CN109311980B - 通过依米立酮（imipridones）进行的g蛋白偶联受体（gpcr）调制 - Google Patents

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Abstract

已发现依米立酮选择性调制A类G蛋白偶联受体(GPCR)，例如D2样多巴胺受体亚家族，并且可用于治疗需要这样调制的病症和障碍，例如癌症、精神障碍和细菌感染。另外，提供了鉴定患有这些病症的受试者是否可能对治疗方案、例如施用依米立酮有响应的方法。此外，还提供了评估治疗方案例如施用依米立酮的有效性、监测或提供患有这些病症的受试者的预后的方法。

Description

通过依米立酮（IMIPRIDONES）进行的G蛋白偶联受体（GPCR） 调制
背景技术
人体细胞在其表面上有各种受体。G蛋白偶联受体(“GPCR”)形成最大的跨膜受体蛋白质家族之一。人类基因组有大约30000个基因，其中多达1000个编码GPCR。GPCR分为五类。第一类是有670种受体蛋白的视紫红质受体家族或“A类GPCR”。视紫红质受体家族可以与各种配体包括胺(α组)、肽(β组)、脂质样物质(γ组)、核苷酸和糖蛋白(δ组)反应，并包含许多药物靶受体。第二类是分泌素受体家族，并具有肽类激素的结合结构域。该家族中的受体与体内稳态有关，并已经成为药物开发的重要靶标。第三类是粘着受体家族，特征在于GPCR蛋白水解位点(GPS)。靶向该GPCR家族的药物的开发尚未发生，因为它们表现出各种N-末端部分并且关于它们的配体知之甚少。第四类是谷氨酸受体家族，迄今已鉴定出 22个GPCR成员。关于每种蛋白质的特异性知之较少。最后一类是 Frizzled/Taste2家族，它包括10种以Wnt糖蛋白作为配体的Frizzled受体、 5种不需要配体的SMO(smoothened)受体、以及25种感知各种味道所需的Taste2受体。包括GPCR的受体也基于内源配体的鉴定进行分类。受体与已知的内源性化合物结合或被分类为尚未鉴定出内源性配体的孤儿受体。
GPCR存在于广泛的组织和细胞类型中，并且与许多不同的生理机制相关。它们被多种多样的配体激活，例如激素如促甲状腺激素(TSH)、促肾上腺皮质激素、胰高血糖素和血管加压素，胺如5-HT、乙酰胆碱(毒蕈碱AchR)和组胺，脂质如LPA和S1P，以及信号递质如氨基酸、Ca2+、核酸、肽和光。GPCR所发挥作用的广泛分布和多样性证明了它们在各种病理疾病中的重要性。实际上，GPCR涉及各种疾病，包括支气管收缩、高血压、糖尿病、炎症、细胞死亡、激素紊乱、癌症、神经传递和行为障碍。因此，GPCR是药品开发的重要领域。目前认为大约360种GPCR可用于药物开发。其中，46种已经用于药物开发。估计有大约150种孤儿GPCR(oGPCR)。在药物开发领域中，细胞膜受体充当药物作用的选择性位点并担负所有药物靶标的50％；GPCR活性调制药物占最常用的前100种药物的30％(400亿美元，总药物市场的9％)。因此，GPCR在新药开发的最重要靶标之中。
GPCR具有共同的结构特征。它们具有7个疏水跨膜结构域，各长20-30 个氨基酸，通过各种长度的亲水氨基酸序列连接。该受体具有细胞外N-端，而C-端位于细胞质中。GTP结合蛋白(G蛋白)充当介体，向细胞内效应物传递通过结合激素或其它刺激GPCR的化学配体而产生的信号。在配体结合后，GPCR细胞内结构域经历构象变化以允许该受体与G蛋白相互作用，G蛋白又激活细胞内信号递质，例如腺苷酸环化酶、磷脂酶C或离子通道。该系统产生信号级联，其中许多次级递质响应一种配体与GPCR的结合而起作用。细胞利用这种机制来检测细胞外环境变化，并响应该变化做出适当反应。总体上，内源性配体激活受体，伴随着构象变化的产生，这允许受体和G蛋白之间结合。最近对蛋白质之间相互作用的研究已经揭示，GPCR与各种蛋白质例如含有GRK或SH2(Src同源2)结构域的蛋白质、以及衔接子Grb2以及G蛋白结合，以参与信号转导。
在正常状态下，信号转导产生细胞活化或抑制的最终结果。在生理环境中，GPCR在细胞膜中在它们的无活性和活性状态之间存在平衡。无活性受体不能与细胞信号转导途径一起发挥生物响应。只有当它们在结构上改变为其活性形式时，受体才经由信号转导途径(通过G蛋白)表现出生物响应。该受体可以通过化合物如内源配体或药物而稳定为活性形式。因此，功能研究例如克隆这样的基因家族以及鉴定其新配体具有与开发新候选药物即siRNA、抗体、多肽、效应物、抑制剂、激动剂、拮抗剂相同的含义。
活生物体的发育、分化、稳态、对刺激的响应、细胞周期的控制以及衰老和凋亡主要是细胞内特定基因选择性表达的结果。与疾病相关的细胞机制也是如此。特别是，病理现象例如肿瘤发生是由基因突变引起的，基因突变最终导致基因表达的变化。
ONC201(7-苄基-4-(2-甲基苄基)-1,2,6,7,8,9-六氢咪唑并[1,2-a]吡啶并 [3,4-e]嘧啶-5(1H)-酮)是一类称为依米立酮(imipridone)的抗癌化合物的创始成员，其正处于多种晚期癌症的II期临床试验中。自从发现ONC201 为TRAIL基因转录的p53非依赖性诱导物以来，临床前研究已经确定 ONC201对多种多样的肿瘤细胞但不是正常细胞具有抗增殖和促凋亡效应。 ONC201的作用机制涉及参与PERK非依赖性激活整合应激响应，导致DR5的肿瘤上调和双重Akt/ERK失活，以及随后Foxo3a活化导致死亡配体 TRAIL的上调。ONC201在动物模型中不频繁施用就有口服活性，引起持续的药效学作用，并且没有基因毒性。在晚期侵袭性难治性实体肿瘤中的首次人类ONC201临床试验证实了它是良好耐受的。总之，包含ONC201 及其化学类似物的依米立酮家族代表新一类的治疗剂。
发明内容
在一个方面，本文提供了式(10)的化合物：
Figure GDA0003815927400000031
其中R1和R2独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳基烷基、烷氧烷基、烷氧羰基、芳烷氧基、芳烷硫基和酰基自由基。在一个实施方式中，当R1是CH2Ph时，R2不是CH2-(2-CH3-Ph)。在一个实施方式中， R1是CH2Ph并且R2是CH2-(2-CH3-Ph)(即ONC201)。在一个实施方式中， R1是CH2Ph并且R2是CH2-(2,4-二F-Ph)(即ONC206)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph并且R2是CH2-(4-CF3-Ph)(即ONC212)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph并且R2是CH2-(3,4-二F-Ph)(即ONC213)。在一个实施方式中，R1是CH2(3,4-二-Cl-Ph并且R2是CH2-(4-CF3-Ph)(即ONC234)。在一个实施方式中，R1是CH2-3-噻吩基并且R2是CH2-(4-CF3-Ph)(即 ONC236)。
另一方面，本文提供了治疗或预防有需要的受试者的疾病、障碍或病症的方法，其包括：向需要这种治疗的受试者施用包含治疗有效量的式(10) 化合物或其类似物、或其药学上可接受的盐的药物组合物。在一个实施方式中，该化合物选自由ONC201、ONC206、ONC212、ONC213、ONC234 和ONC236组成的组。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，癌症选自中枢神经系统肿瘤、脑肿瘤、外周神经系统肿瘤、嗜铬细胞瘤、副神经节瘤、神经内分泌肿瘤、尤文氏肉瘤、胰腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌、血液恶性肿瘤、骨癌和淋巴系统肿瘤。在一个实施方式中，癌症选自脑膜瘤、室管膜瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤或扩散型内因性脑桥神经胶质瘤。在一个实施方式中，癌症选自急性白血病，所述急性白血病选自急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、骨髓增生异常综合征或骨髓增生性疾病。在一个实施方式中，在一个实施方式中，癌症具有组蛋白H3突变(例如H3.3K27M突变)或表观沉默的未甲基化O(6)- 甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有精神障碍。在一个实施方式中，精神障碍选自精神病、精神分裂症、双相障碍或重度抑郁症。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有感染。在一个实施方式中，感染是细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阴性细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阳性细菌感染。在一个实施方式中，细菌感染是选自由屎肠球菌(Enterococcus faecium)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎克雷伯氏菌 (Klebsiella pneumoniae)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和肠杆菌属(Enterobacter)物种组成的组中的细菌的感染。在一个实施方式中，细菌感染是葡萄球菌(Staphylococcus)感染。在一个实施方式中，葡萄球菌感染是金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染(例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染)。
另一方面，本文提供了治疗或预防需要选择性调制G蛋白偶联受体 (GPCR)或G蛋白偶联受体(GPCR)信号传导途径的活性的受试者的疾病、障碍或病症的方法。调制包括但不限于激动、部分激动、反向激动、部分拮抗、拮抗、二价调制或群落生境调制。在一个实施方式中，该方法包括向需要这种治疗的受试者施用包含治疗有效量的式(10)化合物或其类似物、或其药学上可接受的盐的药物组合物。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有精神障碍。在一个实施方式中，精神障碍是精神病。在一个实施方式中，精神障碍是精神分裂症。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有感染。在一个实施方式中，感染是细菌传染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阴性细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阳性细菌感染。在一个实施方式中，细菌感染是选自由屎肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌属物种组成的组中的细菌的感染。在一个实施方式中，细菌感染是葡萄球菌感染。在一个实施方式中，葡萄球菌感染是金黄色葡萄球菌感染(例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染)。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物、其药学上可接受的盐、或其类似物。在一个实施方式中，GPCR是A类GPCR。在一个实施方式中，GPCR是GPR132、 GPR91、MTNR1A、GPR162、GPR137、BAI3、LGR4、PTGIR、CXCR7 或其组合。在一个实施方式中，GPCR是GPR132(也称为G2A)。在一个实施方式中，GPCR是GPR91。在一个实施方式中，GPCR是MTNR1A。在一个实施方式中，GPCR是CXCR7。
另一方面，本文提供了治疗或预防需要选择性调制多巴胺受体或多巴胺受体信号传导途径成员的活性的受试者的疾病、障碍或病症的方法。在一个实施方式中，该方法包括向需要这种治疗的受试者施用包含治疗有效量的式(10)化合物或其类似物、或其药学上可接受的盐的药物组合物。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有精神障碍。在一个实施方式中，精神障碍是精神病。在一个实施方式中，精神障碍是精神分裂症。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有感染。在一个实施方式中，感染是细菌传染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阴性细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阳性细菌感染。在一个实施方式中，细菌感染是选自由屎肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌属物种组成的组中的细菌的感染。在一个实施方式中，细菌感染是葡萄球菌感染。在一个实施方式中，葡萄球菌感染是金黄色葡萄球菌感染(例如，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染)。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物、其药学上可接受的盐、或其类似物。在一个实施方式中，多巴胺受体来自D2样多巴胺受体家族。
另一方面，本文提供了治疗或预防肝纤维化或肝组织再生的方法，其包括：向需要这种治疗的受试者施用包含治疗有效量的式(10)化合物或式(100)化合物(例如TIC-10)、或其类似物、或其药学上可接受的盐的药物组合物。在一个实施方式中，化合物是CXCR7激动剂。
另一方面，本文提供了刺激有需要的受试者的免疫系统(例如激活NK 细胞)的方法，该方法包括：向受试者施用包含治疗有效量的式(10)化合物或其类似物、或其药学上可接受的盐的药物组合物。在一个实施方式中，化合物是GPR91激动剂。在一个实施方式中，化合物是ONC213。在一个实施方式中，受试者患有癌症并且该方法是癌症免疫疗法的方法。在一个实施方式中，受试者患有病毒感染(例如HIV)。在一个实施方式中，受试者患有系统性红斑狼疮。在一个实施方式中，该方法还包括向受试者施用疫苗(例如癌症疫苗)，并且该化合物作为佐剂施用。
另一方面，本文提供了鉴定患有病症的受试者是否可能对本文所述的治疗方案有响应的方法。在一个实施方式中，该方法包括(i)从受试者获得生物样品；(ii)测量样品中至少一种多巴胺受体或G蛋白偶联受体 (GPCR)的表达水平；(iii)将样品中测量的水平与预定标准品的水平进行比较；以及(iv)基于样品中测量的水平与预定标准品的水平，确定受试者是否可能对治疗方案有响应。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有精神障碍。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有感染。在一个实施方式中，治疗方案还包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物、其药学上可接受的盐、或其类似物。在一个实施方式中，多巴胺受体来自D2样多巴胺受体家族。在一个实施方式中，GPCR是A类GPCR。在一个实施方式中， GPCR是GPR132、GPR91、MTNR1A、GPR162、GPR137、BAI3、LGR4、 PTGIR、CXCR7或其组合。在一个实施方式中，GPCR是GPR132、GPR91、 MTNR1A、CXCR7或其组合。在一个实施方式中，GPCR是GPR132。
另一方面，本文提供了评估本文所述治疗方案的有效性、监测或对患有病症的受试者提供预后的方法。在一个实施方式中，该方法包括(i)从受试者获得生物样品；(ii)测量样品中至少一种多巴胺受体或G蛋白偶联受体(GPCR)的表达水平；(iii)将样品中测量的水平与预定标准品的水平进行比较；以及(iv)基于样品中测量的水平与预定标准品的水平，确定预后或确定受试者是否对治疗方案有响应。在一个实施方式中，该方法包括(i)从受试者获得生物样品；(ii)测量样品中至少一种多巴胺受体的基因拷贝数或突变；(iii)将样品中测量的拷贝数或发现的突变与预定标准品的拷贝数或突变进行比较；以及(iv)基于样品中测量的拷贝数或发现的突变与预定标准品的拷贝数或突变，确定受试者是否对治疗方案有响应。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有精神障碍。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有感染。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物、其药学上可接受的盐、或其类似物。在一个实施方式中，多巴胺受体选自DRD2、DRD2S、DRD2L和DRD3。在一个实施方式中，多巴胺受体来自D2样多巴胺受体家族。在一个实施方式中，GPCR 是A类GPCR。在一个实施方式中，GPCR是GPR132、GPR91、MTNR1A、 GPR162、GPR137、BAI3、LGR4、PTGIR、CXCR7或其组合。
另一方面，本文提供了筛选病症的潜在治疗剂的方法。在一个实施方式中，该方法包括(i)使至少一种G蛋白偶联(GPCR)受体与怀疑是病症的治疗剂的测试分子接触；(ii)测量测试化合物与GPCR的结合亲和力、相互作用或信号传导；以及(iii)将测试分子的结合亲和力、相互作用或信号传导与预定阈值进行比较。在一个实施方式中，测试分子的GPCR调制或GPCR信号传导调制相当于或大于阈值表明该病症的治疗剂。在一个实施方式中，病症是癌症。在一个实施方式中，预定阈值是治疗剂、例如式(10)化合物或其药学上可接受的盐、或其类似物的GPCR调制或GPCR 信号传导调制。在一个实施方式中，GPCR是A类GPCR。在一个实施方式中，GPCR是GPR132。在一个实施方式中，GPCR是GPR132、GPR91、 MTNR1A、GPR162、GPR137、BAI3、LGR4、PTGIR、CXCR7或其组合。在一个实施方式中，GPCR是GPR132。在一个实施方式中，GPCR是GPR91。在一个实施方式中，GPCR是MTNR1A。在一个实施方式中，GPCR是CXCR7。
另一方面，本文提供了筛选病症的潜在治疗剂的方法。在一个实施方式中，该方法包括(i)使至少一种多巴胺受体与怀疑是病症的治疗剂的测试分子接触；(ii)测量测试分子与所述至少一种多巴胺受体的结合亲和力、相互作用或信号传导；以及(iii)将测试分子的结合亲和力或相互作用与预定阈值进行比较。在一个实施方式中，测试分子对多巴胺受体的调制相当于或大于阈值表明该病症的治疗剂。在一个实施方式中，病症是癌症。在一个实施方式中，多巴胺受体是D2样多巴胺受体家族的成员。在一个实施方式中，预定阈值是治疗剂、例如式(10)化合物或其药学上可接受的盐、或其类似物对多巴胺受体或多巴胺受体信号传导的调制。
另一方面，本文提供了筛选病症的潜在治疗剂的方法。在一个实施方式中，使用处理器，该方法包括(i)使用计算对接方法以模拟怀疑是病症的治疗剂的测试分子的一种或多种三维结构(构象)与至少一种多巴胺受体的三维结构或模型的结合或相互作用(如果有的话)；(ii)使用该计算方法以评估测试分子结构与至少一种多巴胺受体的结构或模型的结合亲和力或相互作用；以及(iii)使用该计算方法以比较测试分子与预定阈值的结合亲和力或相互作用，其中测试分子对多巴胺受体的调制相当于或大于阈值表明该病症的治疗剂。在一个实施方式中，病症是癌症。在一个实施方式中，多巴胺受体是D2样多巴胺受体家族的成员。
另一方面，本文提供了治疗患有病症的受试者的方法。在一个实施方式中，该方法包括施用有效量的靶向至少一种多巴胺受体或G蛋白偶联受体(GPCR)的治疗剂。在一个实施方式中，治疗剂是中和剂。在一个实施方式中，治疗剂是受体的拮抗剂。在一个实施方式中，治疗剂是受体的激动剂。在一个实施方式中，治疗剂是受体的相对于多巴胺的竞争性抑制剂。在一个实施方式中，治疗剂是受体的相对于多巴胺的非竞争性抑制剂。在一个实施方式中，治疗剂对D2样多巴胺受体家族相对于D1样多巴胺受体家族具有选择性。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有精神障碍。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有感染。在一个实施方式中，多巴胺受体是D2样多巴胺受体家族的成员。在一个实施方式中，GPCR是A类GPCR。在一个实施方式中，GPCR是GPR132。在一个实施方式中，GPCR是GPR91。在一个实施方式中，GPCR是MTNR1A。在一个实施方式中，GPCR是CXCR7。在一个实施方式中，GPCR是GPR132、GPR91、MTNR1A、GPR162、GPR137、BAI3、LGR4、PTGIR、CXCR7或其组合。在一个实施方式中，治疗剂是单克隆抗体(例如嵌合或人源化单克隆抗体)、多克隆抗体(例如嵌合或人源化多克隆抗体)或双特异性抗体。在一个实施方式中，治疗剂是与抗体缀合的药物或活性剂，例如抗癌剂。在一个实施方式中，治疗剂是放射性缀合的抗体或小分子缀合的抗体。在一个实施方式中，治疗剂是表达多巴胺受体或GPCR的重组抗体的载体。在一个实施方式中，治疗剂是靶向多巴胺受体或GPCR的融合蛋白或肽。在一个实施方式中，治疗剂是靶向多巴胺受体或GPCR的siRNA、shRNA或反义寡核苷酸。在一个实施方式中，多巴胺受体或GPCR通过CRISPR干扰而靶向。
另一方面，本文提供了治疗患有病症的受试者和评估治疗功效的方法。在一个实施方式中，该方法包括(i)根据本文所述的治疗方法治疗受试者，(ii)如本文所述评估治疗的功效。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物、其药学上可接受的盐或其类似物。在一个实施方式中，基于测量的基因表达水平或基因拷贝数或者发现的突变，选择或调整治疗剂施用剂量、该化合物(例如式(10)化合物)的施用频率、或二者。
附图说明
当结合附图阅读时，将更好地理解本发明的上述发明内容以及下面的实施方式详细说明。然而，应该理解，本发明不限于所显示的精确布置和手段。在附图中：
图1.ONC201对多巴胺受体(DRD1、DRD2S、DRD2L、DRD3、DRD4 和DRD5)的拮抗作用。
图2示出了在基线和单次ONC201剂量(PO 125-625mg)后通过ELISA 在晚期实体瘤患者的外周血中检测到的可溶性催乳素。治疗后的采样时间点包括治疗后6小时、1天、2天、7天和21天。
图3.癌症程序(GDSC)细胞系集合中药物敏感性基因组的肿瘤类型敏感性。平均敏感性通过在处理后72小时进行的细胞存活率测定平均估算的IC50值确定。条上方的数字表示每种肿瘤类型的细胞系数量。
图4.ONC201是选择性DRD2拮抗剂。(A)使用抑制蛋白募集报道分子测定(10μMONC201)得到的孤儿或已知GPCR的激动作用或已知GPCR 的拮抗作用。(B)利用抑制蛋白募集报道分子测定得到的ONC201对配体刺激的多巴胺受体的拮抗作用。(C)利用抑制蛋白募集报道分子或(D) 利用cAMP调制报道分子得到的ONC201对DRD2L拮抗作用的Schild分析。
图5.DRD2的ONC201拮抗作用在GPCR和其它癌症药物靶标中是高度特异性的。(A)利用抑制蛋白募集报道分子测定(10μM ONC201)得到的GPCR的拮抗作用。(B)抑制蛋白募集报道分子或(C)cAMP调制报道分子中得到的多巴胺竞争DRD2L的ONC201介导拮抗作用。(D)用核转位报道分子测定得到的ONC201(2或20μM)对核激素受体的拮抗作用或激动作用。(E)ONC201(1μM)体外抑制激酶的酶活性。(F)利用抑制蛋白募集报道分子测定得到的ONC201或没有生物活性的ONC201线性异构体的DRD2L拮抗活性。
图6.具有较高DRD2表达的GBM细胞系对ONC201更有响应。(A) NCI60 GBM细胞系抑制随ONC201浓度的变化。(B)每个GBM细胞系的 Log ONC201 GI50(M)相对于DRD2表达。R2＝0.8707。
图7.与其它DRD2拮抗剂例如利培酮相比，ONC201表现出在GPCR 中对DRD2的优异选择性。
图8.与抗精神病的DRD2拮抗剂硫利达嗪相比，ONC201对肿瘤细胞具有更高的选择性。
图9.ONC201对DRD2钙通量抑制的优化。用野生型DRD2(A)或对照GPCR(B)的表达构建体转染HEK-293T细胞。在0.1和1nM多巴胺下研究ONC201浓度在100pM和100μM之间的DRD2特异性钙通量抑制。 100μM ONC201完全抑制DRD2多巴胺诱导的钙通量，但对对照GPCR没有效应。
图10.DRD2抑制剂的比较。在1nM多巴胺下使用抑制剂螺哌隆(正方形)、多潘立酮(三角形)和ONC201(圆形)在一定浓度范围下研究 DRD2特异性钙通量抑制。使用无抑制剂值(显示为10-11M)为100％活性，将各个测定的数据归一化。
图11.对多巴胺诱导的钙通量至关重要的DRD2残基的鉴定。(A)在整个DRD2丙氨酸扫描文库中，如前所述在1nM多巴胺下测定多巴胺诱导的钙通量。数据代表三次实验的平均值。如果突变克隆表现的通量值比整个文库的平均钙通量值低小于2个标准差(AV-2SD)，则认为它们的钙通量有缺陷。(B)在DRD3晶体结构上指示鉴定出的28个突变残基的位置 (绿色球体)(PDB id 3PBL；Chien，E.Y.等(2010)Science 330：1091-5)。 D2R/D3R拮抗剂依替必利以青色显示。
图12.对ONC201抑制多巴胺诱导的钙通量至关重要的DRD2残基的鉴定。(A)在整个DRD2丙氨酸扫描文库中，如前所述在1nM多巴胺下但在100μM ONC 201存在下测定多巴胺诱导的钙通量。数据代表针对用野生型DRD2的通量值的值归一化的三次实验的平均值。如果突变克隆表现的通量值比整个文库的平均钙通量值高出大于2个标准差(AV+2SD)，则认为它们对ONC201抑制是至关重要的。(B)在DRD3晶体结构上指示鉴定出的8个突变残基的位置(红色球体)。
图13.参照化合物(+)布他拉莫和测试化合物ONC201二盐酸盐成功竞争[3H]甲基螺哌隆，IC50值分别为2.5nM和21μM。
图14.ONC201二盐酸盐针对DRD2S受体的关联动力学曲线来确定 Kon和Koff。
图15.用所选的GPCR和孤儿GPCR生物传感器测定得到的化合物活性。用所需的GPCR和孤儿GPCR生物传感器测定以拮抗剂和激动剂模式测试化合物。对于激动剂测定，将数据归一化为在对照配体和载体存在下观察到的最大和最小响应。对于拮抗剂测定，将数据归一化为在EC80配体和载体存在下观察到的最大和最小响应。使用以下EC80浓度：CCR4抑制蛋白：0.0078μM CCL22；CHRM2抑制蛋白：26μM乙酰胆碱；和MC4R 抑制蛋白：0.0026μM美拉诺坦II。
图16.ONC206和ONC212在NCI60癌细胞系组中的各种肿瘤类型间表现出抗癌功效。ONC203是无活性的阴性对照。
图17.ONC206是具有改善的DRD2拮抗作用的依米立酮。ONC206是 ONC201的类似物，对D2样多巴胺受体家族表现出优异的拮抗作用，并且与其它抗精神病药物例如氟哌啶醇相比，保持对D2样多巴胺受体的高度选择性拮抗作用。
图18.骨癌对ONC206比ONC201更有响应。
图19.尤文氏肉瘤是最具ONC206响应性的骨癌亚型。
图20.在16个尤文氏肉瘤细胞系的14个中，ONC206的抗癌功效在纳摩尔范围内。在所有细胞系中，ONC206表现出比ONC201更优异的功效。
图21.依米立酮ONC212靶向孤儿GPCR。它是孤儿GPCR肿瘤抑制因子GPR132的高度选择性激动剂，并且它不结合DRD2。
图22.ONC212在纳摩尔浓度下在癌细胞(HCT116)但不是正常细胞 (MRC5)中诱导细胞死亡。
图23.ONC212在纳摩尔浓度下并且在与ONC201相比较早的时间点诱导整合应激响应和抑制Akt/ERK磷酸化。
图24.ONC212在结肠直肠癌和乳腺癌的异种移植小鼠模型中表现出口服和腹膜内抗癌功效。
图25.白血病对ONC212比ONC201更有响应。
图26.ONC212在55个白血病细胞系中表现出在纳摩尔范围内的抗癌功效(与ONC201相比更优异的功效)，无论细胞系的亚型如何。
图27.GPCR被所测试的9种依米立酮激动或拮抗(>50％)。依米立酮选择性靶向视紫红质样A类GPCR。
图28.患有复发性胶质母细胞瘤的受试者的病例研究(实施例16)。 (A)相对于受试者中总肿瘤负荷的基线的肿瘤大小(％)。一个周期是3 周。(B)2个恶性病灶之一的基线、ONC201启用后21、27和36周时的对比MRI扫描。
图29.ONC212在急性髓性白血病(AML)细胞系中表现出抗癌效应。(A)用ONC212或阿糖胞苷处理的MV411 AML细胞的细胞存活率的比较。(B)用ONC212处理的MOLM14、MV411AML细胞、MRC5肺成纤维细胞和Hs27a骨髓细胞的细胞存活率的比较。(C)用ONC212(250nM)处理MOLM14和MV411 AML细胞在4、8、24、48、72和96h的细胞存活率。
图30.ONC212在ONC201抗性AML异种移植模型中的功效(MV411 AML细胞(5×106)皮下植入无胸腺裸鼠的侧腹)。ONC212和ONC201按指示口服(PO)施用。在指定的天数测量肿瘤体积(A和B)和体重(C) (n＝10)。*表示相对于载体p<0.05。
图31.ONC206在尤文氏肉瘤异种移植模型中的功效(MHH-ES-1尤文氏肉瘤细胞(5×106)皮下植入无胸腺裸鼠的侧腹)。在第1天和第13天按指示施用ONC206(PO)和甲氨蝶呤(IV)。在指定的天数测量肿瘤体积(A) 和体重(B)(n＝4)。
图32.利用β-抑制蛋白募集报道分子测定得到的ONC213(10μM) GPCR谱。
图33.ONC213在类似于ONC212的HCT116/RPMI8226癌细胞中表现出体外抗癌效力，但对正常细胞的体外毒性比ONC212降低。
图34.利用β-抑制蛋白募集报道分子测定得到的ONC237(10μM) GPCR谱。
图35.利用β-抑制蛋白募集报道分子测定得到的ONC236(10μM) GPCR谱。
图36.利用β-抑制蛋白募集报道分子测定得到的ONC234(10μM) GPCR谱。
图37.利用β-抑制蛋白募集报道分子测定得到的ONC201线性异构体 (TIC-10)(10μM)GPCR谱。
图38.几种依米立酮的GPCR命中数量。
具体实施方式
在此使用的科学术语旨在具有本领域普通技术人员通常理解的含义。这些术语在各种标准参考文献中存在并用于说明性地包括J.Sambrook和 D.W.Russell，《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)，Cold Spring HarborLaboratory Press；第三版，2001；F.M.Ausubel， Ed.，《分子生物学短方案，现行方案》(Short Protocols in Molecular Biology， Current Protocols)；第五版，2002；B.Alberts等人，《细胞的分子生物学》 (Molecular Biology of the Cell)，第四版，Garland，2002；D.L.Nelson和 M.M.Cox，《Lehninger生物化学原理》(LehningerPrinciples of Biochemistry)，第四版，W.H.Freeman&Company，2004；Engelke，D.R.，《RNA干扰(RNAi)：RNAi技术的基本要点》(RNA Interference(RNAi): Nuts and Bolts of RNAiTechnology)，DNA Press LLC，Eagleville，PA.，2003； Herdewijn，P.(编著)，《寡核苷酸合成：方法和应用，分子生物学方法》 (Oligonucleotide Synthesis:Methods andApplications，Methods in Molecular Biology)，Humana Press，2004；A.Nagy，M.Gertsenstein，K.Vintersten， R.Behringer，《操纵小鼠胚胎：实验室手册》(Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual)，第三版，Cold SpringHarbor Laboratory Press；2002 年12月15日，ISBN-10:0879695919；Kursad Turksen(编著)，胚胎干细胞：方法和方案(Embryonic stem cells:methods and protocols)，MethodsMol Biol.2002；185，Humana Press；《干细胞生物学的现行方案》(Current Protocols inStem Cell Biology)，ISBN:9780470151808，以及美国专利号 8,673,923。前述各参考文献的内容通过引用整体并入本文。
术语“取代”意指指定原子上的任何一个或多个氢原子被替换为所指示的基团的选择，条件是指定原子的正常化合价不超过，并且取代导致稳定化合物。当取代基为酮(即＝O)时，原子上的2个氢被取代。酮芳取代基不存在于芳族部分上。环双键是在两个相邻环原子之间形成的双键(例如 C＝C、C＝N或N＝N)。
当变量(例如，R4)在化合物的成分或类型中出现多于一次时，其在每次出现时的定义与每次其它发生时的定义无关。因此，例如，如果一个基团被显示为被0-3个R4部分取代，则该基团可以任选地被至多三个R4部分取代，并且在每次出现时R4独立地选自R4的定义。此外，取代基和/ 或变量的组合是允许的，但只有当这种组合导致稳定的化合物时。
当原子或化学部分后面是下标的数字范围(例如C1-6)时，将意识到这意味着涵盖该范围内的所有数字以及所有中间范围。例如“C1-6烷基”是指包括具有1、2、3、4、5、6、6-1、1-5、1-4、1-3、1-2，2-6、2-5、2-4、 2-3、3-6、3-5、3-4、4-6、4-5和5-6个碳的烷基基团。
术语“烷基”包括具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基。例如 C1-6烷基意在包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基基团。烷基的示例包括但不限于甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基仲丁基，叔丁基，正戊基，仲戊基，新戊基和正己基。在某些情况下，直链或支链烷基在其主链中具有六个或更少的碳原子(例如直链的C1-C6，支链的C3-C6)，在其它情况下，直链或支链烷基具有四个以下的碳原子。同样，环烷基在其环结构中具有三至八个碳原子，在其它情况下，环烷基在环结构中具有五个或六个碳原子。最优选的是C1-6烷基，特别是乙基，甲基，异丙基，异丁基，正戊基，正己基和环丙基甲基。
术语“取代的烷基”是指如上定义的烷基、被一个、两个或三个取代基选自卤素、-OH、烷氧基、-NH2、-N(CH3)2、-C(＝O)OH、三氟甲基、-C≡N、 -C(＝O)O(C1-C4)烷基、-C(＝O)NH2、-SO2NH2、-C(＝NH)NH2、-NO2，优选含有选自卤素、-OH、烷氧基、-NH2、三氟甲基、-N(CH3)2和-C(＝O)OH中的一个或两个取代基、更优选选自卤素、烷氧基和-OH。取代烷基的实例包括但不限于2,2-二氟丙基、2-羧基环戊基和3-氯丙基。
除非另有规定，否则“低级烷基”是烷基基团，如上所定义，但在其主链结构中具有1至6个碳原子，优选1至4个。“低烯基”和“低级炔基”具有2-6个碳原子，优选2-4个碳原子的链长。
“烯基”包括在长度上类似的不饱和脂族基团和可能的取代上述烷基，但含有至少一个双键。例如术语“烯基”包括直链烯基(例如乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，庚烯基，辛烯基，壬烯基，癸烯基)，支链烯基，环烯基(例如脂环族)(例如环丙烯基，环戊烯基，环己烯基，环庚烯基，环辛烯基)，烷基或烯基取代的环烯基，以及环烷基或环烯基取代的烯基。在某些情况下，直链或支链烯基在其主链中具有六个或更少的碳原子(例如直链的C2-C6，支链的C3-C6)。同样，环烯基可以在其环结构中具有三至八个碳原子，并且在一些实施方式中，环烯基在环结构中具有五个或六个碳。术语“C2-C6”包括含有2-6个碳原子的烯基。术语“C3-C6”包括含有3至6个碳原子的烯基。
“炔基”包括长度类似的不饱和脂族基团和可能的取代上述烷基，但含有至少一个三键。例如“炔基”包括直链炔基(例如乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基，己炔基，庚炔基，辛炔基，壬炔基，癸炔基)，支链炔基和环烷基或环烯基取代炔基。在某些实施方式中，直链或支链炔基在其主链上具有6个或更少的碳原子(例如直链的C2-C6，支链的C3-C6)。术语“C2-C6”包括含有2-6个碳原子的炔基。术语“C3-C6”包括含有3至6个碳原子的炔基。
术语“环烷基”是指单环或多环非芳族自由基，其中形成环的每个原子 (即骨架原子)是碳原子。在一些情况下，环烷基基团为饱和或部分不饱和。在其它情况下，环烷基基团与芳环稠合。环烷基基团包括有3至10个环原子的基团。环烷基基团的示例包括但不限于以下部分：
Figure GDA0003815927400000161
单环环烷基包括，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基和环辛基。双环环烷基包括但不限于四氢萘基，茚满基和四氢戊烯。多环环烷基包括金刚烷和降冰片烷。术语环烷基包括“不饱和非芳族碳环基”或“非芳族不饱和碳环基”，它们均指本文定义的非芳族碳环，其含有至少一个碳碳双键或一个碳碳三键。
术语“环烷基烷基”是指被环烷基基团取代的烷基基团。实例环烷基烷基基团包括环丙基烷基，环己基烷基。
术语“杂环烷基”是指非芳族杂环，其中一个或多个成环原子是杂原子，例如O，N或S原子。杂环烷基基团包括单环或多环(例如具有2、3或4 个稠环)环体系以及螺环。实例杂环烷基基团包括吗啉代，硫代吗啉代，哌嗪基，四氢呋喃基，四氢噻吩基，2,3-二氢苯并呋喃基，1,3-苯并二氧杂环戊烷，苯并-1,4-二恶烷，哌啶基，吡咯烷基，异恶唑烷基，异噻唑烷基，吡唑烷基，恶唑烷基，噻唑烷基，和咪唑并基。还包括在杂环烷基中的定义中可以是具有一个或多个与非芳族杂环稠合(即具有与之相同的键)的芳香环的部分，例如喹啉基，异喹啉基和杂环的苯并衍生物。具有一个或多个稠合芳环的杂环烷基基团通过芳香族或非芳族部分连接。也包括在杂环烷基的定义中是其中一个或多个成环原子可以被1或2个氧或硫基取代。在一些情况下，杂环烷基基团具有1至约20个碳原子，在其它情况下为约 3至约20个碳原子。在一些情况下，杂环烷基基团含有3～20，3～2约14， 3～27，或5～26个成环原子。在一些情况下，杂环烷基基团有1～24，1～23，或1～22个杂原子。在一些情况下，杂环烷基基团含有0～23个双键。在一些情况下，杂环烷基基团含有0～22个三键。
术语“杂环烷基烷基”是指由杂基烷基基团取代的烷基。实例杂环烷基烷基包括吗啉代烷基和哌嗪基烷基。
术语“芳基”是指单环或多环(例如具有2、3或4个稠环)芳烃，例如苯基，萘基，蒽基，菲基。在一些情况下，芳基有6～20个碳原子。
术语“芳烷基”是指由芳基取代的烷基基团。实例芳烷基基团包括苄基和苯乙基。
术语“杂芳基”是指具有至少一个杂原子环成员如O、S或N原子的芳族杂环。杂芳基基团包括单环和多环(例如具有2、3或4个稠环)系统。杂芳基基团中的成环的N原子也可被氧化形成N-氧部分。杂芳基基团的实例包括吡啶基，N-氧吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基，三嗪基，呋喃基，喹啉基，异喹啉基，噻吩基，咪唑啉基，噻唑基，吲哚基，吡咯基，恶唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，苯并噻唑基，异恶唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吲唑基，1,2,4-噻吩二唑基，异噻唑基，苯并噻吩基，嘌呤基，咔唑基，苯并咪唑啉基，二氢吲哚基。在一些情况下，杂芳基基团具有1至约20个碳原子，在其它情况下为约3至20个碳原子。在一些情况下，杂芳基基团含有3～约14、3～约7或5～6个成环原子。在一些情况下，杂芳基基团有1～约4、1～约3或1～2个杂原子。
“杂芳基烷基”是指由杂基基基团取代的烷基基团。杂芳基基团的示例是吡啶基甲基。
术语“卤素”或“卤素”是指氟(F)，氯(Cl)，溴(Br)或碘(I)原子；优选F、Cl或Br；更优选F或Cl。术语“每卤素”是指其中所有氢被卤素取代的部分。
术语“卤代烷基”是指有卤素的烷基部分代替烃主链的一个或多个碳上的氢。C1-C6卤代烷基包括有六个或更少主链原子和代替一个或多个主链碳上的氢的卤素原子的直链或支链烷基。
术语“烷氧基”或“烷氧基”包括与氧原子共价连接的取代和未取代的烷基，烯基和炔基。C1-C6烷氧基是指在烃骨架中具有六个或更少的碳原子的部分。烷氧基(或烷氧基自由基)的实例包括甲氧基，乙氧基，异丙氧基，丙氧基，丁氧基和戊氧基。优选的是(C1-C3)烷氧基，特别是乙氧基和甲氧基。取代的烷氧基的实例包括卤代烷氧基。
术语“羟基”或“羟基”包括具有-OH或-O-的基团。
术语“药学上可接受的盐”是指化合物的衍生物，其中母体化合物通过将现有的酸或碱部分转化为其盐形式而被修饰。药学上可接受的盐包括但不限于碱性残留物如胺的矿物或有机酸盐；羧基酸等酸性残基的碱金属或有机盐。药学上可接受的盐包括形成的母体化合物的常规无毒盐，例如来自无毒无机或有机酸。药学上可接受的盐可以由通过常规化学方法含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中或两者的混合物中反应来制备；通常，非水载体如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。适用的盐的列表可以在《雷明顿药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，第17版，MackPublishing Company，Easton，PA.， 1985，1418页，Journal of Pharmaceutical Science，66，2(1977)，以及P. H.Stahl和C.G.Wermuth编著，《药用盐手册：性质，选择和使用》(Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties，Selection and Use)，第二修订版，Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA(2011)中找到，其全部内容通过引用并入本文。
合适的无机酸的实例包括盐酸，硫酸，磷酸或氢溴酸，而合适的有机酸的实例包括羧基酸，磺酸或磺酸，例如乙酸，酒石酸，乳酸，丙酸酸，乙醇酸，丙二酸，马来酸，富马酸，单宁酸，琥珀酸，藻酸，苯并戊酸，2-苯氧基苯甲酸，2-乙酰氧基苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，柠檬酸，马来酸，水杨酸，三氟乙酸，3-氨基水杨酸，抗坏血酸，乌头酸，烟酸，异烟酸，草酸，葡萄糖酸，氨基酸，甲磺酸，乙磺酸，2-羟基乙磺酸，乙烷-1,2-二磺酸，苯磺酸，4-甲基苯磺酸或萘-2-磺酸。合适的无机碱的实例包括氢氧化钠，氢氧化钾和氨，合适的有机碱的实例包括胺，例如叔胺，例如三甲基胺，三乙胺，吡啶，N,N-二甲基苯胺，喹啉，异喹啉，α-甲基吡啶，β-甲基吡啶，γ-甲基吡啶，喹哪啶或嘧啶。
术语“抗体”包括构成抗体的天然生物形式的结构。在大多数哺乳动物、包括人类和小鼠中，这种形式是四聚体并由两个相同的两个免疫球蛋白链对组成，每对具有一条轻链和一条重链，每条轻链包含免疫球蛋白结构域 VL和CL，每条重链包含免疫球蛋白结构域VH、Cγ1、Cγ2和Cγ3。在每对中，轻链和重链可变区(VL和VH)一起负责与抗原结合，恒定区(CL、Cγ1、 Cγ2和Cγ3，特别是Cγ2和Cγ3)负责抗体效应子功能。在一些哺乳动物中，例如在骆驼和美洲驼中，全长抗体可以仅由两条重链组成，每条重链包含免疫球蛋白结构域VH、Cγ2和Cγ3。“免疫球蛋白(Ig)”在本文中是指由一种或多种基本上由免疫球蛋白基因编码的多肽组成的蛋白质。免疫球蛋白包括但不限于抗体。免疫球蛋白可具有许多结构形式，包括全长抗体、抗体片段和个体免疫球蛋白结构域包括VH、Cγ1、Cγ2、Cγ3、VL和CL。
基于重链恒定域氨基酸序列，可以将完整抗体分配到不同的“类别”。完整抗体有五大类(同种型)：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有几类可以进一步划分为“亚类”，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。对应于不同抗体类别的重链恒定域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是本领域技术人员公知的。
术语“抗体”或“抗原结合片段”分别指完整分子及其功能片段，例如 Fab、scFv-Fc二价分子、F(ab’)2和能够与期望靶标特异性相互作用的Fv。在一些情况下，抗原结合片段包含：
(1)Fab，含有抗体分子的单价抗原结合片段的片段，其可通过用木瓜蛋白酶消化完整抗体以收得完整的轻链和一条重链的一部分来产生；
(2)Fab’，抗体分子的片段，其可以通过用胃蛋白酶处理完整抗体，然后还原，以产生完整的轻链和重链的一部分来获得；每抗体分子获得两个Fab'片段；
(3)(Fab’)2，可通过用胃蛋白酶处理完整抗体而不随后还原而获得的抗体片段；F(ab’)2是由两个二硫键维系在一起的两个Fab'片段的二聚体；
(4)Fv，遗传工程片段，含有表达为两条链的轻链可变区和重链可变区；
(5)单链抗体(“SCA”)，含有轻链可变区和重链可变区的基因工程分子，通过合适的多肽接头联接为基因融合的单链分子；和
(6)scFv-Fc，通过将单链Fv(scFv)与来自免疫球蛋白(Ig)例如 IgG的铰链区和Fc区融合而产生。
在一个实施方式中，本文提供的抗体是单克隆抗体。在一个实施方式中，本文提供的抗原结合片段是单链Fv(scFv)、双抗体、串联scFv、scFv-Fc 二价分子、Fab、Fab'、Fv、F(ab’)2或抗原结合支架(例如亲合体，单一体，抗运载蛋白，DARPin，Knottin)。
术语“结合”或语法等同词是指组成物彼此直接或间接具有亲和力。“特异性结合”是两个分子之间是选择性结合的情况。特异性结合的具体示例发生在抗体和抗原之间。通常，当解离常数(KD)小于约1×10-5M或小于约 1×10-6M或1×10-7M时，可以将特异性结合与非特异性结合区分开。特异性结合可以通过例如ELISA、免疫沉淀、共沉淀、有或没有化学交联和双杂交测定来检测。适当的对照可用于区分“特异性”和“非特异性”结合。“亲和力”是两种分子、例如抗原及其抗体的结合相互作用的强度，对于抗体和具有多于一个结合位点的其它分子而言，其被定义为所述配体在一个指定结合位点处的结合强度。虽然配体与抗体或其它分子的非共价连接通常不如共价连接那么强，但“高亲和力”是指与抗体或其它分子结合的配体的亲和常数(Ka)大于104M-1，通常105-1011M-1；这是通过抑制ELISA确定的或由可类比的技术、例如Scatchard图或利用作为Ka倒数的Kd/解离常数确定的等效亲和力来确定的。
关于结合、抑制、刺激或调制的术语“选择性”分别指第一活性相对于第二活性的优先结合、抑制、刺激或调制(例如一种受体比另一种受体的优先结合；相对于其它受体的优先抑制；或突变体比野生型的优先抑制或反之亦然)。在一些情况下，对于期望的分子靶标或途径比非期望的分子靶标或途径的结合选择性高出大于两倍，选择性高出大于五倍，选择性高出大于十倍，选择性高出大于五十倍，选择性高出大于100倍，或者选择性高出大于1000倍。在一些情况下，化合物在相同条件下结合第一分子靶标或影响途径将至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍于第二靶标或途径。应当领会，在优选的实施方式中，与D2 样多巴胺受体家族或其成员的结合相对于D1样多巴胺受体家族或其成员将有任何前述量的选择性。分子靶标或途径的体外或体内活性可通过任何合适的可再现手段测量。
术语“调制”是指“刺激”或“抑制”分子靶标或途径的活性。例如，如果相对于在相同条件下但仅缺乏组合物存在时分子靶或途径的活性，组合物刺激或抑制该靶标或途径的活性至少10％、至少约20％、至少约25％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、或约 99％或更多，则所述组合物调制该分子靶标或途径的活性。在另一个示例中，如果相对于在相同条件下但仅缺乏组合物存在时分子靶标或途径的活性，组合物刺激或抑制该靶标或途径的活性至少2倍、至少5倍、至少10 倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍，则所述组合物调制该分子靶标或途径的活性。分子靶标或途径的活性可以通过任何可再现的手段测量。例如，分子靶标或途径的活性可以通过本领域已知的用于测量活性的合适测定在体外或体内测量。对照样品(未用组合物处理)可以赋予100％的相对活性值。
在一个实施方式中，抗体、抗原结合片段或亲和标签以0.1nM-10mM、 0.1nM-1mM、或0.1nM范围内的KD结合其靶标。在一个实施方式中，抗体、抗原结合片段或亲和标签以为0.1-2nM、0.1-1nM、0.05-1nM、0.1-0.5nM 或0.1-0.2nM的KD结合其靶标。在一个实施方式中，抗体、抗原结合片段或亲和标签直接结合其靶标。在一个实施方式中，抗体，抗原结合片段或亲和标签间接结合其靶标，例如，作为与结合靶标的抗体相结合的二级抗体结合。
单词“标记物”是指直接或间接与试剂例如核酸探针或抗体缀合或融合并有助于检测其所缀合或融合的试剂的化合物或组合物。标记物本身可以是可检测的(例如放射性同位素或荧光标记物)，或者在酶标记物的情况下，可以催化底物化合物或组合物的化学改变，这种改变是可检测的。
术语“探针”是指合成的或生物制造的核酸，其含有在严格条件下与靶核酸序列杂交的特定核苷酸序列。术语“标记的探针”、“与可检测标记物可操作联接的核酸探针”或“与可检测标记物可操作联接的核酸链”是指用供检测的标志部分或“可检测标记物”制备的探针。标志部分连在5'末端、3' 末端、内部或其组合。也就是说，一个探针可以与多个标志部分相连。优选的部分是识别性标记物，例如荧光团。标记的探针也可以包含多个不同的核酸序列，每个核酸序列用一个或多个标志部分标记。每个标志部分可以相同或不同。标记各具有不同标志部分的不同探针(例如核酸序列)可能是有益的。这可通过在每个探针上具有单个可区分部分来实现。例如，探针A与X部分相连，探针B与Y部分相连。或者，探针A与X和Y部分相连，而探针B与Z和W部分相连。或者，探针A与X和Y部分相连，而探针B与Y和Z部分相连。上述的所有探针“A”和“B”将是可区分的和独特标记的。
“组织样品”是指从受试者或患者的组织获得的相似细胞的集合，优选含有具有染色体物质的有核细胞。四种主要人类组织是(1)上皮；(2)结缔组织，包括血管、骨和软骨；(3)肌肉组织；和(4)神经组织。组织样本来源可以是来自新鲜、冷冻和/或保存的器官或组织样品或活检或抽吸的实体组织；血液或血液成分；体液如脑脊髓液、羊水、腹膜液或间质液；来自受试者孕育或发育中某个时间的细胞。组织样品可以是原代细胞或培养细胞或细胞系。组织样品可含有在自然界不与组织天然混合的化合物，例如防腐剂、抗凝剂、缓冲剂、固定剂、营养素或抗生素。组织样品的“切片”是指组织样品的单个部分或片，例如从组织样品切下的薄片组织或细胞。可以取多个组织切片并进行分析。“细胞系”是指永久建立的细胞培养物，其在适当的新鲜培养基和空间下会增殖。
检测方法
在各个方面，本文提供了检测或测量生物样品中的靶受体(例如，多巴胺受体或GPCR)的方法。通过使样品与靶检测试剂、例如抗体或其片段和标记试剂接触来检测靶标。靶标的存在与否通过标记试剂的存在与否来检测。在一些情况下，使样品与靶检测试剂和标记试剂同时接触，例如，检测试剂是一级抗体，标记试剂是与其缀合的荧光染料。或者，使生物样品依次与靶检测试剂和标记试剂接触，例如，检测试剂是一级抗体，并且标记试剂包含二级抗体。例如，在允许检测试剂(和标记试剂)和靶标之间形成复合物的条件下，将样品与检测试剂一起温育，在一些情况下与标记试剂一起温育。在复合物形成后，任选将样品洗涤一次或多次以除去未结合的检测试剂(和标记试剂)。当样品进一步与结合靶标的检测试剂特异性结合的标记试剂接触时，可以任选洗涤样品一次或多次以除去未结合的标记试剂。然后通过检测标记试剂确定样品中靶标的存在或不存在。
这里描述的方法提供用于在样品中检测多个靶标。通过使用所描述的方法使生物样品与其它检测试剂接触，然后使用对其它检测试剂特异性的其它标记试剂来鉴定多个靶标。
检测部分即可检测标记物是用于促进靶标识别和/或定量的物质。检测部分是直接观察或测量或者间接观察或测量的。检测部分包括但不限于可以用放射计数装置测量的放射性标记物；可以目视观察或用分光光度计测量的颜料、染料或其它色原体；可以用自旋标记物分析仪测量的自旋标记物；和荧光部分，其中输出信号通过激发合适的分子加合物生成，并且可通过用被染料吸收的光激发来显现，或者可以用标准荧光计或成像系统测量。检测部分可以是发光物质，例如磷光体或荧光团；生物发光物质；化学发光物质，其中通过化学修饰所述信号化合物生成输出信号；含金属的物质；或酶，其中发生酶依赖的二次信号生成，例如从无色底物形成有色产物。检测部分也可以采取化学或生物化学或惰性粒子的形式，包括胶体金、微球、量子点或无机晶体如纳米晶体或磷光体。术语检测部分或可检测标记物也可以指可以选择性结合标记分子的“标签”或半抗原，使得标记分子在随后添加时用于生成可检测信号。例如，可以使用生物素、亚氨基生物素或脱硫生物素作为标签，然后使用辣根过氧化物酶(HRP)的亲和素或链霉亲和素缀合物与所述标签结合，然后使用显色底物(例如，四甲基联苯胺)或荧光底物如Amplex Red或Amplex Gold(Molecular Probes，Inc.)来检测HRP的存在。类似地，标签可以是半抗原或抗原(例如洋地黄毒苷)，并且酶促、荧光或放射性标记抗体可用于结合标签。许多标记物是本领域技术人员已知的，包括但不限于粒子、荧光染料、半抗原、酶和它们的显色、荧光和化学发光底物。
荧光团是表现出最大吸收超过280nm并且当在标记试剂中共价连接时保持其光谱性质的化学部分。荧光团包括芘、蒽、萘、吖啶、芪、吲哚或苯并吲哚、恶唑或苯并恶唑、噻唑或苯并噻唑、卟啉、花青、苝、4-氨基-7- 硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑(NBD)、羰花青、羰基苯乙烯、水杨酸酯、邻氨基苯甲酸酯、甘菊环、吡啶、喹啉、硼杂聚氮杂茚、氧杂蒽、恶嗪或苯并恶嗪、卡巴嗪、非那烯酮、香豆素、苯并呋喃和苯并非那烯酮及其衍生物。恶嗪包括试卤灵、氨基恶嗪酮、二氨基恶嗪及其苯并取代的类似物。
当荧光团是氧杂蒽时，荧光团可以是荧光素、对甲氨基酚或罗丹明。荧光素包括苯并-或二苯并荧光素、半萘并荧光素或萘并荧光素。类似地，对甲氨基酚包括半萘酚罗丹荧。或者，荧光团是氧杂蒽，其在氧杂蒽的9- 位置上经由单个共价键结合。优选的氧杂蒽包括3H-氧杂蒽-6-醇-3-酮的衍生物、6-氨基-3H-氧杂蒽-3-酮的衍生物、或6-氨基-3H-氧杂蒽-3-亚胺的衍生物。荧光团包括氧杂蒽(对甲氨基酚、罗丹明、荧光素及其衍生物)、香豆素、花青、芘、恶嗪和硼杂聚氮杂茚。此外，荧光团可以是磺化氧杂蒽、氟化氧杂蒽、磺化香豆素、氟化香豆素和磺化花青。标记试剂中荧光团的选择将决定标记试剂的吸收和荧光发射性质。荧光团标记物的物理性质包括光谱特征(吸收，发射和斯托克斯频移)、荧光强度、寿命、偏振和光漂白速率都可用于区分一种荧光团与另一种荧光团。
通常，荧光团含有一个或多个任选地被一个或多个各种取代基取代的芳族或杂芳族环，所述取代基包括卤基、硝基、氰基、烷基、全氟烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、芳烷基、酰基、芳基或杂芳基环系、苯并、或通常存在于本领域已知的荧光团上的其它取代基。
优选地，检测部分是荧光染料。荧光染料包括例如Fluorescein， Rhodamine，Texas Red，Cy2，Cy3，Cy5，Cy0，Cy0.5，Cy1，Cy1.5，Cy3.5， Cy7，VECTOR Red，ELFTM(酶标记的荧光)，FluorX，Calcein，Calcein-AM， CRYPTOFLUORTM′S，Orange(42kDa)，Tangerine35kDa)，Gold(31kDa)， Red(42kDa)，Crimson(40kDa)，BHMP，BHDMAP，Br-Oregon，LuciferYellow，Alexa染料家族，N-(6-(7-硝基苯-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)氨基)己酰基)(NBD)，BODIPYTM，二吡咯亚甲基二氟化硼，Oregon Green， MITOTRACKERTMRed，DiOC7(3)，DiIC18，Phycoerythrin，Phycobiliproteins BPE(240kDa)RPE(240kDa)CPC(264kDa)APC(104kDa)，Spectrum Blue，Spectrum Aqua，Spectrum Green，Spectrum Gold，Spectrum Orange，Spectrum Red，NADH，NADPH，FAD，Infra-Red(IR)Dye，Cyclic GDP-Ribose (cGDPR)，Calcofluor White，酪氨酸和色氨酸。许多荧光团也可以起发色团的作用，因此它们也是优选的发色团。
除荧光团外，酶也发现用作可检测部分。酶是理想的可检测部分，因为可以实现可检测信号的放大，导致测定灵敏度增加。酶本身不产生可检测的响应，但当它被适当的底物接触时分解底物，使得转化的底物产生荧光、比色或发光信号。酶扩大可检测信号，因为标记试剂上的一种酶可导致多个底物转化为可检测信号。这在样品中存在少量靶标或不存在将产生与酶相当或更强的信号的荧光团时是有利的。然而，荧光团是优选的，因为它们不需要额外的测定步骤，因此减少了完成测定的总时间。选择酶底物以产生优选的可测量产物，例如比色、荧光或化学发光。这样的底物在本领域中广泛使用。
优选的比色或荧光底物和酶组合使用氧化还原酶如辣根过氧化物酶以及底物如3,3'-二氨基联苯胺(DAB)和3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)，其产生区别性颜色(分别为棕色和红色)。产生可检测产物的其它比色氧化还原酶底物包括但不限于：2,2-连氨-双(3-乙乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)，邻苯二胺(OPD)，3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)，邻联茴香胺，5-氨基水杨酸，4-氯-1-萘酚。荧光底物包括但不限于高香草酸或4-羟基-3-甲氧基苯乙酸，还原的吩恶嗪和还原的苯并噻嗪，包括Amplexe Red试剂及其变体和还原的二氢氧杂蒽，包括二氢荧光素和二氢罗丹明，后者包括二氢罗丹明123。作为酪酰胺的过氧化物酶底物代表了一类独特的过氧化物酶底物，它们在酶作用之前可以是固有可检测的，但在描述为酪酰胺信号放大 (TSA)的过程中通过过氧化物酶的作用被“固定就位”。这些底物被广泛用于标记作为细胞、组织或阵列的样品中的靶标，用于随后通过显微镜检查、流式细胞术、光学扫描和荧光测定法对其进行检测。
其它比色(在某些情况下是荧光)底物和酶组合使用磷酸酶如酸性磷酸酶、碱性磷酸酶或这样的磷酸酶与比色底物如5-溴-6-氯-3-吲哚基磷酸酯 (BCIP)、6-氯-3-吲哚基磷酸酯、5-溴-6-氯-3-吲哚基磷酸酯、对硝基苯基磷酸酯或邻硝基苯基磷酸酯或与荧光底物如4-甲基伞形基磷酸酯、6,8-二氟 -7-羟基-4-甲基香豆酰磷酸酯(DiFMUP)荧光素二磷酸酯、3-0-甲基荧光素磷酸酯、试卤灵磷酸酯，9H-(1,3-二氯-9,9-二甲基吖啶-2-酮-7-基)-磷酸酯 (DDAO磷酸酯)、或ELF 97、ELF 39或相关磷酸酯相组合物的重组形式。
糖苷酶特别是β-半乳糖苷酶、β葡糖苷酸酶和β-葡糖苷酶是其它合适的酶。适当的比色底物包括但不限于5-溴-4-氯-3-吲哚基β-D-吡喃半乳糖苷 (X-gal)和类似的吲哚基半乳糖苷、葡糖苷和葡糖苷酸、邻硝基苯基β-D- 吡喃半乳糖苷(ONPG)和对硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷。优选的荧光底物包括试卤灵β-D-吡喃半乳糖苷、荧光素二半乳糖苷(FDG)、荧光素二葡糖苷酸及其结构变体、4-甲基伞形基β-D-吡喃半乳糖苷、羧基伞形基β-D- 吡喃半乳糖苷和氟化香豆素β-D-吡喃半乳糖苷。其它酶包括水解酶如胆碱酯酶和肽酶，氧化酶如葡萄糖氧化酶和细胞色素氧化酶，以及已知合适底物的还原酶。
酶及其产生化学发光的合适底物对于某些测定是优选的。这些包括但不限于天然和重组形式的荧光素酶和水母发光蛋白。磷酸酶、糖苷酶和氧化酶的产生化学发光的底物，例如含有稳定的二氧杂环丁烷、鲁米诺、异鲁米诺和吖啶酯的那些，也是有用的。例如，酶是荧光素酶或水母发光蛋白。底物是荧光素、ATP、Ca++和腔肠素。
除了酶之外，半抗原例如生物素也是有用的可检测部分。生物素是有用的，因其在酶系统中可进一步放大可检测信号，并且它可用作亲和色谱中的标签用于分离目的。为了检测，使用对生物素有亲和力的酶缀合物，例如亲和素-HRP。随后，添加过氧化物酶底物以产生可检测信号。半抗原也包括激素、天然存在和合成的药物、污染物、过敏原、效应分子、生长因子、趋化因子、细胞因子、淋巴因子、氨基酸、肽、化学中间体或核苷酸。
在一些情况下，可检测部分是荧光蛋白。示例性荧光蛋白包括绿色荧光蛋白(GFP)、藻胆蛋白及其衍生物、荧光素酶或水母发光蛋白。荧光蛋白，尤其是藻胆蛋白，对产生串联染料标记的标记性试剂特别有用。这些串联染料包含荧光蛋白和荧光团，以获得其中发射光谱更远离荧光蛋白的吸收光谱的更大斯托克斯频移。这特别有利于检测所发射的荧光被最大程度优化的样品中的少量靶标，换句话说，荧光蛋白几乎不吸收发射的光。荧光蛋白和荧光团起到能量转移对的作用，其中荧光蛋白以荧光团吸收的波长发射，然后荧光团以远离荧光蛋白而不是可以只由荧光蛋白得到的波长发射。特别有用的组合是藻胆蛋白和磺酰罗丹明荧光团，或磺化花青荧光团；或磺化氧杂蒽衍生物。或者，荧光团是能量供体，荧光蛋白是能量受体。
显现检测部分的方法取决于标记物
在一些情况下，用选定的光波长照射样品以产生可检测的光学响应，并用检测该响应的手段观察。可用于照射荧光化合物的设备包括手持式紫外线灯、汞弧灯、氙灯、激光器和激光二极管。这些照射源被光学整合到激光扫描器、荧光微板读取器或者标准或显微荧光计中。与标准或预期的响应相比，信号的程度或位置指示样品是否以及在何种程度上具有给定的特征或期望的靶标。
通过目视检查，或通过使用以下装置之一：CCD相机、摄像机、摄影胶片、激光扫描装置、荧光计、光电二极管、量子计数器、落射荧光显微镜、扫描显微镜、流式细胞仪、荧光微孔板读取器，或通过放大信号的工具例如光电倍增管，来检测光学响应。当使用流式细胞仪检查样品时，对其的检查任选包括根据样品各部分的荧光响应对它们进行分选。
当使用可间接检测的标记物时，则照射通常包括添加试剂以产生可检测信号，例如比色酶底物。放射性同位素也被认为是可间接检测的，在不需要额外试剂的情况下，宁愿将放射性同位素暴露于X射线胶片或其它机制来记录和测量信号。这对于暴露于胶片后观察的一些化学发光信号是成立的。
I.ONC201(化合物(1))、其盐及其合成
本文提供了ONC201(化合物(1))
Figure GDA0003815927400000281
和其类似物、以及其药学上可接受的盐，以及它们的合成。在体外模型、动物模型和人类临床试验中，ONC201具有广泛的抗癌活性，低毒性，包括很少的不良效应(如果有的话)，低基因毒性，以及高生物利用度(包括口服)。这些特征使ONC 201和各种类似物非常适合各种应用。ONC201可以通过方案1中所示的合成制备。
Figure GDA0003815927400000282
ONC201二盐酸盐的合成始于可商购的中间体N-苄基-3-甲酯基-4-哌啶酮盐酸盐，化合物(3)。在一个实施方式中，合成包括用碱中和化合物 (3)(步骤1)，以产生化合物(4)，一种游离碱。在一个实施方式中，用无机碱中和化合物(3)以产生化合物(4)。在一个实施方式中，用有机碱中和化合物(3)以产生化合物(4)。在一个实施方式中，在醇、例如正丁醇存在下中和化合物(3)。在一个实施方式中，在至少一种有机溶剂、例如正丁醇和/或乙酸乙酯存在下中和化合物(3)。在一个实施方式中，在碱和至少一种有机溶剂、例如NaHCO3和正丁醇存在下中和化合物(3)。在一个实施方式中，在正丁醇和三乙胺(Et3N)存在下中和化合物(3)。
在一个实施方式中，合成包括使化合物(4)和化合物(5)(步骤2) 反应以制备中间体化合物(1)。在一个实施方式中，步骤2中的反应包括加热化合物(4)与化合物(5)。在一个实施方式中，步骤2中的反应包括在溶剂存在下的回流加热化合物(4)和化合物(5)。在一个实施方式中，步骤2中的反应包括使用Dean-stark分水器去除反应中形成的水和/或甲醇(MeOH)。
在一个实施方式中，合成ONC201二盐酸盐(步骤3)。在一个实施方式中，该反应(步骤3)包括在二恶烷中用HCl处理ONC201。在一个实施方式中，步骤3包括在二恶烷中用4NHCl处理ONC201。在一个实施方式中，该合成任选包括重结晶所述ONC201二盐。在优选的实施方式中，如方案2中所示合成ONC201二盐酸盐。
Figure GDA0003815927400000291
II.TNF相关凋亡诱导配体(“TRAIL”)
TRAIL蛋白可以在从受试者获得的样品中进行测定，以检测由本文所述的化合物及其盐诱导的TRAIL表达。免疫测定可用于测定样品中的 TRAIL，包括酶联免疫吸附测定(ELISA)，酶联免疫吸收测定(ELIFA)，流式细胞术，免疫印迹，免疫沉淀，免疫组织化学，免疫细胞化学，发光免疫测定(LIA)，荧光免疫分析(FIA)和放射免疫测定。测定可用于获得定性和/或定量结果。定性和定量样品测定的合适方法的具体细节在标准参考文献中进行了说明，包括E.Harlow&D.Lane，《抗体：实验室手册》 (Antibodies:A Laboratory Manual)，Cold Spring Harbor Laboratory Press， 1988；F.Breitling&S.Diibel，《重组抗体》(Recombinant Antibodies)，John Wiley&Sons，New York，1999；H.Zola，《单克隆抗体：单克隆抗体和工程化抗体衍生物的制备和使用，基础知识：从背景到工作台》(MonoclonalAntibodies:Preparation and Use of Monoclonal Antibodies and EngineeredAntibody Derivatives，Basics:From Background to Bench)，BIOS ScientificPublishers，2000；B.K.C.Lo，《抗体工程：方法和方案，分子生物学方法》 ()AntibodyEngineering:Methods and Protocols，Methods in Molecular Biology)，Humana Press，2003；F.M.Ausubel等人编著，《分子生物学短方案，现行方案》(Short Protocols inMolecular Biology，Current Protocols)， Wiley，2002；S.Klussman编著，《适配体手册：功能性寡核苷酸及其应用》 (The Aptamer Handbook:Functional Oligonucleotides andTheir Applications)，Wiley，2006；Ormerod，M.G.，《流式细胞术：一种实用的方法》(FlowCytometry:a practical approach)，Oxford University Press，2000； Givan，A.L.，《流式细胞术：首要原理》(Flow Cytometry:first principles)， Wiley，New York，2001；Gorczyca，W.，《肿瘤血液学中的流式细胞术：形态-免疫表型相关性》(Flow Cytometry inNeoplastic Hematology: morphologic-immunophenotypic correlation)，Taylor&Francis，2006； Crowther，J.R.，《ELISA指南(分子生物学方法)》(The ELISA Guidebook(Methods in Molecular Biology))，Humana Press，2000；Wild，D.，《免疫测定手册》(TheImmunoassay Handbook)，第三版，Elsevier Science，2005，以及J.Sambrook和D.W.Russell，《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)，ColdSpring Harbor Laboratory Press，第三版，2001。
测定和分析样品的TRAIL以检测药物组合物的效应的方案在El-deiry 等人的美国专利8,673,923中描述，该专利以其全部内容通过引用并入。
在一个实施方式中，TRAIL测定用于监测受试者。例如，在用药物组合物治疗之前和在治疗期间和/或之后的一次或多次，从受试者获得样品，以评估治疗的有效性。在另一个示例中，以各种次数从受试者获得样品以评估疾病或愈合的进程或进展。在一个实施方式中，测定来自循环肿瘤细胞的死亡受体以观察在此描述的治疗是否增加死亡受体的量或类型。
使用本文所述的方法和组合物治疗的癌症的特征在于异常细胞增殖，包括癌前过度增殖、原位癌、肿瘤和转移瘤。本文描述的方法和组合物可用于预防，以及改善癌症体征或症状。受试者的癌症“治疗”包括：预防、抑制或改善受试者的癌症，例如减缓癌症进展或者减轻或改善癌症体征或症状。使用本文描述的方法和组合物治疗的癌症的示例包括乳腺癌、CNS 癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、白血病、肺癌和淋巴瘤。
III.式(10)的化合物及其盐
在一个方面，本文提供了式(10)的化合物和盐及其制备方法。本领域技术人员应理解，在此结合ONC201(化合物(1))及其盐描述的一般原理和概念，包括与方法和药物组合物相关的原理和概念，以同等的力度适用于式(10)化合物及其盐。
在一个实施方式中，本文提供了式(10)的化合物：
Figure GDA0003815927400000311
其中R1和R2独立地选自H、烷基、芳基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基、芳烷基、杂芳基烷基、烷氧烷基、烷氧羰基、芳烷氧基、芳烷硫基和酰基自由基。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且 R2是CH2-(2-CH3-Ph)(即ONC201)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且 R2是CH2-(2,4-二F-Ph)(即ONC206)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph 且R2是CH2-(4-CF3-Ph)(即ONC212)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph 且R2是CH2-(3,4-二F-Ph)(即ONC213)。在一个实施方式中，R1是CH2(3,4- 二-Cl-Ph且R2是CH2-(4-CF3-Ph)(即ONC234)。在一个实施方式中，R1是CH2-3-噻吩基且R2是CH2-(4-CF3-Ph)(即ONC236)。
在一个实施方式中，R1和R2独立地选自H，C1-4烷基，C1-4烷基苯基， C1-4烷基苯基酮，C1-4苄基-哌嗪，C1-4烷基噻吩基，C1-4烷基吡啶基，C1-4烷基异恶唑烷基，C1-4烷基吗啉基，C1-4烷基噻唑基和C1-4烷基吡嗪基，其中C1-4烷基，C1-4烷基苯基，C1-4烷基苯基酮，C1-4苄基-哌嗪，C1-4烷基噻吩基，C1-4烷基吡啶基，C1-4烷基异恶唑烷基，C1-4烷基吗啉基，C1-4烷基噻唑基，C1-4烷基吡嗪基任选被C1-4烷基，C1-4烷氧基，羟基，全卤化的C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，R1和/或R2是取代或未取代的，芳烷基或杂芳基烷基。在一个实施方式中，杂芳基烷基选自C1-4烷基吡咯基， C1-4烷基呋喃基，C1-4烷基吡啶基，C1-4烷基-1,2,4-噻二唑基，C1-4烷基嘧啶基，C1-4烷基噻吩基，C1-4烷基异噻唑基，C1-4烷基咪唑啉基，C1-4烷基四唑基，C1-4烷基吡嗪基，C1-4烷基嘧啶基，C1-4烷基喹啉基，C1-4烷基异喹啉基， C1-4硫代烷基苯基，C1-4烷基苯并噻吩基，C1-4烷基异苯并呋喃基，C1-4烷基吡唑基，C1-4烷基吲哚基，C1-4烷基嘌呤基，C1-4烷基咔唑基，C1-4烷基苯并咪唑啉基，C1-4烷基异恶唑基。
在一个实施方式中，R1和/或R2是在苄基环上任选被下列取代基中的一种或多种取代的苄基:X，-CH3，-NO2，-OCH3，-CN，-CXH2，-CX2H， C2-C4烷基，-CX3，-CH2(CX3)，-CH(CX3)2，-C(CX3)3，-CpX2p+1，-OCX3， -OCpH2p+1，-OCpX2p+1，ORm，SRm，NRmRn，NRmC(O)Rn，SORm，SO2Rm， C(O)Rm，and C(O)ORm；Rm和Rn独立地选自H或C1-C4烷基；并且其中p 是2到20的整数并且X是卤素，包括F、Cl、Br或I；优选F、Cl或Br；更优选F或Cl。
在一个实施方式中，H、CH3、CH2Ph、CH2-(4-CF3-Ph)、CH2-(4-F-Ph)、 CH2-(4-Cl-Ph)、CH2-(OCH3-Ph)、CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2-(3- 噻吩基)、CH2-2-吡啶基、CH2-4-甲基-2-噻唑基、CH2-2-吡嗪基、CH2CH2Ph、 CH2CH2(4-N-苄基-哌嗪)、CH2-(2,4-二F-Ph)、CH2-(3,4-二Cl-Ph)、CH2-(3,4- 二F-Ph)、CH2-(3,5-二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CH(OH)Ph、(4-F-Ph)-4- 氧丁基、CH2CH2NHCOOC(CH3)3、CH2CH2CH2NH2和CD2C6D5。在一个实施方式中，R2选自H、CH3、CH2Ph、CH2-(4-CF3-Ph)、CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-((2-F)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、CH2CH2(4-N-苄基-哌嗪)、 CH2-(2,4-二F-Ph)、CH2-(2,4-二Cl-Ph)、CH2-(3,4-二Cl-Ph)、CH2-(3,4-二F-Ph)、 CH2-(3,5-二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2(2-CH3,4-F-Ph)、 CH2-((4-OCH3)-Ph)、CH2-(3-吡啶基)、CH2-(3-异恶唑烷基)、CH2CH2-(4-吗啉基)、CH2-(2-F,4-CF3-Ph)、CH2CH(OH)Ph、(CH2)3CO-4F-Ph、(4-F-Ph)-4- 氧丁基、CH2CH2NHCOOC(CH3)3、CH2CH2CH2NH2和CD2C6D5。
在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基(CH2Ph)或苯乙基基团。在一个实施方式中，所述芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤化C1-4烷基或卤基取代。
在一个实施方式中，R2是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，所述芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤化C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，所述芳基烷基被一个或多个选自卤基、CH3、CF3或OCH3的取代基取代。在一个实施方式中，R2是取代或未取代的杂环烷基烷基，例如哌嗪基烷基或吗啉代烷基。在一个实施方式中，R2是取代的或未取代的杂芳基烷基，例如吡啶基甲基或异恶唑烷基甲基。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被C1-4烷基、 C1-4烷氧基、羟基、全卤化C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被至少一个卤基、CH3、CF3或OCH3的取代基取代。
在一个实施方式中，化合物(10)具有式(80)的结构：
Figure GDA0003815927400000331
其中Ra1，Ra2，Ra3，Ra4， Ra5，Rb1，Rb2，Rb3，Rb4和Rb5各自独立地选自H，X，-CH3，-NO2，-OCH3， -CN，-CXH2，-CX2H，C2-C4烷基，-CX3，-CH2(CX3)，-CH(CX3)2，-C(CX3)3， -CpX2p+1，-OCX3，-OCpH2p+1，-OCpX2p+1，ORm，SRm，NRmRn，NRmC(O)Rn， SORm，SO2Rm，C(O)Rm和C(O)ORm；Rm和Rn独立地选自H或C1-C4烷基；并且其中p是2到20的整数和X是卤素。
在一个实施方式中，化合物(10)具有式(90)的结构
Figure GDA0003815927400000341
其中R2如上所定义，并且其中Rb1，Rb2， Rb3，Rb4和Rb5各自独立地选自H，X，-CH3，-NO2，-OCH3，-CN，-CXH2， -CX2H，C2-4烷基，-CX3，-CH2(CX3)，-CH(CX3)2，-C(CX3)3，-CpX2p+1，-OCX3， -OCpH2p+1，-OCpX2p+1，ORm，SRm，NRmRn，NRmC(O)Rn，SORm，SO2Rm， C(O)Rm和C(O)ORm；Rm和Rn独立地选自H或C1-4烷基；并且其中p是 2到20的整数以及X是卤素。
在一个实施方式中，化合物(10)具有式(40)的结构
Figure GDA0003815927400000342
其中R1如上所定义，并且其中Ra1， Ra2，Ra3，Ra4和Ra5各自独立地选自H，X，-CH3，-NO2，-OCH3，-CN， -CXH2，-CX2H，C2-4烷基，-CX3，-CH2(CX3)，-CH(CX3)2，-C(CX3)3，-CpX2p+1， -OCX3，-OCpH2p+1，-OCpX2p+1，ORm，SRm，NRmRn，NRmC(O)Rn，SORm， SO2Rm，C(O)Rm和C(O)ORm；Rm和Rn独立地选自H或C1-4烷基；p是2 到20的整数；和X是卤素。在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，芳烷基被C1-4烷基，C1-4烷氧基，羟基，全卤化的C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，苄基被一个或多个卤基取代。在一个实施方式中，苄基被选自下列的一种或多种取代基取代：卤基，-CH3，-CF3，-OCH3。在一个实施方式中，苄基在邻位或对位被一个卤基、例如F取代。在一个实施方式中，苄基在两个间位被两个卤素取代基、例如F取代。
在一个实施方式中，化合物(40)具有化合物(45)的结构：
Figure GDA0003815927400000351
其中Ra1、Ra2、Ra3、Ra4和 Ra5如上文定义。在一个实施方式中，苄基被一个或多个卤素取代。在一个实施方式中，苄基被一个或多个选自卤基、CH3、CF3和OCH3的取代基取代。在一个实施方式中，Ra1或Ra5是卤基，例如F。在一个实施方式中， Ra2和Ra3两个都是卤基，例如F。
在一个实施方式中，化合物(10)具有化合物(50)的结构
Figure GDA0003815927400000352
其中R1如上文定义，并且其中Rb选自由下列组成的组：H，X，-CH3，-NO2，-OCH3，-CN，-CXH2，-CX2H， C2-4烷基，-CX3，-CH2(CX3)，-CH(CX3)2，-C(CX3)3，-CpX2p+1，-OCX3， -OCpH2p+1，-OCpX2p+1，ORm，SRm，NRmRn，NRmC(O)Rn，SORm，SO2Rm， C(O)Rm，和C(O)ORm；Rm和Rn独立地选自H或C1-4烷基；并且其中p是 2至20的整数和X是卤素，并且其中Ra1、Ra2、Ra4和Ra5各自独立地选自由下列组成的组：H，X，-CH3，-NO2，-OCH3，-CN，-CXH2，-CX2H， C2-4烷基，-CX3，-CH2(CX3)，-CH(CX3)2，-C(CX3)3，-CpX2p+1，-OCX3， -OCpH2p+1，-OCpX2p+1，ORm，SRm，NRmRn，NRmC(O)Rn，SORm，SO2Rm，C(O)Rm，和C(O)ORm；Rm和Rn独立地选自H或C1-4烷基；并且其中p是 2至20的整数和X是卤素。在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤化C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，Rb选自卤基、CH3、CF3和OCH3。在一个实施方式中，Ra1、Ra2、Ra4和Ra5中的一个或多个选自卤基、CH3、CF3和OCH3。在一个实施方式中，Ra1、Ra2、Ra4和Ra5是H，并且Rb选自卤基、CH3、CF3和OCH3。在一个实施方式中，Rb是卤素，例如F，并且Ra1是CH3。
在一个实施方式中，Rb是F或Cl，并且Ra2是F或Cl。在一个实施方式中， Rb是CF3。在一个实施方式中，Rb是OCH3。在一个实施方式中，Rb和Ra1是Cl。
在一个实施方式中，化合物(50)具有化合物(55)的结构：
Figure GDA0003815927400000361
其中Ra1、Ra2、Ra4、Ra5和 Rb如上文定义。在一个实施方式中，Rb选自卤基、CH3、CF3和OCH3。在一个实施方式中，Ra1、Ra2、Ra4和Ra5中的一个或多个选自卤基、CH3、CF3和OCH3。在一个实施方式中，Ra1、Ra2、Ra4和Ra5是H，并且Rb选自卤基、 CH3、CF3和OCH3。在一个实施方式中，Rb是卤基，例如F，并且Ra1是 CH3。在一个实施方式中，Rb是F或Cl，并且Ra2是F或Cl。在一个实施方式中，Rb是CF3。在一个实施方式中，Rb是OCH3。在一个实施方式中， Rb和Ra1是Cl。
在一个实施方式中，化合物(10)具有化合物(60)的结构
Figure GDA0003815927400000362
在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的杂环烷基烷基或者取代或未取代的杂芳基烷基，例如CH2-(2-噻吩基)、CH2-(3-噻吩基)、CH2-4-甲基-2-噻唑基、 CH2-2-吡嗪基、CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(3-异恶唑烷基)、CH2-2-吡啶基、CH2-3-吡啶基和CH2CH2-(4-吗啉基)。在一个实施方式中，芳基烷基被 C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤化C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，苄基被一个或多个卤素取代。在一个实施方式中，苄基被一个或多个选自卤基(例如F)、CH3、CF3和OCH3的取代基取代。在一个实施方式中，苄基在对位被卤基、CH3、CF3和OCH3取代基取代。在一个实施方式中，R1是氟苯氧基丁基或羟苯基乙基。
方案3说明了式(10)化合物的合成：
Figure GDA0003815927400000371
式(10)的化合物(即依米立酮)从取代的哌啶酮开始合成，其通过与取代的氨基咪唑啉反应转化而得到核心化合物(10)。有两条途径，其中R1取代基存在于哌啶酮(例如68)中。在该路线中，(80)中使用氢化钠在甲苯中，在80℃下将(68)与二甲基碳酸酯反应，形成哌啶酮酯(69)。将市售的甲基硫氢唑啉HI盐(63)与二恶烷中的胺在70℃下反应，得到R2-取代的氨基-咪唑啉(64)作为其HI盐。(64)与哌啶酮酯(69)在1-丁醇中的反应，通过 Dean-Stark捕集器在3-6小时内除去水，得到三氯化合物(10)。在该方案的变型中，将N-BOC保护的哌啶酮(61)通过相同的方法转化为BOC保护的化合物(65)，其用HCl在二恶烷中处理以除去BOC基团，然后转化为66)用1N NaOH与甲基氯化物萃取。随后用卤化物(67)或环氧化物(70)处理(66)得到期望的化合物(10)。
粗产物可以通过柱色谱法纯化，用甲基氯化物：甲醇洗脱，或通过使用乙腈:TFA:H2O的HPLC进行纯化，得到最终产物，为游离碱或TFA盐。用二恶烷中的HCl处理游离碱，或TFA盐的冻干产生产物(10)，为HCl或TFA盐。或者，可以用另一种无机酸或有机酸处理游离碱以形成其它盐，通常选自已知为药学上可接受的盐的。化合物(10)的盐通常是固体，实例已经从乙醇或其它溶剂中结晶，得到高质量的晶体。在化合物(1)的情况下，通过X射线晶体结构和NMR确定了三环结构。
可以使用本文所述的化合物，用于或不使用氨基烷基接头(例如，化合物 (33))来鉴定在细胞环境中与其相互作用的分子(例如蛋白质)。这些结合靶标的表达可用于预测对依米立酮或其类似物(即作为生物标志物)的响应。这些化合物也可用于利用本领域已知的竞争测定来筛选结构不相关的分子，以鉴定能够以更高亲和力胜过靶标相互作用的药物。此外，这些分子可通过改变药物性质包括安全性、效力、药代动力学、生物分布或代谢而具有改善的药物性质或允许其它应用。
表1：式(10)化合物的示例
Figure GDA0003815927400000391
Figure GDA0003815927400000401
IV.评估治疗方案的敏感性和功效
测量多巴胺受体或另一种G蛋白偶联受体(GPCR)的表达、基因突变或基因拷贝数可用于预测对本文所述治疗方法的响应或敏感性，并鉴定可能对本文所述的治疗方法有响应的受试者，例如用式(10)化合物、其药学上可接受的盐或其类似物治疗。在一个方面，本文提供了鉴定有病症的受试者是否可能对本文所述的治疗方案有响应的方法。在一个实施方式中，该方法包括(i)从受试者获得生物样品；(ii)测量样品中至少一种多巴胺受体或G蛋白偶联受体 (GPCR)的表达水平；(iii)将样品中测量的水平与预定标准品的水平进行比较；以及(iv)基于样品中测量的水平与预定标准品的水平，确定受试者是否可能对治疗方案有响应。在一个实施方式中，测量样品中多巴胺受体或GPCR的表达水平的步骤包括以下步骤：(i)使样品与特异性结合受体的抗体或抗原结合片段接触以形成抗体或抗原结合片段与受体的复合物；以及(ii)测量所述复合物的量。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，癌症是神经肿瘤疾病。在一个实施方式中，癌症是神经内分泌肿瘤。在一个实施方式中，癌症选自脑膜瘤、室管膜瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤或扩散型内因性脑桥神经胶质瘤。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有精神障碍。在一个实施方式中，精神障碍选自由精神病、双相障碍或重度抑郁症组成的组。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有感染。在一个实施方式中，感染是细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阴性细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阳性细菌感染。在一个实施方式中，细菌感染是选自由屎肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌属物种组成的组中的细菌的感染。在一个实施方式中，革兰氏阳性细菌感染是葡萄球菌感染。在一个实施方式中，葡萄球菌感染是金黄色葡萄球菌感染(例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染)。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物、其药学上可接受的盐、或其类似物。在一个实施方式中，多巴胺受体来自D2样多巴胺受体家族。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD2。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD3。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD4。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD2、DRD3或两者。在一个实施方式中，GPCR是A类GPCR。在一个实施方式中，GPCR是GPR132。在一个实施方式中，GPCR选自由 GPR132、GPR91、MTNR1A、GPR162、GPR137、BAI3、LGR4、PTGIR、CXCR7 及其组合组成的组。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD5，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物或其药学上可接受的盐，并且样品中测量的DRD5的表达水平相对于预先确定的标准品增加表明受试者是否可能对治疗方案有响应。
另一方面，本文提供了评估本文所述治疗方案的有效性、监测或对有病症的受试者提供预后的方法。在一个实施方式中，该方法包括(i)从受试者获得生物样品；(ii)测量样品中至少一种多巴胺受体或G蛋白偶联受体(GPCR)的表达水平；(iii)将样品中测量的水平与预定标准品进行比较；以及(iv)基于样品中测量的水平与预定标准品的水平，确定预后或确定受试者是否对治疗方案有响应。在一个实施方式中，测量样品中多巴胺受体或GPCR的表达水平的步骤包括以下步骤：(i)使样品与特异性结合所述受体的抗体或抗原结合片段接触以形成抗体或抗原结合片段与受体的复合物；以及(ii)测量复合物的量。在一个实施方式中，该方法包括(i)从受试者获得生物样品；(ii)测量样品中至少一种多巴胺受体的基因拷贝数或突变；(iii)将样品中测量的拷贝数或发现的突变与预定标准品的拷贝数和突变进行比较；以及(iv)基于样品中测量的拷贝数或发现的突变与预定标准品的拷贝数或突变，确定受试者是否对治疗方案有响应。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，癌症是神经肿瘤疾病。在一个实施方式中，癌症是神经内分泌肿瘤。在一个实施方式中，癌症选自脑膜瘤、室管膜瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤或扩散型内因性脑桥神经胶质瘤。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有精神障碍。在一个实施方式中，精神障碍选自由精神病、双相障碍或重度抑郁症组成的组。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有感染。在一个实施方式中，感染是细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阴性细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阳性细菌感染。在一个实施方式中，细菌感染是选自由屎肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌属物种组成的组中的细菌的感染。在一个实施方式中，革兰氏阳性细菌感染是葡萄球菌感染。在一个实施方式中，葡萄球菌感染是金黄色葡萄球菌感染(例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染)。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物、其药学上可接受的盐、或其类似物。在一个实施方式中，多巴胺受体选自DRD2、DRD2S、DRD2L 和DRD3。在一个实施方式中，多巴胺受体来自D2样多巴胺受体家族。在一个实施方式中，多巴胺受体来自D1样多巴胺受体家族。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD1。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD2。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD3。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD4。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD5。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD2、 DRD3或两者。在一个实施方式中，GPCR是A类GPCR。在一个实施方式中， GPCR是GPR132。在一个实施方式中，GPCR选自由GPR132、GPR91、MTNR1A、GPR162、GPR137、BAI3、LGR4、PTGIR、CXCR7及其组合组成的组。
在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD5，治疗方案包括施用有效量的式 (10)化合物或其药学上可接受的盐，并且样品中测量的DRD5的表达水平相对于预先确定的标准品增加表明治疗方案是否有效。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD5，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物或其药学上可接受的盐，并且样品中测量的DRD5基因中的突变表明治疗方案是否有效。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD5，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物或其药学上可接受的盐，并且样品中测量的DRD5 基因中的错义突变Q366R表明治疗方案是否有效。
另一方面，本文提供了鉴定有病症的受试者是否可能对本文所述的治疗方案有响应的方法。在一个实施方式中，该方法包括(i)从受试者获得生物样品； (ii)测量样品中至少一种多巴胺受体的基因拷贝数或突变；(iii)将样品中测量的拷贝数或发现的突变与预定标准品的拷贝数和突变进行比较；以及(iv)基于样品中测量的拷贝数或发现的突变与预定标准品的拷贝数或突变，确定受试者是否对治疗方案有响应。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，癌症是神经肿瘤疾病。在一个实施方式中，癌症是神经内分泌肿瘤。在一个实施方式中，癌症选自脑膜瘤、室管膜瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤或扩散型内因性脑桥神经胶质瘤。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有精神障碍。在一个实施方式中，精神障碍选自由精神病、精神分裂症、双相障碍或重度抑郁症组成的组。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有感染。在一个实施方式中，感染是细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阴性细菌感染。在一个实施方式中，感染是革兰氏阳性细菌感染。在一个实施方式中，细菌感染是选自由屎肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌属物种组成的组中的细菌的感染。在一个实施方式中，革兰氏阳性细菌感染是葡萄球菌感染。在一个实施方式中，葡萄球菌感染是金黄色葡萄球菌感染(例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)感染)。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物、其药学上可接受的盐、或其类似物。在一个实施方式中，多巴胺受体来自D2样多巴胺受体家族。在一个实施方式中，多巴胺受体是 DRD1。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD2。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD3。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD4。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD5。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD2、DRD3或两者。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD5，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物或其药学上可接受的盐，并且样品中测量的DRD5基因中的突变表明受试者是否可能对治疗方案有响应。在一个实施方式中，多巴胺受体是DRD5，治疗方案包括施用有效量的治疗剂，例如式(10)化合物或其药学上可接受的盐，并且样品中测量的DRD5基因中的错义突变Q366R表明受试者是否可能对治疗方案有响应。
此外，测量eIF2-α、ATF4、CHOP、DR5、或者裂解的或全部细胞角蛋白 18的表达、翻译后修饰、或者活性水平或突变可用于预测对本文所述的治疗方法的响应或敏感性和鉴定可能对本文所述的治疗方法有响应的受试者，例如用式(10)化合物、其药学上可接受的盐或其类似物治疗。另外，eIF2-α，ATF4， CHOP，DR5或裂解的或全部细胞角蛋白18中的测量表达，翻译后修饰或活性水平或突变可用于评估或监测根据本文描述的治疗方法的有效性。此外，eIF2-α， ATF4，CHOP，DR5或裂解的或全部细胞角蛋白18中的测量表达，翻译后修饰或活性水平或突变可用于体内、体外或计算机筛选结构不相关的抗癌分子。例如，竞争和其它测试可以用于识别能够以较高亲和力超越目标相互作用的药物，以将这些水平的变化与式(10)化合物或其类似物产生的各自变化进行比较。测试也可以在活体哺乳动物细胞上进行，其更接近于药物在体内的特定血清水平的影响，或由培养细胞系制备的微粒体提取物。
在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的依米立酮，例如ONC201，或其类似物。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的ONC201。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的式(10)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(40) 化合物，例如式(45)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(50) 化合物，例如式(55)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(80) 化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(90)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(60)化合物。在一个实施方式中，化合物(1) 的类似物具有的结构选自式(25)、式(26)、式(27)、式(28)、式(29)、式 (30)或式(31)的结构。
预定标准品的水平可以是例如来自受试者的样品中测量的平均值或中值水平。预定标准品的水平可以在与测量来自受试者的样品相同或基本类似的实验条件下测量。预定标准品的水平可以从对用依米立酮例如ONC201、或其类似物治疗有响应的受试者获得。在一个实施方式中，预定标准品是从对化学物质治疗有响应的受试者获得的，如果来自受试者的样品中的水平与标准品中的水平相似，则该受试者可被归类为对治疗有响应的可能性。预定标准品的水平可以从对化学物质治疗无响应的受试者获得。在一个实施方式中，预定标准品是从对化合物治疗无响应的受试者获得的，如果受试者样本中的水平与预期标准品中的水平不同(例如上调或下调)，那么受试者可被归类为对治疗有响应的可能性。预定标准品的水平可以从正常健康受试者获得。
免疫测定可用于测定样品中的蛋白质或甲基化学水平，包括酶联免疫吸附测定(ELISA)，酶联免疫吸收测定(ELIFA)，流式细胞术，免疫印迹，免疫沉淀，免疫组化，免疫细胞化学，发光免疫测定(LIA)，荧光免疫测定(FIA)和放射免疫测定。m6A mRNA甲基化学水平可以通过甲基RNA免疫沉淀(Me-RIP) 或本领域已知的其它定量生化测定法获得。
核酸突变可以通过许多已知方法中的任何一种来确定。例如，可以获得个人的生物样本。这种生物样品包括但不限于身体(如尿液，唾液，血浆或血清) 或组织样品(如颊组织样本或颊细胞)。然后可以使用已知方法对生物样品进行测序或扫描。例如DNA阵列可用于分析受试者基因组序列的至少一部分。此外，可以使用全部或部分基因组序列信息。可以使用包括链终止(Sanger双脱氧核苷酸)，染料终止子测序和SOLID TM测序(AppliedBiosystems)的标准测序方法测定此类序列。整个基因组序列可以通过限制酶切割或剪切(机械)成较短的片段进行测序。也可以使用已知方法如PCR和基于载体的克隆方法(例如大肠杆菌)扩增DNA序列。在一个实施方式中，使用例如常规的DNA测序仪或基于芯片的技术来扫描或测序受试者遗传物质的至少一部分(例如DNA，RNA， mRNA，cDNA，其它核苷酸碱基或这些的衍生物)，以确定是否存在突变或拷贝数变异。
在一个方面，本文提供了鉴定和治疗有病症并可能对本文所述的治疗方案有响应的受试者的方法。在一个实施方式中，该方法包括：(i)鉴定有病症的受试者是否可能对本文所描述的治疗方案有响应；(ii)用所述治疗方案治疗被确定可能对该治疗方案有响应的受试者。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的依米立酮，例如 ONC201，或其类似物。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的化合物 (1)。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的式(10)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(40)化合物，例如式(45)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(50)化合物，例如式(55)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(80)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(90)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式 (60)化合物。在一个实施方式中，化合物(1)的类似物具有的结构选自式(25)、式(26)、式(27)、式(28)、式(29)、式(30)或式(31)的结构。
预定标准品的水平可以是例如来自受试者的样品中测量的平均值或中值水平。预定标准品的水平可以在与测量来自受试者的样品相同或基本类似的实验条件下测量。预定标准品的水平可以从对用依米立酮例如ONC201、或其类似物治疗有响应的受试者获得。在一个实施方式中，预定标准品是从对化学物质治疗有响应的受试者获得的，如果来自受试者的样品中的水平与标准品中的水平相似，则该受试者可被归类为对治疗有响应的可能性。预定标准品的水平可以从对化学物质治疗无响应的受试者获得。在一个实施方式中，预定标准品是从对化合物治疗无响应的受试者获得的，如果受试者样本中的水平与预期标准品中的水平不同(例如上调或下调)，那么受试者可被归类为对治疗有响应的可能性。预定标准品的水平可以从正常健康受试者获得。免疫测定可用于测定样品中的蛋白质水平。
在一个方面，本文提供了有病症的受试者中进行治疗和评估治疗有效性的方法。在一个实施方式中，所述方法包括：(i)根据本文所述的治疗方法治疗所述受试者，(ii)如本文所述评估治疗的有效性。在一个实施方式中，受试者患有或有风险患有癌症。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的依米立酮，例如ONC201，或其类似物。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的化合物(1)。在一个实施方式中，治疗方案包括施用有效量的式(10)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(40)化合物，例如式(45)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(50)化合物，例如式(55) 化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(80)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(90)化合物。在一个实施方式中，式(10)化合物是式(60)化合物。在一个实施方式中，化合物(1)的类似物具有的结构选自式(25)、式(26)、式(27)、式(28)、式(29)、式(30)或式(31)的结构。
可能适合本文所述方法的其它病症包括：注意缺陷障碍、成瘾、癫痫、病毒感染、炎症、神经变性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩性侧索硬化、心血管疾病如冠状动脉疾病、心肌病、高血压性心脏病、心力衰竭、肺心病、心律失常、炎性心脏病、心内膜炎、炎性心脏病、心肌炎、瓣膜性心脏病、脑血管病、外周动脉疾病、先天性心脏病、风湿性心脏病、糖尿病和轻链淀粉样变性。
V.组合物
在一个方面，提供了药物组合物，其包含式(10)：
Figure GDA0003815927400000471
或式 (1)：
Figure GDA0003815927400000472
的化合物及其药学上可接受的盐。在一个实施方式中，盐是化合物的药学上可接受的二盐。在一个实施方式中，盐是药学上可接受的单盐或多盐(例如二盐或三盐)选自盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸氢盐，硫酸盐，磷酸盐，富马酸盐，琥珀酸盐，草酸盐和乳酸盐，硫酸氢盐，羟基，酒石酸盐，硝酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，碳酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，富马酸盐磺酸盐，甲基磺酸盐，甲酸盐，乙酸盐和羧酸盐。在一个实施方式中，盐是选自对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、富马酸盐和马来酸盐的盐。在一个实施方式中，盐是选自铵、钠、钾、钙、镁、锌、锂和/或与抗衡离子如甲氨基、二甲氨基、二乙基氨基和三乙基氨基抗衡离子的盐。在一个实施方式中，盐是二盐酸盐或二氢溴酸盐。
化合物(1)(ONC201)具有通过国家癌症研究所发展治疗计划储存库获得的化学物质NSC 350625的结构分析(例如NMR，X射线衍射)所揭示的相同的化学结构。
在一个实施方式中，药物组合物包括ONC201的二盐(例如二盐酸盐)或其类似物(例如，依米立酮)。ONC201类似物的盐(例如二盐或三盐)可以由 ONC201类似物制备，其可以如本文所述、或使用本领域普通技术人员已知的标准化学合成方法合成。
在一个实施方式中，药物组合物包括至少一种药学上可接受的载体。合适的药学上可接受的载体包括但不限于在“药物赋形剂手册(Handbook of PharmaceuticalExcipients)”，第7版，Raymond C.Rowe等编辑，American Pharmaceutical Association，Washington，USA和Pharmaceutical Press，London；和早期版本中的那些。示例性药学上可接受的载体，合物和各种剂型的方法以及施用方式在本领域中是众所周知的，例如在以下文献中详述：Larry L. Augsburger&Stephen W.Hoag.编著的《药物剂型：片剂》(Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets)，London:Informa Healthcare，2008；以及L.V.Allen，Jr.等人，《安塞尔药物剂型和药物递送系统》(Ansel’s PharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery Systems)，第八版，Philadelphia，Pa.:Lippincott，Williams&Wilkins， 2004；A.R.Gennaro，《雷明顿：药学的科学与实践》(Remington:TheScience and Practice of Pharmacy)，Lippincott Williams&Wilkins，第21版，2005，特别89 章；以及J.G.Hardman等人，《Goodman&Gilman的治疗学的药理学基础》 (Goodman&Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics)，McGraw-Hill Professional，第十版，2001。
在一个实施方式中，药物组合物配制用于眼部施用。在一个实施方式中，药物组合物用于局部施用。在一个实施方式中，药物组合物被配制成油滴，软膏或液体。在一个实施方式中，药物组合物包括常规药物载体如水性，粉状或油性基质，增稠剂。
在一个实施方式中，药物组合物是用于静脉内施用的制剂。在一个实施方式中，静脉制剂包含溶解在溶剂中的式(10)化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方式中，溶剂包括水。在一个实施方式中，静脉制剂包括化合物或其盐，浓度约为0.05，约0.25，约0.5，约2.5，约5，约25或约50mg/mL。在一个实施方式中，静脉制剂包括浓度为约0.05，0.5或5mg/mL至约1，10或 100mg/mL的化合物或其盐。在一个实施方式中，静脉制剂包括约0.005％，0.05％，或约0.5％至约0.1％，1％或10％的化合物或其盐。在一个实施方式中，静脉制剂包括约0.05％，0.5％或5％的化合物或其盐。在一个实施方式中，静脉制剂包括较高或较低浓度的化合物或其盐。
在一个实施方式中，静脉制剂的pH为约3。在一个实施方式中，制剂用磷酸盐缓冲液调节至pH 3。在一个实施方式中，静脉制剂包括葡萄糖或氯化钠。在一个实施方式中，静脉制剂包括浓度约5mg/mL和pH 3的化合物或其盐，形成稳定的溶液。在一个实施方式中，静脉制剂包括浓度约5mg/mL，pH<5的化合物或其盐，形成稳定的溶液。在一个实施方式中，静脉制剂包括化合物或其盐和一种或多种抗氧化剂。在一个实施方式中，静脉制剂包括化合物的单和二盐酸盐的混合物。在一个实施方式中，静脉制剂包含化合物或其盐，浓度为约10mg/mL的1％溶液，例如静脉制剂是pH约为3.3的溶液。在一个实施方式中， pH值小于4.0。
在一个实施方式中，药物组合物还包含药学上可接受的载体。在一个实施方式中，合适的药学上可接受的载体包括水性载体。在一个实施方式中，水性载体包括无菌水。在一个实施方式中，制剂包括右旋糖和/或钠。在一个实施方式中，药学上可接受的载体包括油。
在一个实施方式中，静脉内制剂包含以25mg/mL溶解于水中的ONC201或其类似物或其二盐酸盐。在一个实施方式中，制剂用磷酸盐缓冲液调节至pH 3。在一个实施方式中，制剂包含右旋糖、氯化钠或两者。在一个实施方式中，制剂包含浓度较高或较低的ONC201或其类似物的二盐酸盐。在一个实施方式中，制剂包含浓度约5mg/mL的ONC201或其类似物或其二盐酸盐。在一个实施方式中，约5mg/mL的制剂形成稳定的溶液并且pH 3。在一个实施方式中，约 5mg/mL的制剂具有pH<5并形成稳定的溶液。在一个实施方式中，静脉内制剂包含ONC201或其类似物或其二盐酸盐和一种或多种抗氧化剂。在一个实施方式中，静脉内制剂包含ONC201或其类似物的单和二盐酸盐的混合物。在一个实施方式中，静脉内制剂作为浓度约10mg/mL的1％溶液包含ONC201或其类似物或其二盐酸盐。例如，静脉内制剂是pH为约3.3的溶液。在一个实施方式中，pH小于4.0。
在一个实施方式中，静脉内制剂包含约0.5％至约10％(或约5mg/mL至约 100mg/mL)的ONC201或其类似物或其二盐。在一个实施方式中，所述制剂包含约5％(或约50mg/mL)起的ONC201或其类似物或其二盐。在一个实施方式中，可以减慢静脉内输注速率以减少ONC201或其类似物或其二盐的副作用。
在一个实施方式中，药物组合物包含约0.1-99％的ONC201盐或其类似物；和药学上可接受的载体，例如油或无菌水或其它水性载体。在一个实施方式中，对于口服剂型，所述组合物包含在约5％至约50％范围内的ONC201或其类似物的单盐或二盐。
在一个实施方式中，药物组合物包括抗氧化剂。合适的抗氧化剂包括：抗坏血酸衍生物，例如抗坏血酸，异抗坏血酸，抗坏血酸钠，硫代甘油，半胱氨酸，乙酰半胱氨酸，胱氨酸，二硫代红苏糖醇，二硫代苏糖醇，谷氨硫代，生育酚，丁基化羟基苯甲醚(BHA)，丁基化羟基甲苯(BHT)，亚硫酸盐如硫酸钠，亚硫酸氢钠，丙酮亚硫酸氢钠，偏亚硫酸氢钠，亚硫酸钠，甲醛次硫酸钠和硫代硫酸钠，二氢愈创木酸。应注意，用于水性制剂的抗氧化剂通常包括：亚硫酸钠，偏亚硫酸氢钠，甲醛磺酸钠和抗坏血酸及其组合，而用于油基溶液，有机溶剂的抗氧化剂包括丁基化羟基甲苯(BHT)，丁基化羟基茴香醚(BHA) 和丙酸丙酯及其组合。在其它实施方式中，抗氧化剂可以是类黄酮，异黄酮，单硫代甘油，L-半胱氨酸，硫代乙醇酸，α-生育酚，抗坏血酸6-棕榈酸酯，二氢硫辛酸，丁基化羟基甲苯(BHT)中的一种或多种)，丁基化羟基苯甲醚(BHA)，维生素E，没食子酸丙酯，β-胡萝卜素，抗坏血酸。抗氧化剂通常可以以约0.1％至1.0重量％，更典型地约0.2％使用。
在一个实施方式中，药物组合物包含依米立酮，例如ONC201，或其类似物或其药学上可接受的盐和至少一种其它治疗剂。例如其它治疗剂选自激素类似物和抗激素，芳香酶抑制剂，LHRH激动剂和拮抗剂、生长因子抑制剂，生长因子抗体，生长因子受体抗体，酪氨酸激酶抑制剂；抗代谢产物；抗肿瘤抗生素；铂衍生物；烷基化剂；抗有丝分裂剂S；微管蛋白抑制剂；PARP抑制剂，拓扑异构酶抑制剂，丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，蛋白质-蛋白质相互作用抑制剂，RAF抑制剂，MEK抑制剂，ERK抑制剂，IGF-1R 抑制剂，ErbB受体抑制剂，雷帕霉素类似物，BTK抑制剂，CRM1抑制剂(例如KPT185)，P53调节剂(例如Nutlins)，抗血管生成因子(例如，阿替利菌，阿非司亭，索拉非尼和瑞戈非尼)，氨磷汀，阿那格雷，氯膦酸盐，非尔司亭，干扰素，干扰素α，亚叶酸，利妥昔单抗，丙卡巴肼，左旋咪唑，美司那，米托坦，帕米膦酸盐和卟吩姆，2-氯脱氧腺苷，2-氟脱氧胞苷，2-甲氧基雌二醇，2C4,3-alethine，131-1-TM-601,3CPA，7-乙基-10-羟基喜树碱，16-氮杂-埃博霉素 B，A105972，A 204197，阿比特龙，阿地白介素，依维菌素，allovectin-7，六甲蜜胺，alvocidib，amonafide，蒽吡唑，AG-2037，AP-5280，apaziquone，apomine， aranose，arglabin，阿佐昔芬，阿他美坦，阿曲生坦，auristatin PE，AVLB，AZ10992， ABX-EGF，AMG-479(加尼妥单抗)，ARRY 162，ARRY 438162，ARRY-300， ARRY-142886/AZD-6244(司美替尼)704/AZD-8330，AR-12，AR-42，AS-703988， AXL-1717，AZD-8055，AZD-5363，AZD-6244，ARQ-736，ARQ 680，AS-703026 (primasertib)AZD-2014，阿扎胞苷，氮杂倍他乐B，azonafide，BAY-43-9006， BAY80-6946，BBR-3464，BBR-3576，贝伐单抗，BEZ-235，二十二烷酸二钠， BCX-1777，BKM-120，布可菌素，BLP-25，BMS-184476，BMS-247550， BMS-188797，BMS-275291，BMS-663513，BMS-754807，BNP-1350，BNP-7787， BIBW 2992(阿法替尼，妥复克)，BIBF 1120(vargatef)，BI836845，BI 2536， BI 6727，BI 836845，BI 847325，BI 853520，BUB-022，博来霉素酸，博来霉素 A，博来霉素B，brivanib，bryostatin-1，硼替佐米，brostallicin，busulphan，BYL-719， CA-4前药，CA-4，CapCell，骨化三醇，卡培他滨，canfosfamide，卡培他滨，羧基酞霉素，CCl-779，CC-115，CC-223，CEP-701，CEP-751，CBT-1头孢克肟，头孢噻肟，头孢曲松，塞来昔布，西莫白介素，西马多丁， CH4987655/RO-4987655，氯三苯胺，西仑吉肽，环孢菌素，CDA-II，CDC-394， CKD-602，CKI-27，氯法拉滨，秋水仙素，考布他汀A4，COT抑制剂，CHS-828， CH-5132799，CLL-Thera，CMT-3cryptophycin 52，CTP-37，CTLA-4单克隆抗体，CP-461，CV-247，氰基吗啉代阿霉素，阿糖胞苷，D 24851，地西他滨，脱氧维生素，脱氧维生素，脱氧核糖核酸霉素，去磷脂抗坏血酸B，地塞米松，地塞米松，己烯雌酚，diflomotecan，didox，DMDC，多拉司他汀10，多拉达唑， DS-7423，E7010，E-6201，edatrexat，依多曲肽，乙丙昔罗，依氟鸟氨酸，EGFR 抑制剂，EKB-569，EKB-509，enzastaurin，伊曲霉素B，依普美珠宁，埃博霉素B，依普美沙星，ER-86526，厄洛替尼，ET-18-0CH3，乙炔基胞苷，乙炔雌二醇，依沙替康，甲磺酸依沙替康，依西美坦，依昔舒林，芬维A胺，菲咯瑞坦，菲咯立酮，叶酸，FOLFOX，FOLFOX4，FOLFIRI，吉非替尼，吉妥珠单抗，吉非替尼，吉非替尼，吉非他明，吉非替尼，GFC-100，GDC-0623，GDC-0941 (pictrelisib)，GDC-0980，GDC-0032，GDC-0068，GDC-0349，GDC-0879，G17DT 免疫原，GMK，GPX-100，gp100肽疫苗，GSK-5126766，GSK-690693，GSK-1120212(曲美替尼)，GSK-2118436(达拉非尼)，GSK-2126458， GSK-2132231A，GSK-2334470，GSK-2110183，GSK-2141795，GW2016，格拉司琼，赫赛汀，六甲基蜜胺，组胺，homoharringtonine，透明质酸，羟基脲，羟孕酮己酸酯，伊班膦酸酯，伊布他他滨，伊曲霉素，伊曲他汀，艾司他丁， IDN-5109，IGF-1R抑制剂，IMC-1C11，IMC-A12(西妥木单抗)，免疫球蛋白，溶血素，干扰素α-2a，干扰素α-2b，聚乙二醇化干扰素α-2b，白介素-2，INK-1117，INK-128，INSM-18，ionafarnib，伊匹单抗，异哈密酮，异黄酮，异维A酸，伊沙匹隆，JRX-2，JSF-154，J-107088，结合雌激素，kahalid F，酮康唑，KW-2170， KW-2450，洛铂铂，来氟米特，异诺乐加精，亮丙瑞林，leuporelin，lexidronam， LGD-1550，利奈唑胺，泰铢，泰乐菌素，洛司他，卢索他宁，LU 223651，洛索蒽醌，LY-S6AKT1，LY-2780301，马磷酰胺，马立马司他，双氯乙基甲胺， MEK抑制剂，MEK-162，甲基睾酮，甲基泼尼松龙，MEDI-573，MEN-10755，MDX-H210，MDX-447，MDX-1379，MGV，米哚妥林，米诺膦酸，丝裂霉素，米伏布林，MK-2206，MK-0646(达洛珠单抗)，MLN518，莫特沙芬钆，MS-209， MS-275，MX6，奈立膦酸盐，来那替尼，Nexavar，neovastat，尼罗替尼，尼美舒利，硝酸甘油，诺拉曲塞，诺雷琳，N-乙酰半胱氨酸，06-苄基鸟嘌呤，oblimersen，奥美拉唑，oncophage，oncoVEXGM-CSF，ormiplatin，ortataxel，OX44抗体， OSI-027，OSI-906(linsitinib)，4-1BB抗体，oxantrazole，雌激素，帕尼单抗，帕土匹龙，培非尔司亭，PCK-3145，pEG-005，PF-05197281，PF-05212384， PF-04691502，PHT-427，P-04，PKC412，P54，PI-88，培利替尼，培美曲塞， pentrix，哌立福辛，紫苏子醇，帕妥珠单抗，PI3K抑制剂，PI3K/mTOR抑制剂， PG-TXL，PG2，PLX-4032/RO-5185426(维罗非尼)-3603/RO-5212054，PT-100， PWT-33597，PX-866，吡铂，新戊酰氧基甲基丁酸酯，七聚异戊二烯酮，苯妥帝尔O，PKI166，普来曲塞，光辉霉素，聚丙二酸，卟吩霉素，泼尼松，泼尼松龙，喹诺酮，R115777，RAF-265，ramosetron，豹蛙酶，RDEA-119/BAY 869766，RDEA-436，蝴蝶霉素类似物，受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂，瑞戈非尼，revimid， RG-7167，RG-7304，RG-7421，RG-7321，RG 7440，根瘤菌素，rhu-MAb，瑞利法丁，利塞膦酸酯，利妥昔单抗，罗番单抗，罗非考昔，RO-31-7453， RO-5126766，RO-5068760，RPR 109881A，柔红霉素苯腙，鲁比替康，R-氟比洛芬，RX-0201，S-9788，阿巴拉比星，SAHA，沙格司亭，赛特铂，SB408075， Se-015/Ve-015，SU5416，SU6668，SDX-101，semustin，4071，SR-27897，SR-31747，SR-13668，SRL-172，索拉非尼，螺卡铂，角蛋氨酸，异羟肟酸，索坦，T 900607， T 138067，TAK-733，TAS-103，泰乐菌素，塔帕罗培南，泰乐菌素，泰诺沙坦，泰沙普坦，替加氟，替莫唑胺，替沙罗芬，替莫非尔，替莫非林，睾酮，丙酸酯，替米利芬，四氯铂酸，河豚毒素，替扎西平，沙利度胺，曲妥单抗，替拉唑，托伐菌胺，托伐菌素，托伐菌素，曲马替尼，反式MID-107，视黄酸，曲妥珠单抗，曲美母单抗，维A酸，三乙酰尿苷，triapine，曲西立滨，三甲氧嘧啶，TLK-286TXD 258，tykerb/tyverb，尿胆红素，心灵素，瓦拉西尼，长春新碱，维鲁利秦，WX-UK1，WX-554，维克替比，希罗达，XELOX，XL-147， XL-228，XL-281，XL-518/R-7420/GDC-0973，XL-765，YM-511，YM-598， ZD-4190，ZD-6474，ZD-4054，ZD-0473，ZD-6126，ZD-9331，ZD1839，ZSTK-474， zoledronat，zosuquidar及其组合。
在一个实施方式中，其它治疗剂包括激素类似物、抗激素或二者，其选自他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、氟维司群、乙酸甲地孕酮、氟他胺、尼鲁替胺、比卡鲁胺、氨基戊二酰亚胺、乙酸环丙孕酮、非那雄胺、乙酸布舍瑞林、氟氢可的松、氟羟甲基睾丸素、甲羟孕酮、奥曲肽、及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包含一种或多种LHRH激动剂和/或拮抗剂选自乙酸戈舍瑞林，乙酸氯普罗赛汀，曲普瑞林pamoate及其组合并且其中LHRH拮抗剂选择自加加瑞克，西曲瑞克，阿巴列克斯，奥扎雷利克，加加利克组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包含一种或多种生长因子抑制剂选自抑制剂：血小板衍生生长因子(PDGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，血管内皮生长因子(VEGF)，表皮生长因子(EGF)，胰岛素样生长因子(IGF)，人表皮生长因子(HER)和肝细胞生长因子(HGF)。在一个实施方式中，其它治疗剂包括选自HER2、HER3 和HER4的人表皮生长因子的一种或多种抑制剂。在一个实施方式中，其它治疗剂包含一种或多种酪氨酸激酶抑制剂选自西妥昔单抗，吉非替尼，伊马替尼，拉帕替尼和曲妥珠单抗及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包含一种或多种芳香酶抑制剂选自anastrozole，letrozole，liarozole，vorozole，exemestane， atamestane及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包含一种或多种抗代谢产物，其为抗叶酸剂，选自甲氨蝶呤，雷替曲塞和嘧啶类似物。在一个实施方式中，其它治疗剂包括一种或多种抗代谢产物，它们是嘧啶类似物选自 5-fluorouracil，卡培他滨和吉西他滨。在一个实施方式中，其它治疗剂包括一种或多种抗代谢产物，其为嘌呤和/或腺苷类似物选自巯基嘌呤，硫代鸟嘌呤，克拉屈滨和pentostatin，阿糖胞苷，氟达拉滨及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包括一种或多种抗肿瘤药物，阿霉素，道诺霉素，表阿霉素和去甲氧基柔红霉素，丝霉素-C，博来霉素，放线菌素D，光辉霉素，链脲霉素及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包含一种或多种铂衍生物选自顺铂，奥沙利铂，卡铂及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包括一个或多个烷基化剂选自 estramustin，mecloreth胺，melphalan，chlorambucil，busulphan，dacarbazin， cyclophosphamide，ifosfamide，temozolomide，nitsoureas及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包括选择carmustin，lomustin，硫代tepa及其组合的nitsoureas。在一个实施方式中，其它治疗剂包括抗有丝分裂剂选自长春花生物碱和紫杉烷。在一个实施方式中，其它治疗剂包含一个或多个taxanes选自紫杉醇，多西他赛及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包含一种或多种长春碱碱碱选择维生素，维琳西林，维琳雷因，长春新碱及其组合。其中一种实施方式中，其它治疗剂包含一种或多种作为表鬼臼毒素的拓扑异构酶抑制剂。在一个实施方式中，其它治疗剂包括一种或多种表鬼臼毒素选自依托泊苷和凡毕复，替尼泊苷，amsacrin，拓扑替康，伊立替康，mitoxantron及其组合。一个或多个丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂选自PDK 1抑制剂，B-Raf抑制剂，mTOR抑制剂，mTORC1抑制剂，PI3K抑制剂，双mTOR/PI3K抑制剂，STK 33抑制剂， AKT抑制剂，PLK 1抑制剂，抑制剂的CDK，Aurora激酶抑制剂及其组合。其中一种实施方式中，其它治疗剂包含一种或多种酪氨酸激酶抑制剂，它们是 PTK2/FAK抑制剂。在一个实施方式中，其它治疗剂包含一个或多个蛋白质-蛋白质相互作用抑制剂选自IAP，Mcl-1，MDM2/MDMX及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包括一个或多个雷帕霉素类似物选择依维莫司，西罗莫司，ridaforolimus，西罗莫司及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包括一个或更多治疗剂选自阿米夫斯汀，阿那格雷，clodronat，filgrastin，干扰素，干扰素α，leucovorin，利妥昔单抗，丙卡巴肼，levamisole，mesna，mitotane，pamidronate 和porfimer及其组合。在一个实施方式中，其它治疗剂包括一个或多个治疗剂选自2-氯脱氧腺苷，2-氟脱氧胞苷，2-甲氧基雌二醇，2C4,3-alethine， 131-1-TM-601,3CPA，7-乙基-10-羟基喜树碱，16-氮杂-埃博霉素B，A105972， A 204197，阿比特龙，阿地白介素，阿维A酸，allovectin-7，altretamine，alvocidib， amonafide，蒽吡唑，AG-2037，AP-5280，阿扎喹醌，阿立糖，阿利坎定，阿曲昔芬，阿塔美他坦，阿替司坦，澳瑞他汀PE，ABT-199(Venetoclax)，ABT-263 (Navitoclax)，AVLB，AZ10992，ABX-EGF，AMG-479(盖尼塔单抗)，ARRY 162，ARRY 438162，ARRY-300，ARRY-142886/AZD-6244(赛洛米汀) -704/AZD-8330，AR-12，AR-42，AS-703988，AXL-1717，AZD-8055，AZD-5363， AZD-6244，ARQ-736，ARQ 680，AS-703026(primasertib)，AZD-2014，阿扎胞苷，氮杂保护素B，azonafide，BAY-43-9006，BAY 80-6946，BBR-3464， BBR-3576，贝伐单抗，BEZ-235，二十二烷酸二钠，BCX-1777，BKM-120，布可菌素，BLP-25，BMS-184476，BMS-247550，BMS-188797，BMS-275291， BMS-663513，BMS-754807，BNP-1350，BNP-7787，BIBW2992(阿法替尼，妥复克)，BIBF 1120(vargatef)，BI 836845，BI 2536，BI 6727，BI836845，BI 847325，BI 853520，BUB-022，博来霉素酸，博来霉素A，博来霉素B，brivanib，bryostatin-1，硼替佐米，brostallicin，busulphan，BYL-719，CA-4前药，CA-4， CapCell，骨化三醇，卡培他滨，canfosfamide，卡培他滨，羧基酞霉素，CCl-779， CC-115，CC-223，CEP-701，CEP-751，CBT-1头孢克肟，头孢噻肟，头孢曲松，塞来昔布，西莫白介素，西马多丁，CH4987655/RO-4987655，氯三苯胺，西仑吉肽，环孢菌素，CDA-II，CDC-394，CKD-602，CKI-27，氯法拉滨，秋水仙素，考布他汀A4，COT抑制剂，CHS-828，CH-5132799，CLL-Thera，CMT-3cryptophycin 52，CTP-37，CTLA-4单克隆抗体，CP-461，CV-247，氰基吗啉代阿霉素，阿糖胞苷，D 24851，地西他滨，阿霉素，去氧孕霉素B，地塞米松，地塞米松，己烯雌酚，diflomotecan，didox，DMDC，多拉司他汀10，多拉唑尼， DS-7423，E7010，E-6201，依达曲沙敏，依氟鸟氨酸，EGFR抑制剂，EKB-569， EKB-509，enzastaurin，恩扎洛胺，依沙星，埃博霉素B，epratuzumab，ER-86526，厄洛替尼，ET-18-0CH3，乙炔基胞苷，乙炔雌二醇，依沙替康，甲磺酸依沙替康，exemestane，依昔舒林，芬维A胺，菲咯瑞肽，氟尿苷，叶酸，FOLFOX，FOLFOX4，FOLFIRI，甲磺坦，氟托西汀，喜树碱，麦芽酚糖，吉非替尼，吉妥珠单抗，gimatecan，葡糖酰胺，GCS-100，GDC-0623，GDC-0941(pictrelisib) 0980，GDC-0032，GDC-0068，GDC-0349，GDC-0879，G17DT免疫原，GMK， GPX-100，gp100-肽疫苗，GSK-5126766，GSK-690693，GSK-1120212(曲美替尼)，GSK-2118436(达拉非尼)，GSK-2126458，GSK-2132231A，GSK-2334470， GSK-2110183，GSK-2141795，GW2016，granisetron，赫赛汀，六甲基蜜胺，组胺，高三尖杉酯碱，透明质酸，羟基脲，己酸羟孕酮，伊班膦酸伊布他尼，伊曲霉素，伊曲他韦，异雌酚，IDN-5109，IGF-1R抑制剂，IMC-1C11，IMC-A12 (西妥木单抗)，免疫球蛋白，溶血素，干扰素α-2a，干扰素α-2b，聚乙二醇化干扰素α-2b，白细胞介素-2，INK-1117，INK-128，INSM-18，ionafarnib，异丙肾上腺素，异冬青霉素B，异黄酮，异维A酸，伊沙匹隆，JRX-2，JSF-154， J-107088，结合雌激素，kahalid F，酮康唑，KW-2170，KW-2450，洛帕铂，来氟米特，leuporelin，lexidronam，LGD-1550，利奈唑胺，镥泰克萨菲瑞，洛莫曲醇，loosxantrone，LU 223651，洛索蒽醌，LY-S6AKT1，LY-2780301，马磷酰胺，马立马司他，双氯乙基甲胺，MEK抑制剂，MEK-162，甲基睾酮，甲基泼尼松龙，MEDI-573，MEN-10755，MDX-H210，MDX-447，MDX-1379，MGV，米哚妥林，米诺膦酸，丝裂霉素，米伏布林，MK-2206，MK-0646(达洛珠单抗)， MLN518，莫特沙芬钆，MS-209，MS-275，MX6，奈立膦酸盐，来那替尼，Nexavar，neovastat，尼罗替尼，尼美舒利，硝酸甘油，诺拉曲辛，诺雷林，N-乙酰半胱氨酸，06-苄基鸟嘌呤，oblimersen，奥美拉唑，oncophage，oncoVEXGM-CSF， ormiplatin，ortataxel，OX44抗体，OSI-027，OSI-906(linsitinib)，4-1BB抗体， oxantrazole，雌激素，帕尼单抗，帕土匹龙，培非尔司亭，PCK-3145，培非尔司亭，PBI-1402，PBI-05204，PDO325901，PD-1抗体，PEG-紫杉醇，白蛋白稳定的紫杉醇，PEP-005，PF-05197281，PF-05212384，PF-04691502，PHT-427， P-04，PKC412，P54，PI-88，培利替尼，培美曲塞，pentrix，哌立福辛，紫苏子醇，帕妥珠单抗，PI3K抑制剂，PI3K/mTOR抑制剂，PG-TXL，PG2，PLX-4032/RO-5185426(维罗非尼)，PLX-3603/RO-5212054，PT-100，PWT-33597， PX-866，吡铂，新戊酰氧基甲基丁酸酯，七聚维酮，苯氧二醇O，PKI166，百日咳，光辉霉素，聚赖氨酸，卟吩霉素，泼尼松，泼尼松龙，奎宁，奎奴普丁， R115777，RAF-265，雷莫司琼，雷朋精酶，RDEA-119/BAY 869766，RDEA-436，雷贝卡霉素类似物，受体酪氨酸激酶(RTK)RG-7167，RG-7304，RG-7421， RG-7321，RG 7440，根瘤菌素，rhu-MAb，林菲培，利塞膦酸，利妥昔单抗， robatumumab，罗非昔布，RO-31-7453，RO-5126766，RO-5068760，RPR 109881A，哒唑酮，红霉素，R-氟比洛芬，RX-0201，S-9788，阿霉素，SAHA，沙格司亭，赛特铂，SB 408075，Se-015/Ve-015，SU5416，SU6668，SDX-101，semustin，西奥骨化醇，SM-11355，SN-38，SN-4071，SR-27897，SR-31747，SR-13668， SRL-172，索拉非尼，螺磺铂，角蛋氨酸，异羟肟酸，索坦，T 900607，T 138067， TAK-733，TAS-103，塔奇卡因，塔卡罗胺，泰乐菌素，泰沙酮，替加氟，替莫唑胺，替沙罗芬，睾酮，睾酮丙酸酯，替米利芬，四氯铂酸，河豚毒素，替扎西平，沙利度胺，曲妥单抗，依那普利，托美标，替拉唑胺，托伐他汀，托米特雷，托米芬芬，曲马替尼，反式MID-107，视黄酸，曲妥珠单抗，曲美母单抗，维A酸，三乙酰尿苷，三氮丙啶，TLK-286TXD 258，tykerb/tyverb，urocidin，戊柔比星，瓦他拉尼，长春新碱，长春氟宁，维鲁利秦，WX-UK1，WX-554，维克替比，希罗达，XELOX，XL-147，XL-228，XL-281， XL-518/R-7420/GDC-0973，XL-765，YM-511，YM-598，ZD-4190，ZD-6474， ZD-4054，ZD-0473，ZD-6126，ZD-9331，ZD1839，ZSTK-474，zoledronat， zosuquidar及其组合。
在一个实施方式中，其它治疗剂包括类固醇，包括地塞米松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、氟羟强的松龙、倍他米松和可的伐唑。在一个实施方式中，其它治疗剂包括止吐剂，止吐剂包括但不限于5-HT3受体激动剂(例如，多拉司琼，格拉司琼，昂丹司琼，托烷司琼，帕洛诺司琼，和米氮平)，多巴胺激动剂(例如，多潘立酮，奥氮平，氟哌利多，氟哌啶醇，氯丙嗪，丙氯拉嗪，阿利必利，丙氯拉嗪和甲氧氯普胺)，NK1受体拮抗剂(例如阿瑞吡坦和卡索匹坦)，抗组胺剂(例如环嗪，苯海拉明，茶苯海明，多西拉敏，美克洛嗪，异丙嗪，羟嗪)，大麻素(例如，大麻，屈大麻酚，大麻隆和大麻酚)，苯二氮卓类(例如，咪达唑仑和劳拉西泮)，抗胆碱能药(例如，东莨菪碱)，三甲氧苯酰胺，姜，emetrol，丙泊酚，胡椒薄荷，蝇蕈醇和香辣椒。
在一个实施方式中，其它治疗剂包括抗癌剂，其包括有丝分裂抑制剂。在一个实施方式中，有丝分裂抑制剂包括紫杉烷。在一个实施方式中，有丝分裂抑制剂包括选自紫杉醇和多西紫杉醇的紫杉烷。
在一个实施方式中，药物组合物包依米立酮，例如ONC201，或其类似物，或其药学上可接受的盐；以及至少一种抗癌剂，其包括一种或多种阿维菌素，阿柔比星，阿曲达唑，阿克苏宁，阿替沙星，阿维A酸，别嘌呤醇，阿特拉津胺，昂霉素，异丙托铵，氨磷汀，氨基戊二酰亚胺，安吖啶，阿那曲唑，西酞霉素，三氧化二砷，天冬酰胺酶，阿斯匹林，阿扎胞苷，azetepa，azotomycin， batimastat，苯并碲，贝伐单抗，比卡鲁胺，bisantrene，bisnafide二甲磺酸盐，比折来新，博来霉素，布喹那，溴匹立明，白消安，仙人掌霉素，卡培他滨，卡西米汀，卡西汀，卡铂，卡莫司汀，卡比菌素，卡必利辛，塞来昔康，塞来考昔，苯丁酸氮芥，西罗莫林，顺铂，克拉屈滨，甲磺酸辛诺乐，环磷酰胺，阿糖胞苷，达卡巴嗪，放线菌素D，道诺霉素，地西他滨，地塞米松，德扎古嗪，甲磺酸德扎古宁，二氮喹，多西他赛，阿霉素，屈洛昔芬，屈他雄酮，杜唑霉素，依达曲沙明，依替舒林，依沙星，恩洛铂，霉素，埃布洛唑，依托泊苷，依托泊他汀，法多罗唑，法扎拉宾，芬维A胺，氟尿嘧啶，氟达拉滨，氟尿嘧啶，氟西他滨，氟西汀，福斯他宁，氟维他汀，吉西他滨，羟基脲，去甲氧基柔红霉素，异环磷酰胺，肌氨酸，白细胞介素II(IL-2，包括重组白介素II 或rIL2)，干扰素α-2a，干扰素α-2b，干扰素α-1，干扰素α-α3，干扰素β-1a，干扰素γ-1b，美沙酮，乙酸美伦他林，美法仑，美加莫尔，巯基嘌呤，甲氨蝶呤，美托品，meturedepa，mitindomide，mitocarcin，mitocromin，mitocromin，丝裂霉素，丝裂霉素，丝裂霉素，有丝分裂剂，米托坦，米托蒽醌，霉酚酸，奈拉滨，诺考达唑，诺卡拉霉素，奥氮平，奥昔拉胶，紫杉醇，聚乙二醇，波莫霉素，戊莫司汀，酰胺，pipobroman，piposulfan，盐酸吡罗沙酮，光辉霉素，普洛米美烷，卟吩姆，卟吩霉素，prednimustine，丙卡巴肼，嘌呤霉素，吡呋喃，咯咯嗪，罗格酰草胺，安息香酚，乌司他丁，吡拉唑，司他武，斯曲霉素，螺旋霉素，螺旋菌素，螺磺铂，佐星，苏莫尼芬，替莫唑，替莫昔芬，替莫泊芬，替尼泊苷，替尼罗酮，替托龙内酯，噻吗辛胺，硫代鸟嘌呤，硫代泰帕，噻唑呋喃，替拉巴斯胺，拓扑替康，托瑞米芬，特立立隆，曲普瑞林，曲妥珠单抗，尿嘧啶芥菜，维他泮，维必替林，长春氟宁，长春花碱，硫酸长春新碱，长春地辛，维必西汀，伏丁加林，维林西林，长春瑞滨，伏尼索啶，维佐洛西，伏罗唑，泽尼铂，泽诺他汀，唑来膦酸，佐立霉素及其组合。
合适的抗癌剂的示例包括在Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis ofTherapeutics，第12版，Laurence Brunton编辑，Bruce Chabner，Bjorn Knollman，McGrawHill Professional，2010中描述的。
在一些示例性实施方式中，药物组合物包括依米立酮例如ONC201或其类似物的盐(例如单盐或二盐)及至少一种其它治疗剂，其中其它治疗剂包括抗血管生成剂，例如贝伐单抗。在一个实施方式中，抗血管生成剂选自阿普西柏、阿西替尼、血管抑素、内皮抑制素、l6kDa催乳素片段、层粘连蛋白肽、纤连蛋白肽、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP 1、2、3、4)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1、 -2)、肿瘤坏死因子α、(高剂量、体外)、TGF-β1、干扰素(IFN-α、-β、γ)、ELR-CXC 趋化因子、IL-12；SDF-1；MIG；血小板因子4(PF-4)；IP-10、血小板反应蛋白(TSP)、SPARC、2-甲氧基雌二醇、增生素相关蛋白、苏拉明、索拉非尼、替罗非尼、沙利度胺、可的松、线粒体、烟曲霉素(AGM-1470；TNP-470)、他莫昔芬、维甲酸、CM101、地塞米松、白血病抑制因子(LIF)、hedgehog抑制剂及其组合。
药物组合可以包括任何所需比例的第一和第二治疗剂，只要仍然能发生协同或协合效应即可。协同的药物组合优选含有比率为约1:9至约9:1的第一和第二治疗剂。在一个实施方式中，协同组合含有第一和第二治疗剂的比率为约1:8 至约8:1、约1:7至约7:1、约1:6至约6:1、约1:5至约5:1、约1:4至约4:1、约1:3至约3:1、或约1:2至约2:1。在一个实施方式中，协同组合含有大致1: 1比率的治疗剂。
在一个实施方式中，第二治疗剂选自别嘌呤醇、三氧化二砷、阿扎胞苷、硼替佐米、贝伐单抗、卡培他滨、卡铂、塞来昔布、苯丁酸氮芥、氯法拉滨、阿糖胞苷、达卡巴嗪、盐酸柔红霉素、多西紫杉醇、盐酸阿霉素、氟尿苷、盐酸吉西他滨、羟基脲、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼、伊沙匹隆、来那度胺、乙酸甲地孕酮、甲氨蝶呤、米托坦、盐酸米托蒽醌、奥沙利铂、紫杉醇、普拉曲沙、罗米地辛、索拉非尼、链脲霉素、柠檬酸他莫昔芬、盐酸托泊替康、维甲酸、凡德他尼、维莫德吉、伏立诺他及其组合。
在一个实施方式中，第二治疗剂包括小分子多激酶抑制剂，例如索拉非尼或瑞戈非尼。在一个实施方式中，第二治疗剂包括Hedgehog途径抑制剂，例如维莫德吉。在一个实施方式中，第二治疗剂包括选自下表2的药物。
表2：药物类别
Figure GDA0003815927400000601
Figure GDA0003815927400000611
Figure GDA0003815927400000621
在一个实施方式中，第二治疗剂包括靶向肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体的药物。在一个实施方式中，第二治疗剂包括激活一种或多种 TRAIL受体的重组TRAIL或激动性抗体。在一个实施方式中，第二治疗剂包括一种或多种通过DR4、DR5或两者来激活信号传导的抗体或重组TRAIL。在一个实施方式中，第二治疗剂包括AMG-655、LBY-135、马帕木单抗、来沙木单抗、Apomab和rhApo2L/TRAIL中的一种或多种。在一个实施方式中，第二治疗剂包括选自下列的活性剂：喜树碱，5-FU，卡培他滨，顺铂，阿霉素，伊立替康，紫杉醇，顺铂，硼替佐米，BH3I-2，利妥昔单抗，放射线，三萜类，索拉非尼，吉西他滨，HDAC抑制剂，卡铂，T-101(棉酚衍生物)，ABT-263，ABT-737，和GX-15-070(obatoclax)，伏立诺他，西妥昔单抗，帕尼单抗，贝伐珠单抗，盖尼塔单抗，干扰素γ，索拉非尼，XIAP拮抗剂，Bcl-2拮抗剂，和Smac模拟物。
VI.剂量
在一个实施方式中，药物组合物包括依米立酮例如ONC201或其类似物，或其药学上可接受的盐，剂量范围为约40、50、60或100mg至约2000mg；约 4、6、6或10mg至约200mg；或约0.4、0.5、0.6或1mg至约20mg其中重量可以以其游离碱形式的化合物为基础。在一个实施方式中，药物组合物包含依米立酮例如ONC201或其类似物，或其药学上可接受的盐，剂量范围为约50mg 至约200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、 1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000mg；从约5mg至约20、30、40、 50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190 和200mg；或约0.5mg至约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19以及20mg。在一个实施方式中，药物组合物包括依米立酮例如ONC201或其类似物，或其药学上可接受的盐，剂量范围为约40mg至约 200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000mg；从约4mg至约20、30、40、50、 60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200mg；或约0.4mg至约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19以及20mg。在一个实施方式中，药物组合物包含依米立酮例如ONC201 或其类似物，或其药学上可接受的盐，剂量范围为约60mg至约200、300、400、 500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、 1800、1900或2000mg；约6mg至约20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200mg；或约0.6mg至约2、 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg。在一个实施方式中，药物组合物包含依米立酮例如ONC201或其类似物，或其药学上可接受的盐，剂量范围为约100mg至约200、300、400、500、600、700、 800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900mg 或2000mg；从约10至约20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、 130、140、150、160、170、180、190或200mg；或约1mg至约2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg。在一个实施方式中、药物组合物包含依米立酮例如ONC201或其类似物，或其药学上可接受的盐，剂量范围为约200mg至约300、400、500，600、700、800、900、1000、 1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000mg；约20mg 至约30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、 180、190或200mg；或约2mg至约3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19或20mg，基于化合物在它的自由基础形式。在一个实施方式中，药物组合物包含依米立酮例如ONC201或其类似物，或其药学上可接受的盐，剂量范围为约400mg至约500、600、700，800、900、1000、1100、 1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000mg；约40mg至约 50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190 或200mg；或约4mg至约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19或20mg，基于游离碱形式的化合物。在一个实施方式中，药物组合物包含依米立酮例如ONC201或其类似物或其药学上可接受的盐，剂量范围为约 50mg至约60、70、80、90或100mg；约60mg至约70、80、90或100mg；从约70mg至约80、90或100mg，约80mg至约90或100mg；从约90毫克到约100毫克；从约5mg至约6、7、8、9或10mg；约6mg至约7、8、9或10mg；约7mg至约8、9或10mg，约8mg至约9mg或10mg；约9mg至约10mg；从约0.5mg至约0.6、0.7、0.8、0.9或1mg；约0.6mg至约0.7、0.8、0.9或1mg；约0.7mg至约0.8、0.9或1mg，约0.8mg至约0.9或1mg；或约0.9mg至约1mg。
在一个实施方式中，药物组合物包含依米立酮例如ONC201或其类似物，或其药学上可接受的盐，剂量范围为约1mg/kg至约40mg/kg；0.1mg/kg至约 4mg/kg；或0.01mg/kg至约0.40mg/kg。在一个实施方式中，药物组合物包括依米立酮例如ONC201或其类似物，或其药学上可接受的盐，约1、2、3、4、5、 6、7、8或9mg/kg至约10、20、30或40mg/kg；约10、11、12、13、14、15、 16、17、18或19mg/kg至约20、30或40mg/kg；约20、21、22、23、24、25、 26、27、28或29mg/kg至约30或40mg/kg；约30、31、32、33、34、35、36、 37、38或39mg/kg至约40mg/kg；约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8或 0.9mg/kg至约1、2、3或4mg/kg；约1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、 1.8或1.9mg/kg至约2、3或4mg/kg；从约2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、 2.7、2.8或2.9mg/kg至约3或4mg/kg；或从约3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、 3.6、3.7、3.8或3.9mg/kg至约4mg/kg；约0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、 0.07、0.08、0.09mg/kg至约0.10、0.20、0.30或0.40mg/kg；约0.10、0.11、0.12、 0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18或0.19mg/kg至约0.20、0.30或0.40mg/kg；约0.20、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26，0.27、0.28或0.29mg/kg至约0.30 或0.40mg/kg；或约0.30mg/kg约0.30、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、 0.38或0.39mg/kg至约0.40mg/kg。
在一个实施方式中，药物组合物包含依米立酮例如ONC201、或其类似物、或其药学上可接受的盐，剂量范围从约37.5mg/m2至约1500mg/m2、从约 3.75mg/m2至约150mg/m2、或从约0.4mg/m2至约15mg/m2。在一个实施方式中，药物组合物包含依米立酮例如ONC201、或其类似物、或其药学上可接受的盐，剂量范围从约40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、 110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、 180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、 250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、 390、395、400、405、410、415、420、425、430、435、440、445、450、455、 460、465、470、475、480、485、490、495、500、505、510、515、520、525、 530、535、540、545、550、555、560、565、570、575、580、585、590、595、 600、605、610、615、620、625、630、635、640、645、650、655、660、665、 670、675、680、685、690、695、700、705、710、715、720、725、730、735、 740、745、750、755、760、765、770、775、780、785、790、795、800、805、 810、815、820、825、830、835、840、845、850、855、860、865、870、875、 880、885、890、895、900、905、910、915、920、925、930、935、940、945、 950、955、960、965、970、975、980、985、990、995、1000、1005、1010、 1015、1020、1025、1030、1035、1040、1045、1050、1055、1060、1065、1070、 1075、1080、1085、1090、1095、1100、1105、1110、1115、1120、1125、1130、 1135、1140、1145、1150、1155、1160、1165、1170、1175、1180、1185、1190、 1195、1200、1205、1210、1215、1220、1225、1230、1235、1240、1245、1250、 1255、1260、1265、1270、1275、1280、1285、1290、1295、1300、1305、1310、 1315、1320、1325、1330、1335、1340、1345、1350、1355、1360、1365、1370、 1375、1380、1385、1390、1395、1400、1405、1410、1415、1420、1425、1430、 1435、1440、1445、1450、1455、1460、1465、1470、1475、1480、1485、1490、 1495mg/m2至约1500mg/m2；从约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、 32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、 49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、 66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、 83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、 100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、 114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、 128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、 142、143、144、145、146、147、148或149mg/m2至约150mg/m2；或从约0.5、 1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、 10.5、11、111、11.5、12、12.5、13、13.5、14或14.5mg/m2至约15mg/m2。
VII.剂型
用于本文所述方法中的合适的药物组合物可以配制成可施用于患者的剂型。在一个实施方式中，药物组合物是口服剂量单位或肠外剂量单位的形式。在一个实施方式中，药物组合物是口服剂量单位的形式。在一个实施方式中，将口服剂量单位分为几个较小的剂量，在预定时间段内施用于受试者以减轻所施用的治疗剂的毒性。在一个实施方式中，口服剂量单位通过包含控释制剂的片剂或胶囊施用，其可以包含许多粒子、颗粒、丸粒、微型片或片。在一个实施方式中，药物组合物是肠外剂量单位的形式。在一个实施方式中，胃肠外剂量单位是选自由静脉(IV)、皮下(SC)、肌肉(M)、直肠(PR)和透皮剂量单位组成的组。在一个实施方式中，所述组合物是选自由无菌溶液、悬液、栓剂、片剂和胶囊组成的组中的剂型。在一个实施方式中，所述组合物是选自由片剂、囊片、胶囊、锭剂、糖浆、液体、悬液和酏剂组成的组中的口服剂型。在一个实施方式中，所述组合物是选自由片剂、硬壳胶囊、软明胶胶囊、珠粒、颗粒、集合体、粉末、凝胶、固体和半固体组成的组中的口服剂型。
在一个实施方式中，用于本文所述方法的合适的药物组合物形式包括适于皮肤局部施用的皮肤病学组合物。例如，皮肤病学组合物包含可化妆品用或药学上可接受的载体。用于局部施用的皮肤病学组合物可包括软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。在一个实施方式中，常规的药物载体，水性、粉末或油性基质、增稠剂、皮肤增强剂可能是必需的或合乎需要的并因此被使用。合适的增强剂的示例包括醚类，例如二乙二醇单乙醚(可作为
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商购)和二乙二醇单甲醚；表面活性剂，例如月桂酸钠、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、泊洛沙姆(231，182，184)、吐温(20，40，60，80)和卵磷脂(美国专利4,783,450)；醇，例如乙醇、丙醇、辛醇、苯甲醇；聚乙二醇及其酯，例如聚乙二醇单月桂酸酯；酰胺和其它含氮化合物，例如脲、二甲基乙酰胺(DMA)、二甲基甲酰胺(DMF)、2-吡咯烷酮、 1-甲基-2-吡咯烷酮、乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺；萜烯；链烷酮；和有机酸，特别是柠檬酸和琥珀酸。也可以使用
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和亚砜例如DMSO和Cι0MSO，但不太优选。
在一个实施方式中，药物组合物是选自由持续释放形式、控制释放形式、延迟释放形式和响应释放形式组成的组中的剂型。
VIII.使用方法
本文所述的组合物和方法在治疗许多疾病、包括癌症(例如结肠直肠癌、脑癌和胶质母细胞瘤)中具有效用。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如下列的疾病：眼黑素瘤，促结缔组织增生性圆形细胞瘤，软骨肉瘤，软脑膜病，弥漫性大B细胞淋巴瘤，急性淋巴细胞白血病，急性髓性白血病，肾上腺皮质癌，AIDS相关癌症，AIDS相关淋巴瘤，肛门或直肠癌，阑尾癌，星形细胞瘤，和非典型畸胎样/横纹肌样瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如下列的疾病：基底细胞癌，基底细胞痣综合征，Gorlin痣综合征，胆管癌，膀胱癌，骨癌，骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤，脑肿瘤，乳腺癌，支气管肿瘤，伯基特(Burkitt)淋巴瘤，和脊髓肿瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如下列的疾病：类癌肿瘤，未知原发癌，中枢神经系统非典型畸胎样/横纹肌样瘤，软脑膜病，中枢神经系统胚胎肿瘤，中枢神经系统淋巴瘤，宫颈癌，脊索瘤，慢性淋巴细胞白血病，慢性粒细胞白血病，慢性骨髓增生性疾病，结肠癌，结肠直肠癌，颅咽管瘤，和皮肤T细胞淋巴瘤(包括Sezary综合征和蕈样肉芽肿病(MF))。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如下列的疾病：中枢神经系统的胚胎肿瘤，子宫内膜癌，室管膜母细胞瘤，室管膜瘤，食道癌，尤文氏肉瘤肿瘤家族，颅外生殖细胞肿瘤，性腺外生殖细胞肿瘤，肝外胆管癌，和眼癌，包括眼内黑色素瘤和视网膜母细胞瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如下列的疾病：胆囊癌，胃癌，胃肠道类癌肿瘤，胃肠道间质肿瘤(GIST)，生殖细胞肿瘤，妊娠滋养层肿瘤，和神经胶质瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗选自由毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞(肝)癌、组织细胞增生症、霍奇金淋巴瘤和下咽癌组成的组中的癌症。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如卡波西肉瘤(Kaposi Sarcoma)和肾(肾细胞)癌的疾病。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如下列的疾病：朗格罕细胞组织细胞增生症，喉癌，唇和口腔癌，肝癌，肺癌，包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌，非霍奇金淋巴瘤的疾病，和原发性中枢神经系统淋巴瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如下列的疾病：华氏
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巨球蛋白血症(淋巴浆细胞性淋巴瘤)，骨的恶性纤维组织细胞瘤和骨肉瘤，髓母细胞瘤，髓质上皮瘤，黑素瘤，Merkel细胞癌，间皮瘤，具有隐匿性原发性的转移性颈鳞癌，多发性内分泌肿瘤形成综合征，口腔癌，多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤，蕈样肉芽肿病，骨髓增生异常综合征，复杂核型急变期白血病，骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤，多发性骨髓瘤，和骨髓增生性疾病。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗癌症。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌和神经母细胞瘤的疾病。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如下列的疾病：口腔癌，唇和口腔癌，口咽癌，骨肉瘤和骨恶性纤维组织细胞瘤，卵巢癌，卵巢生殖细胞肿瘤，卵巢上皮癌，和卵巢低度恶性潜能肿瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗诸如下列的疾病：胰腺癌，乳头状瘤，鼻窦和鼻腔癌，甲状旁腺癌，阴茎癌，咽癌，中分化的松果体实质肿瘤，松果体母细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤，垂体瘤，胸膜肺母细胞瘤，妊娠和乳腺癌，原发性中枢神经系统淋巴瘤，和前列腺癌。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗选自由下列组成的组中的癌症：直肠癌，肾细胞(肾)癌，肾盂和输尿管癌，涉及15号染色体上的NUT基因的呼吸道癌，视网膜母细胞瘤，和横纹肌肉瘤。在一个实施方式中，本文所述组合物和方法用于治疗高级别前列腺癌。在一个实施方式中，本文所述组合物和方法用于治疗中级别前列腺癌。在一个实施方式中，本文所述组合物和方法用于治疗低级别前列腺癌。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗去势难治性前列腺癌。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗神经系统肿瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗中枢神经系统肿瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗周围神经系统肿瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗副神经节瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗嗜铬细胞瘤。
在体外模型、动物模型和人类临床试验中，化合物(1)(ONC201)具有广泛的抗癌活性，低毒性，包括很少的不良效应(如果有的话)，低基因毒性，以及高生物利用度，包括口服生物利用度。这些特征使ONC 201和各种类似物特别好地适用于小儿患者。这些特征还使ONC 201和各种类似物特别好地适用于长期治疗、高风险患者、并确保持久的响应或稳定的疾病或预防疾病复发。
在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗小儿癌症(例如，小儿实体瘤，小儿肉瘤，小儿尤文氏肉瘤，小儿神经胶质瘤，小儿中枢神经系统癌症，小儿神经母细胞瘤，小儿白血病和小儿淋巴瘤)。
在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗增殖性皮肤病，例如牛皮癣。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗选自由下列组成的组中的癌症：唾液腺癌，肉瘤，Sézary综合征，皮肤癌，眼癌，皮肤癌瘤，小肠癌，软组织肉瘤，鳞状细胞癌，具有隐匿性原发性的颈鳞癌，和幕上原始神经外胚层肿瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗选自由下列组成的组中的癌症：T细胞淋巴瘤，睾丸癌，咽喉癌，胸腺瘤和胸腺癌，甲状腺癌，肾盂和输尿管的移行细胞癌，和妊娠滋养层肿瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗选自由下列组成的组中的癌症：未知原发部位癌瘤，未知原发部位癌，儿童异常癌，肾盂和输尿管的移行细胞癌癌，尿道癌和子宫肉瘤。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗选自由阴道癌和外阴癌组成的组中的癌症。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用于治疗选自由Wilms肿瘤和女性癌症组成的组中的癌症。
在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用作一线疗法(有时称为一级疗法)。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用作二线疗法。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用作三线疗法。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用作挽救疗法。术语“救助疗法”是指在受试者的初始治疗方案已经失败之后或在受试者的病症对初始治疗没有响应之后可以用任何方案采用的治疗剂。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用作拯救疗法。在拯救疗法的一个实施方式中，所述组合物用作拯救剂以抵消初始治疗的作用。在拯救疗法的一个实施方式中，所述组合物用作拯救剂，施用于已经对标准或初始治疗产生抗性的受试者在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用作新辅助疗法。在一个实施方式中，新辅助疗法包含在主要或一线治疗之前向受试者施用一种或多种本文所述的治疗剂。在一个实施方式中，在对接受治疗的受试者施用主要或一线治疗之前，所述新辅助治疗减低了所治疗的癌症的尺寸或程度。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法用作辅助疗法。在一个实施方式中，辅助疗法包括向受试者施用一种或多种本文所述的治疗剂，其中所述一种或多种治疗剂改变已经施用于受试者或同时施用于受试者或随后施用于受试者的其它治疗剂的效应。
在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法表现出降低药物-药物相互作用机率。在一个实施方式中，依米立酮例如ONC201，或其类似物，在可以与另一种药物活性剂相互作用之前，从患者体内消除。
在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法表现出便于与其它药物剂组合的毒性水平。
本文所述的方法和组合物不限于特定的动物物种。在一个实施方式中，根据本文所述的方法和使用本文所述的组合物治疗的受试者可以是哺乳动物或非哺乳动物。在一个实施方式中，哺乳动物受试者的哺乳动物包括但不限于人类；非人灵长类动物；啮齿动物如小鼠、大鼠或豚鼠；家养宠物如猫或狗；马，牛，猪，绵羊，山羊，或兔子。在一个实施方式中，非哺乳动物受试者包括但不限于诸如鸭、鹅、鸡或火鸡的鸟。在一个实施方式中，受试者是人类。在一个实施方式中，受试者可以是任一种性别和任何年龄。所述组合物和方法也可用于预防癌症。所述组合物和方法也可用于刺激免疫系统。
本文所述的方法和组合物不限于特定的受试者年龄。在一个实施方式中，根据本文所述的方法和使用本文所述的组合物治疗的受试者年龄超过50岁，年龄超过55岁，年龄超过60岁，或年龄超过65岁。在一个实施方式中，根据本文所述的方法和使用本文所述的组合物治疗的受试者年龄低于50岁，年龄低于 55岁，年龄低于60岁，或年龄低于65岁。
在一个实施方式中，根据本文所述的方法和使用本文所述的组合物治疗的受试者是小儿患者。在一个实施方式中，小儿患者年龄小于18岁，年龄小于17 岁，年龄小于16岁，年龄小于15岁，年龄小于14岁，年龄小于13岁，年龄小于12岁，年龄小于11岁，年龄小于10岁，年龄小于9岁，年龄小于8岁，年龄小于7岁，年龄小于6岁，年龄小于5岁，年龄小于4岁，年龄小于3岁，年龄2岁以下，年龄小于1岁。在一个实施方式中，小儿患者小于12月龄，小于11月龄，小于10月龄，小于9月龄，小于8月龄，小于7月龄，小于6月龄，小于5月龄，小于4月龄，小于3月龄，小于2月龄，小于1月龄。在一个实施方式中，小儿患者小于4周龄，小于3周龄，小于2周龄，小于1周龄。在一个实施方式中，小儿患者小于7日龄，小于6日龄，小于5日龄，小于4 日龄，小于3日龄，小于2日龄，或小于1日龄。在一个实施方式中，小儿患者是新生儿。在一个实施方式中，小儿患者是早产儿。
在一个实施方式中，患者体重小于45kg，体重小于40kg，体重小于35kg，体重小于30kg，体重小于25kg，体重小于20kg，体重小于15kg，体重小于 14kg，体重小于10kg，体重小于5kg，体重小于4kg，体重小于3kg，体重小于2kg，或体重小于1kg。
在一个实施方式中，受试者已接受至少一种在先治疗剂。在一个实施方式中，受试者已接受至少两种、至少三种或至少四种在先治疗剂。在一个实施方式中，在先治疗剂是依鲁替尼、硼替佐米、卡非佐米、替莫唑胺、贝伐珠单抗、环磷酰胺、羟基柔红霉素、长春新碱、泼尼松、阿糖胞苷、顺铂、利妥昔单抗、 5-氟尿嘧啶、奥沙利铂、亚叶酸或来那度胺。
在一个实施方式中，受试者已用放射疗法。在一个实施方式中，受试者已用手术治疗。在一个实施方式中，受试者已用过继性T细胞疗法治疗。
在一个实施方式中，癌症不再对用依鲁替尼、硼替佐米、卡非佐米、替莫唑胺、贝伐珠单抗、环磷酰胺、羟基柔红霉素、长春新碱、泼尼松、阿糖胞苷、顺铂、利妥昔单抗、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂、亚叶酸、来那度胺、放射、手术或其组合治疗有响应。
在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法在癌细胞中的剂量响应关系不同于在正常细胞中该相同组合物和方法的剂量响应关系。ONC201在正常细胞和肿瘤细胞中对增殖和细胞死亡的剂量响应关系通过用各种浓度的ONC201处理72小时后测量细胞存活率来确定。测试的肿瘤包括人结肠癌细胞系 (HCT116)、乳腺肿瘤细胞系(MDA-MB-231)和人原代胶质母细胞瘤细胞系 (U87)。并且测试的正常细胞包括人包皮成纤维细胞(HFF)、人胎儿肺成纤维细胞(MRC-5)细胞和人肺成纤维细胞系(WI-38)。阿霉素以1μg/mL用作正常成纤维细胞中的阳性对照。所测试的正常细胞的细胞存活率在约1-5mg/mL ONC201时为至少约75％，而在相同ONC201浓度下肿瘤细胞的存活率显著较低(例如等于或低于50％)。此外，随着ONC201浓度增加超过约5mg/mL，肿瘤细胞的存活率降至低于25％，而正常细胞的存活率保持在约75％。人胎儿肺成纤维细胞(MRC-5)细胞中的细胞存活率测定在用化合物(1)(5μM)或DMSO 处理72小时进行并在处理后在完全无药物的培养基中的恢复时段后进行。用ONC201看到细胞恢复，但用DMSO则看不到。
在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法在治疗受试者的癌症中具有效用。在一个实施方式中，本文所述的组合物和方法在治疗人类受试者的癌症中具有效用。在一个实施方式中，治疗方法包括给需要这种治疗的受试者施用药学有效量的依米立酮，例如ONC201，或其类似物，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
在一个实施方式中，治疗方法包括给需要这种治疗的受试者施用：(i)第一治疗剂，包括依米立酮例如ONC201、或其类似物、或其药学上可接受的盐与(ii) 第二治疗剂的组合，其中第一和第二治疗剂同时或依次施用。第二治疗剂可以是任何合适的治疗剂，包括本文公开的任何药物活性剂。药学上可接受的 ONC201盐包括下面的二盐酸盐：
Figure GDA0003815927400000721
应理解，ONC201或其类似物(包括式(10)的化合物)的二盐酸盐、或其从本公开的教导中显而易见的可选二盐，可以在本文所述的组合物或施用方案中替代ONC201或其类似物。
在一个实施方式中，治疗方法包括同时或依次向需要这种治疗的受试者施用协同药物组合，其中所述协同药物组合包含：(i)第一治疗剂，其包含依米立酮例如ONC201、或其类似物、或其药学上可接受的盐；和(ii)第二治疗剂。在一个实施方式中，治疗方法包括同时或依次向需要这种治疗的受试者施用治疗协同有效量的第一治疗剂与第二治疗剂的组合。在一个实施方式中，治疗方法包括同时或依次向需要这种治疗的受试者施用有效量的第一治疗剂与有效量的第二治疗剂的组合，其中所述组合在体内治疗对所述组合敏感的癌症中提供协同效应，并且其中所述第一和第二治疗剂同时或依次施用。在一个实施方式中，治疗方法包括向需要这种治疗的受试者施用有效量的第一治疗剂与有效量的第二治疗剂的组合，其中所述组合在体内治疗对所述组合敏感的微小残留病中提供协同效应，并且其中所述第一和第二治疗剂同时或依次施用。在一个实施方式中，第二种治疗剂在第一种治疗剂之前或先前给予。
在一个实施方式中，治疗方法靶向选自由实性肿瘤、液体肿瘤、淋巴瘤，白血病或骨髓瘤组成的组中的癌症。
在一个实施方式中，治疗方法靶向实体瘤，其中实体瘤选自：子宫颈癌，子宫内膜癌，颅外生殖细胞肿瘤；外生殖细胞肿瘤生殖细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤；卵巢癌，卵巢生殖细胞肿瘤，卵巢上皮癌和卵巢恶性恶性肿瘤；阴茎癌，前列腺癌；妊娠和乳腺癌高级前列腺癌；载体级前列腺癌；低级前列腺癌；去势抗前列腺癌；乳腺癌；胆管癌；肝外胆管癌；胆囊癌肝细胞癌(肝癌)肾脏(肾细胞)癌症；肝癌，肾细胞(肾)癌，肾盂和输尿管；基底细胞癌；基底细胞痣综合征，Gorlin-Nevus综合征，黑素瘤，Merkel细胞癌，乳头状瘤病，多发性内分泌肿瘤综合征；胰腺癌，甲状旁腺癌，眼黑素瘤；眼癌；视网膜母细胞瘤；恶性纤维组织细胞瘤尤文肉瘤家族肿瘤；去纤维性圆细胞肿瘤；软骨肉瘤，卡波西肉瘤，横纹肌肉瘤；脊髓肿瘤，脑膜炎，中枢神经系统胚胎肿瘤，脊索瘤，中枢神经系统胚胎肿瘤，内皮母细胞瘤，室管膜瘤，神经母细胞瘤；中间分化松果体实质性肿瘤，松果体细胞瘤；肾上腺皮质癌；骨癌，骨肉瘤骨和骨肉瘤的恶性纤维组织细胞瘤；骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤骨；类癌肿瘤，未知原发癌，支气管肿瘤，肺癌，胸膜肺泡肿瘤；NUT基因涉及15号染色体上的呼吸道癌，星形细胞瘤，非典型畸胎瘤/横纹肌瘤；中枢神经系统非典型畸胎瘤/横纹肌肿瘤，颅咽管瘤，神经胶质瘤，脑癌，成神经管细胞瘤，髓性上皮瘤，上皮原始神经外胚层肿瘤；垂体肿瘤胃癌(胃)，胃肠类癌，胃肠道间质肿瘤(GIST)，膀胱癌，肛门直肠癌，附件癌症，食道癌，下咽癌；喉癌，唇部和口腔癌，转移性鳞状细胞癌与隐匿性原发性，口腔癌，鼻腔和鼻旁窦癌，鼻咽癌，口腔癌，口腔和口腔癌，口咽癌，鼻旁窦和鼻腔癌，咽癌症；头颈癌和间皮瘤。
在一个实施方式中，治疗方法靶向淋巴瘤选自：弥漫性大细胞淋巴瘤，AIDS 相关性淋巴瘤，皮肤T细胞淋巴瘤，Sezary综合征，蕈样肉芽肿(MF)；组织细胞增生症；伯基特淋巴瘤和中枢神经系统淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤，原发性中枢神经系统淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，
Figure GDA0003815927400000741
巨球蛋白血症；真菌病真菌原发性中枢神经系统淋巴瘤；淋巴浆细胞淋巴瘤和原发性中枢神经系统淋巴瘤。
在一个实施方式中，治疗方法靶向一个非霍奇金淋巴瘤(NHL)选自：mantle 细胞淋巴瘤，弥漫性大细胞淋巴瘤，滤泡淋巴瘤，边缘区淋巴瘤，小淋巴细胞淋巴瘤，淋巴细胞淋巴瘤NHL，Waldenstrom巨球蛋白血症和皮肤淋巴瘤。
在一个实施方式中，治疗方法靶向白血病选自：急性淋巴细胞性白血病 (ALL)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，慢性骨髓增生性疾病；毛细胞白血病急性骨髓性白血病(AML)；慢性骨髓性白血病(CML)；和朗格汉斯细胞组织细胞增多症。
在一个实施方式中，治疗方法靶向急性白血病选自：急性淋巴细胞白血病，急性骨髓性白血病，慢性淋巴细胞白血病，慢性骨髓性白血病，骨髓增生异常综合征和骨髓增生性疾病。
在一个实施方式中，治疗方法靶向选自由下列组成的组中的骨髓瘤：IgA骨髓瘤；IgG骨髓瘤；IgM骨髓瘤；IgD骨髓瘤；IgE骨髓瘤；轻链骨髓瘤；非分泌性骨髓瘤；复杂核型、急变期白血病；多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤，多发性骨髓瘤，骨髓增生异常综合征，骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤，和骨髓增生性疾病。
在一个实施方式中，治疗方法靶向周围神经系统肿瘤。在一个实施方式中，治疗方法靶向副神经节瘤。在一个实施方式中，治疗方法靶向嗜铬细胞瘤。
在一个实施方式中，癌症的治疗包括预防癌症受试者中的肿瘤生长。在一个实施方式中，癌症的治疗包括预防癌症受试者中的癌症转移形成。在一个实施方式中，癌症的治疗包括靶向治疗已知在癌症中有微小残留病的癌症受试者或有微小残留病风险的受试者中的微小残留病。
这可能是在通过手术治疗原发性肿瘤之后和/或在化学疗法(放射疗法)已经开始或确定为有效之后表明的。播散的肿瘤细胞可能处于它们的休眠状态，并且往往不能被化学疗法(放射疗法)攻击。这样治疗的患者似乎处于治愈状态，并被称为“微小残留病”。然而，如果休眠的肿瘤细胞在较长的休眠状态后由于生长刺激而变成转移性细胞，则它们具有形成转移瘤的潜能。
术语“微小残留病”表示在治疗期间或之后当受试者处于缓解(没有表现出疾病的症状或体征)时所述受试者内残留的少量癌细胞。本文描述的方法优选应用于本文列出的疾病形式，包括这些疾病的成人和儿童形式。
在一个实施方式中，治疗方法可用于治疗自身免疫性疾病。自身免疫性疾病包括但不限于斑秃，抗磷脂，自身免疫性肝病，乳糜泻，1型糖尿病，格雷夫斯病，格林巴利综合征，桥本病，溶血性贫血，特发性血小板减少性紫癜，炎性肠病，炎症性肌病，多发性硬化，原发性胆汁性肝硬化，牛皮癣，类风湿性关节炎，硬皮病，
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综合征，系统性红斑狼疮和白癜风。
在一个实施方式中，治疗方法可用于治疗诸如肌萎缩性侧索硬化(Lou Gehrig'sdisease)等周围神经系统的自身免疫性和炎症性疾病，其基于各种原因，例如包括糖尿病，B12和叶酸维生素缺乏症的代谢紊乱，用于治疗艾滋病毒的化疗药物和药物，引起周围神经损伤的毒物，发展周围神经病变的癌症，副肿瘤综合征，酒精滥用，慢性肾脏疾病，引起神经和其它病变压迫的损伤，诸如莱姆病，吉兰巴利综合征，结缔组织病，类风湿关节炎，干燥综合征，系统性红斑狼疮，某些炎性病症如结节病，乳糜泻，遗传性疾病如charcot marie牙综合征，Friedreich's共济失调和/或特发性其中没有发现具体原因但炎症和/或自身免疫机制是发病的原因。
在一个实施方式中，治疗方法可用于治疗具有眼部表现的自身免疫性和炎症性疾病。这种眼部表现包括但不限于眼睛瘢痕性类天疱疮，莫伦角膜溃疡，各种形式的葡萄膜炎，类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮，结节性多动脉炎，复发性多软骨炎，韦格纳肉芽肿病，硬皮病，贝切特氏病，赖特氏病，炎性肠病(溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)和强直性脊柱炎，色素性视网膜炎，黄斑变性，角膜结膜炎，巩膜炎，巩膜旁炎，角膜炎，外周角膜溃疡，以及较不常见的实体，如脉络膜炎，视网膜血管炎，巩膜结节，视网膜脱离和/或黄斑水肿。
在一个实施方式中，治疗方法可用于治疗移植患者的急性同种异体移植排斥反应。在一个实施方式中，治疗方法可用于治疗缺血性卒中。在一个实施方式中，治疗方法对于治疗炎性疾病有用，包括关节炎，牛皮癣，哮喘和结肠炎。
在一个实施方式中，治疗剂包括ONC201或其类似物(例如式(10)的化合物)的药学上可接受的单盐。在一个实施方式中，治疗剂包括ONC201或其类似物(例如式(10)的化合物)的药学上可接受的二盐。如本文所述，一些类似物可以是三盐在一个实施方式中，治疗剂包括ONC201或其类似物(例如，式(10)的化合物)，以药学上可接受的形式的单盐或二盐选盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸氢盐，硫酸盐，磷酸盐，富马酸盐，琥珀酸盐，草酸盐和乳酸盐，硫酸氢盐，羟基，酒石酸盐，硝酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，碳酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，富马酸盐磺酸盐，甲基磺酸盐，甲酸盐，乙酸盐和羧基。在一个实施方式中，治疗剂包括ONC201或其类似物，其形式为药学上可接受的选自对甲苯磺酸盐，苯磺酸盐，甲磺酸盐，草酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，富马酸盐和马来酸盐。在一个实施方式中，治疗剂包括ONC201或其类似物，形式为药学上可接受的具有抗衡离子的一盐或二盐选自铵，钠，钾，钙，镁，锌，锂，和/或与抗衡离子如甲氨基，二甲氨基，二乙基氨基，三乙基氨基抗衡离子及其组合。在一个实施方式中，治疗剂包括本文所述的卤化物形式的化合物二盐，如二盐酸盐或二氢溴酸盐。
在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括抗癌剂。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂选自阿维菌素，阿柔比星，阿曲达唑，阿克苏宁，阿司匹林，阿尔德白介素，依维菌素，别嘌呤醇，阿特拉津胺，环霉素，异丙肾上腺素，氨磷汀，氨基戊二酰亚胺，阿那曲唑，安氏霉素，三氧化二砷，天冬酰胺酶，阿斯利林，阿扎胞苷，azetepa，azotomycin，巴马司他，苯并葡萄糖，贝伐单抗，比卡鲁胺，bisantrene，二甲磺酸双奈法德，比折来新，博来霉素，布喹那，溴匹立明，白消安，仙人掌霉素，卡培他，卡培他滨，卡铂，卡莫司汀，卡比菌素，卡奈司定，卡非司林，塞来昔布，苯丁酸氮芥，西罗莫林，顺铂，克拉屈滨，甲磺酸辛诺乐，环磷酰胺，阿糖胞苷，达卡巴嗪，放线菌素D，道诺霉素，地西他滨，地塞米松，脱氮鸟嘌呤，甲磺酸德扎古宁，二氮喹，多西他赛，阿霉素，屈洛昔芬，二溴吗啉酮，杜唑霉素，依达曲沙明，依替舒林，依沙星，顺铂，依托泊苷，依托泊他汀，依替唑，依托泊苷，依托泊汀，法多唑，法氮芥，芬维A胺，氟尿嘧啶，氟达拉滨，氟尿嘧啶，氟西他滨，氟西汀，福斯特林，氟维司群，吉西他滨，羟基脲，去甲氧基柔红霉素，异环磷酰胺，肌氨酸，白介素II(IL-2，包括重组白细胞介素II或rIL2)，干扰素α-2a，干扰素α-2b，干扰素α-α1，干扰素α-α3，干扰素β-1a，咪达唑仑，咪达唑仑，美罗培南，美加莫尔，美加莫尔，巯基嘌呤，甲氨蝶呤，美托品，meturedepa，米莫地米，米托品，美托品，丝裂霉素，丝裂霉素，丝裂霉素，丝裂霉素，丝裂霉素，mitosper，米托坦，米托蒽醌，霉酚酸，奈拉滨，诺考达唑，诺卡拉霉素，奥氮平，奥昔康脲，紫杉醇，pegaspargase，普罗霉素，普罗莫司胺，pipobroman， piposulfan，盐酸吡罗沙酮，光辉霉素，普洛米美烷，卟吩姆，porfimromycin， prednimustine，丙卡巴肼，嘌呤霉素，吡呋啉，riboprine，rogletimide，safingol， semustine，simtrazene，sparsosycin，sparsomycin，spirogermanium，spiromustine，链脲霉素，sulofenur，替比霉素，他莫昔芬，替加兰，替加氟，替托他芬，替莫泊芬，替尼泊苷，teroxirone，testolactone，thiamiprine，硫代鸟嘌呤，thiotepa，噻唑呋喃，替拉巴斯胺，拓扑替康，托瑞米芬，trestolone，维生素B，维生素B，维林内酯，维生素B，维必西宁，维佐洛西，维佐洛尔，泽尼铂，唑诺他汀，唑来膦酸，佐立霉素及其组合。
在治疗方法的一些实施方式中，第二治疗剂选自激素类似物和抗激素，芳香酶抑制剂，LHRH激动剂和拮抗剂，生长因子抑制剂，生长因子抗体，生长因子受体抗体，酪氨酸激酶抑制剂；抗代谢产物；抗肿瘤抗生素；铂衍生物；烷基化剂；抗有丝分裂剂S；微管蛋白抑制剂；PARP抑制剂，拓扑异构酶抑制剂，丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂，蛋白-蛋白相互作用抑制剂， MEK抑制剂，ERK抑制剂，IGF-1R抑制剂，ErbB受体抑制剂，雷帕金霉素类似物，阿米福汀，阿那格雷，氯膦酸盐，非尔司亭，干扰素，干扰素α，亚叶酸，利妥昔单抗，丙卡巴肼，左旋咪唑，美司那，米托坦，帕米膦酸盐和卟吩姆，阿米福汀，阿那格雷，氯膦酸盐，非尔司亭，干扰素，干扰素α，亚叶酸，利妥昔单抗，丙卡巴肼，左旋咪唑，美司那，米托坦，帕米膦酸盐和卟吩姆，及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂选自2-氯脱氧腺苷，2-氟脱氧胞苷，2-甲氧基雌二醇，2C4,3-alethine，131-1-TM-601，3CPA，7-乙基-10- 羟基喜树碱，16-氮杂-埃博霉素B，A 105972，A 204197，阿比特龙，阿地白介素，阿维A酸，allovectin-7，六甲蜜胺，alvocidib，氨萘非特，蒽吡唑，AG-2037， AP-5280，apaziquone，apomine，aranose，arglabin，阿佐昔芬，阿他美坦，阿曲生坦，auristatin PE，ABT-199(Venetoclax)，ABT-263(Navitoclax)，AVLB， AZ10992，ABX-EGF，AMG-479(加尼妥单抗)，ARRY 162，ARRY 438162，ARRY-300，ARRY-142886/AZD-6244(司美替尼)，ARRY-704/AZD-8330，AR-12， AR-42，AS-703988，AXL-1717，AZD-8055，AZD-5363，AZD-6244，ARQ-736，ARQ 680，AS-703026(primasertib)，阿瓦斯汀，AZD-2014，阿扎胞苷，伊沙匹隆B，azonafide，BAY-43-9006，BAY 80-6946，BBR-3464，BBR-3576，贝伐单抗，BEZ-235，比立考达二柠檬酸盐，BCX-1777，BKM-120，布可菌素，BLP-25， BMS-184476，BMS-247550，BMS-188797，BMS-275291，BMS-663513， BMS-754807，BNP-1350，BNP-7787，BIBW 2992(阿法替尼，妥复克)，BIBF 1120(vargatef)，BI 836845，BI 2536，BI 6727，BI 836845，BI 847325，BI 853520， BUB-022，博来霉素酸，博来霉素A，博来霉素B，布里万尼，苔藓虫素-1，硼替佐米，brostallicin，白消安，BYL-719，CA-4前药，CA-4，CapCell，钙三醇，卡奈替尼，canfosfamide，卡培他滨，羧基联苯铂，CCl-779，CC-115，CC-223，CEP-701，CEP-751，CBT-1头孢克肟，ceflatonin，头孢曲松，塞来昔布，西莫白介素，西马多丁，CH4987655/RO-4987655，氯三苯胺，西仑吉肽，环孢素， CDA-II，CKD-394，CKD-602，CKI-27，氯法拉滨，秋水仙素，考布他汀A4， COT抑制剂，CHS-828，CH-5132799，CLL-Thera，CMT-3cryptophycin 52，CTP-37，CTL A-4单克隆抗体，CP-461，CV-247，氰基吗啉代阿霉素，阿糖胞苷，D24851，地西他滨，阿霉素，deoxyrubicin，脱氧柯福霉素，缩酚酸肽，脱氧埃博霉素B，地塞米松，右丙亚胺，己烯雌酚，diflomotecan，didox，DMDC，多拉司他汀10，多拉达唑，DS-7423，E7010，E-6201，edatrexat，依多曲肽，乙丙昔罗，依氟鸟氨酸，EGFR抑制剂，EKB-569，EKB-509，enzastaurin，恩扎洛胺，依沙星，埃博霉素B，Epratuzumab，ER-86526，厄洛替尼，ET-18-0CH3，乙炔基胞苷，乙炔雌二醇，依沙替康，甲磺酸依沙替康，依西美坦，依昔舒林，芬维A胺，依托米单抗，氟尿苷，叶酸，FOLFOX，FOLFOX4，FOLFIRI，甲磺坦，氟托西汀，喜树碱，麦芽酚镓，吉非替尼，吉姆单抗，吉马替康，葡磷酰胺，GLC-100，GDC-0623，GDC-0941(pictrelisib)，GDC-0980，GDC-0032， GDC-0068，GDC-0349，GDC-0879，G17DT免疫原，GMK，GPX-100，gp100 肽疫苗，GSK-5126766，GSK-690693，GSK-1120212(曲美替尼)，GSK-2118436(达拉非尼)，GSK-2126458，GSK-2132231A，GSK-2334470，GSK-2110183， GSK-2141795，GW2016，格拉司琼，赫赛汀，六甲基蜜胺，组胺，高三尖杉酯碱，透明质酸，羟基脲，羟基孕酮己酸酯，伊班膦酸，替伊莫单抗，idatrexate，idenestrol，IDN-5109，IGF-1R抑制剂，IMC-1C11，IMC-A12(西妥木单抗)， immunol，indisulam、干扰素α-2a，干扰素α-2b，聚乙二醇化干扰素α-2b，白介素-2，INK-1117，INK-128，INSM-18，ionafarnib，伊匹单抗，异丙铂，伊罗夫文，异高软海绵素-B(isohomohalichondrin-B)，异黄酮，异维A酸，伊沙匹隆， JRX-2，JSF-154，J-107088，结合雌激素，kahalid F，酮康唑，KW-2170，KW-2450，洛帕铂，来氟米特，来格司亭，亮丙瑞林，leuporelin，lexidronam，LGD-1550，利奈唑胺，镥泰克萨菲瑞，洛莫曲醇，洛索蒽醌，LU 223651，洛索蒽醌， LY-S6AKT1，LY-2780301，马磷酰胺，马立马司他，双氯乙基甲胺，MEK抑制剂，MEK-162，甲基睾酮，甲基泼尼松龙，MEDI-573，MEN-10755，MDX-H210，MDX-447，MDX-1379，MGV，米哚妥林，米诺膦酸，丝裂霉素，米伏布林， MK-2206，MK-0646(达洛珠单抗)，MLN518，莫特沙芬钆，MS-209，MS-275， MX6，奈立膦酸盐，来那替尼，Nexavar，neovastat，尼罗替尼，尼美舒利，硝酸甘油，诺拉曲塞，诺雷林，N-乙酰半胱氨酸，06-苄基鸟嘌呤，Oblimersen，奥美拉唑，oncophage，oncoVEXGM-CSF，ormiplatin，ortataxel，OX44抗体， OSI-027，OSI-906(linsitinib)，4-1BB抗体，oxantrazole，雌激素，帕尼单抗，帕土匹龙，培非尔司亭，PCK-3145，培非尔司亭，PBI-1402，PBI-05204， PDO325901，PD-1抗体，PEG-紫杉醇，白蛋白稳定的紫杉醇，PEP-005， PF-05197281，PF-05212384，PF-04691502，PHT-427，P-04，PKC412，P54， PI-88，培利替尼，培美曲塞，pentrix，哌立福辛，紫苏子醇，帕妥珠单抗，PI3K 抑制剂，PI3K/mTOR抑制剂，PG-TXL，PG2，PLX-4032/RO-5185426(维罗非尼)，PLX-3603/RO-5212054，PT-100，PWT-33597，PX-866，吡铂，新戊酰氧基甲基丁酸酯，维必旺酮，苯妥帝尔O，PKI166，普来曲塞，光辉霉素，polyprenic acid，泊非霉素，泼尼松，泼尼松龙，quinamed，奎奴普丁，R115777，RAF-265，雷莫司琼，豹蛙酶，RDEA-119/BAY 869766，RDEA-436，雷贝霉素类似物，受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂，revimid，RG-7167，RG-7304，RG-7421，RG-7321， RG 7440，根霉素，rhu-MAb，林菲培，利塞膦酸盐，利妥昔单抗，罗非司布，罗非昔布，RO-31-7453，RO-5126766，RO-5068760，RPR 109881A，柔红霉素苯腙，鲁比替康，R-氟比洛芬，RX-0201，S-9788，萨巴比星，SAHA，沙格司亭，赛特铂，SB 408075，Se-015/Ve-015，SU5416，SU6668，SDX-101，semustin，西奥骨化醇，SM-11355，SN-38，SN-4071，SR-27897，SR-31747，SR-13668，SRL-172，索拉非尼，螺磺铂，角鲨胺，异羟肟酸(suberanilohydroxamic acid)，索坦，T 900607，T 138067，TAK-733，TAS-103，tacedinaline，他拉泊芬，特罗凯，tariquitar，tasisulam，泰索帝，taxoprexin，他扎罗汀，替加氟，替莫唑胺，替米利芬，睾酮，睾酮丙酸酯，替米利芬，四铂，河豚毒素，tezacitabine，沙利度胺，theralux，therarubicin，胸腺法新，thymectacin，tiazofurin，tipifarnib，替拉扎明，托拉地新，拓优得，toremofin，曲贝替定，反式MID-107，反式维甲酸，traszutumab，曲美母单抗，维A酸，三乙酰尿苷，triapine，曲西立滨，三甲曲沙，TLK-286TXD 258，tykerb/tyverb，urocidin，戊柔比星，瓦他拉尼，长春新碱，长春氟宁，维鲁利秦，WX-UK1，WX-554，维克替比，希罗达，XELOX， XL-147，XL-228，XL-281，XL-518/R-7420/GDC-0973，XL-765，YM-511，YM-598， ZD-4190，ZD-6474，ZD-4054，ZD-0473，ZD-6126，ZD-9331，ZD1839，ZSTK-474，zoledronat，zosuquidar，及其组合。
在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂选自他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、氟维司群、乙酸甲地孕酮、氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、氨鲁米特、乙酸环丙孕酮、非那甾胺、乙酸布舍瑞林、氟氢可的松、氟甲睾酮、甲羟孕酮、奥曲肽、及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二种治疗剂选自LHRH激动剂和LHRH拮抗剂。在一个实施方式中，LHRH激动剂选自乙酸戈舍瑞林、乙酸洛普利特、双羟萘酸曲普瑞林及其组合。在一个实施方式中，第二治疗剂包括LHRH拮抗剂，选自地加瑞克，西曲瑞克，阿巴瑞克，Ozarelix，地加瑞克、其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括生长因子的抑制剂。在一个实施方式中，生长因子的抑制剂选自下列因子的抑制剂：血小板衍生生长因子(PDGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，血管内皮生长因子(VEGF)，表皮生长因子(EGF)，胰岛素样生长因子(IGF)，人表皮生长因子(HER)，肝细胞生长因子(HGF)，及其组合。在一个实施方式中，人表皮生长因子(HER)选自HER2、HER3和HER4。
在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括酪氨酸激酶抑制剂。在该治疗方法的一个实施方式中，酪氨酸激酶抑制剂选自西妥昔单抗，吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼和曲妥珠单抗，及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括芳香化酶抑制剂。在该治疗方法的一个实施方式中，芳化酶抑制剂选自阿那曲唑、来曲唑、利罗唑、伏罗唑、依西美坦、阿他美坦及其组合。
在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括抗代谢物。在该治疗方法的一个实施方式中，抗代谢物包含抗叶酸剂。在该治疗方法的一个实施方式中，抗叶酸剂选自甲氨蝶呤、雷替曲塞、嘧啶类似物及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，抗代谢物是嘧啶类似物。在该治疗方法的一个实施方式中，嘧啶类似物选自5-氟尿嘧啶、卡培他滨、吉西他滨及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，抗代谢物是嘌呤类似物或腺苷类似物。在该治疗方法的一个实施方式中，嘌呤类似物或腺苷类似物选自巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、克拉屈滨和喷司他丁、阿糖胞苷、氟达拉滨及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二种治疗剂包括抗肿瘤抗生素。在该治疗方法的一个实施方式中，抗肿瘤抗生素选自蒽环霉素、阿霉素、柔红霉素、表柔比星和伊达比星、丝裂霉素-C、博来霉素、放线菌素、光辉霉素、链脲霉素及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括铂衍生物。在该治疗方法的一个实施方式中，铂衍生物选自顺铂、奥沙利铂、卡铂及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二种治疗剂包括烷基化剂。在该治疗方法的一个实施方式中，烷基化试剂选自雌莫司汀、二氯甲二乙胺、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、达卡巴嗪、环磷酰胺、异环磷酰胺、替莫唑胺、亚硝基脲及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括亚硝基脲。在该治疗方法的一个实施方式中，亚硝基脲选自卡莫司汀、洛莫司丁、噻替派及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括抗有丝分裂剂。在该治疗方法的一个实施方式中，抗有丝分裂剂选自长春花生物碱和紫杉烷。在该治疗方法的一个实施方式中，紫杉烷选自紫杉醇、多西紫杉醇及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，长春花生物碱选自长春碱、长春地辛、长春瑞宾、长春新碱及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二种治疗剂包括拓扑异构酶抑制剂。在该治疗方法的一个实施方式中，拓扑异构酶抑制剂是表鬼臼毒素。在该治疗方法的一个实施方式中，拓扑异构酶抑制剂，其是选自依托泊苷、凡毕复、替尼泊苷、amsacrin、托泊替康、伊立替康、米托蒽醌及其组合的表鬼臼毒素。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂。在该治疗方法的一个实施方式中，丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂选自PDK 1抑制剂、B-Raf抑制剂、mTOR 抑制剂、mTORC1抑制剂、PI3K抑制剂、双重mTOR/PI3K抑制剂、STK 33抑制剂、AKT抑制剂、PLK 1抑制剂、CDK抑制剂、极光激酶抑制剂及其组合。
在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括酪氨酸激酶抑制剂。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括PTK2/FAK抑制剂。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括蛋白蛋白相互作用抑制剂。在该治疗方法的一个实施方式中，蛋白蛋白相互作用抑制剂选自IAP、Mcl-1、MDM2/MDMX 及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂包括雷帕霉素类似物。在该治疗方法的一个实施方式中，雷帕霉素类似物选自依维莫司、替西罗莫司、 ridaforolimus、西罗莫司及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂选自阿米福汀、阿那格雷、氯膦酸盐、非尔司亭、干扰素、干扰素α、亚叶酸、利妥昔单抗、丙卡巴肼、左旋咪唑、美司那、米托坦、帕米膦酸盐和卟吩姆、及其组合。在该治疗方法的一个实施方式中，第二治疗剂选自2-氯脱氧腺苷、 2-氟脱氧胞苷、2-甲氧基雌二醇、2C4,3-alethine、131-1-TM-601、3CPA、7-乙基 -10-羟基喜树碱、16-氮杂-埃博霉素B、A105972、A 204197、阿比特龙、阿地白介素、阿维A酸、allovectin-7、六甲蜜胺、alvocidib、氨萘非特、蒽吡唑、 AG-2037、AP-5280、apaziquone、apomine、aranose、arglabin、阿佐昔芬、阿他美坦、阿曲生坦、auristatin PE、ABT-199(Venetoclax)、ABT-263(Navitoclax)、AVLB、AZ10992、ABX-EGF、AMG-479(加尼妥单抗)、ARRY 162、ARRY 438162、 ARRY-300、ARRY-142886/AZD-6244(司美替尼)、ARRY-704/AZD-8330、AR-12、 AR-42、AS-703988、AXL-1717、AZD-8055、AZD-5363、AZD-6244、ARQ-736、 ARQ 680、AS-703026(primasertib)、阿瓦斯汀、AZD-2014、阿扎胞苷、伊沙匹隆B、azonafide、BAY-43-9006、BAY 80-6946、BBR-3464、BBR-3576、贝伐单抗、BEZ-235、比立考达二柠檬酸盐、BCX-1777、BKM-120、布可菌素、BLP-25、BMS-184476、BMS-247550、BMS-188797、BMS-275291、BMS-663513、 BMS-754807、BNP-1350、BNP-7787、BIBW 2992(阿法替尼、妥复克)、BIBF 1120(vargatef)、BI 836845、BI 2536、BI6727、BI 836845、BI 847325、BI 853520、 BUB-022、博来霉素酸、博来霉素A、博来霉素B、布里万尼、苔藓虫素-1、硼替佐米、brostallicin、白消安、BYL-719、CA-4前药、CA-4、CapCell、钙三醇、卡奈替尼、canfosfamide、卡培他滨、羧基联苯铂、CCl-779、CC-115、CC-223、 CEP-701、CEP-751、CBT-1头孢克肟、ceflatonin、头孢曲松、塞来昔布、西莫白介素、西马多丁、CH4987655/RO-4987655、氯三苯胺、西仑吉肽、环孢素、 CDA-II、CKD-394、CKD-602、CKI-27、氯法拉滨、秋水仙素、考布他汀A4、 COT抑制剂、CHS-828、CH-5132799、CLL-Thera、CMT-3cryptophycin 52、 CTP-37、CTL A-4单克隆抗体、CP-461、CV-247、氰基吗啉代阿霉素、阿糖胞苷、D24851、地西他滨、阿霉素、deoxyrubicin、脱氧柯福霉素、缩酚酸肽、脱氧埃博霉素B、地塞米松、右丙亚胺、己烯雌酚、diflomotecan、didox、DMDC、多拉司他汀10、多拉达唑、DS-7423、E7010、E-6201、edatrexat、依多曲肽、乙丙昔罗、依氟鸟氨酸、EGFR抑制剂、EKB-569、EKB-509、enzastaurin、恩扎洛胺、依沙星、埃博霉素B、Epratuzumab、ER-86526、厄洛替尼、ET-18-0CH3、乙炔基胞苷、乙炔雌二醇、依沙替康、甲磺酸依沙替康、依西美坦、依昔舒林、芬维A胺、依托米单抗、氟尿苷、叶酸、FOLFOX、FOLFOX4、FOLFIRI、甲磺坦、氟托西汀、喜树碱、麦芽酚镓、吉非替尼、吉姆单抗、吉马替康、葡磷酰胺、GLC-100、GDC-0623、GDC-0941(pictrelisib)、GDC-0980、GDC-0032、 GDC-0068、GDC-0349、GDC-0879、G17DT免疫原、GMK、GPX-100、gp100 肽疫苗、GSK-5126766、GSK-690693、GSK-1120212(曲美替尼)、GSK-2118436(达拉非尼)、GSK-2126458、GSK-2132231A、GSK-2334470、GSK-2110183、 GSK-2141795、GW2016、格拉司琼、赫赛汀、六甲基蜜胺、组胺、高三尖杉酯碱、透明质酸、羟基脲、羟基孕酮己酸酯、伊班膦酸、替伊莫单抗、idatrexate、 idenestrol、IDN-5109、IGF-1R抑制剂、IMC-1C11、IMC-A12(西妥木单抗)、 immunol、indisulam、干扰素α-2a、干扰素α-2b、聚乙二醇化干扰素α-2b、白介素-2、INK-1117、INK-128、INSM-18、ionafarnib、伊匹单抗、异丙铂、伊罗夫文、异高软海绵素-B(isohomohalichondrin-B)、异黄酮、异维A酸、伊沙匹隆、 JRX-2、JSF-154、J-107088、结合雌激素、kahalid F、酮康唑、KW-2170、KW-2450、洛帕铂、来氟米特、来格司亭、亮丙瑞林、leuporelin、lexidronam、LGD-1550、利奈唑胺、镥泰克萨菲瑞、洛莫曲醇、洛索蒽醌、LU 223651、洛索蒽醌、 LY-S6AKT1、LY-2780301、马磷酰胺、马立马司他、双氯乙基甲胺、MEK抑制剂、MEK-162、甲基睾酮、甲基泼尼松龙、MEDI-573、MEN-10755、MDX-H210、MDX-447、MDX-1379、MGV、米哚妥林、米诺膦酸、丝裂霉素、米伏布林、 MK-2206、MK-0646(达洛珠单抗)、MLN518、莫特沙芬钆、MS-209、MS-275、 MX6、奈立膦酸盐、来那替尼、Nexavar、neovastat、尼罗替尼、尼美舒利、硝酸甘油、诺拉曲塞、诺雷林、N-乙酰半胱氨酸、06-苄基鸟嘌呤、oblimersen、奥美拉唑、oncophage、oncoVEXGM-CSF、ormiplatin、ortataxel、OX44抗体、OSI-027、 OSI-906(linsitinib)、4-1BB抗体、oxantrazole、雌激素、帕尼单抗、帕土匹龙、培非尔司亭、PCK-3145、培非尔司亭、PBI-1402、PBI-05204、PDO325901、PD-1 抗体、PEG-紫杉醇、白蛋白稳定的紫杉醇、PEP-005、PF-05197281、PF-05212384、 PF-04691502、PHT-427、P-04、PKC412、P54、PI-88、培利替尼、培美曲塞、 pentrix、哌立福辛、紫苏子醇、帕妥珠单抗、PI3K抑制剂、PI3K/mTOR抑制剂、 PG-TXL、PG2、PLX-4032/RO-5185426(维罗非尼)、PLX-3603/RO-5212054、 PT-100、PWT-33597、PX-866、吡铂、新戊酰氧基甲基丁酸酯、维必旺酮、苯妥帝尔O、PKI166、普来曲塞、光辉霉素、polyprenic acid、泊非霉素、泼尼松、泼尼松龙、quinamed、奎奴普丁、R115777、RAF-265、雷莫司琼、豹蛙酶、 RDEA-119/BAY 869766、RDEA-436、雷贝霉素类似物、受体酪氨酸激酶(RTK) 抑制剂、revimid、RG-7167、RG-7304、RG-7421、RG-7321、RG 7440、根霉素、 rhu-MAb、林菲培、利塞膦酸盐、利妥昔单抗、罗非司布、罗非昔布、RO-31-7453、 RO-5126766、RO-5068760、RPR 109881A、柔红霉素苯腙、鲁比替康、R-氟比洛芬、RX-0201、S-9788、萨巴比星、SAHA、沙格司亭、赛特铂、SB 408075、 Se-015/Ve-015、SU5416、SU6668、SDX-101、semustin、西奥骨化醇、SM-11355、 SN-38、SN-4071、SR-27897、SR-31747、SR-13668、SRL-172、索拉非尼、螺磺铂、角鲨胺、异羟肟酸(suberanilohydroxamic acid)、索坦、T 900607、T 138067、 TAK-733、TAS-103、tacedinaline、他拉泊芬、特罗凯、tariquitar、tasisulam、泰索帝、taxoprexin、他扎罗汀、替加氟、替莫唑胺、替米利芬、睾酮、睾酮丙酸酯、替米利芬、四铂、河豚毒素、tezacitabine、沙利度胺、theralux、therarubicin、胸腺法新、thymectacin、tiazofurin、tipifarnib、替拉扎明、托拉地新、拓优得、 toremofin、曲贝替定、反式MID-107、反式维甲酸、traszutumab、曲美母单抗、维A酸、三乙酰尿苷、triapine、曲西立滨、三甲曲沙、TLK-286TXD258、 tykerb/tyverb、urocidin、戊柔比星、瓦他拉尼、长春新碱、长春氟宁、维鲁利秦、 WX-UK1、WX-554、维克替比、希罗达、XELOX、XL-147、XL-228、XL-281、 XL-518/R-7420/GDC-0973、XL-765、YM-511、YM-598、ZD-4190、ZD-6474、 ZD-4054、ZD-0473、ZD-6126、ZD-9331、ZD1839、ZSTK-474、zoledronat、 zosuquidar、及其组合。
在一个实施方式中，另一种治疗剂包括类固醇，包括地塞米松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、氟羟强的松龙、倍他米松和可的伐唑。在一个实施方式中，另一种治疗剂包括止吐药。止吐剂包括但不限于5-HT3受体激动剂(例如多拉司琼，格拉司琼，昂丹司琼，托烷司琼，帕洛诺司琼，和米氮平)，多巴胺激动剂(例如多潘立酮，奥氮平，氟哌利多，氟哌啶醇，氯丙嗪，丙氯拉嗪，阿利必利，丙氯拉嗪和甲氧氯普胺)，NK1受体拮抗剂(例如阿瑞吡坦和卡索匹坦)，抗组胺剂(例如环嗪，苯海拉明，茶苯海明，多西拉敏，美克洛嗪，异丙嗪，羟嗪)，大麻素(例如大麻，屈大麻酚，大麻隆和大麻酚)，苯二氮卓类(例如咪达唑仑和劳拉西泮)，抗胆碱能药(例如东莨菪碱)，三甲氧苯酰胺，姜，emetrol，丙泊酚，胡椒薄荷，蝇蕈醇和香辣椒。
药物组合物可以经由任何合适的施用途径施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物口服，肠胃外，经皮或经粘膜施用。在一个实施方式中，药物组合物肠胃外施用。在一个实施方式中，药物组合物经静脉内(IV)，皮下(SC) 和肌内(IM)经由肠胃外施用途径施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物通过选自直肠和透皮的施用途径施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物以剂型给予受试者，选择无菌溶液，悬液，栓剂，片剂和胶囊。在一个实施方式中，药物组合物以口服剂型对受试者施用，选自片剂，囊袋，胶囊，锭剂，糖浆，液体，悬浮液和酏剂。在一个实施方式中，药物组合物以口服剂型给予受试者，选自片剂，硬壳胶囊，软明胶胶囊，珠粒，颗粒，聚集体，粉末，凝胶，固体和半固体。
在一个实施方式中，药物组合物作为选自由持续释放形式、控制释放形式、延迟释放形式和响应释放形式组成的组中的剂型施用于受试者。
在一个实施方式中，将药物组合物每天一次施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物根据不太频繁(例如，每周施用一次或频率更低)的施用方案施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物根据频繁(例如，每周施用多于一次)的施用方案施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物每周一次施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物每四周一次施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物每周两次施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物每两周一次施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物每三周一次施用于受试者。在一个实施方式中，药物组合物以每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次或其组合的重复循环施用于受试者。
在一个实施方式中，治疗方法包括向需要这样治疗的受试者施用：(i)第一治疗剂，其包括含有依米立酮例如ONC201、或其类似物、或其药学上可接受的盐的化合物，与(ii)第二治疗剂的组合，其中第一治疗剂和第二治疗剂同时或依次施用；并且还包括测定生物样品中内质网(ER)应激响应基因的表达。在一个实施方式中，内质网应激反应基因选自包括但不限于C/EBP-同源蛋白 (CHOP)、转录激活因子3(ATF3)以及CHOP和ATF3二者的组。在一个实施方式中，内质网应激反应基因选自包括但不限于ATF3、转录激活因子4(ATF4)、CHOP、IRE1、免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、真核细胞翻译起始因子 2A(eIF2a)、X盒结合蛋白1(XBP1)的组。生物样品可以是肿瘤、外周血单核细胞或皮肤活检。生物样品可在药物施用之前、期间或之后获得。在一个实施方式中，治疗方法还包括调节第一治疗剂的剂量以达到一种或多种ER应激基因的约50％、75％、100％、125％、150％、175％、200％、225％、250％、275％、 300％、325％、350％、375％、400％、425％、450％、475％、500％、525％、550％、 575％、600％、或大于600％的诱导。在一个实施方式中，治疗方法还包括调节第一治疗剂的剂量以达到ER应激基因的约50％至约100％、约100％至约150％、约150％至约200％、约200％至约250％、约250％至约300％、约300％至约350％、约350％至约400％、约400％至约450％、约450％至约500％、约500％至约550％、约550％至约600％、或大于600％的诱导。在一个实施方式中，治疗方法还包括调节第一治疗剂的剂量以达到ER应激基因的约50％至约100％、约100％至约 200％、约200％至约300％、约300％至约400％、约400％至约500％、约500％至约600％、或大于600％的诱导。
在一个实施方式中，治疗方法包括向需要这样治疗的受试者施用：(i)第一治疗剂，其包括含有依米立酮例如ONC201、或其类似物、或其药学上可接受的盐的化合物，与(ii)第二治疗剂的组合，其中第一治疗剂和第二治疗剂同时或依次施用；并且还包括测定生物样品中蛋白酶体活性的表达。在一个实施方式中，蛋白酶体活性可以是糜蛋白酶样、胰蛋白酶样和/或半胱天冬酶样活性。在一个实施方式中，生物样品可以是肿瘤、外周血单核细胞或皮肤活检。生物样品可在药物施用之前、期间或之后获得。在一个实施方式中，治疗方法还包括调节剂量以达到抑制约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、或约100％的蛋白酶体活性。在一个实施方式中，治疗方法还包括调节剂量以达到抑制至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少 45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、或至少95％的蛋白酶体活性。在一个实施方式中，t治疗方法还包括调节剂量以达到抑制至少约20％至约30％、约30％至约40％、约40％至约50％、约50％至约60％、约60％至约70％、约70％至约80％、约80％至约90％、或大于90％的蛋白酶体活性。
在一个方面，本文提供了治疗方法，其包括向需要这样治疗的受试者施用包含依米立酮例如ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐(例如，二盐或三盐)的第一治疗剂和第二种疗剂的组合，所述方法包括：
(i)给受试者施用第一治疗剂；
(ii)向受试者施用第一治疗剂的时间之后等到经过预定的等待时间；和/ 或直到不良事件消退或正在消退；和
(iii)向受试者施用第二治疗剂，其中选择预定的等待时间以便获得第一治疗剂的延迟治疗效应而不增加第一和第二治疗剂可能的合并毒性效应的风险。在一个实施方式中，预定的等待时间基于第一治疗剂化合物或其代谢物的清除速率确定。在一个实施方式中，预定的等待时间通过定量评估肾功能和肾脏参数来确定。在一个实施方式中，预定的等待时间通过确定肾功能的测定来决定，其中所述测定选自由下列组成的组：第一治疗剂化合物或其代谢物的血清水平；第一治疗剂化合物或其代谢物的清除速率；第一治疗剂化合物或其代谢物的24 小时尿清除率。
在该治疗方法的一个实施方式中，预定的等待时间基本上等于第一治疗剂化合物或其代谢物从受试者体内全身清除所需的时间。在该治疗方法的一个实施方式中，预定的等待时间基本上等于第一治疗剂化合物或其代谢物从受试者体内肾清除所需的时间。在该治疗方法的一个实施方式中，预定的等待时间基本上等于第一治疗剂化合物或其代谢物从受试者体内肝清除所需的时间。在该治疗方法的一个实施方式中，预定的等待时间基本上等于第一治疗剂化合物或其代谢物从受试者体内总清除所需的时间。在该治疗方法的一个实施方式中，预定的等待时间为约4小时。在其它实施方式中，等待时间是1天。在一个实施方式中，等待时间直到第一治疗剂化合物的Cmax已经过去。在其它实施方式中，等待时间是在大多数不利事件消退或正在消退之后。在该治疗方法的一个实施方式中，预定的等待时间为约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天。在该治疗方法的一个实施方式中，预定的等待时间在约1-7天、约1-6 天、约1-5天、约1-4天、约1-3天或约1-2天的范围内。在一个实施方式中，等待时间长达3周。前述被认为是“治疗时间期”。
当施用顺序相反时，施用第一治疗剂的时间可以在第二治疗剂(即，第一施用药物)的Cmax已经过去之后。在一个实施方式中，第一治疗剂的施用可以在大部分或基本上所有的第一施用药物已经从体内消除或者对第一施用药物的毒性效应消退或正在消退之后。
在一个实施方式中，治疗方法还包括使用药代动力学谱分析监测受试者中第一治疗剂化合物或其代谢物的水平。在一些这样的实施方式中，利用药代动力学谱分析监测受试者中第一治疗剂化合物或其代谢物的水平包括利用在适于构建药代动力学特征的时间点从受试者获得的至少两个样品中的第一治疗剂化合物或其代谢物的浓度来构建第一治疗剂化合物或其代谢物的药代动力学谱。在利用药代动力学谱分析监测受试者中第一治疗剂化合物或其代谢物水平的一个实施方式中，通过在护理点装置或使用点装置上或在适合储存样品的基质上取样或自取样，在护理点或使用点从受试者收集样品，然后在实验室定量。在一个实施方式中，每个护理点装置或使用点装置能够定量第一治疗剂化合物或其代谢物。在监测受试者中第一治疗剂化合物或其代谢物水平的一个实施方式中，在护理点或使用点通过活检装置从受试者收集一个或多个样品，用于在护理点或使用点装置处进行分析或在由实验室分析之前进行储存。在一个实施方式中，在第一治疗剂施用于受试者之后的3-8小时时间间隔后取活检。在一个实施方式中，在第一治疗剂施用于受试者之后的3-24小时时间间隔后取活检。在一个实施方式中，在第一治疗剂施用于受试者之后的8-24小时时间间隔后取活检。在一个实施方式中，在第一治疗剂施用于受试者之后的2天时间间隔后取活检。在一个实施方式中，在第一治疗剂施用于受试者之后的3天时间间隔后取活检。在一个实施方式中，在第一治疗剂施用于受试者之后的4天时间间隔后取活检。在一个实施方式中，在施用第一治疗剂之后的1-7天时间间隔后取活检。
在一个实施方式中，药代动力学谱包括适合指导对于受治受试者的第一治疗剂谱的药代动力学参数。在该治疗方法的一个实施方式中，第一治疗剂施用于受试者后的Cmax在一定治疗时间段内范围从约1000ng/dL至1500ng/dL。在一个实施方式中，Cmax在一定治疗时间段内小于1500ng/dL且大于85ng/dL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用于受试者后的Cmax在一定治疗时间段内范围从约1000ng/mL至1500ng/mL。在一个实施方式中，Cmax在一定治疗时间段内小于1500ng/mL且大于85ng/mL。
在一个实施方式中，第一治疗剂施用于受试者之后在受试者血液(全血，血浆，或血清)中的最大浓度(“Cmax”)是Cmax从约1000、1010、1020、1030、 1040、1050、1060、1070、1080、1090、1100、1110、1120、1130、1140、1150、 1160、1170、1180、1190、1200、1210、1220、1230、1240、1250、1260、1270、 1280、1290、1300、1310、1320、1330、1340、1350、1360、1370、1380、1390、 1400、1410、1420、1430、1440、1450、1460、1470、1480或1490ng/dL至约1500ng/dL；从约100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、 111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、 125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、 139、140、141、142、143、144、145、146、147、148或149ng/dL至约150ng/dL；或从约10、10.5、11、11.5、120、12.5、13、13.5、14或14.5ng/dL至约15ng/dL。
在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后在受试者血液(全血，血浆，或血清)中的最大浓度(“Cmax”)是Cmax从约1000、1010、1020、1030、1040、 1050、1060、1070、1080、1090、1100、1110、1120、1130、1140、1150、1160、 1170、1180、1190、1200、1210、1220、1230、1240、1250、1260、1270、1280、 1290、1300、1310、1320、1330、1340、1350、1360、1370、1380、1390、1400、 1410、1420、1430、1440、1450、1460、1470、1480或1490ng/mL至约1500ng/mL；从约100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、 127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、 141、142、143、144、145、146、147、148或149ng/mL至约150ng/mL；或从约10、10.5、11、11.5、120、12.5、13、13.5、14或14.5ng/mL至约15ng/mL。
在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后在受试者血液(全血，血浆，或血清)中的最大浓度(“Cmax”)选自约1000、1010、1020、1030、1040、1050、 1060、1070、1080、1090、1100、1110、1120、1130、1140、1150、1160、1170、 1180、1190、1200、1210、1220、1230、1240、1250、1260、1270、1280、1290、 1300、1310、1320、1330、1340、1350、1360、1370、1380、1390、1400、1410、 1420、1430、1440、1450、1460、1470、1480或1490ng/dL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后在受试者血液(全血，血浆，或血清)中的Cmax(“Cmax”) 选自约100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、 113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、 127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148或149ng/dL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约10、10.5、11、11.5、120、12.5、13、13.5、 14或14.5ng/dL。
在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约1000、1010、1020、 1030、1040、1050、1060、1070、1080、1090、1100、1110、1120、1130、1140、 1150、1160、1170、1180、1190、1200、1210、1220、1230、1240、1250、1260、 1270、1280、1290、1300、1310、1320、1330、1340、1350、1360、1370、1380、 1390、1400、1410、1420、1430、1440、1450、1460、1470、1480或1490ng/mL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约100、101、102、103、 104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、 118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、 132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、 146、147、148、或149ng/mL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约10、10.5、11、11.5、120、12.5、13、13.5、14或14.5ng/mL。
在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约85、95、105、115、125、135、145、155、165、175、185、195、205、215、225、235、245、255、 265、275、285、295、305、315、325、335、345、355、365、375、385、395、 405、415、425、435、445、455、465、475、485、495、505、515、525、535、 545、555、565、575、585、595、605、615、625、635、645、655、665、675、 685、695、705、715、725、735、745、755、765、775、785、795、805、815、 825、835、845、855、865、875、885、895、905、915、925、935、945、955、965、975、985、995、1005、1015、1025、1035、1045、1055、1065、1075、 1085、1095、1105、1115、1125、1135、1145、1155、1165、1175、1185、1195、 1205、1215、1225、1235、1245、1255、1265、1275、1285、1295、1305、1315、 1325、1335、1345、1355、1365、1375、1385、1395、1405、1415、1425、1435、 1445、1455、1465、1475、1485、1495或1500ng/dL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、 19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、 36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、 53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、 70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、 87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、 104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、 118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、 132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、 146、147、148或149ng/dL.在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、 9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14或14.5ng/dL。
在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约85、95、105、115、 125、135、145、155、165、175、185、195、205、215、225、235、245、255、 265、275、285、295、305、315、325、335、345、355、365、375、385、395、 405、415、425、435、445、455、465、475、485、495、505、515、525、535、 545、555、565、575、585、595、605、615、625、635、645、655、665、675、 685、695、705、715、725、735、745、755、765、775、785、795、805、815、 825、835、845、855、865、875、885、895、905、915、925、935、945、955、965、975、985、995、1005、1015、1025、1035、1045、1055、1065、1075、 1085、1095、1105、1115、1125、1135、1145、1155、1165、1175、1185、1195、 1205、1215、1225、1235、1245、1255、1265、1275、1285、1295、1305、1315、 1325、1335、1345、1355、1365、1375、1385、1395、1405、1415、1425、1435、 1445、1455、1465、1475、1485、1495或1500ng/mL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、 19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、 36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、 53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、 70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、 87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、 104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、 118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、 132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、 146、147、148或149ng/mL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、 9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14或14.5ng/mL。
在一个实施方式中，第一治疗剂施用于受试者之后的Cmax范围从约85ng/dL 至1500ng/dL；从约8.5ng/dL至150ng/dL；或从约0.85ng/dL至15ng/dL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后在受试者血液(全血，血浆，或血清)中的Cmax选自约85、95、105、115、125、135、145、155、165、175、185、195、 205、215、225、235、245、255、265、275、285、295、305、315、325、335、 345、355、365、375、385、395、405、415、425、435、445、455、465、475、 485、495、505、515、525、535、545、555、565、575、585、595、605、615、 625、635、645、655、665、675、685、695、705、715、725、735、745、755、 765、775、785、795、805、815、825、835、845、855、865、875、885、895、 905、915、925、935、945、955、965、975、985、995、1005、1015、1025、 1035、1045、1055、1065、1075、1085、1095、1105、1115、1125、1135、1145、 1155、1165、1175、1185、1195、1205、1215、1225、1235、1245、1255、1265、 1275、1285、1295、1305、1315、1325、1335、1345、1355、1365、1375、1385、1395、1405、1415、1425、1435、1445、1455、1465、1475、1485、或1495ng/dL 至约1500ng/dL；约8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、 39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、 56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、 73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、 90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、 106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、 120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、 134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、 148或149ng/dL至约150ng/dL；或约1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、 6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、 14或14.5ng/dL至约15ng/dL。
在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax范围从约85ng/mL至 1500ng/mL；从约8.5ng/mL至150ng/mL；或从约0.85ng/mL至15ng/mL。在一个实施方式中，第一治疗剂施用之后的Cmax选自约85，95、105、115、125、135、 145、155、165、175、185、195、205、215、225、235、245、255、265、275、 285、295、305、315、325、335、345、355、365、375、385、395、405、415、425、435、445、455、465、475、485、495、505、515、525、535、545、555、 565、575、585、595、605、615、625、635、645、655、665、675、685、695、 705、715、725、735、745、755、765、775、785、795、805、815、825、835、 845、855、865、875、885、895、905、915、925、935、945、955、965、975、985、995、1005、1015、1025、1035、1045、1055、1065、1075、1085、1095、 1105、1115、1125、1135、1145、1155、1165、1175、1185、1195、1205、1215、 1225、1235、1245、1255、1265、1275、1285、1295、1305、1315、1325、1335、 1345、1355、1365、1375、1385、1395、1405、1415、1425、1435、1445、1455、 1465、1475、1485或1495ng/mL至约1500ng/mL；约8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、 48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、 82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、 113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、 127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、 141、142、143、144、145、146、147、148或149ng/mL至约150ng/mL；或约 1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、 10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14或14.5ng/mL至约15ng/mL。
在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量，按施用药物后药物在血液(全血，血浆，或血清)中的浓度针对施用药物后时间作图的曲线下面积 (“AUC”)测量，范围从约150ng hr/mL至约8000ng hr/mL；从约15ng hr/mL 至约800ng hr/mL；或从约1.5ng hr/mL至约80ng hr/mL。在一个实施方式中， AUC小于8000ng hr/mL且大于或等于150ng hr/mL。在一个实施方式中，AUC 小于800ng hr/mL且大于或等于15ng hr/mL。在一个实施方式中，AUC小于80ng hr/mL且大于或等于1.5ng hr/mL。
在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC从约100ng hr/mL 至约8000ng hr/mL；从约10ng hr/mL至约800ng hr/mL；或从约1ng hr/mL至约 80ng hr/mL。在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC从约150、 200、400、600、800、1000、1200、1400、1600、1800、2000、2200、2400、 2600、2800、3000、3200、3400、3600、3800、4000、4200、4400、4600、4800、 5000、5200、5400、5600、5800、6000、6200、6400、6600、6800、7000、7200、 7400、7600或7800ng hr/mL至约8000ng hr/mL。在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC从约15、20、40、60、80、100、120、140、160、180、 200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、 480、500、520、540、560、580、600、620、640、660、680、700、720、740、 760或780ng hr/mL至约800ng hr/mL。在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC从约1.5、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、 26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、 60、62、64、66、68、70、72、74、76或78ng hr/mL至约80ng hr/mL。
在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC从约100ng hr/mL 至约8000ng hr/mL，从约10ng hr/mL至约800ng hr/mL；或从约1ng hr/mL至约 80ng hr/mL。在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC从约150ng hr/mL至约7800、7600、7400、7200、7000、6800、6600、6400、6200、6000、 5800、5600、5400、5200、5000、4800、4600、4400、4200、4000、3800、3600、 3400、3200、3000、2800、2600、2400、2200、2000、1800、1600、1400、1200、 1000、800、600、400或200ng hr/mL。在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC从约15ng hr/mL至约780、760、740、720、700、680、660、 640、620、600、580、560、540、520、500、480、460、440、420、400、380、 360、340、320、300、280、260、240、220、200、180、160、140、120、100、 80、60、40或20ng hr/mL。在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是 AUC从约1.5ng hr/mL至约78、76、74、72、70、68、66、64、62、60、58、 56、54、52、50、48、46、44、42、40、38、36、34、32、30、28、26、24、 22、20、18、16、14、12、10、8、6、4或2ng hr/mL。在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC从约100ng hr/mL至约200ng hr/mL；从约10ng hr/mL至约20ng hr/mL；或从约1ng hr/mL至约2ng hr/mL。
在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC选自约100、150、 200、400、600、800、1000、1200、1400、1600、1800、2000、2200、2400、 2600、2800、3000、3200、3400、3600、3800、4000、4200、4400、46000、4800、 5000、5200、5400、5600、5800、6000、6200、6400、6600、6800、7000、7200、 7400、7600、7800和8000ng hr/mL。在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC选自约10、15、20、40、60、80、100、120、140、160、180、 200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、4600、 480、500、520、540、560、580、600、620、640、660、680、700、720、740、 760、780和800ng hr/mL。在一个实施方式中，随时间推移的总药物暴露量是AUC选自约1、15、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、 30、32、34、36、38、40、42、44、460、48、50、52、54、56、58、60、62、 64、66、68、70、72、74、76、78和80nghr/mL。
另一方面，本文提供了治疗或使用组合物治疗疾病状态的方法，所述方法包括向需要这样治疗的受试者施用第一治疗剂和第二治疗剂的组合，所述方法包括：
(i)给受试者施用包含依米立酮例如ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐的第一治疗剂；
(ii)使用药代动力学谱分析监测受试者中第一治疗剂化合物或其代谢物的水平；和
(iii)以受试者中第一治疗剂的水平为条件施用第二治疗剂。在一个实施方式中，所述监测步骤包括利用在适合于构建药代动力学谱的时间点从受试者获得的多个样品中第一治疗剂化合物或其代谢物的浓度，为受试者构建第一治疗剂化合物或其代谢物的药代动力学谱。在一个实施方式中，通过在护理点装置或使用点装置上或在适合储存样品的基质上取样或自取样，在护理点或使用点收集样品，然后由实验室定量化合物或其代谢物。在一个实施方式中，每个护理点装置或使用点装置能够定量化合物或其代谢物。在一个实施方式中，药代动力学谱包括适合指导对于受试者的化合物或其盐施用的药代动力学参数。在一个实施方式中，样品包括2-12个样品。在一个实施方式中，样品在长达8小时、长达24小时、长达48小时或长达72小时的时间段内收集。在一个实施方式中，药代动力学参数包括至少一个选自由下列组成的组中的参数：AUC， AUCinf，Tmax，Cmax，超过阈值的时间，稳态浓度，吸收速率，清除速率，分布速率，终末T-1/2，或者从非房室药代动力学(PK)或房室PK分析、包括基于生理模型的区室PK分析得出的参数。在一个实施方式中，治疗方法还包括生成包括受试者的药代动力学谱的报告。在一个实施方式中，报告包括基于受试者的药代动力学谱关于施用的建议。在一个实施方式中，基于一种或多种药代动力学参数，指示减少ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐的剂量以降低毒性风险。在一个实施方式中，减少化合物或其盐的剂量是基于下列来表明的：超过阈值的时间指示，其中所述阈值是超过它会发生毒性的药物浓度，或以下一种或多种：AUC、AUCinf、平均停留时间(MRT)、界定药代动力学谱的指数、稳态分布容积(Vss)、终末期分布容积(Vz)、或充分描述药代动力学谱的一组药代动力学变量的组合。在一个实施方式中，基于一种或多种药代动力学参数，指示调节化合物或其盐的剂量以增加功效。在一个实施方式中，基于以下一种或多种：AUC、AUCinf、MRT、界定药代动力学谱的指数、稳态分布容积(Vss)、终末期分布容积(Vz)、或充分描述药代动力学谱的一组药代动力学变量的组合，指示增加化合物或其盐的剂量。在一个实施方式中，将化合物或其盐的剂量调节到预定目标值的5％至25％以内。在一个实施方式中，将每个样品施加到护理点装置或使用点装置以确定化合物或其代谢物的浓度，其中所述护理点装置或使用点装置包含侧流试纸条，所述侧流试纸条具有的结构和组成使得一个或多个样品施加到侧流试纸条引起样品中的一部分药物与侧流试纸条的组分结合，从而产生与所施加样品中药物的浓度成正比的可检测信号。在一个实施方式中，在实验室定量之前，将样品施加于适合储存样品的基质。在一个实施方式中，样品作为干血斑储存。在一个实施方式中，通过ELISA、LC MS MS、LC UV 或LCMS测量药物浓度。在一个实施方式中，药代动力学参数包括稳态浓度、吸收和终末T1/2中的至少一种。在一个实施方式中，样本中的至少一个是全血。
IX.多模式治疗方法
在一个方面，本文提供了多模式治疗方法，其中给需要这样治疗的受试者施用依米立酮例如ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐通过施用其它治疗模式加以补充。在一个实施方式中，多模式治疗方法包括给结合放射疗法或在确定放射不再有效之后受试者施用包含依米立酮例如ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐的药物组合物。在一个实施方式中，多模式治疗方法包括结合放射疗法给受试者施用包含依米立酮例如ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中包含依米立酮例如ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐的药物组合物和放射疗法同时或以任何顺序依次施用。在一个实施方式中，多模式治疗方法包括以依次的排列给受试者施用包含依米立酮例如 ONC201、其类似物、或其药学上可接受的盐的药物组合物连同放射疗法。在一个实施方式中，多模式治疗方法包括与放射疗法同时，给需要这样治疗的受试者施用包含依米立酮例如ONC201、其类似物、或其药学上可接受的盐的药物组合物。在一个实施方式中，多模式治疗方法用于治疗癌症。在一个实施方式中，多模式治疗方法包括给需要这样治疗的癌症受试者施用包含依米立酮例如 ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐的药物组合物并用放射束照射癌细胞。在一个实施方式中，多模式治疗方法使用适形放射疗法(CRT)技术来传递为癌症受试者处方的剂量体积直方图(DVH)。在一个实施方式中，多模式治疗方法使用调强放射疗法(IMRT)技术将放射传递给癌细胞。在一个实施方式中，多模式治疗方法使用在治疗期间补偿受试者中肿瘤运动的技术(例如，在必须对随着患者呼吸移动的胸部肿瘤施用放射剂量的情况下)。例如，多模式治疗方法使用四维计算机断层扫描(4D CT)的扫描技术来调节所传递的放射场以补偿呼吸周期中的肿瘤运动。
任何合适的放射类型，包括给出分次的γ放射、IMRT(调强放射疗法)、伽玛刀、质子疗法和近距放射疗法可以与多模式治疗方法一起使用。放射疗法和施用依米立酮例如ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐可用于治疗脑肿瘤，例如胶质母细胞瘤或已经从肺癌转移至脑的疾病。多模式治疗方法可用于治疗肺癌、胰腺癌、直肠癌、乳腺癌、肉瘤、前列腺癌、妇科恶性肿瘤和淋巴瘤。伽玛刀经常用于治疗脑转移瘤。在一个实施方式中，多模式治疗方法包括使用质子疗法来治疗癌症，包括脑肿瘤、前列腺癌和任何接近重要器官的肿瘤，后一种情况下非常重要的是对附近正常组织的毒性最小化。
在一个实施方式中，多模式治疗方法包括给需要这样治疗的癌症受试者同时或以组合施用包含依米立酮例如ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐的药物组合物与过继性细胞疗法(例如，CAR-T(JCAR 14、15、16、17，KTE-C19 或CTL019)、其它T细胞(AFM13)、或NK(CDNO-109或NK-92))的组合。
在一个实施方式中，多模式治疗方法消除了微小残留病，而没有增加由依米立酮ONC201、其类似物或其药学上可接受的盐治疗所产生的毒性。在一个实施方式中，多模式治疗方法改善预后和/或减少与接受治疗的受试者中的疾病状态或病症相关的不良副作用。
X.其它依米立酮衍生物、类似物和盐
在一个方面，本文提供了式(10)化合物的类似物及其制备方法。本领域技术人员应理解，上面结合ONC201和式(10)化合物及其盐描述的一般原理和概念，包括与方法和药物组合物相关的原理和概念，以同等的力度适用于下面的类似物及其盐。
在一个实施方式中，类似物具有化合物(25)的结构：
Figure GDA0003815927400000991
其中Y是NR4或O，并且其中R1、R2、R3和R4独立地表示氢、烷基、环烷基、环烷基烷基、羧基、卤代烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳烷基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、烷氧烷基、烷氧羰基、芳烷氧基、芳烷硫基、烷酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基、酰基和杂环自由基。在一个实施方式中，R1，R1、R2、R3和R4任选被取代。在一个实施方式中，R1、R2、R3和R4中的一些或全部氢原子被氘代替。在其它实施方式中，R1、R2、R3和R4独立地选自由H、C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮、C1-4苄基哌嗪和C1-4烷基噻吩基组成的组，其中C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮和C1-4苄基哌嗪任选被C1-4烷基、羟基或卤素取代。在又其它实施方式中，R1、R2、R3和R4独立地选自由H、CH3、CH2Ph、CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、 CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4-二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和 (CH2)3CO-4F-Ph组成的组。
在一个实施方式中，类似物具有化合物(26)的结构：
Figure GDA0003815927400000992
其中R1和R2独立地表示H、烷基、环烷基、环烷基烷基、羧基、卤代烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳烷基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、芳烷氧基、芳烷硫基、烷酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基、酰基和杂环自由基。在一个实施方式中，R1和R2独立地选自由H、C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮、C1-4苄基哌嗪和C1-4烷基噻吩基组成的组，其中C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮和C1-4苄基哌嗪任选被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，R1选自由H、CH3、CH2Ph、CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、 CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4-二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和 (CH2)3CO-4F-Ph组成的组。在一个实施方式中，R2选自由H、CH3、CH2Ph、 CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4- 二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和(CH2)3CO-4F-Ph组成的组。
在一个实施方式中，R1是任选被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、 -CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或–OCpX2p+1，其中p是2至20的整数并且其中X是卤素，包括F、Cl、Br或I；优选F、Cl或 Br；更优选F或Cl。在一个实施方式中，R2是被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、 -CXH2、-CX2H、-CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中p是2至20的整数并且其中X是卤素。
在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。
在一个实施方式中，R2是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、-CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。在一个实施方式中，R2是取代或未取代的杂环烷基烷基，例如吗啉代烷基或哌嗪基烷基基团。在一个实施方式中，R2是取代或未取代的杂芳基烷基，例如异恶唑烷基甲基或吡啶基甲基基团。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、-CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。
在一个实施方式中，类似物具有化合物(27)的结构：
Figure GDA0003815927400001011
其中R1是H、烷基、环烷基、环烷基烷基、羧基、卤代烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳烷基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、芳烷氧基、芳烷硫基、烷酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基、酰基和杂环自由基。在一个实施方式中，R1选自由H、C1-4烷基、C1-4烷基苯基、 C1-4烷基苯基酮、C1-4苄基哌嗪和C1-4烷基噻吩基组成的组，其中C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮和C1-4苄基哌嗪任选被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，R1选自由H、CH3、CH2Ph、 CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4- 二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和(CH2)3CO-4F-Ph组成的组。
在一个实施方式中，R1是任选被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、 -CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中 p是2至20的整数并且其中X是卤素，包括F、Cl、Br或I；优选F、Cl或Br；更优选F或Cl。在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。
在一个实施方式中，类似物具有化合物(28)的结构：
Figure GDA0003815927400001012
其中R1和R2是H、烷基、环烷基、环烷基烷基、羧基、卤代烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳烷基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、芳烷氧基、芳烷硫基、烷酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基、酰基和杂环自由基。在一个实施方式中，R1和R2独立地选自由H、C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮、C1-4苄基哌嗪和C1-4烷基噻吩基组成的组，其中C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮和C1-4苄基哌嗪任选被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，R1选自由H、 CH3、CH2Ph、CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、CH2-(2,4-二F-Ph)、 CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh、CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)和(CH2)3CO-4F-Ph组成的组。在一个实施方式中，R2选自由H、CH3、CH2Ph、CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2- 噻吩基)、CH2CH2Ph、CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4-二F-Ph)、 CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和(CH2)3CO-4F-Ph组成的组。在一个实施方式中，当R1是CH2Ph时，R2不是CH2-(2-CH3-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph 且R2是CH2-(2-CH3-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且R2是CH2-(2,4-二 F-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且R2是CH2-(4-CF3-Ph)。
在一个实施方式中，R1是任选被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、 -CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中 p是2至20的整数并且其中X是卤素，包括F、Cl、Br或I；优选F、Cl或Br；更优选F或Cl。在一个实施方式中，R2是被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、-CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中p是2至20的整数并且其中X是卤素。
在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。
在一个实施方式中，R2是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、 -CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。在一个实施方式中，R2是取代或未取代的杂环烷基烷基，例如吗啉代烷基或哌嗪基烷基基团。在一个实施方式中，R2是取代或未取代的杂芳基烷基，例如异恶唑烷基甲基或吡啶基甲基基团。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、-CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。
在一个实施方式中，类似物具有化合物(29)的结构：
Figure GDA0003815927400001031
其中R1和R2独立地表示H、烷基、环烷基、环烷基烷基、羧基、卤代烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳烷基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、芳烷氧基、芳烷硫基、烷酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基、酰基和杂环自由基。在一个实施方式中，R1和R2独立地选自由H、C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮、C1-4苄基哌嗪和C1-4烷基噻吩基组成的组，其中C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮和C1-4苄基哌嗪任选被C1-4烷基、 C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，R1选自由 H、CH3、CH2Ph、CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、CH2CH2(4-N- 苄基哌嗪)、CH2-(2,4-二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和(CH2)3CO-4F-Ph 组成的组。在一个实施方式中，R2选自由H、CH3、CH2Ph、CH2-((2-Cl)-Ph)、 CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4-二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和(CH2)3CO-4F-Ph组成的组。在一个实施方式中，当R1是CH2Ph时，R2不是CH2-(2-CH3-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph 且R2是CH2-(2-CH3-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且R2是CH2-(2,4-二 F-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且R2是CH2-(4-CF3-Ph)。
在一个实施方式中，R1是任选被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、 -CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中 p是2至20的整数并且其中X是卤素，包括是指F、Cl、Br或I；优选F、Cl 或Br；更优选F或Cl。在一个实施方式中，R2是被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、-CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中p是2至20的整数并且其中X是卤素。
在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。
在一个实施方式中，R2是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、 -CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。在一个实施方式中，R2是取代或未取代的杂环烷基烷基，例如吗啉代烷基或哌嗪基烷基基团。在一个实施方式中， R2是取代或未取代的杂芳基烷基，例如异恶唑烷基甲基或吡啶基甲基基团。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、-CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。
在一个实施方式中，类似物具有化合物(30)的结构：
Figure GDA0003815927400001041
其中R1和R2独立地表示H、烷基、环烷基、环烷基烷基、羧基、卤代烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳烷基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、芳烷氧基、芳烷硫基、烷酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基、酰基和杂环自由基。在一个实施方式中，R1和R2独立地选自由H、C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮、C1-4苄基哌嗪和C1-4烷基噻吩基组成的组，其中C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮和C1-4苄基哌嗪任选被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，R1选自由H、CH3、CH2Ph、CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、 CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4-二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和(CH2)3CO-4F-Ph组成的组。在一个实施方式中，R2选自由H、CH3、CH2Ph、 CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4- 二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和(CH2)3CO-4F-Ph组成的组。在一个实施方式中，当R1是CH2Ph时，R2不是CH2-(2-CH3-Ph)。在一个实施方式中， R1是CH2Ph且R2是CH2-(2-CH3-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且R2是 CH2-(2,4-二F-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且R2是CH2-(4-CF3-Ph)。
在一个实施方式中，R1是任选被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、 -CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中 p是2至20的整数并且其中X是卤素，包括是指F、Cl、Br或I；优选F、Cl 或Br；更优选F或Cl。在一个实施方式中，R2是被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、-CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中p是2至20的整数并且其中X是卤素。
在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、 C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。
在一个实施方式中，R2是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、 -CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。在一个实施方式中，R2是取代或未取代的杂环烷基烷基，例如吗啉代烷基或哌嗪基烷基基团。在一个实施方式中， R2是取代或未取代的杂芳基烷基，例如异恶唑烷基甲基或吡啶基甲基基团。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、-CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。
在一个实施方式中，类似物具有化合物(31)的结构：
Figure GDA0003815927400001061
其中R1和R2独立地表示H、烷基、环烷基、环烷基烷基、羧基、卤代烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳烷基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、芳烷氧基、芳烷硫基、烷酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基、酰基和杂环自由基。在一个实施方式中，R1和R2独立地选自由H、C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮、C1-4苄基哌嗪和C1-4烷基噻吩基组成的组，其中C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮和C1-4苄基哌嗪任选被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，R1选自由H、CH3、CH2Ph、CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、 CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4-二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和 (CH2)3CO-4F-Ph组成的组。在一个实施方式中，R2选自由H、CH3、CH2Ph、 CH2-((2-Cl)-Ph)、CH2-(2-噻吩基)、CH2CH2Ph、CH2CH2(4-N-苄基哌嗪)、CH2-(2,4- 二F-Ph)、CH2-((2-CH3)-Ph)、CH2CHOHPh和(CH2)3CO-4F-Ph组成的组。在一个实施方式中，当R1是CH2Ph时，R2不是CH2-(2-CH3-Ph)。在一个实施方式中， R1是CH2Ph且R2是CH2-(2-CH3-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且R2是 CH2-(2,4-二F-Ph)。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且R2是CH2-(4-CF3-Ph)。
在一个实施方式中，R1是任选被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、 -CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中 p是2至20的整数并且其中X是卤素，包括F、Cl、Br或I；优选F、Cl或Br；更优选F或Cl。在一个实施方式中，R2是被下列取代基中的一种或多种单独或组合在苄基环的邻位、间位和/或对位取代的苄基：-CH3、-NO2、-OCH3、-CXH2、-CX2H、-CX3、-CH2(CX3)、-CH(CX3)2、-C(CX3)3、-CpX2p+1、-OCX3、或-OCpX2p+1，其中p是2至20的整数并且其中X是卤素。
在一个实施方式中，R1是H。在一个实施方式中，R1是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。
在一个实施方式中，R2是取代或未取代的芳基烷基，例如苄基或苯乙基基团。在一个实施方式中，芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、 -CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。在一个实施方式中，R2是取代或未取代的杂环烷基烷基，例如吗啉代烷基或哌嗪基烷基基团。在一个实施方式中， R2是取代或未取代的杂芳基烷基，例如异恶唑烷基甲基或吡啶基甲基基团。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基或卤基取代。在一个实施方式中，杂环烷基烷基或杂芳基烷基被一种或多种选自由卤基、-CH3、-CF3和-OCH3组成的组中的取代基取代。
在一个实施方式中，本文提供了式(100)的化合物：
Figure GDA0003815927400001071
(100)，其中R1和R2独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、芳烷氧基、芳烷硫基和酰基自由基。在一个实施方式中，R1是CH2Ph且 R2是CH2-(2-CH3-Ph)，其是ONC201线性异构体(即TIC-10)
Figure GDA0003815927400001072
TIC-10，缺乏抗癌活性(Jacob等人，Angew.Chem.Int.Ed.，(2014)53：6628； Wagner等人，Oncotarget(2015)5(24)：12728)。但是如实施例中所示，TIC-10 是CXCR7激动剂。CXCR7激动剂可用于肝再生和预防或治疗肝纤维化(Nature (2014)505：97)。
在一个实施方式中、R1和R2独立地选自由H、C1-4烷基、C1-4烷基苯基、 C1-4烷基苯基酮、C1-4苄基哌嗪、C1-4烷基噻吩基、C1-4烷基吡啶基、C1-4烷基异恶唑烷基、C1-4烷基吗啉基、C1-4烷基噻唑基和C1-4烷基吡嗪基组成的组，其中 C1-4烷基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基苯基酮、C1-4苄基哌嗪、C1-4烷基噻吩基、C1-4烷基吡啶基、C1-4烷基异恶唑烷基、C1-4烷基吗啉基、C1-4烷基噻唑基和C1-4烷基吡嗪基任选被C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、全卤代C1-4烷基、或卤基取代。在一个实施方式中，R1和/或R2是取代或未取代的芳基烷基或杂芳基烷基。在一个实施方式中，杂芳基烷基选自C1-4烷基吡咯基、C1-4烷基呋喃基、C1-4烷基吡啶基、C1-4烷基-1,2,4-噻二唑基、C1-4烷基嘧啶基、C1-4烷基噻吩基、C1-4烷基异噻唑基、C1-4烷基咪唑基、C1-4烷基四唑基、C1-4烷基吡嗪基、C1-4烷基嘧啶基、 C1-4烷基喹啉基、C1-4烷基异喹啉基、C1-4烷硫基苯基、C1-4烷基苯并噻吩基、C1-4烷基异苯并呋喃基、C1-4烷基吡唑基、C1-4烷基吲哚基、C1-4烷基嘌呤基、C1-4烷基咔唑基、C1-4烷基苯并咪唑基和C1-4烷基异恶唑基。
在一个实施方式中，R1和/或R2是任选被下列一个或多个取代基在苄基环上取代的苄基：X，-CH3，-NO2，-OCH3，-CN，-CXH2，-CX2H，C2-C4烷基，-CX3， -CH2(CX3)，-CH(CX3)2，-C(CX3)3，-CpX2p+1，-OCX3，-OCpH2p+1，-OCpX2p+1， ORm，SRm，NRmRn，NRmC(O)Rn，SORm，SO2Rm，C(O)Rm，和C(O)ORm；Rm和Rn独立地选自H或C1-C4烷基；并且其中p是2至20的整数并且其中X是卤素，包括F、Cl、Br或I；优选F、Cl或Br；更优选F或Cl。
XI.实施例
应理解，以下的描述和实施例仅仅意味着说明的目的，并不意味着限制本公开的范围。以下实施例意味着说明所公开的实施方式，而不应解释为对它们的限制。除下面描述的化合物以外的其它化合物可以通过以下反应方案或其适当的变化或修改来制备。
实施例1.2-氯苄基氨基-2-咪唑啉氢碘化物的合成
向搅拌过的2-甲硫基-2-咪唑啉氢碘化物(244mg，1.00mMol)在无水二恶烷(2.0mL)中的溶液添加2-氯苄基胺(141mg，1.0mMol)。将反应混合物在 70℃、氩气下搅拌90分钟。将溶液冷却至室温，在烧结漏斗上过滤，用冷二恶烷(2mL)洗涤并真空干燥。得到白色固体化合物4·HI(R2＝2-氯苄基)(242mg， 72％)，并不经进一步纯化即使用。
实施例2.2-氯苄基氨基-2-咪唑啉的合成
在7℃下向2-氯苄基氨基-2-咪唑啉盐酸盐(242mg，0.72mMol)在水(3mL) 中的溶液添加1.0N氢氧化钠(2mL)。将反应混合物在7℃、氩气下搅拌30分钟。之后添加二氯甲烷(5mL)并将混合物再搅拌5分钟。反应混合物用二氯甲烷(2×2.5mL)提取。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。所得的游离碱 (150mg，100％)得到为粘稠液体并且无需任何进一步纯化即用于下一反应。 MS(ESI)210(M+H)。
实施例3.4-氧代-3-哌啶羧酸甲基-1-苄酯(化合物(6))的合成。
在7℃下向搅拌过的4-氧代-3-哌啶羧酸甲基-1-苄酯盐酸盐(5.7g，20mMol) 在乙酸乙酯(50mL)中的溶液添加三乙胺(6mL)。将反应混合物在7℃、氩气气氛下搅拌30分钟。反应混合物用乙酸乙酯(2×50mL)提取，用水(50mL) 洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。所得的游离碱残余物(5， R1＝苄基)为粘稠油状物，无需任何进一步纯化即用于下一反应。MS(ESI)248 (M+H)。
实施例4.ONC202(化合物(14))的合成
向2-氯苄氨基-2-咪唑啉(150mg，0.72mMol)、4-氧代-3-哌啶羧酸甲基-1- 苄酯(5，R1＝苄基)(195mg，0.79mMol)在1-丁醇(2mL)中的溶液添加PPTS (10mg)，并将混合物在室温下搅拌48小时。之后，将反应混合物在125℃至 130℃回流2小时。真空除去溶剂，用乙酸乙酯(10mL)提取，用饱和碳酸氢钠溶液(2×10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。粗游离碱通过RP HPLC(10％-40％乙腈/水)纯化，产生ONC902 TFA盐，为白色固体(228mg，50％收率)。MS(ESI)407(M+H)。
使用该同样的过程从不同的苄胺开始来制备各种类似物，例如ONC203、 204、205、206、912、210、211、212、213、214、217、218、219、220、221、 222、223、224、225和226。
实施例5.ONC207(化合物(19))的合成
在室温和氮气下，在0.5小时内向60％氢化钠(3.5g，88mMol)在无水甲苯(50mL)中的悬液滴加碳酸二甲酯(4.32g，48.0mMol)。加入几滴甲醇后，将溶解在无水甲苯(20mL)中的1-叔丁氧基羰基-4-哌啶酮(4.8g，24mMol)在搅拌的同时在80℃经1小时滴加到反应混合物中。将反应混合物在相同温度下搅拌3小时，然后冷却至0℃(冰浴)并用乙酸调节至pH 6-6.5。所得的冷混合物用水(10mL)稀释，并用5％氢氧化钠溶液调节至pH 8。分离甲苯层，并用甲苯(20mL)提取水层。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将化合物真空干燥，产生1-叔丁氧基羰基-4-氧代-3-哌啶羧酸甲酯(5.0g，80％)。得到的化合物无需任何进一步纯化即可转入下一个反应。
含2-氯苄氨基-2-咪唑啉(190mg，1mMol)、1-叔丁氧基羰基-4-氧代-3-哌啶羧酸甲酯(315mg，1.1mMol)的1-丁醇(2mL)添加PPTS(10mg)，并将混合物在室温下搅拌48小时。之后，将反应混合物在125℃至130℃回流2小时。真空除去溶剂，用乙酸乙酯(10mL)提取，用饱和碳酸氢钠溶液(2×10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。粗游离碱用10％三氟乙酸的二氯甲烷溶液裂解，通过RP HPLC(10％-40％乙腈/水)纯化，产生ONC907(262mg，50％)TFA盐，为白色固体，MS(ESI)297(M+H)。
实施例6.ONC209(化合物(21))的合成
将ONC907(100mg，0.2mMol)、苯乙基溴(55.0mg，0.28mMol)和碳酸钾(150mg，1.0mMol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物加热到70℃达12小时。真空除去溶剂，用乙酸乙酯(10mL)提取，并用水(5mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。粗游离碱通过RP HPLC(10％-40％乙腈/水)纯化，产生ONC209(62mg，50％)TFA盐，为白色固体，MS(ESI)401(M+H)。
使用该同样的过程从不同的卤化物开始产生ONC215和214。化合物227、 228、229、230、231、232、233、234、235和236使用与实施例1和5相似的过程从不同的苄胺开始来制备。然后用如上所述的不同卤化物处理R1为H的中间体化合物。
从ONC215通过用TFA处理来制备化合物ONC216。
化合物(72)通过使类似于实施例5制备的前体NH化合物反应并用氧化苯乙烯处理它来制备。
实施例7.ONC208(化合物(20))的合成
向2-氯苄氨基-2-咪唑啉(190.0mg，1.0mmol)、4-氧代-3-哌啶羧酸甲酯(185.0mg，1.0mMol)在1-丁醇(2mL)中的溶液添加PPTS(10mg)，并将混合物在室温下搅拌48小时。之后，将反应混合物在125℃至130℃回流2小时。真空除去溶剂，用乙酸乙酯(10mL)提取，用饱和碳酸氢钠溶液(2×10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。粗游离碱通过 HPLC 10％-40％乙腈和水纯化，产生ONC908(270.0mg，50％)TFA盐，为白色固体，MS(ESI)311(M+H)。
实施例8.ONC201(化合物(1))的合成
向在2L圆底烧瓶中的搅拌过的800mL饱和NaHCO3分批添加化合物(3) (239.7g，0.845mol，1.6当量)。向所生成的混合物添加正丁醇(500mL)，将其搅拌30分钟，然后转移至分液漏斗。分离出含有化合物(4)的有机相并转移到配备有机械搅拌、N2入口、热电偶、冷凝器和Dean-Stark分水器的2L三颈圆底烧瓶中。向烧瓶的内容物添加化合物(5)(100g，0.528mol，1当量)和对甲苯磺酸吡啶鎓(PPTS)(6.63gm 0.026mol，5mol％)。将所生成的混合物加热至回流6小时。根据需要将反应混合物中的水分离成Dean-Stark分水器。将回流温度从93℃升高到118℃。通过HPLC监测反应进程。当HPLC上化合物(1) 的峰面积随反应时间保持不变时，停止反应。
实施例9.ONC201二盐(化合物(1)·2HCl)的合成
不分离化合物(1)，将实施例8的反应混合物用水(500mL)洗涤，并用甲基叔丁基醚(MTBE)(800mL)稀释。将有机相用水(500mL×2)洗涤，并转移到配备有机械搅拌、N2入口、热电偶、冷凝器和Dean-Stark分水器的3L三颈圆底烧瓶中。在搅拌反应混合物的同时，滴加1NHCl的二噁烷-METBE溶液(4N HCl的二恶烷溶液：300mL，1.2mol，2.27当量；MTBE：1200mL)，直至在添加HCl时不再从反应混合物中沉淀出固体。将反应混合物加热至在60-65℃回流2小时。根据需要将水分离到Dean-Stark分水器中。冷却至室温后，将固体沉淀物通过烧结玻璃漏斗过滤并分别用正丁醇-MTBE(1:2，600mL)和MTBE (600mL)洗涤。将固体在真空烘箱中65℃下干燥过夜(16小时)，得到200g 黄色固体。
向配备有机械搅拌、N2入口、热电偶和冷凝器的2L三颈圆底烧瓶中添加上述固体(200g)，然后是乙醇(1000mL)。将混合物加热至78℃回流2小时。冷却到室温后，将固体通过烧结玻璃漏斗过滤，并用乙醇(200mL×3)洗涤。将湿固体在真空烘箱中85℃下干燥3天，直到残余溶剂符合规定。以49％收率得到120g化合物(2)，为白色固体，HPLC纯度99.7％。
实施例10.依米立酮的活性
基于上述合成制备了许多依米立酮。对于每种化合物，测量用所述化合物处理后72小时的人癌细胞存活率。测定效力的变化(相对于ONC201)并在表 3中显示。
表3：ONC201类似物的相对效力
Figure GDA0003815927400001121
Figure GDA0003815927400001131
*相对于ONC201的效力；A表明效力增加>ONC201的2倍；B表明效力在ONC201的2倍以内；和C表明效力降低>ONC201的2倍。
ONC212
Figure GDA0003815927400001132
确定ONC201和ONC212(5nM-5μM，72h)在处理几种急性髓性白血病 (AML)细胞系(n＝3)时的IC50并在下表4中显示。
表4
AML细胞系 ONC201 IC<sub>50</sub>(μM) ONC212 IC<sub>50</sub>(μM)
MV411 3.25 0.01
HL60 >5 0.21
MOLM14 3.92 0.01
测量用ONC212和阿糖胞苷处理(5nM-5μM，24h)(n＝3)的MV411 AML 细胞的细胞存活率(图29A)。此外，测量用ONC212处理(5nM-5μM，72h) (n＝3)的MOLM14、MV411 AML细胞、MRC5肺成纤维细胞和Hs27a骨髓细胞的细胞存活率(图29B)。测量用ONC212(250nM)处理MOLM14和MV411 AML细胞4、8、24、48、72和96h的细胞存活率。在这些时间点用新鲜培养基替换ONC212培养基，并在96h测定所有样品的细胞存活率。(n＝2)(图29C)。
此外，与载体处理的对照组相比，通过向携带有人结肠癌异种移植物小鼠口服或腹膜内施用单剂化合物(52)(ONC212)导致肿瘤体积显著减小(图24)。化合物(52)具有宽治疗窗，因为它在小鼠中在至少高达225mg/kg的剂量下耐受良好。
此外，ONC212在ONC201抗性AML异种移植模型中表现出功效(图30)。将MV411 AML细胞(5×106)皮下植入无胸腺裸侧腹。ONC212和ONC201按指示口服(PO)施用。在指定的天数测量肿瘤体积(A和B)和体重(C)(n＝10)。 *表示相对于载体p<0.05。
体外评价ONC212在AML中的功效，并且与ONC201相比，高达400倍更加有效(表4)。ONC212在对标准治疗阿糖胞苷耐受的AML细胞中也是有效的(图29A)。虽然功效稳健地改善，但ONC212仍维持了体外的宽治疗窗口并且在有效浓度下对正常细胞无毒性(图29B)。在250nM下暴露8小时的ONC212 足以引起MOLM14和MV411 AML细胞中细胞存活率的稳健降低(图29C)。 ONC201需要至少24-48小时暴露才能发挥功效。
在有耐受标准治疗阿糖胞苷的MV411 AML细胞的白血病异种移植模型中测定ONC212功效(图30)。ONC212 50mg/kg通过每周一次口服施用显著降低了白血病异种移植肿瘤生长，而ONC201在该模型中在相似剂量下无效(图 30A)。有趣的是，ONC212每两周一次以25mg/kg施用和每周一次/每两周一次以5mg/kg施用是无效的(图30B)。这些ONC212施用方案均不与体重减轻(图 30C)或大体观察结果相关。
ONC212 25mg/kg代表小鼠和大鼠非GLP口服单剂量研究中的NOAEL，其也是小鼠异种移植研究中的有效剂量。ONC212的毒性比ONC201大约高10倍 (在大鼠非GLP口服单剂量研究中NOAEL 225mg/kg)。
ONC206
Figure GDA0003815927400001141
ONC206在尤文氏肉瘤异种移植模型中表现出功效(图31)。将MHH-ES-1 尤文氏肉瘤细胞(5×106)皮下植入无胸腺裸鼠的侧腹。在第1天和第13天按指示施用ONC206(PO)和甲氨蝶呤(IV)。在指示的天数测量肿瘤体积(图31A) 和体重(图31B)(n＝4)。
另外，确定ONC201和ONC206(5nM-5μM，72h)在处理几种细胞系(n＝3) 时的IC50并在下表5中显示。
表5
细胞系 ONC201 IC<sub>50</sub>(μM) ONC206 IC<sub>50</sub>(μM)
MV411(AML) 3.25 0.2
K562(CML) >5 0.22
MOLM14(AML) 3.92 0.27
MHH-ES-1(尤文氏肉瘤) 5.65 0.61
HFF(正常成纤维细胞) >5
与ONC201相比，ONC206在体外效力方面显示出高达20倍的改善，且在治疗剂量下对正常细胞没有体外毒性(表5)。关于ONC206，在大鼠非GLP单剂口服研究中，相对于ONC201(NOAEL 225mg/kg)，总体上观察到仅2倍毒性增加(NOAEL 125mg/kg)。在尤文氏肉瘤模型中无毒性的体内功效(图31)。 ONC206的疗效比得上化疗甲氨蝶呤，但化疗与体重减轻有关。
ONC213
Figure GDA0003815927400001151
使用针对抑制蛋白募集的异源报道分子测定对GPCR活性进行体外谱分析，抑制蛋白募集是GPCR活化的标志，表明ONC213选择性靶向DRD2/3和 GPR132/91(图32)。DRD2/3和GPR132/91的双重靶向代表了一种无毒性抗癌功效的新策略。ONC213是DRD2/3抑制剂和GPR132/91激动剂。ONC213的 DRD2/3效力大于ONC201但小于ONC206。ONC213的GPR132效力小于 ONC212。具体地，ONC213在HCT116/RPMI8226癌细胞中表现出与ONC212 相似的体外抗癌效力，但对正常细胞的体外毒性比ONC212降低。ONC213安全性谱在小鼠MTD研究中证实，NOAEL 75mg/kg是ONC212(25mg/kg)的三倍。ONC213的GPR91激动剂活性为免疫学、免疫肿瘤学和造血应用提供了机会(Nature Immunology 9：1261(2008)；J Leukoc Biol.85(5)：837(May 2009))。
ONC237
Figure GDA0003815927400001161
使用针对抑制蛋白募集的异源报道分子测定对GPCR活性进行体外谱分析，抑制蛋白募集是GPCR活化的标志，表明ONC237选择性靶向DRD5和GPR132 (图34)。ONC237是GPR132激动剂和DRD5拮抗剂，与ONC201相比具有降低的抗癌效力(IC50 31.2μM)。该数据显示，GPR132激动剂活性与DRD5(D1 样多巴胺受体)拮抗剂活性相结合，导致与结合了GPR132激动剂活性和DRD2/3 拮抗剂活性的ONC213相比抗癌效应差。
ONC236
Figure GDA0003815927400001162
使用针对抑制蛋白募集的异源报道分子测定对GPCR活性进行体外谱分析，抑制蛋白募集是GPCR活化的标志，表明ONC236是高度选择性的GPR132激动剂(图35)。在HCT116细胞中，ONC236的抗癌效力(IC50 88nM)比得上 ONC212(10nM)，优于ONC206/ONC201，响应的完整性优于ONC201但不优于ONC212。
ONC234
Figure GDA0003815927400001163
使用针对抑制蛋白募集的异源报道分子测定对GPCR活性进行体外谱分析，抑制蛋白募集是GPCR活化的标志，表明ONC234是广谱且有力的GPCR靶向小分子(图36和38)。ONC234命中几种GPCR，包括作为肾上腺素能、组胺、 5-羟色胺、CHRM、CCR、DRD2/5受体的拮抗剂活性以及CXCR7激动剂活性的活性。ONC236在HCT116细胞中具有与ONC206相似的抗癌功效(IC50 234nM)，与ONC212相同的响应完整性，并且优于ONC201。
ONC201线性异构体(TIC-10)
Figure GDA0003815927400001171
使用针对抑制蛋白募集的异源报道分子测定对GPCR活性进行体外谱分析，抑制蛋白募集是GPCR活化的标志，表明ONC201线性异构体(TIC-10)是 CXCR7激动剂(图37)。CXCR7激动剂可用于肝再生和预防/治疗纤维化，例如肝纤维化(Nature 505：97(2014))。纤维化是器官或组织中过量纤维结缔组织形成，包括由于伤口愈合的结果。纤维化的示例包括，肺纤维化，包括囊性纤维化和特发性肺纤维化；癌症治疗后的放射诱导的肺损伤；肝纤维化(肝硬化)；心脏纤维化，包括心房纤维化、心内膜心肌纤维化和陈旧性心肌梗塞；神经胶质瘢痕；关节纤维化；克罗恩病；掌腱膜挛缩症；瘢痕疙瘩；纵隔纤维化；骨髓纤维化；佩罗尼氏病；肾源性系统性纤维化；进行性大块纤维化；腹膜后纤维化；硬皮病/系统性硬化症；和粘连性关节囊炎。
实施例11.ONC201的GPCR拮抗作用
ONC201在β-抑制蛋白G蛋白偶联受体(GPCR)活性的全细胞功能测定中评价，其通过检测β-抑制蛋白与作为报道分子的活化GPCR的相互作用直接测量多巴胺受体活性。对于每种多巴胺受体(DRD1，DRD2S，DRD2L，DRD3， DRD4，和DRD5)，从冷冻储存细胞扩增过量表达报道分子构建体的细胞系。将细胞以20μL的总体积接种到白壁384孔微量培养板中并在37℃下温育，然后测试，用拮抗剂继之以激动剂以EC80浓度攻击。进行样品原液的中间稀释以在测定缓冲液中产生5×样品。将3.5μL的5×样品添加到细胞中并在37℃或室温下温育30分钟。载体浓度为1％。将5μL在测定缓冲液中的6×EC80激动剂添加到细胞中并在测定读数前在37℃或室温下温育90或180分钟。％拮抗作用使用下式％计算：拮抗作用＝100％×(1-(测试样品的平均RLU-载体对照的平均 RLU)/(EC80对照的平均RLU-载体对照的平均RLU)。
实施例12：ONC201对DRD2的选择性拮抗作用。
ONC201是同类首个小分子，是在对肿瘤选择性促凋亡途径的p53非依赖性诱导物进行表型筛选中发现的。基于对侵袭性和难治性肿瘤的明显功效和极好的安全性，正在五项早期临床试验中评价口服ONC201作为所挑选的晚期癌症的新治疗剂。
在本实施例中，报道了ONC201与特定多巴胺受体家族成员之间选择性直接分子相互作用的预测和验证。实验性GPCR谱分析表明ONC201选择性拮抗 D2样、而不是D1样多巴胺受体亚家族。异源表达系统中的报道分子测定揭示， ONC201选择性拮抗DRD2和DRD3的短和长同种型，而对DRD4的效力较弱且对DRD1或DRD5没有拮抗作用。催乳素分泌增加是几种有力靶向DRD2受体的精神药物的DRD2拮抗作用的临床标志。在关于晚期实体肿瘤的首次人体试验中，用ONC201治疗的患者的外周血中的ELISA测量结果确定了所评价的 10/11个患者表现出催乳素诱导(平均2倍)。
使用TCGA数据库，发现D2样多巴胺受体亚家族，特别是DRD2，在几种恶性肿瘤中普遍存在并选择性过表达。临床前报告显示DRD2抑制经由诱导 ATF4/CHOP以及抑制Akt和ERK信号传导以赋予抗肿瘤功效但不杀死正常细胞，所有这些都是ONC201的属性。
方法
ONC201二盐酸盐从Oncoceutics获得。对激酶组的激酶抑制测定按描述进行(参见Anastassiadis等人，Nat Biotech 29：1039(2011))。GPCR抑制蛋白募集和cAMP调制报道分子测定按描述进行(参见McGuinness等人，Journal of Biomolecular Screening 14：49(2009))。将表达几种GPCR靶标之一的 PathHunterTM(DiscoveRx)β-抑制蛋白细胞在适当的细胞铺板试剂中以20μL 体积以5000个细胞/孔铺在384孔白色固体底部测定板(Corning3570)上。细胞在37℃、5％CO2下温育18-24小时。样品在含有0.05％无脂肪酸的BSA(Sigma)的缓冲液中制备。对于激动剂模式测试，将样品(5μL)添加到预先铺板的细胞中并在37℃、5％CO2下温育90分钟。对于拮抗剂模式测试，将样品(5μL)添加到预先铺板的细胞中，并在37℃、5％CO2下温育30分钟，然后在37℃、5％CO2下添加EC80激动剂(5μL)90分钟。对于Schild分析，将样品(5μL)添加到预先铺板的细胞中，并在37℃、5％CO2下温育30分钟，然后在37℃、5％CO2下添加连续稀释的激动剂(5μL)90分钟。界定每种测定模式的最大和最小响应的对照孔进行平行测试。通过添加15μL PathHunter检测试剂，在室温下温育1-2 小时，并在Perkin Elmer Envision读板器上读数，来测量Arrestin募集。对于激动剂和拮抗剂测试，使用适当的对照将数据归一化为效力百分比，并拟合为S 形剂量-响应(可变斜率)，Y＝底+(顶-底)/(1+10^((LogEC50-X)*Hill斜率))，其中X是化合物的对数浓度。对于Schild分析，使用适当对照将数据归一化为效力百分比，并使用全局拟合拟合为Gaddum/Schild EC50位移，其中Y＝底+(顶 -底)/(1+10^((LogEC-X)*Hill斜率))、Antag＝1+(B/(10^(-1*pA2)))^Schild 斜率和LogEC＝Log(EC50*Antag)。EC50/IC50分析在CBIS数据分析套件(Cheminnovation)中进行，Schild分析在GraphPad Prism 6.0.5中进行。
结果
ONC201是针对挑选的晚期癌症的II期临床试验中的小分子。它是在对促凋亡TRAIL途径的p53非依赖性诱导物的表型筛选中发现的。虽然已经表征了 ONC201诱导的ATF4/CHOP上调和Akt/ERK信号传导失活(Allen等人，Science translational medicine5，171ra117-171ra117(2013))对其抗癌活性的贡献，但其分子结合靶仍然难以捉摸。
使用针对抑制蛋白募集的异源报道基因测定对GPCR活性进行体外谱分析，抑制蛋白募集是GPCR活化的标志，表明ONC201选择性拮抗D2样(DRD2/3/4)、而不是D1样(DRD1/5)多巴胺受体亚家族(图4B和5A)。在评价条件下未观察到肾上腺素能受体α受体或其它GPCR的拮抗作用。在DRD2家族中，ONC201 拮抗DRD2和DRD3的短和长同种型两者，对DRD4的效力较弱。进一步表征针对DRD2L的ONC201介导抑制蛋白募集拮抗作用通过Gaddum/Schild EC50位移分析评估，该分析确定ONC201的解离常数为2.9μM，其等效于它在许多人癌细胞中的有效剂量(图4C)。获得响应ONC201的cAMP调节的验证结果，其是DRD2L活化的另一种量度(图4D)。多巴胺逆转直至100μM ONC201的剂量依赖性拮抗作用的能力表明DRD2L的直接竞争性拮抗作用(图5B和5C)。与BANDIT预测的ONC201特异性一致，在ONC201和核激素受体、激酶组、或FDA批准的癌症疗法的其它药物靶标之间未鉴别出显著的相互作用(图5D 和5E)。有趣的是，ONC201的生物无活性的组成异构体(Wagner等人，Oncotarget 5：12728(2014))不抑制DRD2L，表明该受体的拮抗作用可能与其生物活性有关(图5F)。总之，这些研究确定了ONC201选择性拮抗D2样多巴胺受体亚家族，该亚家族似乎是肿瘤学中有希望的治疗靶标，并且ONC201是在几个正在进行的II期临床研究中利用这种治疗范例的第一个化合物。
实施例13：DRD2的鸟枪诱变表位作图
鸟枪诱变使用高通量细胞表达技术来表达和分析真核细胞内突变靶蛋白的大型文库。将蛋白质中的每个残基单独突变为丙氨酸或其它规定的残基，以测定功能的变化。蛋白质在标准哺乳动物细胞系内表达，因此甚至可以绘制需要真核翻译或翻译后加工的困难蛋白质。
首先，使用鸟枪诱变筛选测定来评估和鉴定用野生型DRD2筛选DRD2拮抗剂ONC201的条件。然后，制备DRD2 Ala扫描文库，并使用鸟枪诱变技术以单氨基酸分辨率绘制对ONC201结合至关重要的残基。
DRD2鸟枪诱变文库：
亲本质粒：DRD2
文库大小：442个突变体克隆(完整蛋白质)
突变策略：丙氨酸扫描诱变
细胞类型：HEK-293T
筛选测定：钙通量
表位标签：C-端V5/HIS6
亲本构建：将编码全长人类DRD2的DNA(登录号：NP_000786.1； MDPLNLSWYDDDLERQNWSR PFNGSDGKAD RPHYNYYATL LTLLIAVIVF GNVLVCMAVS REKALQTTTN YLIVSLAVADLLVATLVMPW VVYLEVVGEW KFSRIHCDIF VTLDVMMCTA SILNLCAISI DRYTAVAMPM LYNTRYSSKRRVTVMISIVW VLSFTISCPL LFGLNNADQN ECIIANPAFV VYSSIVSFYV PFIVTLLVYI KIYIVLRRRRKRVNTKRSSR AFRAHLRAPL KGNCTHPEDM KLCTVIMKSN GSFPVNRRRV EAARRAQELE MEMLSSTSPPERTRYSPIPP SHHQLTLPDP SHHGLHSTPD SPAKPEKNGH AKDHPKIAKI FEIQTMPNGK TRTSLKTMSRRKLSQQKEKK ATQMLAIVLG VFIICWLPFF ITHILNIHCD CNIPPVLYSA FTWLGYVNSA VNPIIYTTFNIEFRKAFLKI LHC(SEQ ID NO： 1)亚克隆到哺乳动物高表达载体中。对该亲本构建体进行序列验证，然后通过检测响应多巴胺的钙通量来验证哺乳动物细胞的表达。对于高通量加工，已经验证了来自质粒制备物的DNA收率。
测定设置：针对在人细胞中表达的DRD2，成功优化了DRD2特异性钙通量测定。激动剂剂量-响应测定用于鉴定在优化拮抗剂ONC201抑制DRD2特异性钙通量中使用的合适的多巴胺浓度。随后的剂量-响应抑制测定鉴定了抑制 DRD2多巴胺响应>95％的ONC201浓度。
钙通量测定优化：
受体活性测定.DRD2活性使用已发表的GPCR测定来评估(Greene，T.A. 等人，(2011)PLoS One 6，e20123)。简而言之，在384孔格式中用野生型DRD2 或阴性对照GPCR的表达构建体转染HEK-293T细胞。22小时后，使用Flexstation II-384荧光读数器(Molecular Devices)在一定多巴胺浓度范围内(300pM-100nM) 进行钙通量实验。使用Prism 5.0软件(GraphPad Software，Inc)分析数据集并表示为超过基线信号的百分比。
对于表达DRD2而非对照GPCR的细胞，添加多巴胺导致细胞钙通量增加，按增加的荧光测量。荧光峰高度对多巴胺浓度的剂量响应曲线表明在表达DRD2 而不是对照GPCR的细胞中多巴胺诱导的钙通量强(EC50＝0.45nM)。这表明钙通量测定可用于测试ONC201抑制。
DRD2钙通量抑制测定优化
在钙通量测定中鉴定多巴胺的EC50后，在几种多巴胺浓度下研究了DRD2 特异性钙通量的ONC201抑制。使用1nM多巴胺(比多巴胺EC50高>2倍)和一定范围的ONC201浓度(1nM至100μM)，在测试的最高浓度下观察到多巴胺诱导的DRD2钙通量的ONC201抑制(图9A)，并被100μM ONC201完全抑制(IC50＝21.5μM)。100μM ONC201对钙通量的抑制不是广泛抑制GPCR或对细胞的非特异性作用的结果，因为ONC201对表达对照GPCR的细胞的钙通量活性没有效应(图9B)。
对通过100μM ONC201抑制DRD2钙通量而获得的许多重复值的分析表明是稳健的测定，Z’值为0.61。Z’值是测定质量的量度，由用或不用ONC201获得的钙通量的重复测定所得的平均值和标准偏差计算。
DRD2抑制剂的比较
将DRD2的ONC201抑制与DRD2拮抗剂螺哌隆和多潘立酮的ONC201抑制进行比较(图10)，螺哌隆和多潘立酮已被描述为在低于通过ONC201进行抑制所需的100μM的浓度下抑制DRD2。这些拮抗剂在100pM和1μM之间的浓度下进行筛选，二者均显示出对多巴胺诱导的钙通量的完全抑制，其中螺哌隆具有IC50＝19nM，多潘立酮IC50＝47nM。这些值与先前的表征一致并且证明对于 ONC201(21.5μM)获得的相对高的IC50不是由使用钙通量测定测量DRD2活性引起的。
确定ONC201响应多巴胺对DRD2特异性钙通量的抑制的最佳筛选条件。这些条件对多巴胺产生稳健的响应，该响应通过添加ONC201到100μM而降低>95％，并且该测定证明了重复之间的变异性低。这些数据表明所选条件适合于成功的高通量筛选。DRD2突变文库的进一步筛选是在多巴胺浓度为1nM和 ONC201浓度为100μM下。
筛选DRD2丙氨酸扫描文库对多巴胺的响应
DRD2丙氨酸扫描突变文库(以及将丙氨酸变为丝氨酸)包含442个克隆，覆盖DRD2蛋白的残基2-443，100％的靶残基。DRD2突变文库首先通过用多巴胺(1nM)在不存在ONC201情况下的钙通量测定进行筛选，以鉴定其突变减小多巴胺诱导的钙通量的残基。我们鉴定了28个对多巴胺诱导的DRD2通量至关重要的氨基酸残基(图11)。
从该分析鉴定的残基列于表6中并在图11中显示。如果克隆表现的通量值比整个文库的平均钙通量值低2个标准差(AV-2SD)，则认为它们的钙通量有缺陷。
表6：对多巴胺诱导的钙通量至关重要的DRD2残基
Figure GDA0003815927400001221
Figure GDA0003815927400001231
筛选DRD2丙氨酸扫描文库的ONC201抑制多巴胺诱导的信号传导鉴定了 ONC201抑制所需的残基
为了鉴定对于ONC201抑制DRD2而言重要的残基，通过钙通量测定筛选 DRD2丙氨酸扫描突变文库在抑制浓度的ONC201存在下对多巴胺作出响应的能力，使用1nM的多巴胺和100μM的ONC201。鉴定了对ONC201抑制活性关键的8个残基(图12)。通过该筛选鉴定的所有残基均显示单独用多巴胺的高钙通量(表7)。如果克隆表现的通量值比整个文库的平均钙通量值高出大于2个标准差(AV+2SD)，则认为它们对ONC201抑制是至关重要的。表7还显示了这些关键克隆的钙通量值，这些钙通量值是用250μM ONC201或不用ONC201 (多巴胺1nM)进行的类似实验获得的，还有关键性残基在5种DRD受体间的％保守性，该残基在各受体中都存在。
表7：对ONC201抑制多巴胺诱导的钙通量关键的DRD2残基
Figure GDA0003815927400001241
由于整个文库中100μM ONC201的平均抑制为约75％，我们还在250μM ONC201下进行筛选，以确定在较高抑制水平下关键性残基是否相同。在这种情况下，多巴胺诱导的钙通量被抑制了大约93％，并且使用通量值比文库的平均钙通量值高出大于2个标准差(AV+2SD)的相同标准，之前鉴定的残基V91、 E95和I397对于在250μM ONC201下的抑制也是至关重要的(表7)。
结论：
在通过多巴胺诱导钙通量测定进行DRD2丙氨酸扫描突变文库的初始筛选中，28个突变极大地降低了钙通量，鉴定了对DRD2功能至关重要的残基。如在GPCR CXCR4的类似分析中发现的，关键性残基分布在DRD2的整个蛋白质中、预测的多巴胺结合袋、跨膜区域中和细胞质暴露部分中。这28个残基对多巴胺结合、通过跨膜结构域的信号转导或G蛋白偶联是至关重要的。可以使用与对CXCR4进行的详细分析相当的详细分析以及DRD3-依替必利结构的结构分析(Chien等人，2010)，赋予每个DRD2关键性残基特定的功能。
为了鉴定对于ONC201抑制DRD2而言重要的残基，通过用多巴胺和100μM ONC201进行钙通量测定来筛选DRD2丙氨酸扫描突变文库。这些筛选鉴定出8 个残基对ONC201抑制DRD2依赖性多巴胺诱导钙通量为至关重要的-L81、 V91、E95、T165、A177、Y192、V196和I397。残基V91、E95和I397也被鉴定为对耐受250μM ONC201的DRD2抑制而言至关重要，表明它们是关键 ONC201相互作用残基。这些残基限定了相对大的配体结合位点，由于与多巴胺和依替必利相比ONC201的尺寸较大，这并不出乎意料。这些残基的位置通常与在介导ONC201抑制DRD2依赖性多巴胺诱导钙通量中的作用一致。对丙磺舒抑制GPCR味觉受体至关重要的残基是以前鉴定的(Greene等人，2011)，其中残基的位置与非竞争性抑制机制一致。相反，在此对DRD2鉴定的残基与 ONC201在多巴胺结合位点的竞争性抑制一致。当对同源受体DRD3的结构建模时，鉴定的大多数残基围绕含有共结晶拮抗剂依替必利的结合袋，其中8个鉴定的残基中的5个在DRD2和DRD3之间是保守的。所述残基中的两个看起来更远离推定的结合位点(A177和L81)，并且可能以更变构的方式影响ONC201 结合。有助于ONC201抑制的其它残基可以使用具有不同于多巴胺的结构的 DRD2激动剂来鉴定。
实施例14：确定未标记的ONC201二盐酸盐对人D2S受体的结合&解离速率常数
在本实施例中，确定了未标记的ONC201二盐酸盐对D2S受体的kon/koff 比率。kon/koff比率估算根据下列文献描述中的方法通过竞争性配体结合进行： M.R.Dowling&S.J.Charlton(2006)Brit.J.Pharmacol.148：927-937和H.J. Motulsky&L.C.Mahan(1984)Mol.Pharmacol.25：1-9。参考该方法，未标记的测试化合物的kon/koff比率由其Ki值(竞争结合)及其对放射性配体的结合动力学(竞争动力学)的影响计算。
首先，确定ONC201二盐酸盐的IC50和Ki值，以及对竞争动力学实验适当的化合物浓度的选择。然后，确定放射性配体([3H]甲基螺哌隆)的kon和koff 速率常数。最后，确定未标记的ONC201二盐酸盐的kon和koff速率常数。 ONC201二盐酸盐在竞争结合测定中以8个浓度一式两份(n＝2)测试，并确定 IC50和Ki值。
参照化合物(+)布他拉莫和测试化合物ONC201-2HCL成功竞争[3H]甲基螺哌隆，IC50值分别为2.5nM和21μM。之前，化合物ONC201-2HCL得出16μM 的类似IC50值。对于竞争结合测定，选择以下6种浓度的ONC201-2HCL：5/10 /20/40/60/80μM。
确定[3H]甲基螺哌隆对D2S受体的结合动力学。为此，将[3H]甲基螺哌隆(浓度为0.3nM)与D2S受体膜一起温育12个不同的温育时间以测量结合速率。每个温育时间用布他拉莫(10μM)测量非特异性结合。在[3H]甲基螺哌隆(0.3nM) 与D2S受体膜温育60分钟后，通过添加过量的布他拉莫(10μM)引发解离，并在12个不同的温育时间后测量信号降低。实验一式三份进行(n＝3)，温育时间调整为0/30/60/80/120/180/240/300/360/420/480分钟和24小时用于结合动力学，以及2/5/8/10/15/20/25/30/40/60/120/180分钟用于解离动力学。
对D2S受体，[3H]甲基螺哌隆表现出kon值为2.3×108M-1min-1和koff值为0.009506min-1(并因此t1/2值为73分钟)。从结合/解离实验的结果计算的Kd (0.04nM)与在饱和实验中观察到的Kd(0.15nM)相比处于相同的范围，从而验证了实验。
测试了六种浓度的未标记ONC201-2HCl对[3H]甲基螺哌隆(0.3nM)的结合动力学的效应。每个温育时间用布他拉莫(10μM)测量非特异性结合。使用与上述相同的12个温育时间：2/5/8/10/15/20/25/30/40/60/120/180 分钟。在不存在化合物的情况下进行测量作为阴性对照。
对D2S受体，ONC201-2HCl表现出kon值为4.1×105M-1min-1以及koff值为1.32min-1(并因此t1/2值为0.53分钟)。从结合/解离实验的结果计算的Ki (3.2μM)与在饱和实验中观察到的Ki(7μM)相比处于相同的范围，从而验证了实验。总之，与[3H]甲基螺哌隆相比，ONC201-2HCl显示出慢得多的结合和快得多的解离。
实施例15：依米立酮的杀菌活性
材料和方法
试验材料：ONC201二盐酸盐；对照：微晶纤维素。
方法：非无菌产品的协合EP/USP微生物检查(Harmonized EP/USP MicrobialExamination of Nonsterile Products)(现行USP<61>/<62>)。
结果
表8：接种物回收控制和微生物计数测试的验证
Figure GDA0003815927400001271
表9：指定微生物的验证
Figure GDA0003815927400001272
P＝通过F＝未通过NA＝不适用；Ec＝大肠杆菌ATCC#8739；Pa＝铜绿假单胞菌ATCC#9027；Sa＝金黄色葡萄球菌ATCC#6538；Bs＝枯草芽孢杆菌ATCC#6633；Ca＝白色念珠菌ATCC#10231；Ab＝巴西曲霉ATCC#16404；BTGN＝胆汁耐受革兰氏阴性细菌；Cs＝梭菌属物种；TSA＝胰蛋白酶大豆琼脂；SDA＝沙氏葡萄糖琼脂。
当在用TSB Mod 1:300稀释下测试时，ONC201二盐酸盐不符合USP <61>/<62>的要求。
微生物限度适应性测试。针对USP<61>/<62>，观察对金黄色葡萄球菌的抑制。因此，可以假定未能分离接种的微生物可归因于ONC201二盐酸盐的杀菌活性并因此不太可能被所抑制的微生物物种污染。
接下来，确定六种依米立酮针对野生型和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度(MIC)。
材料和方法
化合物
将ONC201和ONC206预先以40mM溶解在DMSO中。将ONC212、ONC207 和ONC213以20mg/mL溶解在DMSO中，并将ONC201线性异构体(TIC-10) 以10mg/mL溶解在DMSO中。甲氧西林和/或万古霉素作为阳性对照抗生素平行评价，它们购自Sigma-Aldrich并以10mg/mL的浓度溶解在去离子H2O中。
细菌
在这些测定中使用的细菌菌株得自美国典型培养物保藏中心(American TypeCulture Collection)(ATCC)。所有细菌菌株均按ATCC的推荐进行繁殖。将每种菌株在-80℃下作为冷冻甘油储液储存，并使用10μL冷冻储液环接种每种培养物用于这些测定。菌株及其分类和性质列于下表10中。
表10：金黄色葡萄球菌的菌株和特征
Figure GDA0003815927400001281
最小抑制浓度(MIC)确定
根据临床和实验室标准协会CLSI推荐的方法，通过使用微量肉汤稀释分析确定每种化合物的MIC来评价细菌生物体对测试化合物的易感性。所有微生物菌株均得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，并根据供应商的推荐进行培养。每种生物体对测试化合物的易感性的评价包括阳性对照抗生素。对于每种生物体，通过将新铺板的菌落直接悬浮在如表10中指示的适当培养基中至光密度 625nm(OD625)为0.1(相当于0.5McFarland标准)来制备标准化接种物。将悬浮的接种物稀释至每毫升大约1×106菌落形成单位(CFU/mL)的浓度，并将 100μL置于96孔板的一式三份孔中，所述孔含有100μL在适当肉汤中连续稀释 2倍的测试化合物。还将100微升(100μL)接种物添加到含有100μL两倍连续稀释的阳性对照抗生素的一式三份孔中以及仅含有100μL培养基的孔中。这种稀释方案产生了每种微生物估计为5×105CFU/mL的最终浓度。利用两倍稀释方案，测试化合物浓度范围从100μM的高测试到0.2μM的低测试。将平板在37℃温育24或48小时(金黄色葡萄球菌700699)，通过在Molecular Devices SpectraMax Plus-384读板仪上测量625nm处的光密度并视觉上通过对板+/-是细菌生长评分来确定每种化合物浓度下的微生物生长。将每种化合物的MIC确定为完全抑制微生物生长的最低化合物稀释度。
结果
评估六(6)种依米立酮抑制三种金黄色葡萄球菌菌株生长的能力。ONC201、ONC207和ONC201线性异构体(TIC-10)对所有三种菌株直至浓度为100μg/mL 均无活性。针对野生型金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)，ONC206、ONC212和 ONC213的MIC分别为6.25μg/mL、3.13μg/mL和25μg/mL。针对金黄色葡萄球菌(ATCC 33591)，ONC206、ONC212和ONC213的MIC分别为12.5μg/mL、 3.13μg/mL和3.13μg/mL。该活性与针对MDR金黄色葡萄球菌(ATCC700699) 相似，所有三种化合物的MIC均为12.5μg/mL。阳性对照化合物万古霉素在预期浓度下具有活性，并且发现甲氧西林针对这两种耐甲氧西林细菌菌株直至 100μg/mL的浓度均无活性。数据呈现在表11中。
表11：6种依米立酮对于3种金黄色葡萄球菌的MIC确定
Figure GDA0003815927400001291
讨论
评价六(6)种依米立酮针对3种金黄色葡萄球菌菌株的活性。ONC201、ONC207和TIC-10针对所有三种菌株均无活性。ONC206、ONC212和ONC213 针对所有三种细菌菌株具有3.13μg/mL至25μg/mL的不同活性。相对于万古霉素，这三种依米立酮针对菌株29213的活性相当或低2至8倍。所有这三种依米立酮针对抗菌株33591的活性比万古霉素低10至30倍，而所有三种化合物针对菌株700699的活性比万古霉素高2倍。
用其它依米立酮以及对于其它细菌重复这些实验，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌两者，例如表12中的那些。
表12
生物体 病症 革兰氏+/革兰氏-
屎肠球菌 医院内菌血症，伤口感染，心内膜炎，UTI +
金黄色葡萄球菌 菌血症，心内膜炎 +
肺炎克雷伯氏菌 肺炎，UTI，上呼吸道感染
鲍曼不动杆菌 ICU和烧伤患者的感染；也见于综合医院和疗养院
铜绿假单胞菌 肺炎，CF -
阴沟肠杆菌 UTI，呼吸道感染 -
实施例16：ONC201治疗复发性胶质母细胞瘤受试者的病例研究
本实施例提供了一例患有复发性胶质母细胞瘤(未甲基化MGMT， H3.3K27M突变体)的22岁女性每3周一次用625mg ONC201治疗的病例研究。图28(A)相对于受试者中总肿瘤负荷的基线的肿瘤大小(％)。一个周期是3 周。(B)在用625mg q3w ONC201的受试者中2个恶性病灶之一的基线、ONC201 启用后21、27和36周时的对比MRI扫描。
本领域技术人员将领会，对上面显示和描述的示例性实施方式可以进行改变但不脱离其广泛的发明构思。因此要理解，本发明不限于所显示和描述的示例性实施方式，而是旨在覆盖由权利要求限定的本发明的精神和范围内的修改。例如，示例性实施方式的具体特征可以是或可以不是要求保护的发明的一部分，并且所公开的实施方式的特征可以组合。除非在此具体阐述，否则不带数量指示的指称物不限于一个元件，而是应该被理解为是指“至少一个”。
应当理解，附图和描述可以简化成聚焦在与清楚理解相关的元件，同时为了清楚起见，消除本领域普通技术人员将理解也可以构成本发明的一部分的其它元件。然而，因为这样的件在本领域中是公知的，并且因为它们不一定有助于更好地理解本发明，所以这里不提供对这样的元件的描述。
此外，就方法不依赖于所阐述的步骤的特定顺序而言，特定顺序不应被解释为对权利要求的限制。涉及方法的权利要求不应限于以书写的顺序执行步骤，并且本领域技术人员可以容易地领会，它们可以变化并且仍然保持在本发明的精神和范围内。
在本文中引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，在此通过引用并入，其程度如同各参考文献被个别和具体地指出通过引用并入并以其整体在本文中展示一样。

Claims (5)

1.式(1)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗受试者之中枢神经系统癌症的药物中的用途，
Figure FDA0003827268740000011
其中所述中枢神经系统癌症是具有组蛋白H3.3 K27M突变的神经胶质瘤。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述癌症是胶质母细胞瘤和扩散型内因性脑桥神经胶质瘤。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述癌症具有表观沉默的未甲基化O(6)-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述受试者是人类。
5.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述药学上可接受的盐是二盐酸盐。
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Denomination of invention: G protein coupled receptor (GPCR) modulation by imipridones

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