CN109169415A - 一种全雄乌鳢的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种全雄乌鳢的生产方法，包括如下步骤：1)鱼苗性逆转：选取纯种乌鳢鱼苗进行转雌性逆转处理，得到性逆转XY♀乌鳢；2)将步骤1)得到的性逆转XY♀乌鳢经雌核发育二倍体诱发过程形成纯合二倍体XX♀和YY♂；3)由步骤2)得到的纯合二倍体XX♀和YY♂构建YY超雄鱼繁育系；4)将YY超雄鱼繁育系扩繁的YY♂与纯合二倍体XX♀交配，得到全雄乌鳢。通过本发明的生产方法生产的全雄乌鳢，按乌鳢一年性成熟计算，3年即可建立YY超雄鱼繁育系，并获得大量全雄乌鳢鱼苗，大大缩短了育种时间，提高了育种效率，同时获得的全雄乌鳢降低了饲料系数，提高了乌鳢的养殖产量和经济效益。
Description
技术领域
本发明属于鱼类遗传育种技术领域，具体涉及一种全雄乌鳢的生产方法。
背景技术
乌鳢又名黑鱼、生鱼、财鱼、蛇鱼、火头鱼等，在中国是一种常见的食用鱼，骨刺少，含肉率高，营养丰富，而且作为药用具有去瘀生新，滋补调养等功效，外科手术后，食用黑鱼具有生肌补血，促进伤口愈合的作用，因此很多产妇也经常食用。
目前市场上鳢科鱼类品种主要有乌鳢、斑鳢及两者杂交的杂交鳢，在长江流域及以北地区，还是以养殖纯种乌鳢为主。
而在养殖实践过程中，养殖户们发现乌鳢的雌雄个体生长速度差异很大，成鱼中雄性平均体重超过雌性的2倍。因此开展全雄性乌鳢新品种的研究，对于降低饲料系数，提高乌鳢的养殖产量和经济效益具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种全雄乌鳢的生产方法，获得全雄性乌鳢新品种，并提高了乌鳢鱼苗的育种时间和养殖产量。
本发明的技术方案是提供了一种全雄乌鳢的生产方法，包括如下步骤：
1)鱼苗性逆转：选取纯种乌鳢鱼苗进行转雌性逆转处理，得到性逆转XY♀乌鳢；
2)将步骤1)得到的性逆转XY♀乌鳢经雌核发育二倍体诱发过程形成纯合二倍体XX♀和YY♂；
3)由步骤2)得到的纯合二倍体XX♀和YY♂构建YY超雄鱼繁育系；
4)将YY超雄鱼繁育系扩繁的YY♂与纯合二倍体XX♀交配，得到全雄乌鳢。
进一步的，所述步骤3)构建YY超雄鱼繁育系的方法为：
a)取步骤2)中纯合二倍体部分鱼苗直接培育至性成熟交配，得到性成熟雄鱼苗XY♂，同时取纯合二倍体部分鱼苗进行转雌性逆转处理，再培育至性成熟，得到性成熟雌鱼苗YY♀和XX♀；
b)将步骤a)中得到的性成熟雄鱼苗XY♂与性成熟雌鱼苗YY♀和XX♀一配一测交，根据后代性别比例筛选出性成熟雌鱼苗YY♀；
c)将步骤b)筛选出的性成熟雌鱼苗YY♀与步骤2)得到的纯合二倍体雄性鱼苗YY♂回交，得到的YY型后代，部分继续进行转雌性逆转处理，构建YY超雄鱼繁育系。
进一步的，所述转雌性逆转处理过程为在纯种乌鳢鱼苗孵化后第7天开始投喂雌激素处理过的饵料，连续投喂60天。
进一步的，所述饵料处理方法为采用150～200ug/L炔雌醇和50～100ug/L苯甲酸雌二醇浸泡1～1.5小时。
进一步的，所述步骤2)中雌核发育二倍体诱发方法为将失活的月鳢精子与性逆转XY♀乌鳢Ⅴ期卵细胞进行人工受精，产生单倍体个体，然后采用静水压方法使其染色体二倍化，从而得到形成纯合二倍体XX♀和YY♂。
进一步的，所述月鳢精子的失活方法为采用强度60～70mJ/cm2紫外线照射月鳢精子18～25min。
进一步的，所述静水压方法为受精后4～5min，采用静水压机对单倍体个体施加压力550～600kg/cm2，持续4～5min。
与现有技术相比，本发明的有益效果：本发明提供的这种全雄乌鳢的生产方法通过雌核发育二倍体诱发性逆转的XY♀乌鳢形成纯合二倍体，从而构建YY超雄鱼繁育系，并通过YY超雄鱼繁育系与纯合二倍体的XX交配规模化生产全雄乌鳢，不仅大大缩短了乌鳢育种时间，提高了育种效率，而且大大提高了乌鳢的养殖产量和经济效益。
以下将结合附图对本发明做进一步详细说明。
附图说明
图1是本发明全雄乌鳢的生产方法的工艺流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1所示，本实施例提供一种全雄乌鳢的生产方法，具体包括如下步骤：
(1)鱼苗性逆转：5月份收集长江水系性腺发育良好的野生乌鳢亲本，按常规方法进行人工催产受精，获得乌鳢鱼苗，选取纯种乌鳢鱼苗进行转雌性逆转处理，得到性逆转XY♀乌鳢。
其中，转雌性逆转处理的具体方法为采用150～200ug/L炔雌醇和50～100ug/L苯甲酸雌二醇混合液浸泡饵料1～1.5小时，在乌鳢鱼苗孵化后第7天开始投喂该雌激素处理过的饵料，连续投喂60天，可获得雌性比例在90%以上的乌鳢群体。
(2)将上述步骤(1)得到的性逆转XY♀乌鳢经雌核发育二倍体诱发过程形成纯合二倍体XX♀和YY♂；其中，雌核发育二倍体的诱发通过精子染色体遗传失活和卵子染色体二倍体化实现。
具体的，精子染色体遗传失活是选择性成熟的月鳢雄鱼，人工催产后获得精子，用强度60～70mJ/cm2紫外线照射18～25min使精子失活，照射后精子活力在40%以上，即可用于刺激乌鳢卵子；而其中选用同科不同属的月鳢雄鱼的精子作为异种精子，这样既可以在雌核发育过程中刺激卵细胞正常分裂，又不参与发育，就算有没有失活的精子参与了发育，子代为杂交品种，不易存活或者从外形进行分辨剔除。卵子染色体选择上述性成熟的性逆转XY♀乌鳢Ⅴ期卵细胞；将该失活的月鳢精子与性逆转XY♀乌鳢Ⅴ期卵细胞进行人工受精，产生单倍体个体，然后采用静水压方法使其染色体二倍化，形成纯合二倍体。而其中静水压方法是采用静水压机对单倍体个体的染色体进行二倍化处理，静水压条件设置为开始处理时间为受精后4～5min，施加压力550～600kg/cm2，持续4～5min；采用静水压方法使卵细胞二倍体化对胚胎的损伤小，而且雌核发育可分为减数雌核发育和卵裂雌核发育，减数雌核发育抑制激活卵第二次成熟分裂后期第二极体的形成和排出产生的二倍体，为杂合的，卵裂雌核发育抑制激活卵第一次卵裂产生二倍体，为纯合的，静水压处理则有利于雌核发育产生纯合二倍体。
在上述二倍体化处理过程中由于性逆转XY♀乌鳢是步骤1中得到的，会存在约50%XX♀的可能，同时考虑有些个体没有加倍成功，存在单倍体综合征，因此选择50尾乌鳢进行雌核发育，后代培育10天左右进行解剖观察性腺，得到7组XY♀乌鳢雌核发育的后代（含有XX♀和YY♂），其他组合舍弃。
(3)通过上述步骤(2)得到的纯合二倍体XX♀和YY♂构建YY超雄鱼繁育系。
其中，构建YY超雄鱼繁育系的具体过程如下：
(a)取步骤(2)中纯合二倍体部分鱼苗直接培育至性成熟交配，得到性成熟雄鱼苗XY♂，同时取纯合二倍体部分鱼苗进行转雌性逆转处理，再培育至性成熟，得到性成熟雌鱼苗YY♀和XX♀；此处转雌性逆转处理过程与上述步骤(1)相同，同样采用150～200ug/L炔雌醇和50～100ug/L苯甲酸雌二醇混合液浸泡过的饵料进行投喂。
(b)将步骤(a)中得到的性成熟雄鱼苗XY♂与性成熟雌鱼苗YY♀和XX♀一配一测交，后代培育10天左右进行解剖观察性腺，根据后代性别比例筛选出性成熟雌鱼苗YY♀，若后代100%为雄性的，则可判定其母本为性成熟雌鱼苗YY♀。
(c)将步骤(b)筛选出的性成熟雌鱼苗YY♀与步骤(2)得到的纯合二倍体雄性鱼苗YY♂回交，得到的鱼苗为100%YY型后代，再取其部分继续进行转雌性逆转处理，从而建立YY超雄鱼繁育系；此处YY型后代进行转雌性逆转处理过程与上述步骤(1)相同，同样采用150～200ug/L炔雌醇和50～100ug/L苯甲酸雌二醇混合液浸泡过的饵料进行投喂。
(4)将上述构建的YY超雄鱼繁育系扩繁的YY♂与纯合二倍体XX♀交配，大量生产全雄乌鳢。
采用上述方法生产全雄乌鳢，按乌鳢一年性成熟计算，3年即可建立YY超雄鱼繁育系，并获得大量全雄乌鳢鱼苗，大大缩短了育种时间，提高了育种效率，同时获得的全雄乌鳢降低了饲料系数，提高了乌鳢的养殖产量和经济效益。
以上例举仅仅是对本发明的举例说明，并不构成对本发明的保护范围的限制，凡是与本发明相同或相似的设计均属于本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种全雄乌鳢的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)鱼苗性逆转：选取纯种乌鳢鱼苗进行转雌性逆转处理，得到性逆转XY♀乌鳢；
2)将步骤1)得到的性逆转XY♀乌鳢经雌核发育二倍体诱发过程形成纯合二倍体XX♀和YY♂；
3)由步骤2)得到的纯合二倍体XX♀和YY♂构建YY超雄鱼繁育系；
4)将YY超雄鱼繁育系扩繁的YY♂与纯合二倍体XX♀交配，得到全雄乌鳢。
2.如权利要求1所述的全雄乌鳢的生产方法，其特征在于：所述步骤3)构建YY超雄鱼繁育系的方法为：
a)取步骤2)中纯合二倍体部分鱼苗直接培育至性成熟交配，得到性成熟雄鱼苗XY♂，同时取纯合二倍体部分鱼苗进行转雌性逆转处理，再培育至性成熟，得到性成熟雌鱼苗YY♀和XX♀；
b)将步骤a)中得到的性成熟雄鱼苗XY♂与性成熟雌鱼苗YY♀和XX♀一配一测交，根据后代性别比例筛选出性成熟雌鱼苗YY♀；
c)将步骤b)筛选出的性成熟雌鱼苗YY♀与步骤2)得到的纯合二倍体雄性鱼苗YY♂回交，得到的YY型后代，部分继续进行转雌性逆转处理，构建YY超雄鱼繁育系。
3.如权利要求1或2所述的全雄乌鳢的生产方法，其特征在于：所述转雌性逆转处理过程为在纯种乌鳢鱼苗孵化后第7天开始投喂雌激素处理过的饵料，连续投喂60天。
4.如权利要求3所述的全雄乌鳢的生产方法，其特征在于：所述饵料处理方法为采用150～200ug/L炔雌醇和50～100ug/L苯甲酸雌二醇浸泡1～1.5小时。
5.如权利要求1所述的全雄乌鳢的生产方法，其特征在于：所述步骤2)中雌核发育二倍体诱发方法为将失活的月鳢精子与性逆转XY♀乌鳢Ⅴ期卵细胞进行人工受精，产生单倍体个体，然后采用静水压方法使其染色体二倍化，从而得到形成纯合二倍体XX♀和YY♂。
6.如权利要求5所述的全雄乌鳢的生产方法，其特征在于：所述月鳢精子的失活方法为采用强度60～70mJ/cm2紫外线照射月鳢精子18～25min。
7.如权利要求5所述的全雄乌鳢的生产方法，其特征在于：所述静水压方法为受精后4～5min，采用静水压机对单倍体个体施加压力550～600kg/cm2,持续4～5min。
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