CN109387619A - 一种精液联合检测试剂盒 - Google Patents

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李俊美
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Abstract

本发明提供了一种精液联合检测试剂盒，其特征在于：包括样本稀释液、显色液及pH值检测纸和/或白细胞脂酶检测纸和/或肉毒碱检测纸和/或乳酸脱氢酶检测纸和/或卵磷脂小体检测纸和/或柠檬酸检测纸和/或锌检测纸和/或弹性蛋白酶检测纸和/或果糖检测纸和/或中性‑α‑葡萄糖苷酶检测纸。由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：可实现上机操作，不仅能取代传统检测方法，而且在灵敏度、准确度、保存方法、使用范围、性价比、操作等诸多方面综合优势明显，所述检测纸浸泡稳定液烘干后可以实现长期常温保存，为男性精浆微生态环境评估以及各种男性不育症的诊断提供了科学、准确的检验依据。

Description

一种精液联合检测试剂盒
技术领域
本发明涉及技术检测领域。
具体地说，是涉及一种精液联合检测试剂盒。
背景技术
男性不育症发生率为10%左右。其中单纯女方因素约为50%，单纯男方因素约为30%，男女共有约20%。临床上把男性不育分为性功能障碍和性功能正常两类，后者依据精液分析结果可进一步分为无精子症、少精子症、弱精子症、精子无力症和精子数正常性不育。
男性不育的原因比较复杂，原因主要有精液异常、生精障碍、精子卵子结合障碍以及其它全身性因素，比如精神和环境因素、营养因素和内分泌疾病等等。其中精液异常是引起男性不育的主要原因。
正常的精液是实现生育的最基本的条件之一。分析精液质量不能单从精液的某一项指标定论，应对多方面指标进行综合分析。常用的评估精液质量的方法主要有：一般性状检查、显微镜检查、化学检查、免疫学检查、微生物学检查、精子功能检查等。其中镜检只能从形态上对精子的浓度、存活率、形态等进行主观评估，无法对精浆微生态稳定和健康起到重要作用的功能性指标进行检测。精浆微生态的环境包括pH值、白细胞脂酶、肉毒碱、乳酸脱氢酶、卵磷脂小体、柠檬酸、精浆锌、弹性蛋白酶、精浆果糖和中性-α-葡萄糖苷酶的活性等。现临床上对这些项目的检测，操作复杂，用时较长，而且需要特殊仪器上机操作。另外现有的检测纸必须保存在2-8℃条件下，储存和使用不方便。
发明内容
本发明的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种精液联合检测试剂盒，可快速检测精浆微生态环境，操作简单。
本发明的目的是通过以下技术措施来达到的：
一种精液联合检测试剂盒，其特征在于：包括样本稀释液、显色液及pH值检测纸和/或白细胞脂酶检测纸和/或肉毒碱检测纸和/或乳酸脱氢酶检测纸和/或卵磷脂小体检测纸和/或柠檬酸检测纸和/或锌检测纸和/或弹性蛋白酶检测纸和/或果糖检测纸和/或中性-α-葡萄糖苷酶检测纸。
作为一种改进：所述检测纸的制备方法包括以下步骤：
S1、纸片浸泡浸泡液，然后烘干；
S2、步骤S1的产物浸泡稳定液，然后烘干。
作为一种改进：所述白细胞脂酶检测纸浸泡液由乙醇溶液和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯配制而成；
所述乙醇浓度为92-98%，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯的浓度为0.5-10g/L。
所述肉毒碱检测纸片浸泡液由肉毒碱酰基转移酶、5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）和水配制而成；
所述肉毒碱酰基转移酶的浓度为0.1-100g/L，所述5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）的浓度为0.1-100g/L。
作为一种改进：所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液由磷酸盐缓冲液、乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼配制而成；
所述磷酸盐缓冲液为0.01-10mol/L，pH6.0-7.0的磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液；所述乳酸的浓度为0.1-10mol/L；所述丙酮酸钠的浓度为0.1-10mmol/L；所述2，4-二硝基苯肼的浓度为1-100mmol/L。
所述卵磷脂小体检测纸浸泡液由硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液配制而成；
所述硼酸盐缓冲液的pH为7-8，其中氯化钾的浓度为0.5-20g/L，硼酸的浓度为0.8-20g/L，氢氧化钠的浓度为0.05-8g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为0.5-10g/L；
所述氯化锌溶液中氯化锌的浓度为0.1-20g/L；
所述硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液的比例为20:1:1。
作为一种改进：所述柠檬酸检测纸浸泡液由硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液配制而成；
所述硫酸铁铵溶液中硫酸铁铵的浓度为0.01-1mol/L；
所述磺基水杨酸溶液中磺基水杨酸的浓度为0.01-1mol/L；
所述硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液的比例为1:15。
所述锌检测纸片的浸泡液由硼酸盐缓冲液和锌试剂配制而成；
所述硼酸盐缓冲液的pH为7-9，其中氯化钾的浓度为1-100g/L，硼酸的浓度为1-100g/L，氢氧化钠的浓度为0.1-10g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为1-100g/L；
所述硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液的比例为10:1。
作为一种改进：所述弹性蛋白酶检测纸的浸泡液由Tris-HCl缓冲液、刚果红弹性蛋白配制而成；
所述Tris-HCl缓冲液的pH为6-8,浓度为0.1-1.0M，所述刚果红弹性蛋白的浓度为0.1-5mg/L。
所述果糖检测纸的浸泡液由碘硝基四唑紫和水配制而成；
所述碘硝基四唑紫的浓度为250-300umol/L；
所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的浸泡液由氯化铁和水配制而成；
所述氯化铁的浓度为0.1-2.0mol/L。
作为一种改进：所述稳定液由pH7.2-7.6的PBS缓冲液、酪蛋白、蔗糖、丙酮、硫酸铵、BSA、Prodin-300、柠檬酸、尿素、海藻糖配制而成；
所述PBS缓冲液浓度为0.015-0.025M；所述酪蛋白的浓度为1.0-2.5g/L；所述蔗糖的浓度为5.0-12.0g/L；所述丙酮的浓度为1.5-3.5ml/L；所述硫酸铵的浓度为1.0-3.0g/L；所述BSA的浓度为2.0-3.0g/L；所述Prodin-300的浓度为2.0-6.0ml/L；所述柠檬酸的浓度为3.0-7.0g/L；所述尿素的浓度为2.0-3.5g/L；所述海藻糖的浓度为0.5-5g/L。
所述检测纸浸泡稳定液烘干后可以实现长期常温保存。
作为一种改进：所述样本稀释液由NaCl和水配制而成；
所述NaCl的浓度为0.85-0.9%。
作为一种改进：所述显色液包括乳酸脱氢酶显色液；
所述乳酸脱氢酶显色液由PBS缓冲液和NADH配制而成；
所述PBS缓冲液的pH为7.2-7.6，浓度为0.015-0.025M，所述NADH的浓度为1-50mmol/L；
作为一种改进：所述显色液包括肉毒碱显色液；
所述肉毒碱显色液由PBS缓冲液和乙酰辅酶A配制而成；
所述PBS缓冲液的pH为7.2-7.6，浓度为0.015-0.025M，所述乙酰辅酶A的浓度为0.1-100g/L。
由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：可实现上机操作，不仅能取代传统检测方法，而且在灵敏度、准确度、保存方法、使用范围、性价比、操作等诸多方面综合优势明显，所述检测纸浸泡稳定液烘干后可以实现长期常温保存，为男性精浆微生态环境评估以及各种男性不育症的诊断提供了科学、准确的检验依据。
具体实施方式
实施例1：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述样本稀释液由NaCl和水配制而成，所述NaCl的浓度为0.85%。
所述显色液包括乳酸脱氢酶显色液和肉毒碱显色液；
所述乳酸脱氢酶显色液由PBS缓冲液和NADH配制而成，所述PBS缓冲液的pH为7.2，浓度为0.015M，所述NADH的浓度为1mmol/L；
所述肉毒碱显色液由PBS缓冲液和乙酰辅酶A配制而成，所述PBS缓冲液的pH为7.2，浓度为0.015M，所述乙酰辅酶A的浓度为0.1g/L。
所述检测卡上设有若干反应孔，每个反应孔内放置有pH值检测纸和白细胞脂酶检测纸和肉毒碱检测纸和乳酸脱氢酶检测纸和卵磷脂小体检测纸和柠檬酸检测纸和锌检测纸和弹性蛋白酶检测纸和果糖检测纸和中性-α-葡萄糖苷酶检测纸。
选优的，检测卡上设有十个反应孔，每个反应孔对应上述一种检测纸。
所述pH值检测纸、白细胞脂酶检测纸、肉毒碱检测纸、乳酸脱氢酶检测纸、卵磷脂小体检测纸、柠檬酸检测纸、锌检测纸、弹性蛋白酶检测纸、果糖检测纸、中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的形状均为圆形，直径为3毫米。所述白细胞脂酶检测纸、肉毒碱检测纸、乳酸脱氢酶检测纸、卵磷脂小体检测纸、柠檬酸检测纸、锌检测纸、弹性蛋白酶检测纸、果糖检测纸、中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的材质为滤纸。
所述白细胞脂酶检测纸或肉毒碱检测纸或乳酸脱氢酶检测纸或卵磷脂小体检测纸或柠檬酸检测纸或锌检测纸或弹性蛋白酶检测纸或果糖检测纸或中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的制备方法包括以下步骤：
S1、纸片浸泡浸泡液15ul/cm2，然后37℃烘干30分钟；
S2、步骤S1的产物浸泡稳定液15ul/cm2，然后37℃烘干1小时。
所述稳定液由pH7.2的PBS缓冲液、酪蛋白、蔗糖、丙酮、硫酸铵、BSA、Prodin-300、柠檬酸、尿素、海藻糖配制而成，所述PBS缓冲液浓度为0.015M；所述酪蛋白的浓度为1.0g/L；所述蔗糖的浓度为5.0g/L；所述丙酮的浓度为1.5ml/L；所述硫酸铵的浓度为1.0g/L；所述BSA的浓度为2.0g/L；所述Prodin-300的浓度为2.0ml/L；所述柠檬酸的浓度为3.0g/L；所述尿素的浓度为2.0g/L；所述海藻糖的浓度为0.5g/L。
所述稳定液的配制方法为：首先配置PBS缓冲液，然后加入并溶解酪蛋白、蔗糖、丙酮、硫酸铵、BSA、Prodin-300、柠檬酸、尿素、海藻糖。
1、pH值检测纸采用购买的pH试纸条，测量范围为6.4-8.0。
2、所述白细胞脂酶检测纸浸泡液由乙醇溶液和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯配制而成，所述乙醇浓度为92%，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯的浓度为0.5g/L。
所述白细胞脂酶检测纸浸泡液的配制方法为：乙醇溶液中加入并溶解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯。
3、所述肉毒碱检测纸片浸泡液由肉毒碱酰基转移酶、5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）和水配制而成，所述肉毒碱酰基转移酶的浓度为0.1g/L，所述5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）的浓度为0.1g/L。
所述肉毒碱检测纸片浸泡液的配制方法为：在水中加入肉毒碱酰基转移酶和5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）。
4、所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液由磷酸盐缓冲液、乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼配制而成，所述磷酸盐缓冲液为0.01mol/L，pH6.0的磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液；所述乳酸的浓度为0.1mol/L；所述丙酮酸钠的浓度为0.1mmol/L；所述2，4-二硝基苯肼的浓度为1mmol/L。
所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液的配制方法为：先配置磷酸盐缓冲液，然后在磷酸盐缓冲液中加入溶解乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼。
5、所述卵磷脂小体检测纸浸泡液由硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液配制而成，所述硼酸盐缓冲液的pH为7，其中氯化钾的浓度为0.5g/L，硼酸的浓度为0.8g/L，氢氧化钠的浓度为0.05g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为0.5g/L；
所述氯化锌溶液中氯化锌的浓度为0.1g/L；
所述硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液的比例为20:1:1。
所述卵磷脂小体检测纸浸泡液的配制方法为：先配置硼酸盐缓冲液：在水中加入并溶解氯化钾、硼酸和氢氧化钠，再加入锌试剂溶液和氯化锌溶液。
6、所述柠檬酸检测纸浸泡液由硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液配制而成，所述硫酸铁铵溶液中硫酸铁铵的浓度为0.01mol/L；
所述磺基水杨酸溶液中磺基水杨酸的浓度为0.01mol/L；
所述硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液的比例为1:15。
所述柠檬酸检测纸浸泡液的配制方法为：先分别配制硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液，然后将两种溶液按比例混合。
7、所述锌检测纸片的浸泡液由硼酸盐缓冲液和锌试剂配制而成，所述硼酸盐缓冲液的pH为7，其中氯化钾的浓度为1g/L，硼酸的浓度为1g/L，氢氧化钠的浓度为0.1g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为1g/L；
所述硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液的比例为10:1。
所述锌检测纸片的浸泡液的配制方法为：先配制硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液。所述硼酸盐缓冲液配制方法为：在水中加入并溶解氯化钾、硼酸和氢氧化钠。然后将两种溶液按比例混合。
8、所述弹性蛋白酶检测纸的浸泡液由Tris-HCl缓冲液、刚果红弹性蛋白配制而成，所述Tris-HCl缓冲液的pH为6,浓度为0.1M，所述刚果红弹性蛋白的浓度为0.1mg/L。
所述弹性蛋白酶检测纸浸泡液的配制方法为：先配制Tris-HCl缓冲液，然后加入并溶解刚果红弹性蛋白。
9、所述果糖检测纸的浸泡液由碘硝基四唑紫和水配制而成，所述碘硝基四唑紫的浓度为250umol/L。
所述果糖检测纸浸泡液的配制方法为：在水中加入并溶解碘硝基四唑紫。
10、所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的浸泡液由氯化铁和水配制而成，所述氯化铁的浓度为0.1mol/L。
所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸浸泡液的配制方法为：在水中加入并溶解氯化铁。
实施例2：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述样本稀释液由NaCl和水配制而成，所述NaCl的浓度为0.87%。
所述显色液包括乳酸脱氢酶显色液和肉毒碱显色液；
所述乳酸脱氢酶显色液由PBS缓冲液和NADH配制而成，所述PBS缓冲液的pH为7.4，浓度为0.02M，所述NADH的浓度为25mmol/L；
所述肉毒碱显色液由PBS缓冲液和乙酰辅酶A配制而成，所述PBS缓冲液的pH为7.24，浓度为0.02M，所述乙酰辅酶A的浓度为50g/L。
所述检测卡上设有若干反应孔，每个反应孔内放置有pH值检测纸或白细胞脂酶检测纸或肉毒碱检测纸或乳酸脱氢酶检测纸或卵磷脂小体检测纸或柠檬酸检测纸或锌检测纸或弹性蛋白酶检测纸或果糖检测纸或中性-α-葡萄糖苷酶检测纸。
选优的，检测卡上设有十个反应孔，每个反应孔对应上述一种检测纸。
所述pH值检测纸、白细胞脂酶检测纸、肉毒碱检测纸、乳酸脱氢酶检测纸、卵磷脂小体检测纸、柠檬酸检测纸、锌检测纸、弹性蛋白酶检测纸、果糖检测纸、中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的形状均为圆形，直径为4毫米。所述白细胞脂酶检测纸、肉毒碱检测纸、乳酸脱氢酶检测纸、卵磷脂小体检测纸、柠檬酸检测纸、锌检测纸、弹性蛋白酶检测纸、果糖检测纸、中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的材质为滤纸。
所述白细胞脂酶检测纸或肉毒碱检测纸或乳酸脱氢酶检测纸或卵磷脂小体检测纸或柠檬酸检测纸或锌检测纸或弹性蛋白酶检测纸或果糖检测纸或中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的制备方法包括以下步骤：
S1、纸片浸泡浸泡液20ul/cm2，然后37℃烘干1小时；
S2、步骤S1的产物浸泡稳定液20ul/cm2，然后37℃烘干1.5小时。
所述稳定液由pH7.4的PBS缓冲液、酪蛋白、蔗糖、丙酮、硫酸铵、BSA、Prodin-300、柠檬酸、尿素、海藻糖配制而成，所述PBS缓冲液浓度为0.02M；所述酪蛋白的浓度为1.5g/L；所述蔗糖的浓度为8g/L；所述丙酮的浓度为2.5ml/L；所述硫酸铵的浓度为2.0g/L；所述BSA的浓度为2.5g/L；所述Prodin-300的浓度为4.0ml/L；所述柠檬酸的浓度为5.0g/L；所述尿素的浓度为2.8g/L；所述海藻糖的浓度为3.0g/L。
所述稳定液的配制方法为：首先配置PBS缓冲液，然后加入并溶解酪蛋白、蔗糖、丙酮、硫酸铵、BSA、Prodin-300、柠檬酸、尿素、海藻糖。
1、pH值检测纸采用购买的pH试纸条，测量范围为6.4-8.0。
2、所述白细胞脂酶检测纸浸泡液由乙醇溶液和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯配制而成，所述乙醇浓度为95%，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯的浓度为5g/L。
所述白细胞脂酶检测纸浸泡液的配制方法为：乙醇溶液中加入并溶解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯。
3、所述肉毒碱检测纸片浸泡液由肉毒碱酰基转移酶、5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）和水配制而成，所述肉毒碱酰基转移酶的浓度为50g/L，所述5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）的浓度为50g/L。
所述肉毒碱检测纸片浸泡液的配制方法为：在水中加入肉毒碱酰基转移酶和5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）。
4、所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液由磷酸盐缓冲液、乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼配制而成，所述磷酸盐缓冲液为5mol/L，pH6.5的磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液；所述乳酸的浓度为5mol/L；所述丙酮酸钠的浓度为5mmol/L；所述2，4-二硝基苯肼的浓度为50mmol/L。
所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液的配制方法为：先配置磷酸盐缓冲液，然后在磷酸盐缓冲液中加入溶解乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼。
5、所述卵磷脂小体检测纸浸泡液由硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液配制而成，所述硼酸盐缓冲液的pH为7.5，其中氯化钾的浓度为10g/L，硼酸的浓度为10g/L，氢氧化钠的浓度为4g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为5g/L；
所述氯化锌溶液中氯化锌的浓度为10g/L；
所述硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液的比例为20:1:1。
所述卵磷脂小体检测纸浸泡液的配制方法为：先配置硼酸盐缓冲液：在水中加入并溶解氯化钾、硼酸和氢氧化钠，再加入锌试剂溶液和氯化锌溶液。
6、所述柠檬酸检测纸浸泡液由硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液配制而成，所述硫酸铁铵溶液中硫酸铁铵的浓度为0.5mol/L；
所述磺基水杨酸溶液中磺基水杨酸的浓度为0.5mol/L；
所述硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液的比例为1:15。
所述柠檬酸检测纸浸泡液的配制方法为：先分别配制硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液，然后将两种溶液按比例混合。
7、所述锌检测纸片的浸泡液由硼酸盐缓冲液和锌试剂配制而成，所述硼酸盐缓冲液的pH为8，其中氯化钾的浓度为50g/L，硼酸的浓度为50g/L，氢氧化钠的浓度为5g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为50g/L；
所述硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液的比例为10:1。
所述锌检测纸片的浸泡液的配制方法为：先配制硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液。所述硼酸盐缓冲液配制方法为：在水中加入并溶解氯化钾、硼酸和氢氧化钠。然后将两种溶液按比例混合。
8、所述弹性蛋白酶检测纸的浸泡液由Tris-HCl缓冲液、刚果红弹性蛋白配制而成，所述Tris-HCl缓冲液的pH为7,浓度为0.5M，所述刚果红弹性蛋白的浓度为2.5mg/L。
所述弹性蛋白酶检测纸浸泡液的配制方法为：先配制Tris-HCl缓冲液，然后加入并溶解刚果红弹性蛋白。
9、所述果糖检测纸的浸泡液由碘硝基四唑紫和水配制而成，所述碘硝基四唑紫的浓度为270umol/L。
所述果糖检测纸浸泡液的配制方法为：在水中加入并溶解碘硝基四唑紫。
10、所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的浸泡液由氯化铁和水配制而成，所述氯化铁的浓度为1mol/L。
所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸浸泡液的配制方法为：在水中加入并溶解氯化铁。
实施例3：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述样本稀释液由NaCl和水配制而成，所述NaCl的浓度为0.9%。
所述显色液包括乳酸脱氢酶显色液和肉毒碱显色液；
所述乳酸脱氢酶显色液由PBS缓冲液和NADH配制而成，所述PBS缓冲液的pH为7.6，浓度为0.025M，所述NADH的浓度为50mmol/L；
所述肉毒碱显色液由PBS缓冲液和乙酰辅酶A配制而成，所述PBS缓冲液的pH为7.6，浓度为0.025M，所述乙酰辅酶A的浓度为100g/L。
所述检测卡上设有若干反应孔，每个反应孔内放置有pH值检测纸或白细胞脂酶检测纸或肉毒碱检测纸或乳酸脱氢酶检测纸或卵磷脂小体检测纸或柠檬酸检测纸或锌检测纸或弹性蛋白酶检测纸或果糖检测纸或中性-α-葡萄糖苷酶检测纸。
选优的，检测卡上设有十个反应孔，每个反应孔对应上述一种检测纸。
所述pH值检测纸、白细胞脂酶检测纸、肉毒碱检测纸、乳酸脱氢酶检测纸、卵磷脂小体检测纸、柠檬酸检测纸、锌检测纸、弹性蛋白酶检测纸、果糖检测纸、中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的形状均为圆形，直径为5毫米。所述白细胞脂酶检测纸、肉毒碱检测纸、乳酸脱氢酶检测纸、卵磷脂小体检测纸、柠檬酸检测纸、锌检测纸、弹性蛋白酶检测纸、果糖检测纸、中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的材质为滤纸。
所述白细胞脂酶检测纸或肉毒碱检测纸或乳酸脱氢酶检测纸或卵磷脂小体检测纸或柠檬酸检测纸或锌检测纸或弹性蛋白酶检测纸或果糖检测纸或中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的制备方法包括以下步骤：
S1、纸片浸泡浸泡液25ul/cm2，然后37℃烘干2小时；
S2、步骤S1的产物浸泡稳定液25ul/cm2，然后37℃烘干2小时。
所述稳定液由pH7.6的PBS缓冲液、酪蛋白、蔗糖、丙酮、硫酸铵、BSA、Prodin-300、柠檬酸、尿素、海藻糖配制而成，所述PBS缓冲液浓度为0.025M；所述酪蛋白的浓度为2.5g/L；所述蔗糖的浓度为12.0g/L；所述丙酮的浓度为3.5ml/L；所述硫酸铵的浓度为3.0g/L；所述BSA的浓度为3.0g/L；所述Prodin-300的浓度为6.0ml/L；所述柠檬酸的浓度为7.0g/L；所述尿素的浓度为3.5g/L；所述海藻糖的浓度为5g/L。
所述稳定液的配制方法为：首先配置PBS缓冲液，然后加入并溶解酪蛋白、蔗糖、丙酮、硫酸铵、BSA、Prodin-300、柠檬酸、尿素、海藻糖。
1、pH值检测纸采用购买的pH试纸条，测量范围为6.4-8.0。
2、所述白细胞脂酶检测纸浸泡液由乙醇溶液和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯配制而成，所述乙醇浓度为98%，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯的浓度为10g/L。
所述白细胞脂酶检测纸浸泡液的配制方法为：乙醇溶液中加入并溶解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯。
3、所述肉毒碱检测纸片浸泡液由肉毒碱酰基转移酶、5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）和水配制而成，所述肉毒碱酰基转移酶的浓度为100g/L，所述5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）的浓度为100g/L。
所述肉毒碱检测纸片浸泡液的配制方法为：在水中加入肉毒碱酰基转移酶和5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）。
4、所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液由磷酸盐缓冲液、乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼配制而成，所述磷酸盐缓冲液为10mol/L，pH7.0的磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液；所述乳酸的浓度为10mol/L；所述丙酮酸钠的浓度为10mmol/L；所述2，4-二硝基苯肼的浓度为100mmol/L。
所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液的配制方法为：先配置磷酸盐缓冲液，然后在磷酸盐缓冲液中加入溶解乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼。
5、所述卵磷脂小体检测纸浸泡液由硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液配制而成，所述硼酸盐缓冲液的pH为8，其中氯化钾的浓度为20g/L，硼酸的浓度为20g/L，氢氧化钠的浓度为8g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为10g/L；
所述氯化锌溶液中氯化锌的浓度为20g/L；
所述硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液的比例为20:1:1。
所述卵磷脂小体检测纸浸泡液的配制方法为：先配置硼酸盐缓冲液：在水中加入并溶解氯化钾、硼酸和氢氧化钠，再加入锌试剂溶液和氯化锌溶液。
6、所述柠檬酸检测纸浸泡液由硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液配制而成，所述硫酸铁铵溶液中硫酸铁铵的浓度为1mol/L；
所述磺基水杨酸溶液中磺基水杨酸的浓度为1mol/L；
所述硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液的比例为1:15。
所述柠檬酸检测纸浸泡液的配制方法为：先分别配制硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液，然后将两种溶液按比例混合。
7、所述锌检测纸片的浸泡液由硼酸盐缓冲液和锌试剂配制而成，所述硼酸盐缓冲液的pH为9，其中氯化钾的浓度为100g/L，硼酸的浓度为100g/L，氢氧化钠的浓度为10g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为100g/L；
所述硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液的比例为10:1。
所述锌检测纸片的浸泡液的配制方法为：先配制硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液。所述硼酸盐缓冲液配制方法为：在水中加入并溶解氯化钾、硼酸和氢氧化钠。然后将两种溶液按比例混合。
8、所述弹性蛋白酶检测纸的浸泡液由Tris-HCl缓冲液、刚果红弹性蛋白配制而成，所述Tris-HCl缓冲液的pH为8,浓度为1.0M，所述刚果红弹性蛋白的浓度为5mg/L。
所述弹性蛋白酶检测纸浸泡液的配制方法为：先配制Tris-HCl缓冲液，然后加入并溶解刚果红弹性蛋白。
9、所述果糖检测纸的浸泡液由碘硝基四唑紫和水配制而成，所述碘硝基四唑紫的浓度为300umol/L。
所述果糖检测纸浸泡液的配制方法为：在水中加入并溶解碘硝基四唑紫。
10、所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的浸泡液由氯化铁和水配制而成，所述氯化铁的浓度为2.0mol/L。
所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸浸泡液的配制方法为：在水中加入并溶解氯化铁。
实施例4：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置有pH值检测纸。
pH值检测纸采用购买的pH试纸条，测量范围为6.4-8.0。
本实施例其余特征与实施例相同。
实施例5：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置白细胞脂酶检测纸。
所述白细胞脂酶检测纸浸泡液由乙醇溶液和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯配制而成，所述乙醇浓度为92%，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯的浓度为0.5g/L。
所述白细胞脂酶检测纸浸泡液的配制方法为：乙醇溶液中加入并溶解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯。
施例6：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置肉毒碱检测纸。
所述肉毒碱检测纸片浸泡液由肉毒碱酰基转移酶、5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）和水配制而成，所述肉毒碱酰基转移酶的浓度为0.1g/L，所述5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）的浓度为0.1g/L。
所述肉毒碱检测纸片浸泡液的配制方法为：在水中加入肉毒碱酰基转移酶和5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）。
实施例7：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置乳酸脱氢酶检测纸。
所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液由磷酸盐缓冲液、乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼配制而成，所述磷酸盐缓冲液为0.01mol/L，pH6.0的磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液；所述乳酸的浓度为0.1mol/L；所述丙酮酸钠的浓度为0.1mmol/L；所述2，4-二硝基苯肼的浓度为1mmol/L。
所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液的配制方法为：先配置磷酸盐缓冲液，然后在磷酸盐缓冲液中加入溶解乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼。
实施例8：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置卵磷脂小体检测纸。
所述卵磷脂小体检测纸浸泡液由硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液配制而成，所述硼酸盐缓冲液的pH为7，其中氯化钾的浓度为0.5g/L，硼酸的浓度为0.8g/L，氢氧化钠的浓度为0.05g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为0.5g/L；
所述氯化锌溶液中氯化锌的浓度为0.1g/L；
所述硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液的比例为20:1:1。
所述卵磷脂小体检测纸浸泡液的配制方法为：先配置硼酸盐缓冲液：在水中加入并溶解氯化钾、硼酸和氢氧化钠，再加入锌试剂溶液和氯化锌溶液。
实施例9：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置柠檬酸检测纸。
所述柠檬酸检测纸浸泡液由硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液配制而成，所述硫酸铁铵溶液中硫酸铁铵的浓度为0.01mol/L；
所述磺基水杨酸溶液中磺基水杨酸的浓度为0.01mol/L；
所述硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液的比例为1:15。
所述柠檬酸检测纸浸泡液的配制方法为：先分别配制硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液，然后将两种溶液按比例混合。
实施例10：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置锌检测纸。
所述锌检测纸片的浸泡液由硼酸盐缓冲液和锌试剂配制而成，所述硼酸盐缓冲液的pH为7，其中氯化钾的浓度为1g/L，硼酸的浓度为1g/L，氢氧化钠的浓度为0.1g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为1g/L；
所述硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液的比例为10:1。
所述锌检测纸片的浸泡液的配制方法为：先配制硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液。所述硼酸盐缓冲液配制方法为：在水中加入并溶解氯化钾、硼酸和氢氧化钠。然后将两种溶液按比例混合。
实施例11：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置弹性蛋白酶检测纸。
所述弹性蛋白酶检测纸的浸泡液由Tris-HCl缓冲液、刚果红弹性蛋白配制而成，所述Tris-HCl缓冲液的pH为6,浓度为0.1M，所述刚果红弹性蛋白的浓度为0.1mg/L。
所述弹性蛋白酶检测纸浸泡液的配制方法为：先配制Tris-HCl缓冲液，然后加入并溶解刚果红弹性蛋白。
实施例12：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置果糖检测纸。
所述果糖检测纸的浸泡液由碘硝基四唑紫和水配制而成，所述碘硝基四唑紫的浓度为250umol/L。
所述果糖检测纸浸泡液的配制方法为：在水中加入并溶解碘硝基四唑紫。
实施例13：一种精液联合检测试剂盒，包括样本稀释液、显色液及检测卡。
所述检测卡上设有反应孔，反应孔内放置中性-α-葡萄糖苷酶检测纸。
所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的浸泡液由氯化铁和水配制而成，所述氯化铁的浓度为0.1mol/L。
所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸浸泡液的配制方法为：在水中加入并溶解氯化铁。
本发明在使用时：首先离心，精液样本1500rcf离心10min，去沉淀留上清；然后将检测卡、显色液和样本液放入机器，进行检测；检测完毕后，取出检测卡，样本液按传染病实验室操作规范处理，打印报告。
以上对本发明的数个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应归属于本发明的专利涵盖范围之内。

Claims (10)

1.一种精液联合检测试剂盒，其特征在于：包括样本稀释液、显色液及pH值检测纸和/或白细胞脂酶检测纸和/或肉毒碱检测纸和/或乳酸脱氢酶检测纸和/或卵磷脂小体检测纸和/或柠檬酸检测纸和/或锌检测纸和/或弹性蛋白酶检测纸和/或果糖检测纸和/或中性-α-葡萄糖苷酶检测纸。
2.根据权利要求1所述的精液联合检测试剂盒，其特征在于：所述检测纸的制备方法包括以下步骤：
S1、纸片浸泡浸泡液，然后烘干；
S2、步骤S1的产物浸泡稳定液，然后烘干。
3.根据权利要求2所述的精液联合检测试剂盒，其特征在于：所述白细胞脂酶检测纸浸泡液由乙醇溶液和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯配制而成；
所述乙醇浓度为92-98%，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯的浓度为0.5-10g/L。
4.所述肉毒碱检测纸片浸泡液由肉毒碱酰基转移酶、5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）和水配制而成；
所述肉毒碱酰基转移酶的浓度为0.1-100g/L，所述5.5＇-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）的浓度为0.1-100g/L。
5.根据权利要求2所述的精液联合检测试剂盒，其特征在于：所述乳酸脱氢酶检测纸的浸泡液由磷酸盐缓冲液、乳酸、丙酮酸钠、NADH和2，4-二硝基苯肼配制而成；
所述磷酸盐缓冲液为0.01-10mol/L，pH6.0-7.0的磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液；所述乳酸的浓度为0.1-10mol/L；所述丙酮酸钠的浓度为0.1-10mmol/L；所述2，4-二硝基苯肼的浓度为1-100mmol/L；
所述卵磷脂小体检测纸浸泡液由硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液配制而成；
所述硼酸盐缓冲液的pH为7-8，其中氯化钾的浓度为0.5-20g/L，硼酸的浓度为0.8-20g/L，氢氧化钠的浓度为0.05-8g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为0.5-10g/L；
所述氯化锌溶液中氯化锌的浓度为0.1-20g/L；
所述硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液的比例为20:1:1。
6.根据权利要求2所述的精液联合检测试剂盒，其特征在于：所述柠檬酸检测纸浸泡液由硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液配制而成；
所述硫酸铁铵溶液中硫酸铁铵的浓度为0.01-1mol/L；
所述磺基水杨酸溶液中磺基水杨酸的浓度为0.01-1mol/L；
所述硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液的比例为1:15；
所述锌检测纸片的浸泡液由硼酸盐缓冲液和锌试剂配制而成；
所述硼酸盐缓冲液的pH为7-9，其中氯化钾的浓度为1-100g/L，硼酸的浓度为1-100g/L，氢氧化钠的浓度为0.1-10g/L；
所述锌试剂溶液中5-（2-羟基苯基）-1-（2-羟基-5-磺基苯基）-3-苯基甲单钠盐的浓度为1-100g/L；
所述硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液的比例为10:1。
7.根据权利要求2所述的精液联合检测试剂盒，其特征在于：所述弹性蛋白酶检测纸的浸泡液由Tris-HCl缓冲液、刚果红弹性蛋白配制而成；
所述Tris-HCl缓冲液的pH为6-8,浓度为0.1-1.0M，所述刚果红弹性蛋白的浓度为0.1-5mg/L；
所述果糖检测纸的浸泡液由碘硝基四唑紫和水配制而成；
所述碘硝基四唑紫的浓度为250-300umol/L；
所述中性-α-葡萄糖苷酶检测纸的浸泡液由氯化铁和水配制而成；
所述氯化铁的浓度为0.1-2.0mol/L。
8.根据权利要求2所述的精液联合检测试剂盒，其特征在于：所述稳定液由pH7.2-7.6的PBS缓冲液、酪蛋白、蔗糖、丙酮、硫酸铵、BSA、Prodin-300、柠檬酸、尿素、海藻糖配制而成；
所述PBS缓冲液浓度为0.015-0.025M；所述酪蛋白的浓度为1.0-2.5g/L；所述蔗糖的浓度为5.0-12.0g/L；所述丙酮的浓度为1.5-3.5ml/L；所述硫酸铵的浓度为1.0-3.0g/L；所述BSA的浓度为2.0-3.0g/L；所述Prodin-300的浓度为2.0-6.0ml/L；所述柠檬酸的浓度为3.0-7.0g/L；所述尿素的浓度为2.0-3.5g/L；所述海藻糖的浓度为0.5-5g/L。
9.根据权利要求1到9其中之一所述的精液联合检测试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液由NaCl和水配制而成；
所述NaCl的浓度为0.85-0.9%。
10.根据权利要求1到9其中之一所述的精液联合检测试剂盒，其特征在于：所述显色液包括乳酸脱氢酶显色液；
所述乳酸脱氢酶显色液由PBS缓冲液和NADH配制而成；
所述PBS缓冲液的pH为7.2-7.6，浓度为0.015-0.025M，所述NADH的浓度为1-50mmol/L；
根据权利要求1到9其中之一所述的精液联合检测试剂盒，其特征在于：所述显色液包括肉毒碱显色液；
所述肉毒碱显色液由PBS缓冲液和乙酰辅酶A配制而成；
所述PBS缓冲液的pH为7.2-7.6，浓度为0.015-0.025M，所述乙酰辅酶A的浓度为0.1-100g/L。
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