CN109419806A - 抗病毒组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药化学领域，涉及一种药物组合物，其包含本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶和另外的抗HCV药物，以及所述药物组合物在制备用于治疗和/或预防黄病毒科病毒，尤其是丙型肝炎病毒感染的药物中的应用。本发明的组合物具有好的抗HCV活性。

Description

抗病毒组合物及其应用
技术领域
本发明属于医药化学领域，具体涉及具有肝炎病毒抑制作用的包含联苯核苷氨基磷酸酯化合物的组合物及其应用。
背景技术
丙型肝炎病毒(HCV)感染是世界范围内流行的疾病，全球慢性感染者已超过2亿，埃及的慢性感染率为15％，巴基斯坦为4.8％，中国为3.2％，位列世界前三。丙型肝炎病毒感染的临床表现多样，轻至炎症，重至肝硬化、肝癌。慢性丙型肝炎还可以并发某些肝外表现，包括类风湿性关节炎、干燥性结膜角膜炎、扁平苔藓、肾小球肾炎、混合型冷球蛋白血症、B细胞淋巴瘤和迟发性皮肤卟啉症等，可能是机体异常免疫反应所致。且丙肝肝硬化失代偿期时，可以出现各种并发症，如腹水腹腔感染，上消化道出血，肝性脑病，肝肾综合征，肝衰竭等表现。
HCV属于黄病毒科肝病毒属病毒，其与黄病毒科中的另外两个属即瘟病毒属和黄病毒属的基因结构相似。目前，治疗HCV感染的标准方法有干扰素以及干扰素和利巴韦林联合疗法。不过，仅50％的治疗者对该方法有反应，且干扰素具有明显的副作用，例如流行性感冒样症状、体重减低以及疲乏无力，而干扰素和利巴韦林联合疗法则产生相当大的副作用，包括溶血、贫血症和疲乏等。
丙型肝炎病毒根据其基因组序列的差异，主要分为6个基因型和若干亚型，其中1b型流行最广泛，在美国、欧洲、中国和日本流行率超过HCV感染的70％。在中国，北方地区的HCV基因型较单一，主要为1b和2a型，而南方地区的HCV基因型种类则较多，以1b型为主，2a、3a、3b及6a型各自占较大比例。香港地区6a占第二位，广东地区6a型也有增多趋势。
已开发的用于治疗HCV感染的药物包括蛋白酶抑制剂、噻唑烷衍生物、噻唑烷和N-苯甲酰苯胺、菲醌、解旋酶抑制剂、核苷聚合酶抑制剂和胶霉毒素、反义硫代磷酸酯寡核苷酸、依赖于IRES的翻译的抑制剂、核酶以及核苷类似物等。2013年以来，丙肝治疗历史发生了巨大的改变，强生的西美瑞韦(Simeprevir)和吉利德的索非布韦(Sofosbuvir)上市并表现出惊人的疗效，特别是吉利德的索非布韦的病毒持续应答率(SVR12)可达90％。
不过，用于治疗HCV药物的治疗周期仍较长，疗效应有待提高。因此，开发疗程更短、疗效更优的抗丙肝药物组合已成为该领域的迫切需求。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种药物组合物，其包含本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和另外的抗HCV药物，
本发明的另一个目的是提供本发明的药物组合物在制备用于治疗和/或预防黄病毒科病毒，尤其是丙型肝炎病毒感染的药物中的应用。
CN104031104A公开了一种如以上式1所示的新型核苷氨基磷酸酯化合物，其化学名称为(2S)-2-((([1，1′-联苯]-4-基氧基)(((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯，该篇文献以其全部内容引入本文作为参考。
本发明的发明人令人惊奇地发现，本发明的式1化合物与其他抗HCV药物组合使用，具有更加优异的协同抗病毒活性，对细胞的毒性小，可用于治疗黄病毒科病毒，尤其是丙型肝炎病毒感染，并且可用于治疗和/或预防黄病毒科病毒，尤其是丙型肝炎病毒感染后耐药患者。
本发明的发明人现已发现，NS5B聚合酶核苷类抑制剂的耐药突变复制子S96T和S282T，非核苷类抑制剂的耐药突变复制子M414T，NS5A蛋白抑制剂的耐药突变复制子Q30E、L31V、Y93H突变，以及NS3蛋白酶抑制剂的耐药突变复制子V36M、R155K、D168A等对本发明的式1化合物或其药物组合物均无明显耐药性。因此，本发明的式1化合物或其药物组合物可用于治疗黄病毒科病毒，尤其是丙型肝炎病毒感染及感染后耐药的患者，和/或预防病毒感染或耐药患者疾病发作或复发。体外实验证明，本发明的式1化合物对耐药突变复制子S282T的抑制活性明显优于索非布韦(sofosbuvir，Sovaldi，GS-7977)，对耐药突变复制子S96T和M414T的抑制活性与野生型相比没有降低，对耐药突变复制子Q30E、L31V、Y93H、V36M、R155K、D168A抑制剂的活性没有降低，且对人体正常器官的细胞以及动物体细胞的毒性非常低，具有极高的选择性。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物中的另外的抗HCV药物为选自以下中的一种或多种：干扰素、白介素2、白介素6、白介素12、促进产生1型辅助性T细胞应答的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、肌苷5’-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺、金刚乙胺、三氮唑核苷、巴维昔单抗(Bavituximab)、CivacirTM、波普瑞韦(boceprevir)、替拉瑞韦(telaprevir)、埃罗替尼(erlotinib)、daclatasvir、simeprevir、asunaprevir、vaniprevir、faldaprevir、ABT-450、danoprevir、sovaprevir、MK-5172、vedroprevir、BZF-961、GS-9256、narlaprevir、ANA975、ABT-267、EDP239、PPI-668、GS-5816、samatasvir(IDX-719)、MK-8742、MK-8325、GSK-2336805、PPI-461、TMC-435、MK-7009、BI-2013335、ciluprevir、BMS-650032、ACH-1625、ACH-1095、VX-985、IDX-375、VX-500、VX-813、PHX-1766、PHX-2054、IDX-136、IDX-316、EP-013420、VBY-376、TMC-649128、R-7128、PSI-7977、INX-189、IDX-184、IDX102、R1479、UNX-08189、PSI-6130、PSI-938、PSI-879、HCV-796、HCV-371、VCH-916、VCH-222、ANA-598、MK-3281、ABT-333、ABT-072、PF-00868554、BI-207127、GS-9190、A-837093、JKT-109、G1-59728、GL-60667、AZD-2795、TMC647055、KW-136。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物中的另外的抗HCV药物用于抑制HCV复制过程和抑制HCV病毒蛋白功能的至少之一。在一些实施方案中，所述HCV复制过程选自HCV进入、脱壳、翻译、复制、组装、释放的HCV的完整病毒周期。在一些实施方案中，所述HCV病毒蛋白选自解旋酶、蛋白酶、金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、非结构蛋白NS4A、非结构蛋白NS4B和非结构蛋白NS5A，NS5BRNA合酶；以及HCV病毒复制所需要的内部核糖体进入点(IRES)和肌苷单磷酸脱氢酶(IMPDH)。
在一些实施方案中，本发明提供本发明的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于抑制HCV复制和抑制HCV病毒蛋白功能的至少之一。在另一些实施方案中，本发明提供本发明的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、处理、治疗或减轻患者的HCV感染或丙型肝炎疾病。
在一些实施方案中，本发明提供本发明的药物组合物，其包含本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和NS5A抑制剂和/或NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂和/或NS5B抑制剂。在一些实施方案中，所述NS5A抑制剂选自Daclatasvir、Ledipasvir、Ombitasvir、Elbasvir和KW-136。在一些实施方案中，所述NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂选自Telaprevir、Boceprevir、Danoprevir、Simeprevir、Asunaprevir、Paritaprevir和Grazoprevir。在一些实施方案中，所述NS5B抑制剂选自Dasabuvir和MIV-802。
在一些实施方案中，所使用的式1化合物是式1化合物的立体异构体，其化学名称为(S)-2-[[[(S)-(1，1’-联苯基-4-氧基)]-[((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基]磷酰基]氨基]丙酸异丙酯，结构式如以下式1a，
本发明的发明人发现，式1a的化合物对HCV病毒及其耐药株具有明显优于式1的化合物的抑制活性。
CN104744444A公开了一种如式2所示的新型核苷氨基磷酸酯化合物，其化学名称为N-((2S)-1-((S)-2-(6-(7-((S)-2-(5-((S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)-1H-咪唑-5-基)-9，9，10，10-四氟-9，10-二氢菲-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸甲酯(以下简称“式2化合物”)，
在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和式2的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、水合物或结晶。
在本发明的药物组合物中，可以采用式2的化合物的任意形态或无定形物。在一个具体的实施方案中，使用式2的化合物的无定型物。在另一些实施方案中，使用式2的化合物的晶型形式来制备本发明的药物组合物。
CN104744444A中实施例12公开了式2的化合物的制备方法，根据实施例12所得到的化合物，再加入乙酸异丙酯萃取，即可得到式2的化合物的固体形式。
在另一些具体的实施方案中，本发明的药物组合物包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和Ledpasvir或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、水合物或结晶。
在另一些具体的实施方案中，本发明的药物组合物包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和Daclatasvir或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、水合物或结晶。
在另一些具体的实施方案中，本发明的药物组合物包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和Simeprevir或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、水合物或结晶。
在另一些具体的实施方案中，本发明的药物组合物包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和Dasabuvir或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、水合物或结晶。
在另一些具体的实施方案中，本发明的药物组合物包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和干扰素。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和式2的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、水合物或结晶以及另外的HCV抑制剂。在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和式2的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、水合物或结晶以及另外的HCV抑制剂，所述另外的HCV抑制剂为选自下列组成的一种或多种另外的抗HCV治疗剂：HCVNS3/4蛋白酶抑制剂、HCV NS5B抑制剂、核苷类似物、干扰素α、聚乙二醇化的干扰素、左旋韦林、韦拉米啶、TLR7激动剂、TLR9激动剂、亲环蛋白抑制剂、α葡萄糖苷酶抑制剂、NS5A抑制剂和NS3解螺旋酶抑制剂。在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和式2的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、水合物或结晶以及另外的HCV抑制剂，所述另外的HCV抑制剂选自Daclatasvir、Ledipasvir、Ombitasvir、Elbasvir、Telaprevir、Boceprevir、Danoprevir、Simeprevir、Asunaprevir、Paritaprevir、Grazoprevir、MIV-802、KW-136。
本发明提供本发明的药物组合物用于治疗哺乳动物中HCV感染的应用。优选地，所述哺乳动物为人。在本发明药物组合物应用的一些实施方案中，本发明的药物组合物中各活性组分同时、分开或以任何先后的顺序使用。
本发明的发明人惊奇地发现，本发明的包含式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和另外的抗HCV药物例如式2化合物、GS-5885、BMS-790052或ABT-333或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、水合物或结晶的组合物在治疗HCV感染中具有高度协同作用，产生了意料不到的效果。
本发明还提供本发明的药物组合物用于治疗哺乳动物中HCV耐药的应用。优选地，所述哺乳动物为人。
可以将本发明的药物组合物与药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。在一些实施方案中，将本发明的药物组合物中各活性组分分别与药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，然后同时、分开或序贯给予需要其的个体。给药方法包括但不限于经口、静脉内、皮内、肌内、腹膜内、皮下和鼻内途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过口服、输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身施用或局部施用。所述制剂可通过本领域已知的方法制备。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂、口服剂或注射剂。在另一些实施方案中，本发明的药物组合物中各活性组分以单独剂型提供。在一些实施方案中，本发明的药物组合物为固定组合的形式。
优选地，本发明的药物组合物以胃肠途径给药。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含对HCV感染联合治疗有效量的式1或式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和另外的抗HCV药物。
根据不同种属哺乳动物之间的剂量换算关系，根据优选的实施方案，对于口服给药，以本发明的式1化合物的重量计，本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶在人中可以以200-2400mg/日，例如300-800mg/日，优选400-600mg/日的剂量单独给药。在另一个实施方案中，以本发明的式1化合物的重量计，本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶在人中以200-2400mg/日，例如300-800mg/日，优选400-600mg/日的剂量与其他活性剂例如其他抗HCV药物组合给药。
在一些优选的实施方案中，本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶以200-2400mg/日，例如300-800mg/日，优选400-600mg/日的剂量范围每日一次，连续6-48周，例如6周、12周、24周或48周，口服给药。实际使用的剂量可根据患者的需要以及治疗病症的严重程度而有所改变。在一个具体的实施方案中，本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶以400-600mg/日的剂量范围每日一次，连续口服给药12周。在另一个具体的实施方案中，本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶以400-600mg/日的剂量范围每日一次，连续口服给药24周。在另一些具体的实施方案中，本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶以400-600mg/日的剂量与其他抗HCV药物，例如聚乙二醇干扰素α2a联合，每日一次，连续口服给药12或24周。实际使用的剂量可根据患者的需要以及治疗病症的严重程度而有所改变。
尽管以上提供了本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶的典型剂量，但是临床医师可根据治疗患者的病情允许使用不同的剂量。
在一个实施方案中，本发明提供降低由需要治疗的患者体内的HCV所致病毒感染可能性的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶或它们与其他抗HCV活性剂的组合。在另一个实施方案中，本发明提供治疗和/或预防由需要治疗的患者体内的继发于HCV感染的肝纤维化、肝硬化或癌症的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶或它们与其他活性剂的组合。在一个实施方案中，所述HCV感染是由HCV耐药菌株引起。在一些实施方案中，所述HCV耐药是由丙型肝炎病毒复制子GT1b-NS5B的S96T、S282T和/或M414T突变引起的。在一个实施方案中，所述HCV耐药是由S96T突变引起的。在另一个实施方案中，所述HCV耐药是由S282T突变引起的。在再一个实施方案中，所述HCV耐药是由M414T突变引起的。本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶或其药物组合物对NS5B聚合酶核苷类抑制剂相关的HCV耐药，例如NS5B聚合酶核苷类抑制剂的耐药突变S96T和S282T具有良好的活性，无明显耐药性。本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶或其药物组合物对非核苷类抑制剂相关的HCV耐药，例如非核苷类抑制剂的耐药突变M414T具有良好的活性，无耐药性。本发明的式1化合物对耐药突变S282T的抑制活性优于GS-7977(索非布韦)。
本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶或其药物组合物对NS3蛋白酶和NS5A蛋白抑制剂相关的HCV耐药具有良好的活性，无交叉耐药性。本发明提供本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶或其药物组合物用于治疗和/或预防对NS3蛋白酶和NS5A蛋白抑制剂耐药的HCV感染的应用。对于NS3蛋白酶和NS5A蛋白抑制剂耐药的HCV患者，给予治疗和/或预防有效量的本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶或其药物组合物。在一些实施方案中，本发明的化合物用于治疗的HCV耐药是由GT1b-NS3的V36M、R155K和/或D168A突变引起的。在另一些实施方案中，本发明的化合物用于治疗的HCV耐药是由GT1b-NS5A的L31V和/或Y93H突变所致。在另一些实施方案中，本发明的化合物用于治疗的HCV耐药是由GT1a-NS5A的Q30E、L31V和/或Y93H突变所致。在另一些实施方案中，本发明的化合物用于治疗的HCV耐药是由丙型肝炎病毒复制子GT1b-NS5B的S96T、S282T、M414T，GT1b-NS5A的L31V、Y93H，GT1a-NS5A的Q30E、L31V、Y93H和GT1b-NS3的V36M、R155K、D168A中的一种或多种突变所致。
在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶，还包含选自下列组成的一种或多种另外的抗HCV治疗剂：HCVNS3/4蛋白酶抑制剂、HCVNS5B RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂、核苷类似物、干扰素α、聚乙二醇化的干扰素、左旋韦林、韦拉米啶、TLR7激动剂、TLR9激动剂、亲环蛋白抑制剂、α葡萄糖苷酶抑制剂、NS5A抑制剂和NS3解螺旋酶抑制剂。
在另一些实施方案中，与本发明用于HCV感染治疗的式1化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体或结晶组合的药物包括例如NM 283、VX-950、SCH 50304、TMC435、VX-500、BX-813、SCH503034、R1626、ITMN-191(R7227)、R7128、PF-868554、TT033、CGH-759、GI 5005、MK-7009、SIRNA-034、MK-0608、A-837093、GS 9190、ACH-1095、GSK625433、TG4040(MVA-HCV)、A-831、F351、NS5A、NS4B、ANA598、A-689、GNI-104、IDX102、ADX184、GL59728、GL60667、PSI-7851、TLR9激动剂、PHX1766、SP-30及其混合物。在另一些实施方案中，对于继发于HCV感染的肝纤维化、肝硬化或癌症的治疗中，本发明的化合物还可与抗肝纤维化药物、抗肝硬化药物和/或抗癌药物联合施用。
在一个实施方案中，本发明提供本发明的式1a化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物或结晶或其药物组合物在制备治疗、预防或控制HCV感染的药物中的应用。
在一些实施方案中，本发明提供一种商业包装，其包含本发明的药物组合物以及用于其在治疗HCV相关疾病中同时、分别或相继使用的说明书。
除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体。包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。所有立体异构体均属于本发明的范围。本发明的化合物的单独立体异构体可基本上不含其它异构体或可以混合成例如外消旋体，或者与所有其它的立体异构体混合。
术语“药学可接受的盐”是指本发明所述的化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸可选自：磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸、磺酸、对甲苯磺酸、苹果酸、甲烷磺酸或其类似物。
术语“溶剂合物”是指通过与溶剂分子配位形成固态或液态的配合物的本发明化合物的形式。水合物是溶剂合物的特殊形式，其中与水发生配位。在本发明范围内，溶剂合物优选是水合物。
术语“结晶”是指本发明所述的化合物形成的各种固体形态，包括晶型、无定形。
本发明化合物中的“氢”、“碳”、“氧”包括其所有同位素。同位素应理解为包括具有相同原子数但具有不同质量数的那些原子。举例来说，氢的同位素包括氕、氚和氘，碳的同位素包括13C和14C，氧的同位素包括16O和18O等。
附图说明
图1为式Ia化合物正庚烷溶剂合物单晶的不对称结构单元示意图。
图2为式Ia化合物正庚烷溶剂合物单晶的单胞示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细阐述，但本发明不限于这些实施例。以下实施例中使用的材料如无特殊说明均为商购获得，其中(2′R)-N-苯甲酰基-2′-脱氧-2′-氟-2′-甲基胞苷-3′，5′-二苯甲酸酯购于苏利制药科技江阴有限公司。
实施例1(S)-2-[[[(S)-(1，1’-联苯基-4-氧基)]-[((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基]磷酰基]氨基]丙酸异丙酯
步骤1(2′R)-2′-脱氧-2′-氟-2′-甲基尿苷-3′，5′-二苯甲酸酯的合成
将(2′R)N-苯甲酰基-2′-脱氧-2′-氟-2′-甲基胞苷-3′，5′-二苯甲酸酯(8.0kg，14.0mol)、乙酸(64L)及纯化水(16L)加入100L反应釜中，开启搅拌，升温至120～140℃，剧烈回流，反应完全后，离心，所得滤饼用纯化水(24.0L)搅洗，离心，所得滤饼用甲醇(8.0L)搅洗，离心，干燥，得到标题化合物5.6kg，收率85.41％。
步骤21-[(2R，3R，4R，5R)-3-氟-4-羟基-5-羟甲基-3-甲基四氢呋喃-2-基]嘧啶-2，4-(1H，3H)-二酮的合成
将步骤1中制得的(2′R)-2′-脱氧-2′-氟-2′-甲基尿苷-3′，5′-二苯甲酸酯(5.60kg，11.95mol)和无水甲醇(28.0L)加至50L反应釜中，氮气保护下，降温，待体系温度降为-10℃以下，向反应釜中滴加甲醇钠的甲醇溶液(3.66L，30％wt，17.93mol)，滴加完毕后，升温至室温，2h后，降温。待体系温度降为-10℃以下，向反应釜中滴加浓硫酸(5.60L，10.03mol)的甲醇溶液(体积比1∶9)，反应完全后，硅藻土助滤，甲醇洗涤滤饼，合并滤液。滤液减压浓缩，待析出大量白色沉淀，向旋蒸瓶中加入二氯甲烷(8.0L)，过滤，干燥滤饼，得到标题化合物1.84kg，收率59.15％。
步骤3(S)-2-[[(1，1′-联苯基-4-氧基)(五氟苯氧基)磷酰基]氨基]丙酸异丙酯的合成
于50L玻璃反应釜中，氮气保护下，加入三氯氧磷(1.53kg，10mol)和二氯甲烷(10L)，搅拌，降温至-30℃以下。滴加三乙胺(1.01kg，10mol)的二氯甲烷(5L)溶液，滴加过程，保持内温低于-30℃。滴加完毕，缓慢滴加4-羟基联苯(1.7kg，10mol)的四氢呋喃(3.4L)溶液，滴毕搅拌30min。控制内温低于-30℃，加入L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(1.68kg，10mol)，滴加三乙胺(2.02kg，20mol)的二氯甲烷(8.0L)溶液，搅拌30min。升温至0℃左右，滴加五氟苯酚(1.84kg，10mol)，三乙胺(1.01kg，10mol)的二氯甲烷(7.0L)溶液，滴加过程中，反应放热升温，滴加完毕，內温升至室温，反应完全后，过滤，滤饼用二氯甲烷(2.5L×4)洗涤，合并滤液，将滤液用纯化水(25L)洗涤，分液，有机相减压浓缩，加入庚烷(5L×2)带溶剂，离心，真空干燥，称重，得类白色固体状标题化合物3.71kg，收率70.13％。
步骤4(S)-2-[[(S)-(1，1′-联苯基-4-氧基)(五氟苯氧基)磷酰基]氨基]丙酸异丙酯的合成
于30L反应釜中，氮气保护下，加入(S)-2-[[(1，1’-联苯基-4-氧基)(五氟苯氧基)磷酰基]氨基]丙酸异丙酯(3.70kg，7.0mol)、甲基叔丁基醚(2.40kg)、正庚烷(9.0kg)、三乙胺(77g，0.7mol)和五氟苯酚(43g，0.21mol)，加热至40℃，强力机械搅拌。反应完全后，离心，真空干燥，得(S)-2-[[(S)-(1，1’-联苯基-4-氧基)(五氟苯氧基)磷酰基]氨基]丙酸异丙酯粗品3.5kg，收率94.59％。
步骤5(S)-2-[[(S)-(1，1′-联苯基-4-氧基)(五氟苯氧基)磷酰基]氨基]丙酸异丙酯的精制
于100L玻璃反应釜中，加入(S)-2-[[(S)-(1，1’-联苯基-4-氧基)(五氟苯氧基)磷酰基]氨基]丙酸异丙酯粗品(4.50kg)和异丙醇(81.0L)，搅拌，升温至回流，溶清。氮气保护下，降温。离心，真空干燥，得类白色固体状标题化合物3.40kg，收率75.56％。
步骤6(S)-2-[[[(S)-(1，1’-联苯基-4-氧基)]-[((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基]磷酰基]氨基]丙酸异丙酯的合成
于50L玻璃反应釜中，加入1-[(2R，3R，4R，5R)-3-氟-4-羟基-5-羟甲基-3-甲基四氢呋喃-2-基]嘧啶-2，4-(1H，3H)-二酮(1.30kg，5.0mol)和四氢呋喃(15.6L)，搅拌，氮气保护，降温至-10℃以下。滴加叔丁基氯化镁溶液(8.0L，8.0mol)，滴毕，0～5℃继续反应1h。加入(S)-2-[[(S)-(1，1’-联苯基-4-氧基)(五氟苯氧基)磷酰基]氨基]丙酸异丙酯成品(2.12kg，4.0mol)，滴加完毕，5～10℃反应，10～11h后取样，HPLC监控，反应完全后，降温至0℃以下，向反应液中加入2N盐酸(4.0L，8.0mol)淬灭反应。淬灭过程控制温度在0～10℃。滴加完毕，搅拌10min。减压浓缩，蒸干得固液残余物，加入乙酸乙酯(40.0L)和纯化水(20.0L)，分液。向有机相中加入5％碳酸钠水溶液(10.0L)洗涤，然后水洗，过滤，旋干，再次加入二氯甲烷7.0L，浓缩，得油状发泡物，向油状发泡物中加入乙酸异丙酯(15.0L)，溶清后，降温，析出大量白色沉淀。降温，过滤，干燥滤饼，得类白色固体状标题化合物1.98kg，收率81.72％。
步骤7(S)-2-[[[(S)-(1，1’-联苯基-4-氧基)l-[((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基]磷酰基]氨基]丙酸异丙酯的精制
于30L反应釜中，加入(S)-2-[[[(S)-(1，1’-联苯基-4-氧基)]-[((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基]磷酰基]氨基]丙酸异丙酯粗品(4.80kg)和乙酸异丙酯(24.0L)，搅拌，加热溶清。加入活性炭(144g)，搅拌30min，趁热过滤，降温，过滤，干燥滤饼，得白色固体4.40kg，收率：91.67％，纯度大于98％。ESI-MS m/z：604.2[M+H]-。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ：11.48(s，1H)，7.67(d，2H)，7.64-7.62(m，2H)，7.59(d，1H)，7.47(t，2H)，7.37(t，1H)，7.33(d，2H)，6.04(d，1H)，6.02(d，1H)，5.83(d，1H)，5.57(d，1H)，4.89-4.84(m，1H)，4.42-4.39(m，1H)，4.29-4.24(m，1H)，4.05-4.02(m，1H)，3.88-3.82(m，2H)，1.29-1.24(m，6H)，1.16-1.15(m，6H)。31P NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ4.07ppm。
步骤8(S)-2-[[[(S)-(1，1’-联苯基-4-氧基)]-[((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基]磷酰基]氨基]丙酸异丙酯的构型确证
称取步骤7制备的化合物(15mg)于3mL小瓶中，加入二氯甲烷/正庚烷(5mL，体积比为2：1)的混合溶剂体系中，震荡得到的澄清溶液，用封口膜盖住小瓶并在上面扎孔，室温下放置6天，得到单晶。绝对构型通过单晶X-射线衍射图谱确定，检测仪器为AgilentSuper单晶衍射仪，测试条件为铜靶、管压40kv、管流40mA，晶体结构解析方法为直接法(SHELXTL和OLEX2)，测得的单晶结构数据表见表1，单晶衍射图谱见图1、2。通过单晶X-射线衍射图谱进一步确认了实施例1化合物的结构。
表1单晶结构信息表
实施例2本发明的药物组合物的抗HCV-1b复制子活性检测
本实验应用丙型肝炎病毒GT1b(Con1)复制子稳定转染细胞评价以下各组本发明的药物组合物的效果：
1).本发明的式1a化合物+本发明的式2化合物；
2).本发明的式1a化合物+NS5A抑制剂雷迪帕韦(Ledpasvir，GS-5885)；
3).本发明的式1a化合物+NS5A抑制剂达卡他韦(Daclatasvir，BMS-790052)；
4).本发明的式1a化合物+NS3蛋白酶抑制剂西甲匹韦(Simeprevir，TMC435)；
5).本发明的式1a化合物+非核苷类NS5B抑制剂Dasabuvir(ABT-333)；
6).本发明的式1a化合物+利巴韦林；
7).本发明的式1a化合物+α-干扰素；
使用索菲布韦(GS-7977)+本发明的式2化合物作为对照组。索菲布韦、Dasabuvir购于上海皓元生物医药科技有限公司，雷迪帕韦、达卡他韦由药明康德(上海)新药开发有限公司提供，西甲匹韦购于上海楼岚生物科技有限公司，α-干扰素(IFN-a)、利巴韦林(Ribavirin)购于Sigma公司。
参照中国专利申请CN105985355A公开的方法检测本发明以上的药物组合物以及对照组抗HCV-1b复制子的活性。
具体测试步骤见CN105985355A的实施例1，该篇专利申请以其全部内容引入本文作为参考。
如CN105985355A中所述，HCV 1b复制子细胞，即稳定转入HCV基因型1b复制子的Huh7细胞系，由药明康德(上海)新药开发有限公司提供。
先将每个化合物进行两倍稀释。再将两个化合物分别以7个不同浓度进行正交配比，加入96孔板中，每个组合为3复板。将HCV-1b细胞以每孔8X103个细胞的密度种到含有化合物的96孔板中，DMSO终浓度为0.5％。HCV-1b细胞在5％CO2、37℃条件下培养3天。每孔加入细胞生长检测试剂CellTiter-FluorTM，在37℃、5％CO2培养箱培养细胞1h后，用Envision检测Fluorescence信号值，计算细胞活力百分比，确定化合物联合用药有无细胞毒性。然后每孔加荧光素酶发光底物Bright-GloTM，5min内用Envision检测Luminescence信号值。应用MacSynegy软件对实验数据进行处理，分析联合用药的效果参数。本实验独立重复三次。
联合用药实验数据通过应用MacSynergy软件进行分析并计算联合用药效果指数。所得指数为正值表示两个药物的联合效果为协同作用，指数为负值则为拮抗作用。实验结果见表2。
表2在GT1b复制子细胞实验中的联合用药效果
药物联合指数说明：
指数为正值则为协同作用，负值为拮抗作用；
指数绝对值＜25，即作用轻微、不显著或相加作用；
指数绝对值在25-50范围，即轻度但明确的协同或拮抗作用；
指数绝对值在＞50范围，即高度协同或拮抗作用。
实验结果表明，除与利巴韦林联合用药显示轻微至中度拮抗作用外，式1化合物与TMC435或IFN-a联合效果为相加作用，而式1化合物与式2化合物、GS-5885、BMS-790052或ABT-333联合效果为高度协同作用，显示意义重大。实验显示，作为目前上市最好的NS5B抑制剂的索菲布韦与式2化合物联合时仅显示轻微协同作用，效果明显弱于本发明的药物组合物。另外，使用索菲布韦与GS-5885的组合进行测试，仅为相加作用，没有任何的协同(DIVISION OF ANTIVIRAL PRODUCTS(HFD-530)VIROLOGY REVIEW P25，TABLE 14，NDA：204671 SDN：000，DATE REVIEWED：09/04/2013，Lisa K Naeger，Ph.D.)，其明显弱于本发明的药物组合物的高度协同作用。
此外，在药物联合实验中式1化合物与所有测试的其他联合给药的抗丙型肝炎病毒药物在测定浓度组合范围内未显示细胞毒性(细胞活力大于50％)。
实施例3本发明的化合物的抗HCV-1b复制子活性检测
参照中国专利申请CN105985355A公开的方法检测本发明的式1和式1a化合物抗HCV-1b复制子的活性。式1的化合物参照CN104031104A实施例1的方法制备。使用索菲布韦(GS-7977，购于上海皓元生物医药科技有限公司，货号HY-15005)作为对照药。
具体测试步骤见CN105985355A的实施例1，该篇专利申请以其全部内容引入本文作为参考。
如CN105985355A中所述，HCV 1b复制子细胞，即稳定转入HCV基因型1b复制子的Huh7细胞系，由药明康德(上海)新药开发有限公司提供。
测试的每个化合物用100％DMSO配制成10mM母液后，用含0.5％DMSO的完全培养液稀释至10μM，然后依次3倍稀释，共10个浓度。HCV-1b复制子细胞每孔接种8X103个细胞，在37℃，5％CO2培养箱中培养3天。实验重复三次。
实验结果显示，本发明的式1a化合物对HCV 1b复制子的EC50值为0.036μM，明显优于式1化合物的EC50值，亦明显优于索菲布韦的EC50值(0.092μM)。在测定浓度范围内，本发明的式1a化合物没有显示出细胞毒性，CC50值大于最高检测浓度10μM。
实施例4本发明的化合物的抗HCV-1a复制子活性检测
参照中国专利申请CN105985355A实施例2的方法检测本发明的式1和式1a化合物抗HCV-1a复制子的活性。使用索菲布韦作为对照药，其来源如实施例2中所述。
如CN105985355A中所述，HCV 1a复制子细胞，即稳定转入HCV基因型1a复制子的Huh7细胞系，由药明康德(上海)新药开发有限公司提供。
测试的每个化合物用100％DMSO配制成10mM母液后，用含0.5％DMSO的完全培养液稀释至10μM，然后依次3倍稀释，共10个浓度。HCV-1a复制子细胞每孔接种8X103个细胞，在37℃，5％CO2培养箱中培养3天。实验重复三次。
实验结果显示，本发明的式1a化合物对HCV 1a复制子的EC50值为0.01μM，明显优于式1化合物的EC50值，亦明显优于索菲布韦的EC50值(0.07μM)。在测定浓度范围内，本发明的式1a化合物没有显示出细胞毒性，其对HCV 1a复制子的CC50值＞10μM。
从以上实验可以看出，本发明的化合物对丙型肝炎病毒1b亚型和1a亚型表现出良好的抑制活性，同时对宿主细胞具有非常低的毒性，有效性高，安全性好，适合用于治疗和/或预防与HCV感染相关的疾病。
另外，本发明的发明人还采用NS5B嵌合型复制子的瞬时转染细胞(Huh-7细胞)测试了本发明的式1a化合物、索菲布韦等对抗丙型肝炎病毒基因型GT2b、GT3a、GT4a和GT5a的活性。结果显示，本发明的式1a化合物对NS5B的嵌合型复制子GT1b/GT2b、GT1b/GT3a、GT1b/GT4a和GT1b/GT5a均有抑制活性，EC50值分别为10.32nM、17.62nM、16.68nM和17.52nM；索菲布韦对上述基因型丙型肝炎病毒复制子的EC50值分别为22.68nM、54.52nM、36.02nM和53.32nM。
上述实验结果表明本发明的式1a化合物对所测试的各种基因型复制子的抑制活性均优于对照化合物索菲布韦2-3倍。
实施例5本发明的化合物对HCV耐药突变复制子抑制活性的研究
本实施例测试本发明的式1a化合物对HCV耐药突变复制子的抑制活性。使用的其它类别的丙型肝炎病毒抑制剂参考化合物包括NS5B聚合酶核苷类抑制剂索非布韦(来源如实施例2中所述)、NS5A蛋白抑制剂雷迪帕韦(Ledpasvir，GS-5885，根据WO2010/132601中公开的方法合成，并通过氢谱和质谱确认)和NS3蛋白酶抑制剂西美匹韦(Simeprevir，TMC435，购自上海楼岚生物科技有限公司)。
将本发明式1a化合物、索菲布韦、雷迪帕韦、西美匹韦分别用100％DMSO配制成10mM的母液，保存于氮气柜中。
使用肝癌细胞株Huh-7细胞用于丙型肝炎病毒复制子的瞬时转染实验，将其在含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培养液中培养。
所有丙型肝炎病毒耐药突变复制子均以GT1b或GT1a复制子为骨架，耐药突变通过点突变导入相应的基因。导入的突变通过核苷酸测序确定。本实施例中所用的丙型肝炎病毒突变复制子以及化合物检测起始浓度见表3。
表3 HCV复制子及化合物检测起始浓度
wt表示野生型，S为丝氨酸，T为苏氨酸，M为蛋氨酸，L为亮氨酸，V为缬氨酸，Y为酪氨酸，H为组氨酸，Q为谷氨酰胺，E为谷氨酸，R为精氨酸，K为赖氨酸，D为天冬氨酸，A为丙氨酸，例如S96T表示96位残基的丝氨酸突变为苏氨酸，余同。
主要试剂为荧光素酶检测试剂Bright-GloTM(Promega，货号：E2650)。
主要仪器为多功能酶标仪(Perkin Elemer，型号：Envision)和电穿孔仪(Bio-Rad，型号：Xcell)。
本发明的化合物对所有丙型肝炎病毒耐药突变复制子活性的测定均采用瞬时转染实验，在Huh-7细胞中进行。先将复制子质粒DNA用相应的限制性内切酶线性化后，用T7RNA聚合酶将DNA转录成RNA。用电击穿孔法将体外转录制备的复制子RNA转染到Huh-7细胞内。转染后的细胞以每孔1x104个细胞的密度接种到96孔实验板中，然后加入3倍系列稀释后的化合物，共8个浓度，三复孔。各化合物在不同复制子实验中采用的起始浓度见表2。细胞培养中的DMSO终浓度为0.5％。细胞在含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素DMEM培养液，5％CO2、37℃条件下培养3天。然后应用荧光素酶检测试剂Bright-GloTM测定荧光素酶报告基因表达水平，用于计算化合物对丙型肝炎病毒复制子的抑制率。使用GraphPad Prism(version 5)软件对化合物的抑制率数据进行非线性拟合分析，得到化合物的EC50值。各实验重复2次，每次3复孔。
对NS5B聚合酶核苷类抑制剂耐药突变S96T、S282T和NS5B聚合酶非核苷类抑制剂耐药突变M414T的实验结果见表4。参照化合物索菲布韦的结果与历史数据一致。
表4抗已知NS5B聚合酶抑制剂耐药突变复制子活性
实验结果表明，本发明式1a化合物对NS5B核苷类抑制剂耐药突变S96T和S282T及对NS5B非核苷类抑制剂耐药突变M414T的抑制活性与对野生型GT1b的相比无明显降低。这三个耐药突变对本发明式1a化合物无耐药性。
本发明的式1a化合物对丙型肝炎病毒NS5A抑制剂耐药突变复制子的实验结果见表5。参考化合物雷迪帕韦的实验结果与历史数据基本一致。
表5抗已知NS5A抑制剂耐药突变复制子活性
实验结果表明，本发明的式1a化合物对NS5A蛋白抑制剂耐药突变均无耐药性。
本发明的式1a化合物对丙型肝炎病毒NS3抑制剂耐药突变复制子的实验结果见表6。参考化合物西美匹韦的耐药倍数与历史数据基本一致。
表6抗已知NS3蛋白抑制剂耐药突变复制子活性
结果表明，本发明的式1a化合物对NS3蛋白酶耐药突变均无耐药性。
由以上的丙型肝炎病毒耐药突变复制子实验可以看出，本发明的化合物对NS5B聚合酶核苷类抑制剂耐药突变(S96T、S282T)或非核苷类抑制剂耐药突变(M414T)均无明显耐药性，与NS5A蛋白以及NS3蛋白酶抑制剂无交叉耐药性。因此，本发明的化合物可以与NS5A蛋白和/或NS3蛋白酶抑制剂进行联合用药，并可用于预防或/和治疗体内丙型肝炎病毒已对NS5B聚合酶抑制剂、NS5A蛋白抑制剂和/或NS3蛋白酶抑制剂产生了耐药的患者。
尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其包含式1的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶和另外的抗HCV药物，
2.根据权利要求1的药物组合物，其中所述的另外的抗HCV药物选自干扰素、白介素2、白介素6、白介素12、促进产生1型辅助性T细胞应答的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、肌苷5’-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺、金刚乙胺、三氮唑核苷、巴维昔单抗、CivacirTM、波普瑞韦、替拉瑞韦、埃罗替尼、daclatasVir、simeprevir、asunaprevir、vaniprevir、faldaprevir、ABT-450、danoprevir、sovaprevir、MK-5172、vedroprevir、BZF-961、GS-9256、narlaprevir、ANA975、ABT-267、EDP239、PPI-668、GS-5816、samatasvir、MK-8742、MK-8325、GSK-2336805、PPI-461、TMC-435、MK-7009、BI-2013335、ciluprevir、BMS-650032、ACH-1625、ACH-1095、VX-985、IDX-375、VX-500、VX-813、PHX-1766、PHX-2054、IDX-136、IDX-316、EP-013420、VBY-376、TMC-649128、R-7128、PSI-7977、INX-189、IDX-184、IDX102、R1479、UNX-08189、PSI-6130、PSI-938、PSI-879、HCV-796、HCV-371、VCH-916、VCH-222、ANA-598、MK-3281、ABT-333、ABT-072、PF-00868554、BI-207127、GS-9190、A-837093、JKT-109、G1-59728、GL-60667、AZD-2795、TMC647055、KW-136、MIV-802。
3.根据权利要求1的药物组合物，其中所述的另外的抗HCV药物选自NS5A抑制剂、NS3/4A蛋白酶抑制剂和NS5B抑制剂中的一种或多种，其中所述NS5A抑制剂选自Daclatasvir、Ledipasvir、Ombitasvir、Elbasvir和KW-136，所述NS3/4A蛋白酶抑制剂选自Telaprevir、Boceprevir、Danoprevir、Simeprevir、Asunaprevir、Paritaprevir和Grazoprevir，所述NS5B抑制剂选自Dasabuvir和MIV-802。
4.根据权利要求1的药物组合物，其中所述的另外的抗HCV药物为式2的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体或结晶，
5.根据权利要求4的药物组合物，其还包含选自下列组成的一种或多种其他的抗HCV治疗剂：HCV NS3/4蛋白酶抑制剂、HCVNS5B抑制剂、核苷类似物、干扰素α、聚乙二醇化的干扰素、左旋韦林、韦拉米啶、TLR7激动剂、TLR9激动剂、亲环蛋白抑制剂、α葡萄糖苷酶抑制剂、NS5A抑制剂和NS3解螺旋酶抑制剂。
6.根据权利要求4或5的药物组合物，其中所述式2的化合物为式2化合物的无定形物。
7.根据权利要求1-6之任一项所述的药物组合物，其中所述的式1化合物为以下式1a的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物或结晶，
8.根据权利要求1-7之任一项所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防哺乳动物黄病毒科病毒，尤其是丙型肝炎病毒感染的药物中的应用。
9.根据权利要求1-7之任一项所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防哺乳动物黄病毒科病毒，尤其是丙型肝炎病毒感染后耐药的药物中的应用；进一步地，其中所述丙型肝炎病毒感染后耐药是由丙型肝炎病毒的耐药菌株所引起；更进一步地，所述药物用于对NS5B聚合酶核苷类抑制剂和非核苷类抑制剂、NS5A蛋白抑制剂以及NS3蛋白酶抑制剂的耐药；更进一步地，所述丙型肝炎病毒感染后耐药是由以下丙型肝炎病毒复制子突变中的一种或多种所致：GT1b-NS5B的S96T、S282T、M414T突变；GT1a-NS5A的Q30E、L31V、Y93H突变；GT1b-NS5A的L31V、Y93H突变；和GT1b-NS3的V36M、R155K、D168A突变。
10.一种商业包装，其包含权利要求1-7之任一项所述的药物组合物和药品说明书。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113480512A (zh) * 2021-07-23 2021-10-08 阜阳欣奕华制药科技有限公司 一种1-(7-溴苯并并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)乙-1-酮的制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104031104A (zh) * 2013-03-08 2014-09-10 南京圣和药业有限公司 新的核苷氨基磷酸酯化合物及其应用
CN104744444A (zh) * 2013-12-31 2015-07-01 南京圣和药业股份有限公司 9,9,10,10-四氟-9,10二氢菲类丙型肝炎病毒抑制剂及其应用
CN108201539A (zh) * 2016-12-16 2018-06-26 南京圣和药业股份有限公司 联苯核苷氨基磷酸酯化合物的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104031104A (zh) * 2013-03-08 2014-09-10 南京圣和药业有限公司 新的核苷氨基磷酸酯化合物及其应用
CN104744444A (zh) * 2013-12-31 2015-07-01 南京圣和药业股份有限公司 9,9,10,10-四氟-9,10二氢菲类丙型肝炎病毒抑制剂及其应用
CN108201539A (zh) * 2016-12-16 2018-06-26 南京圣和药业股份有限公司 联苯核苷氨基磷酸酯化合物的应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113480512A (zh) * 2021-07-23 2021-10-08 阜阳欣奕华制药科技有限公司 一种1-(7-溴苯并并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)乙-1-酮的制备方法
CN113480512B (zh) * 2021-07-23 2022-07-29 阜阳欣奕华制药科技有限公司 一种1-(7-溴苯并并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)乙-1-酮的制备方法

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