CN109415443B

CN109415443B - Her-2结合抗体

Info

Publication number: CN109415443B
Application number: CN201780041578.3A
Authority: CN
Inventors: S·费舍尔; M·布兰特
Original assignee: MAB Discovery GmbH
Current assignee: MAB Discovery GmbH
Priority date: 2016-05-06
Filing date: 2017-05-08
Publication date: 2021-10-29
Anticipated expiration: 2037-05-08
Also published as: EP3452515A2; AU2017260684A1; WO2017191327A3; US20210395389A1; JP2019516788A; WO2017191327A2; CN109415443A; EP3241847A1; US11091561B2; US20190241674A1; JP6964127B2; CA3022650A1; NZ747774A; AU2017260684B2

Abstract

本发明涉及特异性结合HER2的单克隆抗体，或其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予特异性HER2结合的、所述抗体的至少一部分。所述抗体结合人Fc受体并诱导FcR介导的信号传导途径。根据本发明的抗体结合与曲妥珠单抗不同的表位。本发明还涉及根据本发明的抗体在治疗HER‑2介导的疾病中的用途。本发明还涉及含有药学上可接受的载体和治疗有效量的根据本发明的抗体的药物组合物，以及所述组合物在治疗HER‑2介导的疾病中的用途。

Description

HER-2结合抗体

技术领域

本发明涉及特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分。本发明还涉及在例如癌症、自身免疫病、炎性紊乱和传染病等疾病的诊断、预后和治疗中使用所述抗体和包含其的组合物的方法。

背景技术

受体酪氨酸蛋白激酶erbB-2，也称为CD340(分化簇340)、原癌基因Neu、Erbb2(啮齿动物)或ERBB2(人类)，是一种人类中由ERBB2基因编码的蛋白质，也经常称为HER2(来自人类表皮生长因子受体2，human epidermal growth factor receptor 2)或HER2/neu。

HER2为人类表皮生长因子受体(HER/EGFR/ERBB)家族的成员。HER2，一种已知的原癌基因，位于人类第17号染色体的长臂(17q12)。已显示该原癌基因的扩增或过表达在乳腺癌的某些侵袭性类型的发展和进展中起重要作用。近年来，该蛋白质已成为大约30％乳腺癌患者的重要生物标志物和治疗靶标。

ErbB家族由四种质膜结合受体酪氨酸激酶组成。其中之一为erbB-2，其它成员为表皮生长因子受体erbB-3(结合神经调节蛋白；缺乏激酶结构域)和erbB-4。所有四种都含有细胞外配体结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，可以与许多信号传导分子相互作用并表现出配体依赖性和配体非依赖性两种活性。HER2可以与其它三种受体的任意者发生异二聚化(heterodimerize)并被认为是其它ErbB受体的优选二聚化配偶体(dimerisationpartner)。

二聚化导致受体的细胞质结构域内酪氨酸残基的自磷酸化并起始多种信号传导途径。这些包括丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径，磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K/Akt)途径，磷脂酶Cγ-、蛋白激酶C(PKC)-和信号转导和转录激活子(Signal transducer and activator oftranscription,STAT)途径。因此，通过ErbB受体家族的信号传导促进细胞增殖并对抗细胞凋亡，因此必须受到严格调节以防不受控的细胞生长发生。

ERBB2基因的扩增或过表达在大约15-30％的乳腺癌中发生。其与增加的疾病复发和不良的预后密切相关。过表达还已知发生在卵巢癌、肠胃癌(stomach cancer)和侵袭形式的子宫癌例如浆液性子宫内膜癌(uterine serous endometrial carcinoma)中。例如，HER-2在大约7-34％的胃癌患者中和在30％的涎腺导管癌中过表达。

已经识别了引起该受体的配体非依赖性激发(firing)的不同结构改变，这是在没有受体过表达的情况下进行的。

HER2发现于多种肿瘤中，这些肿瘤中的一些在描述HER2的跨膜结构域的序列中携带点突变。跨膜结构域中缬氨酸取代谷氨酸在没有配体的情况下可导致该蛋白的组成型二聚化。HER2突变也已发现于非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancers,NSCLC)并可指导治疗。

HER2为单克隆抗体曲妥珠单抗(trastuzumab)(以赫赛汀(Herceptin)市售)的靶标。曲妥珠单抗只在HER2过表达的癌症中有效。对所有还接受化疗的患HER2-阳性乳腺癌的患者推荐一年的曲妥珠单抗疗法。曲妥珠单抗结合HER2的重要下游作用是增加p27，一种阻止细胞增殖的蛋白质。

另一种抑制HER2和HER3受体的二聚化的单克隆抗体帕妥珠单抗(pertuzumab)在2012年6月由FDA批准与曲妥珠单抗联合使用。

另外，NeuVax(Galena Biopharma)为基于肽的免疫疗法，其指导"杀手"T细胞靶向并摧毁表达HER2的癌细胞。其已进入3期临床试验。

HER2试验在乳腺癌患者中进行以评估预后并确定对曲妥珠单抗疗法的适用性。重要的是，曲妥珠单抗由于昂贵且与心脏毒性有关而被限定于HER2-阳性个体。对于HER2-阴性肿瘤，曲妥珠单抗的风险明显超过了益处。

因此，需要开发新的、更有效的抗体，其可以在用曲妥珠单抗(和化疗)的金标疗法的结果不令人满意时用于随访疗法，或者用作与现有抗体联合的替代方案。

根据本发明的研究的目的在于产生大量针对HER2的高亲和力抗体，从而发现与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗等现有抗体和疗法相比具有新作用机理的新分子。

发明内容

本发明涉及特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其中所述抗体结合人Fc受体并诱导FcR介导的信号传导途径。

在一些实施方案中，根据本发明的抗体结合与曲妥珠单抗不同的表位。

本发明还涉及治疗患者的HER-2介导的疾病的方法，其包括向患者给予药学有效量的根据本发明的抗体。

本发明还涉及药物组合物，其包含药学上可接受的载体和治疗有效量的根据本发明的抗体。所述药物组合物可在根据本发明的治疗HER-2介导的疾病的方法中给予患者。

具体实施方式

定义

根据本发明的术语"兔"意为分类学兔形目的成员的动物，其包括(野兔和家兔)和鼠兔科(鼠兔)，优选穴兔属(Oryctolagus)。

术语"抗体"涵盖各种形式的抗体结构，包括但不限于，完整抗体和抗体片段，只要其显示根据本发明的性质即可。

根据本发明的术语"兔单克隆抗体"意为通过免疫兔并从所述兔的抗体产生细胞中分离而产生的单克隆抗体，以及进一步修饰的抗体，优选人源化抗体、嵌合抗体、其片段、或进一步遗传工程化和重组产生的抗体，只要保留根据本发明的特征性质即可。优选抗体来自所述兔的B细胞或兔杂交瘤细胞。

根据本发明的术语"抗体产生细胞"意为产生抗体的兔B细胞，优选B细胞或兔杂交瘤细胞。

"天然抗体"通常为由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。各轻链通过一个共价二硫键连接至重链，而二硫键的数量在不同免疫球蛋白同种型的重链之间不同。各重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫桥。各重链在一端具有可变结构域(VH)，接着是多个恒定结构域。各轻链在一端具有可变结构域(VL)，并在其另一端具有恒定结构域。轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链可变结构域对齐。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成界面。

对于肽或多肽序列的"百分比(％)氨基酸序列同一性"定义为，在根据需要比对序列并引入空位以实现最大百分比序列同一性并且不将任何保守替换考虑为序列同一性的一部分后，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为了测定百分比氨基酸序列同一性的目的的比对可以以在本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。

本文所用的术语“Fc受体”或“FcR”指的是与抗体的Fc区结合的人类受体。FcR结合IgG抗体，并且包括FcγRI、FcγRII、和FcγRIII亚类的受体，包括等位基因变体和这些受体的可选地剪接的形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“激活受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，其具有主要在其细胞质结构域中不同的相似氨基酸序列。激活受体FcγRIIA在其细胞质结构域中含有基于免疫受体络氨酸的激活基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见综述M.in Daeron,Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcRIIIA(CD16a)调节ADCC。FcR在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)；Capel等人,Immunomethods 4:25-34(1994)；和de Haas等人,J.Lab.CHn.Med.126:330-41(1995)中综述。这些和所有其他FcR在本文中由术语"FcR"涵盖。该术语还包括新生儿受体FcRn，其负责母体IgG至胎儿的转移(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))，并且调节较慢的分解代谢，由此延长半衰期。

"恒定结构域(恒定部)"不直接参与抗体与抗原的结合，但也显示例如效应子功能。对应于人类IgG1的重链恒定区称为γ1链。对应于人类IgG3的重链恒定区称为γ3链。人类恒定区γ重链详细记载于Kabat,E.A.等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991)、和Brueggemann,M.等人，J.Exp.Med.166(1987)1351-1361；Love,T.W.等人，Methods Enzymol.178(1989)515-527。IgG1或IgG3类型的恒定结构域在Asn297处糖基化。根据本发明的"Asn 297"意为位于Fc区中大致297位的氨基酸天冬酰胺；基于抗体的微小的序列变化，Asn297也可位于上游或下游的一些氨基酸(通常不超过+3氨基酸)。

如本文所用的术语“抗体效应子功能”或“效应子功能”指的是由IgG的一个(或多个)Fc效应子结构域(例如，免疫球蛋白的Fc区)提供的功能。此类功能可通过例如一个(或多个)Fc效应子结构域与具有吞噬或裂解活性的免疫细胞上的Fc受体的结合、或者通过一个(或多个)Fc效应子结构域与补体系统的组分的结合来影响。典型的效应子功能为ADCC、ADCP和CDC。“抗体片段”指的是除了完整抗体以外的分子，其包含与完整抗体所结合的抗原结合的完整抗体的一部分。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和从抗体片段形成的多特异性抗体。

与参考抗体"结合相同表位的抗体"指的是在竞争分析中阻断参考抗体与其抗原的结合50％以上的抗体，反之，参考抗体在竞争分析中阻断抗体与其抗原的结合50％以上。本文提供示例性的竞争分析。

"抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性"和"ADCC"指的是细胞介导的反应，其中表达FcR的非特异性细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞、和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体，并且随后引起靶细胞的裂解。调节ADCC的原代细胞、NK细胞仅表达FcyRIII，而单核细胞表达FcyRI、FcyRII和FCYRIII。造血细胞上的FCR表达总结于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol 9(1991)457-492的第464页的表3。术语"抗体依赖性细胞吞噬作用"和"ADCP"指的是抗体包被的细胞全部或部分由与免疫球蛋白Fc区结合的吞噬免疫细胞(例如，巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞)内在化的过程。

"C1q"是包括免疫球蛋白的Fc区的结合位点的多肽。C1q与两个丝氨酸蛋白酶C1r和C1s一起，形成复合物C1，即补体依赖性细胞毒性(CDC)途径的第一组分。人C1q可商购自例如Quidel,San Diego,California。

抗体的"类"指的是其重链具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在5大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，并且这些中的几类可进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₅、和IgA₂。对应于不同类的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为a、δ、ε、γ、和μ。

例如药物制剂等的试剂的"有效量"指的是在需要的剂量和时间段下，有效实现期望的治疗或预防结果的量。

本文中术语"Fc区"用于定义免疫球蛋白重链的C末端区域，其包含恒定区的至少一部分。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。

除非本文另有说明，否则在Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号根据EU编号系统，也称为EU索引，其描述于Kabat,等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)。

“变体Fc区”包含凭借至少一个如本文所述的“氨基酸修饰”与“天然”或“野生型”序列Fc区的氨基酸序列不同的氨基酸序列。

如本文所用的术语"Fc-变体"指的是包含Fc结构域中的修饰的多肽。对于本发明中讨论的所有位置，编号根据EU索引。EU索引或如Kabat或EU编号方案中的EU索引指的是EU抗体的编号(Edelman,等人,Proc Natl Acad Sci USA 63(1969)78-85，其通过引用整体并入本文。)修饰可为添加、删除、或取代。取代可包括天然存在的氨基酸或非天然存在的氨基酸。变体可包括非天然氨基酸。

术语"含有Fc区的多肽"指的是包含Fc区的多肽例如抗体或免疫黏附素(参见下述定义)。

术语"Fc受体"或"FcR"用于描述与抗体的Fc区结合的受体。结合IgG抗体的FcR(γ受体)包括FcyRI、FcyRII、和FcyRIII亚类的受体，包括等位基因变体和这些受体的可选地剪接的形式。FcyRII受体包括FcyRIIA("激活受体")和FcyRIIB("抑制受体")，其具有主要在其细胞质结构域中不同的相似的氨基酸序列。激活受体FcyRIIA在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。抑制受体FcyRIIB在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见Daeron,M.,Annu.Rev.Immunol.15(1997)203-234中的综述)。FcR在Ravetch,和Kinet,Annu.Rev.Immunol 9(1991)457-492；Capel，等人，Immunomethods 4(1994)25-34；和de Haas，等人，J.Lab.Clin.Med.126(1995)330-41中综述。其他FcR，包括未来将识别的那些，在本文中由术语"FcR"涵盖。该术语还包括新生儿受体FcRn，其负责母体IgG至胎儿的转移(Guyer，等人，J.Immunol.117(1976)587和Kim，等人，J.Immunol.24(1994)249)。

如本文使用的"IgG Fc配体"意为来自任何生物体的、与IgG抗体的Fc区结合从而形成Fc/Fc配体复合物的分子，优选多肽。Fc配体包括但不限于FcyRs、FcyRs、FcyRs、FcRn、Clq、C3、甘露聚糖结合性凝集素、甘露糖受体、葡萄球菌A蛋白、链球菌G蛋白、和病毒FcyR。Fc配体还包括Fc受体同源物(FcRH)，其为与FcyR同源的Fc受体的家族(Davis,等人,Immunological Reviews 190(2002)123-136，其通过引用整体并入)。Fc配体可包括结合Fc的未发现的分子。具体的IgG Fc配体为FcRn和Fcγ受体。如本文所用的"Fc配体"意为来自任何生物体的、与抗体的Fc区结合从而形成Fc/Fc配体复合物的分子，优选多肽。

如本文所用的"Fcγ受体"、"FcyR"或"FcγR"意为结合IgG抗体Fc区并由FcyR基因编码的蛋白质家族的任何成员。在人类中，该家族包括但不限于，FcyRI(CD64)，包括同种型FcyRIA、FcyRIB、和FcyRIC；FcyRII(CD32)，包括同种型FcyRIIA(包括同种异型H131和R131)、FcyRIIB(包括FcyRIIB-1和FcyRIIB-2)、和FcyRIIc；以及FcyRIII(CD 16)，包括同种型FcyRIIIA(包括同种异型VI 58和F158)和FcyRIIIb(包括同种异型FcyRIIB-NAl和FcyRIIB-NA2)(Jefferis,等人,Immunol Lett 82(2002)57-65，其通过引用整体并入)，以及任何未发现的人FcyR或者FcyR同种型或同种异型。FcyR可来自任何生物体，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔、和猴。鼠FcyR包括但不限于FcyRI(CD64)、FcyRII(CD32)、FcyRIII(CD16)、和FCYRIII-2(CD 16-2)，以及任何未发现的鼠FcyR或者FcyR同种型或同种异型。

如本文所用的"FcRn"或"新生儿Fc受体"意为结合IgG抗体Fc区并至少部分由FcRn基因编码的蛋白质。FcRn可来自任何生物体，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔、和猴。如本领域已知的，功能性FcRn蛋白包括两种多肽，通常称为重链和轻链。轻链为β-2-微球蛋白并且重链由FcRn基因编码。除非本文另有说明，FcRn或FcRn蛋白指的是FcRn重链与β-2-微球蛋白的复合物。

“免疫缀合物"意为与一种或多种细胞毒性剂例如化学治疗剂、药物、生长抑制剂、毒素、其他抗体或放射性同位素缀合的抗体。

"抗体片段"包含全长抗体的一部分，优选其可变区，或至少其抗原结合位点。抗体片段的实例包括双抗体、Fab片段、和单链抗体分子。scFv抗体例如描述于Huston,J.S.,Methods in Enzymol.203(1991)46-88。

如本文所用的术语"单克隆抗体"或"单克隆抗体组合物"指的是单一氨基酸组成的抗体分子的制剂。

术语"人源化抗体"或"抗体的人源化形式(version)"指的是作为抗体工程化的结果重链和轻链均被人源化的抗体。人源化链典型地为其中已改变了V区氨基酸序列的链，从而以整体分析在同源性上与来源物种的胚原序列相比更接近于人胚原序列。人源化评估基于所得氨基酸序列但不基于方法本身。

如本文所用的术语"特异性结合，针对靶标，或抗靶标抗体"指的是通过ELISA测量的抗体与相应抗原(靶标)或抗原表达细胞的结合，其中所述ELISA优选包含将相应抗原涂覆至固体支持体(support)上，在允许与相应抗原或蛋白质形成免疫复合物的条件下加入所述抗体，通过使用与根据本发明的抗体结合的二抗和使用过氧化物酶介导的显色测量光密度值(OD)来检测所述免疫复合物。

根据本发明的术语"抗原”指的是用于免疫的抗原或包含所述抗原作为其蛋白序列的一部分的蛋白质。例如，对于免疫，可以使用蛋白质的细胞外结构域的片段(例如前20个氨基酸)，对于检测/分析等，可以使用蛋白质的细胞外结构域或全长蛋白质。

本文中的术语"特异性结合”或“特异性识别”意为抗体对抗原显示明显的(appreciable)亲和力，并且优选不显示显著的交叉反应性。

“明显的”结合亲和力包括以至少10^-7M、特别是至少10^-8M、更特别是至少10^-9M、或甚至更特别地至少10^-10M的亲和力结合。

“不显示显著的交叉反应性”的抗体是不会明显地结合不期望的其他蛋白质的抗体。特异性结合可以根据用于测定这类结合的任何领域公知的方法、例如通过竞争性结合分析例如ELISA来测定。

如本文所用的所有蛋白质术语指的是人蛋白质。如果意指来自其他物种的蛋白质，则将明确提及。

如本文所用的"根据本发明的抗体的可变区(或结构域)"(轻链(VL)的可变区、重链(VH)的可变区)表示直接参与抗体与抗原结合的该对轻链和重链区中的每个。可变轻链和重链区具有相同的一般结构，并且各区包含序列广泛保守、通过三个互补决定区CDR连接的4个框架(FR)区。

当本文使用时，术语"抗体的抗原结合部分"指的是负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。抗体的抗原结合部分优选包括来自"互补决定区"或"CDR"的氨基酸残基。CDR序列根据Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版.PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)定义。使用该编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含对应于可变区的FR或CDR的缩短或插入的更少或额外的氨基酸。例如，重链可变区可包括在H2的残基52后单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)和在重链FR残基82后的插入残基(如根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。可通过在抗体序列的同源区与"标准"Kabat编号的序列比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。

如本文所用的术语"癌症"可为例如肺癌、非小细胞肺(NSCL)癌、细支气管肺泡细胞肺癌(bronchioloalveolar cell lung cancer)、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌(cancerof the head or neck)、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌症、肠胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆癌(biliary cancer)、中枢神经系统(CNS)肿瘤、脊柱轴肿瘤(spinal axis tumors)、脑干胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、神经鞘瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、鳞状细胞癌、垂体腺瘤、淋巴瘤、淋巴细胞性白血病，包括任意上述癌症的顽固性形式，或上述癌症中的一种或多种的组合。优选此类癌症为乳腺癌、结肠癌、肺癌或胰腺癌。

发明详述

本发明源自使用由本发明人建立的技术，其允许生产大量具有不同特性的不同分子。

本发明人生产了超过40,000个B细胞上清液并对其进行了试验，其中他们识别了超过7,500种抗体，其在ELISA分析中结合HER受体单或寡特异性。

确定了564个分子的RNA和氨基酸序列，克隆、表达并纯化各自的抗体，生成约300个重组嵌合抗体。这种抗体的遗传修饰和纯化允许确定量的抗体的特异性生物化学试验、由此的适当定量评价以及结果在体内使用，这是因为使不需要的免疫防御反应最小化。

在体外和体内试验并比较了重组单克隆抗体。出乎意料的是，发现几种分子显示JIMT-1细胞中FcγRIIIa介导的活性的至少2倍增加，即比曲妥珠单抗/赫赛汀更高的NFAT途径的激活。

此外，发现一些抗体结合与乳腺癌疗法用的金标抗体曲妥珠单抗(TZ)和帕妥珠单抗(PZ)不同的表位。

因此，本发明涉及一种特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其包含：

a)包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的重链可变区(VH)，

其中CDR-H1区包含选自SEQ ID NO:13-18的组的氨基酸序列，

其中CDR-H2区包含选自SEQ ID NO:19-24的组的氨基酸序列，

和其中CDR-H3区包含选自SEQ ID NO:25-30的组的氨基酸序列；和

b)包含CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3的轻链可变区(VL)，和

其中CDR-L1区包含选自SEQ ID NO:31-36的组的氨基酸序列，

其中CDR-L2区包含选自SEQ ID NO:37-42的组的氨基酸序列，

和其中CDR-L3区包含选自SEQ ID NO:43-48的组的氨基酸序列。

此外，根据本发明的抗体可包含

a)包含框架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4的重链可变区(VH)，

其中FR-H1区包含选自SEQ ID NO:49-54的组的氨基酸序列，

其中FR-H2区包含选自SEQ ID NO:55-60的组的氨基酸序列，

其中FR-H3区包含选自SEQ ID NO:61-66的组的氨基酸序列；和

其中FR-H4区包含选自SEQ ID NO:67-72的组的氨基酸序列；

b)包含框架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4的轻链可变区(VL)，

其中FR-L1区包含选自SEQ ID NO:73-78的组的氨基酸序列，

其中FR-L2区包含选自SEQ ID NO:79-84的组的氨基酸序列，

和其中FR-L3区包含选自SEQ ID NO:85-90的组的氨基酸序列，和

其中FR-L4区包含选自SEQ ID NO:91-96的组的氨基酸序列。

在一个实施方案中，根据本发明的抗体为单克隆IgG抗体。

优选地，根据本发明的抗体为单克隆IgG1抗体。

根据本发明的单克隆抗体为特异性结合HER2的抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，所述抗体包含重链可变(VH)区，其与选自由SEQ IDNO:1至6和SEQ ID NO:100至101的VH区组成的组的VH区至少90％相同，和轻链可变(VL)区，其与选自由SEQ ID NO:7至12和SEQ IDNO:102至104的VL区组成的组的VL区至少90％相同。

在根据本发明的抗体中，重链可变(VH)区可与选自由SEQ ID NO:1至6和SEQ IDNO:100至101的VH区组成的组的VH区至少60％相同、优选至少70％相同、更优选至少80％相同。

在一个实施方案中，根据本发明的抗体包含重链可变区(VH)序列，其具有与选自根据本发明的VH序列、即SEQ ID NO:1至6和SEQ ID NO:100至101的组的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

优选地，抗体包含与SEQ ID NO:4的VH区至少90％相同的重链可变(VH)区，优选VH区与SEQ ID NO:4为91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同，最优选VH区包含SEQ ID NO:4。

在某些实施方案中，相对于参考序列，具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入、或删除，借此抗体保留根据本发明特异性结合相应抗原的能力。在某些实施方案中，在所述VH序列的每一个中已取代、插入和/或删除总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或删除发生于CDR以外的区域(即，在FR中)。

在优选的实施方案中，重链可变区(VH)序列选自由SEQ ID NO:1至6和SEQ ID NO:100至101的VH区组成的组。

甚至更优选的，重链可变区(VH)序列为SEQ ID NO:l、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:100或101。更优选的，VH序列为SEQID NO:4。

在根据本发明的抗体中，轻链可变(VL)区可与选自由SEQ ID NO:7至12和SEQ IDNO:102至104的VL区组成的组的VL区至少60％相同、优选至少70％相同、更优选至少80％相同。

在一个实施方案中，根据本发明的抗体包含轻链可变区(VL)，其具有与根据本发明的VL序列的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

优选地，抗体包含与SEQ ID NO:10的VL区至少90％相同的轻链可变(VH)区、优选91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同，最优选VL区包含SEQ IDNO:10。

在一些实施方案中，相对于参考序列，具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入、或删除，借此抗体保留根据本发明特异性结合相应抗原的能力。在某些实施方案中，在所述VL序列中已取代、插入和/或删除总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或删除发生于CDR以外的区域(即，在FR中)。

在优选的实施方案中，轻链可变区(VL)序列选自由SEQ ID NO:7至12和SEQ ID NO102至104的VL区组成的组。

甚至更优选的，轻链可变区(VL)序列为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103或104。

最优选的，VL序列为SEQ ID NO:10。

进一步优选的是，根据本发明的VL序列包含90位处的突变。优选地，包含来自SEQID NO:10、102、103和104的组的序列的VL序列，包含90位处的突变。优选地突变为半胱氨酸向丝氨酸的突变。然而，其也可为不同的氨基酸取代。VL序列当然也可包含如上详述的其它突变。

本发明还涉及一种抗体，其中其VH区与SEQ ID NO:1+n的VH区至少90％相同，其VL区与SEQ ID NO:7+n的VL区至少90％相同，其中n为选自由0至5组成的组的数。

本发明还涉及一种抗体，其中所述抗体包含选自由SEQ ID NO:1+n的VH区组成的组的VH区，其VL区选自由SEQ ID NO:7+n的VL区组成的组，其中n为选自由0至5组成的组的数。

本发明还涉及一种抗体，其中所述抗体包含选自以下VH区的组的VH区：所述VH区的组包含SEQ ID NO:13+n的CDR-H1区、SEQ ID NO:19+n的CDR-H2区和SEQ ID NO:25+n的CDR-H3区，其中n为选自由0至5组成的组的数。

此外，根据本发明的抗体可包含选自以下VL区的组的VL区：所述VL区的组包含SEQID NO:31+n的CDR-L1区、SEQ ID NO:37+n的CDR-L2区和SEQ ID NO:43+n的CDR-L3区，其中n为选自由0至5组成的组的数。

根据本发明的抗体还可包含选自以下VH区的组的VH区：所述VH区的组包含SEQ IDNO:13+n的CDR-H1区、SEQ ID NO:19+n的CDR-H2区和SEQ ID NO:25+n的CDR-H3区，其中所述抗体包含选自以下VL区的组的VL区：所述VL区的组包含SEQ ID NO:31+n的CDR-L1区、SEQID NO:37+n的CDR-L2区和SEQ ID NO:43+n的CDR-L3区，其中n为选自由0至5组成的组的数。

根据本发明的"n为选自由0至5组成的组的数"意为选自0、1、2、3、4和5的组的数。根据本发明的数"n"意指对于同一抗体、其重链和轻链、其可变区和CDR区是相同的。

此外，根据本发明的抗体可包含VH区和VL区，所述VH区和VL区包含选自由C074、C031、B106、B100、AK57、B115组成的组的抗体的各自的CDR1、CDR2和CDR3区和各自的FR1、FR2、FR3和FR4区。

优选地，抗体包含VH区和VL区，所述VH区和VL区包含命名为B100(对应于MABDB100)的抗体的各自的CDR1、CDR2和CDR3区和各自的FR1、FR2、FR3和FR4区。

优选B100为人源化抗体。

优选地，根据本发明的抗体包含SEQ ID NO.:1和7。在另一实施方案中，根据本发明的抗体包含SEQ ID NO.:2和8。根据本发明的抗体还可包含SEQ ID NO.:3和9或者SEQ IDNO.:4和10、或者SEQ ID NO.:5和11、或者SEQ ID NO.:6和12。

在根据本发明的进一步优选的实施方案中，抗体包含SEQ ID NO.:1、7和98。在另一实施方案中，根据本发明的抗体包含SEQ ID NO.:2、8和98。根据本发明的抗体还可包含SEQ ID NO.:3、9和98，或者SEQ ID NO.:4、10和98，或者SEQ ID NO.:5、11和99或者SEQ IDNO.:6、12和98。

在根据本发明的进一步优选的实施方案中，抗体包含SEQ ID NO.:1、7和97。在另一实施方案中，根据本发明的抗体包含SEQ ID NO.:2、8和97。根据本发明的抗体还可包含SEQ ID NO.:3、9和97，或者SEQ ID NO.:4、10和97，或者SEQ ID NO.:5、11和97或者SEQ IDNO.:6、12和97。

在根据本发明的进一步优选的实施方案中，抗体包含SEQ ID NO.:1、7、97和98。在另一实施方案中，根据本发明的抗体包含SEQ ID NO.:2、8、97和98。根据本发明的抗体还可包含SEQ ID NO.:3、9、97和98，或者SEQ ID NO.:4、10、97和98，或者EQ ID NO.:5、11、97和99或者SEQ ID NO.:6、12、97和98。

本发明还涉及特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其包含：

a)重链可变区(VH)，其包含FR-H1、CDR-H1、FR-H2、CDR-H2、FR-H3、CDR-H3和FR-H4，

其中所述CDR-H1区包含根据下式的氨基酸序列：

(S/N)₁-(Y/S)₂-(N/A/G/Y)₃-(M/V/Y)₄-(G/A/S/M)₅-(O/C)₆

其中所述CDR-H2区包含根据下式的氨基酸序列：

(I/C)₁-(I)₂-(N/S/Y)₃-(H/A/S/G)₄-(G/I/S)₅-(D/G/S)₆-(N/T/F/D/S)₇-(T/A/N/S)₈-(Y/H/T/S)₉-(T/Y/W)₁₀-(F/A/Y)₁₁-(S/A/Y)₁₂-(W/A/S)₁₃-(W/A/S)₁₄-(K/A/W)₁₅-(G/A/K)₁₆-(O/G/K)₁₇-(O/AG)₁₈

和其中所述CDR-H3区包含根据下式的氨基酸序列：

(G/S/A/D)₁-(A/Y/D/V/L/Q)₂-(A/T/D/V/Y/I)₃-(P/A/S/G/Y)₄-(G/N/S/D)₅-(D/G/S/Y)₆-(G/T/N/L/S)₇-(R/A/G)₈-(Y/F/L/G)₉-(O/N/G/Y)₁₀-(O/I/Y/L)₁₁-(O/F)₁₂-(O/S)₁₃-(O/L)₁₄

b)轻链可变区(VL)，其包含FR-L1、CDR-L1、FR-L2、CDR-L2、FR-L3、CDR-L3和FR-L4，

其中所述CDR-L1区包含根据下式的氨基酸序列：

(Q)₁-(A)₂-(S)₃-(Q)₄-(S)₅-(I)₆-(G/S/Y)₇-(T/N/S/I)₈-(Y/A/L)₉-(L)₁₀-(G/A/S)₁₁

其中所述CDR-L2区包含根据下式的氨基酸序列：

(G/Y/S/K)₁-(A)₂-(S)₃-(N/S/T)₄-(L)₅-(E/A)₆-(F/S)₇

和其中所述CDR-L3区包含根据下式的氨基酸序列：

(Q)₁-(C/N/S)₂-(S/T/N)₃-(A/D/N/Y)₄-(Y/V/A/G)₅-(G/S)₆-(G/S)₇-(R/N/V/Y/S)₈-(Y/S)₉-(V/S/L)₁₀-(G/A/W)₁₁-(G/A/T/F/E)₁₂-(O/G)₁₃-(O/A)₁₄。

这里的″0″表示在该位置处不具有氨基酸。

在一个优选的实施方案中，本发明的抗体包含CDR-L3的2位处的丝氨酸。

最优选的，根据本发明的抗体包含：包含SEQ ID NO 16的CDR-H1区，包含SEQ IDNO：22的CDR-H2区，包含SEQ ID NO：28的CDR-H3区，和包含SEQ ID NO：34的CDR-L1区，包含SEQ ID NO：40的CDR-L2区，包含SEQ ID NO：46的CDR-L3区。

根据本发明的单克隆抗体可为兔抗体。在优选的实施方案中，本发明的抗体为兔/人嵌合抗体。在优选的情况下，抗体为人源化抗体。

因此，在优选的实施方案中，根据本发明的抗体为包含包括FR-H1、CDR-H1、FR-H2、CDR-H2、FR-H3、CDR-H3和FR-H4的重链可变区(VH)的人源化抗体，或其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其包含：

其中所述CDR-H1区包含根据下式的氨基酸序列：

(S/N)₁-(Y/S)₂-(N/A/G/Y)₃-(M/V/Y)₄-(G/A/S/M)₅-(O/C)₆

其中所述CDR-H2区包含根据下式的氨基酸序列：

和其中所述CDR-H3区包含根据下式的氨基酸序列：

其中所述CDR-L1区包含根据下式的氨基酸序列：

其中所述CDR-L2区包含根据下式的氨基酸序列：

(G/Y/S/K)₁-(A)₂-(S)₃-(N/S/T)₄-(L)₅-(E/A)₆-(F/S)₇

和其中所述CDR-L3区包含根据下式的氨基酸序列：

优选地，根据本发明的抗体为包含以下的人源化抗体：包含SEQ ID NO 16的CDR-H1区，包含SEQ ID NO：22的CDR-H2区，包含SEQ ID NO：28的CDR-H3区，和包含SEQ ID NO:34的CDR-L1区，包含SEQ ID NO:40的CDR-L2区，包含SEQ ID NO:46的CDR-L3区。

本发明还涵盖特异性结合HER2的抗体，或其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其中所述抗体结合人Fc受体并诱导FcR介导的信号传导途径。

优选地，根据本发明的抗体在与商购可得的抗体相比时显示FcR介导的信号传导途径的增加的诱导。

出乎意料的是，本发明人识别了几个显示FcγRIIIa介导的活性的至少50倍增加(FoI：诱导倍数(Fold of induction))的分子(参见图2c)，实施例1)，即，NFAT途径的激活比曲妥珠单抗高至少2倍。曲妥珠单抗显示26的最大诱导倍数(FoI)(参见图2a))。

更具体地，根据本发明的抗体可使FcγRIIIa分析中的Fc受体信号传导活性增加至少10倍、优选至少20倍、更优选至少50倍、最优选70倍以上(参见实施例1，图2b)c))。

优选的是根据本发明的抗体使FcγRIIIa分析中的Fc受体信号传导活性增加17倍、优选22倍、更优选50倍和最优选70倍。

根据本发明的抗体比商购可得的抗体更有效。

在SBKR-3细胞中，根据本发明的抗体，显示在52ng/ml的EC50下优选超过100倍，更优选超过110倍、120倍，更优选超过130倍的FcR信号传导的刺激。优选的抗体可在52ng/ml的EC50下使FcR信号传导增加132倍(参见图6)。这反应了比曲妥珠单抗高的信号传导效力。曲妥珠单抗在81ng/ml的EC50下显示相当的信号传导增加。

这种与癌症疗法中使用的常规抗体相比增加的活性清楚地显示了其用于治疗HER2介导的疾病的优越性和突出的潜力。

为了发现新的、比商购可得的和常规用于癌症疗法的抗体更有效的单克隆抗体，本发明人选择了最具前景的候选抗体并在竞争分析中对其进行试验(实施例2)。

出乎意料的是，发现几个分子结合与乳腺癌疗法用的金标抗体曲妥珠单抗(TZ)和帕妥珠单抗(PZ)不同的表位，即显示不同且独特的作用模式。与其在NFAT途径刺激分析中增加的活性(实施例1，图2)组合，差异结合特征使其成为用于治疗HER2-介导的疾病的理想的新型试剂。

因此，根据本发明的抗体结合与曲妥珠单抗不同的表位。优选地，根据本发明的抗体还结合与帕妥珠单抗不同的表位。

这意味着根据本发明的抗体在表位竞争分析中不与曲妥珠单抗竞争(图3)。

还优选的是，根据本发明的抗体在表位竞争分析中不与帕妥珠单抗竞争。除了命名为B106和B115的抗体以外，优选抗体在表位竞争分析中不与帕妥珠单抗竞争(图3)。

根据本发明的抗体当提及与其靶标结合时具有非常强大的优势。它们显示与其抗原HER 2的强结合能力，但对其他受体却没有。在生化酶联免疫吸附测定(ELISA-参见实施例3和4)中研究抗体的结合性质，并示例于图4、5和7。

优选的根据本发明的抗体，在实施例3中描述的实验中显示小于8ng/ml、优选超过6ng/ml的半数最大有效浓度(EC50)。优选的抗体，MABD B100，显示5.2ng/ml的EC50，这与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的EC50是具有可比性的(参见图4)。

引人注目的是，在其中HER2在SK-BR-3细胞系中表达的实验中根据本发明的抗体还显示与其抗原的非常强的结合(参见实施例5)。优选地，抗体显示小于100ng/ml、优选小于80ng/ml的EC50。优选的根据本发明的抗体，MABD B100，显示78ng/ml的EC50，这与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的EC50是具有可比性的。

根据本发明的抗体的结合性质也是非常特异性的。它们示出与HER 2的强结合，但对同源受体HER1、HER3或HER 4却没有。这示例于图7。引人注目的是，本发明人发现这独立于所用浓度。所有试验抗体在1ng/ml至2000ng/ml的浓度范围内都显示对HER2的特异性结合。甚至是在超过HER2ELISA的EC50的100倍的浓度下，也没有检测到与HER1、HER3和HER4结合的信号。

本发明人还发现根据本发明的抗体不仅结合人HER2，而且还可能会能够结合HER2直向同源物(orthologues)。优选根据本发明的抗体显示与人和猕猴HER2受体的强结合。它们可显示与大鼠HER2受体的部分结合。如图7b)所示，根据本发明的各种抗体与人和猕猴HER2受体的结合处在可比的优势下，具有类似的EC50值，且所试验的抗体还显示对大鼠HER2的部分反应性(EC50>100ng/ml)，但对小鼠(murine)HER2没有反应性。

出乎意料地，并且与商购可得的抗体和现有技术的抗体形成对照的是，本发明人发现本发明的抗体能够以与细胞毒性药物如喜树碱可比的效力诱导细胞凋亡。这是一种将会增加具有不同作用模式的其他HER2抗体活性的显著的活性。不存在附加毒性的风险。与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成对照的，与阳性对照喜树碱相比，本发明的抗体能够在SK-BR-3细胞系实验中的至少60％、优选超过65％、超过70％、75％、80％且最优选超过85％的细胞中诱导细胞凋亡。在本发明的一个实施方案中，抗体在75％的细胞中显示细胞凋亡的诱导，与曲妥珠单抗的仅10％和帕妥珠单抗的12％形成对照(图8)。

如前所述，根据本发明的单克隆抗体可为兔抗体。优选地，其为兔/人嵌合抗体。在进一步优选的情况中，抗体为人源化抗体。

根据本发明的抗体的人源化形式维持它们嵌合形式的有利性质。例如，它们保留其强结合能力和效力。优选的根据本发明的人源化抗体显示小于10ng/ml的EC50。在其它实施方案中，抗体显示小于9ng/ml、小于8ng/ml、小于7ng/ml或小于6ng/ml、最优选5.3ng/ml的EC50。图9示出一些优选的本发明抗体的实例及其效力。

另外，根据本发明的抗体的人源化形式在SK-BR-3实验中显示强结合能力(参见例如图10、实施例4)。优选的根据本发明的人源化抗体显示小于80ng/ml的EC50。在其它实施方案中，抗体显示小于70ng/ml、小于60ng/ml、小于50ng/ml或小于40ng/ml，或者最优选小于20ng/ml的EC50。图10示出一些优选的本发明抗体的实例及其效力。

根据本发明的人源化抗体还能够诱导强的Fcγ-受体信号传导。优选地，Fcy信号传导与嵌合形式抗体的信号传导具有可比性或者更有效。还优选的是，Fcy信号传导的诱导比商购可得的抗体更强。在本发明的某些实施方案中，人源化抗体具有小于300ng/ml、优选小于200ng/ml、小于100ng/ml、小于95ng/ml和最优选小于60ng/ml的EC50。

如前所述，与商购可得的抗体和现有技术的抗体形成对照的是，本发明的抗体能够诱导细胞凋亡。这对于抗体的人源化形式也是成立的。本发明的人源化抗体显示至少60％、优选超过65％、超过70％、75％、80％和最优选超过85％的细胞凋亡的诱导(图12、实施例6)。

引人注目地且与商购可得的抗体形成对照的是，本发明人出乎意料地发现本发明的抗体能够大幅减轻小鼠中的肿瘤负荷(tumor burden)。在HTM-SK-BR-3肿瘤模型中，与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成对照的是，根据本发明的抗体能够显著地减小肿瘤的大小和癌细胞量。

当与曲妥珠单抗相比时，优选的本发明抗体可以使肿瘤细胞数减少超过80％、优选超过85％和最优选超过90％(参见图13)。

当通过流式细胞术分析组织学切片和不同组织的肿瘤细胞数时，本发明人也发现根据本发明的抗体的强抗肿瘤和抗转移活性。与商购可得的抗体如曲妥珠单抗和帕妥珠单抗以及现有技术的其它抗体形成对照的是，本发明的抗体强力地减少的肿瘤细胞数。例如，在用所述抗体处理后在肺、肝和脑组织中肿瘤细胞数减少(参见图14a)和b))。

此外，本发明的抗体可有效地抑制肿瘤细胞的转移，与商购可得的抗体以及现有技术的其它抗体形成对照。例如，与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成对照的是，所述抗体可抑制肿瘤细胞向骨髓中的播散(dissemination)(图15)。

由于特有的和有利的性质，根据本发明的抗体特别适于治疗其中其靶抗原的调节异常是根本原因的疾病。由于这些特有的性质，它们比商购可得的抗体和现有技术的其它抗体更加适合。

因此，根据本发明的抗体特别用于治疗其中HER2的调节异常为根本原因的疾病。

因此，本发明还涵盖根据本发明的抗体用于治疗HER-2介导的疾病。

因此，本发明还涉及患者中HER-2介导的疾病的治疗方法，其包括给予患者药学上有效量的根据本发明的抗体。

此外，本发明涉及药物组合物，其包含药学上可接受的载体和治疗有效量的根据本发明的抗体。

如本文所用的，"药学载体"包括生理上相容的任意的和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、以及等渗和延迟吸收剂等。优选地，载体适用于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮给药(例如注射或输注)。

本发明的组合物可通过本领域已知的各种方法给予。如本领域技术人员将理解的，给药途径和/或模式将根据期望的结果而不同。为了通过某些给药途径给予本发明的化合物，可需要用材料包衣化合物、或共同给予化合物与材料，从而防止化合物失活。例如，化合物可在合适的载体例如脂质体和稀释剂中给予受试者。药学上可接受的稀释剂包括盐水和水性缓冲溶液。药学载体包括用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌水溶液或分散液和无菌粉末。这类介质和试剂用于药学活性物质的用途是本领域已知的。

如本文使用的短语"肠胃外给药"和"肠胃外给予"意为除了肠内和局部给药以外的给药模式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内(intraorbital)、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。

这些组合物还可包括佐剂例如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可以通过灭菌程序，见上文，和通过包括各种抗细菌和抗真菌剂如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、和山梨酸等来确保防止存在微生物。还可期望在组合物中包含等渗剂，例如糖和氯化钠等。此外，可注射药学形式的延长吸收可通过包含延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来进行。无论所选的给药途径，可以以合适的水合形式使用的本发明的化合物和/或本发明的药物组合物通过本领域技术人员已知的常规方法配制为药学上可接受的剂型。可改变本发明的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平，从而获得有效实现对于特定患者、组合物、和给药模式的期望的治疗反应而不对患者有毒性的活性成分量。所选剂量水平将取决于各种药物代谢动力学因素，包括使用的本发明的特定组合物的活性，给药途径，给药时间，使用的特定化合物的排泄速率，治疗时长，与使用的特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料，治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康和先前病史，以及医学领域广泛公知的类似因素。

本发明的一个方面是根据本发明的药物组合物用于治疗癌症，如本申请中所定义的。

本发明的另一方面是治疗患者中HER-2介导的疾病的方法，其包括给予患者根据本发明的药物组合物。此类HER-2介导的疾病可包括癌症。

如本文所用的术语"癌症"可为例如肺癌、非小细胞肺(NSCL)癌、细支气管肺泡细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌症、肠胃癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、脊柱轴肿瘤、脑干胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、神经鞘瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、鳞状细胞癌、垂体腺瘤、淋巴瘤、淋巴细胞性白血病，包括任意上述癌症的顽固性形式，或上述癌症中的一种或多种的组合。优选此类癌症为乳腺癌、结肠癌、肺癌或胰腺癌。最优选所述癌症为乳腺癌。

实施例

以下实施例与附图和表格结合使用以说明本发明。

实施例1：FcγRIIIa信号传导分析

FcγRIIIa信号传导分析，为例如从Promega商购可得的，允许早期检测FcγRIIIa受体信号传导，因此用于有效的抗体候选物选择。

分析原理：

将显示各自的抗原(HER2)的靶细胞(Jurkat)用样品抗体和JIMT-1细胞温育。Jurkat细胞系稳定表达对人IgG Fc片段具有高亲和力的FcγRIIIa受体V158，并含有允许诱导荧光素酶表达的NFAT-RE-启动子位点。在抗体与靶(HER2表达)细胞结合时，Fc介导抗体与FcγRIIIa受体的结合，激活NFAT途径，由此实现荧光素酶的表达。荧光素酶底物(Luciferin)的添加激活导致光致发光的途径，其是可以测量的，并且定性地和半定量地与抗体和受体的结合、即与其免疫学活性相关。荧光素酶的信号强度与激活的受体数量相关。

分析步骤

第1天

-将例如25μl培养基中的7500或15000个JIMT-1细胞添加至微量滴定板的各个孔中。

-在37℃和5％CO₂下温育细胞20至24小时。

第2天

-平衡荧光素酶分析缓冲液和荧光素酶底物至室温。

FcγRIIIa分析缓冲液的制备：

-将FCS用少量的IgG("低IgG FCS"Hyclone der Firma Thermo Scientific SH30898.03)在37℃、水浴中解冻。

-将"低IgG FCS"添加至DMEM细胞培养基(终浓度：4％)和

-在水浴中升温至37℃。

附随的：

-用移液管机械臂(pipette robot)(CyBi-Well vario,CyBio)从各孔中除去23μL培养基。添加16μL样品抗体(在"低IgG FCS"培养基中稀释)和8μL效应细胞-悬浮液(c＝500000/ml，4000细胞/孔)。

-温育6小时，接着添加20μL荧光素酶分析试剂(缓冲液和底物，Promega Corp.)并在室温下温育10分钟。

-发光的光度测量(Tecan infinite M1000PRO)

-减去由NFAT途径的非特定的、自发的激活产生的随机发光：

FoI＝(RLU-样品-RLU-空白):(RLU-效应子-RLU-空白)

样品：抗体样品

空白：盲值(blind value)(仅缓冲液)

效应子：没有抗体的培养基/缓冲液中的效应细胞

FoI：信号-空白之比作为x倍激活(诱导倍数)

RLU：光度发光(相对发光单元)

根据FcγRIIIa激活的诱导倍数(FoI)选择候选抗体用于随后的嵌合抗体的生成。然后在后续实验中测定所得重组抗体。

实施例2：表位竞争分析

分析原理

-NUNC Maxisorp 384孔微量滴定板用结合单克隆参考抗体的抗人Fc涂布。将该板命名为"分析板"。

-用靶抗原(这里：HER2，用His标签标记)并用抗his抗体(用POD标记)预温育样品抗体

-将预温育混合物添加至分析板。

材料：

板：板1：384孔NUNC Maxisorp板；Cat.No.464718(分析板)

板2：预温育板：来自Axygen的PP-板或Deepwell的384板

包被抗体：山羊抗人IgG(Fc特异性)；Sigma；目录号I 2136；

分析浓度：0.5μg/ml

蛋白质：重组人ErbB2/HER2Fc嵌合体；R&D Systems；目录号1129-ER；

工作浓度：体积依赖的(分析浓度0.3μg/mL)

标准抗体：赫赛汀；Roche；浓度：稀释依赖的；

检测抗体：单克隆抗-多聚组氨酸过氧化物酶偶联物；Sigma；目录号A7058；工作浓度：体积依赖的(参见5.1.1/分析浓度0.5μg/mL/例如(90+5+5)μL＝20*0.5μg/ml＝6μg/ml)

PBS：盒中的缓冲液，预混PBS缓冲液，10x；Roche Applied Sciences；目录号11666789001

BSA：来自牛血清的牛血清白蛋白级分V；

Roche Applied Sciences；目录号10735086001

Tween 20：Tween 20；Sigma-Aldrich；目录号P1379

TMB：TMB溶液；Merck；目录号CL07

HCl：1M Titripur盐酸；Merck；目录号1090571000

ELISA缓冲液：PBS、0.5％BSA、0.05％Tween

洗涤缓冲液：PBS、0.05％Tween

封闭缓冲液：PBS、2％BSA、0.05％Tween

分析步骤

1.用20μl PBS中的山羊抗人IgG(Fc特异性)包被NUNC Maxisorp板并室温温育1小时(板1)。

2.用90μl洗涤缓冲液/板进行3次洗涤步骤

3.用90μl封闭缓冲液室温温育板1小时

4.用90μl洗涤缓冲液/板进行3次洗涤步骤

5.用20μl ELISA缓冲液中的一抗(0.2μg/ml)RT温育板1小时。

附随的在不同板(板2)中预温育混合物的制造：将90μl样品抗体混入ELISA缓冲液(工作浓度：>2μg/ml；对照抗体为相同浓度)，各自只有含5μl带HIS标签的蛋白(如HER2-HIS标签)的ELISA缓冲液(空白)。添加5ml抗HIS POD-抗体并室温温育混合物1小时。

6.用90μl洗涤缓冲液对含一抗的板进行3次洗涤。

7.将20μl来自板2的预温育混合物加入板1的孔中并室温温育1小时

8.用洗涤缓冲液洗涤6次

9.向各孔添加25μl TMB。

10.充分显色后，通过25μl HCl停止反应。

11.测量450nm/620nm下的吸光度。

实施例3：HER 2生物化学ELISA(方案1)

材料：

板：384孔NUNC Maxisorp板；NUNC；目录号464718

包被蛋白：

人Her1(重组人EGFR/ErbBl Fc嵌合体；R&D Systems；目录号344-ER)

人Her2(重组人ErbB2/HER2Fc嵌合体；R&D Systems；目录号1129-ER)

人Her3(重组人ErbB3/Her3Fc嵌合体；R&D Systems；目录号348-RB)

人Her4(重组人ErbB4/HER4Fc嵌合体；R&D Systems；目录号1131-ER)

cyno Her2(猕猴HER2/ErbB2蛋白；Sino Biological；目录号90295-C08H)

大鼠Her2(大鼠HER2/ErbB2蛋白；Sino Biological；目录号80079-RCCH)

小鼠Her2(小鼠Her2/ErbB2蛋白；Acro Biosystems；目录号ER2-M5220)

一抗：曲妥珠单抗

帕妥珠单抗

MABD B100

MAB-16-0160

MAB-16-0161

MAB-16-0163

MAB-16-0165

检测抗体：抗人Fab2POD-抗体；AbD Serotec；STAR 126P

BSA：来自牛血清的牛血清白蛋白级分V；Roche Applied Sciences；目录号10735086001

Tween 20：Tween 20；Sigma-Aldrich；目录号P1379

TMB：TMB溶液；Invitrogen；目录号SB02

HCl：1M Titripur盐酸；Merck；目录号1090571000

ELISA缓冲液：PBS、0.5％BSA、0.05％Tween

洗涤缓冲液：PBS、0.1％Tween

封闭缓冲液：PBS、2％BSA、0.05％Tween

样品：ELISA缓冲液中的稀释是项目依赖的(project dependent)(对于高浓度的IgG，推荐1:2稀释)

步骤：

1.在PBS中将所需的包被蛋白稀释至0.5μg/ml并将12.5μL添加至384孔NUNCMaxisorp板。

2.室温温育1小时。

3.用洗涤缓冲液洗涤3次。

4.向各孔添加90μL封闭缓冲液并室温温育1小时。

5.用洗涤缓冲液洗涤3次。

6.添加12.5μL在ELISA缓冲液中稀释为所需浓度的所需一抗。

7.室温温育1小时。

8.用洗涤缓冲液洗涤3次。

9.添加12.5μL在Elisa缓冲液中1:5000稀释的检测抗体，并室温温育1小时。

10.用洗涤缓冲液洗涤6次。

11.添加15μL TMB。

12.在充分的显色时间后添加15μL HCl。

13.在450nm/620nm下读取吸光度。

14.利用Excel Fit(拟合模型：205，对所有4个参数预拟合，对任何参数都没有限制，EC₅₀＝参数C)分析数据

实施例4：与SK-BR-3的细胞结合(方案2)

材料：

细胞培养板：黑色，384孔，透明且平底的康宁细胞培养板；Corning；目录号3764

细胞：SK-BR-3；ATCC；目录号HTB-30

一抗：曲妥珠单抗

帕妥珠单抗

MABD B100

MAB-16-0160

MAB-16-0161

MAB-16-0163

MAB-16-0165

检测抗体：AF488-conj.AffiniPureα-HulgG(H&L)Fragm.Speci.；Dianova；目录号109-546-003

荧光染料：Hoechst；Invitrogen；目录号H3570

FCS：HyClone特级胎牛血清(Fetal Bovine Serum defined)；ThermoScientific；目录号SH 30070.03

细胞培养基：含稳定的谷氨酰胺的Mc Coy's，其中含2.2g/l NaHCO3；PANBiotech；目录号P04-06500+10％FCS

Tween 20：Tween 20；Sigma-Aldrich；目录号P1379

细胞洗涤缓冲液：PBS、0.05％Tween

步骤：

1.在细胞培养板中，添加20μL在细胞培养基中稀释到所需浓度/多个浓度的一抗。

2.在相同的孔中，接种在20μL细胞培养基中的细胞(1,000个细胞/孔)。

3.37℃和5％CO2下温育4小时或过夜。

4.用75μl细胞洗涤缓冲液洗涤三次。

5.在细胞培养基中稀释检测抗体到250ng/ml的浓度并将20μl加入试验孔。

6.37℃和5％CO2下温育4小时

7.在细胞培养基中稀释荧光染料至22.5μg/ml的浓度并将5μl加入试验孔。

8.室温温育10分钟-l小时。

9.利用Celllnsight^TM高内涵筛选平台(High Content Screening Platform)(每孔最小对象物：250个细胞)分析抗体与细胞的结合

10.利用Excel Fit(拟合模型：205，对所有4个参数预拟合，对任何参数都没有限制，EC₅₀＝参数C)分析数据

实施例5：Fcy-受体信号传导(方案3)

材料：

板：带盖的白色平底384孔分析板；Corning；目录号3570

靶细胞：SKBR-3；ATCC；目录号HTB-30

效应细胞：ADCC生物分析效应细胞；Promega；目录号G7011

标准mAb：曲妥珠单抗

帕妥珠单抗

MABD B100

MAB-16-0160

MAB-16-0161

MAB-16-0163

MAB-16-0165

ADCC分析缓冲液：RPMI 1640培养基&低IgG血清；Promega；目录号G7010

FCS：HyClone特级胎牛血清；Thermo Scientific；目录号SH 30070.03

靶细胞培养基：含稳定的谷氨酰胺的Mc Coy's，其中含2.2g/l NaHCO3；PANBiotech；目录号P04-06500+10％FCS

荧光素酶分析试剂：BioGlo^TM荧光素酶分析缓冲液&BioGlo^TM荧光素酶分析底物；Promega；目录号G7010

步骤：

第1天：

1.接种靶细胞：25μL靶细胞培养基中2500个细胞/孔

2.温育20-24小时，37℃，5％CO2。

第2天：

3.根据制造商的说明制备荧光素酶分析试剂。

4.根据制造商的说明制备ADCC分析缓冲液。

5.从分析板的所有孔中移除23μL培养基。向板每孔轻轻添加8μL预热的ADCC分析缓冲液。

6.在ADCC分析缓冲液中稀释所需的一抗至所需浓度，并向孔添加8μL抗体稀释液。作为空白，添加ADCC分析缓冲液。将板存放在试验台上。

7.在37℃水浴中解冻效应细胞(13x10⁶个细胞/小瓶；不要颠倒)。

8.通过吸打轻轻混合细胞。向24.57ml预热的ADCC分析缓冲液添加630μL细胞悬浮液。

9.向板每孔添加8μL效应细胞悬浮液(4000个细胞/孔)。

10.盖上板并在37℃、5％CO2下温育6小时。

11.从培养箱中移出板并平衡至室温(15分钟)。

12.向所有试验中的孔添加20μL荧光素酶分析试剂。

13.室温温育5-30分钟。

14.使用读板器测量发光并根据BioGlo^TM分析制造商的说明来计算结果。

15.利用Excel Fit(拟合模型：205，对所有4个参数预拟合，对任何参数都没有限制，EC₅₀＝参数C)分析数据

实施例6：细胞凋亡分析(方案5)

材料：

细胞培养板：6孔细胞培养板，Nunclon表面；Nunc；目录号：140685

分析板：96-DWP DNA LoBind板；Eppendorf；目录号：0030602.307

细胞：SKBR-3；ATCC；目录号HTB-30

FCS胎牛血清南非低IgG(Fetal Bovine Serum South Africa Low IgG)(PAN；目录号1552-P120909)

细胞-和分析-培养基：DMEM；PAN；目录号：P04-04510+5％FCS

一抗：帕妥珠单抗

曲妥珠单抗

MABD B100

MAB-16-0160

MAB-16-0161

MAB-16-0163

MAB-16-0165

试剂：(A)FITC缀合的膜联蛋白V；Immunotools；目录号：31490013X2

(C)喜树碱；Sigma-Aldrich；目录号：C9911

(D)DRAQ7^TM；Abcam；目录号：ab109202

结合缓冲液：0.1M HEPES；Gibco；目录号：15630-106+1.4M NaCl；Sigma；目录号：S7653-1kg+25mM CaCl2；Fluka；目录号：21114-1L

方案：

1.在细胞培养板的每孔2ml细胞培养基中接种细胞(8x10⁴个细胞/孔)。温育72h；37℃；5％CO2。

2.除去培养基。

3.向板添加2mL分析培养基(对照孔)或者在分析培养基中稀释到所需浓度的一抗。

4.温育48h；37℃；5％CO2。

5.向一个或多个孔添加5μl喜树碱(2mM)作为阳性对照。

6.温育24h；37℃；5％CO2。

7.将上清液从各孔转移到单独的15ml管

8.用1.5ml PBS洗涤各孔并将上清液转移到其各自的同一15ml管。

9.向各孔添加0.5ml胰蛋白酶，37℃温育，然后用1.5ml细胞培养基终止并将所有液体转移到其各自的15ml管。

10.向各15ml管添加5ml PBS。

11.4℃,300g离心15ml管3分钟，并弃去上清液

12.添加140μL预冷的结合缓冲液(4℃)，重悬并将70μL转移至分析板。

13.添加5μL预冷的膜联蛋白(4℃)，混合并在冰上/暗处温育20分钟。

14.添加2μL在结合缓冲液中1:100稀释的DRAQ7^TM。

15.添加120μL预冷的结合缓冲液(4℃)。混合并在冰上/暗处温育7分钟。

进行流式细胞术分析。

附图说明

图1：序列(单字母编码的氨基酸)

完整的可变区(VR)序列：

重链：完整的VH：SEQ ID NO:1-6和SEQ ID NO:100-101

轻链：完整的VL：SEQ ID NO:7-12和SEQ ID NO:102-104

VL序列可在90位包含半胱氨酸向丝氨酸的突变。

互补决定区(CDR)：

重链：CDR-H1：SEQ ID NO:13-18

CDR-H2：SEQ ID NO:19-24

CDR-H3：SEQ ID NO:25-30

轻链：CDR-L1：SEQ ID NO:31-36

CDR-L2：SEQ ID NO:37-42

CDR-L3：SEQ ID NO:43-48

框架区(FR)：

重链：FR-H1：SEQ ID NO:49-54

FR-H2：SEQ ID NO:55-60

FR-H3：SEQ ID NO:61-66

FR-H4：SEQ ID NO:67-72

轻链：FR-L1：SEQ ID NO:73-78

FR-L2：SEQ ID NO:79-84

FR-L3：SEQ ID NO:85-90

FR-L4：SEQ ID NO:91-96

恒定区(CR)：

轻链：CR-L：SEQ ID NO:97

重链：CR-H：SEQ ID NO:98-99

图2：通过FcγRIIIa信号传导分析的抗体选择

分析步骤的详情公开于实施例1。候选抗体根据其FcγRIIIa信号传导的诱导倍数(FoI)进行选择。

a)通过曲妥珠单抗的FcγRIIIa信号传导的FoI，依赖于抗体浓度。最大FOI为约26。

b)FcγRIIIa信号传导通过所选择的候选抗体的FoI。最大FoI为>75。

c)候选抗体根据其FoI进行选择以产生重组嵌合抗体。在后续实验中示出嵌合抗体的FcγRIIIa信号传导结果。

图3：表位竞争分析

根据本发明的所选择的抗体没有与曲妥珠单抗竞争其表位，而赫赛汀(阳性对照)使POD信号减少了超过80％(+++)。作为阳性对照，帕妥珠单抗在预温育混合物中的存在以浓度依赖性方式使POD信号减少超过80％(+++)。B106示出与帕妥珠单抗的表位竞争，而B115示出对帕妥珠单抗表位的部分竞争。任何其它根据本发明的所选择的候选抗体中都未观察到表位竞争。

图4：HER2生物化学ELISA

所示结果在如实施例3中所述的实验中获得。

优选的根据本发明的抗体MABD B100示出5.2ng/ml的EC50，这与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的EC50是具有可比性的。

图5：与SK-BR-3细胞系的结合

所示结果来自如实施例4所述的实验。

优选的根据本发明的抗体MABD B100示出78ng/ml的EC50，这与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的EC50是具有可比性的。

图6：Fcγ-受体信号传导

所示结果在如实施例5中所述的实验中获得。

优选的根据本发明的抗体MABD B100在52ng/ml的EC50下示出132倍的FcR信号传导的刺激。曲妥珠单抗在81ng/ml的EC50下显示可比的信号传导强度。这突出了与商购可得的抗体相比效力的提高。

图7：ELISA实验中的受体结合

在生物化学ELISA实验中试验了抗体与不同受体的结合。根据如实施例3中详述的方案(方案1)进行实验。

a)与同源HER受体的结合

在1ng/ml至2000ng/ml的浓度范围内所有试验的抗体都示出与HER2的特异性结合。甚至在超过HER2ELISA的EC₅₀的100倍的浓度下，也未检测到与HER1、HER3和HER4结合的信号。

b)与HER2的直向同源物的结合

根据本发明的抗体与人和猕猴HER2受体的结合是可比的，具有类似的EC₅₀值。抗体对大鼠HER2(EC₅₀>100ng/ml)示出部分反应性，但对小鼠HER2没有反应性。

图8：对SK-BR-3细胞系的细胞凋亡诱导

图8示出根据实施例6的方案进行的实验结果。体外温育后以膜联蛋白染色测量细胞凋亡诱导。喜树碱用作阳性对照(设为100％)。与曲妥珠单抗(10％)和帕妥珠单抗(12％)形成对照的是，MABD B100示出独特地强细胞凋亡诱导(75％)。

图9：人源化变体的HER2生物化学ELISA

示出的是根据实施例3进行的实验结果。

四种优选的人源化单克隆抗体候选物维持嵌合形式的有利体外性质。

图10：与人源化Mab变体的SK-BR-3细胞系的结合

实验根据如实施例4所述的方案进行。

四种人源化Mab变体导致嵌合形式的体外性质。

图11：人源化Mab变体的Fcγ-受体信号传导

实验根据如实施例5所述的方案进行。四种人源化Mab变体导致嵌合形式的体外性质。

图12：人源化Mab变体的细胞凋亡诱导

实验根据如实施例6所述的方案进行。喜树碱(第二行)用作阳性对照(设为100％)。优选的根据本发明的人源化抗体示出引人注目的强细胞凋亡诱导(68％至83％)。

图13-15：体内实验

体内实验在已经确立的人移植物小鼠模型(HTM)中进行(Wege等人，2011/2014/2016)。具体地，采用含SK-BR-3肿瘤细胞系的HTM模型。该模型抗曲妥珠单抗处理并显示强的播散和转移。实验包括9周的建立免疫系统、肿瘤和转移，以及12周的用5mg/kg/周腹腔注射(i.p.)抗体或安慰剂处理。

图13：MABD B100的体内特征：处理后的肿瘤负荷

在处理结束时分析具有功能性人免疫系统的动物。

用优选的根据本发明的抗体MABD B100处理，与用对照、曲妥珠单抗和帕妥珠单抗抗体处理相比，产生导致肿瘤负荷的强势减少。

通过MABD B100处理的缓解(4/5)或>95％减少(1/5)：p＝0.037相比于对照

用曲妥珠单抗和帕妥珠单抗处理没有效果：不显著

图14：MABD B100的体内特征：抗肿瘤和抗转移活性

在HTM-SK-BR-3模型中进行实验，并定性评价结果(Y/N)：通过IHC(a)并通过流式细胞术(b)的转移

a)组织化学切片中的HER2+肿瘤细胞

b)通过流式细胞术分析的HER2+肿瘤细胞

第2栏：对照：在治疗结束时具有功能性人免疫系统的动物

第3栏：用曲妥珠单抗处理

第4栏：用MABD B100处理

第5栏：用帕妥珠单抗处理

第6+7栏：由Wege等人2016包括的组织化学数据

图15：MABD B100的体内特征：肿瘤细胞向骨髓的播散

在HTM-SK-BR-3模型中进行实验并定性评价结果(Y/N)。从骨髓分离细胞并培养。扩增后，通过FACS试验细胞对处理的抗性。

对照：在处理结束时具有功能性人免疫系统的动物。

MABD B100示出有效抑制肿瘤细胞向骨髓播散。

序列表

<110> MAB发现股份有限公司(MAB DISCOVERY GMBH)

<120> HER-2结合抗体

<130> B198-0005WO1

<160> 104

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 1

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asn

20 25 30

Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Ser His Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala

85 90 95

Ala Gly Gly Ser Gly Ala Tyr Asn Leu Trp Gly Gln Gly Met Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 2

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Asn

20 25 30

Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Asn Ala Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Ile Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Ser Pro Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ser Tyr

85 90 95

Thr Ser Asn Ser Gly Ala Phe Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 3

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 3

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Tyr Ser Gly Gly Asn Ala His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr

65 70 75 80

Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp

85 90 95

Asp Ser Ser Gly Leu Arg Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 4

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 4

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Gly

20 25 30

Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Ser Gly Ser Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Lys Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Val

85 90 95

Val Pro Gly Tyr Asn Ala Gly Gly Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 5

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 5

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Tyr Ala Ile Ser Asp Asn Thr Trp Phe Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile

65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala

85 90 95

Leu Tyr Ala Gly Tyr Thr Ala Gly Tyr Tyr Phe Ser Leu Trp Gly Pro

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 6

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met Cys Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Cys Ile Tyr Gly Gly Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Ile Tyr Asp Asp Ser Gly Phe Asn Leu Trp Gly Pro

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 7

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 7

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala

20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Phe Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Ser

65 70 75 80

Gly Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Ser Ala Tyr Gly Ser Arg

85 90 95

Tyr Val Gly Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 8

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 8

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Ser

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Ser Ala Tyr Gly Ser Val

85 90 95

Tyr Val Gly Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 9

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 9

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Met

35 40 45

Ser Tyr Ala Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Asp Val Gly Ser Asn

85 90 95

Tyr Leu Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 10

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 10

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Ala Ala Gly Ser Val

85 90 95

Ser Val Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Asn

100 105 110

<210> 11

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 11

Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Ala Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Glu Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Asn Asn Gly Gly Ser Tyr

85 90 95

Ser Ser Ala Phe Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 12

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 12

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ile Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Asn Tyr Gly Ser Gly Ser

85 90 95

Ser Ser Trp Glu Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 13

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 13

Ser Tyr Asn Met Gly

1 5

<210> 14

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 14

Asn Tyr Asn Met Ala

1 5

<210> 15

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 15

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 16

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 16

Asn Tyr Gly Val Ser

1 5

<210> 17

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 17

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 18

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 18

Ser Ser Tyr Tyr Met Cys

1 5

<210> 19

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 19

Ile Ile Ser His Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 20

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 20

Ile Ile Asn Ala Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 21

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 21

Ile Ile Tyr Ser Gly Gly Asn Ala His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 22

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 22

Ile Ile Ser Gly Ser Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 23

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 23

Ile Ile Tyr Ala Ile Ser Asp Asn Thr Trp Phe Ala Ser Trp Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 24

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 24

Cys Ile Tyr Gly Gly Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 25

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 25

Gly Ala Ala Gly Gly Ser Gly Ala Tyr Asn Leu

1 5 10

<210> 26

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 26

Ser Tyr Thr Ser Asn Ser Gly Ala Phe Asn Ile

1 5 10

<210> 27

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 27

Gly Asp Asp Ser Ser Gly Leu Arg Leu

1 5

<210> 28

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 28

Gly Val Val Pro Gly Tyr Asn Ala Gly Gly Leu

1 5 10

<210> 29

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 29

Ala Leu Tyr Ala Gly Tyr Thr Ala Gly Tyr Tyr Phe Ser Leu

1 5 10

<210> 30

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 30

Asp Gln Ile Tyr Asp Asp Ser Gly Phe Asn Leu

1 5 10

<210> 31

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 31

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Gly

1 5 10

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 32

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Ala Leu Ala

1 5 10

<210> 33

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 33

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu Leu Ala

1 5 10

<210> 34

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 34

Gln Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Ala Leu Ala

1 5 10

<210> 35

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 35

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 36

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 36

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ile Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 37

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 37

Gly Ala Ser Asn Leu Glu Phe

1 5

<210> 38

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 38

Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 39

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 39

Tyr Ala Ser Ser Leu Ala Ser

1 5

<210> 40

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 40

Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 41

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 41

Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 42

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 42

Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser

1 5

<210> 43

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 43

Gln Cys Ser Ala Tyr Gly Ser Arg Tyr Val Gly Gly

1 5 10

<210> 44

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 44

Gln Cys Ser Ala Tyr Gly Ser Val Tyr Val Gly Thr

1 5 10

<210> 45

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 45

Gln Cys Thr Asp Val Gly Ser Asn Tyr Leu Gly Ala

1 5 10

<210> 46

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 46

Gln Cys Thr Ala Ala Gly Ser Val Ser Val Gly Ala

1 5 10

<210> 47

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 47

Gln Asn Asn Asn Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Ala Phe Gly Ala

1 5 10

<210> 48

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 48

Gln Ser Asn Tyr Gly Ser Gly Ser Ser Ser Trp Glu Gly Ala

1 5 10

<210> 49

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 49

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser

20 25

<210> 50

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 50

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser

20 25

<210> 51

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 51

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser

20 25

<210> 52

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 52

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser

20 25

<210> 53

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 53

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser

20 25

<210> 54

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 54

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser

20 25

<210> 55

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 55

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 56

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 56

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

1 5 10

<210> 57

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 57

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 58

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 58

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

1 5 10

<210> 59

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 59

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 60

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 60

Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala

1 5 10

<210> 61

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 61

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr

1 5 10 15

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 62

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 62

Arg Ile Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Ser

1 5 10 15

Ser Pro Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 63

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 63

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr

1 5 10 15

Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 64

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 64

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr

1 5 10 15

Ser Pro Thr Thr Lys Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 65

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 65

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr

1 5 10 15

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 66

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 66

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln Met

1 5 10 15

Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 67

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 67

Trp Gly Gln Gly Met Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 68

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 68

Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 69

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 69

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 70

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 70

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 71

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 71

Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 72

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 72

Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 73

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 73

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys

20

<210> 74

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 74

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys

20

<210> 75

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 75

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys

20

<210> 76

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 76

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys

20

<210> 77

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 77

Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Ala Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys

20

<210> 78

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 78

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys

20

<210> 79

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 79

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 80

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 80

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 81

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 81

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Met Ser

1 5 10 15

<210> 82

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 82

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 83

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 83

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Glu Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 84

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 84

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 85

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 85

Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 86

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 86

Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg Gly Ser Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Ser Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 87

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 87

Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 88

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 88

Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 89

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 89

Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 90

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 90

Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 91

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 91

Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

1 5 10

<210> 92

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 92

Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

1 5 10

<210> 93

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 93

Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

1 5 10

<210> 94

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 94

Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Asn

1 5 10

<210> 95

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 95

Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

1 5 10

<210> 96

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重组嵌合抗体

<400> 96

Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

1 5 10

<210> 97

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 97

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 98

<211> 329

<212> PRT

<213> 智人

<400> 98

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

325

<210> 99

<211> 331

<212> PRT

<213> 智人

<400> 99

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

100 105 110

Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

115 120 125

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

130 135 140

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

145 150 155 160

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

165 170 175

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

180 185 190

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

195 200 205

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

210 215 220

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

225 230 235 240

Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

245 250 255

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

260 265 270

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

275 280 285

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

290 295 300

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

305 310 315 320

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 100

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化VR

<400> 100

Gln Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Val Val Gln Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ala Ile Ile Ser Gly Ser Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Val Met

65 70 75 80

Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Val Val Pro Gly Tyr Asn Ala Gly Gly Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 101

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化VR

<400> 101

Glu Glu His Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ser Ile Ile Ser Gly Ser Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ala Arg Asp Ser Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Val Val Pro Gly Tyr Asn Ala Gly Gly Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 102

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化VR

<400> 102

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ile Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Val Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Ala Ala Gly Ser Val

85 90 95

Ser Val Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 103

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化VR

<400> 103

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Ala Ala Gly Ser Val

85 90 95

Ser Val Gly Ala Phe Gly Gln Gly Thr Glu Leu Val Ile Lys

100 105 110

<210> 104

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化VR

<400> 104

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Ala Ala Gly Ser Val

85 90 95

Ser Val Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Glu

100 105 110

Claims

1.一种特异性结合HER2的单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽，所述片段或衍生物或多肽含有足以赋予HER2结合特异性的、所述抗体的至少一部分，其中，所述单克隆抗体，或者其片段或衍生物或多肽包含：

a) 重链可变(VH)区，其与如SEQ ID NO: 4所示的VH区至少90%相同，并且包含如SEQID NO：16所示的CDR-H1区，如SEQ ID NO：22所示的CDR-H2区，如SEQ ID NO：28所示的CDR-H3区，和

b) 轻链可变(VL)区，其与如SEQ ID NO: 10所示的VL区至少90%相同，并且包含如SEQID NO：34所示的CDR-L1区，如SEQ ID NO：40所示的CDR-L2区，如SEQ ID NO：46所示的CDR-L3区。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体还结合人Fc受体、诱导FcR介导的信号传导途径、并结合与选自抗体C074、C031、B106、AK57、B115的组的抗体相同的表位。

3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体使FcγRIIIa分析中的Fc受体信号传导活性增加至少10倍。

4.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合与曲妥珠单抗不同的表位。

5.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中在表位竞争分析中所述单克隆抗体不与曲妥珠单抗竞争。

6.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中在表位竞争分析中所述单克隆抗体不与帕妥珠单抗竞争。

7.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体能够诱导细胞凋亡。

8.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体为人源化抗体。

9.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体能够减轻肿瘤负荷、肿瘤播散和转移。

10.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其用于治疗HER-2介导的疾病。

11.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体和治疗有效量的根据权利要求1-10任一项所述的单克隆抗体。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其用于治疗HER-2介导的疾病。