CN109414437A - 治疗免疫球蛋白轻链淀粉样变性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及取代的喹啉化合物用于治疗免疫球蛋白轻链(LC)淀粉样变性(AL),尤其是与免疫球蛋白LC AL相关的心脏毒性的用途。具体来说,可用于治疗心脏LC淀粉样变性的取代的喹啉化合物是5,7‑二卤代‑8‑羟基喹啉衍生物,尤其是5,7‑二氯‑8‑羟基喹啉衍生物。
Description
技术领域
本发明涉及取代的喹啉化合物用于治疗免疫球蛋白轻链(LC)淀粉样变性(AL),尤其是与免疫球蛋白LC AL相关的心脏毒性的用途。具体来说,可用于治疗心脏LC淀粉样变性的取代的喹啉化合物是5,7-二卤代-8-羟基喹啉衍生物,尤其是5,7-二氯-8-羟基喹啉衍生物。
发明背景
免疫球蛋白轻链(LC)淀粉样变性(AL)中的器官损伤是由在靶器官中的细胞外淀粉样沉积物中组构的异常错误折叠的单克隆LC的毒性作用引起的(Merlini和Bellotti,2003;Merlini和Palladini,2008)。虽然靶器官可以是任何器官,但除中枢神经系统外,常见的靶器官包括肾脏和心脏。大约75%的患有免疫球蛋白LC AL的患者在出现时表现出心脏受累。在大多数情况下,如果细胞毒性化学疗法不能阻止血浆细胞LC产生,则这些患者经历心力衰竭的快速恶化,中值存活期仅为6个月。晚期心脏受累的患者(Wechalekar等人,2013)通常太脆弱而不能耐受化疗:矛盾的是,大多数需要治疗的患者都是目前不能有效管理的患者。为了挽救这一相当大比例的患者,需要新的毒性更低且更靶标定向的治疗方法。
需要用于治疗、预防或减轻免疫球蛋白LC AL的症状,尤其是与免疫球蛋白LC AL相关的心脏毒性的其他疗法。
发明内容
在第一方面,本发明涉及一种治疗或预防免疫球蛋白轻链淀粉样变性的方法,所述方法包括向受试者施用式(I)化合物:
其中R、R1和R3是相同或不同的,并且各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、-SOR6、-SO2R6、-SO2NR7R8、-C(O)R9、-SO3H、卤代、-CN、芳基和杂环基;
R2是选自-(CH2)m苯基、-(CH2)m萘基、-(CH2)m四氢萘基、-(CH2)m联苯基、-(CH2)m杂环基、-(CH2)mC(O)R9、-(CH2)mC(S)R9、-(CH2)mCN、-(CH2)mNR7R8、-CH=NR6、-CH=NOR6、-CH=N-NR10R11、-(CH2)mOR6、-(CH2)mSR6和-(CH2)mSO2NR10R11;
R4和R5是相同或不同的,并且独立地选自卤代;
R6是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
R7和R8是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-(CH2)m芳基以及-(CH2)m杂环基,或者R7与R8一起形成杂环;
R9是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、芳基和杂芳基;
R10和R11是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
m是0或选自1、2或3的整数;
其中每个烷基、烯基、炔基、芳基和杂芳基可任选地被取代;
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
在一些实施方案中,所述方法用于治疗或预防免疫球蛋白LC AL,或者减轻或逆转免疫球蛋白LC AL的症状,尤其是其中心脏组织受损。在特定实施方案中,所述方法用于治疗、预防与免疫球蛋白LC AL相关的心脏毒性,或者减轻或逆转与免疫球蛋白LC AL相关的心脏毒性的症状。
在一些实施方案中,所述方法用于逆转由心脏毒性免疫球蛋白LC引起的损伤,所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
附图说明
图1提供MM2-BJ骨髓瘤蛋白、与树脂一起孵育的MM2-BJ骨髓瘤蛋白、H7-BJ孵育心脏毒性LC、与树脂一起孵育的H7-BJ心脏毒性LC以及对照(10mM PBS中的DEPMPO)的使用自旋捕获5-(二乙氧基磷酰基)-5-甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(DEPMPO)的电子顺磁共振谱。实验设置:微波功率5mW,微波频率9.69GHz,模量振幅1G,时间常数40.96ms,扫描宽度150G。溶解于10mM PBS(pH 7.4)中的MM2-BJ(45μM)和H7BJ(28μM)的EPR光谱,与1000倍摩尔过量的DEPMPO一起孵育。MM2-BJ与DEPMPO孵育1小时(70次扫描)。H7-BJ与DEPMPO孵育5小时(40次扫描)。将蛋白质样品(100μg/mL)与50μM 树脂在4℃下在振荡条件下一起孵育10分钟。将样品在4℃下以8700xg离心5分钟并收集上清液。使用Bio-Rad蛋白质测定(Bio-Rad Laboratories GmbH,Munchen,Germany)测定蛋白质浓度。将蛋白质稀释在处理的PBS中以得到对于MM2-BJ45μM的最终浓度,并且对于H7-BJ(心脏毒性)28μM的最终浓度,并且以1000倍过量添加DEPMPO,孵育和如上进行EPR。
图2提供由在室温下与50μM 树脂一起孵育的H7-BJ心脏毒性LC和MM2-BJ骨髓瘤(A)或在室温下与或不与2nM 5,7-二氯-8-羟基-2-(二甲基氨基甲基)喹啉(1033)一起孵育的H7-BJ心脏毒性LC(B)产生的H2O2的图形表示。
图3提供内源性金属水平的图形表示和添加的铜对秀丽隐杆线虫咽部功能的影响。分析了饲喂100μg/mL MM2-BJ(骨髓瘤)、100μg/mL心脏毒性LC H7-BJ、心脏毒性LC+2nM1033或无金属水(媒介物)的蠕虫的内源性Cu(A)、Zn和Fe(B)的量。添加125μM铜显示由心脏毒性LC诱导的咽部功能障碍的恶化,如通过终球咽部抽动速率所证明的(C)。
图4示出(A)1033对LC诱导的咽部功能障碍的剂量反应效应。在不存在或存在0-25nM 1033的情况下,用100μg/mL H7-BJ饲喂蠕虫2小时。对照蠕虫接受单独媒介物(虚线)。每个值是平均值±SE,n=30。报告了IC50±SD,p<0.01学生t检验。(B)从对比相和MitoSOX荧光的叠加获得的图像(箭头)。比例尺50μm。(C)心脏毒性LC、1033、心脏毒性LC+1033、H2O2以及H2O2+1033对咽部功能的影响。(D)和EDTA对LC诱导的咽部功能障碍的影响。
图5是示出由1033诱导的存活增加的卡普兰-迈耶存活曲线,每组n=30个蠕虫;3个独立实验。
图6示出心脏毒性LC对TJ356转基因蠕虫中从细胞质至细胞核的DAF-16易位的影响。(A)对照媒介物饲喂的蠕虫和和(B)心脏毒性LC饲喂的蠕虫(100μg/mL H7-BJ,持续2小时)中的DAF-16::GFP表达的图像。(C-D)饲喂以下各项2小时的蠕虫中DAF-16表达的亚细胞分布:媒介物、100μg/mL H7-BJ(有或没有2nM 1033)、50μM四环素(TETRA)或5mM N-乙酰基半胱氨酸(NAC)。根据DAF-16定位,蠕虫被分为两种表型,包括“细胞溶质”和“细胞核”。基于3次实验计算相对于媒介物饲喂的蠕虫DAF-16定位的百分比,N=100。平均值±SE。**对比媒介物,p<0.01,对比心脏毒性LC°p<0.05和°°p<0.01,单向ANOVA和邦弗朗尼事后检验。(E/F)用1mM H2O2饲喂转基因蠕虫30分钟作为阳性对照。DAF-16::GFP分布(E)以及通过GFP荧光可视化的HSP-16.2和SOD-3表达(F)。
图7示出心脏毒性LC诱导HSP-16.2和SOD-3的咽部表达。将转基因蠕虫用以下各项饲喂2小时:媒介物(i,5mM PBS,pH 7.4)、100μg/mL MM2-BJ(ii,骨髓瘤)、100μg/mL H7-BJ(iii,心脏毒性LC)或2nM 1033(iv,心脏毒性LC+1033)。(A)作为CL2070转基因蠕虫中GFP-荧光和光学显微镜的叠加的HSP-16.2表达的图像。比例尺50μm。(C)作为CF1553转基因蠕虫中的GFP荧光(箭头)的SOD-3表达的图像。比例尺50μm。(B)CL2070和(D)CF1553蠕虫响应于处理的量化的GFP强度。基于3个实验,将每组中的荧光强度计算为平均灰度值±SE,N=25。**对比媒介物,p<0.01,并且对比心脏毒性LC°p<0.05和°°p<0.01,单向ANOVA和和邦弗朗尼事后检验。
图8示出心脏毒性LC严重破坏秀丽隐杆线虫咽部超微结构。饲喂以下各项2小时的秀丽隐杆线虫中通过透射电子显微镜(TEM)从超微结构分析获得的蠕虫咽部的代表性图像:(A)媒介物,(B)骨髓瘤蛋白(MM2-BJ),(C)心脏毒性LC(H7-BJ)单独或与(D)2nM 1033一起,(E)50μM四环素或(F)5mM N-乙酰基半胱氨酸。图像显示两个咽部肌肉(下午)及其线粒体(箭头)由边缘细胞(mc)及其线粒体(箭头),放置在咽沟(ch)的角落。饲喂心脏毒性LC的蠕虫的咽部肌肉导致线粒体受损,其表现出聚集模式和不规则形状、肿胀和内部组分(即嵴)的大量破坏。边缘细胞(其含有许多线粒体)由于它们在收缩运动功能中的积极作用而严重受损,并且连接至边缘细胞的肌丝(其在媒介物饲喂的蠕虫中完全对齐)被扰乱。
图9示出四环素(TETRA)和N-乙酰基半胱氨酸(NAC)对由心脏毒性LC引起的咽部抽动功能障碍的保护作用。将5mM PBS(pH 7.4)中的MM2-BJ(骨髓瘤)和H7-BJ(心脏毒性LC)以100μg/mL单独或与50μM TETRA或5mM NAC一起施用于蠕虫(100个蠕虫/100μL)。对照蠕虫接受单独媒介物(媒介物)。在不存在OP50大肠杆菌的情况下孵育2小后,将蠕虫接种在接种有细菌的NGM板上。在接种后20小时评价咽部抽动并表示为抽动次数/分钟。**对比媒介物p<0.01,并且°°对比心脏毒性LC p<0.01,根据单向ANOVA和邦弗朗尼事后检验。
图10示出心脏AL患者的心肌组织中的线粒体损伤。来自严重心脏淀粉样蛋白AL患者(A-C)和受扩张型心肌病影响的患者(D)的心内膜心肌活检的代表性透射电子显微镜(TEM)图像的超微结构细节。虽然心肌纤维(mf)在AL患者中保存相对较好(A-C),但大多数线粒体(白色箭头)显示显著改变伴随尺寸扩大和破坏(A)或完全丧失嵴(B-C)。在间质中且沿心肌纤维的基底膜通过使用15nm金缀合的蛋白A的包埋后免疫金染色鉴别LC(黑色箭头)。(D)患有非淀粉样蛋白心肌病的患者的心肌显示保存良好的线粒体(白色箭头)和糖原沉积物(g)。乙酸双氧铀,柠檬酸铅。比例尺:1μm。
图11示出1033和四环素的协同有益作用。饲喂100μg/mL H7-BJ(心脏毒性LC)1.5小时且然后用20μM四环素(TETRA)、单独或与20μM TETRA一起的0.5-2nM 1033处理30分钟的蠕虫的咽部表现。对照蠕虫饲喂单独媒介物。对比媒介物,**p<0.001,*p<0.005,°°对比心脏毒性LC,p<0.001,单向ANOVA和邦弗朗尼事后检验。§§对比饲喂心脏毒性LC+0.5nM1033的蠕虫,p<0.01显著相互作用,双向ANOVA和邦弗朗尼事后检验。
具体实施方式
定义
除非另外定义,否则本文使用的所有技术性和科学性术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同的含义。虽然可在本发明的实践或测试中使用与本文描述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料,但是描述了优选的方法和材料。出于本发明的目的,下文定义以下术语。
冠词“一个/种(a/an)”在本文中用来指代冠词的语法对象中的一个或一个以上(即,“至少一个”)。作为举例,“一个/种要素”是指一个/种要素或多于一个/种要素。
在整篇本说明书中,除非上下文另外需要,否则词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”将被理解成暗示包括所述步骤或要素或一组步骤或要素,但不排除任何其他步骤或要素或任何其他组步骤或要素。
单独使用或在复合词如“任选取代的烷基”或“卤代烷基”中使用的术语“烷基”是指具有1至10个碳原子、尤其是1至6个碳原子或1至4个碳原子的直链、支链或环状烃基。此类烷基的说明性实例是甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、2-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、2,2-二甲基丙基、1-甲基丙基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
单独使用或在复合词如“任选取代的烯基”中使用的术语“烯基”表示具有至少一个碳-碳双键和2至20个碳原子、尤其是2至14个碳原子或2至6个碳原子的直链、支链或单环或多环基团。烯基基团的实例包括烯丙基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丙烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、环戊烯基、1-甲基-环戊烯基、1-己烯基、3-己烯基、环己烯基、1-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、环辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、3-癸烯基、1,3-丁二烯基、1,4-戊二烯基、1,3-环戊二烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基、1,3-环己二烯基、1,4-环己二烯基、1,3-环庚二烯基、1,3,5-环庚三烯基、1,3,5,7-环辛-四烯基等。
单独使用或在复合词如“任选取代的炔基”中使用的术语“炔基”表示具有至少一个碳-碳三键和2至10个碳原子、尤其是2至6个碳原子或2至4个碳原子的直链或支链基团。炔基基团的实例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、1-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、3-己炔基、5-己炔基、1-庚炔基、3-庚炔基、6-庚炔基、1-辛炔基、7-辛炔基、1-壬炔基、2-壬炔基、3-壬炔基、8-壬炔基、1-癸炔基、3-癸炔基、9-癸炔基等。
术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“卤代烷基”是指如上所述的烷基,其中一个或多个氢原子被卤素、尤其是氟原子取代。卤代烷基的说明性实例包括三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、2-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、1-氟乙基、1,1-二氟乙基、1,1,2,2,2-五氟乙基、3-氟丙基、4-氟丁基、5-氟戊基、6-氟己基、三氯甲基、二氯甲基、氯甲基、2-氯乙基、2,2-二氯乙基、2,2,2-三氯乙基、1-氯乙基、1,1-二氯乙基、1,1,2,2,2-五氯乙基、3-氯丙基、4-氯丁基、5-氯戊基、6-氯己基、氯二氟甲基、氯氟甲基、溴甲基、2-溴乙基、2-溴-2-氯乙基、2-氯-2-氟乙基、2-氯-2,2-二氟乙基等。
单独使用或在复合词如“任选取代的芳基”中使用的术语“芳基”表示含有一个、两个或三个环的碳环芳族体系,其中此类环可以侧悬的方式连接在一起或可为稠合的。术语“芳基”包括芳族基团,如苯基、萘基、四氢萘基、二氢化茚、芴、菲以及联苯基。在特定实施方案中,芳基是5或6元芳基,如苯基。
如本文所用的术语“杂环”或“杂环基”是指为单环、双环或三环并且其中一个或多个碳原子已被独立地选自由N、N(R)、S、S(O)、S(O)2和O组成的组的杂原子置换的环烃。杂环可以是饱和的或不饱和的或芳族的。合适的杂环基的实例包括氮杂环丁烷、四氢呋喃基、四氢苯硫基、吡咯烷基、2-氧代吡咯烷基、吡咯啉基、吡喃基、二氧杂戊环烷基、哌啶基、2-氧代哌啶基、吡唑啉基、咪唑啉基、噻唑啉基、二硫杂环戊二烯基、氧硫杂环戊二烯基、二氧杂环己烷基、二氧杂环己烯基、二噁唑基、噁噻唑基、噁唑酮基、哌嗪基、吗啉代、硫代吗啉基、3-氧代吗啉基、二硫杂环己基、三硫杂环己基、噁嗪基、吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、吡唑基、吲哚基、异吲哚基、1H,3H-1-氧代异吲哚基、苯并三唑基、呋喃基、噻吩基、苯硫基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并二噁烷、苯并二氧杂环己烯、喹啉基、异喹啉基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、四氢喹啉基、噻唑基、异噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,5-三嗪基、1,2,4-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、四唑基、咔唑基、呫吨基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、啡噁嗪基、氮杂卓基、氧杂卓基和硫杂卓基。具体杂环基具有5或6元环,如四氢呋喃基、四氢苯硫基、吡咯烷基、吡咯啉基、哌啶基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑啉基、哌嗪基、吗啉代、硫代吗啉基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、吲哚基、异吲哚基、1H,3H-1-氧代异吲哚基、异噁唑基、咪唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基以及1,2,4-噁二唑基和1,2,4-噻二唑基。
术语“任选取代的”是指可以或可以不进一步被一个或多个选自以下的基团取代的基团:烷基,烯基、炔基、芳基、醛、卤代、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、卤代芳基、羟基、烷氧基、烯氧基、芳氧基、苄氧基、卤代烷氧基、卤代烯氧基、卤代芳氧基、硝基、硝基烷基、硝基烯基、硝基炔基、硝基芳基、硝基杂环基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烯基氨基、炔基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、苄基氨基、二苄基氨基、酰基、烯基酰基、炔基酰基、芳基酰基、酰基氨基、二酰基氨基、酰氧基、烷基磺酰氧基、芳基亚磺酰氧基、杂环基、杂环氧基、杂环氨基、卤代杂环基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷氧羰基、芳氧羰基、巯基、烷硫基、苄硫基、酰硫基、氰基、含磷基团等。在特定实施方案中,任选的取代基是C1-6烷基,尤其是C1-4烷基;C1-6卤代烷基,尤其是C1-4卤代烷基;氟;氯;碘;氰基;C1-6烷氧基,尤其是C1-4烷氧基;芳基;杂环基;氨基;烷基氨基或二烷基氨基。
式I化合物的盐优选地是药学上可接受的,但应理解,非药学上可接受的盐也属于本发明的范围,因为它们可用作制备药学上可接受的盐的中间体。药学上可接受的盐的实例包括药学上可接受的阳离子(如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵)的眼;药学上可接受的无机酸的酸加成盐,所述无机酸如盐酸、正磷酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸;或药学上可接受的有机酸的盐,所述有机酸如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、柠檬酸、乳酸、粘液酸、葡萄糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲烷磺酸、三卤代甲烷磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、鞣酸、抗坏血酸和戊酸。
此外,本发明的一些化合物可与水(水合物)或常见有机溶剂形成溶剂合物。此类溶剂合物涵盖在本发明的范围内。在一些实施方案中,溶剂合物是水合物或半水合物。在一些实施方案中,溶剂合物是一水合物。在其他实施方案中,溶剂合物是甲醇溶剂合物。
如本文所用,术语“淀粉样变性”或AL是指由形成原纤维的单克隆免疫球蛋白(Ig)轻链(最常见λ同种型)的细胞外沉积引起的疾病。异常Ig轻链具有不稳定的构象并经历异常折叠,从而允许它们堆叠在一起而形成淀粉样蛋白原纤维。异常轻链通常由浆细胞分泌。除中枢神经系统外,异常轻链可沉积在任何器官中,从而引起器官损伤。当异常轻链沉积在心脏中并导致心脏损伤时,所述异常轻链是心脏毒性的。
本发明的方法
本发明的方法涉及治疗或预防受试者,尤其是人的免疫球蛋白轻链淀粉样变性。
淀粉样变性可发生在任何器官中,包括心脏、肾脏、自主神经或外周神经系统、胃肠道、肺和肝脏。在特定实施方案中,淀粉样变性发生在心脏中。
在一些实施方案中,所述方法涉及治疗或预防与免疫球蛋白轻链淀粉样变性相关的心脏毒性。
在一些实施方案中,所述方法涉及减轻与免疫球蛋白轻链淀粉样变性相关的症状或与免疫球蛋白轻链淀粉样变性相关的心脏毒性。
在其他实施方案中,所述方法涉及逆转尤其是心脏组织中由心脏毒性免疫球蛋白LC引起的损伤。
在一些实施方案中,免疫球蛋白LC具有λ同种型。
与心脏毒性免疫球蛋白LC AL相关的症状包括心室壁和心房壁增厚、限制性心脏病、无力、呼吸困难和肢体水肿。免疫球蛋白LC对心肌的浸润也可诱导传导病症和心室或室上性心律失常。这些症状可通过本发明的方法逆转、减轻、治疗或预防。
用于本发明方法中的化合物是式(I)的5,7-二卤代-8-羟基喹啉化合物:
其中R、R1和R3是相同或不同的,并且各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、-SOR6、-SO2R6、-SO2NR7R8、-C(O)R9、-SO3H、卤代、-CN、芳基和杂环基;
R2是选自-(CH2)m苯基、-(CH2)m萘基、-(CH2)m四氢萘基、-(CH2)m联苯基、-(CH2)m杂环基、-(CH2)mC(O)R9、-(CH2)mC(S)R9、-(CH2)mCN、-(CH2)mNR7R8、-CH=NR6、-CH=NOR6、-CH=N-NR10R11、-(CH2)mOR6、-(CH2)mSR6和-(CH2)mSO2NR10R11;
R4和R5是相同或不同的,并且独立地选自卤代;
R6是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
R7和R8是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-(CH2)m芳基以及-(CH2)m杂环基,或者R7与R8一起形成杂环;
R9是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、芳基和杂芳基;
R10和R11是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
m是0或选自1、2或3的整数;
其中每个烷基、烯基、炔基、芳基和杂芳基可任选地被取代;
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
在特定实施方案中,以下中的一者或多者适用:
每个R、R1和R3独立地选自氢、-C1-3烷基、-C2-3烯基、-C2-3炔基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-CH2CF2H、-CH2CH2F、-OH、-OC1-6烷基、-OCF3、-OCHF2、-OCH2F、-OCH2CF3、-OCH2CHF2、-OCH2CH2F、-OC2-3烯基、-OC2-3炔基、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2、-SO2C1-6烷基、-CO2H、-CO2C1-3烷基、-CONH2、-CONH(C1-3烷基)、-CON(C1-3烷基)2、F、Cl和Br;尤其是氢、-C1-3烷基、-CF3、-OC1-3烷基、-OCF3、-NH2、-CO2H、-CONH2、F和Cl,更尤其是氢、甲基、乙基、-CF3、甲氧基、乙氧基、-OCF3和F,最尤其是氢;
R2选自-(CH2)m杂环基、-(CH2)mC(O)R9、-(CH2)mCN、-(CH2)mNR7R8、-CH=NC1-6烷基、-CH=N-OR6、-CH=N-NR10R11、-SO2NR10R11和-(CH2)mOR6;尤其是杂环基、-CH2杂环基、-CO2H、-C(O)NR7R8、-NR7R8、-CH2NR7R8、-CH=NOH、-CH=NOC1-6烷基、-CH2OR6或–SO2NR10R11,更尤其是吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基,特别是当杂环基与喹啉基的连接位于与杂环基的氮原子相邻的杂环基的碳原子处时,-C(O)NH(C1-6烷基)、-C(O)NH(CH2杂环基)、-C(O)NH(CH2CH2杂环基)、-C(O)NH(CH2CH2CH2杂环基、-CH2NH2、-CH2NH(C1-3烷基)、-CH2N(C1-3烷基)2、-CH2NH(杂环基)、-CH2N(C1-3烷基)(杂环基)、-CH2N(C1-3烷基)(CH2杂环基)、-CH2N(C1-3烷基)(C2-3烯基)、-CH2N(C1-3烷基)(C2-3炔基)、-N(C1-3烷基)2、-N(C1-3烷基)(杂环基)、-CH=NC1-3烷基、-CH=NOH、-CH=NO(C1-3烷基)、-CH2OC1-6烷基、-CH2OC1-6卤代烷基,最尤其是-C(O)NH(CH2杂环基)、-C(O)NH(CH2CH2杂环基)、吡啶基、-CH2N(C1-3烷基)2、-N(C1-3烷基)(杂环基)、-CH2NH(C1-3烷基)、-CH=N-OH、-CH=N-OCH3、-CH2OC1-6烷基、-CH2OC1-6卤代烷基、-CH=NCH3和-CH2N(C1-3烷基)(CH2杂环基);
m是0或1或2的整数,尤其是0或1;
R4和R5独立地选自F、Cl、Br或I,尤其是F或Cl或I,更尤其R4和R5均是Cl。
在特定实施方案中,式(I)化合物是选自:
以及
其中n是1、2或3;
尤其是
(1033)。
式(I)化合物可通过本领域中已知的方法来制备。例如,在WO2004/007461和Liang等人,2015中提供了合适的合成方法。
如本文所用的术语“受试者”是指患有需要治疗免疫球蛋白轻链淀粉样变性的疾病或病状的任何动物。受试者可以是哺乳动物,优选人;或者可以是家养动物或伴侣动物。虽然特别考虑到本发明的化合物适用于人的医学治疗,但它也适用于兽医治疗,包括治疗伴侣动物,如狗和猫;以及家畜,如马、小马、驴、骡子、美洲驼、羊驼、猪、牛和绵羊;或动物园动物,如灵长类动物、猫科动物、犬科动物、牛科动物和有蹄类动物。
合适的哺乳动物包括灵长目、啮齿目、兔形目、鲸目、食肉目、奇蹄目和偶蹄目的成员。由于其相似的生物学和经济重要性,特别优选奇蹄目和偶蹄目的成员。
例如,偶蹄目包括分布在九个科中的大约150种生物物种:猪(猪科)、野猪(西貒科)、河马(河马科)、骆驼(骆驼科)、鼷香鹿(鼷鹿科)、长颈鹿和欧卡皮鹿(长颈鹿科)、鹿(鹿科)、叉角羚(叉角羚科)以及牛、绵羊、山羊和羚羊(牛科)。许多这些动物在各个国家被用作喂养动物。更重要的是,许多经济上重要的动物如山羊、绵羊、牛和猪具有非常相似的生物学并且具有高度基因组同源性。
奇蹄目目包括马和驴,它们是经济上重要的并且密切相关的。事实上,众所周知,马和驴异种交配。
如本文所用,术语“治疗有效量”是指本发明化合物的有效产生所需治疗反应的量,例如,用于预防或治疗淀粉样变性或减轻或逆转淀粉样变性的症状的量。
具体的“治疗有效量”显然将随所诸如以下的因素变化:所治疗的特定病状、受试者的身体状况、所治疗的受试者的类型、治疗的持续时间、同步疗法(如果有的话)的性质以及所用的具体制剂和化合物或其衍生物的结构。
预期量将落在相对广泛的范围内,所述量可通过常规试验来确定。关于人患者的有效量例如可处于约0.1ng/kg体重/剂量至1g/kg体重/剂量的范围。剂量优选地在1ng至1g/kg体重/剂量的范围内,如在1ng至1mg或1mg至1g/kg体重/剂量的范围内。在一个实施方案中,剂量在1mg至500mg/kg体重/剂量的范围内。在另一个实施方案中,剂量在1mg至250mg/kg体重/剂量的范围内。在另一个实施方案中,剂量在1mg至100mg/kg体重/剂量的范围内,如至多50mg/kg体重/剂量。在另一个实施方案中,剂量在1μg至1mg/kg体重/剂量的范围内。在另一个实施方案中,剂量在1ng至1mg,例如1ng至500ng、1ng至250ng或1ng至100ng的范围内。在化合物与另一种药物一起施用以提供协同作用的实施方案中,施用可能需要较低量的化合物。可调整剂量方案以提供最佳治疗反应。例如,可每日、每周、每月或其他合适的时间间隔施用若干分次剂量,或者可如由情况的紧急性所指示,按比例减少剂量。
本发明的化合物可另外与其他药物组合以提供有效组合。意图包括药物活性剂的任何化学相容的组合,只要所述组合不会消除式I化合物的活性即可。应理解,本发明的化合物和其他药物可以单一组合物施用,或者可分开、依次或同时施用。
所述方法中使用的化合物可与抗氧化剂组合,所述抗氧化剂如四环素(TETRA)、N-乙酰基半胱氨酸(NAC)、α-生育酚、卡维地洛、吡非尼酮、抗坏血酸、谷胱甘肽、褪黑激素和多酚如白藜芦醇、鞣花酸、没食子酸和鞣酸。
或者,本发明的方法中使用的化合物可与用于治疗淀粉样变性的其他药物化合物组合,所述其他药物化合物包括泊马度胺、来那度胺、沙利度胺、苯达莫司汀、硼替佐米、美法仑、地塞米松、干扰素α、人免疫球蛋白、碘阿霉素、雷利度胺、环磷酰胺、非格司亭、沙格司亭、白消安、氨磷汀、MLN9708、依那西普、卡非佐米、强力霉素、甲磺酸伊马替尼、万珂、利尿剂(如呋塞米、托拉塞米、依他尼酸、噻嗪类、碳酸酐酶抑制剂、醛固酮拮抗剂、阿米洛利和氨苯蝶啶);以及抗心律失常药物,如奎尼丁、普鲁卡因胺、丙吡胺、利多卡因、苯妥英、美西律、妥卡尼、恩卡尼、氟卡尼、普罗帕酮、莫雷西嗪、卡维地洛、普萘洛尔、艾司洛尔、噻吗洛尔、美托洛尔、阿替洛尔、比索洛尔、胺碘酮、索他洛尔、伊布利特、多非利特、决奈达隆、E-4031、维拉帕米、地尔硫卓、腺苷、地高辛和硫酸镁或其组合。
在一些实施方案中,式(I)化合物与其他药物剂的组合可展示协同作用。
在本发明的另一方面,提供了一种治疗或预防免疫球蛋白LC AL的方法,所述方法包括向有需要的受试者施用如上文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物和抗氧化剂。
在特定实施方案中,式(I)化合物是
在一些实施方案中,抗氧化剂是四环素。
在本发明的另一方面,提供了如上文定义的式(I)化合物在制造用于治疗受试者的免疫球蛋白轻链淀粉样变性的药物中的用途。
还提供了如上文定义的式(I)化合物,其用于治疗受试者的免疫球蛋白轻链淀粉样变性。
在本发明的另一方面,提供了如上文定义的式(I)化合物在制造用于治疗或预防或减轻或逆转受试者的与免疫球蛋白轻链淀粉样变性相关的心脏毒性的症状的药物中的用途。
在本发明的另一方面,提供了如上文定义的式(I)化合物,其用于治疗或预防或减轻或逆转受试者的与免疫球蛋白轻链淀粉样变性相关的心脏毒性的症状。
在本发明的另一方面,提供了如上文定义的式(I)化合物在制造用于治疗或预防或减轻或逆转免疫球蛋白轻链淀粉样变性的症状的药物中的用途。
在本发明的另一方面,提供了如上文定义的式(I)化合物,其用于治疗或预防或减轻或逆转免疫球蛋白轻链淀粉样变性的症状。
组合物
尽管有可能的是对于在疗法中使用,本发明的化合物可以纯化学品形式施用,但优选的是以包含活性成分和一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物形式呈现活性成分。
载体在可与组合物的其他成分相容以及不对其接受者有害的意义上必须是“可接受的”。
药物制剂包括适于经口、经直肠、经鼻、表面(包括经颊和舌下)、经阴道或胃肠外(包括肌肉内、皮下和静脉内)施用或呈适于通过吸入或吹入施用的形式的那些制剂。因此,可将本发明化合物连同常规佐剂、载体、赋形剂或稀释剂一起处置成药物组合物及其单位剂量的形式,且在所述形式的情况下,可以下形式加以采用:都用于口服使用的固体(如片剂或填充胶囊)或液体(如溶液、悬浮液、乳液、酏剂或用所述液体填充的胶囊);用于直肠施用的栓剂;或用于胃肠外(包括皮下)使用的无菌可注射溶液。所述药物组合物及其单位剂型可以常规比例包含常规成分,有或无其他活性化合物或成分,且所述单位剂型可含有与待采用的预定每日剂量范围相称的任何适合有效量的活性成分。每片含有十(10)毫克活性成分或更广泛地0.01至两百(200)毫克的制剂是相应适合代表性单位剂型。本发明化合物可以广泛多种经口和胃肠外剂型施用。将为本领域技术人员显而易知的是以下剂型可包含本发明的化合物或式(I)化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性组分。
为了由式(I)化合物制备药物组合物,药学上可接受的载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括粉末、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以是一种或多种也可充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料的物质。
在粉末中,载体是呈与精细分散的活性组分的混合物形式的微细固体。
在片剂中,所述活性组分与具有必要粘合力的载体按合适比例混合并按所需的形状和尺寸加以压制。粉末和片剂优选含有5%或10%至约70%的活性化合物。合适的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”意图包括活性化合物与作为载体的包封材料的制剂,所述包封材料提供胶囊,其中在具有或不具有多种载体的情况下,所述活性组分由载体包围,所述载体由此与其结合。类似地,包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉末、胶囊、丸剂、扁囊剂和口含锭可用作适于经口施用的固体形式。
对于制备栓剂,首先熔融低熔点蜡,如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物,且如通过搅拌将活性组分均质分散于其中。接着将熔融均质混合物倾入适宜尺寸化模具中,使所述混合物冷却,且由此固化。
适于经阴道施用的制剂可呈现为除活性成分之外也含有如本领域中已知为适当的载体的子宫托、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾剂。
液体形式制剂包括溶液、悬浮液和乳液,例如水溶液或水-丙二醇溶液。例如,胃肠外注射液体制剂可被配制为水性聚乙二醇溶液中的溶液。
式(I)化合物因此可被配制用于胃肠外施用(例如通过注射,例如团式注射或连续输注)且可以单位剂型提供于安瓿、预填充注射器、小体积输液或添加有防腐剂的多剂量容器中。组合物可采用诸如于油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液的形式,且可含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的配制剂。或者,活性成分可呈用于在使用之前用适合媒介物,例如无菌无热原水复原的粉末形式,其通过无菌分离无菌固体或通过自溶液冻干获得。
适用于口服使用的含水溶液可通过将活性组分溶解于水中并根据需要添加合适的着色剂、调味剂、稳定剂以及增稠剂来制备。
适于口服使用的水性悬浮液可通过将精细分散的活性组分与粘性材料(如天然胶或合成胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其他熟知的悬浮剂)一起分散于水中来制备。
还包括意图在使用之前即刻转化为用于口服施用的液体形式制剂的固体形式制剂。此类液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。除活性组分之外,这些制剂也可含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
对于向表皮局部施用,根据本发明的化合物可被配制成软膏剂、霜剂或洗剂或经皮贴片。软膏剂和霜剂可例如用水性或油性基质在添加合适的增稠剂和/或胶凝剂下配制。洗剂可用水性或油性基质配制且将通常也含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。
适于在口中局部施用的制剂包括锭剂,其包含在通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶的调味基质中的活性剂;软锭剂,其包含于诸如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶的惰性基质中的活性成分;以及嗽口剂,其包含于合适的液体载体中的活性成分。
通过常规手段,例如用滴管、吸移管或喷雾器将溶液或悬浮液直接施用至鼻腔。制剂可以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或吸移管的后述情况下,这可通过患者施用适当预定体积的溶液或悬浮液来实现。在喷雾器的情况下,这可例如借助于计量雾化喷雾泵来实现。为改进经鼻递送和保留,根据本发明的化合物可用环糊精包封,或与它们的预期会增强在鼻粘膜中的递送和保留的剂一起配制。
向呼吸道施用也可借助于气雾剂制剂来实现,其中活性成分是提供于具有适合推进剂,如氯氟烃(CFC)(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷)、二氧化碳或其他合适气体的加压包装中。气雾剂也可方便地含有如卵磷脂的表面活性剂。药物的剂量可通过提供计量阀来控制。
或者,活性成分可以干燥粉末形式提供,例如化合物于合适的粉末基质(如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(如羟丙基甲基纤维素)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP))中的粉末混合物。
方便地,粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以单位剂型提供,例如以例如明胶胶囊或药筒、或粉末可借助于吸入器自其施用的泡罩包装提供。
在意图向呼吸道施用的制剂,包括鼻内制剂中,化合物将通常具有例如约1至10微米或更小的小粒度。可通过本领域已知的方式、例如通过微粉化来获得这种粒度。
当需要时,可采用适合于持续释放活性成分的制剂。
药物制剂优选呈单位剂型。在这种形式中,制剂被细分成含有适当量的活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂,所述包装含有个别量的制剂,如在小瓶或安瓿中的包装片剂、胶囊和粉末。此外,单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身,或者它可以是适当数目的呈包装形式的任何这些单位剂型。
所述组合物可包含其他活性成分,如用于治疗免疫球蛋白LC淀粉样变性,尤其是与免疫球蛋白LC淀粉样沉积物相关的心脏毒性的疗法。
本发明现将参考以下实施例进行描述,所述实施例说明本发明的一些优选方面。然而,应了解本发明的以下描述的特定性不应优先于本发明的先前描述的一般性。
实施例
实施例1:蛋白质样品的制备
人样品。在淀粉样蛋白研究与治疗中心,基金会IRCCS Policlinico San Matteo(帕维亚,意大利)的常规诊断程序期间从患者获得尿液、骨髓浆细胞和心内膜心肌活检。出于研究目的,生物样品的获取、储存和使用得到了机构审查委员会的批准。在纳入研究之前,已从参与者收到书面知情同意书。根据国际共识小组标准(Gertz等人.2004))定义组织淀粉样蛋白沉积物和淀粉样蛋白器官受累的存在。特别地,基于临床、仪器(超声心动图)和生物化学参数评估LC心脏毒性。来自多发性骨髓瘤患者(MM)的非淀粉样蛋白生成性LC用作对照。研究中包括的所有LC均为λ同种型,其代表约75%的淀粉样蛋白生成性LC。表1A中报告了研究中包括的患者的临床特征。对用作心脏功能障碍的疾病和严重性的对照的来自3名患有晚期心功能障碍的AL患者(表1B)和来自1名患有原发性扩张型心肌病的受试者的心内膜心肌活检进行了分析。
表1A和1B的缩写:M,男性;F,女性;°根据Gertz 2005;H,心脏;°°根据国际共识小组的标准;BJ,Bence Jones;n.a.,不可获得;pI,等电点;FLC,游离轻链;BNP,脑利钠肽;cTnI,心肌肌钙蛋白I;IVS,心室间隔;PW,后壁;EF,射血分数。§完全由BJ蛋白构成。参考范围:血清λFLC<26.3mg/L,κ/λ比率0.26-1.65;血清肌酐男性中<1.18mg/dL,女性中<1.02mg/dL;NT-proBNP<332ng/L;BNP,<50ng/L;cTnI<0.04ng/mL。*BNP(ng/L)。
表1.(A)在诊断免疫球蛋白轻链淀粉样变性(AL)或多发性骨髓瘤(MM)时患者的临床和生物化学特征
LC纯化。从受AL淀粉样变性或MM影响的患者自24小时尿液(Bence Jones,BJ)中分离人单克隆LC,并在细菌系统中作为重组蛋白(r)产生(Rognoni等人.2013)。总之,获得7种蛋白质(6BJ和1种重组LC)(表1A)。
使用在20mM磷酸钠(pH 7.0)中平衡的HiPrep16/10Q FF柱,在 FPLC系统(GE-Healthcare,Piscataway,NJ,USA)上通过阴离子交换色谱法纯化LC。用0直至1M NaCl线性梯度洗脱结合的蛋白质。使用在20mM Tris-HCl(pH 8.0)中平衡的阳离子交换柱(HiPrep16/10SP FF)纯化MM4-BJ,并用0直至1M NaCl线性梯度洗脱。通过12%SDS-PAGE评估分离的物种的均质性。使用Pierce BCA蛋白质测定试剂盒(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA)和牛血清白蛋白作为标准物测定最终蛋白质浓度。在大肠杆菌中产生重组全长H7-r LC(Rognoni等人,2013;Perfetti等人,1996)。使用通用的反向PCR策略获得来自H7患者的LC的核苷酸序列(Perfetti等人,1996)。为了确定种系基因,使用当前版本的EMBL-GenBank、V-BASE(V-BASE Sequence Directory,MRC Centre for ProteinEngineering,Cambridge,UK)和IMGT序列目录进行核苷酸序列比对。
实施例2:氧自由基的产生
为了调查金属离子在自由基生成中的参与,将10mM PBS(pH7.4)中的MM2-BJ和H7-BJ(100μg/mL)与或不与50μM 100金属螯合树脂(Biorad)在4℃下在振荡条件下孵育10分钟。在相同条件下,PBS和双蒸水也与一起孵育。将样品在4℃下以8700gx离心5分钟,并且收集上清液。然后使用Bio-Rad蛋白质测定(Bio-Rad LaboratoriesGmbH,Munchen,Germany)测定蛋白质含量。然后将蛋白质在处理的10mM PBS(pH7.4)中稀释,最终浓度对于MM2-BJ为45μM并且对于H7-BJ为28μM。通过添加1000倍摩尔过量的自旋捕获5-二乙氧基磷酰基-5-甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(DEPMPO,Enzo LifeSciences)来评价通过EPR光谱检测氧自由基种类(特别是超氧化物),如已经描述的(Diomede等人,2014)。将样品在黑暗中在37℃下孵育,并在室温下使用石英扁平池在配备有圆柱形腔的ESP300CW-X带光谱仪(Bruker)上记录EPR光谱。使用由D.Duling(Public EPRSoftware Tools,NIH,USA)开发的WinSim软件(版本0.96)进行EPR光谱模拟。
心脏毒性H7-BJ比MM2-BJ对照蛋白产生显著更高水平的超氧化物,如图1中所示。通过在树脂上洗脱消除了MM2-BJ对照的自由基生成。当蛋白质在树脂上洗脱时,H7-BJ对自由基的生成显著减弱。
实施例3:H2O2的产生
H2O2是代谢活动的产物,其本身不是自由基,但由于它可容易地反应而产生自由基(例如在氧化还原活性金属存在下),它被描述为“活性氧物质”(ROS)。
Amplex Red H2O2测定。将10mM磷酸钠缓冲液(PB)(pH 7.4)中的H7-BJ和MM2-BJ蛋白(100μg/mL)在室温下在50μM 树脂或2nM 5,7-二氯-8-羟基-2-(二甲基氨基甲基)喹啉(1033)存在或不存在下孵育。在孵育(0-2小时)后的不同时间,将2μL溶液放入96孔黑色板中,用10mM PBS(pH 7.4)1:100(vol/vol)稀释,并且通过使用Amplex Red测定试剂盒(Molecular probes,Life Technologies)测定产生的H2O2的量。为此,向每个孔中添加100μM Amplex Red和200mU/mL辣根过氧化物酶于10mM PB(pH 7.4)中的50μL工作溶液。将板振荡并在室温下孵育30分钟,避光。在Tecan Infinite M200酶标仪(Tecan,Austria)上以563nm的激发波长和587nm的发射波长读取荧光。将平均值和标准偏差转换为H2O2浓度。
如通过过氧化氢浓度所测定,H7-BJ蛋白比MM2-BJ产生显著更多的ROS,并且通过在树脂上洗脱(图2A)或与2nM 1033一起孵育显著减弱ROS产生,如图2B中所示。
实施例4:金属离子的影响
Bristol N2菌株、转基因CL2070dvIs70Is[hsp-16.2::gfp;rol-6(su1006)]、CF1553muIs84[(pAD76)sod-3p::GFP+rol-6]和TJ356、zIs356Is[daf-16::daf-16-gfp;rol-6]从秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)遗传中心(CGC,University ofMinnesota,USA)获得并且在20℃下在接种有用于食物的大肠杆菌OP50(来自CGC)的固体线虫生长培养基(NGM)上繁殖。研究了LC对咽部行为的影响(Diomede等人.2014)。简言之,将祖先N2和转基因CL2070、TJ356和CF1553蠕虫与表1A中列出的100μg/mL LC(100个蠕虫/100μL)一起在5mM PBS(pH 7.4)中孵育。对照蠕虫仅与5mM PBS(pH7.4)(媒介物)一起孵育。在轨道振荡上孵育2小时后,将蠕虫转移到接种有OP50大肠杆菌的NGM板上。在20小时后对通过计算咽部的终球在1分钟间隔内收缩的次数来测量的咽部抽动速率进行评分。还通过用100μg/mL的H6-BJ、H7-BJ、H18-BJ、MM2-BJ、MM4-BJ或单独MM7-BJ或用125μM铜(作为CuSO4)饲喂蠕虫2小时来进行实验。
结果在图3A和3B中示出。使用心脏毒性LC而不是骨髓瘤蛋白喂养秀丽隐杆线虫导致内源性铜水平增加,而锌和铁水平没有显著改变。当向心脏毒性LC蛋白溶液中添加125μM铜时,观察到由H7-BJ诱导的咽部功能障碍的恶化,而饲喂MM2-BJ蛋白的秀丽隐杆线虫的抽动速率不受铜剂量的影响(图3C)。
实施例5:金属螯合化合物的影响
用含有或不含1033的心脏毒性LC H7-BJ、树脂或EDTA以及1033、H2O2和H2O2连同1033重复实施例4的实验条件。它们抵消由心脏毒性LC引起的咽部功能障碍的作用是剂量依赖性的,1033具有IC50:1.08±1.1nM(图4A)。1033的最佳浓度为2nM:抵消H2O2产生的剂量水平(图2B)并且完全消除由所研究的所有心脏毒性LC引起的咽部损伤(图4B和4C和4D)。1033抵消了心脏毒性LC诱导的蠕虫铜水平的升高(图3A),而不影响铁或锌的水平(图3B)。1033未抵消通过暴露于外源性H2O2(图4B和4C)诱导的咽部毒性,但确实阻止了由H7-BJ引起的外源性H2O2产生的增加(图2B),从而表明其针对心脏毒性LC的保护作用与一般的抗氧化剂活性无关。单独1033不影响抽动速率(图4C),也不影响咽部线粒体氧负荷的增加。金属螯合不影响LC的二级结构含量和热稳定性。
实施例6:寿命实验
在L3幼虫期,将N2蠕虫(100个虫/100μL)用单独100μg/mL的H7-BJ或与2nM 1033一起喂养2小时。然后将蠕虫在相同药物浓度存在下转移到接种有大肠杆菌的新鲜NGM板上。使对照蠕虫在相同条件下仅暴露于媒介物。在20小时后,将线虫转移至接种有细菌的新鲜NGM板,并对活蠕虫的数量进行评分(认为第0天)。为了避免重叠产生,然后在氟脱氧尿苷不存在下每天转移蠕虫,直到它们停止产卵。为了测试重复施用1033的作用,将蠕虫饲喂2小时100μg/mL的H7-BJ和2nM 1033,且然后在相同药物浓度存在下转移到接种有大肠杆菌的新鲜NGM板上。然后每天在新的NGM板中在新鲜溶解的2nM 1033存在下转移线虫。连续几天测定活蠕虫的数量,直到所有蠕虫都死亡。
使秀丽隐杆线虫暴露于心脏毒性LC显著降低其寿命(中值存活期:对于媒介物和H7-BJ饲喂的蠕虫分别为13天和9天,p=0.0001,对数秩检验)(图5)。施用2nM/天1033显著延长心脏毒性LC治疗的蠕虫的存活,从而恢复其自然寿命(中值存活期:对于H7-BJ+2nM/天1033为13天(对比H7-BJ,p=0.025))(图5)。当施用2nM的单剂量1033时,未观察到保护作用,这可能是由于溶解度问题而不是药物的稳定性问题。事实上,1033在生理条件下和各种标准溶剂中极其稳定。总体而言,这些发现表明金属离子稳态的破坏与心脏毒性LC产生ROS的能力有关。
实施例7:FOXO信号传导途径的调节
在TJ356线虫中评估了DAF-16::绿色荧光蛋白(GFP)核易位。分别在CL2070和CF1553蠕虫中测定HSP-16.2::GFP和SOD-3::GFP的咽部表达。在不存在或存在2nM 1033、50μM四环素(TETRA)和5mM N-乙酰基半胱氨酸(NAC)的情况下,在20℃下将年轻成年线虫与100μg/mL H7-BJ或MM2-BJ(100个蠕虫/100μL)在10mM PBS(pH 7.4)中一起孵育2小时。将对照蠕虫与10mM PBS(pH 7.4)(媒介物)或单独药物一起孵育。在2-20小时后,将线虫通过添加1mM左旋咪唑瘫痪,转移至含有1mL的M9加1mM左旋咪唑的管中,在室温下以2000g离心5分钟,并在4℃下在5mM PBS(pH 7.4)中的4%多聚甲醛中固定24小时。用配备有CDD照相机的倒置荧光显微镜(IX-71Olympus)可视化DAF-16的核易位。当从头至尾在整个身体中观察到绿色焦点时,生物体被评定为对核定位阳性,并且当DAF-16::GFP扩散时被评定为细胞溶质。计数每种易位水平的蠕虫数量(至少100个蠕虫/条件)。所述测定重复至少四次。对于蠕虫咽部中的HSP-16.2和SOD-3GFP表达,使用相同的曝光设置获取图像。通过对不同动物的图像进行采样来计算平均像素强度值。使用Cell-F软件(Olympus)计算每个实验组的平均像素强度。对于每个实验,针对每种菌株/条件检查至少25个蠕虫。每个实验重复至少三次。
在秀丽隐杆线虫中,ROS水平的增加可导致胰岛素/胰岛素生长因子-1信号传到途径的活化(Back等人,2012;Hartwig等人,2009),从而驱动对FOXO/DAF-16的调控,其积极控制参与氧化应激抵抗和存活的各种靶基因(Mukhoposdhyay等人,2006)。观察到由心脏毒性LC产生的ROS充当调节FOXO信号传导途径的信号传导分子。在基础条件下(媒介物饲喂的蠕虫),DAF-16主要定位于在daf-16启动子控制下表达GFP的转基因TJ356秀丽隐杆线虫的细胞溶质中(Hartwig等人,2009)(图6A和6C)。H7-BJ的施用引起DAF-16的核易位的显著增加,在蠕虫体内出现密集的绿色焦点时可检测到(图6B和6D)。当将线虫饲喂H2O2作为阳性对照时观察到类似的作用(图6E和6F)。1033抵消了由心脏毒性LC诱导的DAF-16的活化(图6C和6D)。当H7-BJ与抗氧化剂原型化合物(5mM NAC)一起施用时,未观察到类似的作用(图6C和6D)。相反,TETRA(50μM)(一种已知的抗生素,其也具有抗氧化剂和金属离子螯合剂活性)(Chin和Lack,1975;Stailova等人,2013)抵消了由心脏毒性LC诱导的DAF-16活化(图6C和6D)。
然后评价抗氧化剂防御系统的适应性反应。具体地说,使用分别在hsp-16.2或sod-3启动子控制下表达GFP的转基因CL2070(Hartwig等人,2009)和CF1553(Anbalagan等人,2012)蠕虫来测定小HSP-16.2的表达的活化(其可充当ROS传感器并且还影响蠕虫的寿命)(Hartwig等人,2009)以及抗氧化剂酶锰超氧化物歧化酶的活性。H7-BJ而不是MM2-BJ引起线虫咽部中HSP-16.2(图7A、7B)以及SOD-3表达(图7C、7D)的显著增加,与在H2O2情况下观察到的相似。相比之下,暴露于1033显著降低了LC诱导的HSP-16.2和SOD-3蛋白表达,如分别通过CL2070和CF1553蠕虫的咽部中不存在GFP信号所指示(图7)。
总体而言,这些结果表明心脏毒性LC通过金属离子介导的ROS产生和随后的FOXO/DAF-1途径活化刺激参与控制氧化应激反应和寿命的基因,并且LC与金属螯合化合物(如1033)共孵育消除了蠕虫应激反应。
实施例8:线粒体中的心脏毒性LC损伤对比ROS产生
对由心脏毒性LC产生的ROS是否引起咽部亚细胞区室(特别是线粒体,其在为收缩活动提供能量中起重要作用)的改变进行了研究。
将N2蠕虫饲喂单独或与以下一起的5mM PBS(pH 7.4)中的100μg/mL H6-BJ、H7-BJ、MM2-BJ或MM4-BJ LC(100个蠕虫/100μL):5mM PBS(pH 7.4)中的5mM NAC;5mM PBS(pH7.4)中的50μM TETRA;或2nM 1033。对照蠕虫仅与单独媒介物(媒介物)一起孵育。在轨道振荡上孵育2小时后,将蠕虫在相同药物浓度存在下转移到接种有OP50大肠杆菌的NGM板上。在二十(20)小时后,将秀丽隐杆线虫挑取,在10mM PBS(pH 7.4)中洗涤,并用0.12M磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中的2%戊二醛固定。然后在咽部的第二球水平下切开蠕虫,以改进固定剂的进入。在室温下固定后过夜后,将样品在1%OsO4 1.5%亚铁氰化物于0.12M二甲胂酸盐缓冲液中的溶液(亚铁氰化物还原的OsO4)中在室温下孵育1小时,然后在H2O中的0.3%硫代碳酰肼中孵育5分钟,并且最终在0.12M二甲胂酸盐缓冲液中的2%OsO4中孵育1小时。然后将秀丽隐杆线虫咽部置于2%琼脂糖凝胶中并切割小立方体,并且在乙醇的梯度系列中脱水各10分钟,在环氧丙烷中澄清并包埋在环氧树脂培养基(Epon 812Fluka)中且在60℃下聚合72小时。从每个样品中,用Leica EM UC6超薄切片机切割一个半薄(1μm)切片并安装在载玻片上用于光学显微镜检查。获得超薄(60-80nm厚)的目标区域切片,用乙酸双氧铀和柠檬酸铅复染色,并用配备有YAG闪烁体慢扫描CCD照相机的能量滤波透射电子显微镜(EFTEM,ZEISS 120)检查。
将人心肌组织的标本(表1B)用0.2M二甲胂酸盐缓冲液(pH 7.3)中的2.5%戊二醛固定2小时,并在相同缓冲液中的1%四氧化锇中后固定。然后将它们在分级系列的乙醇中脱水并包埋在环氧树脂中。切割超薄切片(60-80nm厚),安装在镍网格上并用5%乙酸双氧铀和柠檬酸铅(Reynold溶液)染色。用Philips CM12透射电子显微镜观察每位患者的最少5个切片。然后如先前所述(Fernandez de Larrea等人,2014),将切片加工用于包埋后免疫金。简言之,进行酶促预消化(含有0.05%CaCl2的Tris缓冲液中的0.05%胰蛋白酶,37℃,15分钟)以揭示抗原表位。然后在0.05M Tris/HCl缓冲液(pH7.3)中冲洗切片,与1:20正常山羊血清或1%卵白蛋白在室温下孵育15分钟。将切片在4℃下与多克隆抗-λLC抗体(1:50稀释,Dako,Agilent Technologies,CA,USA)一起孵育过夜,然后在室温下与蛋白-A(1:20稀释)孵育1小时,缀合至15nm胶体金颗粒(British Biocell International,UK)。使用正常山羊血清或卵白蛋白作为第一抗体验证免疫反应的特异性。
透射电子显微镜(TEM)分析显示,与媒介物处理的线虫相比,饲喂H7-BJ而不是MM2-BJ的蠕虫的咽部肌肉导致咽部超微结构的显著改变并引起线粒体损伤(图8A-8C)。当蠕虫饲喂H6-BJ(一种源自不相关的种系基因的心脏淀粉样蛋白LC)时,观察到相似的特征,从而证明观察到的功能和结构效应严格依赖于心脏LC所固有的特征,对特定种系基因或基因组没有限制。
此外,1033以及TETRA和NAC能够中和由心脏毒性LC引起的ROS产生和抽动功能障碍(Diomede等人,2014)(图8D-8F和图9)。这些发现表明,心脏毒性LC特异性损伤亚细胞咽部结构(特别是线粒体)的特异性能力源自它们产生ROS的能力。此外,金属螯合化合物能够阻止ROS产生,并且防止氧化损伤的抗氧化剂药物抵抗心脏LC诱导的组织损伤。
测试了在蠕虫中观察到的亚细胞改变是否与由人心脏组织中的心脏LC引起的损伤相当。为此,将来自患有晚期心功能障碍的AL患者的心内膜心肌活检(关于临床特征参见表1B)迅速加工用于TEM。类似于暴露于心脏LC的蠕虫(图8C),大多数人线粒体显示出显著结构紊乱(图10A-10C)。相比之下,来自针对原发性扩张型心肌病(用作心脏功能障碍的疾病和严重程度的对照)经历心脏移植的受试者的心内膜心肌活检显示完全保留的线粒体和仅有轻微改变的分散的线粒体(图10D)。这些结果(与由Guan等人.2014报道的那些相似)支持线虫模型的有效性,并加强其用于设计和测试新治疗方法的基本原理。
实施例9:在抗氧化剂之前施用的心脏毒性LC
为了反映临床中最可能遇到的情况,当咽部已经被心脏毒性LC损伤时,将药物施用于蠕虫。将线虫饲喂H7-BJ持续1.5小时以产生与当施用LC 2小时获得的咽部功能障碍相当的咽部功能障碍(图11A)。然施用药物30分钟并对抽动速率进行评分。在2nM下,1033能够恢复由H7-BJ引起的正常咽部功能,而20μM TETRA(对应于IC50值的剂量)是无效的(图11A)。
实施例10:TETRA和1033的协同作用
饲喂实验,其中将线虫饲喂H7-BJ持续1.5小时以产生噬菌体功能障碍,随后20μMTETRA、0.5nM 1033、2nM 1033、20μM TETRA和0.5nM 1033。
结果在图11B中示出。20μM TETRA对恢复咽部功能具有最小影响,并且0.5nM 1033对恢复咽部功能没有影响。单独2nM 1033和与20μM TETRA组合的2nM 1033提供了类似的结果,这可能是因为已经通过2nM 1033获得了咽部功能的最大恢复(53%)。
然而,20μM TETRA与0.5nM 1033一起(一种无效浓度)提供了协同作用。这些数据表明组合施用低剂量的1033和TETRA可能代表了用于打破由心脏毒性LC诱导的氧化应激的恶性循环的一种创新的药理学方法。
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Claims (25)
1.一种治疗受试者的免疫球蛋白轻链淀粉样变性的方法,所述方法包括施用式(I)化合物:
其中
R、R1和R3是相同或不同的,并且各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、-SOR6、-SO2R6、-SO2NR7R8、-C(O)R9、-SO3H、卤代、-CN、芳基和杂环基;
R2是选自-(CH2)m苯基、-(CH2)m萘基、-(CH2)m四氢萘基、-(CH2)m联苯基、-(CH2)m杂环基、-(CH2)mC(O)R9、-(CH2)mC(S)R9、-(CH2)mCN、-(CH2)mNR7R8、-CH=NR6、-CH=NOR6、-CH=N-NR10R11、-(CH2)mOR6、-(CH2)mSR6和-(CH2)mSO2NR10R11;
R4和R5是相同或不同的,并且独立地选自卤代;
R6是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
R7和R8是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-(CH2)m芳基以及-(CH2)m杂环基,或者R7与R8一起形成杂环;
R9是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、芳基和杂芳基;
R10和R11是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
m是0或选自1、2或3的整数;
其中每个烷基、烯基、炔基、芳基和杂芳基可任选地被取代;
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述方法减轻或逆转免疫球蛋白轻链淀粉样变性的症状。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法,其中所述免疫球蛋白轻链淀粉样变性是心脏免疫球蛋白轻链淀粉样变性。
4.一种治疗或预防或减轻或逆转受试者的与免疫球蛋白轻链淀粉样变性相关的心脏毒性的症状的方法,所述方法包括施用式(I)化合物:
其中
R、R1和R3是相同或不同的,并且各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、-SOR6、-SO2R6、-SO2NR7R8、-C(O)R9、-SO3H、卤代、-CN、芳基和杂环基;
R2是选自-(CH2)m苯基、-(CH2)m萘基、-(CH2)m四氢萘基、-(CH2)m联苯基、-(CH2)m杂环基、-(CH2)mC(O)R9、-(CH2)mC(S)R9、-(CH2)mCN、-(CH2)mNR7R8、-CH=NR6、-CH=NOR6、-CH=N-NR10R11、-(CH2)mOR6、-(CH2)mSR6和-(CH2)mSO2NR10R11;
R4和R5是相同或不同的,并且独立地选自卤代;
R6是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
R7和R8是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-(CH2)m芳基以及-(CH2)m杂环基,或者R7与R8一起形成杂环;
R9是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、芳基和杂芳基;
R10和R11是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
m是0或选自1、2或3的整数;
其中每个烷基、烯基、炔基、芳基和杂芳基可任选地被取代;
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
5.根据权利要求4所述的方法,其中所述方法用于逆转由沉积在心脏组织中的心脏毒性免疫球蛋白轻链引起的损伤。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中每个R、R1和R3独立地选自氢、-C1-3烷基、-C2-3烯基、-C2-3炔基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-CH2CF2H、-CH2CH2F、-OH、-OC1-6烷基、-OCF3、-OCHF2、-OCH2F、-OCH2CF3、-OCH2CHF2、-OCH2CH2F、-OC2-3烯基、-OC2-3炔基、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2、-SO2C1-6烷基、-CO2H、-CO2C1-3烷基、-CONH2、-CONH(C1-3烷基)、-CON(C1-3烷基)2、F、Cl和Br;
7.根据权利要求6所述的方法,其中R、R1和R3都是氢。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其中R2是选自-(CH2)m杂环基、-(CH2)mC(O)R9、-(CH2)mCN、-(CH2)mNR7R8、-CH=NC1-6烷基、-CH=N-OR6、-CH=N-NR10R11、-SO2NR10R11和-(CH2)mOR6。
9.根据权利要求8所述的方法,其中R2是选自杂环基、-CH2杂环基、-CO2H、-C(O)NR7R8、-NR7R8、-CH2NR7R8、-CH=NOH、-CH=NOC1-6烷基、-CH2OR6或–SO2NR10R11。
10.根据权利要求9所述的方法,其中R2是选自-C(O)NH(CH2杂环基)、-C(O)NH(CH2CH2杂环基)、吡啶基、-CH2N(C1-3烷基)2、-N(C1-3烷基)(杂环基)、-CH2NH(C1-3烷基)、-CH=N-OH、-CH=N-OCH3、-CH2OC1-6烷基、-CH2OC1-6卤代烷基、-CH=NCH3和-CH2N(C1-3烷基)(CH2杂环基)。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法,其中R4和R5独立地选自F、Cl和I。
12.根据权利要求11所述的方法,其中R4和R5均是Cl。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法,其中m是0或1。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法,其中所述式(I)化合物是选自:
以及
其中n是1、2或3。
15.根据权利要求14所述的方法,其中所述式(I)化合物是
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法,其还包括施用另一种药物活性剂。
17.根据权利要求16所述的方法,其中所述另一种药物活性剂是抗氧化剂或用于治疗免疫球蛋白轻链淀粉样变性的药物活性剂。
18.根据权利要求17所述的方法,其中所述另一种药物活性剂是抗氧化剂。
19.一种治疗或预防或减轻或逆转免疫球蛋白轻链淀粉样变性的症状的方法,所述方法包括向受试者施用有效量的式(I)化合物
其中
R、R1和R3是相同或不同的,并且各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、-SOR6、-SO2R6、-SO2NR7R8、-C(O)R9、-SO3H、卤代、-CN、芳基和杂环基;
R2是选自-(CH2)m苯基、-(CH2)m萘基、-(CH2)m四氢萘基、-(CH2)m联苯基、-(CH2)m杂环基、-(CH2)mC(O)R9、-(CH2)mC(S)R9、-(CH2)mCN、-(CH2)mNR7R8、-CH=NR6、-CH=NOR6、-CH=N-NR10R11、-(CH2)mOR6、-(CH2)mSR6和-(CH2)mSO2NR10R11;
R4和R5是相同或不同的,并且独立地选自卤代;
R6是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
R7和R8是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-(CH2)m芳基以及-(CH2)m杂环基,或者R7与R8一起形成杂环;
R9是选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、-OR6、-SR6、-NR7R8、芳基和杂芳基;
R10和R11是相同或不同的,并且独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C1-6卤代烷基、芳基和杂芳基;
m是0或选自1、2或3的整数;
其中每个烷基、烯基、炔基、芳基和杂芳基可任选地被取代。
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物;以及有效量的抗氧化剂。
20.根据权利要求19所述的方法,其中治疗、预防、减轻或逆转的所述症状与心脏组织中的心脏毒性免疫球蛋白轻链沉积物相关。
21.根据权利要求19或权利要求20所述的方法,其中所述式(I)化合物的所述有效量是亚治疗量。
22.根据权利要求19至21中任一项所述的方法,其中所述式(I)化合物是
23.根据权利要求19至22中任一项所述的方法,其中所述抗氧化剂是四环素。
24.如权利要求1和6至15中任一项定义的式(I)化合物在制造用于治疗受试者的免疫球蛋白轻链淀粉样变性、治疗或预防或减轻或逆转受试者的与免疫球蛋白轻链淀粉样变性相关的心脏毒性的症状,或者治疗或预防或减轻或逆转免疫球蛋白轻链淀粉样变性的症状的药物中的用途。
25.如权利要求1和6至15中任一项定义的式(I)化合物,其用于治疗受试者的免疫球蛋白轻链淀粉样变性、治疗或预防或减轻或逆转受试者的与免疫球蛋白轻链淀粉样变性相关的心脏毒性的症状,或者治疗或预防或减轻或逆转免疫球蛋白轻链淀粉样变性的症状。
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