CN109182533A - IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点的应用 - Google Patents

IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点的应用，属于细胞工程和基因工程技术领域。本发明以IGF1基因为研究对象，将不同基因型的(CA)n、Poly T和(CA)n‑Tn分别与长白猪的生长性状进行关联分析，最后获得对长白猪生长性状促进作用最大的基因型。本发明设计周详，结果可靠。为证实Poly T位点和(CA)n微卫星位点与长白猪生长性状之间的联系，本发明从多层次、多角度验证，在转录活性水平、细胞水平上进行验证，最后在个体中验证。本发明通过找到IGF1基因启动子区多态性位点(CA)n和Poly T对长白猪生长的促进作用的应用，对于研究IGF1基因对猪生长的影响具有重要应用价值。

Description

IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点的应用
技术领域
本发明属于细胞工程和基因工程技术领域，具体涉及一种IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点在影响猪生长性状中的应用。
背景技术
胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor 1，IGF1)又称生长介素C，是胰岛素样生长因子(Insulin-like growth factors，IGFs)系统的成员之一。IGF1在动物生长过程中发挥着重要作用，它能够介导生长激素(growth hormone，GH)发挥促生长作用，也能够调节哺乳动物卵巢颗粒细胞的增殖与分化等。
动物体内大部分的IGF1来自肝脏。血液中的GH被肝脏细胞表面的受体识别并结合，从而使肝脏细胞分泌IGF1，IGF1与血液中的IGF结合蛋白结合，并随血液运送到各靶细胞中起作用。除内分泌外，IGF1也可以通过旁分泌和/或自分泌的形式释放，并作用于靶细胞。研究发现，哺乳动物几乎所有组织均能分泌IGF1，如此广泛分泌的IGF1功能也很多，它既能调节机体代谢，促进细胞增殖、分化，也能调节机体的生殖和免疫，也能抗衰老、营养神经等。
研究表明，IGF1是机体内细胞增殖、分化和代谢的主要调节剂。因此IGF1最主要的作用是促生长作用，而促生长作用主要表现为促进细胞的增殖与分化，调节细胞有丝分裂过程等。IGF1的促生长作用主要是通过激活RNA聚合酶，促进RNA和DNA的合成，从而促进细胞的增殖和分化。
以前的研究发现猪的IGF1基因存在丰富的多态性，而且它们与猪的多个经济性状相关。学者在探索家兔IGF1基因的多态性时发现，在家兔IGF1基因的第三外显子上检测到了T365C位点存在着三种基因型，分别为TT、TC和CC，与家兔生长性状进行关联分析发现，IGF1可能是影响家兔生长性状的主效基因或与主效基因连锁。研究表明皖南黄兔IGF1基因内含子1中存在三个多态性位点，即3056G>A、3107T>C和3164G>A，且这三个位点均处于顺式作用元件位置，表明它们有可能会影响IGF1基因的转录表达。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点在影响猪生长性状中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点-Poly T位点((CA)n-Tn)的应用。
在IGF1基因靠近转录起始位点的上游区域发现了两个多态性位点，分别是Poly T位点和(CA)n微卫星位点，因此推测这两个多态性位点可能对IGF1基因的转录产生影响。
通过SSR荧光标记检测技术对(CA)n微卫星位点和Poly T位点进行基因分型；进而构建(CA)n-Tn不同单倍型双荧光素酶报告载体，探究不同(CA)n-Tn单倍型对IGF1基因转录活性的影响；最后将两个多态性位点与长白猪的生长性状进行关联分析。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
本发明提供一种IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点在影响猪生长性状中的应用，其中，所述的(CA)n微卫星位点为(CA)17/(CA)19或(CA)19/(CA)19；
优选的，所述的猪品种为长白猪；
优选的，所述的影响猪生长性状体现在体长、达115kg背膘厚和眼肌面积上的提高。
本发明提供一种IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点-Poly T位点((CA)n-Tn)在促进IGF1基因表达中的应用。进一步的，在猪成肌细胞中促进IGF1基因表达中的应用。其中，所述的(CA)n微卫星位点-Poly T位点((CA)n-Tn)为(CA)17/(CA)19-11T/11T或(CA)19/(CA)19-11T/11T。
具体的，所述的IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点-Poly T位点((CA)n-Tn)在影响猪生长性状中的应用。
优选的，所述的猪品种为长白猪；
优选的，所述的影响猪生长性状体现在体长、达115kg背膘厚和眼肌面积上的提高。
本发明的验证结果如下：
1、通过SSR荧光标记检测共发现猪IGF1基因启动子区存在10T、11T和12T三种等位基因；共有四种基因型，分别为10T/11T、11T/11T、11T/12T和12T/12T。
2、通过SSR荧光标记检测发现，IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点存在17CA、18CA、19CA和20CA四种等位基因；共发现十种基因型，分别为(CA)17/(CA)17，(CA)17/(CA)18，(CA)17/(CA)19，(CA)17/(CA)20，(CA)18/(CA)18，(CA)18/(CA)19，(CA)18/(CA)20，(CA)19/(CA)19，(CA)19/(CA)20，(CA)20/(CA)20。
3、将IGF1基因不同单倍型(CA)n-Tn重组质粒和pGL-TK内参质粒依次共转染到猪成肌细胞。多功能酶标仪测量萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶具体数值，计算其对应比值，即为各重组质粒活性。IGF1基因5′调控区不同单倍型(CA)n-Tn的转录活性值如图3所示。由图3结果可知，(CA)17-11T、(CA)18-11T、(CA)19-11T和(CA)20-11T这四个单倍型的转录活性与对照pGL3-Basic转录活性差异显著；单倍型(CA)17-11T、(CA)18-11T和(CA)19-11T的转录活性呈依次增加的趋势，且单倍型(CA)19-11T的转录活性最高，显著高于单倍型(CA)17-11T(p<0.05)；单倍型(CA)20-11T的转录活性明显减少，但与单倍型(CA)19-11T的转录活性差异不显著(p>0.05)。综上，单倍型(CA)19-11T对IGF1基因的转录有最大的促进作用。
4、由表1可知，不同基因型Poly T位点与长白猪生长性状进行关联分析结果表明，基因型11T/11T与11T/12T差异不显著(p>0.05)，但基因型11T/11T在体长、达115kg体重日龄、达115kg背膘厚和眼肌面积均优于11T/12T基因型个体的相应的性状。
5、由表2可知，长白猪达115kg体重日龄在IGF1基因(CA)n微卫星位点各基因型间均差异不显著(p>0.05)，而在体长、达115kg背膘厚和眼肌面积各基因型间均差异显著(p<0.05)，(CA)n微卫星位点影响长白猪生长性状的优势基因型为(CA)17/(CA)19和(CA)19/(CA)19。
6、由表3可知，将不同基因型组合(CA)n-Tn与长白猪生长性状进行关联分析结果表明，达115kg体重日龄性状在不同基因型组合(CA)n-Tn中均差异不显著(p>0.05)，而在体长、达115kg背膘厚和眼肌面积各基因型间均差异显著(p<0.05)，影响长白猪生长性状的优势基因型组合为(CA)17/(CA)19-11T/11T和(CA)19/(CA)19-11T/11T。
本发明以IGF1基因(Gene ID：397491)为研究对象，采用了分子和细胞生物学方法研究其在猪成肌细胞中的应用，并运用SAS软件对不同基因型的(CA)n微卫星位点和Poly T位点进行关联分析。关键点和欲保护点：(1)Poly T位点的基因分型结果；(2)(CA)n微卫星位点的基因分型结果；(3)不同单倍型(CA)n-Tn对IGF1基因转录的影响。(4)Poly T位点与长白猪生长性状进行关联分析结果；(5)(CA)n微卫星位点与长白猪生长性状进行关联分析结果；(6)不同基因型组合(CA)n-Tn与长白猪生长性状进行关联分析结果。
本发明第一次证实不同单倍型(CA)n-Tn对猪IGF1基因转录调控的影响；并探索了这两个多态性位点与长白猪生长性状之间的关系。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明以IGF1基因为研究对象，通过SSR荧光标记检测技术，对多态性位点(CA)n和Poly T进行基因分型。随后构建猪IGF1基因启动子区不同微卫星单倍型(CA)n-Tn双荧光素酶报告基因重组质粒，并检测其在猪成肌细胞的转录活性，从而找到对IGF1基因转录活性影响最大的(CA)n-Tn微卫星单倍型。再整理长白猪生长性状数据，将不同基因型的(CA)n、Poly T和(CA)n-Tn分别与长白猪的生长性状进行关联分析，以分别找到(CA)n、PolyT和(CA)n-Tn中哪些基因型对长白猪的生长具有最大的促进作用。最后将单倍型活性分析结果与三个关联分析结果整合起来进行分析，从而获得对长白猪生长性状促进作用最大的基因型。本发明通过找到IGF1基因启动子区多态性位点(CA)n和Poly T对长白猪生长的促进作用的应用，对于研究IGF1基因对猪生长的影响具有重要应用价值。
(2)本发明技术方案设计周详，结果可靠。为证实Poly T位点和(CA)n微卫星位点与长白猪生长性状之间的联系，本发明从多层次、多角度验证，在转录活性水平、细胞水平上进行验证，最后在个体中验证。
附图说明
图1是Poly T位点SSR荧光标记检测结果；其中，a：10T/11T，b：11T/11T，c：11T/12T，d：12T/12T。
图2是(CA)n微卫星位点SSR荧光标记检测结果。
图3是IGF1基因启动子区不同微卫星单倍型转录活性分析。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均为从商业途径得到的试剂和材料。
实施例中所用的长白猪尾巴样采集来自广东温氏某猪场。
实施例1对Poly T位点和(CA)n微卫星位点进行SSR荧光标记检测
(1)利用Primer5设计引物，以抽提的长白猪的猪尾巴DNA为模板，以FAM-Poly TForward/Reverse、HEX-(CA)n Forward/Reverse为引物分别扩增含Poly T位点或(CA)n微卫星位点的DNA目的片段，扩增的片段经纯化回收，分别命名为FAM-Poly T、HEX-(CA)n。
(2)在96孔板的每个孔中加入1μL稀释纯化后的PCR扩增产物，9μL甲酰胺和0.18μL的LIZ 500分子量内标，混合均匀后3000r/min离心1min；然后95℃变性10min，在放置于冰上迅速降温10min。变性后，在ABI 3730测序仪上样进行毛细管电泳，用Data Colletion软件收集数据，再用其他软件进行数据分析。
本发明所用到的扩增含Poly T位点的目的片段引物：
FAM-Poly T Forward：5′-FAM-CCCAGCACTGTCTTCCAATCTA-3′；
Reverse：5′-CCTCTTCTGGCAAAGTTATCGA-3′；
本发明所用到的扩增含(CA)n微卫星位点的目的片段引物：
HEX-(CA)n Forward：5′-HEX-GACATCATAACCCTTGAGAG-3′；
Reverse：5′-CAAAGATTCTGCTGAGCTGT-3′。
注：FAM：5-羧基荧光素，呈现蓝色；HEX：六绿荧光素，呈现绿色。
实施例2构建IGF1基因启动子区不同微卫星单倍体报告基因重组载体
(1)利用Primer5设计引物，以抽提的长白猪的猪尾巴DNA为模板扩增IGF1基因的不同微卫星单倍体DNA目的片段；扩增的片段经纯化回收、连接pMD18T载体、转化、筛选、测序鉴定正确后抽提普通质粒，分别命名为(CA)17-11T，(CA)18-11T，(CA)19-11T，(CA)20-11T。
(2)BioEdit软件分析发现DNA目的片段序列无Kpn I和Xho I两种限制性内切酶酶切位点，而pGL3-basic Vector(常规市售)存在Kpn I和Xho I酶切位点。Primer5设计5对IGF1基因启动子区不同单倍型目的片段引物，其上下游引物分别加上Kpn I和Xho I酶切位点序列。分别以(CA)17-11T，(CA)18-11T，(CA)19-11T，(CA)20-11T普通质粒为模板，PCR扩增；同样将各片段经纯化回收、双酶切、连接pGL3-basic载体、转化、筛选、测序鉴定正确后抽提无内毒素质粒，分别命名为P1((CA)17-11T)、P2((CA)18-11T)、P3((CA)19-11T)和P4((CA)20-11T)。
本发明所用到的不同单倍型引物均为：
注：下划线为保护碱基，斜体灰色部分为酶切位点。
实施例3猪成肌细胞的培养和转染
(1)猪成肌细胞采购自赛齐生物科技有限公司。首先用75％酒精将培养瓶外消毒，由于部分贴壁细胞贴壁不牢，需要将培养瓶放置于37℃培养箱中静置3～5h，贴壁的细胞原瓶培养，原瓶中培养液离心(1000rpm，3min)，收集脱落细胞，接种。悬浮细胞静置1～2h，观察后传瓶；
(2)移除培养瓶内的完全培养基，用PBS清洗两遍，加入15mL完全培养基，置于37℃培养箱中继续培养；
(3)显微镜观察后置于37℃，5％CO2培养箱中培养，24h后观察成肌细胞生长情况，等成肌细胞长至90％左右，倒掉培养基，用预热的含1％双抗的PBS洗3遍；
(9)加入胰蛋白酶消化，放入培养箱3min左右，显微镜下观察至大部分细胞悬起，立即加入等量终止液终止消化；
(10)DMEM清洗2遍，期间800rpm离心5min；
(11)用完全培养基轻轻重悬细胞沉淀，均匀分到每个孔中，用完全培养基补充体积，轻轻摇匀，放培养箱中培养；
(12)24h左右，观察细胞状态，待细胞汇合度达80％左右时准备转染；
(13)转染方法按Invitrogen公司的3000试剂盒说明书进行，每组设置3个重复；
(14)转染后的孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养，转染后24h～72h，观察细胞状态，生长良好即可收集细胞。
所述的双抗为青霉素和链霉素。
实施例4荧光素酶报告基因活性检测
荧光素酶报告基因活性检测，参照Promega公司的Dual-Luciferase ReporterAssay System试剂盒，具体操作步骤如下：
(1)转染24h后，吸去培养基，用PBS清洗两次，每孔细胞加入100μL的Glo LysisBuffer，室温轻微振摇5min，收集细胞裂解液；
(2)将30μL细胞裂解液加入96孔发光板后，在其中加入75μL Dual-Luciferase Assay Reagent，混匀后在20～25℃静置15～30min。在BioTek公司Synergy 2多功能酶标仪上检测发光值，对应于萤火虫荧光素酶的表达水平；
(3)再加入75μL Stop& Reagent试剂，混匀后在20～25℃静置15～30min。检测发光值，对应于海肾荧光素酶的表达水平；
(4)萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶表达量的比值为萤火虫荧光素酶相对活性，即为对应靶基因活性(三个重复)。
实施例5不同基因型Poly T与长白猪生长性状进行关联分析
(1)使用Excel表将SSR荧光标记检测得到的Poly T位点不同基因型与长白猪的初生重、达115kg日龄体重、达115kg背膘厚、眼肌面积和体长等生长性状数据进行整理。
(2)使用SAS软件(Version 9.2)的GLM程序软件包，采用单因素(基因型)最小二乘模型进行关联分析。
实施例6不同基因型(CA)n与长白猪生长性状进行关联分析
(1)使用Excel表将SSR荧光标记检测得到的(CA)n不同基因型与长白猪的初生重、达115kg日龄体重、达115kg背膘厚、眼肌面积和体长等生长性状数据进行整理。
(2)使用SAS软件(Version 9.2)的GLM程序软件包，采用单因素(基因型)最小二乘模型进行关联分析。
实施例7不同基因型组合(CA)n-Tn与长白猪生长性状进行关联分析
(1)使用Excel表将SSR荧光标记检测得到的(CA)n-Tn不同基因型组合与长白猪的初生重、达115kg日龄体重、达115kg背膘厚、眼肌面积和体长等生长性状数据进行整理。
(2)使用SAS软件(Version 9.2)的GLM程序软件包，采用单因素(基因型)最小二乘模型进行关联分析。
结果分析：
1、由图1可知，通过SSR荧光标记检测共发现猪IGF1基因启动子区(转录起始位点-298bp处起算，以11T为例，即-298bp～-288bp)存在10T、11T和12T三种等位基因；发现共有四种基因型，分别为10T/11T、11T/11T、11T/12T和12T/12T。(在IGF1基因启动子区存在PolyT位点，Poly T结构是微卫星的一种，它指的是双螺旋链中的一条链上只包含腺苷酸(A)而另一条链上只包含胸腺嘧啶(T)的特殊序列DNA分子，10T代表DNA一条链上有连续10个T的结构，即---TTTTTTTTTT---；因为猪是二倍体，一条染色体来自父方，一条染色体来自母方，因此10T/11T代表一条染色体上的DNA上有连续10个T，另一条染色体上的DNA上有连续11个T，所以是10T/11T杂合子)
2、由图2可知，通过SSR荧光标记检测，共发现IGF1基因启动子区(转录起始位点-711bp处起算，以18CA为例，即-711bp～-676bp)的(CA)n微卫星位点有17CA、18CA、19CA和20CA四种等位基因；共发现十种基因型，分别为(CA)17/(CA)17，(CA)17/(CA)18，(CA)17/(CA)19，(CA)17/(CA)20，(CA)18/(CA)18，(CA)18/(CA)19，(CA)18/(CA)20，(CA)19/(CA)19，(CA)19/(CA)20，(CA)20/(CA)20。(与Poly T同理，(CA)n微卫星位点指的是双螺旋中的一条链上只包含胞嘧啶和腺嘌呤(CA)，而另一条链上只包含鸟嘌呤和胸腺嘧啶(GT)。17CA代表DNA一条链上有连续17个CA重复，即---CACACACACACACACACACACACACACACACACA---；而因为猪是二倍体生物，一条染色体来自父方，一条染色体来自母方，因此(CA)17/(CA)18代表一条染色体上的DNA上有连续17个CA重复，另一条染色体上的DNA上有连续18个CA重复，所以是(CA)17/(CA)18杂合体)
3、将IGF1基因不同单倍型(CA)n-Tn重组质粒和pGL-TK内参质粒(常规市售)依次共转染到猪成肌细胞。多功能酶标仪测量萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶具体数值，计算其对应比值，即为各重组质粒活性。IGF1基因5′调控区不同单倍型(CA)n-Tn的转录活性如图3所示。由图3结果可知，(CA)17-11T、(CA)18-11T、(CA)19-11T和(CA)20-11T这四个单倍型的转录活性与对照组pGL3-Basic的转录活性差异显著(p<0.05)；单倍型(CA)17-11T、(CA)18-11T和(CA)19-11T的转录活性呈依次增加的趋势，且单倍型(CA)19-11T的转录活性最高，显著高于单倍型(CA)17-11T的转录活性(p<0.05)；单倍型(CA)20-11T的转录活性明显减少，但与单倍型(CA)19-11T的转录活性差异不显著(p>0.05)。综上，单倍型(CA)19-11T对IGF1基因的转录有最大的促进作用。(单倍型(haplotype)是单倍体基因型的简称，指的是一条染色体上两个或两个以上的多态性位点状态(等位基因)的组合。(CA)17-11T指的就是两个基因座的单倍型，因为(CA)n微卫星位点上的基因型是纯合子(CA)17/(CA)17，PolyT位点上的基因型也是纯合子11T/11T，因此这两个位点的单倍型就是(CA)17-11T一种组合)
4、由表1可知，不同基因型Poly T位点与长白猪生长性状进行关联分析结果表明，基因型11T/11T与11T/12T差异不显著(p>0.05)，但基因型11T/11T在体长、达115kg体重日龄、达115kg背膘厚和眼肌面积均优于11T/12T基因型个体的相应的性状。
5、由表2可知，长白猪达115kg体重日龄在IGF1基因(CA)n微卫星位点各基因型间均差异不显著(p>0.05)，而在体长、达115kg背膘厚和眼肌面积各基因型间均差异显著(p<0.05)，(CA)n微卫星位点影响长白猪生长性状的优势基因型为(CA)17/(CA)19和(CA)19/(CA)19。
6、由表3可知，将不同基因型组合(CA)n-Tn与长白猪生长性状进行关联分析结果表明，达115kg体重日龄性状在不同基因型组合(CA)n-Tn中均差异不显著(p>0.05)，而在体长、达115kg背膘厚和眼肌面积各基因型间均差异显著(p<0.05)，影响长白猪生长性状的优势基因型组合为(CA)17/(CA)19-11T/11T和(CA)19/(CA)19-11T/11T。(这里考虑的是基因连锁，由于(CA)n微卫星位点和PolyT位点均位于IGF1基因的启动子区，即位于同一条同源染色体上，因此这两个位点符合基因连锁。(CA)17/(CA)19-11T/11T表示两个多态性位点的基因型组合，即(CA)n微卫星位点的基因型必须是(CA)17/(CA)19且PolyT位点的基因型必须是11T/11T，这样的个体的基因型才是优势基因型)
表1 Poly T不同基因型与长白猪生长性状的关联分析
注：最小二乘均数分析；同一性状同一行数据肩注不同字母的两数值间差异显著(P<0.05)，肩注为相同字母的量数值间差异不显著(P>0.05)。
表2 (CA)n不同基因型与长白猪生长性状的关联分析
注：最小二乘均数分析；同一性状同一行数据肩注不同字母的两数值间差异显著(P<0.05)，肩注为相同字母的量数值间差异不显著(P>0.05)。
表3 (CA)n-Tn不同基因型组合与长白猪生长性状的关联分析
注：最小二乘均数分析；同一性状同一行数据肩注不同字母的两数值间差异显著(P<0.05)，肩注为相同字母的量数值间差异不显著(P>0.05)。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 华南农业大学
<120> IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点的应用
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FAM-Poly T Forward
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> FAM修饰
<400> 1
cccagcactg tcttccaatc ta 22
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FAM-Poly T Reverse
<400> 2
cctcttctgg caaagttatc ga 22
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> HEX-(CA)n Forward
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> HEX修饰
<400> 3
gacatcataa cccttgagag 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> HEX-(CA)n Reverse
<400> 4
caaagattct gctgagctgt 20
<210> 5
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> P（IGF1） Forward
<400> 5
ggggtaccac ccttgagagg gtattgct 28
<210> 6
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> P（IGF1） Reverse
<400> 6
ccctcgagat atacgtggag gatgggcga 29
<210> 7
<211> 2089
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 长白猪IGF1基因部分启动子区序列：令其第一个碱基为第1bp，最末位碱基为第2089bp
<220>
<222> (1)..(1980)
<223> 长白猪IGF1基因5′调控区
<220>
<222> (1981)..(2089)
<223> 外显子区部分片段
<220>
<222> (1270)..(1305)
<223> (CA)n微卫星位点
<220>
<222> (1683)..(1693)
<223> PolyT位点
<400> 7
gggctggagt gaggcactca gtgccaagac agcctggacc gactctgcac acatggacat 60
ggcagctatt tccaccttcg agatgggtgc agttcttcag cttcatgctg tctacatcat 120
caaagtacac gcggggaggt agagcttttt tttttttttt tttcccacaa actgtgtgat 180
ctgcaaagct gcagaaaaaa aaaaaaaaaa agattttggt aaatcaagtc ttaagtccag 240
tgcactaagg ggagctcacc ggaggaagtc ttggatgagt ctctaaatac aggaaatgcc 300
cacacacctg cagatgcctc ccggtctacc tctcgaagag gcatatttgc agatgcttca 360
ggttaaatca catcccctga aacttcccac ctttgtaccc caaagcctct catggcacac 420
tccaccccct ccattctgga ttttcaatag ggtttcactt ccttatcttt ctggagaaag 480
tgtacacttt tcttatttta aaaagggcat atagccacca catgacagtg acgttttctt 540
ctctgtctct agcacttgct gcaagcccct atggggcctt gactgtgata tgcgtggttg 600
ggcacgtagt aggtacacac tgacggatgc tgaaggcggg gcaccattga aatggcaaaa 660
ctccggacgc ctaacttgtc tttcttgaaa gtaaacagtg ccacaagtga ttaactacag 720
aagacttgag caaactcaac accctttcaa aaccaactgg gttttcctcc aaggacactc 780
acctcagcaa acagctttct ggccacaaga caacataaag gcccagacga gagtttctag 840
cagacctctg ttttcagttg atgcatcagt gtgtctgggt cccctgagaa tcaagagaga 900
gagaaataca aagtccaggc tatttccacc atccctgaga aatcatgcct ggatagacct 960
ccagggagag tggtatgtct gacctgagct tttgcaatct tatttcataa tccactttct 1020
tatctcctac ttcgcaaaac caaagagaaa ctggtacaaa ctgtatcggc aaaagatcag 1080
gacttgattt tcaatggtga aggcaagtat acattattaa tagcaaaaca gctggcttgg 1140
accatgttgc cggccactca tccagttgag agatttgaat gacatcataa cccttgagag 1200
ggtattgcta gccagctggt gttatttaga atacacaaaa attggagaaa gaaaatgcac 1260
tcacgtgaac acacacacac acacacacac acacacacac acacaggttc aagttatgca 1320
gaaaaatatg aacaatggga aaatcatttg cccctcaagt gcccttcccc tggggtgggg 1380
ggacgggggg agataagcag cctagtagag gaaggaagaa aaagatttta ttttattttt 1440
tcagttggct ttacagctca gcagaatctt tgccctgtcg tgggcaaaaa gcatgagaca 1500
gtgtcctaaa gggagccaat tgcaaagctg cctgcccttt tccagtttct aggaaatgag 1560
atcattcccc tcgcttggca actaggatga gggggtcatc ccagcactgt cttccaatct 1620
agtttatcct ggtcatttga gggttaaaat tgtagggtat gcttgagatg gtcttttctt 1680
catttttttt tttctcaatt ttgcgttggc tctggaatat aaaattgctc gcccatcctc 1740
cacgtatatt cttttcatac gggtaaggtg tattagcaga tgtgtgtgtc ttcctgccca 1800
atagaaagtt aatcagagga cagcatcagt attttaatgt ctgctcaccc tgtcactaac 1860
acacattctt ttaagggaaa aaaatgcttc tgtgctctag ttttaaaatg caaaggtatg 1920
atgttatttg tcaccatgcc caaaaaagtc cttactcgat aactttgcca gaagagggag 1980
agagagagaa ggcaagcgtt cccccagctg tttcctgtct acagtgtctg tgtttgtaga 2040
taaatgtgag gattttctct aaatccctct tctgtttgct aaatctcac 2089

Claims (9)

1.IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点在影响猪生长性状中的应用，其特征在于：
所述的(CA)n微卫星位点为(CA)17/(CA)19或(CA)19/(CA)19。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：
所述的猪品种为长白猪。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：
所述的影响猪生长性状体现在体长、达115kg背膘厚和眼肌面积上的提高。
4.IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点-Poly T位点在促进IGF1基因表达中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
所述的IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点-Poly T位点在猪成肌细胞中促进IGF1基因表达中的应用。
6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于：
所述的(CA)n微卫星位点-Poly T位点为(CA)17/(CA)19-11T/11T或(CA)19/(CA)19-11T/11T。
7.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于：
所述的IGF1基因启动子区的(CA)n微卫星位点-Poly T位点在影响猪生长性状中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：
所述的猪品种为长白猪。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：
所述的影响猪生长性状体现在体长、达115kg背膘厚和眼肌面积上的提高。
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