CN109212186B - 一步法胃蛋白酶原ⅱ快速检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,包含检测试剂盒壳体(2)、取样管(4)、过滤管(5)和检测试纸(6),取样管(4)可插入检测试剂盒壳体(2),取样管(4)与检测试剂盒壳体(2)活动连接,取样管(4)插入检测试剂盒壳体(2)时所述检测试剂盒壳体(2)内自上至下依次为取样管(4)、过滤管(5)和检测试纸(6)。检测过程方便快捷,无需专门操作平台或者专业检测人员即可完成样本的处理。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域,特别涉及胃蛋白酶原Ⅱ检测。
背景技术
胃癌是常见一种恶性肿瘤,其病患者的发病率和病死率呈逐年上升的发展趋势。胃蛋白酶原(PG)是由胃内合成的一种胃蛋白酶前体,主要分为胃蛋白酶原I(PGⅠ)及胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)两种亚群。PGⅠ主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌;PGⅡ除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外,贲门腺和胃窦幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能分泌。PG主要贮存在主细胞顶部,细胞受刺激后大部分PG通过胞吐作用进入腺腔,约有1%进入血液循环,并可在血液中稳定存在,所以,血清PGⅠ、Ⅱ不仅可以反映胃黏膜腺体和细胞的数量,而且可以反映胃黏膜各个部位的分泌功能。当胃黏膜出现病变,血清胃蛋白酶原含量会随之改变。研究发现,血清胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)可作为胃癌和癌前病变高危人群的早期血清筛查指标。
胃癌诊断主要依靠胃镜及病理检查,早期血清学筛查尚未在临床普及。血清PG检测是一种非介入性、简便、快速、便于动态监测、重复性好的检查方法。临床上通常联合考察血清PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ比值(PGR)3个指标,能够很好地了解胃黏膜的分泌功能及病变状态,将胃部有疾病的患者筛查出来,再通过胃镜、病理做进一步的确诊。目前常用的血清PGⅡ检测方法,如乳胶增强比浊分析、化学发光分析、酶联免疫分析和时间分辨荧光分析,或需配备大型仪器,对场地、设备要求高,检测成本贵;或自动化程度不高,操作繁杂,反应时间长,操作人员专业要求高。
发明内容
为了解决上述问题,本发明提供了一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,该试剂盒可以方便样本的检查前处理,取样后直接,样本直接插入本发明的一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒中即可完成样本的处理。处理一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒可以整体插入设有适配结构的检测仪器(CM荧光检测仪)中或者取下检测试纸插入现有检测仪器(例如微测生物科技的系列荧光免疫分析仪)中完成检测,检测过程方便快捷,无需专门操作平台或者专业检测人员即可完成样本的处理。
根据本发明的一个方面,在一些实施方式中,提供一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,包含检测试剂盒壳体、取样管、过滤管和检测试纸,取样管可插入检测试剂盒壳体,取样管与检测试剂盒壳体活动连接,取样管插入检测试剂盒壳体时所述检测试剂盒壳体内自上至下依次为取样管、过滤管和检测试纸。检测试纸为胃蛋白酶原Ⅱ检测试纸条,所述检测试纸包含荧光标记物结合垫、T线和C线,荧光标记物结合垫含量子点标记鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体A,T线含有包被鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体B,C线含有包被羊抗鼠多克隆抗体。本发明的取样管取样后直接插入检测试剂盒壳体内完成样本处理,处理完的样本直接滴到检测试纸上,可以使之用于光学检测。
根据本发明的一个方面,在一些实施方式中,提供一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,检测试剂盒壳体顶面设有与所述取样管配合的进样孔,检测试剂盒壳体内设有用于稳固所述取样管的第一固定装置,检测试剂盒壳体内设有用于固定所述过滤管的第二固定装置,第一固定装置位于所述第二固定装置上方。
根据本发明的一个方面,在一些实施方式中,提供一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,取样管包含腔管和毛细管,所述毛细管位于腔管底部。细管是吸取固定体积液体,本发明一些实施例中取样管的毛细管吸取血液样品10μL。
根据本发明的一个方面,在一些实施方式中,提供一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,第一固定装置上设有储液池,储液池朝内一侧为斜面,斜面有开孔并塑封有膜例如锡纸膜,储液池与第一固定装置滑动连接,储液池通过弹簧与检测试剂盒壳体连接,腔管侧壁设有穿刺杆,穿刺杆可以是一根或多根,腔管设有进液开孔,穿刺杆正对进液开孔,腔管外边设有导向柱,进样孔旁设有与导向柱配合的导向通孔,由于可以固定取样管插入的位置使储液池顺利插入取样管。取样后取样管插入进样孔后弹簧压缩直至进液开孔处储液池刺入腔管内,穿刺杆刺破储液池,储液池内液体向下流动,对毛细管中的血液样本进行冲洗。
根据本发明的一个方面,在一些实施方式中,提供一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,储液池内为血液稀释液,血液稀释液为100μL的10mM PBS(PH 7.4)、0.02%NaN3。血液稀释液:稀释样品使待测物质浓度在试剂盒检测范围内。
根据本发明的一个方面,在一些实施方式中,提供一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,过滤管为上下开口结构,所述过滤管中部设有玻璃纤维膜。在取样装置是取样管取样血液时,过滤管中的玻璃纤维膜为经抗红细胞抗体处理后的,可吸附血样中的红细胞;或过滤管中的玻璃纤维膜处为全血滤血膜,起到过滤红细胞的作用。经由储液池内液体冲洗后的样本液体可以通过玻璃纤维膜,可以实现间接混匀样本液体的目的。
根据本发明的一个方面,在一些实施方式中,提供一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,检测试剂盒壳体一侧外壁设有检测孔,检测试剂盒壳体外壁还设有条形码或二维码,用以识别检测的试剂盒类别。本发明的检测试剂盒可以整体放入检测仪器中检测,仅需稍加改造现有检测仪器即可建造方案可以式在原有检测仪器上开出一个适配检测试剂盒的腔体,检测头在位于适配检测孔处伸出即可。
根据本发明的一个方面,在一些实施方式中,提供一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,检测试纸还设有托板,检测试纸和托板构成检测板。
根据本发明的一个方面,在一些实施方式中,提供一种一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,检测试纸(检测板)使用卡扣与检测试剂盒壳体连接、检测试纸可从检测试剂盒壳体上拆下。拆下后可以直接插入现有检测仪器中完成检测。
在一些实施例中,本发明的检测试剂盒可以整体放入适配本发明检测试剂盒的检测仪器中检测,仅需稍加改造现有检测仪器(适配本发明试剂盒的检测仪器主体),即在原有检测仪器上开出一个适配检测试剂盒的腔体(适配装置),检测头在位于试剂盒检测孔处伸出即可。
本发明的整体思路是将检测前的样本处理在一个试剂盒中一步完成处理,并且处理试剂盒可以整体放入改造后的检测仪器中或者取下检测试纸直接用现有检测仪器检测。
本发明提供的试剂盒还是一体式检测试剂盒具有能同时满足快速、灵敏、经济、定量、操作简单的血清PGⅡ检测要求。一体式检测试剂盒(检测装置):定量取样管获取样品直接插入检测装置加样孔,检测装置置入配套检测仪即可,5~10分钟后检测仪自动检测,获得检测项目结果。
附图说明
图1是本发明中检测试剂盒的结构示意图;
图2是本发明中检测试剂盒的顶部结构示意图;
图3是本发明中试纸的结构示意图;
图4是本发明中取样管结构示意图;
图5是本发明中检测试剂盒的外部结构示意图;
图6是适配本发明的检测试剂盒的检测仪器中适配装置腔体结构示意图;
图7是本发明中带有适配本发明检测试剂盒腔体的检测仪器外部示意图;
图8是本发明一实施例检测结果分析图。
具体实施方式
为了便于理解,以下将通过具体的附图、实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是,这些描述仅仅是示例性的描述,并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述,本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见的。另外,本发明引用了公开文献,这些文献是为了更清楚地描述本发明,它们的全文内容均纳入本文进行参考,就好像它们的全文已经在本文中重复叙述过一样。
实施例1
如图1~5所示,本发明的一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,包含检测试剂盒壳体2、取样管4、过滤管5和检测试纸6,取样管4可插入检测试剂盒壳体2,取样管4与检测试剂盒壳体2活动连接,取样管4插入检测试剂盒壳体2时检测试剂盒壳体2内自上至下依次为取样管4、过滤管5和检测试纸6。检测试纸6为胃蛋白酶原Ⅱ检测试纸条,所述检测试纸6包含荧光标记物结合垫、T线和C线,荧光标记物结合垫含量子点标记鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体A,T线含有包被鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体B,C线含有包被羊抗鼠多克隆抗体,以上抗体来源为珠海博美生物科技有限公司。本发明的取样管取样后直接插入检测试剂盒壳体内完成样本处理,处理完的样本直接滴到检测试纸上,可以之际用于光学检测。检测试剂盒壳体2顶面设有与所述取样管4配合的进样孔10,检测试剂盒壳体2内设有用于稳固所述取样管4的第一固定装置11,检测试剂盒壳体2内设有用于固定所述过滤管5的第二固定装置12,第一固定装置11位于第二固定装置12上方。取样管4包含腔管401和毛细管402,毛细管402位于腔管401底部。毛细管是吸取固定体积液体,取样管的毛细管吸取血液样品10μL。第一固定装置11上设有储液池405,储液池405朝内一侧为斜面,斜面有开孔并塑封有锡纸膜,储液池405与第一固定装置11滑动连接,储液池405通过弹簧4051与检测试剂盒壳体2连接,腔管401侧壁设有穿刺杆406,穿刺杆406可以是一根或多根,腔管401设有进液开孔4052,穿刺杆406正对进液开孔4052,腔管401外边设有导向柱407,进样孔10旁设有与导向柱407配合的导向通孔408,由于可以固定取样管4插入的位置使储液池405顺利插入取样管4。取样后取样管4插入进样孔10后弹簧4051压缩直至进液开孔4052处储液池405刺入腔管401内,穿刺杆406刺破储液池405,储液池405内液体向下流动,对毛细管中的血液样本进行冲洗。
储液池405内为血液稀释液,血液稀释液为100μL的10mM PBS(PH 7.4)、0.02%NaN3。过滤管5为上下开口结构,过滤管5中部设有玻璃纤维膜13。在取样装置是取样管取样血液时,过滤管中的玻璃纤维膜为经抗红细胞抗体处理后的,可吸附血样中的红细胞;或过滤管中的玻璃纤维膜处为全血滤血膜,起到过滤红细胞的作用,根据检测需要选用。经由储液池内液体冲洗后的样本液体可以通过玻璃纤维膜,可以实现间接混匀样本液体的目的。检测试纸6还设有托板601。
检测试纸6使用卡扣与检测试剂盒壳体2连接、检测试纸6可从检测试剂盒壳体2上拆下。拆下后可以直接插入现有检测仪器中完成检测。
进样孔10和检测孔7在试剂检测装置未启用有锡纸塑封。主要保持内部干燥和不被污染。
检测试纸6和有托板601构成检测板
实施例2.
在实施例1的基础上本发明的一步法胃蛋白酶原Ⅰ快速检测试剂盒,检测试剂盒壳体2一侧外壁设有检测孔7,所述检测试剂盒壳体2外壁还设有条形码或二维码14。本发明的检测试剂盒可以整体放入适配的检测仪器1(如图7所示)中检测,本发明适配的检测仪器仅需改造现有检测仪器即可获得(例如以系列荧光免疫分析仪为基础),改造方案可以是在原有检测仪器上开出一个适配检测试剂盒的适配结构3如图6所示,适配结构3上设有条形码或二维码检测装置15,检测头701在位于适配检测孔7出伸出即可(如图6所示),检测时检测头701插入检测试剂盒内进行光学检测。
实施例3
1.取样管(4)取血液样品10μl,取样管(4)定量10μl.
2.从进样孔10处插入,储液池405的塑封锡纸被刺破后,液体流出,稀释毛细管402中的血液样品,随之样品进入过滤管5。
3.样品经过滤管中玻璃纤维膜13的过滤和间接混匀滴入检测板的样品孔中。
4.当血液中含有胃蛋白酶原Ⅱ,其余荧光标记物结合垫中量子点标记鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体A进行抗原抗体特异性识别作用,形成胃蛋白酶原Ⅱ-量子点标记鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体A结合物,该结合物随着膜的毛细管作用迁移到检测区,与膜上的鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体B起反应,形成鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体B-胃蛋白酶原Ⅱ-量子点标记鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体A结合物,该结合物在紫外激发光的作用下发光,形成发光条带。无论样品中是否存在胃蛋白酶原Ⅱ,当液面继续迁移至固定羊抗鼠多克隆抗体区带时,控制线(C线)区必定会在紫外激发光下出现一条发光条带。控制线(C线)区发光条带同时作为试剂的内控标准,有助于判定样本量是否足够或层析过程是否正常。
5.到达预置检测时间(约5~10分钟),检测仪依据内置标准曲线对读取的检测线(T线)区发光强度转换成样品中所含胃蛋白酶原Ⅱ量。
胃蛋白酶原Ⅱ检测
用本发明的取样检测试剂盒与商用检测试剂盒对30份血液样品进行检测胃蛋白酶原Ⅱ快速定量检测。
商用检测试剂盒:按照试剂盒说明书进行取制样、加样并进行读取检测样本操作。
所得数据如下:
对两种试剂盒的测定结果作Bland-Altman一致性分析,如图8所示。
通过统计两种试剂盒对相同样本检测结果的差值,并描绘其随浓度变化的分布情况,用于评价两者的一致性水平。以95%置信区间设置一致性界限(Mean±1.96SD),当95%以上的数值位于正负一致性界限范围内,表明两组数据的一致性良好;中值参考线越接近Y轴零值,一致性水平越高。
图8中显示30例样本中,两测量结果的差异均位于95%一致性界限内,表明本发明检测试剂盒与商用检测试剂盒测定结果的一致性较高;
结合P=0.5957,按α=0.05水准,可认为两种试剂盒测量的测量值的差异无统计学意义。可认为两种试剂盒测量胃蛋白酶原Ⅱ的结果是等价的,可以相互替换。
Claims (6)
1.一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,其特征在于,包含检测试剂盒壳体(2)、取样管(4)、过滤管(5)和检测试纸(6),所述取样管(4)可插入检测试剂盒壳体(2),所述取样管(4)与检测试剂盒壳体(2)活动连接;所述取样管(4)插入检测试剂盒壳体(2)时所述检测试剂盒壳体(2)内自上至下依次为取样管(4)、过滤管(5)和检测试纸(6);所述检测试纸(6)为胃蛋白酶原Ⅱ检测试纸条,所述检测试纸(6)包含荧光标记物结合垫、T线和C线,所述荧光标记物结合垫含量子点标记鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体A,T线含有包被鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体B,C线含有包被羊抗鼠多克隆抗体;所述检测试剂盒壳体(2)顶面设有与所述取样管(4)配合的进样孔(10),所述检测试剂盒壳体(2)内设有用于稳固所述取样管(4)的第一固定装置(11),所述检测试剂盒壳体(2)内设有用于固定所述过滤管(5)的第二固定装置(12),所述第一固定装置(11)位于所述第二固定装置(12)上方;所述取样管(4)包含腔管(401)和毛细管(402),所述毛细管(402)位于腔管(401)底部;所述第一固定装置(11)上设有储液池(405),所述储液池(405)与第一固定装置(11)滑动连接,所述储液池(405)通过弹簧(4051)与检测试剂盒壳体(2)连接,所述腔管(401)侧壁设有穿刺杆(406),所述腔管(401)设有进液开孔(4052),所述穿刺杆(406)正对进液开孔(4052),所述腔管(401)外边设有导向柱(407),所述进样孔(10)旁设有与导向柱(407)配合的导向通孔(408)。
2.根据权利要求1所述的一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,其特征在于,所述储液池(405)内装有血液稀释液组成,所述血液稀释液为100μL的10mM PBS(PH 7.4)、 0.02%NaN3。
3.根据权利要求2所述的一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,其特征在于,所述过滤管(5)为上下开口结构,所述过滤管(5)中部设有玻璃纤维膜(13),所述玻璃纤维膜(13)为经抗红细胞抗体处理后的或玻璃纤维膜处为全血滤血膜。
4.根据权利要求3所述的一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,所述检测试剂盒壳体(2)一侧外壁设有检测孔(7),所述检测试剂盒壳体(2)外壁还设有条形码或二维码(14)。
5.根据权利要求4所述的一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,所述检测试纸(6)还设有托板(601)。
6.根据权利要求5所述的一步法胃蛋白酶原Ⅱ快速检测试剂盒,所述检测试纸(6)使用卡扣与检测试剂盒壳体(2)连接、所述检测试纸(6)可从检测试剂盒壳体(2)上拆下。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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