CN109298189A - Hcg检测试剂、试纸及其使用方法 - Google Patents
Hcg检测试剂、试纸及其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109298189A CN109298189A CN201811362488.7A CN201811362488A CN109298189A CN 109298189 A CN109298189 A CN 109298189A CN 201811362488 A CN201811362488 A CN 201811362488A CN 109298189 A CN109298189 A CN 109298189A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- igg
- compound
- antibody
- fluorescent marker
- hcg
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/575—Hormones
- G01N2333/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
Abstract
本发明涉及一种用于HCG检测的免疫层析试纸，其中，在所述免疫层析试纸的膜上沿样本流经方向依次设有一条检测线和一条质控线；其中，所述检测线上包被有第一β‑HCG单克隆抗体，所述质控线上包被有与非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体。本发明还涉及相应的试剂及制备方法、HCG的检测方法。在检测HCG时能够扩大检测范围并改善环境温度的影响。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测领域，特别涉及检测HCG的免疫层析试纸。
背景技术
1927年，Aschheim和zondek在孕妇尿中首次发现了人绒毛膜促性腺激素(HumanChorionic Gonadotropin,HCG)。HCG是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，它是由α和β二聚体的糖蛋白组成，对维持正常妊娠有着非常重要的作用。α亚基与垂体分泌的FSH(卵泡刺激素)、LH(黄体生成素)和TSH(促甲状腺激素)等基本相似，故相互间能发生交叉反应，而β亚基的结构各不相似。β-HCG于β-LH结构相近，但最后24个氨基酸延长部分在β-LH中不存在。
人绒毛膜促性腺激素在受孕后第8～10天开始分泌。在妊娠最初3个月，HCG水平每(2.2±0.5)天约升高一倍，到6～8周孕期HCG浓度达到高峰，至孕期第4个月始降至中等水平并一直维持到妊娠末期。此外，葡萄胎、恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌及睾丸畸胎瘤等患者可伴有HCG升高。因此，在临床上能对HCG检测范围的定量准确检测对早期妊娠判断，妊娠相关疾病、滋养细胞肿瘤等疾病的鉴别和病程观察等有一定借鉴价值。
常用的HCG定量检测的技术包括酶联免疫吸附法，放射性免疫法和化学发光法等，但这些技术都需要在实验室并依赖于特定的检测仪器而进行，同时检测人员的水平也有较高的要求。因此，这些方法存在着检测耗时长、成本高、无法即时检测，或难以在基层医院等设施不完善的地方检测的缺陷。
为解决上述问题，已经提出了基于免疫层析法的检测方法，其以简便、快速且可现场检测的优势在HCG检测中占据一席之地。它的原理是将HCG特异性抗体先固定于膜的某一位置(形成检测线)，同时设置质控线；当试纸一端浸入样本后，由于毛细管作用，样本将沿着该膜向前移动，当移动至检测线时，样本中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，从而实现HCG的免疫检测。
然而，基于免疫层析法的HCG检测技术同样存在一些局限性。一方面，其检测范围受限，这是因为在高浓度HCG样本的检测结果中，容易出现“胡克效应(Hook effect)”，即样本HCG检测浓度在达到最高检测范围的上限后，HCG的测得值反而随浓度上升而下降，这在临床检测中易造成血中HCG低水平的误判。
另一方面，免疫层析的特点之一在于需要在各类复杂环境中进行现场检测，而环境温度通常会对免疫反应有较大的影响，因此免疫层析法检测时还面临环境温度变化引起的检测结果不准确的问题。
针对上述问题，目前已提出了一些解决方式。例如出于提高试纸条的检测浓度范围的目的，可使用在膜上设有至少一条检测线和一条质控线的检测试纸条，其中，其检测线上包被有α-HCG单克隆抗体。然而，其他激素，如垂体激素、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)，均含有与HCG相同的α亚基，检测时会产生严重的交叉反应，因此在检测不同来源但浓度相同的HCG临床样本时，会引起检测线的信号值不同，从而导致最终结果不同。
又例如，为了避免环境温度的影响，可以采用带有温度补偿模块的免疫层析试条检测仪，该温度补偿模块可以包括与单片机相连的温度传感器及数模转换电路等。显然，该温度补偿模块及检测仪的引入不可避免的导致成本的上升及检测过程的复杂化。
值得注意的是，上述解决方案均未同时解决检测范围窄以及受环境温度影响大这两个问题。
据此，在HCG免疫层析检测领域，存在扩大检测范围的同时改善环境温度影响的检测方法的强烈需求。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种简单、便捷的HCG免疫层析检测方法，该方法在扩大检测范围的同时能够改善环境温度影响。
为此，本发明提供了以下技术方案。
第一方面，本发明提供了一种免疫层析试纸，其特征在于，所述免疫层析试纸的膜在样本的流经方向上依次设有一条检测线和一条质控线；
其中，所述检测线上包被有第一β-HCG单克隆抗体，所述质控线上包被有与非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体。
在一个实施方式中，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、Pacific Blue、PE、APC和DAPI等所组成的组。优选的，所述荧光标记物为FITC。
在一个实施方式中所述非人源IgG选自由兔IgG、鸡IgG、鼠IgG所组成的组。优选的，所述非人源IgG为兔IgG。
在优选的实施方式中，所述与非人源IgG结合的抗体为羊抗兔IgG抗体。
在一个实施方式中，所述质控线上包被的与非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体浓度比可约为0.05～1:1，优选约为0.125～0.6:1。
第二方面，本发明提供了一种用于检测β-HCG的检测试剂，包括：
第一复合物，由荧光标记物、第二抗β-HCG单克隆抗体与载体复合而成；以及
第二复合物，由非人源IgG与载体复合而成。
在一个实施方式中，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、Pacific Blue、PE、APC和DAPI等所组成的组。优选的，所述荧光标记物为FITC。
在一个实施方式中所述非人源IgG选自由兔IgG、鸡IgG、鼠IgG所组成的组。优选的，所述非人源IgG为兔IgG。
在一个实施方式中，所述第一复合物与第二复合物的OD值之比约为6～60:1，优选约为20～40:1。
在一个实施方式中，所述载体可以是荧光微球、胶体金、量子点、胶乳。
第三方面，本发明提供了一种试剂盒，包括本发明的免疫层析试纸和本发明的试剂。
第四方面，本发明提供了一种制备用于检测HCG的试剂的方法，包括：
将荧光标记物与第二抗β-HCG单克隆抗体反应，形成所述荧光标记物与第二β-HCG单克隆抗体的复合体；
将载体与所述复合体反应，形成所述荧光标记物、第二抗β-HCG单克隆抗体和载体的第一复合物；
将载体与非人源IgG抗体反应，形成所述非人源抗体与载体的第二复合物；
将所述第一复合物与第二复合物混合。
在一个实施方式中，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、Pacific Blue、PE、APC和DAPI等所组成的组。优选的，所述荧光标记物为FITC。
在一个实施方式中所述非人源IgG选自由兔IgG、鸡IgG、鼠IgG所组成的组。优选的，所述非人源IgG为兔IgG。
在一个实施方式中，所述第一复合物与第二复合物的OD值之比约为6～60:1，优选约为20～40:1。
在一个实施方式中，所述载体可以是荧光微球、胶体金、量子点、胶乳。
在第五方面，本发明提供了一种用于检测HCG的方法，包括：
将样本与反应试剂混合，随后加入至层析试纸以进行反应；
将试纸放入检测仪以获得检测结果；
其中，所述反应试剂中含有由荧光标记物、第二抗β-HCG单克隆抗体和载体形成的第一复合物以及由非人源抗体和载体形成的第二复合物；
其中，所述层析试纸的膜在样本流经方向上依次设有检测线和质控线，所述检测线上包被有第一抗β-HCG单克隆载体，所述质控线上包被有抗非人源IgG抗体和抗所述荧光标记物的抗体的混合物。
在一个实施方式中，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、Pacific Blue、PE、APC和DAPI等所组成的组。优选的，所述荧光标记物为FITC。
在一个实施方式中所述非人源IgG选自由兔IgG、鸡IgG、鼠IgG抗体所组成的组。优选的，所述非人源IgG为兔IgG抗体。
在优选的实施方式中，所述与非人源IgG结合的抗体为羊抗兔IgG抗体。
在一个实施方式中，所述质控线上包被的非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体浓度比可约为0.05～1:1，优选约为0.125～0.6:1。
在一个实施方式中，所述第一复合物与第二复合物的OD值之比约为6～60:1，优选约为20～40:1。
在一个实施方式中，所述载体可以是荧光微球、胶体金、量子点、胶乳。
在具体的实施方式中，所述样本是尿液、血清、血浆或全血。
本发明的有益效果为：至少能够在5～10000mIU/mL线性范围内以及4～37℃的环境温度内实现HCG的免疫层析检测，使得检测结果准确可靠。再一方面，通过调整包被比例及试剂中复合物比例，本发明进一步提高了HCG检测结果的可靠性。
附图说明
图1A示出了使用本发明的方案对HCG质控品进行测定时的标准曲线图；
图1B示出了使用比较例的方案对HCG质控品进行测定时的标准曲线图。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
在本发明中，表述“第一”和“第二”在修饰β-HCG单克隆抗体或复合物时仅用于描述目的，用以区分所限定的物质；而不以任何方式限定次序或主次，也不限定物质特定种类。
对于本发明的第一复合物的使用量，本领域技术人员能够根据样本中通常存在的HCG量的范围进行选取，示例性的使用量范围可为0.01OD～0.05OD，又如0.03OD。
在本发明中，第一复合物和第二复合物的使用比例可为6～60:1，优选约为20～40:1，最优选为30:1。
在本发明的第一复合物中，荧光物质可以是任何用于免疫层析检测的可标记非人源的且能够产生荧光的物质。同时，本发明还涵盖上述荧光物质的衍生物，这些衍生物结构在原有基础上进行调整，但并不改变它们可用于免疫层析检测且能产生荧光的性质。
在本发明中，“β-HCG单克隆抗体”可以是抗人β-HCG单克隆抗体，例如任何合适的动物来源的抗人β-HCG单克隆抗体。
如本发明所使用的，术语“载体”是指免疫层析法中用于与待测物的相应抗原或相应抗体结合的支持物，常见的载体例如为荧光微球、胶体金、量子点(CdSe/ZnS核/壳结构量子点等)、胶乳(例如聚苯乙烯微球、壳聚糖微球、聚乳酸微球、聚丙烯酸微球和/淀粉微球等)，但本发明不限于此。本发明的载体可以是纳米载体。
在检测过程中，样本中的HCG与本发明的第一复合物相结合，在经检测线时为预先包被的第一抗β-HCG抗体所捕获，形成夹心结构；随后继续层析至质控线时，控制线上的与荧光物质特异性结合的抗体捕获未被检测线结合的第一复合物，而控制线上的与非人源抗体特异性结合的抗体捕获第二复合物。
根据上述原理，在质控线上，本领域技术人员能够选择合适的与荧光物质结合的抗体的包被浓度，示例性的浓度范围可为0.05mg/mL～2mg/mL。
在本发明中，质控线上同时包被有抗非人源IgG的抗体以及抗荧光物质的抗体，两者的浓度比可为0.05～1:1，优选为0.125～0.6:1，更优选为0.3～0.6:1，最优选为0.5:1。
如本发明所使用的，“与非人源IgG结合的抗体”是指具有与非人源IgG的特异性结合能力的抗体，或指特异性针对非人源IgG的抗体。
在示例性的实施方式中，本发明的试纸可依次包括样本垫、膜、吸水纸。在本发明中，免疫层析试纸的膜可例如选自硝酸纤维素膜或尼龙膜。
以下通过实施例更详细地说明本发明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1反应试剂的制备
将FITC按一定浓度溶于10mM PBS溶液中，取一定量的鼠抗β-HCG单克隆抗体4(四川迈克生物新材料技术有限公司，XCL1401)装入透析袋中，将透析袋放入FITC溶液中，置于磁力搅拌器上，避光搅拌透析过夜。透析完后，取出FITC～鼠抗β-HCG单克隆抗体4置于4℃保存。
取适量体积的荧光微球(JSR，F7655S)溶液加入EDC(0.1mg/1mg荧光微球)活化剂进行活化30min后，按照0.1mg/1mg荧光微球的量加入FITC-鼠抗β-HCG单克隆抗体4，匀速搅拌反应1h，然后加入封闭剂，终止反应30min，最后得到FITC～鼠抗β-HCG单克隆抗体4～荧光微球复合物。
取适量体积的荧光微球溶液加入EDC(0.1mg/1mg荧光微球)活化剂进行活化30min后，按照0.1mg/1mg荧光微球的量加入兔IgG(四川迈克生物新材料技术有限公司，XCL1084)，匀速搅拌反应1h，然后加入封闭剂，终止反应30min，最后得到兔IgG～荧光微球复合物。
用稀释液稀释，使反应试剂中兔IgG～荧光微球的浓度为0.001OD，FITC～鼠抗β-HCG单克隆抗体4～荧光微球的浓度为0.03OD。每管分装280μL，置于4℃避光储存。
实施例2检测试纸的制备
用包被缓冲液将鼠抗β-HCG单克隆抗体3(四川迈克生物新材料技术有限公司，XCL1400)稀释至2mg/mL；用包被缓冲液将抗FITC单抗(四川迈克生物新材料技术有限公司，XCL1510)稀释至2mg/mL，羊抗兔IgG稀释至1mg/mL，按照1:1比例将抗FITC单抗与羊抗兔IgG混合在一起。使用划膜仪将鼠抗β-HCG单克隆抗体3划在检测线上，将抗FITC单抗与羊抗兔IgG质控线上(喷量为1μL/cm)，置于55℃干燥3天。
实施例3检测方法
取20μL样本(或质控品)加入280μL/管的反应液中，充分混匀后90μL混合液加入检测卡的加样孔中，室温下层析15min后，将测试卡插入免疫荧光检测仪的承载孔中，仪器将自动对测试卡进行扫描计算结果。
比较例
反应试剂的制备
取适量体积的荧光微球(JSR，F7655S)溶液加入EDC(0.1mg/1mg荧光微球)活化剂进行活化30min后，按照0.1mg/1mg荧光微球的量加入鼠抗β-HCG单克隆抗体4，匀速搅拌反应1h，然后加入封闭剂，终止反应30min，最后得到鼠抗β-HCG单克隆抗体4～荧光微球复合物。
取适量体积的荧光微球溶液加入EDC(0.1mg/1mg荧光微球)活化剂进行活化30min后，按照0.1mg/1mg荧光微球的量加入兔IgG(四川迈克生物新材料技术有限公司，XCL1084)，匀速搅拌反应1h，然后加入封闭剂，终止反应30min，最后得到兔IgG～荧光微球复合物。
用稀释液稀释，使反应试剂中兔IgG～荧光微球的浓度为0.001OD，鼠抗β-HCG单克隆抗体4～荧光微球的浓度为0.03OD。每管分装280μL，置于4℃避光储存。
检测试纸的制备
用包被缓冲液将鼠抗β-HCG单克隆抗体3(四川迈克生物新材料技术有限公司，XCL1400)稀释至2mg/mL；用包被缓冲液将羊抗兔IgG稀释至1mg/mL。使用划膜仪将鼠抗β-HCG单克隆抗体3划在检测线上，将羊抗兔IgG划在质控线上(喷量为1μL/cm)，置于55℃干燥3天。
检测方法
取20μL样本(或质控品)加入280μL/管的反应液中，充分混匀后90μL混合液加入检测卡的加样孔中，室温下层析15min后，将测试卡插入免疫荧光检测仪的承载孔中，仪器将自动对测试卡进行扫描计算结果。
实施例4检测范围的测试
使用人HCG抗原(双流正龙生化制品研究所，A0501)制备0～13500mIU/mL的八个浓度梯度的质控品。
分别采用实施例3和比较例中的检测方法对上述质控品进行检测，获取荧光信号强度信号值读数，结果如表1、图1A和图1B所示。
表1
由表1和图1可知，与比较例相比，本发明的检测梯度明显更接近于浓度梯度，能够实现在0～10000mIU/mL范围内的准确检测。
实施例5环境温度影响的测试
在4.8℃、25.2℃和37℃的温度下，分别采用实施例3和比较例的方法对24.41mIU/mL、1749mIU/mL和5750mIU/mL的三个浓度梯度的质控品进行检测，结果如表2所示。
表2
由表2可知，本发明能够在4.8℃、25.2℃和37℃均能实现HCG的准确检测，而比较例在4.8℃、37℃下结果偏差较大。
实施例6羊抗兔IgG包被浓度的优化
按照实施例2的制备方法，将不同浓度的羊抗兔IgG与鼠抗FITC单克隆抗体混合后包被于质控线处，包被后羊抗兔IgG的终浓度分别为为0.1mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、0.75mg/mL、1mg/mL，而FITC的终浓度为1mg/mL。采用实施例3的检测方法，验证不同浓度的羊抗兔IgG对检测范围的影响，结果如表3所示。
表3
由表3可知，当羊抗兔IgG浓度为0.5mg/mL时，本发明的浓度梯度最佳。
接下来，在7.6℃、23.07℃和37℃的温度下，分别对0.25mg/mL和0.5mg/mL两个浓度进行环境温度影响验证，结果如表4所示。
表4
由表4可知，包被0.25mg/mL或0.5mg/mL的羊抗兔IgG均能很好地改善环境温度对检测结果的影响，而包被0.5mg/mL时的改善效果更优。
实施例7反应试剂中兔IgG～荧光微球OD使用量的优化
按照实施例1的制备方法，其中兔IgG～荧光微球的OD值取0.0005、0.001和0.05，FITC～鼠抗β-HCG单克隆抗体4～荧光微球的浓度为0.03OD。进行实施例3的检测方法，以验证不同兔IgG～荧光微球OD使用量对检测范围的影响，结果如表5所示。
表5
由表5可见，兔IgG～荧光微球的OD值取0.0005至0.005至均有很好的信号梯度，其中，OD值为0.001时信号梯度更优。
本发明还提供了以下内容。
<1>一种免疫层析试纸，其中，在所述免疫层析试纸的膜上沿样本的流经方向依次设有一条检测线和一条质控线；
其中，所述检测线上包被有第一β-HCG单克隆抗体，所述质控线上包被有与非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体。
<2>项目<1>的免疫层析试纸，其中，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、Pacific Blue、PE、APC和DAPI等所组成的组，优选的，所述荧光标记物为FITC。
<3>项目<1>的免疫层析试纸，其中，所述非人源IgG为兔IgG、鸡IgG或鼠IgG，优选为兔IgG。
<4>、项目<1>的免疫层析试纸，其中，所述质控线上包被的与非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体浓度比为0.05～1:1，优选为0.125～0.6:1。
<5>一种试剂，包括：
第一复合物，所述第一复合物由荧光标记物、第二抗β-HCG单克隆抗体与载体复合而成；以及
第二复合物，所述第二复合物由非人源IgG与载体复合而成。
<6>项目<5>的试剂，其中，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、Pacific Blue、PE、APC和DAPI等所组成的组，优选的，所述荧光标记物为FITC。
<7>项目<5>的试剂，其中，所述非人源IgG选自兔IgG、鸡IgG或鼠IgG，优选为兔IgG。
<8>项目<5>的试剂，其中，所述第一复合物与第二复合物的OD值之比为6～60:1，优选为20～40:1。
<9>项目<5>的试剂，其中，所述载体选自由荧光微球、胶体金、量子点和胶乳组成的组。
<10>试剂盒，所述试剂盒包括项目<1>～<4>中任一项定义的所述免疫层析试纸和项目<5>～<9>中任一项定义的所述试剂。
<11>一种制备用于检测HCG的试剂的方法，包括：
将荧光标记物与第二抗β-HCG单克隆抗体反应，形成所述荧光标记物与第二β-HCG单克隆抗体的复合体；
将载体与所述复合体反应，形成所述荧光标记物、第二抗β-HCG单克隆抗体和载体的第一复合物；
将载体与非人源IgG抗体反应，形成所述非人源抗体与载体的第二复合物；
将所述第一复合物与第二复合物混合。
<12>项目<11>的方法，其中，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、Pacific Blue、PE、APC和DAPI等所组成的组。优选的，所述荧光标记物为FITC。
<13>项目<11>的方法，其中，所述非人源IgG选自兔IgG、鸡IgG或鼠IgG，优选为兔IgG。
<14>项目<11>的方法，其中，所述第一复合物与第二复合物的OD值之比为6～60:1，优选为20～40:1。
<15>项目<11>的方法，其中，所述载体选自由荧光微球、胶体金、量子点和胶乳组成的组。
<16>一种检测HCG的方法，包括：
将样本与反应试剂混合，随后加入至层析试纸以进行反应；
将所述层析试纸放入检测仪以获得检测结果；
其中，所述反应试剂中含有由荧光标记物、第二抗β-HCG单克隆抗体和载体形成的第一复合物以及由非人源抗体和载体形成的第二复合物；
其中，在所述层析试纸的膜上沿样本的流经方向依次设有检测线和质控线，所述检测线上包被有第一抗β-HCG单克隆载体，所述质控线上包被有抗非人源IgG抗体和抗所述荧光标记物的抗体的混合物。
<17>项目<16>的方法，其中，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、Pacific Blue、PE、APC和DAPI等所组成的组，优选的，所述荧光标记物为FITC。
<18>项目<16>的方法，其中，所述非人源IgG选自兔IgG、鸡IgG或鼠IgG，优选为兔IgG。
<19>项目<16>的方法，其中，所述质控线上包被的与非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体浓度比为0.05～1:1，优选为0.125～0.6:1。
<20>项目<16>的方法，其中，所述第一复合物与第二复合物的OD值之比为6～60:1，优选为20～40:1。
<21>项目<16>的方法，其中，所述载体选自由荧光微球、胶体金、量子点和胶乳组成的组。
Claims (9)
1.一种免疫层析试纸，其中，在所述免疫层析试纸的膜上沿样本的流经方向依次设有一条检测线和一条质控线；
其中，所述检测线上包被有第一β-HCG单克隆抗体，所述质控线上包被有与非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体。
2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其中，
优选地，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、PacificBlue、PE、APC和DAPI等所组成的组，更优选的，所述荧光标记物为FITC；
优选地，其中，所述非人源IgG为兔IgG、鸡IgG或鼠IgG，更优选为兔IgG；
优选地，所述质控线上包被的与非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体浓度比为0.05～1:1，更优选为0.125～0.6:1。
3.一种试剂，包括：
第一复合物，所述第一复合物由荧光标记物、第二抗β-HCG单克隆抗体与载体复合而成；以及
第二复合物，所述第二复合物由非人源IgG与载体复合而成。
4.根据权利要求3所述的试剂，其中，
优选地，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、PacificBlue、PE、APC和DAPI等所组成的组，更优选的，所述荧光标记物为FITC；
优选地，所述非人源IgG选自兔IgG、鸡IgG或鼠IgG，更优选为兔IgG；
优选地，所述第一复合物与第二复合物的OD值之比为6～60:1，更优选为20～40:1；
优选地，所述载体选自由荧光微球、胶体金、量子点和胶乳组成的组。
5.试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1或2中定义的所述免疫层析试纸和权利要求3或4中定义的所述试剂。
6.一种制备用于检测HCG的试剂的方法，包括：
将荧光标记物与第二抗β-HCG单克隆抗体反应，形成所述荧光标记物与第二β-HCG单克隆抗体的复合体；
将载体与所述复合体反应，形成所述荧光标记物、第二抗β-HCG单克隆抗体和载体的第一复合物；
将载体与非人源IgG抗体反应，形成所述非人源抗体与载体的第二复合物；
将所述第一复合物与第二复合物混合。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，
优选地，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、PacificBlue、PE、APC和DAPI等所组成的组，更优选的，所述荧光标记物为FITC；
优选地，所述非人源IgG选自兔IgG、鸡IgG或鼠IgG，更优选为兔IgG；
优选地，所述第一复合物与第二复合物的OD值之比为6～60:1，更优选为20～40:1；
优选地，所述载体选自由荧光微球、胶体金、量子点和胶乳组成的组。
8.一种检测HCG的方法，包括：
将样本与反应试剂混合，随后加入至层析试纸以进行反应；
将所述层析试纸放入检测仪以获得检测结果；
其中，所述反应试剂中含有由荧光标记物、第二抗β-HCG单克隆抗体和载体形成的第一复合物以及由非人源抗体和载体形成的第二复合物；
其中，在所述层析试纸的膜上沿样本的流经方向依次设有检测线和质控线，所述检测线上包被有第一抗β-HCG单克隆载体，所述质控线上包被有抗非人源IgG抗体和抗所述荧光标记物的抗体的混合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，
优选地，所述荧光标记物选自由FITC、Alexa Fluor系列染料、CY3、CY21、PacificBlue、PE、APC和DAPI等所组成的组，更优选的，所述荧光标记物为FITC；
优选地，所述非人源IgG选自兔IgG、鸡IgG或鼠IgG，更优选为兔IgG；
优选地，所述质控线上包被的与非人源IgG结合的抗体以及与荧光标记物结合的抗体浓度比为0.05～1:1，更优选为0.125～0.6:1；
优选地，所述第一复合物与第二复合物的OD值之比为6～60:1，更优选为20～40:1；
优选地，所述载体选自由荧光微球、胶体金、量子点和胶乳组成的组。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811362488.7A CN109298189B (zh) | 2018-11-15 | 2018-11-15 | Hcg检测试剂、试纸及其使用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811362488.7A CN109298189B (zh) | 2018-11-15 | 2018-11-15 | Hcg检测试剂、试纸及其使用方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109298189A true CN109298189A (zh) | 2019-02-01 |
| CN109298189B CN109298189B (zh) | 2021-08-06 |
Family
ID=65143524
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811362488.7A Active CN109298189B (zh) | 2018-11-15 | 2018-11-15 | Hcg检测试剂、试纸及其使用方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109298189B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1811447A (zh) * | 2006-02-08 | 2006-08-02 | 杭州优思达生物技术有限公司 | 核酸薄膜层析快速检测方法及其试纸条及其用途 |
| CN101750495A (zh) * | 2009-10-16 | 2010-06-23 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 一种检测乙肝核心抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN105823892A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-08-03 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂及其制备方法 |
| CN107643399A (zh) * | 2017-03-06 | 2018-01-30 | 广州佰芮慷生物科技有限公司 | 一种提高免疫检测系统灵敏性的方法及使用该方法的装置 |
| CN107941742A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-04-20 | 上海凯创生物技术有限公司 | β人绒毛膜促性腺激素近红外荧光检测试剂卡、试剂盒及其用途 |
| CN108732344A (zh) * | 2018-04-12 | 2018-11-02 | 江苏维尔生物科技有限公司 | 一种用于快速检测紫杉醇的试纸及其制备方法、试剂盒 |
-
2018
- 2018-11-15 CN CN201811362488.7A patent/CN109298189B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1811447A (zh) * | 2006-02-08 | 2006-08-02 | 杭州优思达生物技术有限公司 | 核酸薄膜层析快速检测方法及其试纸条及其用途 |
| CN101750495A (zh) * | 2009-10-16 | 2010-06-23 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 一种检测乙肝核心抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN105823892A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-08-03 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂及其制备方法 |
| CN107643399A (zh) * | 2017-03-06 | 2018-01-30 | 广州佰芮慷生物科技有限公司 | 一种提高免疫检测系统灵敏性的方法及使用该方法的装置 |
| CN107941742A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-04-20 | 上海凯创生物技术有限公司 | β人绒毛膜促性腺激素近红外荧光检测试剂卡、试剂盒及其用途 |
| CN108732344A (zh) * | 2018-04-12 | 2018-11-02 | 江苏维尔生物科技有限公司 | 一种用于快速检测紫杉醇的试纸及其制备方法、试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109298189B (zh) | 2021-08-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0304202B1 (en) | Determination of ambient concentrations of several analytes | |
| US5807755A (en) | Determination of ambient concentrations of several analytes | |
| US6087184A (en) | Opposable-element chromatographic assay device for detection of analytes | |
| US8431405B2 (en) | Hyperglycosylated hCG detection device | |
| JPS6325553A (ja) | 金ゾル試薬の調整方法 | |
| US9575077B2 (en) | TSH antibodies for point-of-care immunoassay formats | |
| US9575076B2 (en) | TSH immunoassays and processes for performing TSH immunoassays in the presence of endogenous contaminants in restricted wash formats | |
| US8765487B2 (en) | Detection of amniotic fluid in vaginal secretions of pregnant women due to premature rupture of fetal membranes | |
| BRPI1005176B1 (pt) | ensaio de insulina e reagente de ensaio de insulina | |
| JP4179419B2 (ja) | 被検物質の検出方法、増感剤及びイムノクロマトグラフィー用キット | |
| US20110008910A1 (en) | Method for the immobilization of a capture molecule on a solid support | |
| CN106918708A (zh) | 一种用于检测胰岛素的竞争法胶乳增强免疫透射比浊试剂盒 | |
| WO1992021974A1 (en) | Stable alkaline phosphatase compositions with color enhancement and their use in assays | |
| US20140072989A1 (en) | Tsh immunoassays employing scavenging reagents for cross-reacting endocrine glycoprotein hormone analogues | |
| CN107656048A (zh) | 一种半定量检测抗原或抗体的免疫层析试纸条及其应用 | |
| CN109298189A (zh) | Hcg检测试剂、试纸及其使用方法 | |
| AP156A (en) | Agglutination assay. | |
| CN113109325A (zh) | 一种胃蛋白酶原i酶促化学发光检测试剂盒及其制备方法与应用 | |
| JPH11352129A (ja) | 検出装置及び検出方法 | |
| CN107561293A (zh) | 抗人绒毛膜促性腺激素抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |