CN109310747A - 恰加斯抗原及其抗体和组合物、方法和用途 - Google Patents

Abstract

本说明书公开了锥虫属(Trypanosoma)抗原、包含这样的锥虫属抗原的免疫原性组合物和药物，这样的锥虫属抗原和免疫原性组合物用于治疗基于锥虫属的疾病的方法和用途。

Description

恰加斯抗原及其抗体和组合物、方法和用途

本申请要求于2016年4月14日提交的美国临时专利申请62/322,770的优先权和申请日的权益，该临时专利申请的内容在此通过引用以其整体并入。

锥虫属(Trypanosoma)是动基体类(kinetoplastids)(动基体目(classKinetoplastida))的属，是单细胞寄生鞭毛原生动物的单系群。大部分锥虫是异源的(需要多于一个专性宿主(obligatory host)才能完成生命周期)，并且大部分经由载体传播。大多数物种通过食血(blood-feeding)无脊椎动物传播，但不同物种间存在不同的机制。在无脊椎动物宿主中，它们通常被发现于肠中，但在哺乳动物宿主中通常占据血流或细胞内环境。

存在两种不同类型的锥虫，并且它们的生命周期不同，即stercorarian物种和唾传锥虫物种(salivarian species)。Stercorarian锥虫，感染昆虫，最常见的是锥蝽接吻虫(triatomid kissing bug)，在其后段消化道(posterior gut)中发育，并且感染性生物体在排泄物中释放并沉积于宿主的皮肤上。然后生物体侵入(penetrate)并且可以散布全身。当昆虫进食血餐时，变成被感染。唾传锥虫(Salivarian trypanosomes)在昆虫，最重要的是采采蝇(Tsetse fly)的前消化道中发育，并且在它进食之前通过昆虫叮咬将感染性生物体侵染(inoculated)到宿主中。随着锥虫在其生命周期中的进展，它们经历了作为典型锥体科(trypanosomatids)的一系列形态变化。生命周期通常由脊椎动物宿主中的锥鞭毛体形式和无脊椎动物宿主消化道中的锥鞭毛体或前鞭毛体形式组成。细胞内生命周期阶段通常以无鞭毛体形式被发现。锥鞭毛体形态是锥虫属(genus Trypanosoma)中的物种特有的。

锥虫感染多种宿主并且引起多种疾病，包括由克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)引起的致命人类疾病恰加斯病(Chagas disease)和由布氏锥虫(T.brucei)引起的非洲昏睡病(African sleeping sickness)。

多年来，基于锥虫属的感染不是易受治疗的状况。本文公开了锥虫属抗原、免疫原性组合物和抗体，所述锥虫属抗原、免疫原性组合物和抗体诱导有效保护免受一种或更多种锥虫属株的免疫应答

概述

因此，本说明书中公开的方面提供了锥虫属抗原。本文公开的锥虫属抗原可以引发免疫应答，所述免疫应答产生能够结合在锥虫属感染的细胞表面上存在的表位的α-锥虫抗体。

本说明书中公开的其他方面提供了免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含本文公开的一种或更多种锥虫属抗原。组合物还可以包含佐剂。

本说明书中公开的其他方面提供了治疗感染锥虫属病原体或具有基于锥虫属的疾病的个体的方法。所公开的方法包括将本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物施用至感染锥虫属病原体或具有基于锥虫属的疾病的个体。

本说明书中公开的其他方面提供了本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物用于制备药物的用途。

本说明书中公开的其他方面提供了本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物用于治疗感染锥虫属病原体的个体的用途。

本说明书中公开的其他方面提供了本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物用于在治疗感染锥虫属病原体的个体中使用。

附图简述

图1A-1D示出了在体外暴露于单个肽48小时之后由脾细胞的IL-4和IFN-γ产生，其中图1A示出了A组动物中的IL-4产生；图1B示出了B组动物中的IL-4产生；图1C示出了A组动物中的IFN-γ产生；且图1D示出了B组动物的IFN-γ产生。

图2A-B示出了疫苗接种的小鼠的血清中对单独肽特异性的总免疫球蛋白应答，其中图2A示出了雄性动物中的总免疫球蛋白应答；且图2B示出了雌性动物中的总免疫球蛋白应答。

图3A-3D示出了疫苗接种的小鼠的血清中对单独肽特异性的IgG1和IgG2应答，其中图3A示出了雄性动物中的IgG2应答；图3B示出了雌性动物中的IgG2应答；图3C示出了雄性动物中的IgG1应答；且图3D示出了雌性动物中的IgG1应答。

图4A-4B示出了在体外暴露于单个肽48小时之后由脾细胞的IL-4和IFN-γ产生，其中图4A示出了IL-4产生；图4B示出了IFN-γ产生。

图5示出了由来自暴露于单个肽的未经试验小鼠的脾细胞的IFN-γ产生。

图6A-6F示出了疫苗接种的小鼠的血清中对单独肽特异性的总免疫球蛋白应答，其中图6A示出了动物中针对CH47的总免疫球蛋白应答；图6B示出了动物中针对CH69的总免疫球蛋白应答；图6C示出动物中针对CH72的总免疫球蛋白应答；图6D示出了动物中针对CH77的总免疫球蛋白应答；图6E示出了动物中针对CH84的总免疫球蛋白应答；且图6F示出了动物中针对CH93的总免疫球蛋白应答。

图7A-7F示出了疫苗接种的小鼠的血清中对单独肽特异性的IgG1和IgG2应答，其中图7A示出了动物中针对CH77的IgG1应答；图7B示出了动物中针对CH47的IgG1应答；图7C示出了动物中针对CH77的IgG2a应答；且图7D示出了动物中针对CH47的IgG2a应答。

图8A-8F示出了疫苗接种的小鼠的血清中对单独肽特异性的IgG1和IgG2应答，其中图8A示出了动物中针对CH37的IgG1应答；图8B示出了动物中针对CH77的IgG1应答；图8C示出了动物中针对CH37的IgG2a应答；且图8D示出了动物中针对CH77的IgG2a应答。

图9A-9H示出了疫苗接种的小鼠的血清中对单独肽特异性的总免疫球蛋白应答，其中图9A示出了动物中针对CH30的总免疫球蛋白应答；图9B示出了动物中针对CH37的总免疫球蛋白应答；图9C示出了动物中针对CH47的总免疫球蛋白应答；图9D示出了动物中针对CH69的总免疫球蛋白应答；图9E示出动物中针对CH72的总免疫球蛋白应答；图9F示出了动物中针对CH77的总免疫球蛋白应答；图9G示出了动物中针对CH84的总免疫球蛋白应答；且图9H示出了动物中针对肽混合物的总免疫球蛋白应答。

图10示出了用于A组、B组、C组和D组的给药方案。

图11示出了锥虫属感染后(pi＝感染后)对照(A+C)和疫苗接种(B和D)动物组中的寄生虫血症。

图12示出了锥虫属感染后(pi＝感染后)对照(A+C)和疫苗接种(B和D)动物组中的死亡率。

图13示出了用于A组、B组和C组的给药方案。

图14示出了锥虫属感染后(pi＝感染后)对照(C)和疫苗接种(A和B)动物组中的死亡率。

图15示出了攻击后第17天和第22天时的所有组中的平均寄生虫血症浓度和标准误差。单位是寄生虫数×10⁵个/mL血液。

图16示出了攻击后存活至少第25天的动物中感染后第17天和第22天时的所有组中的平均寄生虫血症浓度和标准误差。单位是寄生虫数×10⁵个/mL血液。

详细说明

锥虫的生命周期可以被分为载体阶段和人类阶段，在载体阶段中锥虫在载体中增殖并分化以产生感染形式的寄生虫，在人类阶段中锥虫在人类宿主中分化并增殖。在人类阶段期间，载体以人类宿主为食，并将称为循环后期锥鞭毛体的感染形式的锥虫传递到循环系统中。亚循环锥鞭毛体侵入宿主细胞，并且然后分化为无鞭毛体并开始在细胞内增殖。细胞内无鞭毛体分化成锥鞭毛体并最终破坏宿主细胞并进入血液系统，在血液系统中寄生虫能够感染新宿主细胞和/或转移至新载体。

当细胞内无鞭毛体感染宿主细胞时，源自这些寄生虫的多种蛋白在细胞质中累积。这些蛋白可以被蛋白酶体(胞质蛋白酶复合物)加工，以生成通常长度介于8个至11个氨基酸的小蛋白片段或肽。然后这些肽被结合至内质网中的组织相容性复合物I类(MHC-I)糖蛋白的裂缝，并且被转运至感染的细胞的质膜。如果这些肽在它们的序列中包含膜锚，它们也可以突出或位于细胞膜内。抗原呈递细胞还可以吞噬锥虫属细胞或锥虫属感染的细胞，并且将寄生虫蛋白加工为介于12个与35个氨基酸之间的较大肽片段，其也可以被呈递至免疫系统与MHC II类分子结合。

本说明书通过提供免疫原性组合物利用在感染的细胞的表面上表达的这些肽片段，所述免疫原性组合物包含能够识别在I类和II类MHC复合物内的肽片段的CD8⁺和CD4⁺ T细胞以及能够识别在细胞膜和II类的MHC分子内的这些肽片段的B细胞。免疫原性组合物引发T细胞和这些抗原的抗体的生成，T细胞和这些抗原的抗体继而识别位于感染的细胞的细胞表面上的锥虫肽片段。通过T细胞和/或抗体对这些细胞表面肽片段的识别破坏细胞膜，最终导致这些感染的细胞的破坏、锥虫的增殖的破坏和细胞内无鞭毛体的死亡。

本说明书的一个关键发现是用于生成免疫应答的所公开的锥虫抗原源自寄生虫的细胞内蛋白。这是重要的，因为所产生的免疫应答不会在任何很大程度上直接攻击锥虫本身。另一个关键发现是所公开的治疗可以更有效地控制锥虫群体，因为免疫应答靶向寄生虫正增殖的感染的细胞。

本公开内容的方面部分地包括锥虫属抗原。抗原是引发免疫应答的分子，并且包括但不限于肽、多糖和脂质缀合物，诸如，例如，脂蛋白和糖脂。锥虫属抗原是能够引发针对锥虫属病原体或包含锥虫属病原体的组分的免疫应答的任何抗原。包含锥虫属病原体的组分包括但不限于锥虫属基因组、由锥虫属基因组编码的蛋白和锥虫属病原体的脂质膜组分。在该实施方案的一个方面，锥虫属抗原是能够引发针对单一锥虫属株或包含锥虫属株的组分的免疫应答的任何抗原。在该实施方案的另一个方面，锥虫属抗原是能够引发针对两种或更多种锥虫属株或包含两种或更多种锥虫属株的组分的免疫应答的任何抗原。

锥虫属抗原必须足够大以在序列上基本上是独特的，因此减少了产生针对与本文公开的锥虫属抗原以外的抗原交叉反应的抗体的可能性。通常，本文公开的锥虫属抗原具有约5个至约100个氨基酸的长度。

在该实施方案的方面，本文公开的锥虫属抗原可以具有例如约5个、约6个、约7个、约8个、约9个、约10个、约11个、约12个、约13个、约14个、约15个、约16个、约17个、约18个、约19个、约20个、约25个、约30个、约35个、约40个、约45个、约50个、约55个、约60个、约65个、约70、或约75个氨基酸的长度。在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原可以具有例如，至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少25个、至少30个、至少35个、至少40个、至少45个、至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70、或至少75个氨基酸的长度。又在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原可以具有例如，至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个、至多10个、至多11个、至多12个、至多13个、至多14个、至多15个、至多16个、至多17个、至多18个、至多19个、至多20个、至多25个、至多30个、至多35个、至多40个、至多45个、至多50个、至多55个、至多60个、至多65个、至多70、或至多75个氨基酸的长度。

仍在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原可以具有例如，介于约7个至约10个氨基酸、约7个至约12个氨基酸、约7个至约15个氨基酸、约7个至约18个氨基酸、约7个至约20个氨基酸、约7个至约25个氨基酸、约7个至约30个氨基酸、约7个至约35个氨基酸、约7个至约40个氨基酸、约7个至约45个氨基酸、约7个至约50个氨基酸、约7个至约55个氨基酸、约7个至约60个氨基酸、约7个至约65个氨基酸、约7个至约70个氨基酸、约7个至约75个氨基酸、约10个至约12个氨基酸、约10个至约15个氨基酸、约10个至约18个氨基酸、约10个至约20个氨基酸、约10个至约25个氨基酸、约10个至约30个氨基酸、约10个至约35个氨基酸、约10个至约40个氨基酸、约10个至约45个氨基酸、约10个至约50个氨基酸、约10个至约55个氨基酸、约10个至约60个氨基酸、约10个至约65个氨基酸、约10个至约70个氨基酸、约10个至约75个氨基酸、约12个至约15个氨基酸、约12个至约18个氨基酸、约12个至约20个氨基酸、约12个至约25个氨基酸、约12个至约30个氨基酸、约12个至约35个氨基酸、约12个至约40个氨基酸、约12个至约45个氨基酸、约12个至约50个氨基酸、约12个至约55个氨基酸、约12个至约60个氨基酸、约12个至约65个氨基酸、约12个至约70个氨基酸、约12个至约75个氨基酸、约15个至约18个氨基酸、约15个至约20个氨基酸、约15个至约25个氨基酸、约15个至约30个氨基酸、约15个至约35个氨基酸、约15个至约40个氨基酸、约15个至约45个氨基酸、约15个至约50个氨基酸、约15个至约55个氨基酸、约15个至约60个氨基酸、约15个至约65个氨基酸、约15个至约70个氨基酸、约15个至约75个氨基酸、约18个至约20个氨基酸、约18个至约25个氨基酸、约18个至约30个氨基酸、约18个至约35个氨基酸、约18个至约40个氨基酸、约18个至约45个氨基酸、约18个至约50个氨基酸、约18个至约55个氨基酸、约18个至约60个氨基酸、约18个至约65个氨基酸、约18个至约70个氨基酸、约18个至约75个氨基酸、约20个至约25个氨基酸、约20个至约30个氨基酸、约20个至约35个氨基酸、约20个至约40个氨基酸、约20个至约45个氨基酸、约20个至约50个氨基酸、约20个至约55个氨基酸、约20个至约60个氨基酸、约20个至约65个氨基酸、约20个至约70个氨基酸、约20个至约75个氨基酸、约25个至约30个氨基酸、约25个至约35个氨基酸、约25个至约40个氨基酸、约25个至约45个氨基酸、约25个至约50个氨基酸、约25个至约55个氨基酸、约25个至约60个氨基酸、约25个至约65个氨基酸、约25个至约70个氨基酸、约25个至约75个氨基酸、约30个至约35个氨基酸、约30个至约40个氨基酸、约30个至约45个氨基酸、约30个至约50个氨基酸、约30个至约55个氨基酸、约30个至约60个氨基酸、约30个至约65个氨基酸、约30个至约70个氨基酸、约30个至约75个氨基酸、约35个至约40个氨基酸、约35个至约45个氨基酸、约35个至约50个氨基酸、约35个至约55个氨基酸、约35个至约60个氨基酸、约35个至约65个氨基酸、约35个至约70个氨基酸、约35个至约75个氨基酸、约40个至约45个氨基酸、约40个至约50个氨基酸、约40个至约55个氨基酸、约40个至约60个氨基酸、约40个至约65个氨基酸、约40个至约70个氨基酸、约40个至约75个氨基酸、约45个至约50个氨基酸、约45个至约55个氨基酸、约45个至约60个氨基酸、约45个至约65个氨基酸、约45个至约70个氨基酸、约45个至约75个氨基酸、约50个至约55个氨基酸、约50个至约60个氨基酸、约50个至约65个氨基酸、约50个至约70个氨基酸、或约50个至约75个氨基酸的长度。

在另一个实施方案中，本文公开的锥虫属抗原包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12。在该实施方案的方面，本文公开的锥虫属抗原与以下具有，例如，至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的氨基酸同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12。又在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原与以下具有在例如，约75％至约100％、约80％至约100％、约85％至约100％、约90％至约100％、约95％至约100％、约75％至约99％、约80％至约99％、约85％至约99％、约90％至约99％、约95％至约99％、约75％至约97％、约80％至约97％、约85％至约97％、约90％至约97％、或约95％至约97％的范围内的氨基酸同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12。

在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原包含具有例如，至少5个氨基酸、至少6个氨基酸、至少7个氨基酸、至少8个氨基酸、至少9个氨基酸、至少10个氨基酸、至少11个氨基酸、至少12个氨基酸、至少13个氨基酸、至少14个氨基酸、至少15个氨基酸、至少16个氨基酸、至少17个氨基酸、至少18个氨基酸、至少19个氨基酸、至少20个氨基酸、至少21个氨基酸、至少22个氨基酸、至少23个氨基酸、至少24个氨基酸、至少25个氨基酸、至少26个氨基酸、至少27个氨基酸、至少28个氨基酸、至少29个氨基酸、至少30个氨基酸、至少31个氨基酸、至少32个氨基酸、至少33个氨基酸、至少34个氨基酸、至少35个氨基酸、至少36个氨基酸、至少37个氨基酸、至少38个氨基酸、至少39个氨基酸或至少40个氨基酸的长度的氨基酸序列，所述氨基酸序列取自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的连续氨基酸子序列。又在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原包含具有例如，至多5个氨基酸、至多6个氨基酸、至多7个氨基酸、至多8个氨基酸、至多9个氨基酸、至多10个氨基酸、至多11个氨基酸、至多12个氨基酸、至多13个氨基酸、至多14个氨基酸、至多15个氨基酸、至多16个氨基酸、至多17个氨基酸、至多18个氨基酸、至多19个氨基酸、至多20个氨基酸、至多21个氨基酸、至多22个氨基酸、至多23个氨基酸、至多24个氨基酸、至多25个氨基酸、至多26个氨基酸、至多27个氨基酸、至多28个氨基酸、至多29个氨基酸、至多30个氨基酸、至多31个氨基酸、至多32个氨基酸、至多33个氨基酸、至多34个氨基酸、至多35个氨基酸、至多36个氨基酸、至多37个氨基酸、至多38个氨基酸、至多39个氨基酸或至多40个氨基酸的长度的氨基酸序列，所述氨基酸序列取自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的连续氨基酸子序列。

在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原具有相对于SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的，例如，至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、或15个连续氨基酸缺失、添加、和/或取代；或者相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的至多1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、或15个连续氨基酸缺失、添加、和/或取代。又在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原具有相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的，例如，至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、或15个非连续氨基酸缺失、添加、和/或取代；或者相对于SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的至多1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、或15个非连续氨基酸缺失、添加、和/或取代。

可以使用多种序列比对方法中的任何一种来确定同一性百分比，包括但不限于全局方法、局部方法和混合方法(hybrid methods)，诸如，例如，区段接近方法。确定同一性百分比的方案是在本领域技术人员以及来自本文教导的范围内的常规程序。

全局方法从分子的开始至结束比对序列，并且通过将单独残基对的评分相加且通过施加空位罚分来确定最佳比对。非限制性方法包括，例如，CLUSTAL W，参见，例如，JulieD.Thompson等,CLUSTAL W:Improving the Sensitivity of Progressive MultipleSequence Alignment Through Sequence Weighting,Position-Specific Gap Penaltiesand Weight Matrix Choice,22(22)Nucleic Acids Research 4673-4680(1994)；和迭代寻优(iterative refinement)，参见，例如，Osamu Gotoh,Significant Improvement inAccuracy of Multiple Protein Sequence Alignments by Iterative Refinement asAssessed by Reference to Structural Alignments,264(4)J.Mol.Biol.823-838(1996)。

局部方法通过鉴定由所有输入序列共有的一个或更多个保守基序来比对序列。非限制性方法包括，例如，匹配箱(Match-box)，参见，例如，Eric Depiereux和ErnestFeytmans,Match-Box:A Fundamentally New Algorithm for the SimultaneousAlignment of Several Protein Sequences,8(5)CABIOS 501-509(1992)；吉布斯采样(Gibbs sampling)，参见，例如，C.E.Lawrence等,Detecting Subtle Sequence Signals:AGibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment,262(5131)Science 208-214(1993)；Align-M，参见，例如，Ivo Van Walle等，Align-M–A New Algorithm for MultipleAlignment of Highly Divergent Sequences,20(9)Bioinformatics,:1428-1435(2004)。

混合方法组合了全局和局部比对方法的功能方面。非限制性方法包括，例如，区段与区段的比较，参见，例如，Burkhard Morgenstern等,Multiple DNA and ProteinSequence Alignment Based 0n Segment-To-Segment Comparison,93(22)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.12098-12103(1996)；T-Coffee，参见，例如，CédricNotredame等,T-Coffee:A Novel Algorithm for Multiple Sequence Alignment,302(1)J.Mol.Biol.205-217(2000)；MUSCLE，参见，例如，Robert C.Edgar,MUSCLE:MultipleSequence Alignment With High Score Accuracy and High Throughput,32(5)NucleicAcids Res.1792-1797(2004)；和DIALIGN-T，参见，例如，AmarendranR Subramanian等,DIALIGN-T:An Improved Algorithm for Segment-Based Multiple SequenceAlignment,6(1)BMC Bioinformatics 66(2005)。

本说明书描述了其中一个氨基酸被另一个取代的多种多肽变体，诸如，例如，本文公开的锥虫属抗原。取代可以通过多种因素评价，诸如，例如，被取代的氨基酸的物理特性(表1)或原始氨基酸如何耐受取代(表2)。选择哪种氨基酸可以取代多肽中的另一种氨基酸是本领域普通技术人员已知的。

在该实施方案的方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的疏水性氨基酸可以被另一个疏水性氨基酸取代。疏水性氨基酸的实例包括，例如，C、F、I、L、M、V和W。在该实施方案的另一个方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的脂肪族氨基酸可以被另一个脂肪族氨基酸取代。脂肪族氨基酸的实例包括，例如，A、I、L、P、和V。又在该实施方案的另一个方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的芳香族氨基酸可以被另一个芳香族氨基酸取代。芳香族氨基酸的实例包括，例如，F、H、W和Y。仍在该实施方案的另一个方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的堆叠氨基酸(stacking aminoacid)可以被另一个堆叠氨基酸取代。堆叠氨基酸的实例包括，例如，F、H、W和Y。在该实施方案的另外方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的极性氨基酸可以被另一个极性氨基酸取代。极性氨基酸的实例包括，例如，D、E、K、N、Q、和R。在该实施方案的另外方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的较少极性或中性(indifferent)氨基酸可以被另一个较少极性或中性氨基酸取代。较少极性或中性氨基酸的实例包括，例如，A、H、G、P、S、T、和Y。又在该实施方案的另外方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的带正电荷的氨基酸可以被另一个带正电荷的氨基酸取代。带正电荷的氨基酸的实例包括，例如，K、R、和H。仍在该实施方案的另外方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的带负电荷的氨基酸可以被另一个带负电荷的氨基酸取代。带负电荷的氨基酸的实例包括，例如，D和E。在该实施方案的另一个方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的小氨基酸可以被另一个小氨基酸取代。小氨基酸的实例包括，例如，A、D、G、N、P、S、和T。又在该实施方案的另一个方面，本文公开的锥虫属抗原中的一个特定位置处的C-β支链型(C-betabranching)氨基酸可以被另一个C-β支链型氨基酸取代。C-β支链型氨基酸的实例包括，例如，I、T和V。

一种或更多种载体可以与本文公开的锥虫属抗原连接，以增强当不与载体缔合时为免疫原性、非免疫原性或弱免疫原性的锥虫属抗原的免疫原性。非限制性实例包括，例如，匙孔血蓝蛋白(KLH)、卵清蛋白(OVA)、甲状腺球蛋白(THY)、牛血清白蛋白(BSA)、大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)或多重附着肽(MAP)。通过将抗原与载体偶联，可以使非抗原性或弱抗原性抗原具有抗原性。用于将抗原与载体偶联的多种其他载体和方法在以下中描述：例如，Harlow和Lane，同上，1998a；Harlow和Lane，同上，1998b；以及David W.Waggoner,Jr.等,Immunogenicity-enhancing carriers and compositions thereof and methods ofusing the same,美国专利公布第20040057958号，其各自通过引用以其整体并入。本文公开的锥虫属抗原也可以通过将抗原表达为融合蛋白来生成。用于表达多肽融合的方法在以下中描述：例如Ausubel等,Current Protocols in Molecular Biology(Supplement 47),John Wiley&Sons,New York(1999)，其各自通过引用以其整体并入。

本公开内容的方面部分地包含了免疫原性组合物。本文公开的免疫原性组合物包含一种或更多种本文公开的锥虫属抗原和任选地一种或更多种佐剂。当被施用至个体时，包含本文公开的一种或更多种锥虫属抗原的免疫原性组合物刺激针对一种或更多种锥虫属株的免疫应答，从而产生α-锥虫属抗体。免疫应答是个体的免疫系统对本文公开的免疫原性组合物的任何应答。示例性免疫应答包括，但不限于，细胞以及局部和全身体液免疫，诸如，例如，CTL应答(包括CD8+CTL的抗原特异性诱导)、辅助T细胞应答(包括T细胞增殖应答和细胞因子释放)、以及B细胞应答(包括例如产生抗体的应答)。在该实施方案的一个方面，免疫原性组合物是疫苗。在该实施方案的另一个方面，当被施用至个体时，包含本文公开的一种锥虫属抗原的免疫原性组合物刺激针对一种锥虫属株的免疫应答，从而产生α-锥虫属抗体。在该实施方案的另一个方面，当被施用至个体时，包含本文公开的一种锥虫属抗原的免疫原性组合物刺激针对两种或更多种锥虫属株的免疫应答，从而产生针对各自株的α-锥虫属抗体。在该实施方案的另一个方面，当被施用至个体时，包含本文公开的一种或更多种锥虫属抗原的免疫原性组合物刺激针对一种锥虫属株的免疫应答，从而产生α-锥虫属抗体。在该实施方案的另一个方面，当被施用至个体时，包含本文公开的一种或更多种锥虫属抗原的免疫原性组合物刺激针对两种或更多种锥虫属株的免疫应答，从而产生针对各自株的α-锥虫属抗体。

在该实施方案的一个方面，本文公开的免疫原性组合物包含一种或更多种锥虫属抗原，所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:6(CH47)、SEQ ID NO:9(CH77)、SEQ IDNO:5(CH37)或其任何组合。在该实施方案的一个优选的方面，本文公开的免疫原性组合物包含一种或更多种锥虫属抗原，所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:5(CH37)和SEQ ID NO:9(CH77)。在另一个优选的实施方案中，本文公开的免疫原性组合物包含一种或更多种锥虫属抗原，所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:6(CH 47)和SEQ ID NO:9(CH77)。在一个最优选的实施方案中，本文公开的免疫原性组合物包含一种或更多种锥虫属抗原，所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:6(CH 47)。

在该实施方案的一个方面，本文公开的免疫原性组合物包含一种或更多种锥虫属抗原，所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ IDNO:6(CH47)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)、SEQ ID NO:11(CH84)、或其任何组合。在该实施方案的该方面的一个优选的方面，本文公开的免疫原性组合物包含一种或更多种锥虫属抗原，所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:6(CH47)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH77)和SEQ ID NO:11(CH84)。在该实施方案的该方面的一个优选的方面，本文公开的免疫原性组合物包含一种或更多种锥虫属抗原，所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:6(CH47)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)。在该实施方案的一个优选的方面，本文公开的免疫原性组合物包含一种或更多种锥虫属抗原，所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:6(CH47)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)。

在该实施方案的另一个方面，免疫原性组合物是用于治疗基于锥虫属的疾病的药物。在该实施方案的方面，本文公开的锥虫属抗原用于制备用于治疗基于锥虫属的疾病的药物。在该实施方案的方面，本文公开的锥虫属抗原的使用处于足以通过减少与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状来治疗基于锥虫属的疾病的量。在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原的使用处于足以针对锥虫属感染或病理使个体免疫或对个体进行疫苗接种的量。

在一个实施方案中，本文公开的免疫原性组合物包含本文公开的单一锥虫属抗原。在一个实施方案中，本文公开的免疫原性组合物包含本文公开的多于一种锥虫属抗原。在该实施方案的方面，本文公开的免疫原性组合物包含，例如，本文公开的1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、或15种锥虫属抗原。在该实施方案的其他方面，本文公开的免疫原性组合物包含，例如，本文公开的至少1种、至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少9种、至少10种、至少11种、至少12种、至少13种、至少14种、或至少15种锥虫属抗原。又在该实施方案的其他方面，本文公开的免疫原性组合物包含，例如，本文公开的至多1种、至多2种、至多3种、至多4种、至多5种、至多6种、至多7种、至多8种、至多9种、至多10种、至多11种、至多12种、至多13种、至多14种、或至多15种锥虫属抗原。仍在该实施方案的其他方面，本文公开的免疫原性组合物包含，例如，本文公开的1种至2种、1种至3种、1种至4种、1种至5种、1种至6种、1种至7种、1种至8种、1种至9种、1种至10种、1种至11种、1种至12种、1种至13种、1种至14种、1种至15种、2种至3种、2种至4种、2种至5种、2种至6种、2种至7种、2种至8种、2种至9种、2种至10种、2种至11种、2种至12种、2种至13种、2种至14种、2种至15种、3种至4种、3种至5种、3种至6种、3种至7种、3种至8种、3种至9种、3种至10种、3种至11种、3种至12种、3种至13种、3种至14种、3种至15种、4种至5种、4种至6种、4种至7种、4种至8种、4种至9种、4种至10种、4种至11种、4种至12种、4种至13种、4种至14种、4种至15种、5种至6种、5种至7种、5种至8种、5种至9种、5种至10种、5种至11种、5种至12种、5种至13种、5种至14种、5种至15种、6种至7种、6种至8种、6种至9种、6种至10种、6种至11种、6种至12种、6种至13种、6种至14种、6种至15种、7种至8种、7种至9种、7种至10种、7种至11种、7种至12种、7种至13种、7种至14种、7种至15种、8种至9种、8种至10种、8种至11种、8种至12种、8种至13种、8种至14种、8种至15种、9种至10种、9种至11种、9种至12种、9种至13种、9种至14种、9种至15种、10种至11种、10种至12种、10种至13种、10种至14种、10种至15种、11种至12种、11种至13种、11种至14种、11种至15种、12种至13种、12种至14种、12种至15种、13种至14种、13种至15种、或14种至15种锥虫属抗原。

包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量是足以在个体中引发适当免疫应答的量。通常，该量也是不引起显著不良副作用的量。这样的量将根据采用哪种特异性锥虫属抗原(Trypanosoma antigen or antigens)而变化。特定免疫原性组合物的最佳量可以通过标准研究确定，所述标准研究包括观察抗体滴度和个体中的其他反应。初级免疫原性组合物过程可以包括1个、2个或3个剂量的免疫原性组合物，以最佳间隔给予以提供免疫保护性应答。

通常，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的有效且安全的量从约1μg至1,000mg变化。在该实施方案的方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以是，例如，约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约15μg、约20μg、约25μg、约30μg、约35μg、约40μg、约45μg、约50μg、约55μg、约60μg、约65μg、约70μg、约75μg、约80μg、约85μg、约90μg、约95μg、约100μg、约110μg、约120μg、约130μg、约140μg、约150μg、约160μg、约170μg、约180μg、约190μg、约200μg、约210μg、约220μg、约230μg、约240μg、约250μg,260μg、约270μg、约280μg、约290μg、约300μg、约310μg、约320μg、约330μg、约340μg、约350μg,360μg、约370μg、约380μg、约390μg、约400μg、约410μg、约420μg、约430μg、约440μg、约450μg,460μg、约470μg、约480μg、约490μg、约500μg、约510μg、约520μg、约530μg、约540μg、约550μg,560μg、约570μg、约580μg、约590μg、约600μg、约610μg、约620μg、约630μg、约640μg、约650μg,660μg、约670μg、约680μg、约690μg、约700μg、约710μg、约720μg、约730μg、约740μg、约750μg,760μg、约770μg、约780μg、约790μg、约800μg、约810μg、约820μg、约830μg、约840μg、约850μg,860μg、约870μg、约880μg、约890μg、约900μg、约910μg、约920μg、约930μg、约940μg、约950μg,960μg、约970μg、约980μg、约990μg、或约1,000μg。

在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以是，例如，至少1μg、至少2μg、至少3μg、至少4μg、至少5μg、至少6μg、至少7μg、至少8μg、至少9μg、至少10μg、至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg、至少100μg、至少110μg、至少120μg、至少130μg、至少140μg、至少150μg、至少160μg、至少170μg、至少180μg、至少190μg、至少200μg、至少210μg、至少220μg、至少230μg、至少240μg、至少250μg,260μg、至少270μg、至少280μg、至少290μg、至少300μg、至少310μg、至少320μg、至少330μg、至少340μg、至少350μg,360μg、至少370μg、至少380μg、至少390μg、至少400μg、至少410μg、至少420μg、至少430μg、至少440μg、至少450μg,460μg、至少470μg、至少480μg、至少490μg、至少500μg、至少510μg、至少520μg、至少530μg、至少540μg、至少550μg,560μg、至少570μg、至少580μg、至少590μg、至少600μg、至少610μg、至少620μg、至少630μg、至少640μg、至少650μg,660μg、至少670μg、至少680μg、至少690μg、至少700μg、至少710μg、至少720μg、至少730μg、至少740μg、至少750μg,760μg、至少770μg、至少780μg、至少790μg、至少800μg、至少810μg、至少820μg、至少830μg、至少840μg、至少850μg,860μg、至少870μg、至少880μg、至少890μg、至少900μg、至少910μg、至少920μg、至少930μg、至少940μg、至少950μg、960μg、至少970μg、至少980μg、至少990μg、或至少1,000μg。

又在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以是，例如，至多1μg、至多2μg、至多3μg、至多4μg、至多5μg、至多6μg、至多7μg、至多8μg、至多9μg、至多10μg、至多15μg、至多20μg、至多25μg、至多30μg、至多35μg、至多40μg、至多45μg、至多50μg、至多55μg、至多60μg、至多65μg、至多70μg、至多75μg、至多80μg、至多85μg、至多90μg、至多95μg、至多100μg、至多110μg、至多120μg、至多130μg、至多140μg、至多150μg、至多160μg、至多170μg、至多180μg、至多190μg、至多200μg、至多210μg、至多220μg、至多230μg、至多240μg、至多250μg,260μg、至多270μg、至多280μg、至多290μg、至多300μg、至多310μg、至多320μg、至多330μg、至多340μg、至多350μg,360μg、至多370μg、至多380μg、至多390μg、至多400μg、至多410μg、至多420μg、至多430μg、至多440μg、至多450μg,460μg、至多470μg、至多480μg、至多490μg、至多500μg、至多510μg、至多520μg、至多530μg、至多540μg、至多550μg,560μg、至多570μg、至多580μg、至多590μg、至多600μg、至多610μg、至多620μg、至多630μg、至多640μg、至多650μg,660μg、至多670μg、至多680μg、至多690μg、至多700μg、至多710μg、至多720μg、至多730μg、至多740μg、至多750μg,760μg、至多770μg、至多780μg、至多790μg、至多800μg、至多810μg、至多820μg、至多830μg、至多840μg、至多850μg,860μg、至多870μg、至多880μg、至多890μg、至多900μg、至多910μg、至多920μg、至多930μg、至多940μg、至多950μg、960μg、至多970μg、至多980μg、至多990μg、或至多1,000μg。

仍在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以在以下的范围内：例如，约1μg至约10μg、约1μg至约20μg、约1μg至约30μg、约1μg至约40μg、约1μg至约50μg、约1μg至约60μg、约1μg至约70μg、约1μg至约80μg、约1μg至约90μg、约1μg至约100μg、约1μg至约110μg、约1μg至约120μg、约1μg至约130μg、约1μg至约140μg、约1μg至约150μg、约5μg至约10μg、约5μg至约20μg、约5μg至约30μg、约5μg至约40μg、约5μg至约50μg、约5μg至约60μg、约5μg至约70μg、约5μg至约80μg、约5μg至约90μg、约5μg至约100μg、约5μg至约110μg、约5μg至约120μg、约5μg至约130μg、约5μg至约140μg、约5μg至约150μg、约10μg至约20μg、约10μg至约30μg、约10μg至约40μg、约10μg至约50μg、约10μg至约60μg、约10μg至约70μg、约10μg至约80μg、约10μg至约90μg、约10μg至约100μg、约10μg至约110μg、约10μg至约120μg、约10μg至约130μg、约10μg至约140μg、约10μg至约150μg、约10μg至约175μg、约10μg至约200μg、约10μg至约225μg、约10μg至约250μg、约25μg至约50μg、约25μg至约75μg、约25μg至约100μg、约25μg至约125μg、约25μg至约150μg、约25μg至约175μg、约25μg至约200μg、约25μg至约225μg、约25μg至约250μg、约50μg至约75μg、约50μg至约100μg、约50μg至约125μg、约50μg至约150μg、约50μg至约175μg、约50μg至约200μg、约50μg至约225μg、约50μg至约250μg、约75μg至约100μg、约75μg至约125μg、约75μg至约150μg、约75μg至约175μg、约75μg至约200μg、约75μg至约225μg、或约75μg至约250μg。

仍在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以在以下的范围内：例如，约100μg至约125μg、约100μg至约150μg、约100μg至约175μg、约100μg至约200μg、约100μg至约225μg、约100μg至约250μg、约100μg至约275μg、约100μg至约300μg、约100μg至约325μg、约100μg至约350μg、约100μg至约375μg、约100μg至约400μg、约100μg至约425μg、约100μg至约450μg、约100μg至约475μg、约100μg至约500μg、约100μg至约525μg、约100μg至约550μg、约100μg至约575μg、约100μg至约600μg、约125μg至约150μg、约125μg至约175μg、约125μg至约200μg、约125μg至约225μg、约125μg至约250μg、约125μg至约275μg、约125μg至约300μg、约125μg至约325μg、约125μg至约350μg、约125μg至约375μg、约125μg至约400μg、约125μg至约425μg、约125μg至约450μg、约125μg至约475μg、约125μg至约500μg、约125μg至约525μg、约125μg至约550μg、约125μg至约575μg、约125μg至约600μg、约150μg至约175μg、约150μg至约200μg、约150μg至约225μg、约150μg至约250μg、约150μg至约275μg、约150μg至约300μg、约150μg至约325μg、约150μg至约350μg、约150μg至约375μg、约150μg至约400μg、约150μg至约425μg、约150μg至约450μg、约150μg至约475μg、约150μg至约500μg、约150μg至约525μg、约150μg至约550μg、约150μg至约575μg、约150μg至约600μg、约200μg至约225μg、约200μg至约250μg、约200μg至约275μg、约200μg至约300μg、约200μg至约325μg、约200μg至约350μg、约200μg至约375μg、约200μg至约400μg、约200μg至约425μg、约200μg至约450μg、约200μg至约475μg、约200μg至约500μg、约200μg至约525μg、约200μg至约550μg、约200μg至约575μg、约200μg至约600μg、约200μg至约625μg、约200μg至约650μg、约200μg至约675μg、约200μg至约700μg、约200μg至约725μg、约200μg至约750μg、约200μg至约775μg、约200μg至约800μg、约200μg至约825μg、约200μg至约850μg、约200μg至约875μg、约200μg至约900μg、约200μg至约925μg、约200μg至约950μg、约200μg至约975μg、或约200μg至约1,000μg。

仍在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以在以下的范围内：例如，约250μg至约275μg、约250μg至约300μg、约250μg至约325μg、约250μg至约350μg、约250μg至约375μg、约250μg至约400μg、约250μg至约425μg、约250μg至约450μg、约250μg至约475μg、约250μg至约500μg、约250μg至约525μg、约250μg至约550μg、约250μg至约575μg、约250μg至约600μg、约250μg至约625μg、约250μg至约650μg、约250μg至约675μg、约250μg至约700μg、约250μg至约725μg、约250μg至约750μg、约250μg至约775μg、约250μg至约800μg、约250μg至约825μg、约250μg至约850μg、约250μg至约875μg、约250μg至约900μg、约250μg至约925μg、约250μg至约950μg、约250μg至约975μg、约250μg至约1,000μg、约300μg至约325μg、约300μg至约350μg、约300μg至约375μg、约300μg至约400μg、约300μg至约425μg、约300μg至约450μg、约300μg至约475μg、约300μg至约500μg、约300μg至约525μg、约300μg至约550μg、约300μg至约575μg、约300μg至约600μg、约300μg至约625μg、约300μg至约650μg、约300μg至约675μg、约300μg至约700μg、约300μg至约725μg、约300μg至约750μg、约300μg至约775μg、约300μg至约800μg、约300μg至约825μg、约300μg至约850μg、约300μg至约875μg、约300μg至约900μg、约300μg至约925μg、约300μg至约950μg、约300μg至约975μg、约300μg至约1,000μg、约400μg至约425μg、约400μg至约450μg、约400μg至约475μg、约400μg至约500μg、约400μg至约525μg、约400μg至约550μg、约400μg至约575μg、约400μg至约600μg、约400μg至约625μg、约400μg至约650μg、约400μg至约675μg、约400μg至约700μg、约400μg至约725μg、约400μg至约750μg、约400μg至约775μg、约400μg至约800μg、约400μg至约825μg、约400μg至约850μg、约400μg至约875μg、约400μg至约900μg、约400μg至约925μg、约400μg至约950μg、约400μg至约975μg、或约400μg至约1,000μg。

仍在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以在以下的范围内：例如，约500μg至约525μg、约500μg至约550μg、约500μg至约575μg、约500μg至约600μg、约500μg至约625μg、约500μg至约650μg、约500μg至约675μg、约500μg至约700μg、约500μg至约725μg、约500μg至约750μg、约500μg至约775μg、约500μg至约800μg、约500μg至约825μg、约500μg至约850μg、约500μg至约875μg、约500μg至约900μg、约500μg至约925μg、约500μg至约950μg、约500μg至约975μg、约500μg至约1,000μg、约600μg至约625μg、约600μg至约650μg、约600μg至约675μg、约600μg至约700μg、约600μg至约725μg、约600μg至约750μg、约600μg至约775μg、约600μg至约800μg、约600μg至约825μg、约600μg至约850μg、约600μg至约875μg、约600μg至约900μg、约600μg至约925μg、约600μg至约950μg、约600μg至约975μg、约600μg至约1,000μg、约700μg至约725μg、约700μg至约750μg、约700μg至约775μg、约700μg至约800μg、约700μg至约825μg、约700μg至约850μg、约700μg至约875μg、约700μg至约900μg、约700μg至约925μg、约700μg至约950μg、约700μg至约975μg、约700μg至约1,000μg、约800μg至约825μg、约800μg至约850μg、约800μg至约875μg、约800μg至约900μg、约800μg至约925μg、约800μg至约950μg、约800μg至约975μg、或约800μg至约1,000μg。

在该实施方案的方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以是，例如，约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg,260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg,360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg,460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg,560mg、约570mg、约580mg、约590mg、约600mg、约610mg、约620mg、约630mg、约640mg、约650mg,660mg、约670mg、约680mg、约690mg、约700mg、约710mg、约720mg、约730mg、约740mg、约750mg,760mg、约770mg、约780mg、约790mg、约800mg、约810mg、约820mg、约830mg、约840mg、约850mg,860mg、约870mg、约880mg、约890mg、约900mg、约910mg、约920mg、约930mg、约940mg、约950mg,960mg、约970mg、约980mg、约990mg、或约1,000mg。

在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以是，例如，至少1mg、至少2mg、至少3mg、至少4mg、至少5mg、至少6mg、至少7mg、至少8mg、至少9mg、至少10mg、至少15mg、至少20mg、至少25mg、至少30mg、至少35mg、至少40mg、至少45mg、至少50mg、至少55mg、至少60mg、至少65mg、至少70mg、至少75mg、至少80mg、至少85mg、至少90mg、至少95mg、至少100mg、至少110mg、至少120mg、至少130mg、至少140mg、至少150mg、至少160mg、至少170mg、至少180mg、至少190mg、至少200mg、至少210mg、至少220mg、至少230mg、至少240mg、至少250mg,260mg、至少270mg、至少280mg、至少290mg、至少300mg、至少310mg、至少320mg、至少330mg、至少340mg、至少350mg,360mg、至少370mg、至少380mg、至少390mg、至少400mg、至少410mg、至少420mg、至少430mg、至少440mg、至少450mg,460mg、至少470mg、至少480mg、至少490mg、至少500mg、至少510mg、至少520mg、至少530mg、至少540mg、至少550mg,560mg、至少570mg、至少580mg、至少590mg、至少600mg、至少610mg、至少620mg、至少630mg、至少640mg、至少650mg,660mg、至少670mg、至少680mg、至少690mg、至少700mg、至少710mg、至少720mg、至少730mg、至少740mg、至少750mg,760mg、至少770mg、至少780mg、至少790mg、至少800mg、至少810mg、至少820mg、至少830mg、至少840mg、至少850mg,860mg、至少870mg、至少880mg、至少890mg、至少900mg、至少910mg、至少920mg、至少930mg、至少940mg、至少950mg,960mg、至少970mg、至少980mg、至少990mg、或至少1,000mg。

又在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以是，例如，至多1mg、至多2mg、至多3mg、至多4mg、至多5mg、至多6mg、至多7mg、至多8mg、至多9mg、至多10mg、至多15mg、至多20mg、至多25mg、至多30mg、至多35mg、至多40mg、至多45mg、至多50mg、至多55mg、至多60mg、至多65mg、至多70mg、至多75mg、至多80mg、至多85mg、至多90mg、至多95mg、至多100mg、至多110mg、至多120mg、至多130mg、至多140mg、至多150mg、至多160mg、至多170mg、至多180mg、至多190mg、至多200mg、至多210mg、至多220mg、至多230mg、至多240mg、至多250mg,260mg、至多270mg、至多280mg、至多290mg、至多300mg、至多310mg、至多320mg、至多330mg、至多340mg、至多350mg,360mg、至多370mg、至多380mg、至多390mg、至多400mg、至多410mg、至多420mg、至多430mg、至多440mg、至多450mg,460mg、至多470mg、至多480mg、至多490mg、至多500mg、至多510mg、至多520mg、至多530mg、至多540mg、至多550mg,560mg、至多570mg、至多580mg、至多590mg、至多600mg、至多610mg、至多620mg、至多630mg、至多640mg、至多650mg,660mg、至多670mg、至多680mg、至多690mg、至多700mg、至多710mg、至多720mg、至多730mg、至多740mg、至多750mg,760mg、至多770mg、至多780mg、至多790mg、至多800mg、至多810mg、至多820mg、至多830mg、至多840mg、至多850mg,860mg、至多870mg、至多880mg、至多890mg、至多900mg、至多910mg、至多920mg、至多930mg、至多940mg、至多950mg,960mg、至多970mg、至多980mg、至多990mg、或至多1,000mg。

仍在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以在以下的范围内：例如，约1mg至约10mg、约1mg至约20mg、约1mg至约30mg、约1mg至约40mg、约1mg至约50mg、约1mg至约60mg、约1mg至约70mg、约1mg至约80mg、约1mg至约90mg、约1mg至约100mg、约1mg至约110mg、约1mg至约120mg、约1mg至约130mg、约1mg至约140mg、约1mg至约150mg、约5mg至约10mg、约5mg至约20mg、约5mg至约30mg、约5mg至约40mg、约5mg至约50mg、约5mg至约60mg、约5mg至约70mg、约5mg至约80mg、约5mg至约90mg、约5mg至约100mg、约5mg至约110mg、约5mg至约120mg、约5mg至约130mg、约5mg至约140mg、约5mg至约150mg、约10mg至约20mg、约10mg至约30mg、约10mg至约40mg、约10mg至约50mg、约10mg至约60mg、约10mg至约70mg、约10mg至约80mg、约10mg至约90mg、约10mg至约100mg、约10mg至约110mg、约10mg至约120mg、约10mg至约130mg、约10mg至约140mg、约10mg至约150mg、约10mg至约175mg、约10mg至约200mg、约10mg至约225mg、约10mg至约250mg、约25mg至约50mg、约25mg至约75mg、约25mg至约100mg、约25mg至约125mg、约25mg至约150mg、约25mg至约175mg、约25mg至约200mg、约25mg至约225mg、约25mg至约250mg、约50mg至约75mg、约50mg至约100mg、约50mg至约125mg、约50mg至约150mg、约50mg至约175mg、约50mg至约200mg、约50mg至约225mg、约50mg至约250mg、约75mg至约100mg、约75mg至约125mg、约75mg至约150mg、约75mg至约175mg、约75mg至约200mg、约75mg至约225mg、或约75mg至约250mg。

仍在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以在以下的范围内：例如，约100mg至约125mg、约100mg至约150mg、约100mg至约175mg、约100mg至约200mg、约100mg至约225mg、约100mg至约250mg、约100mg至约275mg、约100mg至约300mg、约100mg至约325mg、约100mg至约350mg、约100mg至约375mg、约100mg至约400mg、约100mg至约425mg、约100mg至约450mg、约100mg至约475mg、约100mg至约500mg、约100mg至约525mg、约100mg至约550mg、约100mg至约575mg、约100mg至约600mg、约125mg至约150mg、约125mg至约175mg、约125mg至约200mg、约125mg至约225mg、约125mg至约250mg、约125mg至约275mg、约125mg至约300mg、约125mg至约325mg、约125mg至约350mg、约125mg至约375mg、约125mg至约400mg、约125mg至约425mg、约125mg至约450mg、约125mg至约475mg、约125mg至约500mg、约125mg至约525mg、约125mg至约550mg、约125mg至约575mg、约125mg至约600mg、约150mg至约175mg、约150mg至约200mg、约150mg至约225mg、约150mg至约250mg、约150mg至约275mg、约150mg至约300mg、约150mg至约325mg、约150mg至约350mg、约150mg至约375mg、约150mg至约400mg、约150mg至约425mg、约150mg至约450mg、约150mg至约475mg、约150mg至约500mg、约150mg至约525mg、约150mg至约550mg、约150mg至约575mg、约150mg至约600mg、约200mg至约225mg、约200mg至约250mg、约200mg至约275mg、约200mg至约300mg、约200mg至约325mg、约200mg至约350mg、约200mg至约375mg、约200mg至约400mg、约200mg至约425mg、约200mg至约450mg、约200mg至约475mg、约200mg至约500mg、约200mg至约525mg、约200mg至约550mg、约200mg至约575mg、约200mg至约600mg、约200mg至约625mg、约200mg至约650mg、约200mg至约675mg、约200mg至约700mg、约200mg至约725mg、约200mg至约750mg、约200mg至约775mg、约200mg至约800mg、约200mg至约825mg、约200mg至约850mg、约200mg至约875mg、约200mg至约900mg、约200mg至约925mg、约200mg至约950mg、约200mg至约975mg、或约200mg至约1,000mg。

仍在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以在以下的范围内：例如，约250mg至约275mg、约250mg至约300mg、约250mg至约325mg、约250mg至约350mg、约250mg至约375mg、约250mg至约400mg、约250mg至约425mg、约250mg至约450mg、约250mg至约475mg、约250mg至约500mg、约250mg至约525mg、约250mg至约550mg、约250mg至约575mg、约250mg至约600mg、约250mg至约625mg、约250mg至约650mg、约250mg至约675mg、约250mg至约700mg、约250mg至约725mg、约250mg至约750mg、约250mg至约775mg、约250mg至约800mg、约250mg至约825mg、约250mg至约850mg、约250mg至约875mg、约250mg至约900mg、约250mg至约925mg、约250mg至约950mg、约250mg至约975mg、约250mg至约1,000mg、约300mg至约325mg、约300mg至约350mg、约300mg至约375mg、约300mg至约400mg、约300mg至约425mg、约300mg至约450mg、约300mg至约475mg、约300mg至约500mg、约300mg至约525mg、约300mg至约550mg、约300mg至约575mg、约300mg至约600mg、约300mg至约625mg、约300mg至约650mg、约300mg至约675mg、约300mg至约700mg、约300mg至约725mg、约300mg至约750mg、约300mg至约775mg、约300mg至约800mg、约300mg至约825mg、约300mg至约850mg、约300mg至约875mg、约300mg至约900mg、约300mg至约925mg、约300mg至约950mg、约300mg至约975mg、约300mg至约1,000mg、约400mg至约425mg、约400mg至约450mg、约400mg至约475mg、约400mg至约500mg、约400mg至约525mg、约400mg至约550mg、约400mg至约575mg、约400mg至约600mg、约400mg至约625mg、约400mg至约650mg、约400mg至约675mg、约400mg至约700mg、约400mg至约725mg、约400mg至约750mg、约400mg至约775mg、约400mg至约800mg、约400mg至约825mg、约400mg至约850mg、约400mg至约875mg、约400mg至约900mg、约400mg至约925mg、约400mg至约950mg、约400mg至约975mg、或约400mg至约1,000mg。

仍在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的锥虫属抗原的量可以在以下的范围内：例如，约500mg至约525mg、约500mg至约550mg、约500mg至约575mg、约500mg至约600mg、约500mg至约625mg、约500mg至约650mg、约500mg至约675mg、约500mg至约700mg、约500mg至约725mg、约500mg至约750mg、约500mg至约775mg、约500mg至约800mg、约500mg至约825mg、约500mg至约850mg、约500mg至约875mg、约500mg至约900mg、约500mg至约925mg、约500mg至约950mg、约500mg至约975mg、约500mg至约1,000mg、约600mg至约625mg、约600mg至约650mg、约600mg至约675mg、约600mg至约700mg、约600mg至约725mg、约600mg至约750mg、约600mg至约775mg、约600mg至约800mg、约600mg至约825mg、约600mg至约850mg、约600mg至约875mg、约600mg至约900mg、约600mg至约925mg、约600mg至约950mg、约600mg至约975mg、约600mg至约1,000mg、约700mg至约725mg、约700mg至约750mg、约700mg至约775mg、约700mg至约800mg、约700mg至约825mg、约700mg至约850mg、约700mg至约875mg、约700mg至约900mg、约700mg至约925mg、约700mg至约950mg、约700mg至约975mg、约700mg至约1,000mg、约800mg至约825mg、约800mg至约850mg、约800mg至约875mg、约800mg至约900mg、约800mg至约925mg、约800mg至约950mg、约800mg至约975mg、或约800mg至约1,000mg。

本文公开的免疫原性组合物可以任选地并且还包含一种或更多种佐剂。佐剂是使对本文公开的锥虫属抗原的免疫应答增加或多样化的任何物质或物质混合物。佐剂可以用于减少免疫次数或保护性免疫所需要的抗原量。非限制性佐剂包括，例如，脂质体，病毒样颗粒(VLP)，纳米颗粒，油相，包括但不限于弗氏类佐剂，诸如，例如，弗氏完全佐剂(FCA)；弗氏不完全佐剂(FIA)；皂苷元糖苷(sapogenin glycosides)，诸如，例如，皂苷；卡波姆；N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺(通常被称为胞壁酰二肽或“MDP”)；和脂多糖(LPS)。这样的佐剂通常以乳液形式与水相一起使用，或更常见地，与水不溶性无机盐一起使用。这些无机盐包括氢氧化铝、硫酸锌、胶体氢氧化铁、磷酸钙或氯化钙。

佐剂的另一个实例是基于铝的佐剂(或基于明矾的佐剂)。基于铝的佐剂通过沉淀抗原形成“贮库(depot)”来刺激针对共施用的抗原的免疫应答。基于铝的佐剂主要刺激T_H2免疫应答。常用的基于明矾的佐剂包括氢氧化铝(Al(OH)₃)、磷酸铝(AlPO₄)、羟基磷酸铝、无定形羟基磷酸铝(AAHS)和所谓的“明矾”KAl(SO₄)·12H₂O。

特定的佐剂以及制备和使用方法在以下中描述：例如，Gupta等Vaccine,11:993-306,1993；Arnon,R.(编著)Synthetic Vaccines 1:83-92,CRC Press,Inc.,Boca Raton,Fla.,1987；和David W.Waggoner,Jr.等,Immunogenicity-Enhancing Carriers andCompositions Thereof and Methods of Using the Same,美国专利公布第20040057958号(Mar.25,2004)。另外的佐剂包括在以下中描述的任何化合物："Vaccine Design,TheSubunit and Adjuvant Approach”的第7章(141-227页)(编辑Powell,M.F.和Newman,M.J.)Pharmaceutical Biotechnology,第6卷,Plenum Press(New York)。来自该纲要的实例包括胞壁酰二肽(MDP)和Montanide 720。分子诸如聚肌苷：胞嘧啶(聚I:C)或包含CpG基序的质粒DNA也可以作为佐剂与包封在微粒中的抗原组合施用。在另一个实例中，佐剂是促进抗原化合物进入到细胞的细胞质中的剂，诸如李斯特菌溶胞素(listeriolysin)、链球菌溶血素或其混合物。

在一个实施方案中，本文公开的免疫原性组合物包含本文公开的单一佐剂。在一个实施方案中，本文公开的免疫原性组合物包含本文公开的多于一种佐剂。在该实施方案的方面，本文公开的免疫原性组合物包含，例如，本文公开的1种、2种、3种、4种、或5种佐剂。在该实施方案的其他方面，本文公开的免疫原性组合物包含，例如，本文公开的至少1种、至少2种、至少3种、至少4种、或至少5种佐剂。又在该实施方案的其他方面，本文公开的免疫原性组合物包含，例如，本文公开的至多1种、至多2种、至多3种、至多4种、或至多5种佐剂。仍在该实施方案的其他方面，本文公开的免疫原性组合物包含，例如，本文公开的1种至2种、1种至3种、1种至4种、1种至5种、2种至3种、2种至4种、2种至5种、3种至4种、3种至5种、或4种至5种佐剂。

佐剂通常占施用剂量的一半。通常，包含佐剂的免疫原性组合物将以约0.25mL至约1mL的剂量施用。因此，如果以约1mL剂量施用免疫原性组合物，约0.5mL的该组合物将是佐剂。类似地，如果以约0.5mL剂量施用免疫原性组合物，约0.25mL的该组合物将是佐剂。

包含在免疫原性组合物中的本文公开的佐剂的量是有效增加个体中靶向的锥虫属抗原的适当免疫应答的量。通常，该量也是不引起显著不良副作用的量。这样的量将根据采用哪种佐剂(adjuvant or adjuvants)而变化。用于特定免疫原性组合物的佐剂的最佳量可以通过标准研究确定，所述标准研究包括观察抗体滴度和个体中的其他反应。

通常，本文公开的有效且安全的佐剂剂量从约100μg/mL至约1,500μg/mL浓度变化。在该实施方案的方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的佐剂的量可以是，例如，约100μg/mL、约200μg/mL、约300μg/mL、约400μg/mL、约500μg/mL、约600μg/mL、约700μg/mL、约800μg/mL、约900μg/mL、约1,000μg/mL、约1,100μg/mL、约1,200μg/mL、约1,300μg/mL、约1,400μg/mL、或约1,500μg/mL。在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的佐剂的量可以是，例如，至少100μg/mL、至少200μg/mL、至少300μg/mL、至少400μg/mL、至少500μg/mL、至少600μg/mL、至少700μg/mL、至少800μg/mL、至少900μg/mL、至少1,000μg/mL、至少1,100μg/mL、至少1,200μg/mL、至少1,300μg/mL、至少1,400μg/mL、或至少1,500μg/mL。又在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的佐剂的量可以是，例如，至多100μg/mL、至多200μg/mL、至多300μg/mL、至多400μg/mL、至多500μg/mL、至多600μg/mL、至多700μg/mL、至多800μg/mL、至多900μg/mL、至多1,000μg/mL、至多1,100μg/mL、至多1,200μg/mL、至多1,300μg/mL、至多1,400μg/mL、或至多1,500μg/mL。

又在该实施方案的其他方面，包含在免疫原性组合物中的本文公开的佐剂的量可以是，例如，约100μg/mL至约200μg/mL、约100μg/mL至约300μg/mL、约100μg/mL至约400μg/mL、约100μg/mL至约500μg/mL、约100μg/mL至约600μg/mL、约100μg/mL至约700μg/mL、约100μg/mL至约800μg/mL、约100μg/mL至约900μg/mL、约100μg/mL至约1,000μg/mL、约100μg/mL至约1,200μg/mL、约100μg/mL至约1,300μg/mL、约100μg/mL至约1,400μg/mL、约100μg/mL至约1,500μg/mL、约200μg/mL至约300μg/mL、约200μg/mL至约400μg/mL、约200μg/mL至约500μg/mL、约200μg/mL至约600μg/mL、约200μg/mL至约700μg/mL、约200μg/mL至约800μg/mL、约200μg/mL至约900μg/mL、约200μg/mL至约1,000μg/mL、约200μg/mL至约1,200μg/mL、约200μg/mL至约1,300μg/mL、约200μg/mL至约1,400μg/mL、约200μg/mL至约1,500μg/mL、约300μg/mL至约400μg/mL、约300μg/mL至约500μg/mL、约300μg/mL至约600μg/mL、约300μg/mL至约700μg/mL、约300μg/mL至约800μg/mL、约300μg/mL至约900μg/mL、约300μg/mL至约1,000μg/mL、约300μg/mL至约1,200μg/mL、约300μg/mL至约1,300μg/mL、约300μg/mL至约1,400μg/mL、约300μg/mL至约1,500μg/mL、约400μg/mL至约500μg/mL、约400μg/mL至约600μg/mL、约400μg/mL至约700μg/mL、约400μg/mL至约800μg/mL、约400μg/mL至约900μg/mL、约400μg/mL至约1,000μg/mL、约400μg/mL至约1,200μg/mL、约400μg/mL至约1,300μg/mL、约400μg/mL至约1,400μg/mL、约400μg/mL至约1,500μg/mL、约500μg/mL至约600μg/mL、约500μg/mL至约700μg/mL、约500μg/mL至约800μg/mL、约500μg/mL至约900μg/mL、约500μg/mL至约1,000μg/mL、约500μg/mL至约1,200μg/mL、约500μg/mL至约1,300μg/mL、约500μg/mL至约1,400μg/mL、约500μg/mL至约1,500μg/mL、约600μg/mL至约700μg/mL、约600μg/mL至约800μg/mL、约600μg/mL至约900μg/mL、约600μg/mL至约1,000μg/mL、约600μg/mL至约1,200μg/mL、约600μg/mL至约1,300μg/mL、约600μg/mL至约1,400μg/mL、约600μg/mL至约1,500μg/mL、约700μg/mL至约800μg/mL、约700μg/mL至约900μg/mL、约700μg/mL至约1,000μg/mL、约700μg/mL至约1,200μg/mL、约700μg/mL至约1,300μg/mL、约700μg/mL至约1,400μg/mL、约700μg/mL至约1,500μg/mL、约800μg/mL至约900μg/mL、约800μg/mL至约1,000μg/mL、约800μg/mL至约1,200μg/mL、约800μg/mL至约1,300μg/mL、约800μg/mL至约1,400μg/mL、约800μg/mL至约1,500μg/mL、约900μg/mL至约1,000μg/mL、约900μg/mL至约1,200μg/mL、约900μg/mL至约1,300μg/mL、约900μg/mL至约1,400μg/mL、约900μg/mL至约1,500μg/mL、约1,000μg/mL至约1,200μg/mL、约1,000μg/mL至约1,300μg/mL、约1,000μg/mL至约1,400μg/mL、约1,000μg/mL至约1,500μg/mL、约1,100μg/mL至约1,200μg/mL、约1,100μg/mL至约1,300μg/mL、约1,100μg/mL至约1,400μg/mL、约1,100μg/mL至约1,500μg/mL、约1,200μg/mL至约1,300μg/mL、约1,200μg/mL至约1,400μg/mL、约1,200μg/mL至约1,500μg/mL、约1,300μg/mL至约1,400μg/mL、约1,300μg/mL至约1,500μg/mL、或约1,400μg/mL至约1,500μg/mL。

本文公开的免疫原性组合物还可以包含一种或更多种药学上可接受的载体。可用于本文公开的免疫原性组合物的药学上可接受的载体包括在采用的剂量和浓度对个体无毒的任何相容剂，并且当施用时基本上没有长期或永久的有害作用，并且包括术语诸如药学上可接受的媒介物、稳定剂、增溶剂、稀释剂、添加剂、助剂或赋形剂。这样的载体通常与活性化合物混合或被允许稀释或包封活性化合物并且可以是固体、半固体或液体剂。应当理解的是，活性成分可以是在所需载体或稀释剂中可溶性的或可作为在所需载体或稀释剂中的混悬剂递送。本文公开的载体也可以充当佐剂。可以使用多种药学上可接受的载体中的任何一种，包括但不限于水性介质，诸如，例如水、生理盐水、氨基乙酸、透明质酸等；固体载体，诸如，例如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等；溶剂；分散介质；包衣；抗细菌和抗真菌剂；等渗剂和延缓吸收剂；或任何其他非活性成分。药理学上可接受的载体的选择可以取决于施用的方式。除非任何药理学上可接受的载体与活性成分不相容，考虑将其用于药学上可接受的组合物中。这样的药学载体的具体使用的非限制性实例可见于PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS(Howard C.Ansel等,编著,Lippincott Williams&Wilkins Publishers,第7版.1999)；REMINGTON:THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(Alfonso R.Gennaro编著,Lippincott,Williams&Wilkins,第20版2000)；GOODMAN&GILMAN'S THE PHARMACOLOGICALBASIS OF THERAPEUTICS(Joel G.Hardman等,编著,McGraw-Hill Professional,第10版2001)；和HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL EXCIPIENTS(Raymond C.Rowe等,APhAPublications,第4版2003)。

本文公开的免疫原性组合物还可以包含一种或更多种药学上可接受的组分(或药物组分)，包括但不限于缓冲液、防腐剂、张力调节剂、盐、抗氧化剂、渗透压调节剂(osmolality adjusting agents)、生理物质、药理物质、疏松剂(bulking agents)、乳化剂、润湿剂、甜味剂或调味剂等。调节pH的各种缓冲液和手段可以用于制备本说明书中公开的药物组合物，前提条件是所得制剂(preparation)是药学上可接受的。这样的缓冲液包括但不限于乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水和硼酸盐缓冲液。应理解，可以根据需要使用酸或碱调节组合物的pH。药学上可接受的抗氧化剂包括但不限于焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁羟茴醚和丁羟甲苯。有用的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、三氯叔丁醇、硫柳汞、乙酸苯汞、硝酸苯汞、稳定的氯氧组合物(诸如，例如，)和螯合剂(诸如，例如，DTPA或DTPA-双酰胺、钙DTPA和CaNaDTPA-双酰胺)。可用于药物组合物中的张力调节剂包括但不限于，盐(诸如，例如氯化钠、氯化钾)、甘露醇或丙三醇和其他药学上可接受的张力调节剂。药物组合物可以作为盐而被提供并且可以用许多种酸来形成，所述许多种酸包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐比对应的游离碱形式倾向于更易溶于水或其他质子溶剂中。应当理解的是，药理学领域中已知的这些物质和其他物质可以包括在药物组合物中。

本说明书的方面部分地公开了治疗基于锥虫属的疾病的方法。这样的方法包括治疗性(在锥虫属感染后)和预防性(在锥虫属暴露、感染或病理之前)。例如，治疗个体锥虫属感染的治疗性和预防性方法包括治疗患有锥虫属感染或病理或者处于患有锥虫属感染或病理的风险的个体，治疗患有锥虫属感染的个体，以及保护个体免受锥虫属感染以减少、阻抑或消除个体中锥虫属感染的概率，以减少、阻抑或消除个体对锥虫感染的易感性，以减少、阻抑或消除个体中的锥虫属感染，以减少、阻抑或消除感染的个体的症状、发病率和/或死亡率，或者减少、阻抑或消除锥虫属从感染的个体向未感染的个体的传播。这样的方法包括施用本文公开的免疫原性组合物以治疗性或预防性地治疗(疫苗接种或免疫)患有锥虫属感染或病理或者处于患有锥虫属感染或病理的风险的个体。因此，方法可以治疗锥虫属感染或病理，或者为个体提供免于感染的保护(例如，预防性保护)。

在一个实施方案中，治疗基于锥虫属的疾病的方法包括将本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物以足以减少与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状的量施用至有相应需要的个体，从而治疗所述基于锥虫属的疾病。在该实施方案的方面，免疫原性组合物包含本文公开的一种或更多种锥虫属抗原。

在一个实施方案中，本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物被用于治疗基于锥虫属的疾病。本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物的使用通过减少与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状来治疗基于锥虫属的疾病。在该实施方案的方面，本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物的施用处于足以减少与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状的量，从而治疗所述基于锥虫属的疾病。在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物的施用处于足以增加、诱导、增强、加强、促进或刺激锥虫属清除或去除的量；或者降低、减少、抑制、阻抑、预防、控制或限制锥虫属传播至另一个体的量。

在一个实施方案中，治疗基于锥虫属的疾病的方法包括将本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物以足以针对锥虫属感染或病理使个体免疫或对个体进行疫苗接种的量施用至有相应需要的个体，从而治疗基于锥虫属的疾病。在该实施方案的方面，免疫原性组合物包含本文公开的一种或更多种锥虫属抗原。在该实施方案的其他方面，本文公开的免疫原性组合物的施用处于足以增加、诱导、增强、加强、促进或刺激针对锥虫属的免疫应答的量。又在该实施方案的其他方面，本文公开的免疫原性组合物的施用处于足以增加、诱导、增强、加强、促进或刺激锥虫属清除或去除的量；或者降低、减少、抑制、阻抑、预防、控制或限制锥虫属传播至另一个体的量。

在一个实施方案中，治疗基于锥虫属的疾病的方法包括将本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物以足以针对锥虫属感染或病理保护个体的量施用至有相应需要的个体，从而治疗基于锥虫属的疾病。在该实施方案的方面，免疫原性组合物包含本文公开的一种或更多种锥虫属抗原。在该实施方案的其他方面，本文公开的免疫原性组合物的施用处于足以针对锥虫属感染或病理使个体免疫或对个体进行疫苗接种的量，或者减少、降低、限制、控制或抑制对锥虫属感染或病理的易感性的量。

在一个实施方案中，本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物被用于治疗基于锥虫属的疾病。在该实施方案的方面，本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物的使用处于足以针对锥虫属感染或病理使个体免疫或对个体进行疫苗接种的量。

基于锥虫属的疾病指其中病理生理学作用是由于锥虫属的存在的任何状况、疾病或紊乱。存在两种不同类型的锥虫，并且它们的生命周期不同，即stercorarian物种和唾传锥虫物种。Stercorian是被传递至来自Triatominae亚科(最重要地骚扰锥蝽(Triatomainfestans))的昆虫粪便中的受体的锥虫。该组包括克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、路氏锥虫(T.lewisi)、T.melophagium、T.nabiasi、T.rangeliT.rangeli、泰氏锥虫(T.theileri)、T.theodori。蛇滴虫亚属(Herpetosoma)包含路氏锥虫并且锥体虫亚属(Schizotrypanum)包含克氏锥虫。唾传锥虫是达氏锥虫属(Duttonella)、锥虫亚属(Trypanozoon)、Pycnomonas和Nannomonas的亚属的锥虫。这些锥虫在采采蝇(东非舌蝇物种(Glossina spp.))的唾液中被传递至受体。抗原变异是唾传锥虫物种共有的特征，这已经在布氏锥虫中被特别好地研究。锥虫亚属(Trypanozoon subgenus)包含物种布氏锥虫、布氏罗得西亚锥虫(T.rhodesiense)和马媾疫锥虫(T.equiperdum)。亚属达氏锥虫属(Duttonella)包含物种活动锥虫(T.vivax)。Nannomonas包含刚果锥虫(T.congolense)。

在该实施方案的方面，基于锥虫属的疾病是恰加斯病。在该实施方案的另一个方面，基于锥虫属的疾病是非洲昏睡病，包括但不限于东非昏睡病(East African sleepingsickness)和西非昏睡病(West African sleeping sickness)。

恰加斯病或美洲锥虫病(American trypanosomiasis)由克氏锥虫引起，克氏锥虫通过仅发现于美洲的昆虫载体传播至动物和人类。如果不治疗，感染是终生的，并且可能会危及生命。估计，在墨西哥、中美洲和南美洲农村地区多达800万人患有恰加斯病，其中大部分不知道自己被感染了。另外，从拉丁美洲农村地区至城市地区以及至世界其他地区的大规模人口流动增加了地理分布，并且改变了恰加斯病的流行病学。例如，在美国患有恰加斯病的大部分人在流行国家获得其感染，并且目前的估计表明，患有克氏锥虫感染的多于30万人生活在美国。

克氏锥虫是一种人畜共患疾病，其可以通过吸血的锥蝽接吻虫传播至人类。用于锥虫病的常见锥蝽(triatomine)载体属于属锥猎蝽属(Triatoma)、红猎蝽属(Rhodnius)、和攀锥蝽属(Panstrongylus)。通过以包含克氏锥虫寄生虫的循环锥鞭毛体的人类或动物血液为食，锥蝽接吻虫变成感染的。被摄取的锥鞭毛体在载体的中消化道转化为上鞭毛体(epimastigotes)，在中消化道中寄生虫繁殖和分化，并且然后迁移至后消化道，在后消化道中它们分化为感染性的亚循环锥鞭毛体。当在感染的锥蝽载体进食血餐之后克氏锥虫在咬伤部位附近排便并且在其粪便中释放锥鞭毛体时，人类或动物宿主可能变成被克氏锥虫感染。锥鞭毛体通过皮肤中的伤口或其他破裂，通过摄取或通过完整的粘膜(诸如结膜)进入宿主。在宿主内部，锥鞭毛体侵入侵染部位附近的细胞，在那里它们分化为细胞内无鞭毛体。无鞭毛体通过二元分裂繁殖并且分化为锥鞭毛体，并且然后作为血流锥鞭毛体释放到循环中。锥鞭毛体感染来自多种组织的细胞并且在新感染部位转化为细胞内无鞭毛体。由这种感染周期可能导致临床表现。血流锥鞭毛体不复制(不同于非洲锥虫)。仅当寄生虫进入另一个细胞或被另一个载体摄取时，复制才会恢复。尽管获得恰加斯病的主要手段是通过载体传播(vector-bourne transmission)，克氏锥虫也可以通过污染的血液制品经由输血、从感染的捐赠者移植的器官、从母体至婴儿的跨胎盘(trans-placentally)(先天性)、摄取污染的食物或饮品和/或意外暴露传播。

恰加斯病具有急性期和慢性期。在感染之后立即发生急性恰加斯病，可能持续多达数周或数月，并且寄生虫可能被发现于循环血液中。感染可能是轻微的或无症状的。在侵染部位周围可能存在发热或肿胀(在该处寄生虫进入到皮肤或粘膜中)。罕见地，急性感染可能导致心肌或脑以及脑周围内层的严重炎症。在急性期后，大部分感染者(infectedpeople)进入到长期无症状形式的疾病(称为“慢性不确定”)，在此期间在血液中很少发现或未发现寄生虫。在此期间，大部分人都不知道其感染。许多人可能在生命中保持无症状，并且也从未发展出与恰加斯相关的症状。然而，估计的20％-30％感染者会在其生命过程中发展出使人衰弱且有时危及生命的医学问题。慢性恰加斯病的并发症可以包括：1)心脏并发症包括心脏增大(心肌病)、泵血不良的心脏扩张、心脏衰竭、心律异常、心率异常和心脏骤停(猝死)；和/或2)肠并发症，包括食管增大(巨食管)、食管结肠增大(巨结肠)、进食困难或粪便通便困难。在免疫系统受阻抑的人中(例如，由于AIDS或化学疗法)，恰加斯病可以通过被发现于循环血液中的寄生虫再活化。这种情况可能引起严重的疾病。

非洲昏睡病或非洲锥虫病由寄生虫布氏锥虫(Trypanosoma brucei)的两个亚种引起，这两个亚种在形态学上不可区分。然而，这种疾病的临床特征取决于所包括的亚种。布氏罗得西亚锥虫(T.b.rhodesiense)(东非昏睡病)被发现于非洲东部和东南部地区。每年向世界卫生组织报告数百例东非昏睡病。超过95％的人类感染病例发生在坦桑尼亚、乌干达、马拉维、和赞比亚。野生和驯养动物是感染的主要储存库(reservoir)。牛已经牵涉疾病至新地区的传播和当地的爆发，而野生动物储存库被认为是导致猎人和游客到游戏公园的零星传播的原因。患有布氏罗得西亚锥虫的感染的国际旅行者是罕见的，但它偶尔会发生。在美国，平均每年诊断一例病例。输入到美国的大部分昏睡病例都发生于在东非野生动物园旅行的旅行者中。

布氏冈比亚锥虫(T.b.gambiense)(西非昏睡病)主要被发现于非洲中部和西非的有限地区。非洲的大部分昏睡病由这种形式的寄生虫引起。昏睡病的流行病在过去一直是一个重要的公共卫生问题，但目前该疾病控制得相当好，且近年来每年报告7,000-10,000例。超过95％的人类感染病例被发现于刚果民主共和国、安哥拉、苏丹、中非共和国、乍得和乌干达北部。尽管寄生虫有时可以被发现于家畜中，人类是重要的感染储存库。美国的输入的感染极为罕见，并且大部分病例发生在移民的非洲国民中而非返回美国的旅行者中。

两个亚种布氏锥虫都通过采采蝇(东非舌蝇物种)的叮咬传播。通过以包含布氏锥虫寄生虫的循环锥鞭毛体的人类或动物血液为食，采采蝇变成感染的。在蝇的中消化道中，摄取的锥鞭毛体转化为前循环(procyclic)锥鞭毛体，二元分裂繁殖，离开中消化道，并且转化为上鞭毛体。上鞭毛体到达蝇的唾液腺并且继续通过二元分裂繁殖，在那里它们转化为亚循环锥鞭毛体。在蝇中的周期约需要3周。当在对宿主血餐期间感染的采采蝇将含有布氏锥虫的亚循环锥鞭毛体的唾液注入到皮肤组织时，人类或动物宿主可能变成感染的。寄生虫进入淋巴系统并且传递到血液中。在宿主体内，它们转化为血流锥鞭毛体，被带到整个身体的其他部位，到达其他血液流体(例如淋巴液、脊髓液)，并且通过二元分裂继续复制。尽管变成感染的主要手段是通过载体传播(vectorbourne transmission)，布氏锥虫也可以通过污染的血液制品经由输血、从感染的捐赠者移植的器官、从母体至婴儿的跨胎盘(transplacentally)(先天性)、摄取污染的食物或饮品、性行为(sexual intercourse)和/或意外暴露传播。

非洲人类昏睡病的临床过程具有两个时期。在第一时期，寄生虫被发现于外周循环中，但其尚未侵入中枢神经系统。在寄生虫跨越血脑屏障并且感染中枢神经系统后，疾病就会进入第二时期。亚种具有不同的疾病进展速率，并且临床特征取决于哪种形式的寄生虫布氏罗得西亚锥虫或布氏冈比亚锥虫正在引起感染。然而，如果不治疗，任一种形式的感染最终都会导致昏迷和死亡。布氏罗得西亚锥虫感染(东非昏睡病)进展快速。在一些患者中，在采采蝇咬伤部位处会发展大的疮(下疳(chancre))。大部分患者在感染性叮咬的1-2周内发展发热、头痛、肌肉和关节疼痛以及淋巴结增大。一些人发展皮疹。在感染数周之后，寄生虫侵入中枢神经系统并且最终引起精神恶化和其他神经系统问题。死亡通常在几个月内发生。布氏冈比亚锥虫感染(西非昏睡病)进展较缓慢。起初，仅存在轻微的症状。感染的人可能具有间歇性发热、头痛、肌肉和关节疼痛、以及不适。可能发生皮肤瘙痒、淋巴结肿大和体重减轻。通常，在1-2年之后，存在中枢神经系统受累、伴有性格改变、白天嗜睡且夜间睡眠障碍、和进行性混乱的证据。其他神经系统征象，诸如部分瘫痪或平衡或行走问题、以及荷尔蒙不平衡可能发生。未治疗的感染过程很少持续长于6-7年，且更常见的是在约3年内死亡。

本说明书的方面部分地提供了个体。个体包括任何哺乳动物，包括人类，并且人类可以是患者。

本文公开的方法包括用于基于锥虫属的疾病的治疗。治疗包括任何治疗性或有益效果，包括提供至特定个体的任何客观或个体可测量或可检测的改进或益处。治疗性或有益作用可以但不必是完全消除由锥虫属感染、增殖、复制或病理引起的或与之相关的所有或任何特定不良状况、症状、紊乱、疾患、疾病或并发症。因此，当存在由锥虫属感染、增殖、复制、或病理引起的或与之相关的不良状况、症状、紊乱、疾患、疾病或并发症的逐渐改进或部分减少，或者由锥虫属感染、增殖、复制或在短的或长的持续期间内的病理引起的或与之相关的一种或更多种状况、不良症状、紊乱、疾患、疾病或并发症的恶化或进展的抑制、降低、减少、阻抑、预防、限制或控制时，实现令人满意的临床终点。

在该实施方案的方面，本文公开的治疗或使用的方法可以减少、降低、抑制、限制、延迟或预防锥虫属感染、增殖、复制或病理。在该实施方案的其他方面，本文公开的治疗或使用的方法可以减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制锥虫属病原体的数目或滴度；减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制锥虫属病原体的增殖或复制；减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制合成的锥虫属蛋白的量；或者减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制复制的锥虫属病原体核酸量的量。又在该实施方案的其他方面，本文公开的治疗或使用的方法可以降低、减少、抑制、阻抑、预防、控制或限制由锥虫属感染、增殖或复制、或者病理引起的或与之相关的一种或更多种不良状况、症状、紊乱、疾患、疾病或并发症。仍在该实施方案的其他方面，本文公开的治疗或使用的方法可以改进、加快、促进、增强、加强、或加速个体从锥虫属感染或病理的恢复，或者由锥虫属感染、增殖或复制、或者病理引起的或与之相关的一种或更多种不良症状、紊乱、疾患、疾病或并发症的恢复。

在该实施方案的其他方面，本文公开的治疗或使用的方法可以稳定锥虫属感染、病理、或者由锥虫属感染、增殖、复制、或者病理引起的或与之相关的不良状况、症状、紊乱、疾患、疾病或并发症。又在该实施方案的其他方面，本文公开的治疗或使用的方法可以降低、减少、抑制、阻抑、限制或控制锥虫属病原体从感染的个体向未感染的个体的传播。仍在该实施方案的其他方面，本文公开的治疗或使用的方法可以减少或消除同时或随后治疗诸如用于治疗患有锥虫属感染或病理或者处于患有锥虫属感染或病理的风险的个体使用的另一种药物或其他剂的需要、剂量频率或量。例如，减少辅助疗法的量，例如，对于锥虫属感染或病理学的治疗的减少或降低，或者疫苗接种或免疫方案被认为是有益作用。另外，减少或降低用于个体的疫苗接种或免疫以为个体提供保护使用的锥虫属抗原的量被认为是有益作用。

本说明书的方面部分地提供了施用本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物。如本文使用的，术语“施用”指向个体提供本文公开的锥虫属抗原或免疫原性组合物的，可能导致临床、治疗或实验有益作用的任何递送机制。用于将本文公开的组合物施用至个体的实际递送机制可以由本领域普通技术人员通过考虑以下因素来确定，所述因素包括但不限于，基于锥虫属的疾病的类型、基于锥虫属的疾病的位置、基于锥虫属的疾病的原因、基于锥虫属的疾病的严重程度、对于基于锥虫属的疾病所期望的缓解程度、对于基于锥虫属的疾病所期望的缓解持续时间、所使用的特定锥虫属抗原和/或免疫原性组合物、所使用的特定锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的排出速率、所使用的特定锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的药效动力学、待包含在免疫原性组合物中的其他化合物的性质、特定的施用途径、个体的特定特征、病史和风险因素(诸如，例如，年龄、体重、一般健康状况等)，或其任何组合。

可以使用细胞摄取方法将本文公开的组合物施用至个体。使用细胞摄取方法施用本文公开的组合物包括多种肠内或肠胃外方法，包括但不限于以任何可接受的形式的口服施用，诸如，例如，片剂、液体、胶囊、粉末、可吸入等；以任何可接受的形式的局部施用，诸如，例如，滴剂、喷雾剂、乳膏、凝胶或软膏；以任何可接受的形式的血管内施用，诸如，例如，静脉内注射、静脉内输注、动脉内注射、动脉内输注和导管滴注到脉管系统中；以任何可接受的形式的周边组织(peri-tissue)和组织内施用，诸如，例如，腹膜内注射、肌内注射、皮下注射、皮下输注、眼内注射、视网膜注射或视网膜下注射或硬膜外注射；以任何可接受的形式的囊内(intravesicular)施用，诸如，例如，导管滴注；以及通过放置装置，诸如，例如，植入物、贴剂、丸剂(pellet)、导管、渗透泵、栓剂、生物可蚀解(bioerodible)的递送系统、非生物可蚀解的递送系统或另一种植入的延伸的或缓慢的释放系统。生物可降解的聚合物和使用方法的示例性列表描述于以下中：例如，Handbook of Biodegradable Polymers(Abraham J.Domb等,编著,Overseas Publishers Association,1997)。

本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物以足以治疗基于锥虫属的疾病的量施用。在该实施方案的方面，施用的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的量是足以减少与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状的量、足以针对锥虫属感染或病理使个体免疫或对个体进行疫苗接种的量、或者足以针对锥虫属感染或病理保护个体的量。如本文使用的，术语“足够的量”包括“有效量”、“有效剂量”、“治疗有效量”或“治疗有效剂量”，并且指实现所期望的治疗性作用所需的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的最小量，并且包括足以减少或抑制与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状的量。

在该实施方案的方面，有效量的本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物将与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状减少或抑制了，例如，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在该实施方案的其他方面，有效量的本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物将与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状减少或抑制了，例如，至多10％、至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％、至多90％或至多100％。又在该实施方案的其他方面，有效量的本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物将与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状减少或抑制了，例如，约10％至约100％、约10％至约90％、约10％至约80％、约10％至约70％、约10％至约60％、约10％至约50％、约10％至约40％、约20％至约100％、约20％至约90％、约20％至约80％、约20％至约20％、约20％至约60％、约20％至约50％、约20％至约40％、约30％至约100％、约30％至约90％、约30％至约80％、约30％至约70％、约30％至约60％、或约30％至约50％。仍在该实施方案的其他方面，有效量的本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物将与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状减少或抑制了，持续，例如，至少一周、至少一个月、至少两个月、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少十个月、至少十一个月、或至少十二个月。

待递送至个体的本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的实际有效量可以由本领域普通技术人员通过考虑以下因素来确定，所述因素包括但不限于，基于锥虫属的疾病的类型、基于锥虫属的疾病的位置、基于锥虫属的疾病的原因、基于锥虫属的疾病的严重程度、对于基于锥虫属的疾病所期望的缓解程度、对于基于锥虫属的疾病所期望的缓解持续时间、所使用的特定锥虫属抗原和/或免疫原性组合物、所使用的特定锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的排出速率、所使用的特定锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的药效动力学、待包含在免疫原性组合物中的其他化合物的性质、所使用的特定的施用途径、个体的特定特征、病史和风险因素(诸如，例如，年龄、体重、一般健康状况等)，或其任何组合。另外，在使用本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的重复施用的情况下，实际治疗有效量还将取决于以下因素，所述因素包括但不限于施用频率、本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的半衰期、或者其任何组合。本领域普通技术人员已知的是，在施用至人类之前，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以从体外测定和使用动物模型的体内施用研究中推断出来。考虑到各种施用途径的不同效率，可以预期所需有效量的广泛变化。例如，通常将预期口服施用需要比通过静脉内或玻璃体内注射施用更高的剂量水平。可以使用最优化的标准经验途径调节这些剂量水平的变化，这是本领域的普通技术人员所熟知的。精确的治疗有效剂量水平和模式优选地由主治医生考虑上述因素来确定。

在该实施方案的其他方面，本文公开的有效量的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物通常在约0.001mg/kg/天至约100mg/kg/天的范围内。在该实施方案的方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以是例如，至少0.001mg/kg/天、至少0.01mg/kg/天、至少0.1mg/kg/天、至少1.0mg/kg/天、至少5.0mg/kg/天、至少10mg/kg/天、至少15mg/kg/天、至少20mg/kg/天、至少25mg/kg/天、至少30mg/kg/天、至少35mg/kg/天、至少40mg/kg/天、至少45mg/kg/天、或至少50mg/kg/天。

在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约0.001mg/kg/天至约10mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约15mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约20mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约25mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约30mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约35mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约40mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约45mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约50mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约75mg/kg/天、或约0.001mg/kg/天至约100mg/kg/天。又在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约0.01mg/kg/天至约10mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约15mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约20mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约25mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约30mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约35mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约40mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约45mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约50mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约75mg/kg/天、或约0.01mg/kg/天至约100mg/kg/天。仍在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约0.1mg/kg/天至约10mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约15mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约20mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约25mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约30mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约35mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约40mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约45mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约50mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约75mg/kg/天、或约0.1mg/kg/天至约100mg/kg/天。

在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约1mg/kg/天至约10mg/kg/天、约1mg/kg/天至约15mg/kg/天、约1mg/kg/天至约20mg/kg/天、约1mg/kg/天至约25mg/kg/天、约1mg/kg/天至约30mg/kg/天、约1mg/kg/天至约35mg/kg/天、约1mg/kg/天至约40mg/kg/天、约1mg/kg/天至约45mg/kg/天、约1mg/kg/天至约50mg/kg/天、约1mg/kg/天至约75mg/kg/天、或约1mg/kg/天至约100mg/kg/天。又在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约5mg/kg/天至约10mg/kg/天、约5mg/kg/天至约15mg/kg/天、约5mg/kg/天至约20mg/kg/天、约5mg/kg/天至约25mg/kg/天、约5mg/kg/天至约30mg/kg/天、约5mg/kg/天至约35mg/kg/天、约5mg/kg/天至约40mg/kg/天、约5mg/kg/天至约45mg/kg/天、约5mg/kg/天至约50mg/kg/天、约5mg/kg/天至约75mg/kg/天、或约5mg/kg/天至约100mg/kg/天。

在该实施方案的其他方面，本文公开的有效量的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物通常在约0.001mg/天至约100mg/天的范围内。在该实施方案的方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以是例如，至少0.001mg/天、至少0.01mg/天、至少0.1mg/天、至少1.0mg/天、至少5.0mg/天、至少10mg/天、至少15mg/天、至少20mg/天、至少25mg/天、至少30mg/天、至少35mg/天、至少40mg/天、至少45mg/天、或至少50mg/天。

在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约0.001mg/天至约10mg/天、约0.001mg/天至约15mg/天、约0.001mg/天至约20mg/天、约0.001mg/天至约25mg/天、约0.001mg/天至约30mg/天、约0.001mg/天至约35mg/天、约0.001mg/天至约40mg/天、约0.001mg/天至约45mg/天、约0.001mg/天至约50mg/天、约0.001mg/天至约75mg/天、或约0.001mg/天至约100mg/天。又在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约0.01mg/天至约10mg/天、约0.01mg/天至约15mg/天、约0.01mg/天至约20mg/天、约0.01mg/天至约25mg/天、约0.01mg/天至约30mg/天、约0.01mg/天至约35mg/天、约0.01mg/天至约40mg/天、约0.01mg/天至约45mg/天、约0.01mg/天至约50mg/天、约0.01mg/天至约75mg/天、或约0.01mg/天至约100mg/天。仍在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约0.1mg/天至约10mg/天、约0.1mg/天至约15mg/天、约0.1mg/天至约20mg/天、约0.1mg/天至约25mg/天、约0.1mg/天至约30mg/天、约0.1mg/天至约35mg/天、约0.1mg/天至约40mg/天、约0.1mg/天至约45mg/天、约0.1mg/天至约50mg/天、约0.1mg/天至约75mg/天、或约0.1mg/天至约100mg/天。

在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约1mg/天至约10mg/天、约1mg/天至约15mg/天、约1mg/天至约20mg/天、约1mg/天至约25mg/天、约1mg/天至约30mg/天、约1mg/天至约35mg/天、约1mg/天至约40mg/天、约1mg/天至约45mg/天、约1mg/天至约50mg/天、约1mg/天至约75mg/天、或约1mg/天至约100mg/天。又在该实施方案的其他方面，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约5mg/天至约10mg/天、约5mg/天至约15mg/天、约5mg/天至约20mg/天、约5mg/天至约25mg/天、约5mg/天至约30mg/天、约5mg/天至约35mg/天、约5mg/天至约40mg/天、约5mg/天至约45mg/天、约5mg/天至约50mg/天、约5mg/天至约75mg/天、或约5mg/天至约100mg/天。

给药可以为单一剂量或累积性的(连续给药)，并且可以由本领域技术人员容易地确定。例如，基于锥虫属的疾病的治疗可以包括一次性施用有效量的本文的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物。作为非限制性实例，本文公开的有效量的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物可以一次施用至个体，例如，作为单次注射或沉积。可选地，基于锥虫属的疾病的治疗可以包括在一系列时间段内进行多于一次(multiple)施用有效量的本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物，诸如，例如，每天、每几天一次、每周一次、每月一次或每年一次。作为非限制性实例，本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物可以每年一次、两次、三次、四次、五次或六次地施用至个体。施用时机可以因人而异，这取决于诸如个体症状的严重程度这样的因素。例如，有效剂量的本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物可以每三个月一次地施用至个体持续不确定的时间段，或者直到个体不再需要疗法。本领域普通技术人员将认识到，可以在整个治疗过程中监测个体的状况，并且所施用的本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的有效量可以被相应地调节。

包含本文公开的锥虫属抗原和/或免疫原性组合物的组合物也可以与其他治疗性化合物组合施用至个体以增加治疗的整体治疗作用。使用多于一种化合物治疗适应症可以增加有益作用同时减少副作用的存在。

本说明书的方面可以被描述如下：

1.一种锥虫属(Trypanosoma)抗原，其中所述锥虫属抗原包含以下，基本上由以下组成或者由以下组成：SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12，或者与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％氨基酸同一性的肽，或者具有来自SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12的至少7个连续氨基酸的肽。

2.根据实施方案1所述的锥虫属抗原，其中所述肽与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％的氨基酸同一性，相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12包含至少1个连续氨基酸缺失、添加、和/或取代。

3.根据实施方案1所述的锥虫属抗原，其中所述肽与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％的氨基酸同一性，相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12包含至少1个非连续氨基酸缺失、添加、和/或取代。

4.根据实施方案1所述的锥虫属抗原，其中所述肽与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％的氨基酸同一性，相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12包含至多11个连续氨基酸缺失、添加、和/或取代。

5.根据实施方案1所述的锥虫属抗原，其中所述肽与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％的氨基酸同一性，相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12包含至多11个非连续氨基酸缺失、添加、和/或取代。

6.一种免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含如在实施方案1-5中任一项中定义的一种或更多种锥虫属抗原，基本上由如在实施方案1-5中任一项中定义的一种或更多种锥虫属抗原组成或者由如在实施方案1-5中任一项中定义的一种或更多种锥虫属抗原组成。

7.根据实施方案6所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:6(CH47)，基本上由SEQ ID NO:6(CH47)组成或者由SEQ ID NO:6(CH47)组成。

8.根据实施方案6或实施方案7所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:9(CH77)，基本上由SEQ ID NO:9(CH77)组成或者由SEQ ID NO:9(CH77)组成。

9.根据实施方案6-8中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:5(CH37)，基本上由SEQ ID NO:5(CH37)组成或者由SEQ ID NO:5(CH37)组成。

10.根据实施方案6所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:5(CH37)和SEQ ID NO:9(CH77)、基本上由SEQ ID NO:5(CH37)和SEQ ID NO:9(CH77)组成或者由SEQ ID NO:5(CH37)和SEQ ID NO:9(CH77)组成。

11.根据实施方案6所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:6(CH 47)和SEQ ID NO:9(CH77)，基本上由SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:6(CH 47)和SEQ ID NO:9(CH77)组成或者由SEQ ID NO:5(CH37)、SEQID NO:6(CH 47)和SEQ ID NO:9(CH77)组成。

12.根据实施方案6-11中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)和SEQ ID NO:11(CH84)，基本上由SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)和SEQ ID NO:11(CH84)组成或者由SEQ IDNO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)和SEQ ID NO:11(CH84)组成。

13.根据实施方案6或实施方案7所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:7(CH69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ IDNO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)，基本上由SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)组成或者由SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)组成。

14.根据实施方案6或实施方案7所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ IDNO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)，基本上由SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)组成或者由SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)组成。

15.根据实施方案6所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:6(CH47)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)，基本上由SEQ ID NO:2(CH30)、SEQ ID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:6(CH47)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ ID NO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)组成或者由SEQ ID NO:2(CH30)、SEQID NO:5(CH37)、SEQ ID NO:6(CH47)、SEQ ID NO:7(CH 69)、SEQ ID NO:8(CH72)、SEQ IDNO:9(CH 77)和SEQ ID NO:11(CH84)组成。

16.根据实施方案6-15中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原各自以介于约1mg至约1,000mg之间的量存在。

17.根据实施方案6-16中任一项所述的免疫原性组合物，其中免疫原性组合物还包含一种或更多种佐剂，基本上由一种或更多种佐剂组成或者由一种或更多种佐剂组成。

18.根据实施方案17所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种佐剂各自以介于约100μg/mL至约1,500μg/mL之间的量存在。

19.根据实施方案6-18中任一项所述的免疫原性组合物，所述免疫原性组合物还包含一种或更多种药学上可接受的载体，基本上由一种或更多种药学上可接受的载体组成或者由一种或更多种药学上可接受的载体组成。

20.一种治疗基于锥虫属的疾病的方法，所述方法包括以下，基本上由以下组成或者由以下组成：将如在实施方案6-18中任一项中定义的免疫原性组合物以足以减少与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状的量施用至有相应需要的个体的步骤，从而治疗所述基于锥虫属的疾病。

21.根据实施方案20所述的方法，其中所述免疫原性组合物的施用处于足以增加、诱导、增强、加强、促进或刺激锥虫属清除或去除的量，或者降低、减少、抑制、阻抑、预防、控制或限制锥虫属传播至另一个体的量。

22.根据实施方案20或实施方案21所述的方法，其中所述免疫原性组合物的施用处于足以减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制锥虫属病原体的数目或滴度的量；减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制锥虫属病原体的增殖或复制的量；减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制合成的锥虫属蛋白的量；或者减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制复制的锥虫属病原体核酸量的量。

23.根据实施方案20-22中任一项所述的方法，其中所述免疫原性组合物的施用将与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状减少了至少10％。

24.根据实施方案20-23中任一项所述的方法，其中所述免疫原性组合物的施用将与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状减少了至少一周。

25.根据实施方案20-24中任一项所述的方法，其中所述基于锥虫属的疾病是恰加斯病或非洲昏睡病。

26.如在实施方案1-5中任一项中定义的α-锥虫属抗原或如实施方案6-18中任一项中定义的免疫原性组合物用于治疗基于锥虫属的疾病的用途。

27.一种治疗基于锥虫属的疾病的方法，所述方法包括以下，基本上由以下组成，或者由以下组成；将如在实施方案1-5中任一项中定义的锥虫属抗原或如在实施方案6-19中任一项中定义的免疫原性组合物以足以针对所述锥虫属感染或病理使个体免疫或对个体进行疫苗接种的量施用至有相应需要的个体的步骤，从而治疗所述基于锥虫属的疾病。

28.一种治疗基于锥虫属的疾病的方法，所述方法包括以下，基本上由以下组成或者由以下组成：将如在实施方案1-5中任一项中定义的锥虫属抗原或如在实施方案6-19中任一项中定义的免疫原性组合物以足以针对锥虫感染或病理保护个体的量施用至有相应需要的个体。

29.根据实施方案27或实施方案28所述的方法，其中所述锥虫属抗原或所述免疫原性组合物的施用处于足以增加、诱导、增强、加强、促进或刺激针对锥虫属的免疫应答的量。

30.根据实施方案27-29中任一项所述的方法，其中所述锥虫属抗原或所述免疫原性组合物的施用处于足以针对所述锥虫属感染或病理免疫或疫苗接种所述个体的量。

31.根据实施方案27-30中任一项所述的方法，其中所述锥虫属抗原或所述免疫原性组合物的施用处于足以减少、降低、限制、控制或抑制锥虫属感染或病理的易感性的量。

32.根据实施方案27-31中任一项所述的方法，其中所述锥虫属抗原或所述免疫原性组合物的施用处于足以增加、诱导、增强、加强、促进或刺激锥虫属清除或去除的量，或者降低、减少、抑制、阻抑、预防、控制或限制锥虫属传播至另一个体的量。

33.根据实施方案27-32中任一项所述的方法，其中所述基于锥虫属的疾病是恰加斯病或非洲昏睡病。

34.如在实施方案1-5中任一项中定义的锥虫属抗原用于制备药物的用途。

35.如在实施方案6-18中任一项中定义的免疫原性组合物用于制备药物的用途。

36.根据实施方案34或35中任一项所述的用途，其中所述基于锥虫属的疾病是恰加斯病或非洲昏睡病。

实施例

仅为了说明性的目的提供以下非限制性实施例，以促进更完整理解所公开的主题。这些实例不应该被解释为限制本说明书中描述的实施方案中的任何一个，包括关于锥虫属抗原和/或免疫原性组合物，或者用于治疗基于锥虫属的疾病的方法或用途的那些实施方案。

实施例1

锥虫属肽的鉴定

使用能够预测蛋白序列肽内的T细胞反应性表位的计算机算法鉴定锥虫属抗原。在该计算机(in-silico)模型中，从锥虫属病原体收集尽可能多的蛋白序列和可能多的不同株。然后使用Clustal比对特定蛋白的可用序列，并且使用Jalview生成共有序列。然后将该序列上传到预测所有可能的T细胞反应性表位的算法中。鉴定了来自包含大量表位的区域的肽序列，并且进一步分析了这些高度T细胞免疫原性区域在不同株间的保守性。选择长度介于20-40个氨基酸之间的、其中连续氨基酸在发现的所有其他序列间共有至少70％序列同一性的保守肽序列并且进一步分析。例如，为了避免在疫苗接种后诱导自身免疫反应，评价这些保守的肽序列以确认这些序列与其他人类和鼠(murine)蛋白序列不共有显著的同一性。另外，评价这些保守的肽序列以确认这些序列可以通过F-moc化学合成制造。

使用该方法，鉴定了来自不同抗原的总计452种肽。基于预测的表位的数目对这些肽进行排序，并且评价来自该分析的前100种肽的制造可行性。最终，根据它们包含的预测表位的数目和根据它们的制造的可行性鉴定了12种候选肽。具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12的氨基酸序列的肽根据良好制造实践(GMP)各自通过Fmoc化学(Bachem AG,Switzerland)制造。SEQ ID NO:1(CH9)是对应于来自克氏锥虫的副鞭毛杆蛋白(paraflagelar rod protein)的残基60至99的40氨基酸肽。SEQ ID NO:2(CH30)是对应于来自克氏锥虫的ADP核糖基化因子1的残基1至30的30氨基酸肽。SEQ ID NO:3(CH32)是对应于来自克氏锥虫的tryparedoxin蛋白的残基1至32的32氨基酸肽。SEQ ID NO:4(CH36)是对应于来自克氏锥虫的葡萄糖6磷酸异构酶蛋白的残基564至588的25氨基酸肽。SEQ ID NO:5(CH37)是对应于来自克氏锥虫的丙酮酸磷酸二激酶蛋白的残基564至588的39氨基酸肽。SEQ ID NO:6(CH47)是对应于来自克氏锥虫的Tcp2b蛋白的残基1至34的34氨基酸肽。SEQ ID NO:7(CH69)是对应于来自克氏锥虫的DNA拓扑异构酶2蛋白的残基441至475的35氨基酸肽。SEQ ID NO:8(CH72)是对应于来自克氏锥虫的磷酸肌醇特异性磷脂酶C蛋白的残基116至145的30氨基酸肽。SEQ ID NO:9(CH77)是对应于来自克氏锥虫的二氢乳清酸脱氢酶蛋白的残基108至140的33氨基酸肽。SEQ ID NO:10(CH82)是对应于来自克氏锥虫的组蛋白H3蛋白的残基43至78的36氨基酸肽。SEQ ID NO:11(CH84)是对应于来自克氏锥虫的AGP2b2蛋白的残基36至68的33氨基酸肽。SEQ ID NO:12(CH93)是对应于来自克氏锥虫的聚-A结合蛋白的残基514至544的31氨基酸肽。通过对在美国国家生物技术信息中心(the National Centre for Biotechnology Information)(NCBI)数据库(January2006)中可用的所有锥虫属蛋白序列的多于一种序列(ClustalW)和免疫原性分析，在计算机中鉴定这些序列。每个多肽代表包含>5个人类T细胞表位的高序列保守性(≥70％)的短区域。

实施例2

对单独锥虫属肽的细胞因子应答

通过在体外暴露于诱导高IgG2a滴度的序列或肽之后疫苗接种的动物的脾细胞中产生IFNγ来评价所鉴定的肽的体内免疫原性。将BALB/c小鼠在第1天用10nmol的各自肽，在第15天用加强剂(booster)免疫并且在第21天分离脾和末端采血(terminal bleeds)。

在研究开始时将7-9周龄的育种障碍(即无病原体)BALB/c小鼠划分为3组，且每组6只动物(3只雄性/3只雌性)。选择BALB/c小鼠用于该研究，因为它们提供了急性恰加斯病的模型。将A组小鼠施用以下肽的10nmol/肽的等摩尔混合物：CH9(SEQ ID NO:1)、CH30(SEQID NO:2)、CH32(SEQ ID NO:3)、CH36(SEQ ID NO:4)、CH37(SEQ ID NO:5)和CH47(SEQ IDNO:6)。将B组小鼠施用以下肽的10nmol/肽的等摩尔混合物：CH69(SEQ ID NO:7)、CH72(SEQID NO:8)、CH77(SEQ ID NO:9)、CH82(SEQ ID NO:10)和CH84(SEQ ID NO:11)。将C组小鼠施用10nmol/肽等摩尔的非相关肽混合物作为对照。所有动物在第1天在尾的基部皮下免疫，并且在第15天接受加强剂。在第21天，将所有动物处死(cull)，并且收获脾和血清用于分析。

如下通过细胞因子ELISA评价T细胞应答。将小鼠脾轻轻地挤压通过细胞过滤器，并且将红细胞用红细胞裂解缓冲液(9份0.16M NH₄Cl和1份0.17M Tris，pH 7.2)去除。将来自每个实验组的脾细胞悬浮液以RPMI-1640以4×10⁶个细胞/孔的密度铺板在96孔板中，所述RPMI-1640补充有50IU/50μg/mL的青霉素/链霉素和10％FCS，并且仅包含任一种单独的培养基、伴刀豆球蛋白A(Con A)(5μg/mL)、2μM的单一多表位(polyepitope)肽。在孵育48小时之后，收集上清液，并且使用小鼠细胞因子ELISA试剂盒(BD Biosciences)分析IFN-γ和IL-4产生，以评价免疫应答的诱导。对于IFN-γ，测定的检测阈值是31.25pg/mL，并且对于IL-4，测定的检测阈值是7.81pg/mL。将应答绘制为用恰加斯肽及其各自的对照免疫的组之间细胞因子产生(pg/mL)的差异。所有组中的动物与Con A反应，其中IFN-γ水平高于1000pg/mL且IL-4水平高于200pg/mL。没有动物显示出自发增殖，且所有单独的培养基读数低于或接近IFN-γ和IL-4两者的检测阈值。

如期望的，与用Con A非特异性刺激脾细胞观察到的分泌相比，响应于多种肽分泌很少IL-4或未分泌IL-4(图1A&图1B)。至于IFN-γ分泌，结果突出了这样的事实：雌性通过分泌比雄性更高量的IFN-γ来应答。肽CH9、CH47、CH77、CH82和CH84在雌性中诱导IFN-γ分泌但在雄性中未诱导(图1C&图1D)。另一方面，CH72在雄性中诱导与雌性类似的中度IFN-γ分泌，并且仅CH69在两种性别中诱导类似的强烈的应答(图1D)。考虑到雄性和雌性之间不同的免疫应答以及性别对克氏锥虫感染的不同易感性，这些结果是非常有趣的。在IL-4产生不存在下体外暴露于回忆抗原之后，通过疫苗接种的BALB/c小鼠的脾细胞的IFN-γ产生清楚地表明用恰加斯肽的免疫诱导Th1应答。在BALB/c小鼠中对CH30、CH32、CH36和CH37的应答的不存在可以反映从该序列的显著减少的表位生成速率(即该序列对降解耐受)。

为了进一步分析通过用这些肽的疫苗接种诱导的免疫应答，在所有组的动物血清中测量对每种肽特异性的总Ig滴度。将ELISA 96孔板在+4℃用2μM单一恰加斯肽包被过夜。将板用PBST(具有0.05％TWEEN 20的PBS)洗涤两次，并且用在PBS中的1％BSA级分V封闭1小时。将板用PBST洗涤三次，然后以从1:100至1:3,200的双倍递减稀释度添加测试血清样品并且孵育2小时。在用PBST洗涤6次之后，将孔用HRP缀合的山羊抗小鼠Ig血清装载。在孵育1小时之后，将板用PBST洗涤8次，并且添加TMB底物。将反应用0.5M H₂SO₄停止，并且在450nm处读取每个孔的吸光度。

结果显示在疫苗接种的雌性与疫苗接种的雄性相比的更好抗体应答。肽CH47和CH77在两种性别中显示出最佳抗体应答，随后是CH69，CH69诱导两种性别中类似的较低抗体滴度(图2A&图2B)。

为了进一步剖析抗体应答，测量了对显示出强烈的抗体应答的肽特异性的IgG1和IgG2a抗体。为该目的，将ELISA 96孔板在+4℃用2μM单一恰加斯肽包被过夜。将板用PBST洗涤两次，并且用在PBS中的1％BSA级分V封闭1小时。将板用PBST洗涤三次，然后添加测试血清样品持续2小时。在用PBST洗涤6次之后，将孔用山羊抗小鼠IgG1或抗小鼠IgG2a装载。在1h孵育之后，添加HRP缀合的抗山羊IgG并且孵育另外1h。然后将板用PBST洗涤8次，并且添加TMB底物持续30分钟。将反应用0.5M H₂SO₄停止，并且在450nm处读取每个孔的吸光度。

如图中观察到的，肽CH47和CH77表现出IgG2a和IgG1两者的强烈的抗体应答(图3A-3D)。我们不能假设抗体是否更倾向于Th1应答(更高的IgG2a)或Th2应答(更高的IgG1)，因为这些ELISA不定量仅定性。

因此，该实施例的结果显示，新合成的恰加斯肽的体内测试结果鉴定出显示出良好的体内免疫原性和诱导显著Th1应答的一组6种肽。例如，CH9、CH47、CH69、CH72、CH77和CH84在体外暴露于序列之后在疫苗接种的动物的脾细胞中显示出强烈的IFN-γ产生，而CH47和CH77也诱导了良好的抗体应答，如由高IgG1和IgG2a滴度显示的。

实施例3

细胞因子对锥虫属肽的应答

为了进一步测试CH47(SEQ ID NO:6)、CH69(SEQ ID NO:7)、CH72(SEQ ID NO:8)、CH77(SEQ ID NO:9)、CH84(SEQ ID NO:11)以及另外的肽CH93(SEQ ID NO:12)，进行了另外的体内免疫原性测试。在研究开始时将7-9周龄的育种障碍(即无病原体)BALB/c小鼠划分为4组，且每组6只动物(3只雄性/3只雌性)。将动物在第1天和在第15天施用0.2mL组合物作为皮下注射，所述组合物包含在用0.1mL Montanide ISA-51佐剂乳化的水中的CH47、CH69、CH72、CH77、CH84和CH93的0.1mL肽混合物。第1组包含三只雌性小鼠，其接受等摩尔浓度的2.5nmol的每种肽；第2组包含三只雄性小鼠，其接受等摩尔浓度的2.5nmol的每种肽；第3组包含三只雌性小鼠，其接受等摩尔浓度的10nmol的每种肽；并且第4组包含三只雄性小鼠，其接受等摩尔浓度的10nmol的每种肽。在最后一次剂量之后7天，将所有动物处死，末端采血并且收获脾。

通过细胞因子ELISA评价T细胞应答。将相同性别和组的脾池化在一起并且轻轻地挤压通过细胞过滤器，并且将红细胞用红细胞裂解缓冲液(9份0.16M NH₄Cl和1份0.17MTris，pH 7.2)去除。将来自每个实验组的分离的脾细胞悬浮液以RPMI-1640以4×10⁵个细胞/孔的密度铺板在96孔板中，所述RPMI-1640补充有50IU/50μg/mL的青霉素/链霉素和10％FCS，并且仅包含单独的培养基、伴刀豆球蛋白A(Con A)(5μg/mL)、或以2μM的单一多表位(polyepitope)肽。在孵育48小时之后，收集上清液，并且使用小鼠细胞因子ELISA试剂盒(BD Biosciences)分析IFN-γ和IL-4产生，以评价免疫应答的诱导。对于IFN-γ，通过测定确定的细胞因子检测阈值是31.25pg/mL，并且对于IL-4，通过测定确定的检测阈值是7.81pg/mL。

根据所接受的剂量和性别的IFN-γ和IL-4分泌的结果显示于图4A&图4B中。如期望的，与用Con A非特异性刺激脾细胞观察到的分泌相比，响应于多种肽分泌很少IL-4或未分泌IL-4(图4A)。至于IFN-γ分泌，两种较高应答者是肽CH47和CH93(图4B)。与先前的研究(例如，实施例2)相比，该研究中对CH69、CH77和CH84的IFN-γ应答较低。其原因可能是肽CH47和CH93是免疫显性的，基本上甚至所有肽以等摩尔量施用，CH47和CH93在结合MHC方面更有效，并且因此与剩余肽相比是高度代表性的。在实施例2中，肽CH69、CH77和CH84与CH47和CH93处于不同的组中，并且因此不受影响。接受2.5nmol剂量或10nmol剂量的动物之间在细胞因子表达方面不存在显著差异。在用2.5nmol与10nmol疫苗接种的两种性别中，仅CH93显示出IFN-γ产生的明显增加(图4B)。

为了确定观察到的IFN-γ应答是否是特异性的，我们在来自尚未疫苗接种(未经试验)的不同小鼠品系(C57BLK6)的脾细胞中测试了单个肽。如先前所述处理总计10个脾(5只雄性/5只雌性)并且池化为单个脾细胞悬浮液。将细胞以RPMI-1640以4×10⁵个细胞/孔接种在96孔板中，所述RPMI-1640补充有50IU/50μg/mL的青霉素/链霉素和10％FCS，并且仅包含单独的培养基、伴刀豆球蛋白A(Con A)(5μg/mL)、或以2μM的单一多表位肽。在孵育48小时之后，收集上清液，并且使用小鼠细胞因子ELISA试剂盒(BD Biosciences)分析IFN-γ产生，以评价免疫应答的诱导。对于IFN-γ，通过测定确定的细胞因子检测阈值是31.25pg/mL。

结果表明用CH93获得的应答是非特异性的，因为来自暴露于CH93的未经试验动物的脾细胞在48h孵育之后分泌非常高水平的IFN-γ(图5)。CH93最有可能通过与模式识别受体(诸如TLR)结合来刺激先天免疫。

为了进一步分析通过用这些肽的疫苗接种诱导的免疫应答，如下通过ELISA对来自不同组的血清样品测量总Ig滴度。将ELISA 96孔板在+4℃用2μM单一恰加斯肽包被过夜。将板用PBST洗涤两次，并且用在PBS中的1％BSA级分V封闭1小时。将板用PBST洗涤三次，然后以从1:100至1:3,200的双倍递减稀释度添加测试血清样品并且孵育2小时。在用PBST洗涤6次之后，将孔用HRP缀合的山羊抗小鼠Ig血清装载。在孵育1小时之后，将板用PBST洗涤8次，并且添加TMB底物。将反应用0.5M H₂SO₄停止，并且在450nm处读取每个孔的吸光度。

在分析ELISA结果之后，CH47在雄性和雌性中显示出优异的应答(图6A)。然而，这种高应答抑制(dampen)肽CH69和CH77的抗体应答(图6B&图6D)，肽CH69和CH77在实施例2中显示出显著的抗体应答。CH93未诱导抗体应答。

为了进一步剖析由CH47和CH77生成的抗体应答，测量了对每种单一肽特异性的IgG1和IgG2a抗体。为该目的，将ELISA 96孔板在+4℃用2μM单一肽包被过夜。将板用PBST洗涤两次，并且用在PBS中的1％BSA级分V封闭1小时。将板用PBST洗涤三次，然后添加测试血清样品持续2小时。在用PBST洗涤6次之后，将孔用山羊抗小鼠IgG1或抗小鼠IgG2a装载。在1小时孵育之后，添加HRP缀合的抗山羊IgG并且孵育另外1小时。然后将板用PBST洗涤8次，并且添加TMB底物持续30分钟。将反应用0.5M H₂SO₄停止，并且在450nm处读取每个孔的吸光度。

如图7A-7D中观察到的，肽CH47和CH77表现出强烈的IgG1抗体应答，这是Th2应答的特征(图7A&图7B)。有趣的是，仅CH47能够诱导强烈的IgG2a应答(图7D)，这指示小鼠中的Th1应答。

实施例4

CH47的免疫显性

为了测试CH47对其他肽的免疫原性的作用，将与CH47一起测试的其他肽(如实施例2和3中公开的)分为两组，并且在第1天用第1组或第2组中的肽疫苗接种小鼠。然后将每组分为A和B，并且在第14天，亚组A接受在第1天接受的相同肽的剂量，而亚组B接受与第1天相同的肽加上CH47。剂量方案如下：1A组，在第1天和在第14天10nmol的各自CH9、CH30、CH32、CH36和CH37；1B组，在第1天10nmol的各自CH9、CH30、CH32、CH36和CH37，并且在第14天相同肽组合加10nmol的CH47；2A组，在第1天和在第14天10nmol的各自CH69、CH72、CH77、CH82和CH84；2B组，在第1天10nmol的各自CH69、CH72、CH77、CH82和CH84，并且在第14天相同肽组合加10nmol的CH47。

在研究开始时，在7-9周龄的育种障碍(即无病原体)BALB/c小鼠中进行研究。4组中的每一组包括4只动物(2只雄性/2只雌性)。在第1天和在第14天，所有动物接受2个剂量0.2mL组合物(在用0.1mL Montanide ISA-51佐剂乳化的水中的0.1mL肽混合物)作为皮下注射。如实施例2和3中描述分析脾和血清样品。

表3表明根据所接受的剂量和性别的脾细胞培养物的上清液中的IL-4产生(pg/mL)。与用伴刀豆球蛋白A(ConA)获得的应答相比，响应于任何测试的肽产生很少IL-4。

表4表明根据所接受的剂量和性别的脾细胞培养物的上清液中的IFN-γ产生(pg/mL)。肽CH30、CH69、CH72、CH77和CH84(以黑框标记)诱导中度至良好的IFN-γ应答，这通过在加强剂疫苗制剂中具有CH47而增加。CH9和CH32诱导强烈的IFN-γ产生，但它是非特异性的，因为甚至在来自未用肽疫苗接种的动物的脾细胞中它也是高的。这种非特异性应答最可能是由于它们的低溶解度和颗粒性质。

至于抗体应答，CH37和CH77两者都能够诱导抗体应答(表5)。表5示出了血清的以1:400稀释度的抗体滴度(吸光度(abs)450nm-570nm)。在所有进行的研究中，CH77一直表现出高水平的抗体应答。我们从未测量过CH37的这样的强烈的抗体应答，因为在过去的研究中，CH37一直用于包括CH47的肽组合中，并且因此其抗体应答被CH47沉默。

为了进一步剖析由CH37和CH77生成的抗体应答，测量了对每种单一肽特异性的IgG1和IgG2a抗体(图8A-8D)。将结果表示为相对吸光度，其中已经从测试组中减去对照组的吸光度。如图8A-8D中观察到的，对于CH37和CH77两者，IgG1滴度比IgG2a滴度高。IgG2a应答倾向于与针对感染的细胞的补体活化和ADCC应答相关，而IgG1抗体可以与诱导中和应答的细胞外表面上锥虫属的可用抗原结合。

总之，结果表明加强剂中的单剂量的CH47增加细胞因子和抗体应答两者。从测试的肽的清单中我们认为疫苗应该由CH37和CH77组成用于其抗体应答，且由CH30、CH69、CH72和CH84组成用于其的IFN-γ应答，在加强剂免疫接种中加上CH47以强化其他肽的作用。

实施例5

兔抗血清

为了在兔中生成针对所公开的恰加斯肽的抗体，使用两只重约3Kg的雄性新西兰兔(Zealand Rabbit)。将一只兔在研究开始时末端采血，以收集血液，将其用作阴性对照。将另一只雄性使用以下时间表进行免疫。在第0天，动物接受600μL皮下注射的免疫原性组合物。第0天免疫原性组合物通过乳化300μL肽混合物以及使用300μL Montanide ISA-51佐剂(Seppic)来制备，所述肽混合物包含溶解在水中的30nmol的各自CH30、CH37、CH69、CH72、CH77和CH84。在第14天，动物接受另一个600μL皮下注射的免疫原性组合物。第14天免疫原性组合物通过乳化300μL肽混合物以及使用300μL Montanide ISA-51佐剂(Seppic)来制备，所述肽混合物包含溶解在水中的30nmol的各自CH30、CH37、CH69、CH72、CH84和CH47。在第28天，动物接受第三个600μL皮下注射的免疫原性组合物。第14天免疫原性组合物通过乳化300μL肽以及使用300μL Montanide ISA-51佐剂(Seppic)混合物来制备，所述肽混合物包含溶解在水中的30nmol的各自CH30、CH37、CH69、CH72、CH77和CH84。在第42天，动物接受第四个600μL皮下注射的免疫原性组合物。第42天免疫原性组合物通过乳化300μL肽混合物以及使用300μL Montanide ISA-51佐剂(Seppic)来制备，所述肽混合物包含溶解在水中的30nmol的各自CH30、CH37、CH69、CH72、CH84和CH47。0.5mL血液样品从在第0天(预先疫苗接种)、第14天、第25天(在第二次免疫之后11天)、第39天(在第三次免疫之后第7天)和第67天(在第四次免疫之后25天)的动物获得。将血液在室温放置以凝结，然后收集血清并且分析抗体应答。

为了评价由这些免疫原性组合物诱导的免疫应答，如下通过ELISA对来自不同组的血清样品测量总Ig滴度。将ELISA 96孔板的孔在+4℃用2μM的一种恰加斯肽单独包被过夜。将板用PBST洗涤两次并且用在PBS中的1％BSA级分V封闭1小时。将板用PBST洗涤三次，然后以从1:100至1:3,200的双倍递减稀释度添加180μL血清样品并且孵育2小时。在用PBST洗涤4次之后，将孔用HRP缀合的山羊抗兔Ig血清装载。在黑暗中孵育1小时之后，将板用PBST洗涤6次，并且添加100μL TMB底物，并且将板在黑暗中在环境温度孵育30分钟。将反应用50μl 0.5M H₂SO₄停止。在450nm处读取每个孔的吸光度，并且通过读取在570nm处的吸光度减去背景。

图9A-9H示出在第67天即接受第四次免疫之后25天的IgG水平。与阴性对照血清以及与总肽混合物两者相比，肽CH30、CH37、CH47和CH77各自单独引发强烈的免疫原性应答。肽CH69和CH72也单独引发良好的免疫原性应答。

实施例6

锥虫属鼠攻击中的疫苗效力

为了检查本文公开的锥虫属抗原作为针对恰加斯的预防性疫苗的用途，在2月龄的BALB/cJ小鼠中测试疫苗组合物。命名为CH-v的组合物包含佐剂Montanide ISA-51(Seppic)和以下肽：CH30、CH37、CH69、CH72、CH77和CH84。还使用由CH-v加CH47组成的另外的组合物。对2月龄的雄性BALB/cJ小鼠进行免疫。首先使动物适应BSL-3实验室的装置，然后免疫。如图10中描述进行免疫。

将免疫的动物用克氏锥虫血流锥鞭毛体株RA(进化谱系/分型单位＝TcVI)(Risso,等,J Infect Dis 189:2250,2004)攻击，动物通过腹膜内注射(IP)接受50个锥鞭毛体。将RA株通过在研究所的动物设施中的雄性CF1小鼠中的连续传代进行维持。在免疫之后且在攻击之前从每只小鼠获得另一种血浆样品并储存。循环寄生虫的存在通过计数来自在感染后(dpi)第10天、第13天和第40天的一滴血液(根据光学显微术以400×，30个视野)的寄生虫来评价。从16dpi开始，寄生虫血症通过从5ul外周血与45ul裂解液(用来裂解红细胞)混合开始、计数血细胞计数器(hemocytometer)(Neubauer)中的寄生虫来确定。将值表示为寄生虫的数目/ml。每天随访死亡率。

确定所有组的寄生虫血症数据。在18dpi时在B组与对照(A+C)中观察到寄生虫数目的显著差异(p<0.00014)(图11)。出乎意料地，用单独的CH-v疫苗接种的动物(B组)中寄生虫的数目超过了对照组中寄生虫的数目。

确定所有组的死亡率数据(图12)。有趣的是，在攻击后25天之后，D组(CH-v与CH47组合)中40％的动物在攻击中存活，并且到第50天33％仍然保持活的。分析使用学生检验(Student's test)(寄生虫血症值)、ANOVA、随后是Bonferroni和Gehan-Breslow-Wilcoxon(GraphPad Software)进行。还鉴定了死亡率的显著差异：B与对照(A+C)，p<0.0005；D与对照(A+C)，p<0.0394(图11)。获得的结果显示用CH-v(B组)免疫的动物发展较高的寄生虫血症，这与该组中观察到的早期死亡率相关。这表明该混合物或其组分之一可能充当调节因子，其对宿主应答的结果产生负面影响，导致观察到更快的死亡率。来自D组(CH-v与CH47组合)的动物中的寄生虫血症值与在对照小鼠中观察到的类似，尽管如此，在27dpi时的死亡率被减少至58.3％，并且直到40dpi天时被减少至66.7％，而对照组在24dpi时达到100％死亡率。总之，结果表明，被用CH-v疫苗接种的动物接受的加强剂中的肽CH47的包含对于引发保护性免疫应答是重要的。同样重要的是注意到该肽的作用可能抵消由CH-v混合物对免疫应答诱导的负面作用。

用克氏锥虫的RA株的感染模型对于被评价的疫苗候选者来说是一个严峻的挑战，因为它引起100％的死亡率以及脾、胸腺和神经节的组织结构的改变和破坏。通过在小鼠中连续传代来维持该株有利于保护该株的生物学特征，诸如其毒力，其毒力在体外培养时衰减。

实施例7

锥虫属鼠攻击中的疫苗效力

为了检查CH-v与CH47组合或单独的CH47(两个剂量)作为针对恰加斯的预防性疫苗的效力，在2月龄的BALB/cJ小鼠中测试疫苗组合物。该研究由三组(A、B和C)组成，每组包含12只2月龄的雄性BALB/cJ小鼠。如图13中代表的，A组中的动物在第1天和第14天接受两个剂量的佐剂化的单独的CH47。B组中的动物在第1天接受佐剂化的CH-v(CH30、CH37、CH69、CH72、CH77、CH84)，随后在第14天接受佐剂化的CH-v与CH47组合。C组(对照)在第1天和第14天接受水和Montanide ISA-51佐剂的乳液作为皮下剂量。

将免疫的动物用克氏锥虫血流锥鞭毛体株RA(进化谱系/分型单位＝TcVI)(Risso,等,J Infect Dis 189:2250,2004)攻击，动物通过腹膜内注射(IP)接受50个锥鞭毛体。将RA株通过在研究所的动物设施中的雄性CF1小鼠中的连续传代进行维持。寄生虫血症通过从5μL外周血与45μL裂解液(用来裂解红细胞)混合开始、计数血细胞计数器(hemocytometer)(Neubauer)中的寄生虫来确定。将值表示为寄生虫的数目/ml。每天随访死亡率。

如图14中观察到的，用CH-v与CH47组合获得的存活率与研究1中获得的那些存活率非常类似(33.3％)。出乎意料地，用仅CH47免疫的组中的存活率经历了更高的存活率，其中在致死性锥虫属攻击之后60天，与对照组中的83.5％相比仅50％的动物死于感染。

与对照组相比，在第17天时两个疫苗接种组中的寄生虫血症减少。CH-v+CH47组中的存活动物在第22天经历了寄生虫血症的进一步减少(图15)。然而，观察在过去第25天存活的那些动物的攻击后第17天和第22天的寄生虫血症，与对照组相比，两个疫苗接种组中的寄生虫血症都被减少(图16)。最可能的解释是，在对照组中的急性感染中存活的动物进入慢性感染而不是明确的感染。

最后，应当理解，尽管本说明书的方面通过参考特定的实施方案被强调，本领域的技术人员将容易理解这些公开的实施方案仅是对本文公开的主题的原理的说明。因此，应当理解，除非明确地同样陈述，所公开的主题决不限于本文描述的特定的化合物、组合物、物品、设备、方法、方案和/或试剂等。此外，本领域普通技术人员将理解，在不偏离本说明书的精神的情况下，根据本文的教导，可以做出某些变化、修改、排列、改变、添加、减少及其子组合。因此预期，以下所附的权利要求和今后引入的权利要求被解释为包括所有这样的变化、修改、排列、改变、添加、减少及其子组合，因为在其真正的精神和范围内。

本文描述了本发明的某些实施方案，包括本发明人已知用于进行本发明的最佳的模式。当然，在阅读了前述说明书后，对这些描述的实施方案的变化对于本领域的普通技术人员将变得明显。本发明人预期了技术人员酌情采用这样的变化，并且本发明人设想了本发明另外以不同于本文具体描述的方式被实施。因此，本发明包括被适用法律许可的所附权利要求书中列举的主题的所有修改和等同物。此外，在其所有可能的变化中上述实施方案的任何组合由本发明所涵盖，除非本文另外指示或另外与上下文明显矛盾。

本发明的替代性实施方案、要素或步骤的分组不应被解释为限制。每个组成员可以被单独地或与本文公开的其他组成员组合来提及和要求保护。预期，为了方便和/或专利性的原因，组的一个或更多个成员可以被包括于组或从组中删除。当任何这样的包括或删除发生时，本说明书被认为包含作为修改的组，从而实现在所附权利要求书中使用的所有马库什组(Markush group)的书面描述。

除非另外指示，在本说明书和权利要求书中使用的表达特性、项目、数量、参数、特性、术语等等的数字被理解为在所有情况下被术语“约”修饰。如本文使用的，术语“约”意指如此合格的特征、项目、数量、参数、特性、或术语包含规定的特征、项目、数量、参数、性质或术语的值的以上和以下正或负10％的范围。因此，除非相反指示，本说明书和所附权利要求书中列出的数字参数为可以变化的近似值。例如，在确定给定分析物的质量时，质谱设备可以略微地变化，在离子的质量或离子的质/荷比的上下文中，术语“约”指+/-0.50原子质量单位。至少，而非试图限制对权利要求书的范围的等同原则的应用，每个数字指示应该至少根据所报告的有效数字的数目和通过应用通常的约数技术来解释。

关于实施方案或实施方案的方面的术语“可能(may)”或“可以(can)”的使用也带有“可能不(may not)”或“不能(cannot)”的替代含义。因此，如果本说明书公开了实施方案或实施方案的方面可能(may)或可以(can)作为本发明的主题的部分被包括，那么也明确地意指负面限制或排除性条件，意味着实施方案或实施方案的方面可能不是或不能作为本发明的主题的部分被包括。以类似的方式，关于实施方案或实施方案的方面的术语“任选地”的使用意指这样的实施方案或实施方案的方面可能作为本发明的主题的部分被包括，或可能不作为本发明的主题的部分被包括。这样的负面限制或排除性条件是否应用将基于该负面限制或排除性条件是否在所要求保护的主题中列举。

尽管列出本发明的广泛范围的数值范围和值为近似值，但在具体实例中所列出的数值范围和值则尽可能精确地来报告。然而，任何数值范围或值固有地包含一定的误差，该误差是由其各自的试验测量中发现的标准偏差必然产生的。本文中值的数值范围的列举仅仅意图用作单独地提及落入所述范围的每个单独数值的速记方法。除非本文另外指示，将数值范围的各单独值并入到本说明书中，如同其在本文被单独列举。

除非本文另外指示或与上下文明显矛盾，在描述本发明的上下文中(特别地在所附权利要求书的上下文中)使用的术语“一(a)”、“一(an)”、“该(the)”和类似的指示词，被解释为覆盖单数和复数两者。另外，用于识别的要素的序数指示词例如“第一”、“第二”、“第三”等被用于区分这些要素，并且不指示或暗示这样的要素的需要的或限制的数目，并且除非另外具体地陈述，不指示这样的要素的特定的位置或顺序。可以按任何合适顺序进行本文中描述的所有方法，除非本文另外指示或另外与上下文明显矛盾。本文所提供的任何以及全部实例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅意图更好地说明本发明而不对以其他方式要求保护的本发明的范围提出限制。本说明书中的语言不应该被解释为表明任何未要求保护的要素对实施本发明必不可少。

当在权利要求中使用时，无论是按照修正案提交还是添加，开放式过渡术语“包含(comprising)”(及其等同的开放式过渡措辞如包括(including)、包含(containing)和具有)单独地或与未列举的主题组合地涵盖所有清楚地叙述的要素、限制、步骤和/或特征；所指出的要素、限制和/或特征是必要的，但是可以添加其他未指出的要素、限制和/或特征，并且仍然形成权利要求的范围内的构造。可以在权利要求中使用封闭式过渡措辞“由...组成”或“基本上由...组成”替代或作为对“包含(comprising)”的修改来进一步限制本文公开的特定的实施方案。当在权利要求书中使用时，无论是按照修正案提交还是添加，封闭式过渡措辞“由...组成”排除未在权利要求中明确列举的任何要素、限制、步骤或特征。封闭式过渡措辞“基本上由...组成”将权利要求的范围限制为明确列举的要素、限制、步骤和/或特征以及不实质影响所要求保护的主题的基本特性和新颖特性的任何其他要素、限制、步骤和/或特征。因此，开放式过渡措辞“包含(comprising)”的含义被定义为涵盖所有具体列举的要素、限制、步骤和/或特征以及任何任选的、另外的未指定的要素、限制、步骤和/或特征。封闭式过渡措辞“由...组成”的含义被定义为仅包括权利要求中具体列举的那些要素、限制、步骤和/或特征，而封闭式过渡措辞“基本上由...组成”的含义被定义为仅包括权利要求中具体列举的那些要素、限制、步骤和/或特征以及不实质影响所要求保护的主题的基本特性和新颖特性的那些要素、限制、步骤和/或特征。因此，开放式过渡措辞“包含(comprising)”(及其等同的开放式过渡措辞)在其含义内包括作为限制性情况的由封闭式过渡措辞“由...组成”或“基本上由...组成”指定的要求保护的主题。因此，本文描述的或这样以措辞“包含(comprising)”要求保护的实施方案被明确地或固有明白地描述、在此能够实现和支持短语“基本上由...组成”和“由...组成”。

本说明书中引用和标识的所有专利、专利出版物、和其他出版物通过引用以其整体出于描述和公开的目的被单独地和清楚地并入本文，例如，与本发明有关可被使用的在这样的出版物中描述的组合物和方法论。这些出版物以其先于本申请的申请日期的公开内容被单独地提供。就这一点而言，任何内容不应该被解释为本发明人没有资格借助在先发明或出于任何其他原因先于这样的公开内容的承认。关于日期或陈述，关于这些文件的内容的所有表述是基于对本申请人可用的信息，并不构成关于这些文件的日期或内容的正确性的任何承认。

最后，本文使用的术语仅为了描述特定实施方案的目的，并不意图限制唯一地由权利要求书限定的本发明的范围。因此，本发明不限于如所显示和所描述的精确内容。

序列表

<110> 派特塞尔有限公司

奥尔加·普莱格苏埃洛斯马泰奥

威尔逊·罗梅罗·卡帕罗斯-万德雷

格雷戈里·艾伦·斯特洛夫

<120> 恰加斯抗原及其抗体和组合物、方法和用途

<130> 3IPSK1.0047WO

<150> US 62/322,770

<150> 2016-14-04

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的肽片段

<400> 1

Ala Gly Ile Arg Ser Ile Leu Arg Thr Leu Gln Glu Thr Arg Thr Gln

1 5 10 15

Leu Pro Arg Gly Arg Phe Leu Leu Met Arg Asp Asn Leu Ser Ala Leu

20 25 30

Lys Pro His Gln Pro Pro Asp Leu

35 40

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)ADP核糖基化因子1的肽片段

<400> 2

Met Gly Gln Trp Leu Ala Ser Ala Phe Lys Ser Leu Leu Gly Lys Gln

1 5 10 15

Glu Val Arg Ile Leu Met Val Gly Leu Asp Ala Ala Gly Lys

20 25 30

<210> 3

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的肽片段

<400> 3

Met Leu Pro Arg Val Leu Gly Ala Gly Thr Leu Glu Leu Leu Arg Gln

1 5 10 15

Asp Gly Ser Asn Val Thr Ala Ser Lys Ala Leu Gln Gly Lys Lys Tyr

20 25 30

<210> 4

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的肽片段

<400> 4

Asp Gln Trp Gly Val Glu Leu Gly Lys Leu Leu Ala Lys Ser Ile Leu

1 5 10 15

Pro Gln Leu Gln Pro Gly Gln Lys Val

20 25

<210> 5

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的丙酮酸磷酸二激酶的肽片段

<400> 5

Ser Arg Ile Asp Ala Ile Arg Glu Met Ile Leu Ala Asp Thr Leu Glu

1 5 10 15

Gly Arg Lys Ala Ala Ile Gln Lys Leu Leu Pro Val Gln Arg Gly Asp

20 25 30

Phe Leu Gly Ile Phe Arg Thr

35

<210> 6

<211> 34

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223>来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)酸性核糖体P1蛋白Tcp2b的肽片段

<400> 6

Met Lys Tyr Leu Ala Ala Tyr Ala Leu Val Gly Leu Ser Gly Gly Thr

1 5 10 15

Pro Ser Lys Ser Ala Val Glu Ala Val Leu Lys Ala Ala Gly Val Pro

20 25 30

Val Asp

<210> 7

<211> 35

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)DNA拓扑异构酶2的肽片段

<400> 7

Ser Ala Lys Ala Leu Ala Gln Asn Ser Leu Ser Ser Asp Gln Lys Arg

1 5 10 15

Tyr Thr Gly Val Phe Pro Leu Arg Gly Lys Leu Leu Asn Val Arg Asn

20 25 30

Lys Asn Leu

35

<210> 8

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)磷酸肌醇特异性磷脂酶C的肽片段

<400> 8

Ser Leu Arg Glu Leu Gly Lys Leu Val Lys Gly Leu Asn Phe Pro Ala

1 5 10 15

Asp Leu Ser Lys Gln Leu Ile Ala Ala Val Lys Ala Ala Gly

20 25 30

<210> 9

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)二氢乳清酸脱氢酶的肽片段

<400> 9

Asn Val Ala Met Val Arg Arg Leu Ala Pro Val Ala Gln Glu Lys Gly

1 5 10 15

Val Leu Leu Glu Leu Asn Leu Ser Cys Pro Asn Val Pro Gly Lys Pro

20 25 30

Gln

<210> 10

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的肽片段

<400> 10

Val Ala Leu Arg Glu Ile Arg Gln Phe Gln Arg Ser Thr Asp Leu Leu

1 5 10 15

Leu Gln Lys Ala Pro Phe Gln Arg Leu Val Arg Glu Val Ser Gly Ala

20 25 30

Gln Lys Glu Gly

35

<210> 11

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)AGP2b2的肽片段

<400> 11

Gly Asp Lys Ile His Ala Ser Ser Pro Pro Leu Ile Ala Asp Asp Gly

1 5 10 15

Gly Lys Leu His Val Asn Leu Ser Arg Ile Phe Thr Ser Thr Leu Gln

20 25 30

Arg

<210> 12

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 来自克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的肽片段

<400> 12

Met Leu Leu Glu Met Asp Asn Gly Glu Ile Leu Asn Leu Leu Asp Thr

1 5 10 15

Pro Gly Leu Leu Asp Ala Lys Val Gln Glu Ala Leu Glu Val Leu

20 25 30

Claims (36)

1.一种锥虫属(Trypanosoma)抗原，其中所述锥虫属抗原是SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12，或者与SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％氨基酸同一性的肽，或者具有来自SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:12的至少7个连续氨基酸的肽。

2.根据权利要求1所述的锥虫属抗原，其中所述肽与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％的氨基酸同一性，并且相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12包含至少1个连续氨基酸缺失、添加和/或取代。

3.根据权利要求1所述的锥虫属抗原，其中所述肽与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％的氨基酸同一性，并且相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12包含至少1个非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。

4.根据权利要求1所述的锥虫属抗原，其中所述肽与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％的氨基酸同一性，并且相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12包含至多11个连续氨基酸缺失、添加和/或取代。

5.根据权利要求1所述的锥虫属抗原，其中所述肽与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12具有75％的氨基酸同一性，并且相对于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12包含至多11个非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。

6.一种免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含如在权利要求1-5中任一项中定义的一种或更多种锥虫属抗原。

7.根据权利要求6所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQID NO:6。

8.根据权利要求6或权利要求7所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:9。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:5。

10.根据权利要求6所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9。

11.根据权利要求6所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9。

12.根据权利要求6-11中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:11。

13.根据权利要求6或权利要求7所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:11。

14.根据权利要求6或权利要求7所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ IDNO:11。

15.根据权利要求6所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQID NO:11。

16.根据权利要求6-15中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种锥虫属抗原各自以介于约1mg至约1,000mg之间的量存在。

17.根据权利要求6-16中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物还包含一种或更多种佐剂。

18.根据权利要求17所述的免疫原性组合物，其中所述一种或更多种佐剂各自以介于约100μg/mL至约1,500μg/mL之间的量存在。

19.根据权利要求6-18中任一项所述的免疫原性组合物，所述免疫原性组合物还包含一种或更多种药学上可接受的载体。

20.一种治疗基于锥虫属的疾病的方法，所述方法包括将如在权利要求6-18中任一项中定义的免疫原性组合物以足以减少与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状的量施用至有相应需要的个体的步骤，从而治疗所述基于锥虫属的疾病。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述免疫原性组合物的施用处于足以增加、诱导、增强、加强、促进或刺激锥虫属清除或去除的量，或者降低、减少、抑制、阻抑、预防、控制或限制锥虫属传播至另一个体的量。

22.根据权利要求20或权利要求21所述的方法，其中所述免疫原性组合物的施用处于足以减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制锥虫属病原体的数目或滴度的量；减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制锥虫属病原体的增殖或复制的量；减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制合成的锥虫属蛋白的量；或者减少、降低、阻抑、限制、控制或抑制复制的锥虫属病原体核酸量的量。

23.根据权利要求20-22中任一项所述的方法，其中所述免疫原性组合物的施用将与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状减少了至少10％。

24.根据权利要求20-23中任一项所述的方法，其中所述免疫原性组合物的施用将与锥虫属感染或病理相关的一种或更多种生理状况或症状减少了至少一周。

25.根据权利要求20-24中任一项所述的方法，其中所述基于锥虫属的疾病是恰加斯病或非洲昏睡病。

26.如在权利要求1-5中任一项中定义的α-锥虫属抗原或如权利要求6-18中任一项中定义的免疫原性组合物用于治疗基于锥虫属的疾病的用途。

27.一种治疗基于锥虫属的疾病的方法，所述方法包括将如在权利要求1-5中任一项中定义的锥虫属抗原或如在权利要求6-19中任一项中定义的免疫原性组合物以足以针对所述锥虫属感染或病理使个体免疫或对个体进行疫苗接种的量施用至有相应需要的个体的步骤，从而治疗所述基于锥虫属的疾病。

28.一种治疗基于锥虫属的疾病的方法，所述方法包括将如在权利要求1-5中任一项中定义的锥虫属抗原或如在权利要求6-19中任一项中定义的免疫原性组合物以足以针对锥虫感染或病理保护个体的量施用至有相应需要的个体。

29.根据权利要求27或权利要求28所述的方法，其中所述锥虫属抗原或所述免疫原性组合物的施用处于足以增加、诱导、增强、加强、促进或刺激针对锥虫属的免疫应答的量。

30.根据权利要求27-29中任一项所述的方法，其中所述锥虫属抗原或所述免疫原性组合物的施用处于足以针对所述锥虫属感染或病理使所述个体免疫或对所述个体进行疫苗接种的量。

31.根据权利要求27-30中任一项所述的方法，其中所述锥虫属抗原或所述免疫原性组合物的施用处于足以减少、降低、限制、控制或抑制锥虫属感染或病理的易感性的量。

32.根据权利要求27-31中任一项所述的方法，其中所述锥虫属抗原或所述免疫原性组合物的施用处于足以增加、诱导、增强、加强、促进或刺激锥虫属清除或去除的量，或者降低、减少、抑制、阻抑、预防、控制或限制锥虫属传播至另一个体的量。

33.根据权利要求27-32中任一项所述的方法，其中所述基于锥虫属的疾病是恰加斯病或非洲昏睡病。

34.如在权利要求1-5中任一项中定义的锥虫属抗原用于制备药物的用途。

35.如在权利要求6-18中任一项中定义的免疫原性组合物用于制备药物的用途。

36.根据权利要求34或35中任一项所述的用途，其中所述基于锥虫属的疾病是恰加斯病或非洲昏睡病。