CN109452452A - 一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂及制备方法 - Google Patents

一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂，其技术要点是：所述添加剂原料所占质量百分比为：木醋液增殖培养基98%，植物乳杆菌菌液2%；本发明采用的木醋液的制备工艺提高了木醋液的纯度，同时有效降低了有害杂质；以木醋液和植物乳杆菌菌液为主要成分的添加剂促进了植物乳杆菌在肠道的快速定植和增殖，抑制肠道有害菌的生长，从而增强机体的抵抗力和抗病能力，二者协同增效，提高动物免疫力的性能优异。

Description

一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂及制备方法
技术领域
本发明涉及动物饲料添加剂领域，具体是涉及一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂及制备方法。
背景技术
动物在遭受疾病、断奶等外在或内在各种因素时，常造成免疫功能下降、肠道有益菌群数量会减少，有害菌群数量增多，从而出现抵抗力低、腹泻，最终导致生产性能下降。抗生素及化学添加剂的使用在一段时间内确实起到了明显的促生长效应，但其药物残留、耐药性等问题随之而来。
木醋液是一种经生物质碳化热解产生的伴生物质，是一种天然的植物素材。其中包含200多种有机物，如酸类、酚类以及矿物元素等。木醋液的制备方法很多，如碳化热解、蒸馏法、静置法等。不同质量的木醋液其用途也不同。如粗制木醋液可用于土壤的消毒剂、除臭剂、果蔬防虫防病等；而精制木醋液被广泛用于化妆品、食品、农业种植、畜牧养殖、化妆品等诸多领域。
在畜牧业生产中木醋液主要作为饲料添加剂使用，也取得了一些积极效果。木醋液中含有多种营养成分（有机酸、醇等），可以提高饲料的适口性，降低畜禽胃肠pH，促进肠道有益菌增殖，提高营养的消化率，改善生产性能和肉质性能。同时木醋液还有降低畜禽粪便中氨和臭味物质、改善养殖舍内空气环境的作用。木醋液可以提高畜禽的免疫性能，减少抗生素的使用。
然而，木醋液在畜牧生产中应用还不广泛，因为其制备和应用中还存在一些问题：（1）木醋液收集比较粗放，杂质多，质量难以保证；（2）粗木醋液提纯或蒸馏工艺还不完善，有害和难以吸收的物质难以彻底清除；（3）木醋液添加方法单一，即直接添加到饲料中；（4）木醋液与其他营养素联用效果不理想等。因此，如何在现有技术基础上制备安全木醋液产品是畜牧学需要解决的技术问题。
发明内容
为了弥补上述现有技术的不足，本发明的目的提出一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂及制备方法，其中木醋液的制备工艺提高了木醋液的纯度，同时有效降低了有害杂质；以木醋液和植物乳杆菌菌液为主要成分的添加剂促进了植物乳杆菌在肠道的快速定植和增殖，抑制肠道有害菌的生长，从而增强机体的抵抗力和抗病能力，二者协同增效，提高动物免疫力的性能优异。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂，其技术要点是：所述添加剂原料所占质量百分比为：木醋液增殖培养基98%，植物乳杆菌菌液2%；
所述提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂的制备方法为：
（1）配制MRS（乳酸细菌培养基） 基础培养基：采用1mol/L的HCl溶液和NaOH溶液将MRS基础培养基pH值调整在6.3-6.8之间，在121℃下高压灭菌20min、冷却至室温。
（2）制备木醋液增殖培养基：在MRS基础培养基中加入浓度为0.1%-0.3%（质量百分数）的精制木醋液，115.6℃高压灭菌20min；
（2）接种植物乳杆菌：在上述木醋液增殖培养基中按2%（质量百分数）的接种量接种活化的植物乳杆菌，37℃培养箱中恒温静置培养23-25h，所得黄褐色菌液即为木醋液菌液饲料添加剂；
所述精制木醋液的制备方法为：
（1）木棒的制备：以果木、柞木废枝、木屑、地板边角料的一种或几种为原料，放入烘干釜內，密闭绝氧，采用外加温进行排潮处理，加温温度为140~160℃，持续加温9~11小时，然后用机器粉碎，并烘干将水分降到10%以下，用成型设备将锯末制成直径4-6cm，长30-40cm木棒；
（2）粗木醋液的制备：将制备好的木棒放入干馏热解釜内，经四阶段干馏热解、三级冷却、气液分离、蒸馏制得粗木醋液；
所述四阶段干馏热解的具体方法为：第一阶段热解温度由常温均匀升温到155~170℃，升温时间9~12h；第二阶段热解温度由160℃左右均匀升温到260~280℃，升温时间为2~4h；第三阶段热解温度由270℃左右均匀升温到360~380℃，升温时间为3~5h；第四阶段热解温度由370℃左右均匀升温到500~800℃，升温时间为2~4h；根据温度传感器指示的釜内温度，当温度达到300℃时关闭进风口，缺氧燃烧。
所述三级冷却的具体方法为：将干馏热解所产生的气液混合物输送到三级冷却装置；一级冷却使气液混合物温度将降至360-380℃，冷却25~35秒；二级冷却使气液混合物温度降至190~220℃，冷却10~15秒；三级冷却使温度降至60-70℃，冷却15~20秒。
所述气液分离的具体方法为：将三级冷却产生的气、液输送到气液分离器，将温度降至30~40℃，10秒，打开底座的进风口，将气体送入储气罐，液体为焦油和醋液，实现气液分离；液体进入油液分离器；
所述蒸馏的具体方法为：.将气液分离器中分离出的液体，即油液（焦油和醋酸）输送蒸馏反应釜中，蒸馏温度60-70℃，经30秒，分离出木焦油和木醋液原液；其中釜内底部油状物为木焦油，上部为液态物质为木醋液原液，即为粗木醋液；蒸馏釜的压力控制在负压3左右；
（3）精制木醋液制备：将步骤（2）所得粗木醋液进行蒸馏、精馏、冷凝、过滤，得黄褐色液体，为精制木醋液；
所述蒸馏过程参数设置：温度为90℃~120℃，时间为50~80分钟，粗木醋液由液态转变为气态。
所述精馏过程参数设置：将气态物质输送入精馏器中。精馏器温度80℃~100℃，时间为50~80分钟。
所述冷凝过程参数设置：将上述精馏后的气态物质输送入冷凝器，温度30~40℃，10~15秒。气态物质变成液态物质。
所述过滤过程：液态物质经滤网和活性炭过滤。
所述精制木醋液理化指标见表1；
表1 精制木醋液理化指标
进一步的，所述木棒加温温度为150℃，持续加温10小时；
进一步的，所述植物乳杆菌的活化方法为：在无菌实验室，用灭菌后的接种针挑取试管中的菌种，迅速接入预先配置好的并冷却至室温的MRS液体培养基中，于37℃培养箱中恒温培养12h，然后用画线法将培养12h的植物乳杆菌菌液接种于盛有MRS固体培养基的培养皿上，37℃培养箱恒温培养24h，生化鉴定后，再挑取单个菌落接种于培养基中，37℃恒温培养12h，如此反复进行3次，活化菌种。
进一步的，所述木醋液菌液饲料添加剂质量技术指标见表2。
表2 木醋液菌液饲料添加剂理化指标
项目 pH 活菌数（CFU/mL） 乳酸（g/L）
数值 4-4.1 （4.5-4.6）×10<sup>9</sup> 20.36±0.18
本发明还提出了一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲添加剂的应用方法：将所述木醋液菌液饲料添加剂添加在全价饲料中，添加浓度为10 mL -30mL /kg，现喂现拌。
本发明的有益效果：
（1）本发明制备的木醋液是由林木植物的加工废弃物、废材（料）的并经生物质碳化热解制备的，在废弃物的再加工和综合利用上具有积极作用。
（2）本发明的木醋液菌液饲料添加剂由木醋液和植物乳杆菌菌液在一定条件下培养而成。木醋液为菌液生长提供酸性条件，促进了植物乳杆菌在肠道的快速定植和增殖，而植物乳杆菌代谢产生的乳酸和其他有机酸又能抑制肠道有害菌的生长，从而增强机体的抵抗力和抗病能力。两者协同增效，效果优于单独添加。
附图说明
图1为精制木醋酸制备流程图；
图2 静置和摇床培养状态下植物乳杆菌的生长曲线；
图3植物乳杆菌不同培养时间的pH变化曲线。
具体实施方式
实施例1
一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂，其技术要点是：所述添加剂原料所占质量百分比为：木醋液增殖培养基98%，植物乳杆菌菌液2%；
所述提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂的制备方法为：
（1）制备木醋液增殖培养基：在MRS基础培养基中加入浓度为0.2%（质量百分数）的精制木醋液，115.6℃高压灭菌20min，。
（2）接种植物乳杆菌：在上述木醋液增殖培养基中按2%（质量百分数）的接种量接种植物乳杆菌菌液，37℃培养箱中恒温静置培养23-25h，所得黄褐色菌液即为木醋液菌液饲料添加剂；植物乳杆菌购买于饲料市场，厂家为广州市微元生物科技有限公司。
所述MRS基础培养基采用1mol/L的HCl溶液和NaOH溶液控制pH值为6.5之间，在121℃下高压灭菌20min、冷却至室温。
所述精制木醋液的制备方法为：
（1）木棒的制备：以果木、柞木废枝、木屑、地板边角料的一种或几种为原料，放入烘干釜內，密闭绝氧，采用外加温进行排潮处理，加温温度为140~160℃，持续加温9~11小时，然后用机器粉碎，并烘干将水分降到10%以下，用成型设备将锯末制成直径4-6cm，长30-40cm木棒。优选加温温度为150℃，持续加温10小时；
（2）粗木醋液的制备：将制备好的木棒放入干馏热解釜内，经四阶段干馏热解、三级冷却、气液分离、蒸馏制得粗木醋液；
所述四阶段干馏热解的具体方法为：第一阶段热解温度由常温均匀升温到155~170℃，升温时间9~12h；第二阶段热解温度由160℃左右均匀升温到260~280℃，升温时间为2~4h；第三阶段热解温度由270℃左右均匀升温到360~380℃，升温时间为3~5h；第四阶段热解温度由370℃左右均匀升温到500~800℃，升温时间为2~4h；根据温度传感器指示的釜内温度，当温度达到300℃时关闭进风口，缺氧燃烧。
所述三级冷却的具体方法为：将干馏热解所产生的气液混合物输送到三级冷却装置；一级冷却使气液混合物温度将降至360-380℃，冷却25~35秒；二级冷却使气液混合物温度降至190~220℃，冷却10~15秒；三级冷却使温度降至60-70℃，冷却15~20秒。
所述气液分离的具体方法为：将三级冷却产生的气、液输送到气液分离器，将温度降至30~40℃，10秒，打开底座的进风口，将气体送入储气罐，液体为焦油和醋液，实现气液分离；液体进入油液分离器；
所述蒸馏的具体方法为：.将气液分离器中分离出的液体，即油液（焦油和醋酸）输送蒸馏反应釜中，蒸馏温度60-70℃，经30秒，分离出木焦油和木醋液原液；其中釜内底部油状物为木焦油，上部为液态物质为木醋液原液，即为粗木醋液；蒸馏釜的压力控制在负压3左右；
（3）精制木醋液制备：将步骤（2）所得粗木醋液进行蒸馏、精馏、冷凝、过滤，得黄褐色液体，为精制木醋液；
所述蒸馏过程参数设置：温度为90℃~120℃，时间为50~80分钟，粗木醋液由液态转变为气态。
所述精馏过程参数设置：将气态物质输送入精馏器中。精馏器温度80℃~100℃，时间为50~80分钟。
所述冷凝过程参数设置：将上述精馏后的气态物质输送入冷凝器，温度30~40℃，10~15秒。气态物质变成液态物质。
所述过滤过程：液态物质经滤网和活性炭过滤。
所述精制木醋液理化指标见表1；
所述植物乳杆菌的活化方法为：在无菌实验室，用灭菌后的接种针挑取试管中的菌种，迅速接入预先配置好的并冷却至室温的MRS液体培养基中，于37℃培养箱中恒温培养12h，然后用画线法将培养12h的植物乳杆菌菌液接种于盛有MRS固体培养基的培养皿上，37℃培养箱恒温培养24h，生化鉴定后，再挑取单个菌落接种于培养基中，37℃恒温培养12h，如此反复进行3次，活化菌种。
所述木醋液菌液饲料添加剂质量技术指标见表2。
所述木醋液菌液饲料的应用方法：将上述木醋液菌液饲料添加剂添加在全价饲料中，添加浓度为10 mL -30mL /kg，现喂现拌。
实施例2：
一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂，所述添加剂原料所占质量百分比为：木醋液增殖培养基98%，植物乳杆菌菌液2%；
所述提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂的制备方法为：
（1）制备木醋液增殖培养基：在MRS基础培养基中加入浓度为0.15%（质量百分数）的精制木醋液，115.6℃高压灭菌20min，。
（2）接种植物乳杆菌：在上述木醋液增殖培养基中按2%（质量百分数）的接种量接种植物乳杆菌菌液，37℃培养箱中恒温静置培养23h，所得黄褐色菌液即为木醋液菌液饲料添加剂；植物乳杆菌购买于饲料市场，厂家为广州市微元生物科技有限公司。
所述MRS基础培养基采用1mol/L的HCl溶液和NaOH溶液控制pH值为6.4，在121℃下高压灭菌20min、冷却至室温。
其精制木醋酸制备和植物乳杆菌活化方法同实施例1。
实施例3：
所述提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂的制备方法为：
（1）制备木醋液增殖培养基：在MRS基础培养基中加入浓度为0.25%（质量百分数）的精制木醋液，115.6℃高压灭菌20min，。
（2）接种植物乳杆菌：在上述木醋液增殖培养基中按2%（质量百分数）的接种量接种植物乳杆菌菌液，37℃培养箱中恒温静置培养 25h，所得黄褐色菌液即为木醋液菌液饲料添加剂；植物乳杆菌购买于饲料市场，厂家为广州市微元生物科技有限公司。
所述MRS基础培养基采用1mol/L的HCl溶液和NaOH溶液控制pH值为6.6，在121℃下高压灭菌20min、冷却至室温。
其精制木醋酸制备和植物乳杆菌活化方法同实施例1。
应用方法同实施例1。
实施例4
结合体外试验、动物饲养试验和微生物学检验，对本发明作进一步的描述：
1. 体外木醋液菌液饲料添加剂理化特性的测定
1.1 材料与方法
1.1.1 试验材料
本实验所用木醋液菌液饲料添加剂为实施例1所述。
1.1.2 试验方法
OD值和pH值测定方法：酶标仪和pH计分别测定木醋液菌液培养24h时菌液的OD610和pH值。
活菌数测定方法：采用平板计数法对木醋液菌液进行活菌计数。在无菌操作台下，取1mL菌液，放入装有9 mL经过灭菌的MRS液体培养基试管内，用振荡器将其彻底混匀，再从混匀后的试管中取出1 mL稀释液放入9 mL灭菌的MRS液体培养基中，彻底混匀，如此反复，将试管中的菌液按照10倍的比例进行稀释，直至将试管中菌液的浓度稀释到10-7，然后从高倍的稀释液起用微量移液枪分别取样50μL，滴入灭菌培养皿中，加入冷却至室温的MRS固体培养基并混匀，每个梯度设置三个重复，在37℃培养箱恒温培养24h后计数。
乳酸浓度测定：乳酸浓度的测定选用EDTA定钙法。取10mL木醋液菌液于试管中，向其加入碳酸钙，直至出现碳酸钙沉淀为止，以5000r/min离心5min，取1mL上清液，加30mL蒸馏水，用1mol/L的NaOH溶液调节pH值。然后加入钙黄绿素指示剂，0.05mol/L的EDTA·Na2进行滴定，直至溶液由黄绿色变成橙色，滴定完成。
1.2结果与分析
表3结果显示，本发明的木醋液菌液在体外培养24小时后的pH值显酸性，OD值和活菌数都较高，乳酸浓度为20.36±0.18 g/L。木醋液提供酸性环境有利于有益菌（植物乳杆菌）的增殖，在肠道中还能降低有害菌的数量，且植物乳杆菌代谢产生的乳酸和其他有机酸又能抑制肠道有害菌的生长，增强机体的抵抗力和抗病能力。
表3 木醋液菌液饲料添加剂理化指标
指标 pH OD<sub>610</sub>值 活菌数（CFU/mL） 乳酸浓度（g/L）
结果 4.05±0.01 1.66±0.02 4.58×10<sup>9</sup> 20.36±0.18
2. 木醋液菌液饲料添加剂对断奶仔猪生长性能、免疫性能的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 试验动物和基础日粮
选取日龄相近、健康状况良好、体重接近（9.41±0.23）kg的“杜×长×大”杂交仔猪共144头。本试验基础日粮是以玉米-豆粕型为主的全价饲料。
2.2.2 试验设计
采用单因素完全随机设计，选取日龄相近、健康状况良好、平均体重为（9.41±0.23）kg的“杜×长×大”杂交仔猪144头，随机分为4组，每组6个重复，每个重复6头猪。第1组为对照组（基础日粮+100mL MRS液体培养基）；第2组为木醋液组（基础日粮+0.2%木醋液+100mLMRS液体培养基）；第3组为植物乳杆菌组(基础日粮+100mL植物乳杆菌菌液)；第4组为木醋液菌液组（基础日粮+100mL木醋液菌液饲料添加剂）。本实验所用木醋液菌液饲料添加剂为实施例1所述。
2.2.3 指标测定方法
生长性能测定:：分别于试验期第1和28d早晨，逐头空腹称重，饲养期间每天记录采食量，计算各组的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。
腹泻率测定：试验期间，早上喂料前，观察并记录试验猪每天的腹泻发生情况，试验结束后计算各组的腹泻率，计算公式如下：
腹泻率(%)=试验期腹泻头次总数/（试验猪头数×试验天数）×100%。
免疫指标的测定：在试验期第28d，早晨喂料前，每个重复随机挑选仔猪2头，颈静脉采血5mL，静置30min，吸出血清并置于已编号的离心管中，4℃、3000r/min离心10min，分离血清。测定血清生长激素（GH）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、细胞因子-4（IL-4）、细胞因子-6（IL-6）。
2.2 结果与分析
2.2.1 木醋液菌液对断奶仔猪血清生产性能的影响
由表4可以看出，木醋液菌液组显著改善了断奶仔猪生产性能。与对照组相比，木醋液组显著提高了平均日增重和平均日采食量（P<0.05），并显著降低了断奶仔猪的腹泻率（P<0.05），改善了料肉比。
木醋液是一种富含有机酸和多种矿物元素的酸性液体，植物乳杆菌是一种重要的益生菌，与其他益生菌相比，植物乳杆菌能耐胆盐和较低的pH，顺利通过胃并能在肠道定植发挥益生作用。本发明制备的木醋液菌液不仅能够同时发挥木醋液和植物乳杆菌本身固有的促生长作用，而且还表现出一定的协同效应，改善动物的生长性能，降低腹泻率。
表4 木醋液-植物乳杆菌合生元对断奶仔猪生产性能的影响
处理 对照组 木醋液组 植物乳杆菌组 木醋液菌液组
平均日增重(g/d) 381.76±25.22 398.41±14.60 387.92±20.36 417.79±16.85*
平均日采食量(g/d) 665.35±22.86 682.10±25.32 667.11±20.76 708.80±16.11*
料重比F/G 1.74±0.05 1.71±0.07 1.72±0.13 1.70±0.08
腹泻率 (%) 8.23±0.45 2.17±0.15** 2.32±0.20** 1.60±0.16**
注： *表示与对照组差异显著（P<0.05）；**表示与对照组差异极显著（P<0.01）。下表同。
2.2.2木醋液菌液对断奶仔猪血清生长激素的影响
表5结果表明，断奶仔猪基础日粮中添加木醋液菌液血清GH的含量显著高于对照组、木醋液组和植物乳杆菌组（P<0.05）。GH是一种多肽类激素，它的促生长作用主要是通过合成代谢作用刺激机体组织的发育，促进体细胞的增殖和分化以及骨骼的生长。本发明的木醋液菌液促进了生长激素的分泌，效果优于单独添加。
表5 木醋液-植物乳杆菌合生元对断奶仔猪血清激素指标的影响
处理 对照组 木醋液组 植物乳杆菌组 木醋液菌液组
GH (ng/mL) 4.85±0.28 4.97±0.11 4.91±0.10 5.36±0.24*
2.2.3 木醋液菌液对断奶仔猪免疫性能的影响
表6表明，四个处理中木醋液组和木醋液菌液组IgA含量最高，显著高于对照组，其次是植物乳杆菌组。同时木醋液菌液组显著提高了血清IgG的含量（P<0.05），分别比对照组、木醋液组和植物乳杆菌组提高了15.73%、13.51%和15.21%（P<0.05）。
木醋液菌液组仔猪血清IL-4的含量显著高于对照组和木醋液组（P<0.05）。木醋液菌液也提高了血清IL-6含量。
本发明中的木醋液可以为植物乳杆菌提供酸性环境，促进有益菌的定植和增殖，进而提高动物机体吞噬细胞吞噬活性和增强肠粘膜淋巴组织的活化，增强机体肠道黏膜淋巴细胞生成sIgA、IgM和细胞因子的能力，从而提高机体免疫力。
表6 木醋液菌液对断奶仔猪血清免疫球蛋白和细胞因子的影响
处理 对照组 木醋液组 植物乳杆菌组 木醋液菌液组
IgA (g/L) 0.86±0.08 0.96±0.06* 0.94±0.02 0.96±0.02*
IgG (g/L) 8.71±0.53 8.88±0.77 8.75±0.59 10.08±0.32*
IL-4(pg/ml) 48.27±4.64 48.07±1.51 54.79±3.80 56.68±5.49*
IL-6(pg/ml) 98.39±6.97 105.13±5.63 101.93±5.43 102.51±3.54
3木醋液菌液饲料添加剂对断奶仔猪粪中菌群数量的影响
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
选取日龄相近、健康状况良好、体重约9.4kg的“杜×长×大”杂交仔猪108头。本试验基础日粮是以玉米-豆粕型为主的全价饲料。
3.1.2 试验设计
采用单因素完全随机设计，将108头仔猪随机分为3组，每组6个重复。第1组为对照组，在基础日粮加100mL MRS液体培养基；第2组为植物乳杆菌组，在基础日粮加100mL植物乳杆菌菌液；第3组为木醋液菌液组，在基础日粮中添加100mL木醋液菌液。试验期28天。本实验所用木醋液菌液饲料添加剂为实施例1所述。
3.1.3 粪中菌群测定
在试验期第28d早上，每个重复选2头健康仔猪，用无菌自封袋采集刚排出的新鲜粪便30g左右（观察跟踪仔猪，肛门处取粪，收集于灭菌自封袋中），将收集好的粪样保存于冰盒中，立即送入实验室进行测定。
粪样菌群计数方法：采用平板计数法。在无菌实验室，首先将灭菌试管中加入9mL灭菌生理盐水，取1g粪样加入试管中，用振荡器使其彻底混匀，再从混匀后的试管中取出1mL稀释液加入到盛有9 mL灭菌生理盐水的试管中混匀，如此反复，将试管中的稀释液按照10倍的比例进行稀释，直至将稀释液的浓度稀释至10-7。每个菌种选取10-4、10-5和10-6三个梯度，每个梯度设置三个重复，用微量移液枪分别从试管中吸取50μL稀释液，分别滴入已装入相应培养基并且冷却至室温的培养皿中，摇匀。沙门氏菌和大肠杆菌置于37℃培养箱恒温培养24h，双歧杆菌和乳酸菌于37℃厌氧培养箱培养48h。取长有30-300个菌落的平板进行计数，结果以log10cfu/g表示。
3.2 结果与分析
表7结果表明，与对照组和植物乳杆菌组相比，木醋液菌液组显著降低了粪中大肠杆菌和沙门氏菌的数量（P<0.05）。同时木醋液菌液组显著提高了粪中乳酸杆菌和双歧杆菌的数量（P<0.05），提高幅度高于植物乳杆菌组。
外源补充有机酸，可降低胃肠pH值，对于防止有害菌在胃肠道的增殖和抑制不良菌的入侵发挥着重要作用。本发明中的木醋液是一种富含有机酸的酸性液体，木醋液抑制肠道有害菌的生长，促进有益菌的繁殖。一方面，木醋液中的有机酸和酚类等成分能够使菌体细胞内的糖类、蛋白质和电解质等物质渗出，造成细胞代谢紊乱，最终导致菌体死亡，另一方面，进入肠道的植物乳杆菌在木醋液提供的酸性环境下，利用其提供的能量和养分大量生长，同时发酵产生大量乳酸和乙酸等杀菌成分，抑制致病菌生长。由此可见，木醋液-植物乳杆菌合生元起到了促进有益菌增殖，减少有害菌，调节肠道菌群平衡的作用。
表7 木醋液-植物乳杆菌合生元对断奶仔猪粪中菌群的影响
处理 对照组 植物乳杆菌组 木醋液菌液组
大肠杆菌(log<sub>10</sub>cfu/g) 7.61±0.50 7.16±0.36 6.42±0.22*
沙门氏菌(log<sub>10</sub>cfu/g) 7.37±0.35 7.15±0.23 7.01±0.46*
乳酸杆菌(log<sub>10</sub>cfu/g) 8.46±0.33 9.21±0.23* 9.28±0.37*
双歧杆菌(log<sub>10</sub>cfu/g) 8.81±0.27 9.19±0.16 9.41±0.53*
本发明的原理：
本发明中的木醋液是一种富含有机酸、醇等多种营养成分的酸性液体。植物乳杆菌是一种同型发酵乳酸菌。另一方面，木醋液可以为植物乳杆菌提供的酸性环境和养分，使其大量生长，背景发酵产生大量乳酸和乙酸等杀菌成分，抑制致病菌生长，提高免疫力。一方面，木醋液中的有机酸和酚类等成分能够使有害菌体细胞内的糖类、蛋白质和电解质等物质渗出，造成细胞代谢紊乱，会使有害菌菌体死亡。木醋液与植物乳杆菌两者可以协同增效，改善微生物菌群的数量，提高免疫性能。

Claims (5)

1.一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂及制备方法，其特征是：所述木醋液菌液饲料添加剂的原料所占质量百分比为：木醋液增殖培养基98%，植物乳杆菌菌液2%；
所述木醋液菌液饲料添加剂的制备方法，其特征是：包括以下步骤：
（1）配制MRS（乳酸细菌培养基） 基础培养基：采用1mol/L的HCl溶液和NaOH溶液将MRS基础培养基pH值调整在6.3-6.8之间，在121℃下高压灭菌20min、冷却至室温；
（2）制备木醋液增殖培养基：在MRS基础培养基中加入浓度为0.1%-0.3%（质量百分数）的精制木醋液，115.6℃高压灭菌20min；
（3）接种植物乳杆菌：在上述木醋液增殖培养基中按2%（质量百分数）的接种量接种活化的植物乳杆菌，37℃培养箱中恒温静置培养23-25h，所得黄褐色菌液即为木醋液菌液饲料添加剂；
所述精制木醋液的制备方法为：
a. 木棒的制备：以果木、柞木废枝、木屑、地板边角料的一种或几种为原料，放入烘干釜內，密闭绝氧，采用外加温进行排潮处理，加温温度为140~160℃，持续加温9~11小时，然后用机器粉碎，并烘干将水分降到10%以下，用成型设备将锯末制成直径4-6cm，长30-40cm木棒；
b. 粗木醋液的制备：将制备好的木棒放入干馏热解釜内，经四阶段干馏热解、三级冷却、气液分离、蒸馏制得粗木醋液；
所述四阶段干馏热解的具体方法为：第一阶段热解温度由常温均匀升温到155~170℃，升温时间9~12h；第二阶段热解温度由160℃左右均匀升温到260~280℃，升温时间为2~4h；第三阶段热解温度由270℃左右均匀升温到360~380℃，升温时间为3~5h；第四阶段热解温度由370℃左右均匀升温到500~800℃，升温时间为2~4h；根据温度传感器指示的釜内温度，当温度达到300℃时关闭进风口，缺氧燃烧；
所述三级冷却的具体方法为：将干馏热解所产生的气液混合物输送到三级冷却装置；一级冷却使气液混合物温度将降至360-380℃，冷却25~35秒；二级冷却使气液混合物温度降至190~220℃，冷却10~15秒；三级冷却使温度降至60-70℃，冷却15~20秒；
所述气液分离的具体方法为：将三级冷却产生的气、液输送到气液分离器，将温度降至30~40℃，10秒，打开底座的进风口，将气体送入储气罐，液体为焦油和醋液，实现气液分离；液体进入油液分离器；
所述蒸馏的具体方法为：.将气液分离器中分离出的液体，即油液（焦油和醋酸）输送蒸馏反应釜中，蒸馏温度60-70℃，经30秒，分离出木焦油和木醋液原液；其中釜内底部油状物为木焦油，上部为液态物质为木醋液原液，即为粗木醋液；蒸馏釜的压力控制在负压3左右；
c. 精制木醋液制备：将步骤b所得粗木醋液进行蒸馏、精馏、冷凝、过滤，得黄褐色液体，为精制木醋液；
所述蒸馏过程参数设置：温度为90℃~120℃，时间为50~80分钟，粗木醋液由液态转变为气态；
所述精馏过程参数设置：将气态物质输送入精馏器中，精馏器温度80℃~100℃，时间为50~80分钟；
所述冷凝过程参数设置：将上述精馏后的气态物质输送入冷凝器，温度30~40℃，10~15秒，
气态物质变成液态物质，所述过滤过程：液态物质经滤网和活性炭过滤；
所述精制木醋液理化指标：pH：2.48-2.49；焦油和灰尘(mg/ m3)：<10；产量(kg/吨) ：250-260；硫化氢(mg/ m3)：<20。
2.根据权利要求1所述一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂的制备方法，其特征是：所述木醋液菌液饲料添加剂质量技术指标：pH：4-4.1；活菌数（CFU/mL）：（4.5-4.6）×109；乳酸（g/L）：20.36±0.18。
3.根据权利要求1所述一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂的制备方法，其特征是：所述的木棒加温温度为150℃，持续加温10小时。
4.根据权利要求1所述一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂的制备方法，其特征是：所述植物乳杆菌的活化方法为：在无菌实验室，用灭菌后的接种针挑取试管中的菌种，迅速接入预先配置好的并冷却至室温的MRS液体培养基中，于37℃培养箱中恒温培养12h，然后用画线法将培养12h的植物乳杆菌菌液接种于盛有MRS固体培养基的培养皿上，37℃培养箱恒温培养24h，生化鉴定后，再挑取单个菌落接种于培养基中，37℃恒温培养12h，如此反复进行3次，活化菌种。
5.根据权利要求1所述的一种提高动物免疫力的木醋液菌液饲料添加剂，其特征是：所述木醋液菌液饲料添加剂的应用方法为：将所述木醋液菌液饲料添加剂添加在全价饲料中，添加浓度为10 mL -30mL /kg，现喂现拌。
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