CN109358122A - 血液中维生素e的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种血液中维生素E的检测方法，将全血样本进行离心，得血清，加入甲醇乙腈混合溶液及正己烷，将其置于旋涡混合器内进行旋涡混合30—60s、然后在常温下进行离心3‑4min，取上清液得血清，备用；制作标准曲线系列溶液，提取5—8个混合标准工作液90μL—110μL，将标准工作液和100μL—120μL内标工作液混匀；用紫外分光光度计分别标定溶液的准确浓度；将内标工作液和血清加入离心管中；加入甲醇乙腈混合溶液150μL—190μL，涡旋混合器充分混匀3min—4min，再加入正己烷140μL—180μL，混匀3min—4min后离心，静置；对下层溶液重复提取2—3次；取上清液样品70μL—90μL放入进样瓶中待测；将样品进行液相色谱测定。本申请操作简单，重复性好，效率高等优点。

Description

血液中维生素E的检测方法
技术领域
本发明涉及一种血液中维生素E的检测方法。
背景技术
维生素E是维持机体正常代谢和既能的必需维生素，最主要的抗氧化剂之一，在抗自由基提高免疫功能，抗衰老，抗癌变等过程中发挥重要的功效，缺乏时会引起贫血等一系列问题。目前，国内外有关血液中维生素E的测定方法报道很多，测定维生素的方法有很多种， 在众多的方法中，液相色谱法为测定维生素的首选方法。以往方法存在前处理复杂、干扰因素多、分析时间长、灵敏度不高、定性定量不够准确的问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种血液中维生素E的检测方法。
本发明采用的技术方案是：一种血液中维生素E的检测方法，包括如下步骤：
一种血液中维生素E的检测方法，包括如下步骤：
（1）将全血样本进行离心，移取上清液得到血清，加入甲醇乙腈混合溶液及正己烷，将其置于旋涡混合器内进行旋涡混合30—60s、然后在常温下进行离心3-4min，取上清液得血清，备用；
（2）制作标准曲线系列溶液，提取5—8个混合标准工作液90μL—110μL， 将标准工作液和100μL—120μL内标工作液混匀，制作标准曲线系列溶液；
（3）用紫外分光光度计分别标定溶液的准确浓度；
（4）将内标工作液和血清加入离心管中；
（5）加入甲醇乙腈混合溶液150μL—190μL，涡旋混合器充分混匀3min—4min，再加入正己烷140μL—180μL，涡旋混合器充分混匀3min—4min后离心，静置；
（6）取上层溶液置于离心管中，对下层溶液重复提取2—3次，氮气吹干正己烷；
（7）取上清液样品70μL—90μL放入进样瓶中待测；
（8）将样品进行液相色谱测定。
甲醇乙腈为1：1配比，所述样品离心为2800 r/min —3200r/min。
液相色谱测定条件：色谱柱：ZORBAX，XDB-C8，5μm，2.1*50mm，柱温：25℃-35℃，流动相：甲醇、水，进样量：5μL—7μL，流速：0.8L/min—1.0mL/min，其甲醇的含量为85—95%。
本发明的有益效果是：能简单高效的检测出血液中的维生素E，与现有技术相比，具有操作简单，重复性好，效率高等优点，有效检测血液中维生素E。
具体实施方式
实施例1
一种血液中维生素E的检测方法，包括如下步骤：
（1）将全血样本进行离心，移取上清液得到血清，加入甲醇乙腈混合溶液及正己烷，将其置于旋涡混合器内进行旋涡混合30s、然后在常温下进行离心3min，取上清液得血清，备用；
（2）制作标准曲线系列溶液，提取5个混合标准工作液90μLμL， 将标准工作液和100μL内标工作液混匀，制作标准曲线系列溶液；
（3）用紫外分光光度计分别标定溶液的准确浓度；
（4）将内标工作液和血清加入离心管中；
（5）加入甲醇乙腈混合溶液150μL，涡旋混合器充分混匀3min，再加入正己烷140μL，涡旋混合器充分混匀3min后离心，静置；
（6）取上层溶液置于离心管中，对下层溶液重复提取2次，氮气吹干正己烷；
（7）取上清液样品70μL放入进样瓶中待测；
（8）将样品进行液相色谱测定。
甲醇乙腈为1：1配比，所述样品离心为2800 r/min。
液相色谱测定条件：色谱柱：ZORBAX，XDB-C8，5μm，2.1*50mm，柱温：25℃，流动相：甲醇、水，进样量：5μL，流速：0.8L/min，其甲醇的含量为85%。
实施例2
一种血液中维生素E的检测方法，包括如下步骤：
（1）将全血样本进行离心，移取上清液得到血清，加入甲醇乙腈混合溶液及正己烷，将其置于旋涡混合器内进行旋涡混合30s、然后在常温下进行离心3min，取上清液得血清，备用；
（2）制作标准曲线系列溶液，提取5个混合标准工作液90μLμL， 将标准工作液和100μLμL内标工作液混匀，制作标准曲线系列溶液；
（3）用紫外分光光度计分别标定溶液的准确浓度；
（4）将内标工作液和血清加入离心管中；
（5）加入甲醇乙腈混合溶液180μL，涡旋混合器充分混匀3min，再加入正己烷140μL，涡旋混合器充分混匀3min后离心，静置；
（6）取上层溶液置于离心管中，对下层溶液重复提取2次，氮气吹干正己烷；
（7）取上清液样品70μL放入进样瓶中待测；
（8）将样品进行液相色谱测定。
甲醇乙腈为1：1配比，所述样品离心为2800 r/min。
液相色谱测定条件：色谱柱：ZORBAX，XDB-C8，5μm，2.1*50mm，柱温：25℃，流动相：甲醇、水，进样量：5μL，流速：0.8L/min，其甲醇的含量为85%。
实施例3
一种血液中维生素E的检测方法，包括如下步骤：
（1）将全血样本进行离心，移取上清液得到血清，加入甲醇乙腈混合溶液及正己烷，将其置于旋涡混合器内进行旋涡混合60s、然后在常温下进行离心4min，取上清液得血清，备用；
（2）制作标准曲线系列溶液，提取8个混合标准工作液110μL， 将标准工作液和120μL内标工作液混匀，制作标准曲线系列溶液；
（3）用紫外分光光度计分别标定溶液的准确浓度；
（4）将内标工作液和血清加入离心管中；
（5）加入甲醇乙腈混合溶液190μL，涡旋混合器充分混匀4min，再加入正己烷180μL，涡旋混合器充分混匀4min后离心，静置；
（6）取上层溶液置于离心管中，对下层溶液重复提取3次，氮气吹干正己烷；
（7）取上清液样品0μL放入进样瓶中待测；
（8）将样品进行液相色谱测定。
甲醇乙腈为1：1配比，所述样品离心为3200r/min。
液相色谱测定条件：色谱柱：ZORBAX，XDB-C8，5μm，2.1*50mm，柱温： 35℃，流动相：甲醇、水，进样量： 7μL，流速： 1.0mL/min，其甲醇的含量为95%。

Claims (3)

1.一种血液中维生素E的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）将全血样本进行离心，移取上清液得到血清，加入甲醇乙腈混合溶液及正己烷，将其置于旋涡混合器内进行旋涡混合30—60s、然后在常温下进行离心3-4min，取上清液得血清，备用；
（2）制作标准曲线系列溶液，提取5—8个混合标准工作液90μL—110μL， 将标准工作液和100μL—120μL内标工作液混匀，制作标准曲线系列溶液；
（3）用紫外分光光度计分别标定溶液的准确浓度；
（4）将内标工作液和血清加入离心管中；
（5）加入甲醇乙腈混合溶液150μL—190μL，涡旋混合器充分混匀3min—4min，再加入正己烷140μL—180μL，涡旋混合器充分混匀3min—4min后离心，静置；
（6）取上层溶液置于离心管中，对下层溶液重复提取2—3次，氮气吹干正己烷；
（7）取上清液样品70μL—90μL放入进样瓶中待测；
（8）将样品进行液相色谱测定。
2.根据权利要求1所述的一种血液中维生素E的检测方法，其特征在于：所述甲醇乙腈为1：1配比，所述样品离心为2800 r/min —3200r/min。
3.根据权利要求1所述的一种血液中维生素E的检测方法，其特征在于：所述液相色谱测定条件：色谱柱：ZORBAX，XDB-C8，5μm，2.1*50mm，柱温：25℃-35℃，流动相：甲醇、水，进样量：5μL—7μL，流速：0.8L/min—1.0mL/min，其甲醇的含量为85—95%。
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