CN109157502B

CN109157502B - 基于干细胞提取物的美容护肤品及其制备方法

Info

Publication number: CN109157502B
Application number: CN201811197193.9A
Authority: CN
Inventors: 不公告发明人
Original assignee: Zhongsai Stem Cell Genetic Engineering Co ltd
Current assignee: Zhongsai stem cell genetic engineering Co.,Ltd.
Priority date: 2018-10-15
Filing date: 2018-10-15
Publication date: 2021-06-25
Anticipated expiration: 2038-10-15
Also published as: CN109157502A

Abstract

本发明公开了基于干细胞提取物的美容护肤品及其制备方法，该美容护肤品各原料的重量百分比为：植物干细胞提取物0.04‑5％，激活剂0.05‑0.6％，余量为护肤保湿液；制备方法具体为:取植物干细胞提取物以及激活剂用生理盐水溶解，然后过0.22μm滤膜，与护肤保湿液充分混匀后，获得美容护肤品；激活剂白藜芦醇氨基酸酯可以减少SASP造成的有丝分裂阻滞，降低半乳糖苷酶的活性，激活干细胞，提高具有较高增殖能力的干细胞数量，从而从根源上抵抗衰老；激活剂与番茄干细胞的协同作用，可以长久的维持皮肤的光滑和弹性，有效的防止了的细胞的衰老。

Description

基于干细胞提取物的美容护肤品及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及基于干细胞提取物的美容护肤品及其制备方法。

背景技术

皮肤是覆盖于人体表面的一个重要器官，由表皮、真皮、皮下组织和皮肤的附属器官构成，是外界环境和机体之间的一道天然屏障。然而，皮肤的保护作用是有限的，人的皮肤从20～25岁起就进入自然老化状态。一方面，随着年龄的增大，皮脂分泌量减少，角质细胞间质也减少，因而水份保持能力降低，皮肤的水份屏障功能逐步衰退，开始出现皮肤干燥问题；另一方面，表皮细胞分化能力降低，表皮恢复速率减慢，角质化功能衰退，角质层变薄，表皮萎缩产生细皱纹。人体的衰老，皱纹的出现，究其根源实质上都是细胞的衰老和减少。而细胞的衰老和减少则是由干细胞老化引起的。

干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。干细胞美容技术及相关产品近两年受到了美容界专家及业内人士的广泛关注。所有的干细胞，不论它们的来源(植物，动物或者人类)均含有特别的表观遗传因子以及丰富的营养物质，这些物质是维持干细胞的自我更新能力因子以及丰富的营养物质，这些物质是维持干细胞的自我更新能力。

干细胞美容原理是通过输注特定的多种细胞(包括各种干细胞和免疫细胞)，激活人体自身的“自愈功能”，对病变的细胞进行补充与调控，激活细胞功能，增加正常细胞的数量，提高细胞的活性，改善细胞的质量，防止和延缓细胞的病变，恢复细胞的正常生理功能，从而达到疾病康复、对抗衰老的目的。

随着动物年龄的增长，衰老细胞在各种组织中积累，分泌一系列炎症细胞因子、趋化因子、生长因子和蛋白酶，称为衰老相关的分泌表型(senescence associatedsecretory phenotype)，简称SASP；细胞在发生衰老以后，会表现出明显的衰老特征。比如，细胞在衰老之后往往会表达衰老特异性的标志物，而衰老相关的半乳糖苷酶(SA-β-gal)是目前为止能够鉴别细胞衰老的特异性最强的标志物，在多半衰老细胞中都能够运用这种染色方法检测到此标志物，而在没有发生衰老的细胞中则不能检测到。老化的细胞在衰老过程中积聚在各种组织中，它们分泌炎性细胞因子，趋化因子，蛋白酶和生长因子。这些SASP组件可以改变组织内的微环境，通过自分泌和旁分泌的方式促进细胞增殖阻滞，并最终影响邻近细胞的功能导致局部和全身功能障碍，而且这些衰老的细胞在组织中过度积累对组织再生能力产生不利的影响。减少SASP的有害影响，抑制SASP，从根源上解决抗衰老势在必行。

发明内容

本发明的目的在于提供了基于干细胞提取物的美容护肤品及其制备方法，美容护肤品中添加的激活剂与番茄干细胞的协同作用，可以长久的维持皮肤的光滑和弹性，有效的防止了的细胞的衰老。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

基于干细胞提取物的美容护肤品，各原料的重量百分比为：植物干细胞提取物0.04-5％，激活剂0.05-0.6％，余量为护肤保湿液；

所述的激活剂的制备方法为：

反应式如下：

将白藜芦醇2加入反应瓶中，加入乙醇溶解，接着加入氨基酸1，待氨基酸1溶解后，加入缩合剂，升温至60℃，搅拌反应3-4h，反应结束后，反应液经纯化得到了白藜芦醇氨基酸酯3。

白藜芦醇生物利用度低、水溶性较差，且其结构上的3个酚羟基很不稳定容易被氧化，导致稳定性差等缺点，从而限制了其应用；

天冬氨酸和谷氨酸为人体必需的氨基酸，是构成蛋白质必备的氨基酸，是人体和动物的重要营养物质，安全无害；另外，天冬氨酸具有防止和恢复疲劳的作用；谷氨酸可缩合而成性能优良的阴离子表面活性剂，广泛用于化妆品、香皂、牙膏、香波、泡沫浴液、洗洁净等产品中，生物表面活性剂N—酰基谷氨酸钠不同于化学法合成的表面活性剂，它不但性能优良，并且具有良好的生物降解性和安全性，在人体内能分解为氨基酸和脂肪酸而吸收利用；

本发明采用缩合剂法，将白藜芦醇与氨基酸进行缩合，在酚羟基上引入了氨基酸，提高了白藜芦醇的水溶性，且氨基和羧基均为亲水性基团，易与美容护肤品其他组分混合乳化；

SIRT1是一种组蛋白去乙酰化酶，可以通过去乙酰化转录因子、信号分子和组蛋白来调节细胞衰老/早衰、炎症、应激抵抗和凋亡/自噬；衰老的细胞产生炎症细胞因子形成SASP，最终导致干细胞更新受损，白藜芦醇氨基酸酯可以减少SASP造成的有丝分裂阻滞，降低半乳糖苷酶的活性，激活干细胞，提高具有较高增殖能力的干细胞数量，从而从根源上抵抗衰老。

进一步，所述的植物干细胞为番茄干细胞。番茄形成层的干细胞及其培养物能抑制与老化相关的酶的生成，抑制效率高于改善皱纹效果很强的视黄酸；激活剂与番茄干细胞的协同作用，可以长久的维持皮肤的光滑和弹性，有效的防止了的细胞的衰老。

进一步，所述的氨基酸1中的x为1或者2，当x为1时，氨基酸1为天冬氨酸，当x为2时，氨基酸1为谷氨酸。

进一步，所述的氨基酸1、白藜芦醇2和缩合剂的摩尔比为6.5:1:6.5。由于白藜芦醇结构中存在多个酚羟基，为避免副产物的生成，要氨基酸用量过大，保证白藜芦醇反应完全。

进一步，所述的缩合剂为二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶,二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1。

进一步，所述的纯化步骤具体为：反应结束后，过滤反应液，去除不溶物，滤液减压浓缩后，加入乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤，弃去水相，有机相加入无水硫酸钠脱水干燥5h，过滤，减压浓缩，石油醚-乙酸乙酯重结晶，即得到了纯化的白藜芦醇氨基酸酯3。

进一步，所述的护肤保湿液各原料的重量百分比为：透明质酸2-5％、维生素C0.5-1.5％、鲸蜡硬脂醇1-2.5％、棕榈酸乙基己酯4-8％、纤维素胶0.05-0.08％、醋酸维生素E1.5-3.5％、卡波姆0.15-0.4％、甘油6-10％、余量为水。

进一步，所述的透明质酸的分子量为5*10⁴-1*10⁵。小分子的透明质酸更易进入皮肤，起到保湿的作用；透明质酸(HA)是人体真皮层的其中一种成份，具备保持水份的能力，份量更高达其本身重量的100倍以上，人体皮肤表层(角质层)水分含量约占15-30％，透明质酸作用于皮肤内部调理后，可在不同环境中自动调节，始终维持皮肤水分在25-30％，保持皮肤的湿润、清爽，使皮肤更富有弹性，起到抗皱防皱、延缓人全皮肤衰老、美容养颜的作用。

基于干细胞提取物的美容护肤品的制备方法，具体为：取植物干细胞提取物以及激活剂用生理盐水溶解，然后过0.22μm滤膜，与护肤保湿液充分混匀后，获得美容护肤品。

本发明的有益效果：

(1)本发明的美容护肤品中添加了植物干细胞提取物以及激活剂，所述的植物干细胞为番茄干细胞，番茄形成层的干细胞及其培养物能抑制与老化相关的酶的生成，抑制效率高于改善皱纹效果很强的视黄酸；本发明采用缩合剂法，将白藜芦醇与氨基酸进行缩合，在酚羟基上引入了氨基酸，提高了白藜芦醇的水溶性，且氨基和羧基均为亲水性基团，易与美容护肤品其他组分混合乳化；白藜芦醇氨基酸酯可以减少SASP造成的有丝分裂阻滞，降低半乳糖苷酶的活性，激活干细胞，提高具有较高增殖能力的干细胞数量，从而从根源上抵抗衰老；激活剂与番茄干细胞的协同作用，可以长久的维持皮肤的光滑和弹性，有效的防止了的细胞的衰老；另外，激活剂白藜芦醇氨基酸酯还具有消炎杀菌的作用，延长了美容护肤品的保质期；

(2)在激活剂的合成反应中，选用的物料氨基酸、白藜芦醇和缩合剂的摩尔比为6.5:1:6.5，由于白藜芦醇结构中存在多个酚羟基，为避免副产物的生成，要氨基酸用量过大，保证白藜芦醇反应完全，得到的激活剂白藜芦醇氨基酸酯的收率高达93.7％；

(3)美容护肤品中添加了透明质酸，且透明质酸的分子量为5*10⁴-1*10⁵；小分子的透明质酸更易进入皮肤，起到保湿的作用；透明质酸(HA)是人体真皮层的其中一种成份，具备保持水份的能力，份量更高达其本身重量的100倍以上，人体皮肤表层(角质层)水分含量约占15-30％，透明质酸作用于皮肤内部调理后，可在不同环境中自动调节，始终维持皮肤水分在25-30％，保持皮肤的湿润、清爽，使皮肤更富有弹性，起到抗皱防皱、延缓人全皮肤衰老、美容养颜的作用。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

下述实施例中，番茄干细胞提取物的制备方法为：将番茄的外表面用锋利物造成伤口时，因植物特有的反应而想要进行再生。此时，将再生部位移到培养基板通过一般细胞培养方法使细胞增殖，培养30天后，在培养基上细胞增殖而获得大量的番茄干细胞，新生的形成层干细胞与脱分化的愈伤组织分离，将获得的形成层干细胞转移到生长培养基上培养，番茄干细胞经冷冻破碎后浓缩，得到番茄干细胞提取物。

实施例1

基于干细胞提取物的美容护肤品，各原料的重量百分比为：番茄干细胞提取物1％，激活剂0.2％，余量为护肤保湿液；

所述的护肤保湿液各原料的重量百分比为：透明质酸2％、维生素C 0.5％、鲸蜡硬脂醇2.5％、棕榈酸乙基己酯8％、纤维素胶0.05％、醋酸维生素E3.5％、卡波姆0.15％、甘油10％、余量为水；

所述的透明质酸的分子量为5*10⁴-1*10⁵；

基于干细胞提取物的美容护肤品的制备方法为：取番茄干细胞提取物以及激活剂用生理盐水溶解，然后过0.22μm滤膜，与护肤保湿液充分混匀后，获得美容护肤品。

所述的激活剂的制备方法为：

反应式如下：

将10mol白藜芦醇2加入反应瓶中，加入1L乙醇溶解，接着加入65mol氨基酸1，待氨基酸1溶解后，加入65mol缩合剂，升温至60℃，搅拌反应3h，反应结束后，过滤反应液，去除不溶物，滤液减压浓缩后，加入1L乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠溶液(1L*3)、1L饱和氯化钠溶液洗涤，弃去水相，有机相加入50g无水硫酸钠脱水干燥5h，过滤，减压浓缩，石油醚-乙酸乙酯重结晶，即得到了纯度为99.5％的白藜芦醇氨基酸酯3，收率为93.5％；

所述的氨基酸1中的x为1，氨基酸1为天冬氨酸；

所述的氨基酸1、白藜芦醇2和缩合剂的摩尔比为6.5:1:6.5；

所述的缩合剂为二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶,二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1。

实施例2

基于干细胞提取物的美容护肤品，各原料的重量百分比为：番茄干细胞提取物5％，激活剂0.6％，余量为护肤保湿液；

所述的护肤保湿液各原料的重量百分比为：透明质酸5％、维生素C 1.5％、鲸蜡硬脂醇1％、棕榈酸乙基己酯4％、纤维素胶0.05％、醋酸维生素E3.5％、卡波姆0.25％、甘油8％、余量为水；

所述的透明质酸的分子量为5*10⁴-1*10⁵；

所述的激活剂的制备方法为：

反应式如下：

将10mol白藜芦醇2加入反应瓶中，加入1L乙醇溶解，接着加入65mol氨基酸1，待氨基酸1溶解后，加入65mol缩合剂，升温至60℃，搅拌反应3h，反应结束后，过滤反应液，去除不溶物，滤液减压浓缩后，加入1L乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠溶液(1L*3)、1L饱和氯化钠溶液洗涤，弃去水相，有机相加入50g无水硫酸钠脱水干燥5h，过滤，减压浓缩，石油醚-乙酸乙酯重结晶，即得到了纯度为99.3％的白藜芦醇氨基酸酯3，收率为92.1％；

所述的氨基酸1中的x为2，氨基酸1为谷氨酸；

所述的氨基酸1、白藜芦醇2和缩合剂的摩尔比为6.5:1:6.5；

实施例3

基于干细胞提取物的美容护肤品，各原料的重量百分比为：番茄干细胞提取物0.05％，激活剂0.05％，余量为护肤保湿液；

所述的护肤保湿液各原料的重量百分比为：透明质酸3％、维生素C 1％、鲸蜡硬脂醇2％、棕榈酸乙基己酯6％、纤维素胶0.06％、醋酸维生素E2％、卡波姆0.35％、甘油7％、余量为水；

所述的透明质酸的分子量为5*10⁴-1*10⁵；

所述的激活剂的制备方法为：

反应式如下：

将10mol白藜芦醇2加入反应瓶中，加入1L乙醇溶解，接着加入65mol氨基酸1，待氨基酸1溶解后，加入65mol缩合剂，升温至60℃，搅拌反应3h，反应结束后，过滤反应液，去除不溶物，滤液减压浓缩后，加入1L乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠溶液(1L*3)、1L饱和氯化钠溶液洗涤，弃去水相，有机相加入50g无水硫酸钠脱水干燥5h，过滤，减压浓缩，石油醚-乙酸乙酯重结晶，即得到了纯度为99.6％的白藜芦醇氨基酸酯3，收率为93.7％；

所述的氨基酸1中的x为1，氨基酸1为天冬氨酸；

所述的氨基酸1、白藜芦醇2和缩合剂的摩尔比为6.5:1:6.5；

对比实施例1

基于干细胞提取物的美容护肤品，不添加番茄干细胞提取物和激活剂，配方(同实施例3中护肤保湿液配方)为：各原料的重量百分比为：透明质酸3％、维生素C 1％、鲸蜡硬脂醇2％、棕榈酸乙基己酯6％、纤维素胶0.06％、醋酸维生素E2％、卡波姆0.35％、甘油7％、余量为水。

对比实施例2

基于干细胞提取物的美容护肤品，不添加番茄干细胞提取物，其余同实施例3。

对比实施例3

基于干细胞提取物的美容护肤品，不添加激活剂，其余同实施例3。

激活剂白藜芦醇氨基酸酯的抑菌活性测试：

采用微量稀释法实施例1和实施例2制备的白藜芦醇氨基酸酯对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌这三株致病菌的抑菌活性，测试结果如表一所示；

表一、实施例1、2制备的白藜芦醇氨基酸酯对细菌的抑制活性测试结构

由表一可知，实施例1和实施例2制备的白藜芦醇氨基酸酯对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均表现出了良好的抑菌活性。

对制备的美容护肤品进行性能测试：

招募60名女性受试者，年龄18-40岁，分成6组，每组10人，每位受试者均被告知整个研究过程，并签署知情同意书。6组受试者分别每天早晚涂抹实施例1-3和对比例1-3制备的美容护肤品3g(第一组涂抹实施例1的美容护肤品，第二组涂抹实施例2的美容护肤品，第三组涂抹实施例3的美容护肤品，，第四组涂抹对比例1的美容护肤品，第五组涂抹对比例2的美容护肤品，第六组涂抹对比例3的美容护肤品)，连续使用30天，期间不使用其他护肤产品，正常活动。在使用前及使用30天后，由测试者使用皮肤弹性测试仪及MicroSkinII多功能皮肤镜图像分析系统测定使用部位的弹性及皮肤纹理。每点测5次，取平均值。统计使用美容护肤品后的面部皮肤变化情况，并计算算数平均粗糙度变化率(简记为A)和弹性相对变化率(简称为B)。

其中，算数平均粗糙度变化率(A)＝(使用后平均粗糙度-使用前平均粗糙度)/使用前平均粗糙度，算数平均粗糙度变化率(A)的计算结果如表二所示：

表二、算数平均粗糙度变化率(A)

组别	实施例1	实施例2	实施例3	对比例1	对比例2	对比例3
							A％	-22	-25	-20	11	-12	-8

注：算数平均粗糙反反应了皮肤的光滑程度，值越低表示皮肤越光滑，算数平均粗糙度变化率A为负值表示皮肤有改善。

由表二可知，本发明涂抹本发明提供的美容护肤品后皮肤光滑度提升，说明本发明提供的美容护肤品具有抗衰老促进皮肤增生的功效。同时，本发明实施例1-3的美容护肤品的效果明显优于对比例1-对比例3，从而从证明本发明提供的激活剂与番茄干细胞提取物存在协同作用，其所实现的功效并不仅是各组分单独使用时功效的简单叠加。

弹性相对变化率(B)的计算公式为：弹性相对变化率＝(使用后弹性-使用前弹性)/使用前域弹性，弹性相对变化率(B)的计算结果如表三所示：

表三、弹性相对变化率(B)

组别	实施例1	实施例2	实施例3	对比例1	对比例2	对比例3
							B％	34	38	32	7	16	10

注：弹性相对变化率越大，说明抗衰老效果越明显。

由表三可知，本发明涂抹本发明提供的美容护肤品后皮肤弹性变化率上述，说明本发明提供的美容护肤品具有抗衰老的功效。同时，本发明实施例1-3的美容护肤品的效果明显优于对比例1-3，从而从证明本发明提供的美容护肤品中的各活性组分之间存在协同作用，该美容护肤品实现的功效并不仅是各组分单独使用时功效的简单叠加。

以上内容仅仅是对本发明的构思所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims

1.基于干细胞提取物的美容护肤品，其特征在于：各原料的重量百分比为：植物干细胞提取物0.04-5％，激活剂0.05-0.6％，余量为护肤保湿液；

所述的激活剂的制备方法为：

反应式如下：

将白藜芦醇2加入反应瓶中，加入乙醇溶解，接着加入氨基酸1，待氨基酸1溶解后，加入缩合剂，升温至60℃，搅拌反应3-4h，反应结束后，反应液经纯化得到了白藜芦醇氨基酸酯3；所述的缩合剂为二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶,二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1；

所述的植物干细胞为番茄干细胞；番茄干细胞提取物的制备方法为：将番茄的外表面用锋利物造成伤口，将再生部位移到培养基板通过一般细胞培养方法使细胞增殖，培养30天后，在培养基上细胞增殖而获得番茄干细胞，新生的形成层干细胞与脱分化的愈伤组织分离，将获得的形成层干细胞转移到生长培养基上培养，番茄干细胞经冷冻破碎后浓缩，得到番茄干细胞提取物；

所述的氨基酸1中的x为1或者2，当x为1时，氨基酸1为天冬氨酸，当x为2时，氨基酸1为谷氨酸；

该基于干细胞提取物的美容护肤品的制备方法具体为:取植物干细胞提取物以及激活剂用生理盐水溶解，然后过0.22μm滤膜，与护肤保湿液充分混匀后，获得美容护肤品。

2.根据权利要求1所述的基于干细胞提取物的美容护肤品，其特征在于：所述的氨基酸1、白藜芦醇2和缩合剂的摩尔比为6.5:1:6.5。

3.根据权利要求1所述的基于干细胞提取物的美容护肤品，其特征在于：所述的纯化步骤具体为：反应结束后，过滤反应液，去除不溶物，滤液减压浓缩后，加入乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤，弃去水相，有机相加入无水硫酸钠脱水干燥5h，过滤，减压浓缩，石油醚-乙酸乙酯重结晶，即得到了纯化的白藜芦醇氨基酸酯3。

4.根据权利要求1所述的基于干细胞提取物的美容护肤品，其特征在于：所述的护肤保湿液各原料的重量百分比为：透明质酸2-5％、维生素C 0.5-1.5％、鲸蜡硬脂醇1-2.5％、棕榈酸乙基己酯4-8％、纤维素胶0.05-0.08％、醋酸维生素E1.5-3.5％、卡波姆0.15-0.4％、甘油6-10％、余量为水。

5.根据权利要求4所述的基于干细胞提取物的美容护肤品，其特征在于：所述的透明质酸的分子量为5×10⁴-1×10⁵。