活力，促进细胞修复。蛋白核小球藻的绿藻生长因子能够活化巨噬细胞，增强巨噬细胞吞噬细菌与病毒的能力，清除皮肤等机体中的毒素。

螺旋藻属于蓝藻，是一类低等的原核生物：本身的蛋白质含量高达(60-70)％；特有的藻蓝蛋白能够提高淋巴细胞活性，增强人体免疫；富含异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸等氨基酸；富含维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B6、维生素B12、维生素E等维生素；富含人体所需的钙、磷、镁、铁、钠、锰、锌、钾、氯等矿物质；富含叶绿素a，是人类合成血红蛋白的直接原料。螺旋藻中的螺旋藻多糖含量高达干重的(14-16)％，螺旋藻多糖能够抑制机体内自由基氧化反应，降低脂质过氧化，减少组织脂褐质的形成，提高细胞活力，减缓细胞衰老。

蛋白核小球藻和螺旋藻本身含有众多护肤营养成分，而当这些微藻细胞呈活性状态时：一方面，能够提高自身所含护肤营养成分的品质；另一方面，能够源源不断地产出护肤营养成分，提高护肤液的功效，延长护肤液的作用周期；更重要的，活力旺盛的微藻细胞，能够更好地清除皮肤细菌、毒素，分解皮肤毛孔中的残留化妆品，有助于毛孔收缩，平复肌肤，显著增强护肤功效。

发明人经大量实验证明，蛋白核小球藻和螺旋藻之间具有很好的兼容性，每lmL活性微藻护肤液中，活性微藻细胞的个数可达10⁶以上，活性微藻细胞的密度大，护肤营养成分及其能够继续产出的护肤营养成分更加丰富，清除皮肤细菌、毒素、残留化妆品的能力更强。

本发明的目的二：提供一种上述的活性微藻护肤液的制备方法，所述微藻藻液的制备包括有以下步骤：

S1，分别扩大培殖蛋白核小球藻和螺旋藻，获得两种藻液；

S2，将两种藻液混合获得微藻藻液。

较佳的，步骤S1的扩大培殖所用的培养基溶液包括如下浓度的组分：2-6mg/L乙二胺四乙酸二钠、5-13mg/L柠檬酸、0.05-0.15mg/L FeSO₄·7H₂O、0.15-0.35g/L NaHCO₃、0.03-0.1g/LCaCl₂、0.05-0.2g/L MgSO₄·7H₂O、1-3.5g/L NaNO₃、0.05-0.15g/L K₂HPO₄、0.2-1g/L KH₂PO₄、1.5-2.5mg/L MnCl₂·4H₂O、0.02-0.05mg/L ZnSO₄·7H₂O、0.05-0.1mg/LCuSO₄·5H₂O、0.02-0.05mg/L Na₂MoO₄·2H₂O、2-4mg/L H₃BO₃。

通过采用上述方案，培养基溶液中的各组分能够为微藻提供营养元素，促进微藻的健康生长和快速繁殖，提高微藻的生命活性，进而提高营养修复液的功效。

较佳的，步骤S1的扩大培殖过程包括：选择和分离单个微藻细胞，将单个微藻细胞进行分级扩大培殖，每一级扩大培殖过程中，微藻细胞的数量≥10⁶个/mL时，进入下一级扩大培殖过程。

通过采用上述方案，大量实验证明，在微藻培养过程中，当微藻活性细胞的生物密度为≥10⁶个/mL时，较适合微藻的存活和继续更大的繁殖，以此作为分级扩大培养的标准，有利于提高微藻培养的效率和质量。

较佳的，步骤S1的扩大培殖过程包括：单个微藻细胞于15mL培养基溶液中培殖10-15天，获得15mL藻液→转接种到85mL培养基溶液中继续培殖10-15天，获得100mL藻液→转接种到0.9L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得1L藻液→转接种到4L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得5L藻液→转接种到13L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得18L藻液→转接种到782L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得800L藻液。

通过采用上述方案，经发明人实验证明，上述培养方式培殖获得的微藻的生物量适宜、微藻活性高、质量好，易于微藻培殖的产业化。

较佳的，步骤S1的扩大培殖过程中：向藻液里持续性通入净化空气，净化空气的压强为0.14-0.6Mpa；向藻液里间歇性通入CO₂气体，CO₂气体的压强为0.14-0.6Mpa，通气间隔3-5h，每次通20-50min。

通过采用上述方案，通入的气体不仅能够促进微藻细胞的生长繁殖，还能起到搅动藻液的作用，使得微藻在藻液中均匀分布，提高微藻生长繁殖的均匀性和一致性。

较佳的，步骤S1的扩大培殖过程中，光照强度为2300-2700lux，培殖温度为25-27℃。

通过采用上述方案，设置适宜的光照强度和培殖温度，能够进一步促进微藻的生长繁殖。

本发明的目的三：提供一种上述的活性微藻护肤液的应用：掺入常规护肤液中一同使用。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

1、本发明提供的活性微藻护肤液中，含有均呈活体状态的蛋白核小球藻和螺旋藻，能够提高自身所含护肤营养成分的品质，源源不断地产出护肤营养成分，更好地清除皮肤细菌、毒素，分解皮肤毛孔中的残留化妆品，有助于毛孔收缩，平复肌肤，显著增强护肤功效；

2、本发明提供的活性微藻护肤液中，蛋白核小球藻和螺旋藻之间具有良好的兼容性和共生性，活性微藻细胞的数量级可达10⁶个/mL，活性微藻细胞的密度大，护肤营养成分及其能够继续产出的护肤营养成分更加丰富，清除皮肤细菌、毒素、残留化妆品的能力更强。

具体实施方式

以下对本发明作进一步详细说明。

藻母来源

以下实施例中的藻母来源于中国科学院典型培养物保藏委员会淡水藻种库。

实施例1

一种活性微藻护肤液，制备方法包括有以下步骤：

S1，分别扩大培殖蛋白核小球藻和螺旋藻，获得三种藻液，其中，扩大培殖中，

两种藻液的扩大培殖过程均包括：显微镜下选择和分离单个微藻细胞→单个微藻细胞于15mL培养基溶液中培殖10天，获得15mL藻液→转接种到85mL培养基溶液中继续培殖10天，获得100mL藻液→转接种到0.9L培养基溶液中继续培殖10天，获得1L藻液→转接种到4L培养基溶液中继续培殖10天，获得5L藻液→转接种到13L培养基溶液中继续培殖10天，获得18L藻液→转接种到782L培养基溶液中继续培殖10天，获得800L藻液。上述每一级扩大培殖结束时，微藻活性细胞的数量均≥10⁶个/mL，最终获得的藻液中的微藻活性细胞的数量≥10⁶个/mL；

所用培养基溶液均包括：2mg/L乙二胺四乙酸二钠、5mg/L柠檬酸、0.05mg/LFeSO₄·7H₂O、0.15g/L NaHCO₃、0.03g/L CaCl₂、0.05g/L MgSO₄·7H₂O、1g/L NaNO₃、0.05g/L K₂HPO₄、0.2g/LKH₂PO₄、1.5mg/L MnCl₂·4H₂O、0.02mg/L ZnSO₄·7H₂O、0.05mg/L CuSO₄·5H₂O、0.02mg/LNa₂MoO₄·2H₂O、2mg/L H₃BO₃；

光照强度为2300lux，培殖温度为25℃；向藻液里持续性通入净化空气，净化空气的压强为0.14Mpa；向藻液里间歇性通入CO₂气体，CO₂气体的压强为0.14Mpa，通气间隔3h，每次通20min。

S2，将两种藻液混合获得微藻藻液，按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻55份和螺旋藻5份，添加量子水至微藻活性细胞的数量为10⁶个/mL获得活性微藻护肤液。

实施例2

与实施例1的区别在于：

步骤S1的扩大培殖中，

两种藻液的扩大培殖过程均包括：显微镜下选择和分离单个微藻细胞→单个微藻细胞于15mL培养基溶液中培殖12天，获得15mL藻液→转接种到85mL培养基溶液中继续培殖10天，获得100mL藻液→转接种到0.9L培养基溶液中继续培殖12天，获得1L藻液→转接种到4L培养基溶液中继续培殖12天，获得5L藻液→转接种到13L培养基溶液中继续培殖12天，获得18L藻液→转接种到782L培养基溶液中继续培殖12天，获得800L藻液。上述每一级扩大培殖结束时，微藻活性细胞的数量均≥10⁶个/mL，最终获得的藻液中的微藻活性细胞的数量≥10⁶个/mL；

扩大培殖中：光照强度为2500lux，培殖温度为26℃；向藻液里持续性通入净化空气，净化空气的压强为0.3Mpa；向藻液里间歇性通入CO₂气体，CO₂气体的压强为0.3Mpa，通气间隔4h，每次通35min。

实施例3

与实施例1的区别在于：

步骤S1的扩大培殖中，

两种藻液的扩大培殖过程均包括：显微镜下选择和分离单个微藻细胞→单个微藻细胞于15mL培养基溶液中培殖15天，获得15mL藻液→转接种到85mL培养基溶液中继续培殖15天，获得100mL藻液→转接种到0.9L培养基溶液中继续培殖15天，获得1L藻液→转接种到4L培养基溶液中继续培殖15天，获得5L藻液→转接种到13L培养基溶液中继续培殖15天，获得18L藻液→转接种到782L培养基溶液中继续培殖15天，获得800L藻液。上述每一级扩大培殖结束时，微藻活性细胞的数量均≥10⁶个/mL，最终获得的藻液中的微藻活性细胞的数量≥10⁶个/mL；

扩大培殖中：光照强度为2700lux，培殖温度为27℃；向藻液里持续性通入净化空气，净化空气的压强为0.6Mpa；向藻液里间歇性通入CO₂气体，CO₂气体的压强为0.14-0.6Mpa，通气间隔5h，每次通50min。

实施例4

与实施例2的区别在于，步骤S1中，

所用培养基溶液均包括：4mg/L乙二胺四乙酸二钠、9mg/L柠檬酸、0.1mg/LFeSO₄·7H₂O、0.25g/L NaHCO₃、0.07g/L CaCl₂、0.12g/L MgSO₄·7H₂O、2g/L NaNO₃、0.1g/LK₂HPO₄、0.6g/LKH₂PO₄、2mg/L MnCl₂·4H₂O、0.03mg/L ZnSO₄·7H₂O、0.07mg/L CuSO₄·5H₂O、0.03mg/LNa₂MoO₄·2H₂O、3mg/L H₃BO₃。

实施例5

与实施例2的区别在于，步骤S1中，

所用培养基溶液均包括：6mg/L乙二胺四乙酸二钠、13mg/L柠檬酸、0.15mg/LFeSO₄·7H₂O、0.35g/L NaHCO₃、0.1g/L CaCl₂、0.2g/L MgSO₄·7H₂O、3.5g/L NaNO₃、0.15g/LK₂HPO₄、1g/LKH₂PO₄、2.5mg/L MnCl₂·4H₂O、0.05mg/L ZnSO₄·7H₂O、0.1mg/L CuSO₄·5H₂O、0.05mg/LNa₂MoO₄·2H₂O、4mg/L H₃BO₃。

实施例6

与实施例2的区别在于，步骤S1中，

所用培养基溶液为无菌水。

实施例7

与实施例4的区别在于，步骤S2中，

按微藻细胞个体数量计，按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻70份和螺旋藻10份。

实施例8

与实施例4的区别在于，步骤S2中，

按微藻细胞个体数量计，按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻80份和螺旋藻20份。

实施例9

与实施例4的区别在于，步骤S2中，

按微藻细胞个体数量计，按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻90份和螺旋藻30份。

实施例10

与实施例4的区别在于，步骤S2中，

按微藻细胞个体数量计，按微藻细胞个体数量计，蛋白核小球藻95份和螺旋藻45份。

对比例1

市售普通的护肤液。

活性微藻护肤液中活性微藻细胞成活率及兼容性试验

将实施例1-10制得的10份活性微藻护肤液于室温避光环境下保存10天、1个月、2个月、3个月、6个月，镜检10份活性微藻护肤液，以镜检时微藻活性细胞数量与初始时微藻活性细胞数量之比计算微藻的成活率，镜检前摇匀，检测结果如表1所示。

表1活性微藻护肤液中活性微藻细胞成活率检测结果

由表1可以看出：

(1)实施例1-5和实施例7-10制备的活性微藻护肤液，6个月时，蛋白核小球藻和螺旋藻的成活率仍能保持在92％以上；其中，实施例8的活性微藻护肤液的成活率最高，6个月时，三种微藻的成活率均保持在96％以上，这说明，本发明的活性微藻护肤液中，蛋白核小球藻和螺旋藻均能长期保持生长活性，并且具有很好的兼容性和共生性，使得活性微藻护肤液拥有较长保质期；

(2)对比实施例2和实施例6，实施例6对应的微藻成活率具有大幅降低，6个月时，实施例6对应的蛋白核小球藻和螺旋藻的成活率分别降至81％和80％，说明，相比于采用无菌水，本发明提供的培养基溶液的组分配比合理，能够为微藻提供营养元素，促进微藻的健康生长和繁殖；对比实施例2、实施例4和实施例5，可以进一步看出，本发明提供的培养基的组分浓度对微藻的活性同样存在影响；

(3)对比实施例7-10，蛋白核小球藻和螺旋藻的个体数量之比对成活率具有一定的影响，当两种微藻的个体数量比为蛋白核小球藻80份和螺旋藻20份时，成活率较高，这说明，该比例的蛋白核小球藻和螺旋藻，能够更好的互利共生，更具兼容性和共生性。

活性微藻护肤液护肤功效性试验

选择试用志愿者1100人，随机均分为11组，11组志愿者分别对实施例1-10制得的10份活性微藻护肤液和对比例1中的市售普通护肤液进行试用。试用时间为2个月，每日早晚洁面后使用。得到护肤功效性评价如表2所示。

表2活性微藻护肤液护肤功效性试验结果

由表2可以看出：

(1)实施例1-10制备的活性微藻护肤液对皮肤无刺激性，而且，在平微、增弹、提亮肤色上的功效明显优于对比例1，其中，实施例8制备的活性微藻护肤液的评价反馈最佳，体现了本发明的活性微藻护肤液在平微、增弹、提亮肤色方面具有优势。这主要得益于蛋白核小球藻和螺旋藻活性高，能够清除皮肤细菌、毒素，分解皮肤毛孔中的残留化妆品，有助于毛孔收缩，平复肌肤，增强护肤功效；

(2)本发明制备活性微藻护肤液在平微、增弹、提亮肤色方面的功效于微藻的活性有关，微藻活性高，其护肤功效越明显。

另外，本发明的活性微藻护肤液可以与常规护肤品一同使用，或直接掺入常规护肤液中使用，与上述单独使用的功效相同，利用微藻的作用，起到平微、增弹、提亮肤色、消除痘印、淡斑等护肤功效。

上述具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (4)

1.一种活性微藻护肤液，其特征在于：包括微藻藻液，微藻藻液中包含两种呈活体状态的微藻，按微藻细胞个体数量计，所述微藻由蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）55-95份、螺旋藻（Spirulina sp.）5-45份组成；

所述微藻藻液的制备包括有以下步骤：

S1，分别扩大培殖蛋白核小球藻和螺旋藻，获得两种藻液；

S2，将两种藻液混合获得微藻藻液；

其中，

步骤S1的扩大培殖所用的培养基溶液包括如下浓度的组分：2-6mg/L乙二胺四乙酸二钠、5-13mg/L柠檬酸、0.05-0.15mg/L FeSO₄•7H₂O、0.15-0.35g/L NaHCO₃、0.03-0.1g/LCaCl₂、0.05-0.2g/L MgSO₄•7H₂O、1-3.5g/L NaNO₃、0.05-0.15g/L K₂HPO₄、0.2-1g/L KH₂PO₄、1.5-2.5mg/L MnCl₂•4H₂O、0.02-0.05mg/L ZnSO₄•7H₂O、0.05-0.1mg/L CuSO₄•5H₂O、0.02-0.05mg/L Na₂MoO₄•2H₂O、2-4mg/L H₃BO₃；

步骤S1的扩大培殖过程包括：选择和分离单个微藻细胞，将单个微藻细胞进行分级扩大培殖，每一级扩大培殖过程中，微藻细胞的数量≥10⁶个/mL时，进入下一级扩大培殖过程；

步骤S1的扩大培殖过程包括：单个微藻细胞于15mL培养基溶液中培殖10-15天，获得15mL藻液→转接种到85mL培养基溶液中继续培殖10-15天，获得100mL藻液→转接种到0.9L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得1L藻液→转接种到4L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得5L藻液→转接种到13L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得18L藻液→转接种到782L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得800L藻液；

步骤S1的扩大培殖过程中：向藻液里持续性通入净化空气，净化空气的压强为0.14-0.6Mpa；向藻液里间歇性通入CO₂气体，CO₂气体的压强为0.14-0.6Mpa，通气间隔3-5h，每次通20-50min；

步骤S1的扩大培殖过程中，光照强度为2300-2700lux，培殖温度为25-27℃。

2.根据权利要求1所述的活性微藻护肤液，其特征在于：按微藻细胞个体数量计，所述微藻包括有蛋白核小球藻70-90份和螺旋藻10-30份。

3.根据权利要求1所述的活性微藻护肤液，其特征在于：按微藻细胞个体数量计，所述微藻包括有蛋白核小球藻80份和螺旋藻20份。

4.一种权利要求1-3任一所述的活性微藻护肤液的非治疗目的的应用，其特征在于：与常规护肤品一同使用，或直接掺入常规护肤液中使用。