CN109475645A - 微rna组合物及其制备和使用方法 - Google Patents

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CN109475645A CN201780026347.5A CN201780026347A CN109475645A CN 109475645 A CN109475645 A CN 109475645A CN 201780026347 A CN201780026347 A CN 201780026347A CN 109475645 A CN109475645 A CN 109475645A
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Abstract

一种方法，包括向受试者施用包含分离的微RNA的组合物，所述微RNA具有选自下述的序列：miR‑19a‑3p(SEQ ID NO：1)；miR‑103a‑3p(SEQ ID NO：2)；miR‑106b‑5p(SEQ ID NO：3)；miR‑146a‑5p(SEQ ID NO：4)；miR‑223‑5p(SEQ ID NO：5)；miR‑4497(SEQ ID NO：6)；miR‑1303(SEQ ID NO：7)；miR‑619‑5p(SEQ ID NO：8)；miR‑1273f(SEQ ID NO：9)；miR‑7851‑3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。

Description

微RNA组合物及其制备和使用方法
技术领域
本公开一般性地涉及用于改善和/或恢复细胞功能的一个或多个方面的组合物和方法。更具体地，本公开涉及微RNA的预防和/或治疗用途。
背景技术
对于大多数慢性疾病而言，老化是一个重要的风险因素，并且是发达国家大多数病症和医疗保健支出的主要因素。与细胞衰老相关的细胞功能降低导致通常与老化的哺乳动物细胞相关的病症和功能障碍。细胞衰老的有效诱导剂是(epi)基因组应激，其可以由直接DNA损伤、功能障碍的端粒、破坏的染色质或强有丝分裂信号引起。此外，细胞衰老可引起至少部分是由衰老相关的分泌因子介导的慢性炎症。
存在对改善由于与细胞衰老相关的一种或多种机制而受到负面影响的细胞功能的组合物和方法的持续需求。此外，存在对改善受试者的细胞健康的组合物和方法的持续需求。
发明内容
本文公开了一种方法，该方法包括向受试者施用包含经分离的微RNA的组合物，所述微RNA具有选自下述的序列：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。
本文还公开了制备恢复的干细胞的方法，其包括i)获得包含成体干细胞的样品；ii)在具有选自下述序列的分离的微RNA存在下培养样品，以产生恢复的干细胞：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ IDNO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合；和iii)从样品中回收恢复的干细胞，其中与成体干细胞相比，所述恢复的干细胞的特征在于，对于选自下述的一种或多种基因，表达的变化为大约1.5倍：C-abl致癌基因-1非受体酪氨酸激酶；V-akt鼠胸腺瘤(thymona)病毒致癌基因同源物1；醛脱氢酶1家族，成员A3；共济失调毛细血管扩张突变；BMI1多梳环指癌基因；钙网蛋白(calrecticulin)；细胞周期蛋白A2；细胞周期蛋白B1；细胞周期蛋白D1；细胞周期蛋白E1；CD44分子，细胞分裂周期25同源物C；细胞周期蛋白依赖性激酶2；细胞周期蛋白依赖性激酶4；细胞周期蛋白依赖性激酶6；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1C；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2C；和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2D。
本文还公开了制备恢复的干细胞组合物的方法，其包括(i)获得包含成体干细胞的细胞样品；(ii)将含有核酸序列的载体构建体到成体干细胞中以产生恢复的干细胞，所述核酸序列用于表达具有选自下述序列的分离的微RNA：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合；和(iii)回收恢复的干细胞。
本文还公开了包含成体干细胞的药物制剂，其中所述成体干细胞包含含有与寡核苷酸可操作地连接的启动子元件的质粒，所述寡核苷酸用于表达具有选自下述序列的微RNA：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。
本文还公开了一种药物制剂，其包含选自下述的分离的微RNA：miR-19a-3p(SEQID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ IDNO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。
附图说明
图1是免疫表型细胞样品的一个方面的描绘。
图2是跨室联合培养(transwell coculture)装置的描绘。
图3是在不同干细胞群中表达的微RNA的三维外泌体谱(profile)。
具体实施方式
本文公开了在受试者中局部或全身增加本文所述类型的微RNA的量的方法。例如，本公开的方法可以包括向受试者施用包含一种或多种本文公开类型的微RNA的组合物。在另一个方面，本公开内容考虑一种方法，该方法包括向受试者中引入已经改变以表达本文公开的增加量的微RNA的细胞。在本公开的另一个方面中，一种方法包括向受试者施用经修饰以含有增加量的本文公开类型的微RNA的微泡(例如，外泌体)。在一个方面中，所述微泡的至少部分膜直接得自细胞。或者，所述微泡是合成的。
在本公开的其他方面中，一种方法包括向受试者施用用质粒载体转化的细胞，所述质粒载体提供本文公开类型的微RNA的诱导型或组成型表达。这些方法可以是治疗性的并且导致受试者正在经历的一种或多种不利医学病症受到治疗。在替代方案中，这些方法事实上可以是预防性的。
为了更容易理解本公开，首先在下面定义某些术语。贯穿整个说明书阐述了以下术语和其他术语的额外的定义。
微RNA：如本文中所用，术语“微RNA(miRNA)”是指转录后调节因子，其通常结合靶信使RNA转录物(mRNA)的三个主要非翻译区(3'UTR)中的互补序列，通常导致基因沉默。通常，miRNA是短核糖核酸(RNA)分子，例如长度为21或22个核苷酸或更短。术语“微RNA”和“miRNA”可互换使用。
微RNA模拟物：如本文中所用，是指能够进入RNAi途径并调节基因表达的合成非编码RNA。如本文中所用，“合成微RNA”是指除内源性微RNA之外的任何类型的RNA序列。微RNA模拟物模拟内源性微RNA的功能，并且可以被设计为成熟的双链分子或模拟前体(例如，微RNA原始转录物(pri-微RNA)或前-微RNA(pre-微RNA))。微RNA模拟物可以包含修饰的或未修饰的RNA、DNA、RNA-DNA杂交体或替代的核酸化学物质。
微泡：如本文中所用，术语“微泡”是指包含衍生自各种细胞类型的质膜片段的膜颗粒。通常，微泡具有约10nm至约5000nm(例如，约50nm至1500nm之间，约75nm至1500nm之间，约75nm至约1250nm，约50nm至1250nm，约30nm至1000nm，约50nm至1000nm，约100nm至1000nm，约50nm至750nm之间等)的直径(或在颗粒不是球状体的情况中的最大尺寸)。适用于本发明的微泡可以通过膜转化(membrane inversion)、胞吐作用、脱落、起泡和/或出芽源自细胞。取决于产生的方式(例如，膜转化、胞吐作用、脱落或出芽)，本文中考虑的微泡可表现出不同的表面/脂质特征。微泡的替代名称包括，但不限于，外泌体、核外颗粒体(ectosomses)、膜颗粒、外泌体样颗粒和凋亡小泡。
受试者：如本文中所用，术语“受试者”是指人或任何非人动物(例如，小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、猪、绵羊、马或灵长类动物)。人包括产前和产后形式。在许多方面，受试者是人类。受试者可以是患者，其是指呈现给医疗提供者用以诊断或治疗疾病的人。术语“受试者”在本文中与“个体”或“患者”可互换使用。受试者可能患有或易患某种疾病或病症，但可能会或可能不会表现出该疾病或病症的症状。
治疗：如本文中所用，是响应于由患者表现出或患者可能易感的疾病、病症或生理状况而进行的临床干预。治疗的目的包括减轻或预防症状，减缓或停止疾病、病症或状况的进展或恶化和/或缓解疾病、病症或状况。“治疗”是指治疗性治疗和预防性措施中的一种或两种。需要治疗的那些包括已经受疾病或病症或不期望的生理状况影响的那些以及其中要预防疾病或病症或不期望的生理状况的那些。
有效量：如本文中所用，是指足以产生有益或期望的生物学和/或临床结果的量。
表达载体：如本文中所用，是重组或合成产生的核酸构建体，其携带一系列特定的能够在宿主细胞中转录特定基因的核酸元件。通常，基因表达置于某些调节元件的控制下，例如组成型或诱导型启动子。
可操作地连接：如本文中所用，用于描述调节元件与基因或其编码区之间的连接。也就是说，基因表达通常置于某些调节元件的控制下，例如，但不限于，组成型或诱导型启动子，组织特异性调节元件和增强子。据称，一个基因或编码区与调节元件“可操作地连接”或“可操作地连接”或“可操作地相关”，这意味着该基因或编码区受该调节元件的控制或影响。
药学上可接受的：如本文中所用，是指对于暴露在所使用的剂量和浓度下的细胞或哺乳动物无毒的或者具有为本领域技术人员所确定的可接受毒性水平的载体、赋形剂或稳定剂。生理学上可接受的载体的非限制性实例是水性pH缓冲溶液。生理学上可接受的载体还可包含下列中的一种或多种：抗氧化剂，例如抗坏血酸，低分子量(小于约10个残基)的多肽，蛋白质，例如血清白蛋白，明胶，免疫球蛋白，亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮，氨基酸，碳水化合物例如葡萄糖，甘露糖或糊精，螯合剂例如EDTA，糖醇例如甘露醇或山梨糖醇，成盐抗衡离子例如钠，和非离子表面活性剂如Tween.TM.，聚乙二醇(PEG)，和Pluronics.TM.。
分离的：如本文中所用，术语“分离的”是指(1)与最初产生时(无论是在自然界中还是/或者在实验环境中)相关联的至少一些组分分离的，和/或(2)由人工生产、制备和/或制造的物质和/或实体。分离的物质和/或实体可以与至少约10％，约20％，约30％，约40％，约50％，约60％，约70％，约80％，约90％，约95％，约98％，约99％，基本上100％或100％的它们最初相关联的其他组分分离。在一些方面，经分离的试剂的纯度大于约80％，约85％，约90％，约91％，约92％，约93％，约94％，约95％，约96％，约97％，约98％，约99％，基本上100％或100％。如本文中所用，如果一种物质基本上不含其他组分，则该物质是“纯的”。如本文中所用，术语“分离的细胞”是指不包含在多细胞生物中的细胞。
在一个方面，用于本公开中的组合物包含一种或多种选自下述的微RNA：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ IDNO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。如本文中所用，术语微RNA序列的“功能变体”是指寡核苷酸序列，其与天然微RNA序列不同，但保留该微RNA的一种或多种功能特征(例如，特异性微RNA靶标抑制)。在一些方面中，一个微RNA序列的功能变体保留该微RNA的所有功能特征。在某些方面，一个微RNA的功能变体具有约5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100或更多个核碱基的区域上与该微RNA或其前体至少约60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％相同的核碱基序列，或者该功能变体在严格杂交条件下与该微RNA或其前体的互补序列杂交。因此，在某些方面中，功能变体的核碱基序列可能能够与该微RNA的一个或多个靶序列杂交。
在一些方面中，本文中公开的微RNA的功能变体包含至少约65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：1相同的序列同一性；或者至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：2的序列同一性；或者至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：3的序列同一性；或者至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：4的序列同一性；或者至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：5的序列同一性；或者至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：6的序列同一性；或者至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：7的序列同一性；或者至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：8的序列同一性；或者至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：9的序列同一性；或者至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％与SEQ ID NO：10的序列同一性。
在一些方面中，本文公开的微RNA的功能变体包含65％至约99％的与SEQ ID NO：1的序列同一性；或者65％至约99％的与SEQ ID NO：2的序列同一性；或者65％至约99％的与SEQ ID NO：3的序列同一性；或者65％至约99％的与SEQ ID NO：4的序列同一性；或者65％至约99％的与SEQ ID NO：5的序列同一性；或者65％至约99％的与SEQ ID NO：6的序列同一性；或者65％至约99％的与SEQ ID NO：7的序列同一性；或者65％至约99％的与SEQ ID NO：8的序列同一性；或者65％至约99％的与SEQ ID NO：9的序列同一性；或者65％至约99％的与SEQ ID NO：10的序列同一性。
在一个方面中，本文公开的任何微RNA在使用时是基本上纯的分离的分子。本文中基本上纯的是指当微RNA是在样品中总物质的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，75％，80％，85％或超过90％，95％或99％重量时的微RNA。因此，例如，化学合成的，通过重组技术生产的，或通过已知纯化技术分离的微RNA分子通常基本上不含其天然相关联的组分。因此，例如，通过从天然来源提取；通过表达编码微RNA分子的重组核酸分子；或通过化学合成，可以获得基本上纯的微RNA分子。
在一个方面中，本公开的第一方法包括(i)从受试者获得干细胞；(ii)将获得的干细胞与本文中公开类型的微RNA结合以形成恢复的细胞。本公开的方法可以进一步包括将恢复的细胞引入受试者。
在本公开的一个方面中，干细胞得自受试者。在一些方面中，受试者被鉴定为具有与不良医学状况的发展相关的一种或多种风险因素。在另一方面，受试者未被诊断患有医学状况和/或尚未被鉴定为具有与医学状况的发展相关的一种或多种风险因素。可以预期的是，本文中公开的方法可用于治疗具有先前或当前正在使用其他疗法的医学状况的受试者。可以进一步预期的是，在一个方面中，受试者已经经历或正在经历一种或多种针对与使用本文中公开的组合物和方法治疗受试者的医学状况无关的医学状况的治疗。在一个方面中，受试者具有一种或多种与年龄相关的医学状况。
在本方面的一个方面中，给受试者施用有效量的动员剂。本文中，“动员剂”或“造血干细胞或祖细胞的动员剂”(可互换使用)是指任何物质，无论其是合成的有机小分子，天然衍生的有机小分子，多肽，如生长因子或集落刺激因子或其活性片段或模拟物，核酸，碳水化合物，抗体，或任何其他用于增强干细胞从骨髓迁移到外周血中的试剂。这种“动员剂”可以增加外周血中干细胞(例如，造血干细胞或造血祖细胞/前体细胞)的数量，因此允许更容易获得的干细胞来源用于本文公开的方法中。可以使用任何适于增加受试者中可用于收获的干细胞数量并且与本公开的其他方面相容的动员剂。在一个方面中，所述动员剂是细胞因子，例如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。适用于在本公开中使用的动员剂的商业实例是(非格司亭)，其是用于治疗中性粒细胞减少症的处方药，其可从Amgen商购获得。适用于在本公开中使用的动员剂的另一个实例是重组甲硫氨酰人干细胞因子，其作为从Amgen商购可得。适用于在本公开中使用的动员剂的另一个实例是PLERIXAFOR，其是CXCR4趋化因子受体的抑制剂并且阻断其同源配体，基质细胞衍生因子-1α(SCF-1α)的结合并且是作为来自Genzyme的商购可得的。
动员剂的有效量可以由普通技术人员根据最佳医学实践并考虑多种因素，包括例如但不限于，受试者的一般健康状况和体重来确定。
在施用动员剂之后，并且在适当的时间段过去之后；可以从受试者收获细胞样品。可以改变动员剂施用于受试者和收获细胞样品之间的时间段以满足一个或多个用户和/或过程目标。在一个方面中，动员剂的施用和细胞样品的收获之间的时间段可以为约24小时至约10天，或者约48小时至约7天，或者约3天至约5天。
如本领域普通技术人员所知，已经在各种器官和组织中鉴定出干细胞，包括脑、骨髓、外周血、血管、骨骼肌、皮肤、牙齿、心脏、肠、肝、卵巢上皮和睾丸。在本公开的范围内，使用包括从已知为干细胞来源的任何组织获得的干细胞的细胞样品进行本方法的各个方面。因此，在一个方面中的本公开考虑使用适合于干细胞来源的方法从任何组织中分离干细胞。因此，在一些方面中，本公开的方法包括从未施用本文公开类型的动员剂的受试者获得干细胞。
在一个方面中，使用任何合适的方法从受试者收获细胞样品，例如，使用体外疗法如血浆分离置换法(apheresis)。血浆分离置换法是一种用于仅收集受试者血液的特定部分的方法。其基于离心或快速旋转血液起作用。为受试者的血液建立通路并允许连接到血浆分离置换装置。该仪器使用小型泵移动血液和流体通过该系统。一个泵从导管的一个臂或侧面抽取血液并将其引导到离心机，在那里血液被分离成红细胞、白细胞和血浆层。一部分白细胞层(包括干细胞)和少量的血浆和红细胞被转移到收集袋中。其余的血液在导管的另一个臂或第二侧中返回到受试者。在这样的方面中，使用位于受试者的每个臂中的静脉中的静脉内针来收获细胞样品。可以使血液从第一静脉移除，通过分离出感兴趣的细胞样品的体外回路，并可将剩余的材料返回到第二静脉。
在一个方面中，直接从骨髓收获细胞样品。例如，可以从受试者的髂嵴收获细胞样品。在这样的方面中，用于获得细胞样品的骨髓抽吸可涉及在进行标准预防措施(例如皮肤消毒和施用局部麻醉剂)之后定位受试者的髂后嵴的医疗服务提供者。具有就位的管心针的合适的针可以缓慢地前进穿过指向髂前上棘的皮肤和皮下组织。在到达髂后嵴时，该针可以穿过该区域，直到达到足够的深度。一旦针就位，可以移除管心针，连接注射器，并进行抽吸。
在一个方面中，进行多次干细胞收集(例如，骨髓抽吸)以获得细胞样品中的一些使用者和/或方法所需数量的细胞。例如，收集的细胞数量范围可以是1X 106–1.0X 109个细胞/kg受试者体重，或者约2X 106–1.0X 108个细胞/kg受试者体重，或者约5X 106–1.0X108个细胞/kg受试者体重。如本文中所公开的收获的细胞样品可以在本文公开的方法中使用而无需进一步处理。或者，可以使用与本文中公开的组合物和方法相容的任何方法进一步处理如本文中所公开的收获的细胞样品。或者，如本文中所公开的收获的细胞样品可以在用于本文中所公开的方法和治疗之前储存一段时间。细胞样品的储存可以包括，例如，在生物相容性的溶液中低温保藏细胞样品，以在储存期间稳定该样品。“生物相容性的溶液”是指将细胞样品悬浮于其中以用于本文公开的细胞恢复方法或用于任何其他后续用途的溶液。这种生物相容性的溶液可以包括盐水，并且可以进一步包含其他成分，如防腐剂、抗微生物剂等。
在一个方面中，所述细胞样品包含成体干细胞和/或成体干细胞材料，其是指既非胚胎起源也不是来源于胚胎或胚胎组织的干细胞或干细胞材料。在一个方面中，所述细胞样品包含胚胎起源和/或源自胚胎或胚胎组织的干细胞和/或干细胞材料。
在一个方面中，如本文中所公开的收获的细胞样品在用于本文公开的方法之前储存超过约24小时。或者，如本文中所公开的收获的细胞样品在用于本文公开的方法之前储存超过1小时至约20年的时间段。或者，如本文中所公开的收获的细胞样品的储存可以持续约10天至约15年，或者约30天至约10年，或者可选地约30天至约5年的时间段。
如普通技术人员将理解的，所收获的细胞样品包含异质细胞群。本文公开的方法的一个方面包括标识和定量细胞样品中存在的细胞的数量和类型。可以使用适合于表征在细胞样品中存在的细胞的数量和类型的任何方法。在一个方面中，细胞样品的特征在于免疫表型分型。本文中，免疫表型分析是指分析异质细胞群，目的是标识样品中不同群体的存在和比例。使用抗体通过检测由这些细胞表达的特异性抗原(称为标志物)来标识细胞。在一方面中，所述细胞样品通过使用诸如流式细胞术的技术进行免疫表型分型来表征。在替代方面中，存在于细胞样品中的各种细胞类型的表征可以使用任何合适的方法进行，例如逆转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)或免疫细胞化学。
在一个方面中，基于一种或多种细胞表面标志物的存在或不存在来鉴定细胞样品中存在的细胞群或细胞类型。用于鉴定细胞样品200中不同细胞群(例如，细胞类型)的流式细胞术方案的一个方面示于图1中。参考图1，细胞样品210经受流式细胞术。在一个方面中，样品210可以在第一阶段基于CD45的存在或不存在分选成造血细胞220和非造血细胞230。CD45，也已知为白细胞共同抗原(LCA)，T200，B220，Ly5和蛋白酪氨酸磷酸酶受体类型C(PTPRC)是白细胞特异性受体样蛋白酪氨酸磷酸酶家族的跨膜糖蛋白。它在所有有核造血细胞上表达，并且可以覆盖细胞表面积的最多10％。CD45作为T细胞和B细胞抗原受体信号传导的调节剂起作用，并且是细胞生长和细胞分化的调节剂。
在一个方面中，鉴定为非造血干细胞230的CD45-细胞可以基于CD105的存在或不存在来进一步表征。CD105，也已知为内皮糖蛋白，HHT1，ORW和SH-1是位于细胞表面的I型膜糖蛋白，并且是TGFβ受体复合物的组分。CD105可能在造血和血管生成中起作用。在一个方面中，CD45-和CD105+，240的细胞群的特征在于具有间充质干细胞和内皮祖细胞两者。
在一个方面中，被鉴定为CD45-和CD105+，240的细胞群可以进一步分选成间充质干细胞和内皮祖细胞。在一个方面中，间充质干细胞被鉴定为CD45-，CD105+，CD29+和CD44+，250。CD29，也已知为血小板GPIIa，整联蛋白1，和GP是与极晚期抗原受体相关的整联蛋白单元并且在细胞粘附中起作用。CD44，也已知为ECMRII，H-CAM，Pgp-1，HUTCH-1，Hermes抗原，吞噬糖蛋白I，细胞外基质受体III，GP90淋巴细胞归巢/粘附受体，和透明质酸盐受体在细胞粘附和迁移中起作用。在一个方面中，内皮祖细胞被鉴定为CD45-，CD105+和CD31+，260。CD31，也已知为PECAM-1，endoCAM，血小板内皮细胞粘附分子，和PECA-1是在人中通过PECAM1基因编码的在染色体17上发现的蛋白质。CD31被认为在细胞粘附、活化和迁移中起作用。
本公开的方法可以进一步包括鉴定CD45+细胞中存在的不同造血细胞类型，220。在一个方面中，基于是CD45+，CD34+和CD38-，该细胞的一个群体被鉴定为原始造血干细胞，270。在一个方面中，基于是CD45+，CD34+和CD38+，该细胞的一个群体被鉴定为造血祖细胞，280。CD34也已知为gp105-120，并且造血祖细胞抗原(HPCA-1)是在早期造血和血管组织中表达的单次跨膜唾液黏蛋白家族的成员。CD34被认为在细胞粘附中起作用。CD38，也已知为ADP-核糖基环化酶，T10，和环状ADP-核糖水解酶1是由CD38基因编码的多功能外核苷酸酶，其位于染色体4上。在一个方面中，该细胞群的至少一部分是CD45+和CD34-，290，并被鉴定为分化的造血细胞。在这样的方面中，所述分化的造血细胞，290，可以进一步定义为T淋巴细胞，300，或自然杀伤细胞，310。T-淋巴细胞可以表征为CD45+，CD34-和CD3+。CD3，也已知为T3，是蛋白质复合物，并且在T细胞和其他细胞类型之间的细胞粘附中起作用。天然杀伤细胞可以表征为CD45+，CD34-和CD56+。CD56也已知为Leu-19，NKH-1，和神经细胞粘附分子(NCAM)是血友病结合糖蛋白，其可以在细胞-细胞粘附，神经突起生长，突触可塑性以及学习和记忆中起作用。
在一个方面中，可以使用本文公开的方法表征细胞样品。这些表征可以导致细胞样品中细胞群的鉴定，所述细胞样品包括但不限于非造血细胞，间充质干细胞，内皮祖细胞，造血细胞，原始造血干细胞，造血祖细胞，分化的造血细胞，T-淋巴细胞，天然杀伤细胞或其组合。可以预见的是，本文所述的表面标志物代表用于鉴定细胞样品中存在的细胞群的一种方法。如普通技术人员将理解的，可以利用除本文中公开的标志物之外的许多标志物和标志物组合来鉴定和表征细胞样品中存在的细胞群。此外，细胞样品中存在的各种细胞群的鉴定可以在本文所述的范围内进行，可以包括确定是否存在额外的表面标志物，可以使用比本文中公开的更少的标志物，或者可以在更小范围进行，由此鉴定细胞样品中较少的细胞群。在一个方面中，方法包括排除细胞样品中存在的不同细胞群的鉴定。
在一个方面中，可以基于细胞样品中存在的衰老细胞和非衰老细胞的数量进一步表征细胞样品。在本文中，非衰老细胞是指保留多次分裂能力而不显示复制性衰老的细胞。在此，衰老细胞是指尽管具有持续存活力和代谢活性但具有长期丧失增殖能力的细胞。
可以使用多种指标来鉴定衰老细胞，所述指标包括例如增殖丧失，形态变化，端粒长度减少，S-β-GAL活性增加，衰老相关异染色质聚集(SAHF)的产生，衰老相关分泌因子(SASF)的产生增加，活性氧(ROS)的产生增加，DNA损伤增加，分子伴侣介导的自噬减少，或其组合。考虑所描述的各种指标的变化相对于建立为非衰老细胞的可比较细胞类型进行评估。或者，可以将细胞样品的特征与在相应的非衰老细胞中针对分析指标建立的文献值进行比较。
非衰老细胞的特征可在于其端粒的长度和细胞中存在的端粒酶活性水平。通过非限制性实例，存在于细胞样品中的非衰老细胞的特征可在于端粒长度大于或等于约4千个碱基，或者4.5千个碱基，或者5千个碱基。本领域普通技术人员将理解，表明非衰老细胞的端粒长度可以取决于细胞类型而变化。因此，对于特定细胞类型，可以通过常规实验确定非衰老细胞的端粒长度特征。
在一个方面中，本文中公开类型的细胞样品包含大于90％的非衰老细胞，或者大于91％的非衰老细胞，或者大于92％的非衰老细胞，或者大于93％的非衰老细胞，或者大于94％的非衰老细胞，或者大于95％的非衰老细胞，或者大于96％的非衰老细胞，或者大于97％的非衰老细胞，或者大于98％非衰老细胞，或者大于99％的非衰老细胞。非衰老细胞的百分比基于样品中存在的细胞总数计。在一个方面中，基于样品中存在的细胞总数计，细胞样品包含约90％的非衰老细胞至约99％的非衰老细胞。
在一些方面中，可以使用任何合适的方法鉴定细胞样品中存在的非衰老细胞。在这些方面中，可以使用与本公开内容相容的任何合适的方法将非衰老细胞与衰老细胞分离，以产生包含非衰老细胞，基本上由非衰老细胞组成或由非衰老细胞组成的细胞样品。可以预见的是，这些方法可以扩展到进一步定义具有存在或不存在特定细胞表面标志物的非衰老细胞群，并产生包含特定类型(例如，非衰老间充质干细胞，非衰老自然杀伤细胞)的非衰老细胞的细胞样品，基本上由特定类型(例如，非衰老间充质干细胞，非衰老自然杀伤细胞)的非衰老细胞组成的细胞样品或由特定类型(例如，非衰老间充质干细胞，非衰老自然杀伤细胞)的非衰老细胞组成的细胞样品。
在一个方面中，可以对细胞样品分析与细胞衰老相关的一种或多种基因和/或蛋白质的表达程度。可以使用本文中公开类型的恢复生物标志物蛋白质面板(panel)(RBPP)和/或恢复生物标志物基因表达面板(RBGEP)进行这种分析。
在一个方面中，RBPP包含多个抗体探针，用于与细胞老化和衰老相关的因子。例如，所述RBPP可包含大于5个抗体探针，或者大于10个抗体探针，或者可选地大于20个抗体探针。在一个方面中，所述RBPP包含10至15个抗体探针。适用于在本公开中使用的RBPP的实例是命名为RBPP-X1的蛋白质阵列面板，其包含针对表1中列出的蛋白质的一个或多个抗体探针：
表1
在一个方面中，所述RBGEP可包含大于5个基因探针，或者大于10个基因探针，或者可选地，大于20个基因探针。在一个方面中，所述RBGEP包含10至15个基因探针。在一些方面中，所述RBGEP包含针对与细胞周期或p53途径调节相关的因子，例如IFBP3，CSC25C，ABL1，CDKN2B，ALDH1A3，SIRT1，ING1，CITED2，CDKN1C或其组合的基因探针。所述RBGEP可以进一步包含针对与炎症过程的调节相关的因子，例如CDKN1A，IRF3，EGR1，IFNG，CDKN1B，NFKB1，SERPING2，IGFBP7，IRF7或其组合的基因探针。所述RBGEP可以进一步包含针对与DNA损伤相关过程的调节相关的因子，例如PCNA，TERT，TP53BP1或其组合的基因探针。所述RBGEP可以进一步包含针对与氧化应激相关的因子，例如PRKCD，SOD1，NOX4或其组合的基因探针。所述RBGEP可以进一步包含针对与细胞衰老相关的因子，例如CDKN2A，CDK6，TWIST，ATM，CCND1，ETS2，RBL2，BMI1，ETS1或其组合的基因探针。所述RBGEP可以进一步包含针对与MAPK途径相关的因子，例如HRAS，MAP2K3或其组合的基因探针。RBGEP可以进一步包含针对与细胞骨架功能相关的因子，例如VIM，PIK3CA，THBS1或其组合的基因探针。所述RBGEP可以进一步包含针对与p16效应物途径相关的因子，例如TBX3，TBX2或其组合的基因探针。所述RBGEP可以进一步包含针对与胰岛素信号传导相关的因子，例如IGFBP5的基因探针。所述RBGEP可以进一步包含针对与细胞粘附相关的因子，例如CDL3A1，CD44，TGFB1A，CDL1A1，TGFB1或其组合的基因探针。所述RBGEP可以进一步包含针对与p53效应物途径相关的因子的基因探针，例如E2F1，MYC或其组合。适用于在本公开中使用的RBGEP的一个实例，命名为RBGEP-X1，是包含对表2中列出的一种或多种蛋白质的cDNA的基因面板：
表2
在一个方面中，对细胞样品的至少一部分使用RBPP-X1阵列进行蛋白质阵列分析，使用RBGEP-X1阵列进行基因表达分析，或进行这两者。在可选方面中，对细胞样品的至少一部分使用任何合适的蛋白质和/或基因阵列进行蛋白质阵列分析，基因表达分析或这两者。
在一个方面中，细胞样品经历至少一种分析技术以表征细胞样品的质量。在本文中，细胞样品的“品质”是指用于表征样品的细胞健康的因子，并且包括诸如样品中存在的细胞的数量和类型的参数；样品中衰老细胞与非衰老细胞的比例；一组遗传和/或蛋白质生物标志物的表达程度；样品中细胞的平均端粒长度；样品中细胞的先天免疫功能的状态或其组合。端粒长度可使用任何合适的方法来确定，例如末端限制性片段(TRF)分析。可以使用任何合适的方法评估先天免疫功能，例如51Cr细胞毒性释放自然杀伤细胞测定。细胞样品品质可以是样品中的细胞改善和/或恢复细胞样品中细胞的一种或多种细胞功能的能力的评估。细胞样品品质可以是当经受本文中公开的组合物和方法时，样品中细胞表现出改善和/或恢复一种或多种细胞功能的能力的评估。
可以将细胞样品品质指定为1至10的数值，其中具有可恢复或可改善的细胞功能的样品具有10的值，并且其细胞功能不能显著改善和/或恢复的样品具有1的值。例如，以下每个因素在表征细胞样品的品质方面可能具有正面的重要性：相对长的端粒长度；中等水平的衰老促进基因和/或蛋白质的表达；和存在大于约90％的非衰老细胞。显示这些特征的接收器细胞样品可以被赋予10的样本品质值。
利用本文中公开的品质度量(例如，端粒长度，非衰老细胞的百分比)，本公开的一个方面包括评估细胞样品的品质和鉴定适用于在所公开的方法中的样品。例如，品质值小于3的细胞样品可能被认为不适合用于本公开的方法。应当理解，可以基于用于评估细胞样品品质的任何度量的数来指定品质值。因此，基于用于进行品质值指定的参数，与特定品质值相关联的特征可能不同。
在一些方面中，进一步处理已经经过本文所描述的一种或多种定性和定量表征的细胞样品，以提供一些用户和/或过程所需的含有预定的细胞类型和数量的样品。
在一个方面中，本公开的方法进一步包括将从受试者获得的干细胞与本文中公开类型的微RNA相结合。例如，获得的干细胞可以在本文公开类型的微RNA的存在下培养，使用的微量RNA的量为约1nM至约1000nM，或者约10nM至约500nM，或者可选地约30nM至约300nM。例如，获得的干细胞可以在适当的培养基中，在本文公开类型的微RNA的存在下，培养约24小时至约6周，或者约1周至约5周，或者可选地约2周至约4周的时间段。本文中，培养基，也已知为生长介质，是指含有适当营养物以支持细胞生长的液体或凝胶。合适的培养基可由普通技术人员根据本公开内容的益处来选择。获得的干细胞的培养可以在标准组织培养条件下进行，例如RPMI-1640(Sigma)与10％胎牛血清(Sigma)或STEMSPAN ACF(Stem CellTechnologies)。
在一个替代方面中，本公开的方法包括向干细胞中引入能够诱导或组成型表达本文公开类型的一种或多种微RNA的载体。例如，微RNA的可表达形式可位于载体上，例如质粒，粘粒，噬菌粒，病毒和衍生自病毒或细菌来源的其它载体。在一个方面中，本文公开类型的一种或多种微RNA位于载体上，所述载体还包含一种或多种体内表达元件，例如启动子元件，增强子元件和选择元件。在一个方面中，用于表达本文公开类型的微RNA的基因序列与载体的一种或多种元件，例如与启动子元件可操作地连接。将微RNA引入干细胞可以通过任何合适的用于将载体引入细胞(例如基因转移)的方法例如转染和转导进行。获得的干细胞一旦与本文公开类型的微RNA相结合(例如，通过培养或载体引入)就已经恢复并被命名为恢复细胞(RC)。
在一个方面中，本公开考虑利用本文公开的微RNA和/或RC作为用于向有此需要的受试者施用的组合物。在一个方面中，所述微RNA和/或RC可以是药物组合物的组分，所述药物组合物局部或全身性地施用于受试者。在一个方面中，本文公开类型的微RNA与载体，例如纳米颗粒、胶束、脂质体、囊泡(niosome)、微球、环糊精等结合使用。在一个方面中，这样的载体还包含一个或多个元件，以将载体(carrier)或运载体(vehicle)引导至受试者的特定细胞、组织或器官。
在一个方面中，将RC局部或全身施用于有此需要的受试者。本文公开的治疗方法通常称为细胞恢复，其中将从受试者中移除并使用本文的方法和组合物恢复的细胞返回受试者。在一个方面中，本公开考虑使用本文公开的方法和组合物处理从第一受试者移除的成体干细胞，并将经处理的细胞(即，RC)施用于第二受试者。该替代方面被称为过继性细胞修复疗法。还考虑在本公开的细胞恢复疗法和/或过继性细胞恢复疗法的另一个方面中，将RC引入到与提供该干细胞的受试者的实际年龄不同的受试者中。在此，RC和无细胞组合物统称为恢复剂(RAG)。
在一些方面中，基于各种因素选择RAG的合适给药途径，所述因素例如为医学状况的类型，基本病因，状况的严重程度等。合适的给药途径包括，但不限于，口服，静脉内，直肠，气雾剂，肠胃外，眼，肺，经粘膜，经皮，阴道，眼，鼻和局部给药。另外，仅举例来说，肠胃外给药包括肌内，皮下，静脉内，髓内注射，以及鞘内，直接心室内，腹膜内，淋巴管内和鼻内注射。
在一些方面中，配制RAG用于口服给药，例如，通过将活性剂(例如RC)与例如药学上可接受的载体或赋形剂组合。在多个方面，将RAG如无细胞组合物配制成口服剂型，其包括，仅举例来说，片剂，粉剂，丸剂，糖衣丸，胶囊，液体，凝胶，糖浆，酏剂，浆液，悬浮液等。
在其他方面中，局部施用RAG。局部给药对于治疗或预防由于损伤或手术引起的瘢痕形成特别有用。RAG可以配制成各种局部可施用的组合物，例如溶液，悬浮液，洗剂，凝胶，糊剂，药用棒，香脂，乳膏或软膏。这样的药物组合物任选地含有增溶剂，稳定剂，张力增强剂，缓冲剂和防腐剂。
在一些方面中，配制RAG用于经皮给药。经皮制剂可以使用经皮递送装置和经皮递送贴剂，并且可以是亲脂性乳液或缓冲的水溶液，溶解和/或分散在聚合物或粘合剂中。在多个方面，这种贴剂被构建用于连续、脉冲或按需递送药剂。在另外的方面中，RAG的经皮递送借助于离子电渗疗法贴剂等完成。在某些方面中，经皮贴剂提供RAG的受控递送。在特定方面中，通过使用速率控制膜或通过将化合物捕捉在聚合物基质或凝胶内来减慢吸收速率。在替代方面中，吸收增强剂用于增加吸收。吸收增强剂或载体包括可吸收的药学上可接受的溶剂，其有助于通过皮肤。例如，在一个方面中，经皮装置是绷带的形式，包括背衬构件，含有RAG的储库，任选地具有载体，任选的速率控制屏障，以在受控和预定的速率下经延长的时间段将化合物递送到宿主的皮肤，和将设备固定在皮肤上的工具。
在其他方面中，配制RAG用于通过吸入给药。适于通过吸入给药的多种形式包括，但不限于，气溶胶，雾或粉末。RAG以加压包装或喷雾器的气溶胶喷雾形式方便地递送，使用合适的喷射剂(例如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷，二氧化碳或其他合适的气体)。在特定的方面中，通过提供递送计量量的阀来确定加压气溶胶的计量加入单元。在某些方面中，配制用于吸入器或吹入器中的，例如，仅举例来说，明胶的胶囊和药筒，其包含RAG和合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
如上所述，考虑了用于治疗特定状况或递送至特定细胞、组织、器官等的其他施用途径。施用RAG的手段可包括，但不限于，输注。全身性地还可以包括，例如，通过泵，通过静脉内管线或通过推注。推注可包括皮下，肌肉内或腹膜内途径。
本文中所用的短语“全身给药”或“全身性给药”是指施用本公开的化合物、组合物、药物、或其他材料，使其进入受试者的全身，并因此进行代谢和其他类似过程，例如皮下给药。
在其他方面中，RAG通过例如但不限于注射，植入，移植或表皮的方式局部施用。例如，RAG可以在受试者的伤口部位附近施用，并且用于改善与伤口相关的症状或增加伤口愈合的速度。RAG的施用可以以与本文公开的组合物相容并且符合一个或多个用户和/或过程目标的任何方式进行。
在另一个方面中，可以配制RAG用于向受试者施用以改善受试者的一般健康。可以通过定量评估受试者的一个或多个生理或心理参数来鉴定这种改善。在替代方案中，可以通过对受试者的一个或多个生理或心理参数的定性评估来鉴定这种改善。
在一个替代方面中，施用了RAG的受试者可以施用另外的活性剂，如认为有益于治疗该医学状况。这些另外的活性剂可以与RAG的给药同时给药。其他活性剂的实例包括但不限于：(a)抗微生物剂，(b)类固醇(例如氢化可的松，曲安西龙)；(c)止痛药(例如阿司匹林，NSAID和局部麻醉剂)；(d)抗炎剂；(e)生长因子；(f)细胞因子；(g)激素；或(h)其组合。这些另外的活性剂也可以以治疗有效量存在。
用于与RAG一起施用的另外的活性剂的实例包括，但不限于，麻醉剂，催眠药，镇静剂和睡眠诱导剂，抗精神病药，抗抑郁药，抗过敏药，抗心绞痛药，抗关节炎药，止喘药，抗糖尿病药，止泻药，抗惊厥药，抗痛风药，抗组胺药，止痒药，催吐药，止吐药，抗痉挛药，食欲抑制药，神经活性物质，神经递质激动剂，拮抗剂，受体阻滞剂和再摄取调节剂，β-肾上腺素能受体阻滞剂，钙通道阻滞剂，双硫仑和双硫仑样药物，肌肉松弛剂，镇痛药，退热药，兴奋剂，抗胆碱酯酶剂，拟副交感神经药，激素，抗凝剂，抗血栓剂，溶栓剂，免疫球蛋白，免疫抑制剂，激素激动剂/拮抗剂，维生素，抗微生物剂，抗肿瘤药，抗酸药，消化剂，轻泻药，泻药，防腐剂，利尿剂，消毒剂，杀真菌剂，杀外寄生虫剂，抗寄生虫药，重金属，重金属拮抗剂，螯合剂，气体和蒸气，生物碱，盐，离子，自体有效物质，洋地黄，强心苷，抗心律失常药，抗高血压药，血管扩张剂，血管收缩剂，抗毒蕈碱药，神经节刺激剂，神经节阻滞剂，神经肌肉阻滞剂，肾上腺素能神经抑制剂，抗氧化剂，维生素，化妆品，抗炎药，伤口护理产品，抗血栓形成剂，抗肿瘤剂，抗血管生成剂，麻醉剂，抗原药，伤口愈合剂，植物提取物，生长因子，润肤剂，润湿剂，排斥/抗排斥药物，杀精子剂，护发素，抗细菌剂，抗真菌剂，抗病毒剂，抗生素，镇定剂，降胆固醇药，镇咳药，组胺阻断药，单胺氧化酶抑制剂或其组合。
适合与RAG一起使用的具体化合物包括但不限于，磺胺嘧啶银(silversulfadiazine)，制霉菌素(Nystatin)，制霉菌素/曲安奈德(triamcinolone)，杆菌肽(Bacitracin)，呋喃西林(nitrofurazone)，呋喃妥因(nitrofurantoin)，多粘菌素(例如粘菌素(Colistin)，莎梵亭(Surfactin)，多粘菌素E和多粘菌素B)，强力霉素(doxycycline)，抗菌肽(antimicrobial peptides)(例如天然和合成来源)，(即杆菌肽(Bacitracin)，多粘菌素B和新霉素(Neomycin))，(即杆菌肽(Bacitracin)和多粘菌素B)。另外的抗微生物剂包括局部抗微生物剂(即抗菌剂)，其实例包括银盐，碘酒，苯扎氯铵(benzalkonium chloride)，醇，过氧化氢，氯己定(chlorhexidine)，对乙酰氨基酚(acetaminophen)；盐酸阿芬太尼(AlfentanilHydrochloride)；氨基苯甲酸钾(Aminobenzoate Potassium)；氨基苯甲酸钠(Aminobenzoate Sodium)；阿尼多昔(Anidoxime)；阿尼利定(Anileridine)；盐酸阿尼洛泮(Anilopam Hydrochloride)；阿尼罗酸(Anirolac)；安替比林(Antipyrine)；阿司匹林；苯恶洛芬(Benoxaprofen)；盐酸苄达明(Benzydamine Hydrochloride)；盐酸比西发定(Bicifadine Hydrochloride)；盐酸布芬太尼(Brifentanil Hydrochloride)；马来酸溴朵林(Bromadoline Maleate)；溴芬酸钠(Bromfenac Sodium)；盐酸丁丙诺啡(BuprenorphineHydrochloride)；布他西丁(Butacetin)；布替西雷(Butixirate)；布托啡诺(Butorphanol)；酒石酸环丁甲二羟吗喃(Butorphanol tartrate)；酰胺咪嗪(Carbamazepine)；卡巴匹林钙(Carbaspirin calcium)；盐酸卡必芬(CarbipheneHydrochloride)；枸橼酸卡芬太尼(Carfentanil Citrate)；琥珀环丙法多(CiprefadolSuccinate)；西拉马多(Ciramadol)；盐酸西拉马多(Ciramadol Hydrochloride)；氯尼舍林(Clonixeril)；氯尼辛(Clonixin)；可待因；磷酸可待因；硫酸可待因；盐酸柯洛呋酮(Conorphone Hydrochloride)；环唑辛(Cyclazocine)；盐酸右奥沙屈(DexoxadrolHydrochloride)；右培美酸(Dexpemedolac)；地佐辛(Dezocine)；双氟尼酸(Diflunisal)；酒石酸二氢可待因(Dihydrocodeine Bitartrate)；二甲法登(Dimefadane)；安乃近(Dipyrone)；盐酸多匹可明(Doxpicominehydrochloride)；氨甲茚酮(Drinidene)；盐酸依那多林(Enadoline Hydrochloride)；依匹唑(Epirizole)；酒石酸麦角胺(ErgotamineTartrate)；盐酸依托沙秦(Ethoxazene Hydrochloride)；依托芬那酯(Etofenamate)；丁香酚(Eugenol)；非诺洛芬(Fenoprofen)；苯氧苯丙酸钙(Fenoprofen Calcium)；枸橼酸芬太尼(Fentanyl Citrate)；氟喹氨苯酯(Floctafenine)；氟苯柳(Flufenisal)；氟尼辛(Flunixin)；氟尼辛葡胺(Flunixin Meglumine)；马来酸氟吡啶(Flupirtine Maleate)；氟丙喹酮(Fluproquazone)；盐酸氟朵林(Fluradoline Hydrochloride)；氟比洛芬(Flurbiprofen)；盐酸氢吗啡酮(Hydromorphone Hydrochloride)；异丁芬酸(Ibufenac)；吲哚布洛芬(Indoprofen)；酮唑辛(Ketazocine)；酮啡诺(Ketorfanol)；酮咯酸氨丁三醇(Ketorolac Tromethamine)；盐酸来替米特(Letimide Hydrochloride)；左旋乙酰美沙酮(Levomethadyl Acetate)；盐酸左旋乙酰美沙酮；盐酸左南曲朵(LevonantradolHydrochloride)；酒石酸左啡烷(Levorphanol Tartrate)；盐酸洛非咪唑(LofemizoleHydrochloride)；草酸洛芬太尼(Lofentanil Oxalate)；洛西那朵(Lorcinadol)；氯诺昔康(Lomoxicam)；水杨酸镁(Magnesium Salicylate)；甲芬那酸(Mefenamic Acid)；盐酸美大麻坦(Menabitan Hydrochloride)；盐酸哌替啶(Meperidine Hydrochloride)；盐酸美普他酚(Meptazinol Hydrochloride)；盐酸美沙酮(Methadone Hydrochloride)；醋美沙朵(Methadyl Acetate)；甲氧夫啉(Methopholine)；甲氧异丁嗪(Methotrimeprazine)；醋酸美克法胺(Metkephamid Acetate)；盐酸米姆本(Mimbane Hydrochloride)；盐酸米芬太尼(Mirfentanil Hydrochloride)；吗啉那宗(Molinazone)；硫酸吗啡(Morphine Sulfate)；甲氧唑辛(Moxazocine)；盐酸纳比坦(Nabitan Hydrochloride)；盐酸纳布啡(NalbuphineHydrochloride)；盐酸纳美酮(Nalmexone Hydrochloride)；纳莫雷特(Namoxyrate)；盐酸南曲朵(Nantradol hydrochloride)；甲氧萘丙酸(Naproxen)；甲氧萘丙酸钠；甲氧萘丙醇(Naproxol)；盐酸奈福泮(Nefopam Hhydrochloride)；盐酸萘西利定(NexeridineHydrochloride)；盐酸诺美沙朵(Noracymethadol Hydrochloride)；盐酸奥芬太尼(OcfentHhydrochloride)；辛唑酰胺(Octazamide)；奥伐尼(Olvanil)；富马酸奥昔托隆(Oxetorone Fumarate)；羟考酮(Oxycodone)；盐酸氧可酮(Oxycodone Hydrochloride)；对苯二酸氧可酮(Oxycodone Terephthalate)；盐酸羟吗啡酮(OxymorphoneHydrochloride)；培美酸(Pemedolac)；戊吗酮(Pentamorphone)；喷他佐辛(Pentazocine)；盐酸镇痛新(Pentazocine Hydrochloride)；乳酸镇痛新(Pentazocine Lactate)；盐酸非那吡啶(Phenazopyridine Hydrochloride)；盐酸苯吡氨醇(PhenyramidolHydrochloride)；盐酸哌西那朵(Picenadol Hydrochloride)；匹那朵林(Pinadoline)；吡非尼酮(Pirfenidone)；吡罗昔康乙醇胺(Piroxicam olamine)；马来酸普拉多林(Pravadoline Maleate)；盐酸普罗利定(Prodilidine Hydrochloride)；盐酸普罗法朵(Pprofadol Hydrochloride)；富马酸哌丙吡胺(Propirarn Fumarate)；盐酸丙氧芬(Propoxyphene Hydrochloride)；萘磺酸丙氧芬(Propoxyphene Napsylate)；普罗沙唑(Proxazole)；枸橼酸普罗沙唑(Proxazole Citrate)；酒石酸普螺啡烷(ProxorphanTartrate)；盐酸吡咯苯丙酯(Pyrroliphene Hydrochloride)；盐酸瑞芬太尼(Remifentanil Hydrochloride)；水杨酸胆碱硫酸镁(Salcolex)；马来酸沙乙酰胺(Salethamide Maleate)；水杨酰胺(Salicylamide)；水杨酸葡胺(SalicylateMeglumine)；双水杨酯(Salsalate)；水杨酸钠(Sodium Salicylate)；甲磺酸螺朵林(Spiradoline Mesylate)；舒芬太尼(Sufentanil)；枸橼酸舒芬太尼(SufentanilCitrate)；他美辛(Talmetacin)；他尼氟酯(Talniflumate)；他洛沙酯(Talosalate)；琥珀酸他扎朵林(Tazadolene Succinate)；特丁非隆(Tebufelone)；四氢甲吲胺(Tetrydamine)；替呋酸钠(Tifurac Sodium)；盐酸替立定(Tilidine Hydrochloride)；硫平酸(Tiopinac)；甲磺酸托那佐辛(Tonazocine Mesylate)；盐酸曲马多(TramadolHydrochloride)；盐酸曲芬太尼(Trefentanil Hydrochloride)；三乙醇胺；盐酸维拉朵林(Veradoline Hydrochloride)；盐酸维立洛泮(Verilopam Hydrochloride)；伏拉佐辛(Volazocine)；甲磺酸佐尔啡诺(Xorphanol Mesylate)；盐酸赛拉嗪(XylazineHydrochloride)；甲磺酸泽来索兴(Zenazocine Mesylate)；佐美酸钠(ZomepiracSodium)；珠卡赛辛(Zucapsaicin)，Aflyzosin盐酸盐；阿利帕胺(Alipamide)；阿尔噻嗪(Althiazide)；氨喹新(Amiquinsin)盐酸盐；氨氯地平苯磺酸盐；氨氯地平马来酸盐；醋酸阿那立肽(Anaritide Acetate)；马来酸阿替丙嗪(Atiprosin Maleate)；贝磷地尔(Belfosdil)；贝米曲啶(Bemitradine)；甲磺苯达洛尔(Bendacalol Mesylate)；苄氟噻嗪；苯噻嗪；盐酸倍他洛尔(Betaxolol Hydrochloride)；硫酸苄甲胍(Bethanidine Sulfate)；盐酸贝凡洛尔(Bevantolol Hydrochloride)；盐酸二氯地尔(Biclodil Hydrochloride)；比索洛尔；富马酸比索洛尔；盐酸布新洛尔(Bucindolol Hydrochloride)；丁吡考胺(Bupicomide)；布噻嗪(Buthiazide)；坎沙曲(Candoxatril)；坎沙曲拉(Candoxatrilat)；卡托普利(Captopril)；卡维地洛(Carvedilol)；西罗普利(Ceronapril)；氯噻嗪钠(Chlorothiazide Sodium)；西氯他宁(Cicletanine)；西拉普利(Cilazapril)；可乐定(Clonidine)；盐酸可乐定；氯帕胺(Clopamide)；环戊噻嗪(Cyclopenthiazide)；环噻嗪(Cyclothiazide)；达罗地平(Darodipine)；硫酸异喹胍(Debrisoquin Sulfate)；盐酸地拉普利(Delapril Hydrochloride)；硫米齐特(Diapamide)；二氮嗪(Diazoxide)；盐酸地来洛尔(Dilevalol Hydrochloride)；苹果酸地尔硫卓(Diltiazem Malate)；地替吉仑(Ditekiren)；甲磺酸多沙唑嗪(Doxazosin Mesylate)；Eeadotril；马来酸依那普利(Enalapril Maleate)；依那普利(Enalaprilat)；依那吉仑(Enalkiren)；甲磺酸恩地拉嗪(Endralazine Mesylate)；依匹噻嗪(Epithiazide)；伊普沙坦(Eprosartan)；甲磺酸依普罗沙坦(Eprosartan Mesylate)；甲磺酸非诺多泮(Fenoldopam Mesylate)；甲磺酸黄酮地洛(Flavodilol Maleate)；氟地平(Flordipine)；氟司喹南(Flosequinan)；福辛普利钠(Fosinopril Sodium)；福辛普利拉(Fosinoprilat)；胍那苄(Guanabenz)；醋酸胍那苄(Guanabenz Acetate)；硫酸胍那克林(Guanacline Sulfate)；硫酸胍那决尔(GuanadrelSulfate)；胍西定(Guancydine)；单硫酸胍乙啶(Guanethidine Monosulfate)；硫酸胍乙啶(Guanethidine Sulfate)；盐酸胍法辛(Guanfacine Hydrochloride)；硫酸胍尼索喹(Guanisoquin Sulfate)；硫酸胍氯酚(Guanoclor Sulfate)；盐酸胍诺克汀(GuanoctineHydrochloride)；胍诺沙苄(Guanoxabenz)；硫酸胍生(Guanoxan Sulfate)；硫酸胍诺西芬(Guanoxyfen Sulfate)；盐酸肼屈嗪(Hydralazine Hydrochloride)；肼苯哒嗪(Hydralazine)Polistirex；氢氟噻嗪(Hydroflumethiazide)；茚达立酮(Indacrinone)；吲达帕胺(Indapamide)；盐酸吲哚普利(Indolaprif Hydrochloride)；吲哚拉明(Indoramin)；盐酸吲哚拉明；盐酸吲哚瑞酯(Indorenate Hydrochloride)；拉西地平(Lacidipine)；来尼喹新(Leniquinsin)；左色满卡林；赖诺普利(Lisinopril)；盐酸洛非西定(Lofexidine Hydrochloride)；氯沙坦钾；盐酸洛硫嗪(Losulazine Hydrochloride)；美布氨酯(Mebutamate)；盐酸美加明(Mecamylamine Hydrochloride)；美沙洛尔(Medroxalol)；盐酸美沙洛尔；美沙噻嗪(Methalthiazide)；甲氯噻嗪(Methyclothiazide)；甲基多巴(Methyldopa)；盐酸甲基多巴乙酯(MethyldopateHydrochloride)；美替洛尔(Metipranolol)；美托拉宗(Metolazone)；富马酸美托洛尔；琥珀酸美托洛尔；美替罗星(Metyrosine)；米诺地尔；马来酸莫那匹尔(Monatepil Maleate)；莫唑胺(Muzolimine)；奈必洛尔(Nebivolol)；尼群地平(Nitrendipine)；奥福宁(Ofornine)；盐酸帕吉林(Pargyline Hydrochloride)；帕佐昔特(Pazoxide)；盐酸培兰色林(Pelanserin Hydrochloride)；特丁胺培哚普利(Perindopril Erbumine)；盐酸酚苄明(Phenoxybenzamine Hydrochloride)；吡那地尔；匹伏普利(Pivopril)；泊利噻嗪(Polythiazide)；盐酸哌唑嗪(Prazosin Hydrochloride)；普米洛尔(Primidolol)；盐酸普齐地洛(Prizidilol Hydrochloride)；盐酸喹那普利(Quinapril Hydrochloride)；喹那普利特(Quinaprilat)；盐酸喹唑嗪(Quinazosin Hydrochloride)；盐酸喹洛雷(QuineloraneHydrochloride)；盐酸喹吡罗(Quinpirole Hydrochloride)；奎纽溴铵(QuinucliumBromide)；雷米普利(Ramipril)；萝芙碱(Rauwolfia Serpentina)；蛇根碱(Reserpine)；沙普立沙坦钾(Saprisartan Potassium)；醋酸肌丙抗增压素(Saralasin Acetate)；硝普钠(Sodium Nitroprusside)；盐酸磺苄心定(Sulfinalol Hydrochloride)；他索沙坦(Tasosartan)；盐酸替鲁地平(Teludipine Hydrochloride)；盐酸替莫普利(TemocaprilHydrochloride)；盐酸特拉唑嗪(Terazosin Hydrochloride)；特拉吉仑(Terlakiren)；噻胺唑啉(Tiamenidine)；盐酸噻胺唑啉(Tiamenidine Hydrochloride)；Tierynafen；替大麻酚(Tinabinol)；硫达唑嗪(Tiodazosin)；盐酸噻戊托辛(Tipentosin Hydrochloride)；三氯噻嗪(Trichlormethiazide)；盐酸三甲氧唑啉(Trimazosin Hydrochloride)；咪噻芬(Trimethaphan Camsylate)；盐酸曲莫沙明(Trimoxamine Hydrochloride)；曲帕胺(Tripamide)；希帕胺(Xipamide)；盐酸占吉仑(Zankiren Hydrochloride)；精氨酸佐芬普利拉(Zofenoprilat Arginine)；阿氯芬酸(Alclofenac)；双丙酸阿氯米松(AlclometasoneDipropionate)；丙酮缩二羟孕酮(Algestone Acetonide)；α淀粉酶(Alpha Amylase)；安西法尔(Amcinafal)；安西非特(Amcinafide)；氨芬酸钠(Amfenac Sodium)；盐酸氨普立糖(Amiprilose Hydrochloride)；阿那白滞素(Anakinra)；阿尼罗酸(Anirolac)；阿尼扎芬(Anitrazafen)；阿扎丙宗(Apazone)；巴柳氮二钠(Balsalazide Disodium)；苄达酸(Bendazac)；苯恶洛芬(Benoxaprofen)；盐酸苄达明；菠萝蛋白酶(Bromelains)；溴哌莫(Broperamole)；布地奈德(Budesonide)；卡布洛芬；环洛芬(Cicloprofen)；辛喷他宗(Cintazone)；克利洛芬(Cliprofen)；丙酸氯倍他索(Clobetasol Propionate)；氯倍他松(Clobetasone Butyrate)；氯苯吡咯酸(Clopirac)；丙酸氯硫卡松(CloticasonePropionate)；醋酸三氟米松(Cormethasone Acetate)；去氧可的松(Cortodoxone)；地夫可特(Deflazacort)；丙缩羟强龙(Desonide)；去羟米松(Desoximetasone)；二丙酸地塞米松；双氯芬酸钾；双氯芬酸钠；双醋二氟拉松(Diflorasone Diacetate)；二氟米酮钠(Diflumidone Sodium)；双氟尼酸(Diflunisal)；二氟泼尼酯(Difluprednate)；地弗他酮(Diftalone)；二甲基亚砜；羟西奈德(Drocinonide)；甲地松(Endrysone)；恩莫单抗(Enlimomab)；依诺利康钠(Enolicam sodium)；依匹唑；依托度酸(Etodolac)；依托芬那酯；联苯乙酸(Felbinac)；非那莫(Fenamole)；芬布芬(Fenbufen)；芬氯酸(Fenclofenac)；苯克洛酸(Fenclorac)；芬度柳(Fendosal)；苯吡恶二酮(Fenpipalone)；芬替酸(Fentiazac)；夫拉扎酮(Flazalone)；氟扎可特(Fluazacort)；氟芬那酸；氟咪唑(Flumizole)；醋酸氟尼缩松(Flunisolide Acetate)；氟尼辛(Flunixin)；氟尼辛葡胺；氟考丁酯(FluocortinButyl)；醋酸氟米龙(Fluorometholone Acetate)；氟喹宗(Fluquazone)；氟吡洛芬；氟瑞托芬(Fluretofen)；丙酸氟替卡松(Fluticasone Propionate)；呋喃洛芬(Furaprofen)；呋罗布芬(Furobufen)；哈西奈德(Halcinonide)；丙酸卤倍他索(Halobetasolpropionate)；醋酸卤泼尼松(Halopredone Acetate)；异丁芬酸(Ibufenac)；布洛芬；布洛芬铝；布洛芬吡啶甲醇(Ibuprofen Piconol)；伊洛达普(Ilonidap)；吲哚美辛(Indomethacin)；吲哚美辛钠；吲哚布洛芬(Indoprofen)；吲哚克索(Indoxole)；吲四唑(Intrazole)；醋酸异氟泼尼龙(Isoflupredone acetate)；伊索克酸(Isoxepac)；伊索昔康(Isoxicam)；酮洛芬(Ketoprofen)；盐酸洛非咪唑(Lofemizolehydrochloride)；氯诺昔康(Lornoxicam)；氯替泼诺碳酸乙酯(Loteprednol Etabonate)；甲氯灭酸钠(Meclofenamate Sodium)；甲氯灭酸(Meclofenamic Acid)；二丁酸甲氯松(Meclorisone Dibutyrate)；甲芬那酸(MefenamicAcid)；美沙拉秦；美西拉宗(Meseclazone)；磺庚甲泼尼龙(MethylprednisoloneSuleptanate)；Momiflumate；萘丁美酮(Nabumetone)；萘普生(Naproxen)；萘普生钠；萘普索(Naproxol)；尼马宗(Nimazone)；奥沙拉秦钠(Olsalazine Sodium)；奥古蛋白(Orgotein)；奥帕诺辛(Orpanoxin)；奥沙普秦(Oxaprozin)；羟布宗(Oxyphenbutazone)；盐酸瑞尼托林(Paranyline Hydrochloride)；戊聚硫钠(Pentosan Polysulfate Sodium)；甘油保泰松钠(Phenbutazone Sodium Glycerate)；吡非尼酮；吡罗昔康(Piroxicam)；肉桂酸吡罗昔康；吡罗昔康乙醇胺(Piroxicam Olamine)；吡洛芬(Pirprofen)；泼那扎特(Prednazate)；普立非酮(Prifelone)；普罗度酸(Prodolicacid)；普罗喹宗(Proquazone)；普罗沙唑(Proxazole)；枸橼酸普罗沙唑；利美索龙(Rimexolone)；氯马扎利(Romazarit)；柳胆来司(Salcolex)；沙那西定(Salnacedin)；双水杨酯(Salsalate)；血根氯铵；司克拉宗(Seclazone)；丝美辛(Sermetacin)；舒多昔康(Sudoxicam)；舒林酸(Sulindac)；舒洛芬(Suprofen)；他美辛(Talmetacin)；他尼氟酯(Talniflumate)；他洛柳酯(Talosalate)；特丁非隆(Tebufelone)；替尼达普(Tenidap)；替尼达普钠；替诺昔康(Tenoxicam)；替昔康(Tesicam)；苄叉异喹酮(Tesimide)；四氢甲吲胺(Tetrydamine)；硫平酸(Tiopinac)；替可的松匹伐酯(Tixocortol Pivalate)；托美丁(Tolmetin)；托美丁钠；三氯奈德(Triclonide)；三氟米酯(Triflumidate)；齐多美辛(Zidometacin)；佐美酸钠(ZomepiracSodium)或其组合。
尽管本文提供的组合物主要涉及适合于对人进行伦理施用的材料，但本领域技术人员将理解，这样的组合物通常适合施用于各种动物。为了使该组合物适合施用于各种动物，本文公开类型的适合施用于人的组合物的修饰(即，RAG)可以由受益于本公开内容可以用常规(如果有的话)实验来设计和执行这些修饰的普通技术的兽医药理学家来完成。考虑施用本公开的药物组合物的受试者包括，但不限于，人和其他灵长类动物；哺乳动物包括商业上相关的哺乳动物，如牛，猪，马和羊；伴侣动物，如猫和狗；和鸟类，包括商业相关的鸟类，如鸡，鸭，鹅和火鸡。
在一个方面中，配制RAG用于局部施用成形式，例如霜剂，洗剂，血清，粉末，软膏或滴剂。用于局部给药的RAG制剂还可含有药学上可接受的载体，保湿剂，油，脂肪，蜡，表面活性剂，增稠剂，抗氧化剂，粘度稳定剂，螯合剂，缓冲剂，防腐剂，香料，染料，低级链烷醇，润湿剂，润肤剂，分散剂，防晒剂如阻挡辐射的化合物或UV阻断剂，抗细菌剂，抗真菌剂，消毒剂，维生素，抗生素，抗痤疮剂，以及对局部组合物的活性没有显著不利影响的其他合适的材料或其组合。可用于包含恢复的细胞的组合物中的非限制性示例性药学上可接受的载体可包括水，水和水可混溶性溶剂的混合物，所述水可混溶性溶剂例如为低级链烷醇或植物油，和水溶性眼科学上可接受的无毒聚合物(例如，纤维素衍生物如甲基纤维素)，甘油，丙二醇，对羟基苯甲酸甲酯，藻酸盐，硬脂酸甘油酯，PEG-100硬脂酸酯，十六醇，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸丁酯，山梨糖醇，聚乙氧基脱水山梨醇单硬脂酸酯白凡士林三乙醇胺，鸸鹋油，芦荟提取物，羊毛脂，可可油，碱等，或其组合。在一个方面中，配制用于局部给药的RAG可以施用于包括面部、手和颈部的皮肤的一个或多个区域。
在一个方面中，本文公开的方法产生预防性，姑息性，治疗性的疗法或其组合。本文公开类型的方法和组合物可用于治疗与细胞功能和生活力降低有关的多种医学状况，例如包括神经障碍的与年龄相关的医学状况；自身免疫性疾病；传染病；与辐射过度暴露(慢性或急性)相关的癌症和疾病。
可以预见的是，本文公开的方法和组合物可以产生恢复的细胞，其具有增加的与改善的细胞健康相关的基因表达，伴随着降低的与不利细胞事件相关的基因表达。在一些方面中，本文公开的方法和组合物导致增加的与有利的细胞事件相关的基因表达。
例如，当与获得它们的成体干细胞相比时，本文公开的方法导致RC的表达模式的变化对于选自下述的一种或多种基因而言是约1.5倍：C-abl致癌基因-1非受体酪氨酸激酶；V-akt鼠胸腺瘤病毒致癌基因同源物1；醛脱氢酶1家族，成员A3；共济失调毛细血管扩张突变；BMI1多梳环指癌基因；钙网蛋白；细胞周期蛋白A2；细胞周期蛋白B1；细胞周期蛋白D1；细胞周期蛋白E1；CD44分子，细胞分裂周期25同源物C；细胞周期蛋白依赖性激酶2；细胞周期蛋白依赖性激酶4；细胞周期蛋白依赖性激酶6；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1C；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2C；和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2D。
在另一个方面中，RC的特征可在于如通过克隆形成分析测量的集落形成能力的增加等于或大于约5％或者可选地等于或大于约10％。
在另一个方面中，RC的特征可在于如通过天然杀伤细胞的数量测量的细胞毒性的增加等于或大于约5％，或者可选地等于或大于约10％。
在另一个方面中，RC的特征可在于如通过活化标志物CD25的表达的增加测量的用抗CD3和抗CD25单克隆抗体刺激后T细胞活化标志物的增加等于或大于约5％或者等于或大于约10％。
在另一个方面中，当与引入RAG之前的受试者的外周血髓细胞：淋巴比率相比时，向受试者施用本文公开类型的RAG可以导致外周血髓细胞：淋巴比率降低约0.5：1至约0.05：1，或者约0.25：1至约0.02：1或者约0.75：1至约0.1：1。淋巴谱系细胞包括T、B和自然杀伤(NK)细胞，而巨核细胞和红细胞(MegE)以及粒细胞和巨噬细胞(GM)属于髓系。外周血髓细胞：淋巴比率可以使用任何合适的方法来测定，例如CD33+对CD3+CD19细胞的血液表型分型。
在另一个方面中，当与引入RAG之前的受试者的外周血CD4+：CD8+T细胞比率相比时，向受试者施用本文公开类型的RAG可以导致外周血CD4+：CD8+T细胞比率增加约1：1至约3：1，或者约0.5：1至约1：1或者约0.75：1至约2：1。外周血CD4+/CD8+T细胞比率测量T辅助细胞与细胞毒性T细胞的比率。CD4+/CD8+比率的下降与老化有关，并且是免疫衰老的标志。
在另一个方面中，向受试者施用本文公开类型的RAG可以导致，当与引入RAG之前的受试者的外周血T细胞水平相比时，如通过CD3+细胞的量测量的外周血T细胞水平的增加等于或大于约5％，或者可选地等于或大于约10％。
在某些方面中，将治疗有效剂量的RAG递送至受试者。治疗有效剂量将使用多种因素(例如，受试者的体重)来确定，并且可以进一步修改，例如，基于医学状况的严重程度或阶段。可以预期的是，使用本文公开的组合物和方法观察到的细胞功能的改善将对细胞和/或组织和/或器官和/或器官系统和/或整个生物体的功能产生积极的生理作用。在一个方面中，细胞功能的改善产生治疗效果，其改善受试者正在经历的不利医学状况。
在一个方面中，可以随后监测已经施用本文公开类型的RAG的受试者一段时间。对受试者的监测可包括对受试者的一般健康和/或医学状况的定性和定量评估。在一些方面中，受试者可以被多次施用RAG。例如，已经施用第一RAG的受试者可能表现出一段时期该受试者的一般健康和/或医学状况的定量和/或定性改善。随后，受试者可能经历其一般健康和/或医学状况的一些下降，并且施用另一治疗有效量的第二RAG。考虑第一RAG的组成可与第二RAG的组成相同。或者，第一RAG的组成可以与第二RAG的组成不同。
在一些方面中，对受试者的评估包括基于本文公开的分析的测定(例如，自然杀伤测定，端粒长度，基因和蛋白质生物标志物阵列)。在这些方面中，受试者可以提供细胞样品和经如本文中所公开的评估的样品品质。在一些方面中，可以将在恢复后某些点处的细胞样本品质值与恢复前的该细胞样本品质值进行比较，并且该信息用于评估是否需要额外的治疗。例如，具有细胞样品恢复前品质值5的受试者可以在恢复过程之后最长约1年的时期具有细胞样品恢复后品质值9。受试者在1.5年后的恢复后细胞样本品质值可能已降至7，而在3年后，该值可能为5。在这种情况下，可以给受试者施用另一RAG。
实施例
提供以下实施例以说明本公开。这些实施例并非意在限制本公开的范围，并且不应如此来理解它们。
实施例1
通过将供体受试者的成体干细胞(即供体细胞)置于transwell装配件的上室中，同时将受体受试者的成体干细胞(即受体细胞)置于下室中来进行一系列transwell实验。参照图2，transwell培养物400包含具有可渗透表面的插入物410，其允许供体细胞在transwell的基底和/或顶端表面上摄取和分泌分子。transwell插入物410包含孔径为0.4μm的可渗透膜。将供体细胞样品420的至少一部分施加到transwell插入物410，同时将受体细胞样品430置于具有适当量的培养基的transwell培养物的下室内。
供体受试者的平均实际年龄为25岁，而受体受试者的平均实际年龄为61岁，因此将供体受试者的细胞称为幼稚细胞，将受体细胞称为成熟细胞。将在如本文中所述的幼稚细胞存在下在transwell中培养后的受体细胞称为异时细胞。向transwell培养物中加入外泌体生物发生的药理学抑制剂GW4869(3.5μM)或外泌体包装的抑制剂BCI-137(10μM)。BCI-137是一种细胞可透过的、无毒的二氧四氢喹喔啉化合物，其模拟尿苷并与Argonaute-2的miRNA结合域可逆地相互作用；而GW4869是一种细胞可透过的非竞争性的中性鞘磷脂酶抑制剂，其不影响酸性鞘磷脂酶活性。抑制剂在初始接种(第0天)时加入到transwell培养物中，并在第3天再次加入。
收集外泌体并定量以确定抑制剂对外泌体生产的影响，同时分析从外泌体提取的RNA以确定外泌体消耗和RNA消耗水平。结果列于表3中。
表3
SNORD68和SNORD95是小核仁RNA。结果还证明，BCI-137和GW4869均有效地耗尽了从异时培养物中收获的外泌体中的miRNA。抑制剂对细胞功能的影响的进一步分析通过测定总的细胞活力，CD34+细胞活力和CD34+细胞扩增程度来评估。结果表明，抑制剂GW4869的添加表现出对CD34+细胞有毒，而BCI-137对幼稚或成熟细胞健康没有影响。该结果表明，用BCI-137抑制增加了CD34+成熟细胞的分化潜能，但降低了CD34+异时细胞的分化。该结果表明，成熟的外泌体及其伴随的RNA对成熟细胞功能具有有害作用。此外，外泌体及其伴随的RNA涉及过继性细胞恢复疗法的机制，因为BCI-137的抑制阻断了恢复作用。
实施例2
将从幼稚细胞或异时细胞收获的外泌体加入成熟细胞(1千万)中，随后培养7天。表4报告了培养3天和7天后CD34+细胞的总血细胞、干细胞功能、细胞扩增和细胞活力的结果。
表4
结果表明，培养7天后培养物增加了对补充有幼稚或异时外泌体的老年等时培养物的克隆形成潜力。当与1000万个幼稚外泌体每1000万个成熟细胞的剂量相比，100万个幼稚外泌体每1000万个成熟细胞的剂量表现出具有改善的结果。而且在培养7天后，在所有补充有外泌体的样品中观察到增加的CD34+细胞的频率。结果还表明，在所有补充有幼稚外泌体的培养物中观察到增加的总细胞活力。数据表明，在没有transwell培养的情况下，过继性细胞恢复疗法是可能的。
实施例3
研究了可能负责影响细胞恢复的微RNA的身份。从五个受试者获得干细胞。受试者R1，R2和R3是年龄大于60岁的受体受试者。受试者D1和D2是在获得组合物的时候小于30岁的供体受试者。在用NEUPOGEN和标准方案动员后从受试者获得组合物。通过流式细胞术和利用标准方案的克隆形成测定法分析获得的组合物的品质。进行本文公开类型的Transwell实验，并将供体组合物置于transwell装配件的上室中，同时将受体组合物置于下室中，并在3天或7天分析该组合物。从外泌体中提取总RNA，纯化并转化成cDNA，使用可得自Qiagen的MIFINDER qPCR ARRAY探测84种miRNA。使用新鲜的干细胞培养物确认候选微RNA，并在幼稚、成熟和异时细胞中进一步在细胞内验证。
测定外泌体生产量和外泌体RNA含量，结果列于表5中。
表5
84种通常表达的微RNA的外泌体剖析在图2中呈现为所研究的不同群体之间的比较。该图显示了包装在老化细胞与年轻细胞中的外泌体微RNA的巨大差异。
结果还鉴定了第一组外泌体微RNA候选物，其作用可能影响过继性细胞恢复疗法的过程。具体地，miR-146a，miR-103a，miR-106a和miR-19a被确认为外泌体候选物，其在阵列的相对定量后显示出统计显著性的趋势。miR-19a在异时相与成熟干细胞群中显示出统计学显着性，其中p<0.05。表6提供了所鉴定的每种miR的总的和细胞内微RNA生产量的相对变化。
表6
参与促进过继性细胞恢复疗法的候选微RNA是miR-146a，miR-103a，miR-106a和miR-19a。使用CD34+细胞人核转染试剂盒(Lonza)和人CD34+细胞方案将候选微RNA的组合以60nM的总浓度核转染到成熟血细胞中，并且与siRNA载体对照相比，评估对CD34+干细胞活力和克隆形成的影响。此外，使用P3原代细胞4D-Nucleofector X试剂盒(Lonza)和人T细胞高效率方案将miR-103a，miR-106b和miR-19a的微RNA组合以90nM的总浓度核转染到成熟血细胞中，并与siRNA载体对照相比，评估对T细胞活化和细胞介导的细胞毒性的影响。表7列出了得自这些研究的数据。
表7
实施例4
参与促进所鉴定的过继性细胞恢复疗法的其他候选微RNA是miR-1303，miR-7851-3p，miR-223，miR-4497，miR-619-5p和miR-1273f。使用CD34+细胞人核转染试剂盒(Lonza)和人CD34+细胞方案将这些另外的候选微RNA的组合以60nM的总浓度核转染到成熟血细胞中，并且与siRNA载体对照相比，评估对CD34+克隆形成的影响。表8中列出了得自这些研究的数据。
表8
提供以下列举的方面作为非限制性实施例。
第一方面，其是包括向受试者施用包含分离的微RNA的组合物的方法，所述微RNA具有选自下述的序列：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。
第二方面，其是第一方面的方法，其中分离的微RNA选自与SEQ ID NO：1具有至少约65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：2具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：3具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：4具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：5具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：6具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：7具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：8具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：9具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：10具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；及其组合。
第三方面，其是第一至第二方面中任一方面的方法，其中分离的微RNA是模拟物，所述模拟物包含与SEQ ID NO：1具有至少约65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：2具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：3具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：4具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：5具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：6具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：7具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：8具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：9具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：10具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；及其组合。
第四方面，其是第一方面的方法，其中所述组合物包含miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；其功能变体；或其组合。
第五方面，其是第一方面的方法，其中所述组合物包含miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；其模拟物，其功能变体或其组合。
第六方面，其是第一至第五方面中任一方面的方法，其中所述组合物还包含载体。
第七方面是第六方面的方法，其中所述载体包括纳米颗粒，胶束，脂质体，囊泡，微球，环糊精或其组合。
第八方面，其是制备恢复的干细胞的方法，包括：i)获得包含成体干细胞的样品；ii)在具有选自下述序列的分离的微RNA存在下培养该样品，以产生恢复的干细胞：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQID NO：10)；其功能变体；及其组合；和iii)从样品中回收恢复的干细胞，其中与成体干细胞相比，所述恢复的干细胞的特征在于，对于选自下述的一种或多种基因，表达的变化为大约1.5倍：C-abl致癌基因-1非受体酪氨酸激酶；V-akt鼠胸腺瘤病毒致癌基因同源物1；醛脱氢酶1家族，成员A3；共济失调毛细血管扩张突变；BMI1多梳环指癌基因；钙网蛋白；细胞周期蛋白A2；细胞周期蛋白B1；细胞周期蛋白D1；细胞周期蛋白E1；CD44分子，细胞分裂周期25同源物C；细胞周期蛋白依赖性激酶2；细胞周期蛋白依赖性激酶4；细胞周期蛋白依赖性激酶6；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1C；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2C；和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2D。
第九方面是第八方面的方法，其还包括使修复的细胞与载体，赋形剂，稳定剂，抗氧化剂，多肽，蛋白质，亲水性聚合物，氨基酸，碳水化合物，螯合剂，糖醇成盐抗衡离子，非离子表面活性剂或其组合接触，以形成药物制剂。
第十方面，其是第八至第九方面的方法，其还包括将该药物制剂施用给有需要的受试者。
第十一方面，其是第十方面的方法，其中当与施用药物制剂之前的受试者的外周血髓细胞：淋巴比率相比时，受试者具有降低约0.5：1至约0.05：1的外周血髓细胞样：淋巴比率。
第十二方面，其是第十至第十一方面中任一方面的方法，其中当与施用该药物制剂之前的受试者的外周血CD4+：CD8+T细胞比率相比时，受试者具有增加约1：1至约3：1的外周血CD4+：CD8+T细胞比率。
第十三方面，其是制备恢复的干细胞组合物的方法，其包括(i)获得包含成体干细胞的细胞样品；(ii)将含有核酸序列的载体构建体到成体干细胞中以产生恢复的干细胞，所述核酸序列用于表达具有选自下述序列的分离的微RNA：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合；和(iii)回收恢复的干细胞。
第十四方面，其是第十三方面的方法，其中所述载体包含与微RNA可操作地连接的启动子序列。
第十五方面，其是第十三至第十四方面中任一方面的方法，其中恢复的干细胞组成型表达分离的微RNA。
第十六方面，其是第十三至第十四方面中任一方面的方法，其中恢复的干细胞诱导型表达分离的微RNA。
第十七方面，其是第十三方面至第十六方面中任一方面的方法，其还包括将恢复的干细胞施用给有需要的受试者。
第十八方面是包含成体干细胞的药物制剂，其中所述成体干细胞包含含有与寡核苷酸可操作地连接的启动子元件的质粒，所述寡核苷酸用于表达具有选自下述序列的微RNA：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。
第十九方面，其是包含选自下述的分离的微RNA的药物制剂：miR-19a-3p(SEQ IDNO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ IDNO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。
第二十方面，其是第十九方面的制剂，其中所述分离的微RNA包含miR-4497(SEQID NO：6)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；或其组合。
第二十一方面，其是第十八至第二十方面中任一方面的制剂，还包含载体，赋形剂，稳定剂，抗氧化剂，多肽，蛋白质，亲水性聚合物，氨基酸，碳水化合物，螯合剂，糖醇成盐抗衡离子，非离子表面活性剂或其组合，以形成药物制剂。
第二十二方面，其是包含第十八方面至第二十一方面中任一方面的制剂的试剂盒。
为了由本申请提交任何美国国家阶段的目的，本公开中提及的所有出版物和专利在此通过引用将其整体并入本文，以描述和公开在那些出版物中描述的可以结合本公开的方法使用的构造和方法。提供上面和全文中讨论的任何出版物和专利仅仅是为了它们在本申请的提交日之前的公开内容。本文中的任何内容均不应被解释为承认发明人无权借助于在先发明而将此公开提前。
除非另有说明，当公开或要求保护任何类型的一个范围时，例如碳原子数、摩尔比、温度等的范围，其意在分别公开或要求保护这样的范围可以合理地包含(包括其中包含的任何子范围)的每个可能的数字。此外，当公开或要求保护一个数值范围时，申请人意在分别反映这样一个范围可合理包含的每个可能的数字，申请人还意在公开一个范围，以反映并且可以与公开的任何和所有子范围以及其中包含的子范围的组合互换。因此，如果由于任何原因，申请人选择要求保护少于本公开的全面度，例如，以解释申请人在提交本申请时不知道的对比文件，申请人保留对任何此类组的任何个体成员进行限制或排除的权利，包括该组内的任何子范围或子范围的组合。
在美国专利商标局之前的任何申请中，提供本申请的摘要是为了满足37C.F.R.§1.72的要求和37C.F.R.§1.72(b)中所述的目的“使美国专利商标局和公众能够从粗略的检查中迅速确定技术公开的性质和要点。”因此，本申请的摘要并不意在用于解释权利要求的范围或限制本文公开的主题的范围。此外，本文可采用的任何标题也不旨在用于解释权利要求的范围或限制本文公开的主题的范围。使用过去时来描述否则表示为建设性或预言性的实施例并不旨在反映实际上已经实施了该建设性或预言性的实施例。

Claims (22)

1.一种方法，包括向受试者施用包含分离的微RNA的组合物，所述微RNA具有选自下述的序列：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ IDNO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。
2.根据权利要求1所述的方法，其中分离的微RNA选自与SEQ ID NO：1具有至少约65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：2具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ IDNO：3具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：4具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：5具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：6具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：7具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQID NO：8具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：9具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：10具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；及其组合。
3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其中分离的微RNA是模拟物，所述模拟物包含与SEQ ID NO：1具有至少约65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：2具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：3具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：4具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：5具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：6具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：7具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：8具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：9具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；与SEQ ID NO：10具有至少65％序列同一性的寡核苷酸；及其组合。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；其功能变体；或其组合。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；其模拟物，其功能变体或其组合。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述组合物还包含载体。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述载体包括纳米颗粒，胶束，脂质体，囊泡，微球，环糊精或其组合。
8.一种制备恢复的干细胞的方法，包括：
i)获得包含成体干细胞的样品；
ii)在具有选自下述序列的分离的微RNA存在下培养该样品，以产生恢复的干细胞：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合；和
iii)从样品中回收恢复的干细胞，其中与成体干细胞相比，所述恢复的干细胞的特征在于，对于选自下述的一种或多种基因，表达的变化为大约1.5倍：C-abl致癌基因-1非受体酪氨酸激酶；V-akt鼠胸腺瘤病毒致癌基因同源物1；醛脱氢酶1家族，成员A3；共济失调毛细血管扩张突变；BMI1多梳环指癌基因；钙网蛋白；细胞周期蛋白A2；细胞周期蛋白B1；细胞周期蛋白D1；细胞周期蛋白E1；CD44分子，细胞分裂周期25同源物C；细胞周期蛋白依赖性激酶2；细胞周期蛋白依赖性激酶4；细胞周期蛋白依赖性激酶6；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1C；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2C；和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2D。
9.根据权利要求8所述的方法，其还包括使修复的细胞与载体，赋形剂，稳定剂，抗氧化剂，多肽，蛋白质，亲水性聚合物，氨基酸，碳水化合物，螯合剂，糖醇成盐抗衡离子，非离子表面活性剂或其组合接触，以形成药物制剂。
10.根据权利要求8-9中任一项所述的方法，其还包括将该药物制剂施用给有需要的受试者。
11.根据权利要求10所述的方法，其中当与施用药物制剂之前的受试者的外周血髓细胞：淋巴比率相比时，受试者具有降低约0.5：1至约0.05：1的外周血髓细胞样：淋巴比率。
12.根据权利要求10-11中任一项所述的方法，其中当与施用该药物制剂之前的受试者的外周血CD4+：CD8+T细胞比率相比时，受试者具有增加约1：1至约3：1的外周血CD4+：CD8+T细胞比率。
13.一种制备恢复的干细胞组合物的方法，包括：
(i)获得包含成体干细胞的细胞样品；
(ii)将含有核酸序列的载体构建体引入到成体干细胞中以产生经恢复的干细胞，所述核酸序列用于表达具有选自下述序列的分离的微RNA：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合；和
(iii)回收恢复的干细胞。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述载体包含与微RNA可操作地连接的启动子序列。
15.根据权利要求13-14中任一项所述的方法，其中恢复的干细胞组成型表达分离的微RNA。
16.根据权利要求13-14中任一项所述的方法，其中恢复的干细胞诱导型表达分离的微RNA。
17.根据权利要求13-16中任一项所述的方法，其还包括将恢复的干细胞施用给有需要的受试者。
18.一种包含成体干细胞的药物制剂，其中所述成体干细胞包含含有与寡核苷酸可操作地连接的启动子元件的质粒，所述寡核苷酸用于表达具有选自下述序列的微RNA：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQID NO：10)；其功能变体；及其组合。
19.一种包含选自下述的分离的微RNA的药物制剂：miR-19a-3p(SEQ ID NO：1)；miR-103a-3p(SEQ ID NO：2)；miR-106b-5p(SEQ ID NO：3)；miR-146a-5p(SEQ ID NO：4)；miR-223-5p(SEQ ID NO：5)；miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-1303(SEQ ID NO：7)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-1273f(SEQ ID NO：9)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；及其组合。
20.根据权利要求19所述的制剂，其中所述分离的微RNA包含miR-4497(SEQ ID NO：6)；miR-619-5p(SEQ ID NO：8)；miR-7851-3p(SEQ ID NO：10)；其功能变体；或其组合。
21.根据权利要求18-20中任一项所述的制剂，其还包含载体，赋形剂，稳定剂，抗氧化剂，多肽，蛋白质，亲水性聚合物，氨基酸，碳水化合物，螯合剂，糖醇成盐抗衡离子，非离子表面活性剂或其组合，以形成药物制剂。
22.一种试剂盒，其包含权利要求18-21中任一项所述的制剂。
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