CN109247270A - 一种快速筛选小型实验鱼构建胰腺脂肪浸润模型的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速筛选小型实验鱼构建胰腺脂肪浸润模型的方法，属于生物技术领域。所述胰腺脂肪浸润动物模型是利用高脂饲料饲喂诸氏鲻虾虎鱼构建得到的。本发明通过实验筛选出符合造模预期(具备稳定/易患NAFLD等代谢综合征)或易于造模的实验鱼为诸氏鲻虾虎鱼，该实验鱼肝脏病理特征与人NAFLD发病初期至肝纤维化前期的病理特征高度相似，由于临床常见胰腺脂肪浸润常伴有NAFLD，因此能很好地模拟代谢综合征的病理状态。本发明在保证模拟性高、重复性好、可靠性强、成本低廉的基础上，还公开了一种可靠的模型评价方法，所述评价方法的建立有利于指导本领域技术人员快速构建诸氏鲻虾虎鱼胰腺脂肪浸润动物模型。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速筛选小型实验鱼构建胰腺脂肪浸润模型的方法。
背景技术
胰腺的甘油三酯沉积过多，或胰腺组织发生脂肪替代时，会形成“胰腺脂肪浸润”。目前对脂肪在胰腺中沉积缺乏统一命名，常见命名为“脂肪胰”、“非酒精性脂肪性胰腺病”和“胰腺脂肪浸润”等等(Lee et al.,2009；Mathur et al.,2007；Tushuizen et al.,2007)。研究表明胰腺脂肪浸润多由肥胖引起，非酒精性脂肪胰腺主要是后天肥胖和代谢综合征引起的胰腺脂肪堆积，包括高血糖、血脂紊乱、高胰岛素血症伴胰岛素抵抗等等，其早期可表现为脂肪浸润(李建婷等,2013)。在Shwachman-Diamond综合征、Johanson-Blizzard综合征以及羧酯脂酶基因突变导致的疾病中，均有胰腺脂肪累积，但胰腺脂肪浸润与疾病发生发展的机制尚不清楚(Hwang et al.,2011；Lee et al.,2008)。迄今对胰腺脂肪浸润发生机制的研究相对较少，且主要集中在胰岛细胞/β细胞内甘油三酯的浸润机制上，其与非酒精性脂肪肝发病机制是否类似，是否相互促进仍需深入研究。
无论病理研究，还是药物筛选、评价均需要选择合适的动物模型，目前胰腺脂肪浸润的动物模型主要通过高脂饲料喂养、毒性损伤及基因突变等方式构建，且主要基于大/小鼠模型，这些模型已用于疾病机制和药物干预研究中。由于大/小鼠模型的构建、维护成本较高，对饲料和药物的消耗量较大，且不适用于高通量实验；同时采用四氯化碳腹腔注射等毒性损伤下的大/小鼠模型，会因毒性的影响引发动物死亡率上升，从而造模成功率下降，因而限制了其应用。
因此，筛选大/小鼠以外的动物模型，模拟脂肪浸润与代谢综合征并发的病理特征，构建胰腺脂肪浸润模型，对于相关疾病的发生、发展机制研究以及后期的药物筛选具有现实意义。
发明内容
本发明的目的在于快速筛选一种合适的小型实验鱼，构建胰腺脂肪浸润模型，用于胰腺脂肪浸润与代谢综合征特别是NAFLD发生、发展机制的研究。同时，在保证模拟性高、重复性好、可靠性强、成本低廉的基础上，提供一种可靠的模型评价方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种动物模型，所述动物模型是利用诸氏鲻虾虎鱼构建得到的。
诸氏鲻虾虎鱼是虾虎鱼亚目的一种生物。其形态特征为：体延长，前部亚圆筒形，后部侧扁；背缘浅弧形隆起，腹缘较平直；尾柄较长，其长大于体高。头颇大，稍宽，头部和鳃盖部无任何感觉管孔。诸氏鲻虾虎鱼暖水性底层小型鱼类，栖息于河口咸、淡水水域中；数量少，大经济价值。个体小。体长30—40mm。分布于香港；菲律宾，日本，泰国及西太平洋海域。
优选的，所述诸氏鲻虾虎鱼选自封闭群个体。
封闭群是指动物的一个种群在五年以上不从外部引进新种，仅在固定场所的一定群体中保持繁殖的动物群。具体来说就是引种于某亲本或同源亲本的动物，让其不以近交形式，也不与群外动物杂交而繁衍的动物群，目的是要求整个群体尽量防止近亲交配而保持着遗传变异，也就是说既保持群体的一般特性，又保持动物的杂合性。
优选的，所述诸氏鲻虾虎鱼选用≥120日龄的诸氏鲻虾虎鱼；更优选的，所述诸氏鲻虾虎鱼为120-200日龄的诸氏鲻虾虎鱼。
发明人研究发现：诸氏鲻虾虎鱼的胚后发育根据其形态和性腺发育程度，可分为仔鱼期(0～25日龄)、稚鱼期(25～35日龄)、幼鱼期(35～80日龄)、过渡期(80～120日龄)、成鱼期(120日龄～250日龄)和衰老期(250日龄～800日龄)，一般120日龄～200日龄的成年个体活力最好。
优选的，所述诸氏鲻虾虎鱼选用雄鱼。
更优选的，诸氏鲻虾虎鱼选自封闭群中≥120日龄的诸氏鲻虾虎鱼的雄鱼。
最优选的，诸氏鲻虾虎鱼选自封闭群中120-200日龄的诸氏鲻虾虎鱼的雄鱼。
优选的，构建动物模型时所用的方法为本领域技术人员公知的方法。
优选的，所述动物模型包括脂肪肝动物模型、胰腺脂肪浸润动物模型，等等。
一种胰腺脂肪浸润动物模型，所述动物模型是利用高脂饲料饲喂诸氏鲻虾虎鱼构建得到的。利用高脂饲料构建胰腺脂肪浸润动物模型是本领域技术人员的公知常识，因为不同的物种对饲料的脂肪需求量不同，一般来说，比正常饲料高出2倍算是高脂饲料。发明人研究发现：对诸氏鲻虾虎鱼来说，脂肪含量超过12％的饲料就是高脂饲料。
优选的，所述诸氏鲻虾虎鱼选自封闭群个体。
优选的，所述诸氏鲻虾虎鱼选用≥120日龄的诸氏鲻虾虎鱼；更优选的，所述诸氏鲻虾虎鱼为120-200日龄的诸氏鲻虾虎鱼。
优选的，所述诸氏鲻虾虎鱼选用雄鱼。
更优选的，诸氏鲻虾虎鱼选自封闭群中≥120日龄的诸氏鲻虾虎鱼的雄鱼。
最优选的，诸氏鲻虾虎鱼选自封闭群中120-200日龄的诸氏鲻虾虎鱼的雄鱼。
优选的，所述高脂饲料中粗蛋白为38％-50％，粗脂肪为5％-25％，水分＜10％，粗纤维≤5％，按重量百分比计。
优选的，所述高脂饲料由以下重量份数的组分组成：白鱼粉40-75g，豆粕5-20g，鱼油0-20g，大豆油0-20g，土豆淀粉10-30g，矿物盐预混0.5-2g，维生素预混0.5-2g，羧甲基纤维素1-3g，微晶纤维素1-3g。
一种构建胰腺脂肪浸润诸氏鲻虾虎鱼模型的高脂饲料，所述饲料由以下重量份数的组分组成：白鱼粉40-75g，豆粕5-20g，鱼油0-20g，大豆油0-20g，土豆淀粉10-30g，羧甲基纤维素1-3g，微晶纤维素1-3g，以及适量的矿物盐预混料和维生素预混料。
发明人对上述组分设置了多种组合，并测定其含量组成，并将建模的效果联系起来，最终获得上述配方。所述配比的高脂饲料，经过检测其中粗蛋白为38％-50％，粗脂肪为5％-25％，水分＜10％，粗纤维≤5％，按重量百分比计。
本发明实施例1自配饲料中粗脂肪的含量约为5％，所述自配饲料也可以导致诸氏鲻虾虎鱼的肝脏空泡化现象，本发明研究主要是针对诸氏鲻虾虎鱼肝脏空泡化下构建胰腺脂肪浸润，简单说就是使得诸氏鲻虾虎鱼肝脏出现脂肪肝的同时，构建胰腺脂肪浸润模型，所以本发明的饲料配方中将范围扩大到粗脂肪为5％的下限。粗脂肪的上限为25％，如果超过上限，到达如30％，诸氏鲻虾虎鱼的死亡率会明显增高。
最佳的，对诸氏鲻虾虎鱼来说，脂肪含量为15％-20％的高脂饲料，可以达到理想的建模效果。
优选的，按照最后配制成的1kg的高脂饲料计，还包括矿物盐预混料，其组分为：氯化钠450-550mg；硫酸镁7000-8000mg；磷酸二氢钠12000-13000mg；磷酸二氢钾15000-17000mg；磷酸二氢钙9000-11000mg；硫酸铁1200-1300mg；乳酸钙1700-1800mg；硫酸锌170-180mg；硫酸锰75-85mg；硫酸铜15-16mg；硫酸钴0.4-0.6mg；碘化钾1.4-1.6mg。
更优选的，按照最后配制成的1kg的高脂饲料计，还包括矿物盐预混料，其组分为：氯化钠500mg；硫酸镁7500mg；磷酸二氢钠12500mg；磷酸二氢钾16000mg；磷酸二氢钙10000mg；硫酸铁1250mg；乳酸钙1750mg；硫酸锌176.5mg；硫酸锰81mg；硫酸铜15.5mg；硫酸钴0.5mg；碘化钾1.5mg。
优选的，按照最后配制成的1kg的高脂饲料计，还包括维生素预混料，其组分为：维生素A 1.8-1.9mg；维生素D 0.4-0.6mg；维生素E 8-12mg；维生素K 8-12mg；烟酸90-110mg；核黄素18-22mg；吡哆醇18-22mg；硫胺18-22mg；泛酸钙45-55mg；生物素0.08-0.12mg；叶酸4.5-5.5mg；维生素B12 18-22mg；抗坏血酸90-110mg；肌醇90-110mg。
更优选的，按照最后配制成的1kg的高脂饲料计，还包括维生素预混料，其组分为：维生素A 1.83mg；维生素D 0.5mg；维生素E 10mg；维生素K 10mg；烟酸100mg；核黄素20mg；吡哆醇20mg；硫胺20mg；泛酸钙50mg；生物素0.1mg；叶酸5mg；维生素B12 20mg；抗坏血酸100mg；肌醇100mg。
一种胰腺脂肪浸润诸氏鲻虾虎鱼模型的评价方法，所述评价方法包括5个指标的评价，所述指标分别为诸氏鲻虾虎鱼的存活率、活动状况、肥满度、酶活评价以及空泡化程度；其中活动状况是指诸氏鲻虾虎鱼饥饿12h后，每分钟的活动次数；酶活评价指超出AST、ALT、Trypton和Lipase正常范围/与对照组有显著差异的指标个数；空泡化程度指胰管周围空泡化细胞所占面积的百分比；上述3个指标的意义是发明人自己发明定义的，而存活率和肥满度参见现有技术的解释。生存率又名存活率，乃指某生物种群内的每一个体经过一定时限以后生存的机率。肥满度，鱼体重量与鱼体体长立方数的比值，是反映鱼类肥瘦程度和生长情况的指标。
评分规程：存活率在80％-100％得1分，＜80％得0分；活动状况每分钟活动次数为0-5次得1分，＞5次得0分；肥满度标准为1.38，＞1.38得1分，＜1.38得0分；酶活指标共4个，AST、ALT、Trypsase和lipase，其正常的范围分别为：200～300U L-1、300～450U L-1、2500-4500U mg-1、0.19～0.3U mg-1，根据超出此范围的异常指标数，分别对应给2-4分，否则不得分。一般来说，至少2个酶活指标异常比仅有1个酶活指标异常判定的结果要准确，所以这里评分是规定至少2个酶活指标异常才得分。空泡化程度在5％～15％和15～60％范围内分别得3分和4分，空泡化程度超出此范围不得分；其中存活率是对所有个体整体统计结果来评分，活动状况、肥满度、酶活、空泡化程度为抽检诸氏鲻虾虎鱼群体中数尾样本结果评分后取平均值；评价诸氏鲻虾虎鱼模型的最终得分＝上述所有得分×空泡化鱼所占抽检比例，最终得分＞5分为合格，判定此群体的诸氏鲻虾虎鱼胰腺脂肪浸润模型构建成功。
由于诸氏鲻虾虎鱼为小型试验鱼，体重均不超过0.5g/尾，肝脏仅有0.01g/尾；活动状况、肥满度、酶活、空泡化程度等多个指标无法用单独个体表示，因此采取抽检诸氏鲻虾虎鱼群体中数尾样本结果评分后取平均值。抽检的数目可以根据统计学的原理来进行。而在确定胰腺脂肪浸润时，拿到切片结果就等于该鱼被杀死取样，所以酶活、空泡化程度的抽检数目可以相应减少。
优选的，空泡化程度的计算方法是：抽检5尾鱼，取样，石蜡切片观察并统计组织细胞空泡化面积所占的比例是否在5％-15％或者15％-60％，然后每一尾进行打分，得到5个值，进行平均，得到平均值。
关于空泡化程度的评分，空泡化程度＜5％时现象不明显，此时胰腺脂肪浸润现象很容易在饥饿状态下消失；而空泡化程度＞60％时，胰腺脂肪浸润较严重，会严重影响鱼体摄食等活动，死亡率很高，因此一般选用上述范围内的个体。
本发明的有益效果是：
(1)本发明通过实验快速筛选出了符合造模预期(具备稳定/易患NAFLD等代谢综合征)或易于造模的实验鱼为诸氏鲻虾虎鱼，该实验鱼肝脏病理特征与人NAFLD发病初期至肝纤维化前期的病理特征高度相似，由于临床常见胰腺脂肪浸润常伴有NAFLD，因此能很好地模拟代谢综合征的病理状态。
(2)本发明筛选的实验鱼诸氏鲻虾虎鱼能稳定维持肝脏细胞空泡化症状，即使饥饿状态下也能较长时间维持该症状。此外，该鱼具有肝脏结构清晰，肝体比大，易于取材操作的特点，所以非常符合作为胰腺脂肪浸润模型的模型动物的要求。
(3)本发明筛选用于构建胰腺脂肪浸润模型的实验鱼优选为雄性个体。实验数据表明周年产卵的诸氏鲻虾虎鱼，其性腺发育对雌鱼的影响显著大于雄性个体，因此本发明技术能有效降低性别对肝脏空泡化(NAFLD脂肪浸润的典型病理特征)变化的影响，最大程度减少造模材料差异带来的实验误差。
(4)本发明造模用的诸氏鲻虾虎鱼是封闭群个体，遗传杂合度在0.5～0.65之间，在保证造模材料有效杂合度(个体差异)的前提下，有效兼顾了实验稳定性，组内个体间差异显著小于野生鱼或者普通繁育群体(遗传杂合度远高于0.7)。
(5)本发明是在充分研究诸氏鲻虾虎鱼摄食、营养生理以及幼鱼期至成鱼期完整生长特性的基础上，开发的一种用于构建胰腺脂肪浸润模型的诸氏鲻虾虎鱼用高脂饲料。其配方中的大量基本营养素能充分满足成年诸氏鲻虾虎鱼(＞120日龄，以120-200日龄为宜)的营养需求。本发明未采用任何添加剂、激素、中药成份，能最大程度避免原料对实验动物造成的影响，进而保证实验和检测的准确性。
(6)本发明高脂饲料配方能有效降低研究、检测成本，为实验室节约饲料成本50％以上；同时适用于批量造模，每个批次可大于1000尾，为病理机制研究和药物筛选提供理想的动物模型和可操作的高通量筛选工具。
(7)本发明公开的一种胰腺脂肪浸润实验鱼模型的评价方法，综合考虑了多种因素的影响，评分规则的制定重点增加了胰腺脂肪浸润抽检占比，酶活异常在评分中的权重，同时兼顾了鱼体存活和活力状况对动物模型的影响，可有效降低空泡化程度较轻、饥饿等条件下症状消失的几率。所述评价方法的建立有利于指导本领域技术人员快速构建诸氏鲻虾虎鱼胰腺脂肪浸润动物模型。
附图说明
图1为斑马鱼(A)和诸氏鲻虾虎鱼(B)的解剖结构及饲喂2周肝体比；
图2为斑马鱼(A、B)和诸氏鲻虾虎鱼(C、D)的肝脏、胰腺结构及位置；
图3为实施例1中，饲喂2周后，斑马鱼(A)和诸氏鲻虾虎鱼(B)的肝脏油红染色比较；
图4为实施例1中，饥饿处理2周诸氏鲻虾虎鱼的肝脏形态变化；
图5为实施例1中，诸氏鲻虾虎鱼饥饿处理下的肝脏细胞变化；
图6为实施例1中，诸氏鲻虾虎鱼饥产卵前后肝脏和性腺比重变化；
图7为实施例1中，产卵前后诸氏鲻虾虎鱼雌鱼(A、B)和雄鱼(C、D)的肝脏变化；
图8为人非酒精性脂肪肝不同病理阶段的病理特征(A)和正常饲喂条件下诸氏鲻虾虎鱼的肝脏特征对比(B1、B2)；
图9为本发明实施例2中各试验组肝脏(包括胰腺)重量变化；
图10为本发明实施例2中各试验组肝脏、胰腺H&E染色结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它成果，都属于本发明保护的范围。
实施例1：以常见小型实验鱼斑马鱼以及本发明的诸氏鲻虾虎鱼为例进行比较筛选
分别选用25尾120-200日龄的AB系斑马鱼、封闭群18-20代诸氏鲻虾虎鱼，循环水系统中适应性饲养5-8天，每天饲喂生物饵料和自配饲料。
自配饲料(同实施例2中的CK2)中各原料的重量份数为：白鱼粉55g，豆粕15g，鱼油0.75g，大豆油0.75g，土豆淀粉22g，羧甲基纤维素2g，微晶纤维素2.5g，以及适量的矿物盐预混料和维生素预混料。
优选的，按照最后配制成的1kg的饲料计，还包括矿物盐预混料，其组分为：氯化钠500mg；硫酸镁7500mg；磷酸二氢钠12500mg；磷酸二氢钾16000mg；磷酸二氢钙10000mg；硫酸铁1250mg；乳酸钙1750mg；硫酸锌176.5mg；硫酸锰81mg；硫酸铜15.5mg；硫酸钴0.5mg；碘化钾1.5mg。
优选的，按照最后配制成的1kg的饲料计，还包括维生素预混料，其组分为：维生素A1.83mg；维生素D 0.5mg；维生素E 10mg；维生素K 10mg；烟酸100mg；核黄素20mg；吡哆醇20mg；硫胺20mg；泛酸钙50mg；生物素0.1mg；叶酸5mg；维生素B12 20mg；抗坏血酸100mg；肌醇100mg。
随机取3尾鱼解剖取样，观察组织结构差异。
适应性饲养结束后，饲喂基础饲料1-2周。
观察成鱼活动状况，及时剔除生病或死亡个体，严格控制水体环境指标，具体包括光照、水温、pH、溶解氧、氨氮、余氯等等；12h光照和黑夜循环，水温24±2℃，pH 7.0±0.5，氨氮≤0.5mg L-1，余氯≤0.05mg L-1。
饲喂实验结束时，随机抽取3尾/组鱼麻醉后，切片H&E染色，同时取肝脏进行油红染色，观察脂肪浸润情况。
根据实验结果对造模实验材料进行初步评估，筛选出符合预期(具备稳定/易患NAFLD等代谢综合征)或易于造模的实验鱼。
利用初步筛选出的实验鱼，以诸氏鲻虾虎鱼为例进行2周饥饿处理，分别于0d、7d、14d油红和H&E染色，比较观察肝脏空泡化(NAFLD脂肪浸润的典型病理特征)维持情况，最终确定是否适用于构建伴有肝脏NAFLD病理特征的胰腺脂肪浸润模型。
利用初步筛选出的实验鱼，以诸氏鲻虾虎鱼为例，基础饲料投喂的基础上进行雌雄鱼的比较，分别于产卵前后取样，比较观察性别对肝脏空泡化(NAFLD脂肪浸润的典型病理特征)的变化的影响，最大程度减少造模材料差异带来的实验误差。
实验结果：
见图1-图7。
图1为斑马鱼(A)和诸氏鲻虾虎鱼(B)的解剖结构及饲喂2周肝体比。由图1可见，斑马鱼和诸氏鲻虾虎鱼在解剖结构上存在显著差异：与斑马鱼相比，诸氏鲻虾虎鱼肝脏体积为0.068±0.012cm3(见图1C2)和肝体比HSI为3.59±0.86(见图1C1)显著大于斑马鱼的肝脏体积0.027±0.018cm3、肝体比HSI为1.25±0.18；同时，诸氏鲻虾虎鱼具有相对短的肠组织(图1A，1B中虚线)，肝脏更易识别和取材。
图2为斑马鱼(A、B)和诸氏鲻虾虎鱼(C、D)的肝脏、胰腺结构及位置。由图2可知，斑马鱼和诸氏鲻虾虎鱼在解剖结构上类似，均具相对完整的胰腺结构：胰腺位于肝脏远离腹侧上壁，位于肝脏与肠之间，与肝脏组织相对独立。此外，饲喂2周的诸氏鲻虾虎鱼肝脏结构(图2D)与斑马鱼(图2C)相比，具有典型脂肪浸润的特征(空泡化；***标出)，而斑马鱼肝脏较致密，无此现象。
图3为饲喂2周后斑马鱼(A)和诸氏鲻虾虎鱼(B)的肝脏油红染色比较(bar＝50μm)。由图3可见，基础饲料饲喂2周后，诸氏鲻虾虎鱼肝脏有明显的油滴，其脂肪浸润情况较斑马鱼极其显著，说明其肝脏组织积累了大量的脂肪滴，这与图2的空泡化症状相对应；而斑马鱼无此症状。
图4为饥饿处理2周诸氏鲻虾虎鱼的肝脏的形态变化。图5为诸氏鲻虾虎鱼饥饿处理下的肝脏细胞变化。注：A、B、C分别为0d、7d、14d的肝脏H&E染色(bar＝50μm)；D、E、F分别为0d、7d、14d的肝脏油红染色。由图4和图5可见，诸氏鲻虾虎鱼在饥饿2周时虽然肝体比减小，但未有显著差异。而肝脏空泡化仍存在，且有大量的油滴。说明其可以保持较高的脂肪浸润水平，符合造模预期(具备稳定/易患NAFLD等代谢综合征)或易于造模的要求，能很好的模拟代谢综合征的病理状态。
图6为诸氏鲻虾虎鱼饥产卵前后肝脏和性腺比重变化。注：A、B分别为诸氏鲻虾虎鱼雌雄个体产卵前1d和产卵后5d时，肝体比和形体比变化；**表示产卵前后相同指标有显著差异(P＜0.05)。由图6可见，作为周年产卵的鱼类，随着诸氏鲻虾虎鱼性腺的发育，雌鱼在产卵前和产卵后，肝脏重量发生了显著变化(p＜0.05)；而雄鱼变化不明显。
图7为产卵前后诸氏鲻虾虎鱼雌鱼(A、B)和雄鱼(C、D)的肝脏变化(bar＝100μm)。由图7可见，雌性诸氏鲻虾虎鱼在产卵前后其肝脏的空泡化症状也发生了显著变化，而雄鱼未有此种变化。由于超过120d的诸氏鲻虾虎鱼即可达到性成熟，因此这选用雄性个体用于后期胰腺脂肪浸润模型的构建，能最大程度减少造模材料差异带来的实验误差。
讨论：
目前实验鱼的相关动物模型研究在国内外还处于空白。虽然斑马鱼已成为国际上疾病研究的主要模式生物之一，并被成功应用于新药筛选中，但未见相关斑马鱼的动物模型的建立。
诸氏鲻虾虎鱼是本发明申请人广东省实验动物监测所开发的一种小型实验鱼，由于其具备良好的实验鱼特性(个体小，繁殖周期短，繁殖量大，易于实验操作等)，具有较大的实验动物开发潜力。本申请人所在团队通过近二十年的诸氏鲻虾虎鱼实验动物化研究，突破了虾虎鱼的全人工繁育关键技术，对其生长遗传特性，毒理学应用，病原菌感染与控制等进行了系统性研究(李建军等，2012；李建军等，2013；蔡磊等，2015；魏远征等，2017)。
本发明采用封闭群个体，在保证造模材料有效杂合度(个体差异)的前提下，有效兼顾了实验稳定性，组内个体间差异显著小于野生鱼或者普通繁育群体。因为申请人所在团队研究发现20个微卫星位点SSR在诸氏鲻虾虎鱼封闭群和野生群中检测到平均等位基因数(Na)和平均有效等位基因数(Ne)分别为7.3500和8.700、3.6824和4.0188；平均期望杂合度(He)分别为0.6924和0.7197。诸氏鲻虾虎鱼封闭群遗传杂合度在0.5～0.65之间，符合实验动物封闭群杂合度要求，野生群遗传杂合度远高于0.7。
本发明中发明人以斑马鱼作为对照，通过对诸氏鲻虾虎鱼的解剖结构、短期饲料饲喂的肝脏脂肪浸润情况等的研究，发现诸氏鲻虾虎鱼具有相对短的肠组织(图1A，1B中虚线)，肝脏等更易识别和取材；同时饲喂2周的诸氏鲻虾虎鱼肝脏具有典型的脂肪浸润特征(图8B1为饲喂2周时诸氏鲻虾虎鱼的肝脏外观、B2为肝脏的切片)，而斑马鱼肝脏较致密，无此现象(图2)。临床上胰腺脂肪浸润与非酒精性脂肪肝(NAFLD)存在密切联系，同时存在脂肪肝和胰腺脂肪浸润的患者比例高达67.9％，切片结果显示本发明的实验鱼诸氏鲻虾虎鱼的肝脏病理特征(图8B2)与人NAFLD发病初期至肝纤维化前期时肝脏脂肪变性的病理特征(图8A中红色方框)高度相似，肝脏细胞空泡化特征明显，因此利用诸氏鲻虾虎鱼能很好的模拟胰腺脂肪浸润发生时伴有的代谢综合征特点，该模型具有显著的优势与应用价值。
本发明筛选的实验鱼诸氏鲻虾虎鱼能稳定维持肝脏细胞空泡化症状，即使饥饿状态下肝体比减小，也能较长时间维持该症状(图5)，这对于构建胰腺脂肪浸润模型，特别是伴有早期NAFLD病理特征模型具有天然优势。
同时，本发明为避免性别(主要是性腺发育)对模型构建的影响，针对性研究了诸氏鲻虾虎鱼雌雄个体产卵前后的变化：雌性诸氏鲻虾虎鱼的肝脏在产卵前后，空泡化症状有显著变化，而雄鱼未有此现象。由于超过120d的诸氏鲻虾虎鱼即可达到性成熟，因此选用雄性个体用于后期胰腺脂肪浸润模型的构建，能最大程度地减少造模材料差异带来的实验误差。
此外，诸氏鲻虾虎鱼肝脏结构清晰，肝体比大的特点极有利于酶活检测等的取材操作，可有效降低研究、检测成本，为病理机制研究和药物筛选提供理想的潜在动物模型和药物筛选评价工具。
实施例2：以封闭群雄性诸氏鲻虾虎鱼为例构建胰腺脂肪浸润模型的方法
选用250尾180-200日龄的封闭群雄性诸氏鲻虾虎鱼，体重为0.35-0.50克/尾。12h光照和黑夜循环，水温24±2℃，pH 7.0±0.5，氨氮≤0.5mg L-1，余氯≤0.05mg L-1。
制备诸氏鲻虾虎鱼高脂饲料I，其中各原料的重量份数为：白鱼粉55g，豆粕15g，鱼油6.5g，大豆油6.5g，土豆淀粉10.5g，羧甲基纤维素2g，微晶纤维素2.5g，以及适量的矿物盐预混料和维生素预混料。
优选的，按照最后配制成的1kg的高脂饲料计，还包括矿物盐预混料，其组分为：氯化钠500mg；硫酸镁7500mg；磷酸二氢钠12500mg；磷酸二氢钾16000mg；磷酸二氢钙10000mg；硫酸铁1250mg；乳酸钙1750mg；硫酸锌176.5mg；硫酸锰81mg；硫酸铜15.5mg；硫酸钴0.5mg；碘化钾1.5mg。
优选的，按照最后配制成的1kg的高脂饲料计，还包括维生素预混料，其组分为：维生素A1.83mg；维生素D 0.5mg；维生素E 10mg；维生素K 10mg；烟酸100mg；核黄素20mg；吡哆醇20mg；硫胺20mg；泛酸钙50mg；生物素0.1mg；叶酸5mg；维生素B12 20mg；抗坏血酸100mg；肌醇100mg。
饲料制备过程如下：(1)分别将购自市场的白鱼粉、豆粕等原料用粉碎机粉碎后过80目筛；(2)按照配比依次称取白鱼粉、豆粕、土豆淀粉、矿物盐预混、维生素预混料、羧甲基纤维素、微晶纤维素；放入容器中搅拌均匀，再倒入按上述配比称量的鱼油、大豆油并混合均匀；(3)所得混合原料使用实验室小型制粒机进行制粒，粒径为0.8mm，制粒温度为85℃，使其糊化度达到90％以上；(4)将步骤(3)制粒后得到的湿颗粒饲料置于烘箱中70℃烘干后，使用密封袋分装后置于4℃冰箱中保存备用。
上述步骤制备好的高脂饲料直接投喂，每日2次，以20min内食完为宜。
225尾诸氏鲻虾虎鱼予普通饲料适应性饲喂5-8天后随机分为3组(每组3个重复，每个重复25尾)，其中：
对照组CK1，饲喂卤虫，分别于4周、6周、8周取样；
对照组CK2，饲喂实施例1的自配饲料，分别于4周、6周、8周取样；
事实上，实施例1的自配饲料就是正常的低脂饲料，一般情况下配合饲料提供的能量值高于生物饵料(活饵)。如果低脂条件下就可导致肝脏空泡化现象，那么高脂条件下此现象将更为显著。因此实施例2中将此饲料作为低脂对照组CK2进行对比。
高脂饲料模型组，饲喂高脂饲料I，分别于4周、6周、8周抽取检测。
将对照组CK1和CK2(即生物饵料卤虫投喂组和正常饲料组)与高脂饲料模型组进行对比实验。
诸氏鲻虾虎鱼严格按照相应的实验条件完成饲养后，剔除死亡个体计算该组整体的存活率，并抽取20尾鱼完成体重、体长等参数测量，计算增重率、肥满度等参数；随机抽取5尾/组鱼麻醉后取肝脏、胰腺组织进行H&E染色，做病理切片确定脂肪浸润情况；随机抽取3尾/组鱼麻醉后取肝脏、胰腺组织冰浴条件下碾磨，4℃3000～5000g/min离心15min，比色法测定蛋白酶、脂肪酶活性；通过综合评价打分的方法对构建模型进行合理评估。
实验结果：
一、将上述实施例中配合饲料的成品机械碾磨后混匀，称重150g取样。饲料样品中粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分的测定方法参照国标方法(GB 5009.3-2010、GB 5009.4-2010、GB 5009.5-2010和GB 5009.6-2003)进行；生物饵料的测定参考上述方法进行。结果见表1。
表1.饲料基本成分分析及粒径
| Diets | CK1(按湿重算) | CK2 | 高脂饲料I |
| 组成(实测值，％) | |||
| 粗蛋白crude protein | 6.89 | 41.20 | 42.41 |
| 粗脂肪crude lipid | 1.35 | 5.42 | 15.47 |
| 粗灰分ash | 1.72 | 11.63 | 13.96 |
| 水分mositure | 90.65 | 7.06 | 7.10 |
| 粗纤维crude fiber | --- | 0.64 | 0.58 |
| 钙calcium | 0.76 | 2.32 | 3.72 |
| 磷phosphorus | 0.7 | 2.01 | 2.79 |
| 饲料粒径feed particle size | --- | 0.8mm | 0.8mm |
表1结果显示：与对照组CK1和CK2饲料相比，高脂饲料I粗脂肪含量显著提高；由于对照组CK1为生物饵料，受环境影响因素较多(批次、产地、培养环境等均会影响其最终组成)，高脂饲料I的组成成分主要与低脂对照组CK2比较。高脂饲料I与CK2相比仅粗脂肪成分有显著提高，其他成分指标无显著差异。
本发明是在充分研究诸氏鲻虾虎鱼摄食、营养生理以及幼鱼期至成鱼期完整生长特性的基础上，开发的一种用于造模的配合饲料。其配方中的大量基本营养素能充分满足成年诸氏鲻虾虎鱼(＞120日龄，以120-200日龄为宜)的营养需求。本发明未采用任何添加剂、激素、中药成份，能最大程度避免原料对实验动物造成的影响，进而保证实验和检测的准确性。
二、对比实验结果
由于小型实验鱼的胰腺较小，取样难度较高，且常常与肝脏紧密联系在一起；此外胰腺脂肪浸润常常与脂肪肝的发生密切相关，因此，发明人选用不摘除胰腺的肝脏进行体重测量，作为评价的一个参考指标。
图9为本发明实施例2中各试验组肝脏(包括胰腺)重量变化。由图9可见，对照组CK1和CK2饲喂4-8周时，肝体比均无显著差异(p>0.05)。与对照组相比，4周短期高脂饲料饲喂亦无显著差异(p>0.05)；随着实验的进行，6周后(包括6周和8周)出现了极显著的差异(p<0.05)。
图10为本发明实施2中例各试验组胰腺H&E染色结果；其中st：steatosis，脂肪浸润。图9可见，本发明实施例2中，各试验组胰腺H&E染色结果显示：CK1和CK2组胰腺组织持续未见胰腺脂肪浸润现象发生，胰腺结构完整，且组织结构紧密；本发明实施例中高脂饲料组饲喂4周时与对照组无显著差异，饲喂6周时虽无大规模的胰腺脂肪浸润现象发生，但胰腺开始出现空泡化症状，8周时胰腺组织出现了严重的脂肪浸润现象，空泡化严重。
其他参数结果见表2和表3。
表2本发明实施例2中各试验组生长参数、肝脏(包括胰腺)AST、ALT变化以及胰蛋白酶、脂肪酶变化
注：存活率(％)＝终尾数/初尾数；增重率(％)＝(终体重-初体重)/初体重；肥满度(％)＝体重(g)/体长3(cm)；酶活的测定方法采用赖氏比色法；同一列上不同字母表示差异显著(P<0.05)。
由表2可见，对照组CK2和CK1除胰蛋白酶有差异(p<0.05)外，其他参数均无显著差异(p>0.05)。饲喂高脂饲料I 4周时，胰蛋白酶和脂肪酶较卤虫饲喂组已有显著差异(p<0.05)；饲喂6周时，增重率、肥满度、AST、ALT以及胰蛋白酶和脂肪酶活性均较对照组发生显著变化(p<0.05)，说明第6周时，诸氏鲻虾虎鱼消化组织酶活已发生较大改变，这与H&E染色观察到的结果相一致。
针对本发明实施例的实验结果，表3进行了综合评价，评分规则的制定重点增加了胰腺脂肪浸润抽检占比，酶活异常在评分中的权重，同时兼顾了鱼体存活和活力状况对动物模型的影响，最终得分综合考虑了多种因素的影响，取＞5分为合格。
表3本发明实施例2中各试验组建模综合结果评价
注：活动状况是指诸氏鲻虾虎鱼饥饿12h后，每分钟的活动次数；酶活评价指超出AST、ALT、Trypton和Lipase正常范围/与对照组有显著差异的指标个数；空泡化程度指胰管周围空泡化细胞所占面积的百分比；评分规程：存活率在80％-100％得1分，＜80％得0分；活动状况每分钟活动次数为0-5次得1分，＞5次得0分；肥满度标准为1.38，＞1.38得1分，＜1.38得0分；酶活指标共4个，AST、ALT、Trypsase和lipase，其正常的范围分别为：200～300UL-1、300～450U L-1、2500-4500U mg-1、0.19～0.3U mg-1，根据超出此范围的异常指标数，分别对应给2-4分，否则不得分；空泡化程度在5％～15％和15～60％范围内分别得3分和4分，空泡化程度超出此范围不得分；其中存活率是对所有个体整体统计结果来评分，活动状况、肥满度、酶活、空泡化程度为抽检诸氏鲻虾虎鱼群体中数尾样本结果评分后取平均值；评价诸氏鲻虾虎鱼模型的最终得分＝上述所有得分×空泡化鱼所占抽检比例，最终得分＞5分为合格，判定此群体的诸氏鲻虾虎鱼胰腺脂肪浸润模型构建成功。
由于诸氏鲻虾虎鱼为小型试验鱼，体重均不超过0.5g/尾，肝脏仅有0.01g/尾；活动状况、肥满度、酶活、空泡化程度等多个指标无法用单独个体表示，因此采取抽检诸氏鲻虾虎鱼群体中数尾样本结果的平均值来评分。抽检的数目可以根据统计学的原理来进行。而在确定胰腺脂肪浸润时，拿到切片结果就等于该鱼被杀死取样，所以酶活以及空泡化程度的抽检数目可以相应减少。
本发明实施例中，总共225尾诸氏鲻虾虎鱼分为3组，分别为对照CK1组、对照CK2组、高脂组，每组75尾鱼，且每组设置3个重复，每个重复25尾鱼。
以每个重复组为单位进行统计，具体如下:
a每组的每个重复有25尾鱼，除去死亡个体，一般实验结束后存活22-24尾左右，根据最终结果统计存活率，存活率＝最终存活尾数/25尾。
b取20尾鱼，分别统计每尾体重、体长等参数，然后根据初始体重，计算实验结束时每个重复组的肥满度。活动状况统计情况与肥满度相同。
c测量统计完后，20尾鱼放回，然后从总体(75尾)中抽取10尾，麻醉处理后解剖取肝脏和胰腺，其中5个肝脏混样磨碎后测酶活；另外5个肝脏福尔马林浸泡固定后用于切片检测空泡化程度。
目前来说，现有技术中暂时没有统一的构建脂肪浸润模型的评价方法，而公认的核心方法为病理切片结果观察。由于胰腺脂肪浸润往往伴有酶活等一系列生理生化指标，以及活动情况的改变，同时严重的脂肪浸润往往会造成死亡率直线上升，不利于后期实验应用，因此考虑综合评分可以更准确的筛选造模合格的个体。表3结果显示：根据评分规则饲喂高脂饲料8周时，符合明显可检测指标的胰腺脂肪浸润和NAFLD早期症状的个体比例达86.7％，可获得满意的建模效果，可用于相关实验。而6周时高脂饲喂组虽然脂肪浸润个体所占比例超过50％，但空泡化程度普遍较轻，饥饿条件下症状消失的几率较高，而综合评分有效避免了此现象。本发明所述评价方法的建立有利于指导本领域技术人员快速构建诸氏鲻虾虎鱼胰腺脂肪浸润动物模型。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (12)
1.一种动物模型，其特征在于，所述动物模型是利用诸氏鲻虾虎鱼构建得到的。
2.根据权利要求1所述的动物模型，其特征在于：所述诸氏鲻虾虎鱼选自封闭群个体。
3.根据权利要求1所述的动物模型，其特征在于：所述诸氏鲻虾虎鱼选用≥120日龄的诸氏鲻虾虎鱼。
4.根据权利要求1所述的动物模型，其特征在于：所述诸氏鲻虾虎鱼选用雄鱼。
5.根据权利要求1-4任一项所述的动物模型，其特征在于：构建动物模型时所用的方法为本领域技术人员公知的方法。
6.一种胰腺脂肪浸润动物模型，其特征在于，所述动物模型是利用高脂饲料饲喂诸氏鲻虾虎鱼构建得到的。
7.根据权利要求6所述的动物模型，其特征在于：所述诸氏鲻虾虎鱼选自封闭群个体。
8.根据权利要求6所述的动物模型，其特征在于：所述诸氏鲻虾虎鱼选用≥120日龄的诸氏鲻虾虎鱼。
9.根据权利要求6所述的动物模型，其特征在于：所述诸氏鲻虾虎鱼选用雄鱼。
10.根据权利要求6-9任一项所述的动物模型，其特征在于：所述高脂饲料中粗蛋白为38％-50％，粗脂肪为5％-25％，水分＜10％，粗纤维≤5％，按重量百分比计。
11.一种构建胰腺脂肪浸润诸氏鲻虾虎鱼模型的高脂饲料，请特征在于：所述饲料由以下重量份数的组分组成：白鱼粉40-75g，豆粕5-20g，鱼油0-20g，大豆油0-20g，土豆淀粉10-30g，羧甲基纤维素1-3g，微晶纤维素1-3g，以及适量的矿物盐预混料和维生素预混料。
12.一种胰腺脂肪浸润诸氏鲻虾虎鱼模型的评价方法，其特征在于：所述评价方法包括5个指标的评价，所述指标分别为诸氏鲻虾虎鱼的存活率、活动状况、肥满度、酶活评价以及空泡化程度；其中活动状况是指诸氏鲻虾虎鱼饥饿12h后，每分钟的活动次数；酶活评价指超出AST、ALT、Trypton和Lipase正常范围/与对照组有显著差异的指标个数；空泡化程度指胰管周围空泡化细胞所占面积的百分比；评分规程：存活率在80％-100％得1分，＜80％得0分；活动状况每分钟活动次数为0-5次得1分，＞5次得0分；肥满度标准为1.38，＞1.38得1分，＜1.38得0分；酶活指标共4个，AST、ALT、Trypsase和lipase，其正常的范围分别为：200～300U L-1、300～450U L-1、2500-4500U mg-1、0.19～0.3U mg-1，根据超出此范围的异常指标数，分别对应给2-4分，否则不得分；空泡化程度在5％～15％和15～60％范围内分别得3分和4分，空泡化程度超出此范围不得分；其中存活率是对所有个体整体统计结果来评分，活动状况、肥满度、酶活、空泡化程度为抽检诸氏鲻虾虎鱼群体中数尾样本结果评分后取平均值；评价诸氏鲻虾虎鱼模型的最终得分＝上述所有得分×空泡化鱼所占抽检比例，最终得分＞5分为合格，判定此群体的诸氏鲻虾虎鱼胰腺脂肪浸润模型构建成功。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111647639A (zh) * | 2020-06-28 | 2020-09-11 | 广东省实验动物监测所 | 一种基于实验鱼胚胎和基因表达快速筛选脂代谢药物的方法 |
| CN111763744A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-10-13 | 广东省实验动物监测所 | 一种鉴别虾虎鱼性别的方法 |
| CN113080338A (zh) * | 2021-04-29 | 2021-07-09 | 中国水产科学研究院南海水产研究所 | 一种加州鲈脂肪肝模型及其构建方法和应用 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102017911A (zh) * | 2010-08-31 | 2011-04-20 | 华南理工大学 | 一种节能减排的大菱鲆育苗方法 |
| CN102027886A (zh) * | 2011-01-05 | 2011-04-27 | 苏州大学 | 一种草鱼脂肪性肝病实验模型建立方法 |
| DE202010016061U1 (de) * | 2010-12-01 | 2012-03-02 | Meggle Aktiengesellschaft | Fettreduziertes Milchfett-haltiges Streichfett |
| CN102805047A (zh) * | 2012-08-15 | 2012-12-05 | 苏州硒谷科技有限公司 | 一种富硒饲料及富硒鲍鱼的培育方法 |
| CN104663551A (zh) * | 2015-03-20 | 2015-06-03 | 湖北省水产科学研究所 | 一种草鱼种的培育方法 |
| CN106135752A (zh) * | 2016-07-06 | 2016-11-23 | 广东省实验动物监测所 | 一种诸氏鲻虾虎鱼生长配合饲料及其制备方法 |
| CN106386591A (zh) * | 2016-04-29 | 2017-02-15 | 四川农业大学 | 一种芥酸诱导鱼肠炎模型的建立方法 |
| US20170231174A1 (en) * | 2011-10-24 | 2017-08-17 | Trent Jones | Sustainable Aquaponic System and Method for Growing Useful Plants and for Treating Gray Water |
| CN107460240A (zh) * | 2017-08-03 | 2017-12-12 | 广东省实验动物监测所 | 一种利用基因表达变化快速检测海水或海洋沉积物中多环芳烃的方法 |
-
2018
- 2018-08-07 CN CN201810888790.XA patent/CN109247270B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102017911A (zh) * | 2010-08-31 | 2011-04-20 | 华南理工大学 | 一种节能减排的大菱鲆育苗方法 |
| DE202010016061U1 (de) * | 2010-12-01 | 2012-03-02 | Meggle Aktiengesellschaft | Fettreduziertes Milchfett-haltiges Streichfett |
| CN102027886A (zh) * | 2011-01-05 | 2011-04-27 | 苏州大学 | 一种草鱼脂肪性肝病实验模型建立方法 |
| US20170231174A1 (en) * | 2011-10-24 | 2017-08-17 | Trent Jones | Sustainable Aquaponic System and Method for Growing Useful Plants and for Treating Gray Water |
| CN102805047A (zh) * | 2012-08-15 | 2012-12-05 | 苏州硒谷科技有限公司 | 一种富硒饲料及富硒鲍鱼的培育方法 |
| CN104663551A (zh) * | 2015-03-20 | 2015-06-03 | 湖北省水产科学研究所 | 一种草鱼种的培育方法 |
| CN106386591A (zh) * | 2016-04-29 | 2017-02-15 | 四川农业大学 | 一种芥酸诱导鱼肠炎模型的建立方法 |
| CN106135752A (zh) * | 2016-07-06 | 2016-11-23 | 广东省实验动物监测所 | 一种诸氏鲻虾虎鱼生长配合饲料及其制备方法 |
| CN107460240A (zh) * | 2017-08-03 | 2017-12-12 | 广东省实验动物监测所 | 一种利用基因表达变化快速检测海水或海洋沉积物中多环芳烃的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| KATSUYA IWATA 等: ""functional ureogenesis in the gobiid fish,mugilogobius abei"", 《JOURNAL OF EXPERIMENTAL BIOLOGY》 * |
| 郑新春 等: ""过度喂养建立斑马鱼幼鱼肥胖模型"", 《南方医科大学学报》 * |
| 魏远征 等: ""不同饲料对诸氏鲻虾虎鱼生长和利用效果的影响"", 《中国比较医学杂志》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111763744A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-10-13 | 广东省实验动物监测所 | 一种鉴别虾虎鱼性别的方法 |
| CN111763744B (zh) * | 2020-06-24 | 2023-01-31 | 广东省实验动物监测所 | 一种鉴别虾虎鱼性别的方法 |
| CN111647639A (zh) * | 2020-06-28 | 2020-09-11 | 广东省实验动物监测所 | 一种基于实验鱼胚胎和基因表达快速筛选脂代谢药物的方法 |
| CN111647639B (zh) * | 2020-06-28 | 2023-12-05 | 广东省实验动物监测所 | 一种基于实验鱼胚胎和基因表达快速筛选脂代谢药物的方法 |
| CN113080338A (zh) * | 2021-04-29 | 2021-07-09 | 中国水产科学研究院南海水产研究所 | 一种加州鲈脂肪肝模型及其构建方法和应用 |
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Legal Events
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