CN109164259A - 一种灵敏度高的结合珠蛋白检测试剂盒 - Google Patents

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李倩
刘佳丽
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Abstract

本发明涉及血清结合珠蛋白检测技术领域，特别涉及一种血清结合珠蛋白检测试剂，试剂R1中含有磷酸盐缓冲液，聚乙二醇，吐温‑80，防腐剂；试剂R2中含有磷酸盐缓冲液，吐温‑80，羊抗人HP抗体、防腐剂。所述试剂R1采用由磷酸盐缓冲液、叠氮化钠组成的复合稳定剂，解决了试剂长期保存不稳定这一难题；加入了加速剂聚乙二醇、表面活性剂吐温‑80组成的复合试剂，提高了试剂检测的灵敏度。此外，所述试剂R2通过添加复合稳定剂可有效提高抗体蛋白的稳定性；且加入了表面活性剂吐温‑80，提高了试剂检测的灵敏度。

Description

一种灵敏度高的结合珠蛋白检测试剂盒
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种灵敏度高的结合珠蛋白检测试剂盒。
背景技术
结合珠蛋白又叫触珠蛋白,是血清α2球蛋白组分中的一种分子量为85000的酸性糖蛋白,由两条β重链和两条α轻链组成α2β2的四聚体，广泛存在于人类和许多哺乳动物的血清及其他体液中,主要在肝脏合成与降解。
结合珠蛋白的主要功能是结合游离的血红蛋白，形成稳定的结合珠蛋白-血红蛋复合物，这种结合使结合珠蛋白和血红蛋白的构型和特征均发生改变,且这个反应基本上是不可逆的。临床上有许多病因可造成红细胞破坏，如创伤、烧伤等,造成血中游离血红蛋白明显升高，血红蛋白可以从人的肾脏滤过，造成肾脏损害，甚至造成不可逆转的肾功能损伤。而结合珠蛋白与游离的血红蛋白结合后形成的复合物可被网状内皮细胞迅速清除，但该复合物因分子量大，不能通过肾小球滤膜而经尿液排出，故可阻止亚铁血红素的漏失，且可防止溶血导致的肾脏受损。这种生理现象，为临床检验学提供了一个可靠的参照指标：当医生利用实验仪器发现血清结合珠蛋白含量下降时，结合病人的临床表现，可以确定是否发生了血管内溶血性疾病，如阵发性睡眠性血红蛋白尿症和蚕豆病，以及先天性无结合珠蛋白血症等。还有一些其他类型的血管内溶血和部分血管外溶血时结合珠蛋白可降低，其降低的程度常与病性轻重相一致。
结合珠蛋白又是一种急性期时相反应蛋白。当机体处在应激状态时，血液中的结合珠蛋白明显增多，如心肌梗塞、肿瘤、炎症、创伤、感染等病理状态时，以及应用某些激素，如皮质激素和雄性激素后，其血清含量常有显著升高，并与严重程度和预后有关。经论证，血清中结合珠蛋白和铁蛋白含量的变化，对急性肺栓塞和深部静脉血栓形成的病人具有一定的诊断价值。另外在进行糖尿病合并血管病变患者的基础研究中，也发现血清结合珠蛋白含量与疾病进展发生相关性变化，结合珠蛋白基因型有可能是糖尿病冠状动脉病变的一个独立的风险因素。所以对结合珠蛋白含量的动态监测，有益于糖尿病血管病变患者的治疗，尤其是在建立糖尿病患者血管病变预防策略时，具有十分重要的意义。
由于结合珠蛋白的合成与降解均在肝脏，并且在结合珠蛋白与血红蛋白的复合物形成与降解的过程中，结合珠蛋白不能重复利用，因此当肝脏功能出现问题时，体内的结合珠蛋白数量常发生明显的变化。合成不足则其含量减少，降解不足则其含量增多。此时化验检查血液中的结合珠蛋白含量是否减少或增加，对诊断肝脏疾病，判断疾病的预后很有帮助。本专利利用样本中(血清)的HP可与其相应抗体(羊抗人HP抗体)产生抗原抗体的反应，形成抗原抗体复合物，并产生浊度变化，通过测定特定波长下浊度的变化，即可算出HP的含量。
该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是目前市场上存在的结合珠蛋白的检测试剂存在着操作复杂、准确度不高、稳定性差等缺陷，因此需要改进。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种灵敏度高的结合珠蛋白检测试剂盒。该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性好，准确度高，线性范围好，分析灵敏度高，有利于试剂在临床上的推广应用。
本发明是通过以下措施实现的：
一种灵敏度高的结合珠蛋白检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
所述试剂R1和试剂R2在使用时的体积比例为R1：R2＝4：1。
本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如图4所示。
本发明所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
本发明所使用的质控品为英国朗道公司生产的复合质控品
加入生理盐水、样本或校准品3μl，之后再加入R1试剂240μl预孵育5min后加入60μl的试剂R2，30秒后开始记录吸光度值A1，反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
本发明的有益效果：
本发明提供的结合珠蛋白检测试剂盒，通过在试剂R2中加入了由磷酸盐缓冲液、聚乙二醇、吐温-80、叠氮化钠组成的复合稳定剂，各组分协同作用使试剂稳定性能优异，解决了试剂长期保存不稳定这一难题，却不会对试剂的准确度和分析灵敏度产生影响，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
附图说明
图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图4试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪的具体使用方法。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
实施例1
市场上获得认可的一种准确度优异的结合珠蛋白试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
磷酸盐缓冲液(pH7.4) 20mmol/L
聚乙二醇(PEG) 1g/L
试剂R2组成为：
羊抗人HP抗体 ＞10mL/L
叠氮化钠 1g/L
本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自动分析仪，操作如下：
加入纯化水、样本或校准品3μl，之后再加入R1试剂240μl预孵育5min后加入60μl的试剂R2，30秒后开始记录吸光度值A1，反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
本实施例所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
实施例2
一种灵敏度高的结合珠蛋白检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
具体测定方法同实施例1。
实施例3
一种灵敏度高的结合珠蛋白检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
具体测定方法同实施例1。
实施例4
一种灵敏度高的结合珠蛋白检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
具体测定方法同实施例1。
对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
准确度验证实验：
将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组，实施例1中市场上获得认可的准确度优异的结合珠蛋白试剂盒作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的结果如图1-图3。
通过图1-图3的检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检测结果线性相关系数r分别为0.9994、0.9991、0.9992，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的结合珠蛋白检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
线性相关性验证实验：
找到结合珠蛋白高值样本为3g/L，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，依次为3g/L、1.5g/L、0.75g/L、375g/L、0.1875g/L、0g/L浓度的样本，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如表1所示。
表1实施例1-4线性相关验证实验检测结果
上述检测结果显示，实施例1-4检测结果相关性均大于0.990，但实施例2、3、4的检测结果大于0.999，与实施例1相比具有更好的线性相关性，这说明本发明试剂具有更好的线性相关性。
稳定性验证实验：
在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结果进行对比，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如表2。
表2稳定性验证实验检测结果
实验结果显示，实施例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存4个月稳定，而实施例2、3、4试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存12个月稳定，说明在试剂中通过加入复合稳定剂能够有效的提高结合珠蛋白检测试剂盒的稳定性。
综合以上分析，本发明提供的结合珠蛋白检测试剂盒，在试剂R2中通过加入复合稳定剂能够有效的提高试剂盒的稳定性，线性范围较好，试剂的准确度也较好。因此，本发明提供的结合珠蛋白检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。

Claims (4)

1.一种灵敏度高的结合珠蛋白检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、R2和校准品，其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2在使用时的体积比例为R1：R2＝4：1。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中加入了由磷酸盐缓冲液、叠氮化钠组成的复合稳定剂，解决了试剂长期保存不稳定这一难题；所述试剂R1中加入了加速剂聚乙二醇、表面活性剂吐温-80组成的复合试剂，提高了试剂检测的灵敏度。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中加入了磷酸盐缓冲液、叠氮化钠组成的复合稳定剂，解决了抗体蛋白长期保存不稳定这一难题。所述试剂R2中加入了表面活性剂吐温-80，提高了试剂检测的灵敏度。
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