CN109258806A - 含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液、其涂膜方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液、其涂膜方法及应用，属于食品安全与加工技术领域。本发明含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液，是向涂膜剂溶液中加入不产毒黄曲霉菌的孢子制备而成；所述不产毒黄曲霉菌孢子的添加量为107～109个/L。在上述涂膜液中添加0.1～0.5％的生物类黄酮与不产毒黄曲霉菌的孢子具有协同增效作用。本发明的涂膜液能够有效的防止花生被黄曲霉毒素污染；其中不产毒黄曲霉菌孢子与生物类黄酮协同作用，以提高防止黄曲霉毒素污染的功效。
Description
技术领域
本发明属于食品安全与加工技术领域，具体涉及含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液、其涂膜方法及应用。
背景技术
花生是一种重要的油料和经济作物，我国花生的种植面积为500万公顷，花生的年产量为1400万吨，占世界花生总产量的40％以上。黄曲霉毒素主要是由黄曲霉(A.flavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)产生的次生代谢化合物，它们是二氢呋喃香豆素的衍生物，1993年被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为I类致癌物。黄曲霉菌分布广泛，在花生种植、收获以及运输和储藏过程中，均易受到黄曲霉菌的污染；大部分黄曲霉菌在生长繁殖过程中可产生黄曲霉毒素；被黄曲霉毒素污染的花生不仅对经济动物和人体造成危害，还能造成资源的浪费。
目前，已经存在很多黄曲霉毒素脱毒、解毒、降解的方法；许多抑制黄曲霉菌生长、抑制黄曲霉菌产毒和降解黄曲霉毒素的微生物被分离、培养；不产毒黄曲霉菌是一种重要的抑制黄曲霉生长、产毒和降解黄曲霉毒素的微生物；然而，已经分离的不产毒黄曲霉菌大都局限在实验室研究阶段，还没有不产毒黄曲霉菌在实际生产应用的报到。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点和不足，并提供一种含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液、其涂膜方法和应用。
为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：
一种含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液，向涂膜剂溶液中加入不产毒黄曲霉菌的孢子制备而成；所述不产毒黄曲霉菌孢子的添加量为107～109个/L。
在上述方案的基础上，所述在涂膜液中添加0.1～0.5％的生物类黄酮与不产毒黄曲霉菌的孢子具有协同增效作用。
在上述方案的基础上，所述的生物类黄酮为原花青素、芸香素、橙皮素中的至少一种。
在上述方案的基础上，所述涂膜剂溶液是将涂膜剂按3％～5％的重量比添加到去离子水中制备而成。
在上述方案的基础上，所述涂膜剂为海藻酸钠、黄原胶、壳聚糖中的至少一种。
在上述方案的基础上，所述含有不产毒黄曲霉菌涂膜液的制备方法，步骤如下：
(1)称取涂膜剂于锥形瓶中，溶于1L去离子水，加热至完全溶解，得到涂膜剂溶液；
(2)向上述涂膜剂溶液中添加不产毒黄曲霉菌孢子和生物类黄酮，搅拌混合均匀，即得涂膜液。
上述方法制备的含有不产毒黄曲霉菌涂膜液在黄曲霉毒素生物防控中的应用。
在上述方案的基础上，用于农产品的储藏过程；所述的农产品为玉米或花生。
一种涂膜抑制黄曲霉毒素侵染的方法，将上述制备的涂膜液与花生仁加入到包衣机中，进行涂膜包衣；得到的涂膜花生常温储藏；所述涂膜液与花生仁的混合比为0.2～0.5mL/g。
在上述方案的基础上，花生仁涂膜包衣的条件为进风温度50～55℃，风量500～600m3/h，风速10～12m/s。
所述不产毒黄曲霉菌为AS3.3950，购自上海北诺生物科技有限公司。
本发明的有益效果：
本发明的涂膜液能够有效的防止花生被黄曲霉毒素污染；其中不产毒黄曲霉菌孢子与生物类黄酮协同作用，以提高防止黄曲霉毒素污染的功效。
采用不产毒黄曲霉孢子作为本发明涂膜液中的有效成分之一，在一般贮存条件下，贮存的水分、温度不适宜黄曲霉菌的生长繁殖，不产毒的黄曲霉菌孢子在涂膜层中处于休眠状态；外界也没有产毒黄曲霉入侵；当贮存的条件适宜黄曲霉菌生长时，涂膜层中的不产毒黄曲霉孢子就会萌发，早先于外界产毒黄曲霉菌覆盖于花生仁表面，有效的阻隔外界产毒黄曲霉菌向花生内部的入侵；此外，涂膜液中的生物类黄酮物质能够有效的发挥其抗氧化的功效；从而影响黄曲霉毒素合成中脱氢反应，进一步抑制黄曲霉毒素的生物合成。
附图说明
图1生物类黄酮对黄曲霉产毒的抑制作用；
图2原花青素添加量对黄曲霉产毒的影响；
图3不产毒黄曲霉对黄曲霉毒素B1的降解作用；
图4不产毒黄曲霉对黄曲霉毒素B2的降解作用；
图5不产毒黄曲霉对黄曲霉毒素G1的降解作用；
图6不产毒黄曲霉对黄曲霉毒素G2的降解作用。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1不产毒黄曲霉菌孢子的制备
将不产毒黄曲霉菌AS3.3950(购自上海北诺生物科技有限公司)接种于Czapek‘s琼脂培养基，28℃培养5天，然后用棉签蘸取培养基上的孢子于无菌的0.1％吐温-80中，利用振荡器震荡均匀，再利用血球计数板计数，将其浓度调至1011cfu/mL备用。
实施例2生物类黄酮对黄曲霉产毒的抑制作用
第一组：将产毒黄曲霉菌ATCC 28539(购自北京北纳创联生物技术研究院)接种于综合PDA液体培养基(添加0.3％的原花青素)中；使其终浓度为106个/mL，置于28℃摇床培养。
第二组：将产毒黄曲霉菌ATCC 28539接种于综合PDA液体培养基(添加0.3％的芸香素)中；使其终浓度为106个/mL，置于28℃摇床培养。
第三组：将产毒黄曲霉菌ATCC 28539接种于综合PDA液体培养基(添加0.3％的橙皮素)中；使其终浓度为106个/mL，置于28℃摇床培养。
第四组：将产毒黄曲霉菌ATCC 28539接种于综合PDA液体培养基中；使其终浓度为106个/mL，置于28℃摇床培养。
分别于培养的第6d取样测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，每组3次重复试验。结果如图1所示：
由图1可知，添加生物类黄酮的组黄曲霉菌产黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量降低，这说明本发明的生物类黄酮对黄曲霉菌的产毒具有抑制作用；生物类黄酮物质一般具有抗氧化的特性，生物类黄酮可能是通过抑制黄曲霉毒素合成过程中脱氢氧化过程，从而导致黄曲霉毒素合成量降低；添加原花青素组的黄曲霉毒素的含量最低，这说明原花青素的抑制效果优于芸香素和橙皮素。
实施例3原花青素添加量对黄曲霉产毒的影响
将产毒黄曲霉菌ATCC 28539(购自北京北纳创联生物技术研究院)分别接种于含有0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.8％、1.0％原花青素的综合PDA液体培养基中；使其终浓度为106个/mL，置于28℃摇床培养6d，取样测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，每组3次重复试验。结果如图2所示：
由图2可知：随着原花青素添加量的增加，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量降低，原花青素添加量大于0.5％时，黄曲霉毒素的降低缓慢，趋于平稳；考虑到节约成本的原则，建议将0.5％作为原花青素的最佳添加量；在实际应用中，如果保存期较长，可适当增加原花青素的添加量。
实施例4不产毒黄曲霉对黄曲霉毒素的降解作用
第一组：将不产毒黄曲霉菌AS3.3950孢子接种于PD液体培养基(含有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准品，即终浓度为25μg/mL)中，使其终浓度为107个/mL，置于28℃摇床培养。
第二组：将不产毒黄曲霉菌AS3.3950孢子接种于PD液体培养基(含有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准品，即终浓度为25μg/mL；添加0.3％的原花青素)中，使其终浓度为107个/mL，置于28℃摇床培养。
第三组：含有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准品(终浓度为25μg/mL)的PD液体培养基作为空白对照组，置于28℃摇床培养。
分别于培养2d、4d、6d、8d、10d取样测定4种黄曲霉毒素的含量，每组3次重复试验。试验结果如图3～6所示：
由图3～6可知：添加原花青素的组，黄曲霉毒素的降解速度比仅添加不产毒黄曲霉菌组的快，这说明原花青素对不产毒黄曲霉菌降解黄曲霉毒素具有协同作用。
实施例5
一种含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液的制备方法，步骤如下：
(1)称取40g海藻酸钠于锥形瓶中，溶于1L去离子水，加热至完全溶解，得到涂膜剂溶液；
(2)向上述涂膜剂溶液中添加不产毒黄曲霉菌孢子和生物类黄酮，搅拌混合均匀，即得涂膜液。
所述生物类黄酮为原花青素，添加量为0.5％；
所述不产毒黄曲霉菌孢子的添加量为108个/L。
实施例6
一种含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液的制备方法，步骤如下：
(1)称取30g黄原胶于锥形瓶中，溶于1L去离子水，加热至完全溶解，得到涂膜剂溶液；
(2)向上述涂膜剂溶液中添加不产毒黄曲霉菌孢子和生物类黄酮，搅拌混合均匀，即得涂膜液。
所述生物类黄酮为芸香素，添加量为0.3％；
所述不产毒黄曲霉菌孢子的添加量为107个/L。
实施例7
一种含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液的制备方法，步骤如下：
(1)称取50g壳聚糖于锥形瓶中，溶于1L去离子水，加热至完全溶解，得到涂膜剂溶液；
(2)向上述涂膜剂溶液中添加不产毒黄曲霉菌孢子和生物类黄酮，搅拌混合均匀，即得涂膜液。
所述生物类黄酮为橙皮素，添加量为0.4％；
所述不产毒黄曲霉菌孢子的添加量为109个/L。
实施例8
一种涂膜抑制黄曲霉毒素侵染的方法，将实施例5～7制备的涂膜液与花生仁加入到包衣机中，进行涂膜包衣；得到的涂膜花生常温储藏；所述涂膜液与花生仁的混合比为0.2～0.5mL/g。花生仁涂膜包衣的条件为进风温度50～55℃，风量500～600m3/h，风速10～12m/s。
一、花生涂膜抑制黄曲霉毒素侵染效果试验
1.1试验分组
1.1.1实施例5制备的涂膜液；
1.1.2实施例6制备的涂膜液；
1.1.3实施例7制备的涂膜液；
1.1.4实施例5不含有原花青素的涂膜液；
1.1.5实施例5不含有不产毒黄曲霉菌孢子的涂膜液；
1.1.6空白涂膜液(称取40g海藻酸钠于锥形瓶中，溶于1L去离子水，加热至完全溶解，得到涂膜液)；
1.2试验设计
挑选新收获，饱满，含水量为9％，无霉变粒的花生仁，分别用1.1.1～1.1.6的涂膜液涂膜。述涂膜液与花生仁的混合比为0.2～0.5mL/g。花生仁涂膜包衣的条件为进风温度50～55℃，风量500～600m3/h，风速10～12m/s。涂膜后的花生置于常温储存120d，取样测定各组中4种黄曲霉毒素的含量，每组3次重复试验。
1.3试验结果
涂膜后贮存的花生的黄曲霉毒素含量测定如表1所示：
表1花生的黄曲霉毒素含量
由表1可知，本发明实施例5～7的涂膜液涂膜花生中，黄曲霉毒素的含量显著低于其他各组黄曲霉毒素的含量；其中实施例5的效果最优；这说明本发明的涂膜液能够有效的防止黄曲霉毒素的污染，可应用于花生或其他农产品的贮存。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液，其特征在于：向涂膜剂溶液中加入不产毒黄曲霉菌的孢子制备而成；所述不产毒黄曲霉菌孢子的添加量为107～109个/L。
2.根据权利要求1所述含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液，其特征在于：所述在涂膜液中添加0.1～0.5％的生物类黄酮与不产毒黄曲霉菌的孢子具有协同增效作用。
3.根据权利要求2所述含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液，其特征在于：所述的生物类黄酮为原花青素、芸香素、橙皮素中的至少一种。
4.根据权利要求1所述含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液，其特征在于：所述涂膜剂溶液是将涂膜剂按3％～5％的重量比添加到去离子水中制备而成。
5.根据权利要求4所述含有不产毒黄曲霉菌的涂膜液，其特征在于：所述涂膜剂为海藻酸钠、黄原胶、壳聚糖中的至少一种。
6.根据权利要求1～5任一项所述含有不产毒黄曲霉菌涂膜液的制备方法，其特征在于：步骤如下：
(1)称取涂膜剂于锥形瓶中，溶于1L去离子水，加热至完全溶解，得到涂膜剂溶液；
(2)向上述涂膜剂溶液中添加不产毒黄曲霉菌孢子和生物类黄酮，搅拌混合均匀，即得涂膜液。
7.权利要求6所述方法制备的含有不产毒黄曲霉菌涂膜液在黄曲霉毒素生物防控中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：用于农产品的储藏过程；所述的农产品为玉米或花生。
9.一种涂膜抑制黄曲霉毒素侵染的方法，其特征在于：将权利要求6制备的涂膜液与花生仁加入到包衣机中，进行涂膜包衣；得到的涂膜花生常温储藏；所述涂膜液与花生仁的混合比为0.2～0.5mL/g。
10.根据权利要求9所述涂膜抑制黄曲霉毒素侵染的方法，其特征在于：花生仁涂膜包衣的条件为进风温度50～55℃，风量500～600m3/h，风速10～12m/s。
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