CN110951654A - 一种植物乳杆菌增殖剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种植物乳杆菌增殖剂及其应用，其为：枯草芽孢杆菌CGMCC 18057发酵上清液。还可以包括6′‑乙酰基人参皂苷F1，所述发酵上清液为在含有大豆成分的培养基中发酵获得的。本发明提供的增殖剂制备方法简单，成本低，而且所用的菌株为益生菌，还能增进其他保健益生效果；本发明制备的增殖剂对植物乳杆菌在乳中的生长具有十分显著促进作用，极大的提高了植物乳杆菌的应用空间实际产品开发中的应用潜力。

Description

一种植物乳杆菌增殖剂及其应用

技术领域

本发明涉及一种植物乳杆菌增殖剂，属于微生物技术领域。

背景技术

植物乳杆菌是乳酸菌的一种，最适生长温度为30～35,厌氧或兼性厌氧,菌种为直或弯的杆状，单个、有时成对或成链状，最适pH 6.5左右，属于同型发酵乳酸菌。此菌与其他乳酸菌的区别在于此菌的活菌数比较高，能大量的产酸，使水中的PH值稳定不升高，而且其产出的酸性物质能降解重金属；由于此菌是厌氧细菌(兼性好氧)，在繁殖过程中能产出特有的乳酸杆菌素，乳酸杆菌素是一种生物型的防腐剂。在养殖中后期，由于动物的粪便和残饵料增加，会下沉到池塘的底部，并且腐烂，滋生很多病菌，生成大量的氨氮和亚硝酸盐，使底部偷死现象严重。如果长期使用植物乳酸杆菌，就能很好的抑制底部粪便和残饵料的腐烂，也就降低了氨氮和亚硝酸盐的增加，大量减少了化工降解素的用量，使养殖成本降低。

植物乳杆菌具有很多的保健作用，如下：①有一定的免疫调节作用；②对致病菌有抑制作用；③降低血清胆固醇含量和预防心血管疾病；④维持肠道内菌群平衡；⑤促进营养物质吸收；⑥缓解乳糖不耐症；⑦抑制肿瘤细胞的形成等。然而，普遍认为植物乳杆菌很难在牛乳中培养，几乎没有生长。

本发明旨在提供一种植物乳杆菌增殖剂，其能有效刺激植物乳杆菌的生长，尤其是在牛乳中的生长。

发明内容

本发明的目的是提供一种植物乳杆菌增殖剂，其能有效刺激植物乳杆菌的生长，尤其是在牛乳中的生长。

江南大学杨瑞金教授等人发现一种具有抗血栓功能的枯草芽孢杆菌(B.subtilissp)，nk1，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC 18057。该菌株的已知功能为可以发酵牛乳产生纳豆激酶，制作一种具有抗血栓功能的发酵凝乳饮品。本发明所用枯草芽孢杆菌CGMCC 18057来自江南大学食品学院。

本发明团队发现枯草芽孢杆菌CGMCC 18057的大豆发酵上清液具有显著的刺激植物乳杆菌增殖的能力。

本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

一种植物乳杆菌增殖剂，其为：

枯草芽孢杆菌CGMCC 18057发酵上清液。

作为优选，所述发酵上清液为在含有大豆成分的培养基中发酵获得的。

作为进一步优选，所述发酵上清液的制备方法为：

(1)活化菌种：

取一环枯草芽孢杆菌CGMCC 18057接种到LB固体培养基中划线，37℃需氧培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至LB液体培养基中活化，最后调节浓度成10⁸cfu/ml枯草芽孢杆菌种子液。

(2)按照体积百分比为3％的接种量，将种子液接种于发酵培养基进行发酵，培养温度为25～30℃，摇床转速为150～200rpm/min，培养48-62h，获得纯培养物；

所述发酵培养基的配方为：

1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g大豆粉+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂，pH7.0。

(3)将步骤(2)所得纯培养物于转速1200rpm，温度4℃条件下离心15min，取上清液进行无菌过滤，所述过滤膜孔径为0.22μm，既得。

将上述植物乳杆菌增殖剂应用于促进植物乳杆菌生长的方法，步骤如下：

(1)制备植物乳杆菌种子液；

(2)取植物乳杆菌增殖剂溶于水，制备成10％浓度的溶液；

(3)将步骤(1)制备的植物乳杆菌种子液以2％(v/v)比例接种至灭菌的生牛乳中，加入生牛乳体积5％的步骤(2)所得的植物乳杆菌增殖剂，混合均匀，静置培养即可。

作为优选，35℃静置培养12h。

6′-乙酰基人参皂苷F1分离自人参花蕾，其结构如下所示：

本发明人还发现6′-乙酰基人参皂苷F1可以增进枯草芽孢杆菌CGMCC18057发酵上清液的促进增殖效果。

本发明的优点：

(1)本发明提供的增殖剂制备方法简单，成本低，而且所用的菌株为益生菌，还能增进其他保健益生效果；

(2)本发明制备的增殖剂对植物乳杆菌在乳中的生长具有十分显著促进作用，极大的提高了植物乳杆菌的应用空间实际产品开发中的应用潜力。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

本发明的具体实施例如以下说明。

实施例1

设置下列实验组，每组5个重复取平均。

组1：

一种植物乳杆菌增殖剂，其为：

枯草芽孢杆菌CGMCC 18057发酵上清液。

作为优选，所述发酵上清液为在含有大豆成分的培养基中发酵获得的。

作为进一步优选，所述发酵上清液的制备方法为：

(1)活化菌种：

取一环枯草芽孢杆菌CGMCC 18057接种到LB固体培养基中划线，37℃需氧培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至LB液体培养基中活化，最后调节浓度成10⁸cfu/ml枯草芽孢杆菌种子液。

(2)按照体积百分比为3％的接种量，将种子液接种于发酵培养基进行发酵，培养温度为28℃，摇床转速为150rpm/min，培养48h，获得纯培养物；

所述发酵培养基的配方为：

1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g大豆粉+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂，pH7.0。

(3)将步骤(2)所得纯培养物于转速1200rpm，温度4℃条件下离心15min，取上清液进行无菌过滤，所述过滤膜孔径为0.22μm，既得。

组2，培养基不加大豆成分：

一种植物乳杆菌增殖剂，其为：

枯草芽孢杆菌CGMCC 18057发酵上清液。

作为优选，所述发酵上清液为在含有大豆成分的培养基中发酵获得的。

作为进一步优选，所述发酵上清液的制备方法为：

(1)活化菌种：

取一环枯草芽孢杆菌CGMCC 18057接种到LB固体培养基中划线，37℃需氧培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至LB液体培养基中活化，最后调节浓度成10⁸cfu/ml枯草芽孢杆菌种子液。

(2)按照体积百分比为3％的接种量，将种子液接种于发酵培养基进行发酵，培养温度为28℃，摇床转速为150rpm/min，培养48h，获得纯培养物；

所述发酵培养基的配方为：

1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂，pH7.0。

(3)将步骤(2)所得纯培养物于转速1200rpm，温度4℃条件下离心15min，取上清液进行无菌过滤，所述过滤膜孔径为0.22μm，既得。

组3，含有0.3％6′-乙酰基人参皂苷F1的LB液体培养基。

组4，含有0.3％6′-乙酰基人参皂苷F1的组1的发酵上清液。

实施例2

测定其对植物乳杆菌ST-III在乳中的促生长作用，其具体包括如下步骤：

(1)植物乳杆菌ST-III种子液的制备：取一环纯乳杆菌接种到MRS固体培养基中划线，37℃厌氧培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至MRS液体培养基中活化，厌氧培养成10⁸cfu/ml植物乳杆菌种子液。；

(2)取组1-4的增殖剂溶于水，制备成10％浓度的溶液；

(3)将步骤(1)制备的植物乳杆菌种子液以2％(v/v)比例接种至灭菌的生牛乳中，加入生牛乳体积5％的步骤(2)所得的植物乳杆菌增殖剂，混合均匀，静置培养即可。

作为优选，35℃静置培养12h，分别在0.6h，12h观察。观察培养过程中培养基凝乳情况；利用MRS平板倾注法对乳培养基中的ST-III菌落计数，单位为log CFU/mL。

结果如下表1所示：

表1

可见，本发明的发酵上清液可以显著促进植物乳杆菌在牛乳中的增殖，而在该上清液的制备中，选择有大豆蛋白成分的培养基至关重要，不含有大豆成分培养得到的上清液效果十分微弱，而乙酰基人参皂苷F1可以显著进一步增强其促进作用。

需要说明的是，以上所述仅为本发明的优选具体的实施例，若依本发明的构想所作变动，其产生的功能作用，仍未超出说明书所涵盖的精神时，均应在本发明的范围内。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种植物乳杆菌增殖剂，其为：

枯草芽孢杆菌CGMCC 18057发酵上清液。

2.权利要求1所述的增殖剂，其特征在于：

还包括6′-乙酰基人参皂苷F1，其结构如下所示：

3.权利要求1所述的增殖剂，其特征在于：

所述发酵上清液为在含有大豆成分的培养基中发酵获得的。

4.权利要求3所述的增殖剂，其特征在于：

所述发酵上清液的制备方法为：

(1)活化菌种：

取一环枯草芽孢杆菌CGMCC 18057接种到LB固体培养基中划线，37℃需氧培养24h，挑取平板中长势较好的单菌落接种至LB液体培养基中活化，最后调节浓度成10⁸cfu/ml枯草芽孢杆菌种子液；

(2)按照体积百分比为3％的接种量，将种子液接种于发酵培养基进行发酵，培养温度为25～30℃，摇床转速为150～200rpm/min，培养48-62h，获得纯培养物；

(3)将步骤(2)所得纯培养物于转速1200rpm，温度4℃条件下离心15min，取上清液进行无菌过滤，所述过滤膜孔径为0.22μm，既得。

5.权利要求4所述的增殖剂，其特征在于：

所述发酵培养基的配方为：

1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g大豆粉+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂，pH7.0。

6.权利要求1-5所述的植物乳杆菌增殖剂应用于促进植物乳杆菌生长的方法，步骤如下：

(1)制备植物乳杆菌种子液；

(2)取植物乳杆菌增殖剂溶于水，制备成10％浓度的溶液；

(3)将步骤(1)制备的植物乳杆菌种子液以2％(v/v)比例接种至灭菌的生牛乳中，加入生牛乳体积5％的步骤(2)所得的植物乳杆菌增殖剂，混合均匀，静置培养即可。