CN109293757A

CN109293757A - 具有控制叶片卷曲功能的毛竹PeTCP10蛋白及其应用

Info

Publication number: CN109293757A
Application number: CN201811255554.0A
Authority: CN
Inventors: 项艳; 刘欢龙; 吴敏; 高亚蒙; 史亚男
Original assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Current assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Priority date: 2018-10-26
Filing date: 2018-10-26
Publication date: 2019-02-01
Anticipated expiration: 2038-10-26
Also published as: CN109293757B

Abstract

本发明公开了一种具有控制叶片卷曲功能的毛竹PeTCP10蛋白及其应用。本发明的一种毛竹PeTCP10蛋白，所述的毛竹PeTCP10蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。本发明的一种编码所述的毛竹PeTCP10蛋白的基因序列，所述的毛竹PeTCP10蛋白的脱氧核苷酸序列如SEQID No.2所示。本发明含有所述的编码基因的脱氧核苷酸序列的载体。本发明通过农杆菌介导的花序浸染法将重组的过表达载体pCAMBIA1301‑35S‑PeTCP10转入野生型拟南芥，结果显示PeTCP10过表达转基因植株的叶片弯曲程度明显高于野生型植株，说明毛竹PeTCP10基因能够使转基因拟南芥的叶片发生明显卷曲。

Description

具有控制叶片卷曲功能的毛竹PeTCP10蛋白及其应用

技术领域

本发明涉及植物分子生物学领域，具体涉及一种具有控制叶片卷曲功能的毛竹PeTCP10蛋白及其应用。

背景技术

竹类属于禾本科竹亚科植物，根据地下茎的分生繁殖特点和形态特征分单轴散生型、合轴丛生型、复轴混生型等三类。毛竹(Phyllostachys edulis)是单轴散生型竹类，生长速度快、生物量大、栽培面积广，具有较高的经济、文化和生态价值。毛竹浑身是宝，竹竿可以作为建筑用材，竹笋可以作为食物，其他部位可以制作为工艺品以及其他的生活用品。

TCPs(TEOSINTE BRANCHED 1,CYCLOIDEA,and PROLIFERATING CELL FACTORS)是植物特有的转录因子，包含一个不标准的螺旋-环-螺旋结构，在植物的生长发育及应对环境胁迫过程中发挥重要的作用。II类TCPs(CIN)主要参与调节叶片形状的发育。金鱼草中的CIN具有使细胞正常感知增殖抑制信号的作用,其突变体由于不能正常感知该信号,导致叶缘细胞增殖过多而造成叶片畸形。拟南芥(AtTCP2、3、4、10和24)的基因是miR319的靶标,并在转录后下调。miR319介导TCP部分功能的缺失,会导致波状或锯齿状叶的产生，表明其具有负向调控细胞增殖因子的作用。Ori等(2007)发现的CIN类基因(LANCEOLATE,LA)功能增强突变体,其番茄叶片发育为小的单叶而不是复合叶。Masuda等指出AtTCP24能够与AtABAP1和AtORC1发生互作,参与DNA的复制和转录等生物过程。此外,CIN类基因的时空表达模式在控制细胞分化中起到了重要作用,由此决定了叶的最终形状和大小。

目前已公布的调节植物叶片发育的基因多为拟南芥、水稻等模式植物中的TCP基因，而毛竹中TCP基因的功能尚未报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以导致拟南芥叶片卷曲的具有控制叶片卷曲功能的毛竹PeTCP10蛋白及其应用。

为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：本发明的一种毛竹PeTCP10蛋白，所述的毛竹PeTCP10蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

本发明的一种编码所述的毛竹PeTCP10蛋白的基因序列，所述的毛竹PeTCP10蛋白的脱氧核苷酸序列如SEQID No.2所示。

本发明的含有所述的编码基因的脱氧核苷酸序列的载体。

本发明的所述的载体的构建方法，包括如下步骤：将两端包含酶切位点的毛竹PeTCP10蛋白编码基因序列构建到pEASY Blunt simple Cloning Vector载体上，转入大肠杆菌感受态细胞TransT1内，得到重组质粒，双酶切重组质粒和pCAMBIA1301a质粒，连接后，转入大肠杆菌感受态细胞，提取质粒后，获得表达重组质粒pCAMBIA1301a-PeTCP10。

本发明的含有所述的载体的工程菌。

本发明的用于克隆所述的编码基因序列的引物对，所述的引物对包括上游引物和下游引物，所述的上游引物序列如SEQ ID No.4所示，所述的下游引物序列如SEQ ID No.5所示。

PeTCP10—F:5’—CGGAATTCATGGAGGCGCAGGTGC—3’；

PeTCP10—R:5’—GGGGTACCCTACCGGTGGCCGA—3’。

本发明的一种毛竹PeTCP10基因，所述的毛竹PeTCP10基因的cDNA全长的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明的所述的毛竹PeTCP10基因在拟南芥叶片卷曲中的应用。

进一步地，通过农杆菌介导的花序浸染法将所述的基因或所述的编码基因序列转入植物中。

有益效果：本发明首次提供了毛竹叶片卷曲相关的PeTCP10基因及其编码蛋白与应用。通过农杆菌介导的花序浸染法将PeTCP10基因过表达载体转入野生型拟南芥中，结果显示过表达株系与野生型株系相比叶片发生明显的卷曲。该结果为研究毛竹叶片发育提供理论基础。

附图说明

图1是本发明所述的PeTCP10基因所编码的蛋白的氨基酸序列和结构域划分图；

图2是本发明实施例2毛竹叶片总RNA的电泳图。M：Trans2K DNA Marker；1：毛竹叶片总RNA；

图3本发明实施例4毛竹PeTCP10基因的植物转基因载体pCAMBI1301a示意图；

图4是本发明实施例5转基因拟南芥和野生型拟南芥表型图；Col：野生型拟南芥；OE-3、OE-4、OE-8：转基因过表达株系。

具体实施方式

通过解释以下本申请的优选实施方案，本发明的其他目的和优点将变得清楚。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限值和下限值之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述的范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限值和下限值可独立地包括或排除在范围内。

实施例中所使用的试剂主要包括分子生物学实验试剂和试剂盒等，均可通过商业途径获得，具体包括：RNA提取试剂盒(Reagent)购自Ambion生物科技有限公司；琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、质粒快速小提试剂盒购自Axygen；反转录试剂盒(First-StrandcDNA Synthesis Kit)、pEASY Blunt simple Cloning Vector、Trans T1感受态及相关的试剂盒购置北京全式金公司；限制性内切酶KpnI和XbaI、Primer Star Mix及DNA Marker均购自TaKaRa(宝生物工程(大连))有限公司；引物合成及测序工作均由华大基因科技股份有限公司完成。本发明实施例中所提供的方法如果没有特殊说明均为常规方法。

本发明的一种毛竹PeTCP10蛋白，所述的毛竹PeTCP10蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.3所示。

本发明的含有所述的编码基因的脱氧核苷酸序列的载体。

本发明的含有所述的载体的工程菌。

PeTCP10—F:5’—CGGAATTCATGGAGGCGCAGGTGC—3’；

PeTCP10—R:5’—GGGGTACCCTACCGGTGGCCGA—3’。

本发明的所述的毛竹PeTCP10基因在拟南芥叶片卷曲中的应用。

通过农杆菌介导的花序浸染法将所述的基因或所述的编码基因序列转入植物中。

实施例1

毛竹PeTCP10基因编码的蛋白序列分析

利用毛竹数据库查找PeTCP10基因，并且找到对应的蛋白序列(SEQ ID No.3)，并根据TCP基因特点，使用DNAMAN软件对PeTCP蛋白序列进行比对，查找和标注PeTCP蛋白序列中的Non-basic Helix-Loop-Helix(图1)结构域。

实施例2

毛竹PeTCP10蛋白编码序列的克隆

1.毛竹叶片TotalRNA的提取

利用1mM的赤霉素溶液对健康的毛竹种子处理12小时后种植于培养基中(黑土：蛭石＝1:3)，并在光周期(光/暗)为18/6h，25℃的温室中培养。生长三个月后选择生长状况良好的毛竹幼苗，取其叶片，液氮冷冻后使用Trizol法提取总RNA，具体方法如下所示：

(1)在超净工作台上取0.1g叶片放入灭过菌的研钵，加入液氮，迅速研磨至粉末状，将粉末装入1.5mL RNAse Free Dof管中；

(2)向管中加入1mL Trizol，在漩涡仪上震动20s，使其完全裂解，静置5min；

(3)然后将其放入预冷过的高速冷冻离心机中(4℃，1.2×10⁴g离心力)离心10min；

(4)离心后在超净工作台吸取800μL上清液(尽量避免吸取到沉淀)于新的2.0mLRNAse Free Dof管中，再加入200μL氯仿/异戊醇(24:1)，震荡混匀，静置5min；

(5)4℃，1.2×10⁴g，离心10min；吸取400μL上清液于新的2.0mL RNAse Free Dof管中，并向其中加入等体积异丙醇，混匀静置25min；

(6)之后于高速冷冻离心机中4℃、1.2×10⁴g离心15min；弃上清，加入1.0mL 75％的DEPC水配制的乙醇；

(7)4℃，8×10³g，离心5min，小心地弃掉上清；

(8)重复步骤(7)，之后将2.0mL RNAse Free Dof管放置于超净工作台上15min，使其干燥；

(8)每管加入25μL DEPC水，取1μL RNA用分光光度计检测浓度。

2.电泳检测总RNA完整性

取2μL DEPC水溶解的RNA，加入1μL溴酚蓝混匀，使用1.0％琼脂糖凝胶进行电泳检测，电泳3-5V/cm。电泳20-30分钟后，将凝胶放在凝胶成像系统下观察，如果离点样孔较近的28S rRNA的主带的亮度是另一条18S rRNA的二倍且没有其它杂带(5S除外)，则表明RNA未降解(图2)。

3.反转录

使用全式金反转录试剂盒First-Strand cDNA Synthesis Kit合成第一条链cDNA，具体操作如下：

点动混匀后，PCR仪中42℃反应15min；95℃反应5min，5℃孵育5min；反应完成后离心5s，-20℃保存备用。

实施例3

毛竹PeTCP10蛋白编码序列的克隆

根据毛竹eTCP10蛋白编码序列，利用Primers 5.0设计PCR扩增该片段的引物，上游引物加EcoR I的GAATTC酶切位点，下游引物加KpnI的GGTACC酶切位点。

引物序列如下：

PeTCP10—F:5’—CGGAATTCATGGAGGCGCAGGTGC—3’；

PeTCP10—R:5’—GGGGTACCCTACCGGTGGCCGA—3’

以毛竹叶片totalRNA反转录产物为模板进行PCR，反应体系如表1所示：

表1 PCR反应体系

PCR反应条件为：预变性：98℃10min；变性：98℃10s；退火：62℃5s；延伸：72℃30s，33个循环；总延伸：72℃10min。

反应结束后，吸取PCR产物进行2％琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统中检测和切胶后，使用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒回收，将回收片段与pEASY Blunt simple CloningVector连接，转化到上海唯地生物技术有限公司的大肠杆菌感受态TransT1细胞中；PCR和酶切检测筛选阳性克隆；对检测结果初步判断正确的连接片段，送去上海生工公司进行测序，测序结果如：序列表中SEQ ID NO:2的DNA序列所示，由462bp个碱基组成，与公布的毛竹PeTCP10蛋白的编码序列进行比对，结果完全一致，说明我们已经将这个基因的编码序列克隆到。

实施例4

毛竹PeTCP10基因过表达载体pCAMBI1301a-PeTCP10构建

使用EcoR I和KpnI两个限制性内切酶对测序正确的含有PeTCP10基因编码序列的pEASY Blunt simple Cloning Vector重组质粒和过表达载体pCAMBIA1301a质粒于37℃水浴锅中进行双酶切3h；酶切体系如表2所示：

表2双酶切体系表

双酶切后，通过2％琼脂糖凝胶电泳检测，利用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒回收。用T4DNA连接酶将获得的1301a载体大片段和目的基因小片连接，25℃反应10～15min，连接体系如表3所示：

表3 T4连接酶反应体系

取10μL连接产物轻轻打入25～50μL Tans T1大肠杆菌感受态细胞中，冰埋30min，42℃热激30s，再次冰埋2min，之后向其中加入500μL左右的LB液体培养基于37℃摇床中180rpm培养1h，然后涂布于含有50μg/mL的LB平板上。37℃培养8～12h，挑取单克隆菌株，进行摇菌，提取质粒进行初步的酶切验证，将酶切结果显示为两条带的菌株送样测序。测序结果与序列表中SEQ ID NO:2的DNA序列一致，说明pCAMBIA1301a–PeTCP10载体已经构建完成。将测序正确的菌株提取pCAMBIA1301a–PeTCP10质粒，取1μL提取的质粒轻轻打入到50μLEHA105农杆菌感受态细胞中，冰浴5min，液氮速冻5min，37℃金属浴热激5min后，加入500μLYEP液体培养基，28℃，220培养2～3h；6.0×10³g，离心30s，弃上清，加入100μL YEP液体培养基，重新悬浮细胞，涂布于含50μg/mL Kan和30μg/mL Rif的YEP固体平板上，28℃培养约24～48h；挑取平板上长出的微黄色的单菌落，接种于含50μg/mL Kan和30μg/mL Rif的YEP液体培养液中，摇菌24～48h；待菌液浑浊，显示为橙黄色，提取质粒；分别用PCR和双酶切验证。

实施例5

将植物转基因表达载体pCAMBIA1301a–PeTCP10转入野生型拟南芥中

1.野生型拟南芥的种植：

(1)在超净台上，用12％花王漂白水漂洗饱满的野生型拟南芥种子8min，漂洗两遍，然后用双蒸水轻轻地漂洗拟南芥种子7-8次，每次冲洗3min。

(2)用1mL移液枪吸取消毒过的种子均匀地吹打在1/2MS固体培养基上，放入4℃冰箱低温处理2～3天，然后转移到22℃温室中培养；

(3)待平板上的拟南芥幼苗生长到四叶期时移栽到营养基质(蛭石：黑土＝3:1)中，每盆4株，并用保鲜膜覆盖保湿。生长期间保持花盆中基质湿润。

2.农杆菌侵染液的制备：

取50μL含有目的过表达质粒的农杆菌菌液加入到50mLYEP液体培养中，同时加入50μg/mL Kan和30μg/mL Rif，28℃，230r/min，培养两天，OD₆₀₀＝08-1.0。4℃，4.5×10³r/min，离心5min，弃上清，用转化缓冲液重悬菌落，备用。

待野生型拟南芥生长至初花期时，用1mL胶头滴管吸取配制好的侵染缓冲液滴蘸花蕾，避光黑暗培养三天左右。待侵染后的拟南芥生长势恢复后用样的方法进行第二次侵染。经过两次侵染后收获种子为T0代。

实施例6

毛竹PeTCP10基因的转基因拟南芥筛选和鉴定

1.潮霉素筛选：

将拟南芥T0种子，均匀地平铺在含有30μg/mL潮霉素的MS培养基上，如上述步骤。待4℃处理3天左右后，转移到温室中培养。观察拟南芥幼苗是否可以正常生长，在MS平板上能够正常生长且侧根发育正常的幼苗即可能为阳性植株。此时，将生长正常的幼苗移栽至土壤基质中于温室中培养。

2.PCR分子验证

首先粗提取PeTCP10基因的转基因拟南芥DNA，

(1)取生长状况良好的拟南芥叶片0.1g于2mL灭菌后的离心管中；

(2)放入钢珠，35Hz研磨35s；

(3)加入400μL DNA Extraction Buffer，最高速离心15min；

(4)离心后小心吸取300μL上清液于新的1.5mL灭菌的离心管中，加入等体积的异丙醇，震荡混匀，室温静置2min；

(5)再以最高转速离心5min以沉淀DNA；

(6)弃去(5)中的上清液，加入1mL 75％的酒精，7500rpm离心5min；重复一次，弃去上清，使沉淀的DNA尽量干燥后加入100μL双蒸水，轻轻震荡使DNA沉淀溶解；

(7)同时以相同的方法提取野生型拟南芥的基因组DNA为对照组。

以上述提取的基因组DNA为模板，使用引物PeTCP10-F和PeTCP10-R进行PCR分子检测。扩增程序：98℃10min；变性：98℃10s；退火：62℃5s；延伸：72℃30s，28个循环；总延伸：72℃10min。反应结束后，取PCR产物，进行2％琼脂糖凝胶电泳后，在凝胶成像系统中观察。

3.毛竹PeTCP10基因的转基因拟南芥的表型分析

同时将野生型和转基因拟南芥种植于温室中，两周后，拍照观察表型(图4)。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，本发明要求保护范围由所附的权利要求书、说明书及其等效物界定。

序列表

<110> 安徽农业大学

<120> 具有控制叶片卷曲功能的毛竹PeTCP10蛋白及其应用

<130> 2018

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1681

<212> DNA

<213> 人工序列(PeTCP10)

<220>

<221> misc_feature

<222> (314)..(327)

<223> n is a, c, g, t or u

<400> 1

gtttttgaac cgtctgtgaa agccttttct gtagtagtgc tcgtagatct accggacgct 60

gcccgtccga gatgagctgc tctgggggct tttcaacgcc gacctcatcg gcttccacac 120

cttcgactac gcgcgccact tcctctcatc gtgcaaccgc atcctcggcc tcgcctacga 180

atccaagagg gatacatcgg catcgagtac tacggccgca ccgtcaacat caagatcctc 240

cttgtcggca tccacatggg ccagctcagg caggtcatga gcctcctggc gcccgcgggc 300

tgtgggacca tccnnnnnnn nnnnnnntgc ggttgccggc accggccgcg gggctaccgg 360

tggccgagac agcgaagaga gggacgaggc cttgtggggg tggcggtggc ggtgatgggg 420

gcgaggccgc tgggcacaga aatcgccgcg ccgccgctgc tttggaggag agggttggcg 480

atgacgggta gtaggccgcg ggcgccgccg tggccagtgg gccctagctc ccgcgtgagc 540

tggaagatcc tagccgcgca cgccgccgac atgcggatcc gccgcccgcg gccctccacc 600

ttggtgtgtc ggtcgtggtt cctcggcggc ggcttgcgta tcatggccat cccgccgaag 660

aactccaccg gctcgggctt aggcacgatg aagctgtgca tggggattgc gccaatggcc 720

atggccgccg ccacgccgca tcccacccca cccggctgcg cgtggagtcg cgcgctctcc 780

tcctcctccg ccttgtcctg cacctgcgcc tccatggtgg gaatcaaagc gattggattg 840

gttcggcttc ggaattgggt tgatactata acttgggctg gatggatggg atgggttaga 900

aatgggttga acccatattg aggaattggg ttgggttgga attgcatatg ggttgggttg 960

ggttttgaag gtggaacgat gagtttgtct gtattggatt gatatactac acatgaagtg 1020

agttgggatg ggtttagatt gggtttcaac ctattagcag gcggaggcag cagttgtcaa 1080

ctttgcggtg cgcgcgcgtg tgacggatgg aacagagagc gaagcactgg acggtcggcg 1140

ccggtatgac catatccaga tgccctctca cgcctttttc ctcccgcgcg cgctgaggcc 1200

gagctttctc tcccgctctt ttggtctggg tttcctcgcc gggcgtcacg tgccgatgtg 1260

gacggggcgg gtgttggctg acgcgtgggc ccaatcgctt gcggtggcgc gcggggccgg 1320

agtggaagcg ggtaggttgc gccggggtgg aactgtcggc gtgaggtgta aagggcgcac 1380

gggcgcgttg cctggggtct gggtctgggt ctgggtctag gtcacgtgcg ggttcccttt 1440

ccttcgggcg aggggggtgg acgtgggtga tggactgatg gggacgctgc tgcagattgt 1500

gctctgattc gcagctcgca aggcttggct tgccagtagc cacctcaaga ttggaatatt 1560

ttggaatatt tttcttccaa attggcctgg gacccggtgc gacctgtcta tgaagggaaa 1620

atgcagagtg cttgtttgaa tggcgagaat ttttttataa gaattttgca ggaagcctag 1680

t 1681

<210> 2

<211> 462

<212> DNA

<213> 人工序列(PeTCP10)

<400> 2

atggaggcgc aggtgcagga caaggcggag gaggaggaga gcgcgcgact ccacgcgcag 60

ccgggtgggg tgggatgcgg cgtggcggcg gccatggcca ttggcgcaat ccccatgcac 120

agcttcatcg tgcctaagcc cgagccggtg gagttcttcg gcgggatggc catgatacgc 180

aagccgccgc cgaggaacca cgaccgacac accaaggtgg agggccgcgg gcggcggatc 240

cgcatgtcgg cggcgtgcgc ggctaggatc ttccagctca cgcgggagct agggcccact 300

ggccacggcg gcgcccgcgg cctactaccc gtcatcgcca accctctcct ccaaagcagc 360

ggcggcgcgg cgatttctgt gcccagcggc ctcgccccca tcaccgccac cgccaccccc 420

acaaggcctc gtccctctct tcgctgtctc ggccaccggt ag 462

<210> 3

<211> 153

<212> PRT

<213> 人工序列(PeTCP10)

<400> 3

Met Glu Ala Gln Val Gln Asp Lys Ala Glu Glu Glu Glu Ser Ala Arg

1 5 10 15

Leu His Ala Gln Pro Gly Gly Val Gly Cys Gly Val Ala Ala Ala Met

20 25 30

Ala Ile Gly Ala Ile Pro Met His Ser Phe Ile Val Pro Lys Pro Glu

35 40 45

Pro Val Glu Phe Phe Gly Gly Met Ala Met Ile Arg Lys Pro Pro Pro

50 55 60

Arg Asn His Asp Arg His Thr Lys Val Glu Gly Arg Gly Arg Arg Ile

65 70 75 80

Arg Met Ser Ala Ala Cys Ala Ala Arg Ile Phe Gln Leu Thr Arg Glu

85 90 95

Leu Gly Pro Thr Gly His Gly Gly Ala Arg Gly Leu Leu Pro Val Ile

100 105 110

Ala Asn Pro Leu Leu Gln Ser Ser Gly Gly Ala Ala Ile Ser Val Pro

115 120 125

Ser Gly Leu Ala Pro Ile Thr Ala Thr Ala Thr Pro Thr Arg Pro Arg

130 135 140

Pro Ser Leu Arg Cys Leu Gly His Arg

145 150

<210> 4

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(上游引物)

<400> 4

cggaattcat ggaggcgcag gtgc 24

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(下游引物)

<400> 5

ggggtaccct accggtggcc ga 22

Claims

1.一种毛竹PeTCP10蛋白，其特征在于：所述的毛竹PeTCP10蛋白的氨基酸序列如SEQID No.3所示。

2.一种编码权利要求1所述的毛竹PeTCP10蛋白的编码序列，其特征在于：所述的毛竹PeTCP10蛋白的脱氧核苷酸序列如SEQID No.2所示。

3.含有权利要求2所述的编码基因的脱氧核苷酸序列的载体。

4.权利要求3所述的载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：将两端包含酶切位点的毛竹PeTCP10蛋白编码基因序列构建到pEASY Blunt simple Cloning Vector载体上，转入大肠杆菌感受态细胞TransT1内，得到重组质粒，双酶切重组质粒和pCAMBIA1301a质粒，连接后，转入大肠杆菌感受态细胞，提取质粒后，获得表达重组质粒pCAMBIA1301a-PeTCP10。

5.含有权利要求3所述的载体的工程菌。

6.用于克隆权利要求2所述的编码基因序列的引物对，其特征在于：所述的引物对包括上游引物和下游引物，所述的上游引物序列如SEQ ID No.4所示，所述的下游引物序列如SEQ ID No.5所示。

7.一种毛竹PeTCP10基因，其特征在于：所述的毛竹PeTCP10基因的cDNA全长的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

8.权利要求7所述的毛竹PeTCP10基因在拟南芥叶片卷曲中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：通过农杆菌介导的花序浸染法将权利要求7所述的基因或权利要求2所述的编码基因序列转入植物中。