CN109342714B - 一种抗原抗体免疫复合物解离方法 - Google Patents

一种抗原抗体免疫复合物解离方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109342714B
CN109342714B CN201811123796.4A CN201811123796A CN109342714B CN 109342714 B CN109342714 B CN 109342714B CN 201811123796 A CN201811123796 A CN 201811123796A CN 109342714 B CN109342714 B CN 109342714B
Authority
CN
China
Prior art keywords
antigen
antibody
dissociation
urea
concentration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811123796.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109342714A (zh
Inventor
李金峰
李婷婷
张玲
黎诚耀
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BEIJING XUNYIN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.
Original Assignee
Southern Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Southern Medical University filed Critical Southern Medical University
Priority to CN201811123796.4A priority Critical patent/CN109342714B/zh
Publication of CN109342714A publication Critical patent/CN109342714A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109342714B publication Critical patent/CN109342714B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及医学检测领域，公开了一种抗原抗体免疫复合物解离方法，首先往样品中添加高浓度的氯化钠，置于50~70℃作用一段时间，再添加解离剂对抗原抗体复合物进行解离。采用本发明所提出的抗原抗体复合物解离方案处理相关样品，效果明显优于文献报道的和商品化试剂盒的处理效果。

Description

一种抗原抗体免疫复合物解离方法
技术领域
本发明涉及医学检测领域，尤其涉及一种抗原抗体免疫复合物解离方法。
背景技术
由于HCV（丙型肝炎病毒）感染者血清抗体会与ELISA反应体系中捕获抗体和检测抗体竞争结合HCV-cAg（人丙肝病毒核心抗原）的抗原表位，降低了HCV-cAg检测的灵敏度，可能导致假阴性。
在现有文献报道的方法中，主要采用酸、表面活性剂、蛋白质变性剂、还原剂，以及温度等对抗原-抗体复合物进行解离，在解离的同时破坏抗体的活性，以蛋白质、糖等物质对抗原进行保护，如：溶液（0.3% Triton X-100、1.5% CHAPS、15% SDS），但效果并不理想。
发明内容
本发明针对现有检测技术中的以上问题，本发明提供了一种新的解离抗原抗体复合物的方法。
一种抗原抗体免疫复合物解离方法，首先往样品中添加高浓度的氯化钠，置于50~70℃作用一段时间，再添加解离剂对抗原抗体复合物进行解离。
作为优选的，所述解离剂中含有5~6 M的尿素、3.0~7.0 %的Tween 80、0.5~3.0 %的Triton X100。
作为优选的，所述解离剂中尿素的含量为5.5 M，所述Tween 80的含量为5 %，所述Triton X100的含量为1.0 %。
作为优选的，所述高浓度的氯化钠是指终浓度在1.5~3M范围内的氯化钠。
作为有限的，所述氯化钠的终浓度为2.5M。
作为优选的，往样品中添加氯化钠之后，置于45~70℃作用5~20min。
本发明的有益效果是，采用本发明所提出的抗原抗体复合物解离方案处理相关样品，效果明显优于文献报道的和商品化试剂盒的处理效果。
附图说明
图1 为本发明中尿素浓度对于样品处理效果的影响（0~7M区段）。
图2 为本发明中尿素浓度对于样品处理效果的影响（5.0~6.0M区段）。
图3 为本发明中表面活性剂、蛋白质浓度对于样品处理效果的影响（已含5.5M尿素）。
图4 为本发明中表面活性剂、糖等的浓度对于样品处理效果的影响（已含5.5M尿素、5% Tween 80）。
图5 为本发明与现有技术的效果对比。
具体实施方式
下面用具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明不仅局限于以下具体实施例。如无特别说明，本发明文件中所有百分浓度均为重量体积比；M是指摩尔浓度。
实施例一 氯化钠对于处理效果的影响。
1.往血清中加入不同浓度的氯化钠，作用一段时间。
2.取处理后的液体，用山东莱博生物科技有限公司的HCV核心抗原检测试剂盒进行检测，同时检测未经氯化钠处理的同一血清样品，比较两种处理方法的差异。结果如表1~3所示。
3.从表中可以看出，经氯化钠处理可以显著提升P/N值，有助于提高阳性检出率。随着氯化钠浓度的增加，P/N值先升高再降低。到2.5M时，达到最高。随着处理温度的升高，P/N值也是先升高再降低，到58℃时达到最高值。随着处理时间的延长，P/N值先增大，等达到平台期之后（15min），基本不再增加。
表1 NaCl处理对于结果的影响
NaCl浓度（M） 0 1.5 2 2.5 3
P/N 5.14 6.79 9.24 15.42 13.99
注：P/N指阳性与阴性对照之间的比值。
表2 NaCl处理温度对于结果的影响
温度（℃） 37 45 58 65 70
P/N 3.25 5.64 13.65 12.45 10.21
注：P/N指阳性与阴性对照之间的比值。
表2 NaCl处理时间对于结果的影响
时间（min） 0 5 10 15 20
P/N 3.78 4.98 9.95 13.54 13.78
注：P/N指阳性与阴性对照之间的比值。
实施例2 不同解离剂对于解离效果的影响。
用自己配制的解离剂代替山东莱博HCV核心抗原检测试剂盒中的解离剂进行HCV核心抗原血清样本检测，以确定最佳解离剂配方。
1.首先对尿素的浓度进行了摸索：用不同浓度的尿素处理血浆样品，比较ELISAP/N值变化情况，确定最佳工作浓度。结果见图1。
随着尿素浓度的增加，阴阳性之间的差异也越来越明显。到5M尿素时，P/N值达到最大值。
为了进一步确定尿素的工作浓度，比较了5M、5.5M、6M尿素对于样品处理的影响，结果如图2所示。
可知5.5M的处理效果要好于5M和6M两个浓度。
2.为进一步考察在5.5M尿素条件下，还能否进一步提高检测信号强度。分别往5.5M尿素中添加不同浓度的DTAB、CHAPS、Triton X 114、Triton X 100、Tween 80、FBS、SDS、Tween 20。其结果如图3所示。
可见Tween 80较其他物质会明显提升检测信号。当Tween 80的浓度达到5%时，信号达到最高（P/N=2.5）。
3.为进一步考察在5.5M尿素、5% Tween 80条件下，还能否进一步提高检测信号强度。分别往5.5M尿素、5% Tween 80中添加不同浓度的，其结果如图4所示。
发现添加Triton X 100对于检测信号的提升效果最佳：Triton X 100浓度在3.0%时，P/N=4.38最高。
分别采用发明制备的处理液（PBS含5.5M尿素、5% Tween 80、1% Triton X100）和文献报道的处理液，以及山东莱博生物科技有限公司HCV核心抗原检测试剂盒中提供的处理液进行实验比较，其结果如图5所示。
从图中可以看出，本研究制备的血浆（血清）样品处理液稀释的HCV感染者样品经ELISA检测，其OD450值为0.93（P/N=2.63），优于文献报道的和商品化试剂盒的处理液的样品处理效果。
实施例3 本发明所述方案与现有方案对比。
分别用本发明公开的方案和文献报道的方案（解离剂为0.3% Triton X-100、1.5%CHAPS、15% SDS），以及商品化试剂盒（山东莱博的HCV核心抗原检测试剂盒）检测HCV血清样本，比较彼此之间的差异。结果如表4所示。从结果来看，本发明方案明显优于现有方案。
表4 本发明方案与现有技术方案对比
本发明方案 文献报道方案 试剂盒
P/N 25.17 14.34 19.87
注：P/N指阳性与阴性对照之间的比值。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (3)

1. 一种抗原抗体免疫复合物解离方法，其特征在于，首先往样品中添加高浓度的氯化钠，置于45~70℃作用5~20min，其中，所述高浓度的氯化钠是指终浓度在1.5~3M范围内的氯化钠；再添加解离剂对抗原抗体复合物进行解离；所述解离剂中含有5~6 M的尿素、3.0~7.0%的Tween 80、0.5~3.0 %的Triton X100；其中，所述抗原抗体复合物为HCV感染者血清抗体和HCV-cAg形成的复合物。
2.如权利要求1所述的抗原抗体免疫复合物解离方法，其特征在于，所述解离剂中尿素的含量为5.5 M，所述Tween 80的含量为5 %，所述Triton X100的含量为1.0 %。
3.如权利要求1所述的抗原抗体免疫复合物解离方法，其特征在于，所述氯化钠的终浓度为2.5M。
CN201811123796.4A 2018-09-26 2018-09-26 一种抗原抗体免疫复合物解离方法 Active CN109342714B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811123796.4A CN109342714B (zh) 2018-09-26 2018-09-26 一种抗原抗体免疫复合物解离方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811123796.4A CN109342714B (zh) 2018-09-26 2018-09-26 一种抗原抗体免疫复合物解离方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109342714A CN109342714A (zh) 2019-02-15
CN109342714B true CN109342714B (zh) 2020-05-19

Family

ID=65306919

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811123796.4A Active CN109342714B (zh) 2018-09-26 2018-09-26 一种抗原抗体免疫复合物解离方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109342714B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110132945B (zh) * 2019-06-10 2021-09-03 天津市宝坻区人民医院 一种消除尿素干扰的化学发光法试剂盒配方

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1330153A (zh) * 2000-06-19 2002-01-09 苏荣仁 血液中的幽门螺杆菌抗原
CN101832999A (zh) * 2010-04-29 2010-09-15 山东莱博生物科技有限公司 一种抗原抗体复合物解离液试剂盒及应用
CN102081018A (zh) * 2009-11-30 2011-06-01 希森美康株式会社 样品的预处理方法及hcv的免疫测定方法
CN103674657A (zh) * 2013-12-24 2014-03-26 山东莱博生物科技有限公司 血清或血浆样本中的抗原抗体免疫复合物处理试剂盒及其应用
CN103777006A (zh) * 2014-01-23 2014-05-07 中国人民解放军第一一七医院 一种免疫复合物缓冲解离剂及其应用
CN108490166A (zh) * 2018-02-28 2018-09-04 广州市丰华生物工程有限公司 一种改良实验缓冲液及其应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1330153A (zh) * 2000-06-19 2002-01-09 苏荣仁 血液中的幽门螺杆菌抗原
CN102081018A (zh) * 2009-11-30 2011-06-01 希森美康株式会社 样品的预处理方法及hcv的免疫测定方法
CN101832999A (zh) * 2010-04-29 2010-09-15 山东莱博生物科技有限公司 一种抗原抗体复合物解离液试剂盒及应用
CN103674657A (zh) * 2013-12-24 2014-03-26 山东莱博生物科技有限公司 血清或血浆样本中的抗原抗体免疫复合物处理试剂盒及其应用
CN103777006A (zh) * 2014-01-23 2014-05-07 中国人民解放军第一一七医院 一种免疫复合物缓冲解离剂及其应用
CN108490166A (zh) * 2018-02-28 2018-09-04 广州市丰华生物工程有限公司 一种改良实验缓冲液及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN109342714A (zh) 2019-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103674657B (zh) 血清或血浆样本中的抗原抗体免疫复合物处理试剂盒及其应用
CN104634959B (zh) 一种处理液以及采用其测定铝盐吸附型疫苗中抗原含量的方法
CN109342714B (zh) 一种抗原抗体免疫复合物解离方法
EP1752768B1 (en) Method of detecting hepatitis b virus
BR112014005107A2 (pt) método de preparação de material biológico
JP5954799B2 (ja) ポリソルベートの測定方法
CN111308071A (zh) 解吸附铝盐吸附型疫苗中的抗原的解吸附剂及抗原含量检测方法
CN103471902A (zh) 一种解吸附方法及其应用
CN1379248A (zh) 抑制内毒素活性的方法
CN113552358A (zh) 一种hcv病毒裂解剂及其制备方法、hcv病毒检测试剂盒
CN105319313A (zh) 一种毒黄素的液相色谱-串联质谱检测方法
CN111190015B (zh) 胶乳增强免疫比浊法检测人血浆中破伤风抗体的试剂盒
CN114164207B (zh) 一种病毒核酸提取无醇裂解液、试剂盒及提取方法
Hayashi et al. Improvement on the colorimetric determination of choline with iodine.
Suzuki et al. Interaction of peptide-bound beads with lipopolysaccharide and lipoproteins
CN112379087B (zh) 一种应用于新型冠状病毒灭活疫苗的裂解液及抗原解离的方法
CN103116024B (zh) 抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1c11在黄曲霉毒素b1荧光淬灭中的应用及方法
CN108362542A (zh) 一种抗干扰碱试剂及其制备、使用方法
Wang et al. Sample preparation for the analysis of membrane proteomes by mass spectrometry
CN104761674B (zh) 一种酰肼化pH敏感型聚合物及其制备方法
CN104345151A (zh) 提高酶联免疫斑点技术的特异性膜封闭方法
CN110394164B (zh) 一种重金属离子磁性印迹聚合物及其制备方法
Yassin et al. Protamine-adsorbed magnetic nanoparticles for efficient isolation and concentration of hepatitis-C virus from human plasma samples
KR101944711B1 (ko) 단백질 흡착 방지 기능을 갖는 소프트 콘택트렌즈 보존액 및 이의 제조방법
CN113491784A (zh) 一种利用环氧乙烷对医疗防护用品进行高效灭菌及强化解析的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210519

Address after: 100096 room 233, 2 / F, no.1-1-5 / F, area 1, yard 8, shengshengyuan Road, Huilongguan town, Changping District, Beijing (Changping Demonstration Park)

Patentee after: BEIJING XUNYIN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

Address before: South Medical University, 1838 Guangzhou Avenue North, Guangzhou, Guangdong 510515

Patentee before: SOUTHERN MEDICAL University

TR01 Transfer of patent right