CN109161573B - 一种井冈霉素发酵培养基及发酵方法 - Google Patents
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Abstract
一种井冈霉素发酵培养基及发酵方法，属于生物杀菌剂技术领域。该培养基由以下组分构成：可溶性淀粉6～12%，黄豆饼粉1.5～3.5%，氨基酸粉0.2～1%，磷酸二氢钾0.1～0.15%，磷酸氢二钾0.15～0.3%，氯化钠0.1～0.3%，硫酸镁0.05～0.15%，井冈羟胺0.05～0.1%，水余量，pH值为6.8～7.2。本发明通过在井冈霉素发酵培养基中添加井冈羟胺，井冈霉素发酵效价提高了13%以上，生产周期缩短至40～45小时，生产成本大大的降低。
Description
技术领域
本发明属于生物杀菌剂技术领域，具体涉及一种井冈霉素发酵培养基及发酵方法。
背景技术
井冈霉素是一种放线菌产生的抗生素，具有较强的内吸性，易被菌体细胞吸收并在其内迅速传导，干扰和抑制菌体细胞生长和发育,主要用于水稻纹枯病，也可用于水稻稻曲病、玉米大小斑病以及蔬菜和棉花、豆类等作物病害的防治。多年大规模的田间使用结果充分显示其"防效高、无药害、无污染"的环保型农药的特点，深受国内外用户欢迎。
井冈霉素采用液态发酵法进行生产，现有的发酵工艺存在如下问题：
1）工业化发酵水平偏低，发酵效价在18000ug/ml左右；
2）发酵周期较长，通常在50小时左右，造成成本较高；
3）对氧气消耗较多，能耗较高。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种井冈霉素发酵培养基及发酵方法的技术方案。
所述的一种井冈霉素发酵培养基，其特征在于由以下组分构成：可溶性淀粉6～12%，黄豆饼粉1.5～3.5%，氨基酸粉0.2～1%，磷酸二氢钾0.1～0.15%，磷酸氢二钾0.15～0.3%，氯化钠0.1～0.3%，硫酸镁0.05～0.15%，井冈羟胺0.05～0.1%，水余量，pH值为6.8～7.2。
所述的一种井冈霉素发酵培养基，其特征在于由以下组分构成：可溶性淀粉6～12%，黄豆饼粉1.5～3.5%，氨基酸粉0.2～1%，磷酸二氢钾0.1～0.15%，磷酸氢二钾0.15～0.3%，氯化钠0.15～0.25%，硫酸镁0.05～0.15%，井冈羟胺0.05～0.07%，水余量，pH值为6.8～7.2。
所述的一种井冈霉素发酵培养基，其特征在于由以下组分构成：可溶性淀粉8～10%，黄豆饼粉2～3%，氨基酸粉0.4～0.8%，磷酸二氢钾0.12～0.14%，磷酸氢二钾0.18～0.26%，氯化钠0.18～0.22%，硫酸镁0.08～0.12%，井冈羟胺0.05～0.07%，水余量，pH值为6.8～7.2。
所述的井冈霉素发酵的方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取所述配方量的可溶性淀粉、黄豆饼粉、氨基酸粉、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、硫酸镁、井冈羟胺和水混合均匀，调pH值至6.8～7.2，灭菌，得到发酵培养基；
2）发酵培养基中接种井冈霉素种子液进行发酵培养，发酵后收集发酵产物，过滤得滤液。
所述的井冈霉素发酵的方法，其特征在于所述的井冈霉素种子液为吸水链霉菌井冈变种种子液。
所述的井冈霉素发酵的方法，其特征在于所述的井冈霉素接种量为5～15vol%，优选为10vol%。
所述的井冈霉素发酵的方法，其特征在于所述的发酵条件为：温度39～42℃，通气比1:1，搅拌转速50～200rpm，罐压0.05MPa，发酵周期40～45小时。
所述的井冈羟胺在提高井冈霉素发酵效价中的应用。
所述的应用，其特征在于在井冈霉素发酵培养基中添加井冈羟胺。
所述的应用，其特征在于所述的井冈羟胺的添加重量为0.05～0.1%，优选为0.05～0.07%。
本发明通过在井冈霉素发酵培养基中添加井冈羟胺，井冈霉素发酵效价提高了13%以上，生产周期缩短至40～45小时，生产成本大大的降低。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步说明本发明。
实施例1
（1）培养基配方：可溶性淀粉12%，黄豆饼粉1.5%，氨基酸粉1%，磷酸二氢钾0.1%，磷酸氢二钾0.15%，氯化钠0.15%，硫酸镁0.1%，井冈羟胺0.1%，水余量，pH值为7.0。
（2）培养基配置方法：将可溶性淀粉，黄豆饼粉，氨基酸粉，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，氯化钠，硫酸镁，井冈羟胺加入自来水溶解，定容，用30%氢氧化钠调pH值为7.0。
（3）灭菌：121℃，灭菌30分钟。
（4）接种：发酵液降温至40℃时，接种吸水链霉菌井冈变种（Streptomyceshygros copicusvar.jinggangensis）种子液，接种量为10vol%，发酵培养。
（5）发酵培养：温度40℃，通气比1:1，搅拌转速150rpm，罐压0.05MPa，发酵周期42小时，收集发酵产物，过滤得滤液，采用液相色谱法测得滤液井冈霉素效价为21085ug/ml。
实施例2
（1）培养基配方：可溶性淀粉6%，黄豆饼粉3.5%，氨基酸粉1%，磷酸二氢钾0.15%，磷酸氢二钾0.3%，氯化钠0.1%，硫酸镁0.05%，井冈羟胺0.05%，水余量，pH值为6.8。
（2）培养基配置方法：将可溶性淀粉，黄豆饼粉，氨基酸粉，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，氯化钠，硫酸镁，井冈羟胺加入自来水溶解，用30%氢氧化钠调pH值为6.8。
（3）灭菌：121℃，灭菌30分钟。
（4）接种：发酵液降温至40℃时，接种吸水链霉菌井冈变种（Streptomyceshygros copicusvar.jinggangensis）种子液，接种量为5vol%，发酵培养。
（5）发酵培养：温度39℃，通气比1:1，搅拌转速100rpm，罐压0.05MPa，发酵周期40小时，收集发酵产物，过滤得滤液，采用液相色谱法测得滤液井冈霉素效价为20324ug/ml。
实施例3
（1）培养基配方：可溶性淀粉9%，黄豆饼粉2.0%，氨基酸粉0.2%，磷酸二氢钾0.12%，磷酸氢二钾0.2%，氯化钠0.3%，硫酸镁0.15%，井冈羟胺0.06%，水余量，pH值为7.2。
（2）培养基配置方法：将可溶性淀粉，黄豆饼粉，氨基酸粉，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，氯化钠，硫酸镁，井冈羟胺加入自来水溶解，定容，用30%氢氧化钠调pH值为7.2。
（3）灭菌：121℃，灭菌30分钟。
（4）接种：发酵液降温至40℃时，接种吸水链霉菌井冈变种种子液（Streptomyces hygroscopicusvar.jinggangensis），接种量为15vol%，发酵培养。
（5）发酵培养：温度42℃，通气比1:1，搅拌转速200rpm，罐压0.05MPa，发酵周期45小时，收集发酵产物，过滤得滤液，测得滤液井冈霉素效价为20556ug/ml。
实施例4
（1）培养基配方：可溶性淀粉8%，黄豆饼粉2.5%，氨基酸粉0.6%，磷酸二氢钾0.1%，磷酸氢二钾0.25%，氯化钠0.2%，硫酸镁0.12%，井冈羟胺0.08%，水余量，pH值为7.1。
（2）培养基配置方法：将可溶性淀粉，黄豆饼粉，氨基酸粉，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，氯化钠，硫酸镁，井冈羟胺加入自来水溶解，定容，用30%氢氧化钠调pH值为7.1。
（3）灭菌：121℃，灭菌30分钟。
（4）接种：发酵液降温至40℃时，接种吸水链霉菌井冈变种（Streptomyceshygros copicusvar.jinggangensis）种子液，接种量为15vol%，发酵培养。
（5）发酵培养：温度40℃，通气比1:1，搅拌转速50rpm，罐压0.05MPa，发酵周期40小时，收集发酵产物，过滤得滤液，采用液相色谱法测得滤液井冈霉素效价为20167ug/ml。
实施例5： 按照下列步骤实施该方案：
（1）配置培养基，按照表1，配制6份各1000ml，pH值调制7.0。
（2）将所述培养基在121-123℃下灭菌30分钟。
（3）培养基温度降到40℃接种井冈霉素种子液，接种量10vol%,发酵培养。
（4）发酵温度40℃、通气比1:1、搅拌转速150rpm、罐压0 .05MPa，条件下发酵42h，收集发酵产物，过滤得滤液，测得滤液井冈霉素效价。
上述结果表明，当向培养基中加入井冈羟胺的浓度为0.05%～0.07%时，其提高井冈霉素效价的作用显著，当井冈羟胺浓度大于0.07%时，井冈霉素发酵效价有所下降，这说明井冈羟胺作为培养基基质浓度超过一定的范围反而不利于吸水链霉菌井冈变种代谢井冈霉素。所以，本发明专利的井冈羟胺优选浓度为0.07%，这时其与其他培养基的成分相互配合取得的井冈霉素效价最高。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种井冈霉素发酵培养基，其特征在于由以下组分构成：可溶性淀粉6～12%，黄豆饼粉1.5～3.5%，氨基酸粉0.2～1%，磷酸二氢钾0.1～0.15%，磷酸氢二钾0.15～0.3%，氯化钠0.1～0.3%，硫酸镁0.05～0.15%，井冈羟胺0.05～0.1%，水余量，pH值为6.8～7.2。
2.如权利要求1所述的一种井冈霉素发酵培养基，其特征在于由以下组分构成：可溶性淀粉6～12%，黄豆饼粉1.5～3.5%，氨基酸粉0.2～1%，磷酸二氢钾0.1～0.15%，磷酸氢二钾0.15～0.3%，氯化钠0.1～0.3%，硫酸镁0.05～0.15%，井冈羟胺0.05～0.07%，水余量，pH值为6.8～7.2。
3.如权利要求1所述的一种井冈霉素发酵培养基，其特征在于由以下组分构成：可溶性淀粉8～10%，黄豆饼粉2～3%，氨基酸粉0.4～0.8%，磷酸二氢钾0.12～0.14%，磷酸氢二钾0.18～0.26%，氯化钠0.15～0.25%，硫酸镁0.08～0.12%，井冈羟胺0.05～0.07%，水余量，pH值为6.8～7.2。
4.利用权利要求1-3任一所述的井冈霉素发酵培养基进行井冈霉素发酵的方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取所述配方量的可溶性淀粉、黄豆饼粉、氨基酸粉、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、硫酸镁、井冈羟胺和水混合均匀，调pH值至6.8～7.2，灭菌，得到发酵培养基；
2）发酵培养基中接种吸水链霉菌井冈变种种子液进行发酵培养，发酵后收集发酵产物，过滤得滤液。
5.如权利要求4所述的井冈霉素发酵的方法，其特征在于所述的吸水链霉菌井冈变种种子液接种量体积百分比为5～15%。
6.如权利要求4所述的井冈霉素发酵的方法，其特征在于所述的发酵条件为：温度39～42℃，通气比1:1，搅拌转速50～200rpm，罐压0.05MPa，发酵周期40～45小时。
7.井冈羟胺在提高井冈霉素发酵效价中的应用，其特征在于在井冈霉素发酵培养基中添加井冈羟胺，井冈羟胺的添加重量为0.05～0.1%。
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