CN109153640B - 用抗病毒剂消除乙型肝炎病毒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于预防、治疗或治愈人受试者或其他动物宿主中的乙型肝炎(HBV)感染的化合物、组合物和方法。所述化合物也是其药学上可接受的盐、前药和其它衍生物，作为用于治疗、预防或根除HBV感染的药物组合物和方法。

Description

用抗病毒剂消除乙型肝炎病毒
技术领域
本发明涉及用于预防、治疗和/或治愈乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染的化合物、方法和组合物。更具体地，本发明具体描述了取代的芳族/杂芳族化合物、其药学上可接受的盐或其他衍生物，及其在治疗HBV感染中的用途。
背景技术
乙型肝炎病毒(HBV)引起严重的人类健康问题，是仅次于烟草的人类癌症的原因。HBV诱发癌症的机制尚不清楚。据推测，它可能直接触发肿瘤发展，或通过慢性炎症、肝硬化和与感染相关的细胞再生而间接触发肿瘤发展。
在潜伏期期间宿主通常不会察觉到感染，在2至6个月的潜伏期之后，HBV感染可导致急性肝炎和肝脏损伤，导致腹痛、黄疸和某些酶的血液水平升高。HBV可引起暴发性肝炎，这是一种快速进展的、通常致命的疾病形式，其中大部分肝脏被破坏。
受试者通常会从HBV感染的急性期恢复。然而，在一些患者中，病毒持续复制很长一段时间或无限复制，导致慢性感染。慢性感染可导致慢性持续性肝炎。感染慢性持续性HBV的患者在发展中国家最为常见。到1991年中期，仅亚洲就有大约2.25亿HBV慢性携带者，全球有近3亿携带者。慢性持续性肝炎可导致疲劳、肝硬化和肝细胞癌(一种原发性肝癌)。
在工业化国家，HBV感染的高风险人群包括与HBV携带者或其血液样本接触的人群。HBV的流行病学与HIV/AIDS的流行病学非常相似，这是HBV感染在感染HIV或患有AIDS的患者中常见的原因。然而，HBV比HIV更具传染性。
3TC(拉米夫定(lamivudine))、干扰素α-2b、聚乙二醇干扰素α-2a、贺维力(hepsera)(阿德福韦酯(adefovir dipivoxil))、博路定(baraclude)(恩替卡韦(entecavir))和替泽卡(Tyzeka)(替比夫定(Telbivudine))是目前FDA批准用于治疗HBV感染的药物。另一种核苷，替诺福韦艾拉酚胺富马酸盐(tenofovir alafenamide fumarate，TAF)(以前称为GS-7340)目前处于3期。所有这些药物在降低病毒载量方面都非常有效，但这些药物都不能治愈HBV。此外，它们的影响可能受到耐药性、低效率和耐受性问题的限制。HBV的低治愈率至少部分归因于受感染的肝细胞核中共价闭合环状DNA(covalentlyclosed circular DNA，cccDNA)的存在和持续。
因此，迫切需要这样的新的HBV药物，其有效、安全，通过不同于核苷类似物的机制起作用，并且可以减少HBV的潜伏形式(称为cccDNA)。
提供新的抗病毒剂、包括这些剂的组合物以及使用这些剂治疗HBV和预防耐药性HBV的出现的治疗方法将是有利的。本发明提供了这样的剂、组合物和方法。
发明内容
本发明提供了用于预防、治疗和/或治愈宿主中HBV感染或降低宿主中HBV活性的化合物、方法和组合物。所述方法涉及施用治疗有效量或预防有效量的至少一种如本文所述的化合物，以治疗、治愈或预防HBV感染，或施用足以降低HBV感染的生物活性的量。
所述化合物还可用于治疗其他病毒感染，包括黄病毒科病毒，例如西尼罗河病毒(West Nile virus，WNV)和丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)、登革热、寨卡病毒感染。
药物组合物包括一种或多种本文所述的化合物，以及药学上可接受的载体或赋形剂，用于治疗感染HBV的宿主。这些化合物可与HBV的核苷和非核苷抑制剂组合使用。制剂可进一步包括至少一种其他治疗剂。此外，本发明包括制备这些化合物的方法。
在一个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000031
或其药学上可接受的盐或前药，
其中：
A是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基；
B是含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元或七元环或六元或七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环，或C5-14双环，
当R1和R1’与碳连接时，它们独立地为氢、卤素(包括F、Cl、Br和I)、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C2-6烯基、氰基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；
当R1和R1’与氮连接时，它们独立地为氢、C2-6烷氧基、C3-6烷氧基烷基、C2-6烯基、烷氧基羰基、羰基烷基、羰基芳基、C1-6烷基、杂环基烷基、C2-6羟烷基或S(O)2R’；
每个R’独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、芳基、杂芳基、烷基芳基或芳基烷基，或者如果两个R’存在于相同的氮原子上，则它们可以结合在一起形成任选含有N、O或S杂原子的C3-6环；
R’基团可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地为卤素、C1-6卤代烷基、C1-6羟烷基、羟基、羧基、酰基、芳基、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、烷氧基烷基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫醇、亚胺、磺酰基(sulfonyl)、硫烷基(sulfanyl)、亚磺酰基(sulfinyl)、氨磺酰基(sulfamonyl)、酯、羧酸、酰胺、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦、硫酯、硫醚、酸性卤化物、酸酐、肟、肼(hydrozine)、氨基甲酸酯、膦酸或膦酸酯，其是未受保护的或视需要受到保护的，如本领域技术人员已知的，例如Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，第二版，1991教导的，在此通过引用并入；
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
X是
Figure BDA0001848657530000041
或
Figure BDA0001848657530000042
R3是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R2是C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，芳基如苯基，杂芳基，包括含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环和含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，烷基芳基，芳基烷基，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元环或六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；环烷基、烷基杂芳基或烷基芳基；
R2任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；或者任选地被芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基。
或者
R2和R3可以与它们所连接的氮一起形成6-10元双环或桥环、3-8饱和环或5元不饱和环；这种双环、桥环、饱和环和不饱和环任选地含有一个或多个另外的杂原子，其中杂原子各自独立地为O、S或N，并且任选地被一个或多个取代基取代，其中所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br、I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟基烷基。
在第二个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000051
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如关于式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
C是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基芳基或烷基杂芳基；
D是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，或C5-14双环，
Y是
Figure BDA0001848657530000061
或
Figure BDA0001848657530000062
R4是H或C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基；在一个实施方案中，R4是C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，
R5是烷基芳基，芳基烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，芳基如苯基，杂芳基，包括含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环和含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；和含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元桥环或螺稠合环；在一个实施方案中，R5是烷基芳基，芳基烷基，苯基，五元或六元杂芳基，或含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元桥环或螺稠合环；
R5任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、环烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；或者被芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基；
其中，在一个实施方案中，如果C是苯基，则D不是苯基或5-元环杂芳基，在另一个实施方案中，如果C是苯基且D是苯基或5-元环杂芳基，则R5不是烷基芳基、烯基或六元桥环；
或者当Y是
Figure BDA0001848657530000063
时，R4和R5与它们所连接的氮一起形成任选被一个或多个取代基取代的3至4元环，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br、I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基。
在一个实施方案中，D是
Figure BDA0001848657530000071
其中R6是H、Cl、F或Br，并且R7是H、甲基、F或Cl。
在这一实施方案的一个方面，当Y是
Figure BDA0001848657530000072
时，则R5不是
Figure BDA0001848657530000073
Figure BDA0001848657530000074
在这一实施方案的另一方面，当R4是乙基时，则R5不是
Figure BDA0001848657530000075
在第三个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000076
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如关于式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
E是含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个各自独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基；
F是含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，或C4-14双环，
Z是
Figure BDA0001848657530000081
或
Figure BDA0001848657530000082
R8是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R9是C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环，或者三元环；
R9任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、环烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；或者被芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基；或者
R8和R9可以与它们所连接的氮一起形成6-10元双环或桥环或3至8饱和环；这种双环、桥环和饱和环部分任选地含有一个或多个另外的杂原子，所述杂原子独立地为O、S或N，并且任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟基烷基。
在第四个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000091
或其药学上可接受的盐或前药，其中
G是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基；
H是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，任选地含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的六元非芳香环；或C4-14双环；
当R1和R1’与碳连接时，它们独立地为氢、卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；
当R1和R1’与氮连接时，它们独立地为氢、C1-6烷氧基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、羰基烷基、羰基芳基、C1-6烷基、C2-6炔基、C2-6烯基、杂环基烷基、C1-6羟烷基或S(O)2R’；
每个R'独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、芳基、杂芳基、烷基芳基或芳基烷基，或者如果两个R'存在于相同的氮原子上，则它们可以结合在一起形成任选含有N、O或S的C3-6烷基环；其中R'基团可以被一个或多个如上定义的取代基取代，例如，C1-6羟烷基、氨基烷基和烷氧基烷基；
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
W是
Figure BDA0001848657530000101
R10是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R11为C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，芳基，杂芳基，烷基芳基，芳基烷基，苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元环或六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的七元桥环或螺稠合环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；三元环，烷基杂芳基或烷基芳基；
其中R11任选地被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：卤素(包括F、Cl、Br和I)、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C2-6烯基、氰基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基、C1-6羟烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基；
或者
R10和R11可以与它们所连接的氮一起形成6-10元双环或桥环或3至8饱和环；这种双环、桥环或饱和环部分任选地含有一个或多个另外的杂原子，所述杂原子各自独立地为O、S或N，并且任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟基烷基。
在第五个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000111
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如关于式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
I是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，C4-14双环；烷基杂芳基或烷基芳基；
J是含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元或七元环或六元或七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；或含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环，
W是
Figure BDA0001848657530000112
R12是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R13是C2-6烯基，C2-6炔基，芳基包括苯基，杂芳基，包括含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环和含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；烷基芳基，芳基烷基，C4-14双环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元桥环或螺稠合环，
R13任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由以下组成的组：氢、卤素(F、Cl、Br、I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、环烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；或者任选地被芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基；
或者R12和R13与它们所连接的氮一起形成任选被一个或多个取代基取代的3至4元环，所述取代基各自独立地选自由以下组成的组：氢、卤素(F、Cl、Br、I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基和C1-6羟烷基。
在第六个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000121
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如关于式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
K是含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基；
L是含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元或七元环或六元或七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环，或C4-14双环，
W是
Figure BDA0001848657530000131
R14是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R15是C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元环或六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；
R15任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地为卤素(F、Cl、Br、I)、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、环烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；或者任选地被芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基；
或者
R14和R15可以与它们所连接的氮一起形成6-10元双环或桥环或3至8饱和环；这种双环、桥环和饱和环部分任选地含有一个或多个另外的杂原子，所述杂原子独立地为O、S或N，并且任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由以下组成的组：卤素(包括F、Cl、Br和I)、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基和C1-6羟基烷基。
在第七个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000141
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如关于式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
M是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基，
N是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元或七元环或六元或七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；或C4-14双环，
V是
Figure BDA0001848657530000142
或者
Figure BDA0001848657530000143
并且
R16是C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，芳基如苯基，杂芳基，如含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环或含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元环或六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；烷基芳基，芳基烷基，烷基杂芳基或烷基芳基，其中R16任选地被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：卤素(包括F、Cl、Br和I)、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C2-6烯基、氰基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基、C1-6羟烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基。
落在本发明范围内的代表性化合物包括以下：
Figure BDA0001848657530000151
Figure BDA0001848657530000161
及其药学上可接受的盐或前药。
另外的化合物还包括
Figure BDA0001848657530000162
Figure BDA0001848657530000171
，及其药学上可接受的盐或前药。
特别优选的化合物包括：
Figure BDA0001848657530000181
或其药学上可接受的盐或前药。
还公开了包含式I-VII化合物中的一种或多种和药学上可接受的载体的药物组合物。载体可以是例如口服组合物、可注射组合物、透皮组合物或纳米颗粒组合物。组合物可以进一步包括第二抗病毒剂，特别是其中所述剂具有抗HBV感染的活性，更特别地，其中第二抗病毒剂具有通过与本文描述的化合物不同的机制抗HBV感染的活性。
第二抗病毒剂的代表性类型包括聚合酶抑制剂、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装调节剂、IMPDH抑制剂、蛋白酶抑制剂、基于免疫的治疗剂、逆转录酶抑制剂、TLR-激动剂和不同或未知机制的剂。可以使用这些剂的组合。
本文所述的化合物可用于制备用于治疗HBV感染、预防HBV感染或降低HBV感染的生物学活性的药物。药物可进一步包括另一种抗HBV剂。
所述化合物和组合物可用于治疗感染HBV的宿主、预防HBV感染和降低宿主中HBV感染的生物学活性的方法中。所述方法还可以包括共同施用另一种抗HBV剂，该共同施用可以同时或相继进行。
在以下具体实施方式中进一步解释了本发明的这些和其他方面。
附图说明
图1示出了在通常会形成衣壳的条件下孵育HBVCp149的结果的一系列电子显微照片，并且其中孵育伴随着添加公认的活性剂，其中活性剂至少部分地通过抑制衣壳形成而起作用。在仅使用媒介物(vehicle)进行孵育的情况下，电子显微照片显示衣壳为完整的(fully-formed)空心球体形式。当与GLS4一起孵育时，衣壳形成错误组装的空心球体，与化合物7a一起孵育时，衣壳形成不完整的空心球体，丰度相对较低。
图2示出了用媒介物(显示衣壳为完整的空心球体形式)、用GLS4(显示衣壳形成了错误组装的空心球体)和用化合物7a(显示衣壳形成了不完整的空心球体，丰度相对较低)处理的HBV Cp149衣壳的一系列电子显微照片。
图3示出了图2中所示衣壳的一系列电子显微照片，其中前两张显微照片重复出现，并且第三张显微照片放大了第二个显微照片的部分，以增加对衣壳的损伤的观察。
图4示出了图2中所示衣壳的一系列电子显微照片，其中第一张和第三张显微照片作为第一张和第二张显微照片重复出现。示出的第三张显微照片放大了第二张显微照片的部分，以增加对衣壳的损伤的观察。
结果表明，该化合物有效地破坏了HBV衣壳的形成。
具体实施方式
公开了可用于治疗、预防或治愈HBV感染的化合物和组合物。还公开了用于治疗、预防或治愈HBV感染的方法。
本文所述的化合物在基于细胞的测定中显示出对HBV的抑制活性。因此，所述化合物可用于治疗或预防宿主中的HBV，或降低病毒的生物学活性。宿主可以是感染HBV的哺乳动物，特别是人。所述方法涉及施用有效量的一种或多种本文所述的化合物。
还公开了药物制剂，其包含一种或多种本文所述的化合物，以及药学上可接受的载体或赋形剂。在一个实施方案中，制剂包括至少一种本文所述的化合物和至少一种其他治疗剂。
参考以下定义将更好地理解本发明：
I.定义
术语“独立地”在本文中用于表示独立应用的变量因应用而独立变化。因此，在诸如其中R”“独立地为碳或氮”的R”XYR”的化合物中，两个R”可以都是碳，两个R”可以都是氮，或者一个R”可以是碳，另一个R”可以是氮。
如本文所用，术语“对映异构体纯的”是指包含至少约95％，优选约97％、98％、99％或100％的该化合物的单一对映异构体的化合物组合物。
如本文所用，术语“基本上不含”或“基本上不存在”是指包含至少85％至90％重量，优选95％至98％重量，甚至更优选地，99％至100％重量的该化合物的指定对映异构体的化合物组合物。在一个优选的实施方案中，本文所述的化合物基本上不含对映异构体。
类似地，术语“分离的”是指这样的化合物组合物，其包含至少85％至90％重量，优选95％至98％重量，甚至更优选地，99％至100％重量的化合物，其余包含其他化学物质或对映异构体。
除非另有说明，否则本文所用的术语“烷基”是指饱和的直链、支链或环状伯、仲或叔烃，包括取代和未取代的烷基。烷基可以任选地被不另外干扰反应或者提供该方法的改进的任意部分取代，包括但不限于卤素、卤代烷基、羟基、羧基、酰基、芳基、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫醇、亚胺、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、氨磺酰基、酯、羧酸、酰胺、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦、硫酯、硫醚、酰卤、酸酐、肟、肼、氨基甲酸酯、膦酸、膦酸酯，其是未受保护的或视需要受到保护的，如本领域技术人员已知的，例如如Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，第二版，1991所教导的，在此通过引用并入。具体包括CF3和CH2CF3。
在本文中，每当使用术语C(烷基范围)时，该术语独立地包括该类的每个成员，如同具体地、单独地列出一样。术语“烷基”包括C1-22烷基部分，术语“低级烷基”包括C1-6烷基部分。本领域普通技术人员应理解，相关的烷基基团通过用后缀“-基(-yl)”代替后缀“-烷烃(-ane)”来命名。
如本文所用，“桥连烷基(bridged alkyl)”是指双环或三环烷烃，例如，2：1：1双环己烷。
如本文所用，“螺烷基(spiro alkyl)”是指连接在单个(季)碳原子上的两个环。
术语“烯基”是指不饱和的烃基，为直链或支链，只要它含有一个或多个双键即可。本文公开的烯基可任选地被对反应过程无不利影响的任意部分取代，包括但不限于对烷基部分上的取代基所描述的那些。烯基的非限制性实例包括乙烯、甲基乙烯、异亚丙基、1,2-乙烷-二基、1,1-乙烷-二基、1,3-丙烷-二基、1,2-丙烷-二基、1,3-丁烷-二基和1,4-丁烷-二基。
术语“炔基”是指不饱和的无环烃基，为直链或支链，只要它含有一个或多个三键即可。炔基可以任选地被对反应过程无不利影响的任意部分取代，包括但不限于上述对烷基部分描述的那些。合适的炔基的非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、羟丙炔基、丁炔-1-基、丁炔-2-基、戊炔-1-基、戊炔-2-基、4-甲氧基戊炔-2-基、3-甲基丁炔-1-基、己炔-1-基、己炔-2-基和己炔-3-基、3,3-二甲基丁炔-1-基。
术语“烷基氨基”或“芳基氨基”分别指具有一个或两个烷基或芳基取代基的氨基。
除非另外定义，否则本文所用的术语“受保护的”是指加到氧、氮或磷原子以防止其进一步反应或用于其它目的的基团。多种氧和氮保护基团是有机合成领域技术人员已知的，描述于例如Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis，同上。
单独或组合使用的术语“芳基”是指含有一个、两个或三个环的碳环芳族体系，其中这些环可以以悬垂方式连接在一起或者可以稠合。芳基的非限制性实例包括苯基、联苯基或萘基，或从芳环除去氢后保留的其它芳族基团。术语芳基包括取代和未取代的部分。芳基可任选地被对过程无不利影响的任意部分取代，包括但不限于上述对烷基部分所描述的那些。取代的芳基的非限制性实例包括杂芳基氨基、N-芳基-N-烷基氨基、N-杂芳基氨基-N-烷基氨基、杂芳烷氧基、芳基氨基、芳烷基氨基、芳硫基、单芳基酰氨磺酰基、芳基亚磺酰氨基、二芳基酰氨磺酰基、单芳基酰氨基磺酰基、芳基亚磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基硫基、杂芳基亚磺酰基、杂芳基磺酰基、芳酰基、杂芳酰基、芳烷酰基、杂芳烷酰基、羟基芳烷基、羟基杂芳烷基、卤代烷氧基烷基、芳基、芳烷基、芳氧基、芳烷氧基、芳氧基烷基、饱和杂环基、部分饱和的杂环基、杂芳基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基、芳烷基、杂芳基烷基、芳基烯基和杂芳基烯、芳烷氧羰基(carboaralkoxy)。
术语“烷芳基”或“烷基芳基”是指具有芳基取代基的烷基。术语“芳烷基”或“芳基烷基”是指具有烷基取代基的芳基。
本文所用的术语“卤素”包括氯、溴、碘和氟。
术语“酰基”是指这样的羧酸酯，其中酯基的非羰基部分选自直链、支链或环状烷基或低级烷基，烷氧基烷基(包括但不限于甲氧基甲基)，芳烷基(包括但不限于苄基)，芳氧基烷基(如苯氧基甲基)，芳基(包括但不限于苯基)，其任选地被卤素(F、Cl、Br或I)、烷基(包括但不限于C1、C2、C3和C4)或烷氧基(包括但不限于C1、C2、C3和C4)取代，磺酸酯(如烷基或芳烷基磺酰基，包括但不限于甲磺酰基)，单、二或三磷酸酯，三苯甲基或单甲氧基三苯甲基，取代的苄基，三烷基甲硅烷基(例如二甲基-叔丁基甲硅烷基)和二苯基甲基甲硅烷基。酯中的芳基最佳地包含苯基。术语“低级酰基”是指这样的酰基，其中非羰基部分是低级烷基。
术语“烷氧基”和“烷氧基烷基”包括具有烷基部分的直链或支链含氧基团，例如甲氧基。术语“烷氧基烷基”还包括具有一个或多个与烷基连接的烷氧基的烷基，即，形成单烷氧基烷基和二烷氧基烷基。“烷氧基”基团可以进一步被一个或多个卤原子取代，例如氟、氯或溴，以提供“卤代烷氧基”基团。这些基团的实例包括氟甲氧基、氯甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟乙氧基、氟乙氧基、四氟乙氧基、五氟乙氧基和氟丙氧基。
术语“烷基氨基”表示分别含有一个或两个与氨基连接的烷基的“单烷基氨基”和“二烷基氨基”。术语芳基氨基表示分别含有一个或两个与氨基连接的芳基的“单芳基氨基”和“二芳基氨基”。术语“芳烷基氨基”包括与氨基连接的芳烷基。术语芳烷基氨基表示分别含有一个或两个与氨基连接的芳烷基的“单芳烷基氨基”和“二芳烷基氨基”。术语芳烷基氨基还表示含有与氨基连接的一个芳烷基和一个烷基的“单芳烷基单烷基氨基”。
如本文所用，术语“杂原子”是指氧、硫、氮和磷。
本文所用的术语“杂芳基”或“杂芳族”是指芳环中包含至少一个硫、氧、氮或磷的芳族化合物。
术语“杂环”、“杂环基”和环杂烷基是指非芳族环状基团，其中在环中存在至少一个杂原子，例如氧、硫、氮或磷。
杂芳基和杂环基团的非限制性实例包括呋喃基(furyl)、呋喃基(furanyl)、吡啶基、嘧啶基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、四唑基、吡嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻吩基、异苯并呋喃基、吡唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并咪唑基、嘌呤基、咔唑基、恶唑基、噻唑基、异噻唑基、1,2,4-噻二唑基、异恶唑基、吡咯基、喹唑啉基、噌啉基(cinnolinyl)、酞嗪基、黄嘌呤基(xanthinyl)、次黄嘌呤基(hypoxanthinyl)、噻吩、呋喃、吡咯、异吡咯、吡唑、咪唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、恶唑、异恶唑、噻唑、异噻唑、嘧啶或哒嗪和蝶啶基、氮丙啶、噻唑、异噻唑、1,2,3-恶二唑、噻嗪、吡啶、吡嗪、哌嗪、吡咯烷、氧氮杂环丙烷(oxazirane)、吩嗪、吩噻嗪、吗啉基、吡唑基、哒嗪基、吡嗪基、喹喔啉基、黄嘌呤基、次黄嘌呤基、蝶啶基、5-氮杂胞苷基(5-azacytidinyl)、5-氮杂尿嘧啶基(5-azauracilyl)、三唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、腺嘌呤、N6-烷基嘌呤、N6-苄基嘌呤、N6-卤代嘌呤、N6-乙烯基嘌呤(vinypurine)、N6-炔嘌呤、N6-酰基嘌呤、N6-羟烷基嘌呤、N6-硫代烷基嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、6-氮杂嘧啶、2-巯基嘧啶、尿嘧啶、N5-烷基嘧啶、N5-苄基嘧啶、N5-卤代嘧啶、N5-乙烯基嘧啶、N5-炔嘧啶、N5-酰基嘧啶、N5-羟烷基嘌呤和N6-硫代烷基嘌呤和异恶唑基。杂芳族基团可以任选地如上对于芳基所述被取代。杂环或杂芳族基团可任选地被一个或多个选自卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、羧基衍生物、酰氨基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基的取代基取代。杂芳族化合物可根据需要部分或完全氢化。作为非限制性实例，可以使用二氢吡啶代替吡啶。可以根据需要或期望保护杂环或杂芳基上的官能氧和氮基团。合适的保护基团是本领域技术人员熟知的，包括三甲基甲硅烷基、二甲基己基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基、三苯甲基或取代的三苯甲基、烷基、酰基如乙酰基和丙酰基、甲磺酰基和对甲苯磺酰基。杂环或杂芳族基团可以被对反应无不利影响的任意部分取代，包括但不限于但不限于上述对于芳基所描述的那些。
如本文所用，术语“宿主”是指病毒可以在其中复制的单细胞或多细胞生物体，包括但不限于细胞系和动物，并且优选人。或者，宿主可以携带病毒基因组的一部分，其复制或功能可以被本发明的化合物改变。术语宿主特别是指感染的细胞，用全部或部分病毒基因组转染的细胞，和动物，特别是灵长类动物(包括但不限于黑猩猩)和人类。在本发明的大多数动物应用中，宿主是人类。然而，在某些适应症中，本发明清楚地考虑兽医应用(例如用于治疗黑猩猩)。
术语“肽”是指含有2至100个氨基酸的天然或合成化合物，这些氨基酸通过一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基连接。
在整个说明书中使用术语“药学上可接受的盐或前药”来描述化合物的任意药学上可接受的形式(例如酯)，在向患者施用该形式后提供该化合物。药学上可接受的盐包括衍生自药学上可接受的无机碱和无机酸或有机碱和有机酸的盐。合适的盐包括衍生自碱金属如钾和钠、碱土金属如钙和镁以及制药领域熟知的许多其它酸的盐。
在整个说明书中使用术语“药学上可接受的盐或前药”来描述化合物的任意药学上可接受的形式(例如酯)，在向患者施用该形式后提供该化合物。药学上可接受的盐包括衍生自药学上可接受的无机碱和无机酸或有机碱和有机酸的盐。合适的盐包括衍生自碱金属如钾和钠、碱土金属如钙和镁以及制药领域熟知的许多其它酸的盐。药学上可接受的前药是指在宿主中被代谢(例如被水解或氧化)以形成本发明化合物的化合物。前药的典型实例包括在活性化合物的功能部分上具有生物学上不稳定的保护基团的化合物。前药包括可被氧化、还原、胺化、脱氨基、羟基化、脱羟基化、水解、脱水、烷基化、脱烷基化、酰化、脱酰化、磷酸化或去磷酸化以产生活性化合物的化合物。本发明化合物的前药形式可具有抗病毒活性，可被代谢形成表现出这种活性的化合物，或二者兼具。
II.活性化合物
乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)的包膜的部分双链DNA(dsDNA)病毒。它的基因组包含4个重叠阅读框：前核心/核心基因；聚合酶基因；L、M和S基因，其编码3个包膜蛋白；和X基因。
感染后，部分双链DNA基因组(松弛的环状DNA；rcDNA)在宿主细胞的细胞核中转化为共价闭合的环状DNA(cccDNA)，并转录病毒mRNA。一旦被衣壳化，前基因组RNA(pgRNA)(它也编码核心蛋白和Pol)则用作逆转录的模板，其再生核衣壳中的部分dsDNA基因组(rcDNA)。
在乙型肝炎感染后，cccDNA可以在进行临床治疗后保留在肝细胞中，并且可以重新激活。存在的cccDNA的相对量是HBV治疗的指标(Bourne等人，(2007年1月)."Quantitative analysis of HBV cccDNA from clinical specimens:correlation withclinical and virological response during antiviral therapy".Journal of ViralHepatitis 14(1):56–63)。
衣壳是病毒的蛋白质壳，包括由称为原体的蛋白质组成的寡聚结构亚基。可观察到的三维形态亚基(可能对应于或不对应于单个蛋白质)被称为壳粒。衣壳包围病毒的遗传物质。
在体内，HBV衣壳围绕RNA-逆转录酶复合物组装。为了将RNA前基因组逆转录成成熟DNA形式，需要组装衣壳。在HBV中，衣壳的主要形式由120个衣壳蛋白二聚体拷贝组成。甚至衣壳蛋白的适度突变都会对子代病毒的活力产生显著影响。
本文所述的大多数化合物具有作为衣壳抑制剂的活性。抑制衣壳组装可以减少cccDNA(HBV的主要储库)，也可以降低HBV DNA、HBeAg和HBsAg的水平。
在一个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000261
或其药学上可接受的盐或前药，其中
A是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基；
B是含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元或七元环或六元或七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环，或C4-14双环，
当R1和R1’与碳连接时，它们独立地为氢、卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C2-6烯基、氰基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；
当R1和R1’与氮连接时，它们独立地为氢、C2-6烷氧基、C3-6烷氧基烷基、C2-6烯基、烷氧基羰基、羰基烷基、羰基芳基、C1-6烷基、杂环基烷基、C2-6羟烷基或S(O)2R’；
每个R’独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、芳基、杂芳基、烷基芳基或芳基烷基，或者如果两个R’存在于相同的氮原子上，则它们可以结合在一起形成任选含有N、O或S杂原子的C3-6环；
R’基团可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地为卤素、C1-6卤代烷基、C1-6羟烷基、羟基、羧基、酰基、芳基、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、烷氧基烷基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫醇、亚胺、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、氨磺酰基、酯、羧酸、酰胺、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦、硫酯、硫醚、酸性卤化物、酸酐、肟、肼、氨基甲酸酯、膦酸或膦酸酯，其是未受保护的或视需要受到保护的，如本领域技术人员已知的，例如Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis，JohnWiley and Sons，第二版，1991教导的，在此通过引用并入；
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
X是
Figure BDA0001848657530000271
或
Figure BDA0001848657530000272
R3是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R2是C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，芳基如苯基，杂芳基，包括含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环和含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，烷基芳基，芳基烷基，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元环或六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；环烷基、烷基杂芳基或烷基芳基；
R2任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；或者被芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基。
R2和R3可以与它们所连接的氮一起形成6-10元双环或桥环、3-8饱和环或5元不饱和环；这种双环、桥环、饱和环和不饱和环任选地含有一个或多个另外的杂原子，其中杂原子各自独立地为O、S或N，并且任选地被一个或多个取代基取代，其中所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br、I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟基烷基。
在第二个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000281
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
C是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基芳基或烷基杂芳基；
D是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，或C4-14双环，
Y是
Figure BDA0001848657530000291
或
Figure BDA0001848657530000292
R4是H或C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基；在一个实施方案中，R4是C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，
其中，在一个实施方案中，如果C是苯基，则D不是苯基或5-元环杂芳基，在另一个实施方案中，如果C是苯基且D是苯基或5-元环杂芳基，则R5不是烷基芳基、烯基或六元桥环；
R5是烷基芳基，芳基烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，芳基如苯基，杂芳基，包括含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环和含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；和含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元桥环或螺稠合环；在一个实施方案中，R5是烷基芳基，芳基烷基，苯基，五元或六元杂芳基，或含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元桥环或螺稠合环；
R5任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、环烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；或者被芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基；
或者当Y是
Figure BDA0001848657530000301
时，R4和R5与它们所连接的氮一起形成任选被一个或多个取代基取代的3至4元环，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br、I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基。
在式II化合物的一个实施方案中，D是
Figure BDA0001848657530000302
其中R6是H、Cl、F或Br，并且R7是H、甲基、F或Cl。
在这一实施方案的一个方面，当Y是
Figure BDA0001848657530000303
时，R5不是
Figure BDA0001848657530000304
Figure BDA0001848657530000305
在这一实施方案的另一方面，当R4是乙基时，R5不是
Figure BDA0001848657530000306
在式II化合物的一个实施方案中，C是含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基芳基或烷基杂芳基。
在式II化合物的一个实施方案中，D是C4-14双环。
在式II化合物的另一个实施方案中，R5是芳基烷基，C2-6炔基，芳基如苯基，杂芳基，包括含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环和含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；和含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元螺稠合环；
在第三个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000311
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如关于式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
E是含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个各自独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基；
F是含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，或C4-14双环，
Z是
Figure BDA0001848657530000312
或
Figure BDA0001848657530000313
R8是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R9是C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环，或者三元环；
R9任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、环烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基、C1-6羟烷基；或者被芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基。
R8和R9可以与它们所连接的氮一起形成6-10元双环或桥环或3至8饱和环；这种双环、桥环和饱和环部分任选地含有一个或多个另外的杂原子，所述杂原子独立地为O、S或N，并且任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟基烷基。
在第四个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000321
或其药学上可接受的盐或前药，其中
G是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基；
H是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，任选地含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的六元非芳香环；或C4-14双环；
当R1和R1’与碳连接时，它们独立地为氢、卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟烷基；
当R1和R1’与氮连接时，它们独立地为氢、C1-6烷氧基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、羰基烷基、羰基芳基、C1-6烷基、C2-6炔基、C2-6烯基、杂环基烷基、C1-6羟烷基或S(O)2R’；
每个R'独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、芳基、杂芳基、烷基芳基或芳基烷基，或者如果两个R'存在于相同的氮原子上，则它们可以结合在一起形成任选含有N、O或S的C3-6烷基环；其中R'基团可以被一个或多个如上定义的取代基取代，例如，C1-6羟烷基、氨基烷基和烷氧基烷基；
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
W是
Figure BDA0001848657530000331
R10是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R11为C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，芳基，杂芳基，烷基芳基，芳基烷基，苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元环或六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的七元桥环或螺稠合环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；三元环，烷基杂芳基或烷基芳基；
其中R11任选地被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：卤素(包括F、Cl、Br和I)、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C2-6烯基、氰基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基、C1-6羟烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基；或者
R10和R11可以与它们所连接的氮一起形成6-10元双环或桥环或3至8饱和环；这种双环、桥环或饱和环部分任选地含有一个或多个另外的杂原子，所述杂原子各自独立地为O、S或N，并且任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地为卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基或C1-6羟基烷基。
在第五个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000341
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如关于式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
I是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，C4-14双环；烷基杂芳基或烷基芳基；
J是含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元或七元环或六元或七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；或含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环，
W是
Figure BDA0001848657530000351
R12是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R13是C2-6烯基，C2-6炔基，芳基包括苯基，杂芳基，包括含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环和含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；烷基芳基，芳基烷基，C4-14双环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元桥环或螺稠环，
R13任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由以下组成的组：氢、卤素(F、Cl、Br、I)、CF3、SF5、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、环烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、卤代烷基、杂环基烷基和C1-6羟烷基；或者任选地被芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基；
或者R12和R13与它们所连接的氮一起形成任选被一个或多个取代基取代的3至4元环，所述取代基各自独立地选自由以下组成的组：氢、卤素(F、Cl、Br、I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基和C1-6羟烷基。
在第六个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000361
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如关于式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
K是含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基；
L是含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元或七元环或六元或七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环，或C4-14双环，
W是
Figure BDA0001848657530000362
R14是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，
R15是C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元环或六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；
R15任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地为卤素(F、Cl、Br、I)、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、环烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基和C1-6羟烷基；或者被芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基取代，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基，或者
R14和R15可以与它们所连接的氮一起形成6-10元双环或桥环或3至8饱和环；这种双环、桥环和饱和环部分任选地含有一个或多个另外的杂原子，所述杂原子独立地为O、S或N，并且任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由以下组成的组：卤素(包括F、Cl、Br和I)、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基和C1-6羟基烷基。
在第七个实施方案中，化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000371
或其药学上可接受的盐或前药，其中
R1和R1’如关于式I所定义，
u和v独立地为0、1、2、3、4或5；
M是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环，C4-14双环、烷基杂芳基或烷基芳基，
N是苯基，含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环，含有一个、两个或三个独立地选自N、O和S的杂原子的五元杂芳环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元或七元环或六元或七元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；或C4-14双环，
V是
Figure BDA0001848657530000381
或者
Figure BDA0001848657530000382
并且
R16是C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-8烷氧基烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，芳基如苯基，杂芳基，如含有一个、两个或三个氮原子的六元杂芳环或含有一个、两个或三个独立地为N、O或S的杂原子的五元杂芳环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的六元环或六元桥环或螺稠合环，含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的五元环；含有零个、一个或两个独立地为N、O或S的杂原子的四元环；烷基芳基，芳基烷基，烷基杂芳基或烷基芳基，其中R16任选地被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：卤素(包括F、Cl、Br和I)、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C2-6烯基、氰基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、C1-6烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、C1-6卤代烷基、杂环基烷基、C1-6羟烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，其中取代的芳基和取代的杂芳基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、SF5、CF3、羟基、N(R’)S(O)2R’、S(O)2R’、S(O)2N(R’)2、C(O)R’、C1-6烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基和C1-6烷基；
落在本发明范围内的代表性化合物包括以下：
Figure BDA0001848657530000383
Figure BDA0001848657530000391
及其药学上可接受的盐或前药。
代表性化合物还包括：
Figure BDA0001848657530000392
Figure BDA0001848657530000401
Figure BDA0001848657530000411
Figure BDA0001848657530000412
及其药学上可接受的盐和前药。
特别优选的化合物包括：
Figure BDA0001848657530000413
或其药学上可接受的盐或前药。
特别优选的化合物具有下式：
Figure BDA0001848657530000421
或其药学上可接受的盐。
III立体异构现象和多晶型现象
本文所述的化合物可具有不对称中心，并以外消旋体、外消旋混合物、单独的非对映异构体或对映异构体存在，所有异构形式均包括在本发明中。具有手性中心的本发明化合物可以以光学活性和外消旋形式存在和分离。一些化合物可以表现出多晶型。本发明包括本发明化合物的外消旋、光学活性、多晶型或立体异构形式或其混合物，其具有本文所述的有用性质。光学活性形式可以通过例如例如以下方式来制备：通过重结晶技术拆分外消旋形式、通过从光学活性起始材料合成、通过手性合成或通过使用手性固定相的色谱分离或通过酶促拆分。可以纯化相应的化合物，然后衍生所述化合物以形成本文所述的化合物，或纯化化合物本身。
光学活性形式的化合物可以使用本领域已知的任意方法制备，包括但不限于通过重结晶技术拆分外消旋形式、通过从光学活性起始材料合成、通过手性合成或通过使用手性固定相的色谱分离。
获得光学活性材料的方法的实例包括至少下列方法：
i)晶体物理分离法：手动分离各个对映异构体的宏观晶体的技术。如果存在单独的对映异构体的晶体，即原料是团聚体(conglomerate)且所述晶体是视觉上可区分的，则可采用该技术；
ii)同时结晶法：从外消旋体的溶液中分别结晶出各个对映异构体的技术，可能只有当外消旋体是固态的团聚体时才可行；
iii)酶促拆分法：借助对映异构体与酶反应的不同速率，部分或完全分离外消旋体的技术；
iv)酶促不对称合成法：至少一个合成步骤采用酶促反应以获得所需对映异构体的对映异构体纯的或富集的合成前体的合成技术；
v)化学不对称合成法：在产物中产生不对称(即手性)的条件下从非手性前体合成所需对映异构体的合成技术，其可使用手性催化剂或手性助剂来完成；
vi)非对映异构体分离法：使外消旋化合物与对映异构体纯试剂(手性助剂)反应，将各个对映异构体转化为非对映异构体的技术。然后所得非对映异构体借助其现在更明显的结构差异，通过色谱法或结晶法分离，随后除去手性助剂，获得所需的对映异构体；
vii)一级和二级不对称转化法：该技术通过平衡来自外消旋体的非对映异构体，使其在来自所需对映异构体的非对映异构体的溶液中占优势，或者来自所需对映异构体的非对映异构体的优先结晶作用破坏了这种平衡，致使所有材料最终几乎都被转化为来自所需对映异构体的结晶型非对映异构体。然后从所述非对映异构体中释放出所需对映异构体；
viii)动力学拆分法：该技术是指借助对映异构体与手性、非消旋试剂或催化剂在动力学条件下的不同反应速率，实现对外消旋体的部分或完全拆分(或者对部分拆分的化合物进一步拆分)；
ix)从非外消旋前体进行对映异构体专一性合成：从非手性原料获得所需对映异构体且在合成过程中没有或仅最小量地破坏立体化学完整性的合成技术；
x)手性液相色谱法：借助于外消旋体的对映异构体与固定相的相互作用不同而在液体流动相中分离出外消旋体的对映异构体的技术(包括但不限于通过手性HPLC)。所述固定相可由手性材料制得，或者所述流动相可包含引起不同相互作用的另外的手性材料；
xi)手性气相色谱法：通过使外消旋体挥发，并借助于对映异构体在气态流动相中与含有固定的非外消旋手性吸附相的柱子的不同相互作用而分离出对映异构体的技术；
xii)用手性溶剂萃取：借助一种对映异构体优先溶解于特定手性溶剂中而分离出对映异构体的技术；
xiii)跨手性膜转运法：使外消旋体与薄膜屏障接触的技术。该屏障通常分离出两种可混溶液体，其中一种含有外消旋体，并且驱动力如浓度差或压力差导致优先跨膜屏障转运。该膜的非外消旋手性性质仅允许外消旋体中的一种对映异构体通过，从而实现了分离。
在一个实施方案中使用手性色谱法，包括但不限于模拟移动床色谱法。各种手性固定相可商购获得。
IV.盐或前药制剂
在化合物足够碱性或酸性以形成稳定的无毒酸盐或碱盐的情况下，将化合物作为药学上可接受的盐施用可能是合适的。药学上可接受的盐的实例为有机酸，其形成生理学上可接受的阴离子，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。还可以形成合适的无机盐，包括但不限于硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。对于某些透皮应用，可优选使用本文所述化合物的脂肪酸盐。脂肪酸盐可以帮助渗透角质层。合适的盐的实例包括化合物与硬脂酸、油酸、亚油酸、棕榈酸、辛酸和癸酸的盐。
药学上可接受的盐可以使用本领域熟知的标准方法获得，例如通过使足够碱性的化合物如胺与合适的酸(提供生理学上可接受的阴离子)反应。在化合物包括多个胺基的那些情况下，可以与任意数量的胺基形成盐。还可以制备羧酸的碱金属(例如钠、钾或锂)盐或碱土金属(例如钙)盐。
前药是一种药理学物质，其以无活性(或显著较低的活性)形式施用，并随后在体内代谢为活性代谢物。以较低剂量使更多药物到达所需靶标通常是使用前药背后的基本原理并且这通常归因于更好的吸收、分布、代谢和/或排泄(ADME)性质。前药通常设计成用于改善口服生物利用度，因为胃肠道吸收不良通常是限制因素。另外，使用前药策略可以增加药物对其预期靶标的选择性，从而降低脱靶效应的可能性。
V.同位素
本文所述的化合物包括同位素标记的化合物，其与本文提供的各种化学式和结构中所述的那些相同，除了一个或多个原子被原子质量或质量数不同于通常在自然界中发现的原子质量或质量数的原子取代之外。在其他实施方案中，掺入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟和氯的同位素，例如分别为2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、35S、18F、36Cl。本文所述的某些同位素标记的化合物，例如掺入放射性同位素如2H的那些化合物，可用于药物和/或底物组织分布测定。此外，在一些实施方案中，用同位素例如氘(即2H)取代可以提供某些治疗优势，这是因为代谢稳定性更高，例如体内半衰期增加或剂量需求减少。
VI.治疗的方法
本文所述的化合物可用于预防、治疗或治愈乙型肝炎病毒(HBV)感染和西尼罗河病毒感染。
可以通过施用有效量的、在药学上可接受的载体或稀释剂存在下的活性化合物或其药学上可接受的前药或盐，来治疗患有这些癌症之一或感染这些病毒之一(例如HBV)或其基因片段的宿主(包括但不限于人类)。活性物质可以通过任意合适的途径施用，例如以液体或固体形式口服、胃肠外、静脉内、皮内、透皮、皮下或局部施用。
本文所述的化合物和组合物还可用于治疗其他病毒性疾病。例如，通过治愈、控制或消除HBV，也可以抑制或消除HDV感染。Sheldon等人，“Does treatment of hepatitis Bvirus(HBV)infection reduce hepatitis delta virus(HDV)replication in HIV-HBV-HDV-coinfected patients？”Antivir Ther.2008；13(1):97-102)。
丁型肝炎病毒(HDV)具有独特的复制过程，其需要与乙型肝炎病毒(HBV)共感染。虽然认为治疗目前仅限于干扰素疗法，但是用本文所述化合物进行成功抗HBV治疗的患者可间接受益于HDV复制的抑制。通过减少HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)可以使血清HDV RNA显著持续降低。HBV中的cccDNA通过衣壳相关的松弛环状DNA(rcDNA)的转化形成。[Guo等人，"Characterization of the intracellular deproteinized relaxed circular DNAof hepatitis B virus:an intermediate of covalently closed circular DNAformation".J Virol.81(22):12472–12484(2007年11月)]。因此，使用本文描述的化合物抑制衣壳形成也可以抑制或消除HDV复制。
此外，还有一部分HCV患者也早先感染了HBV，并且在治疗HCV时HBV处于潜伏状态。在一些这种患者中，HCV的成功治疗(例如，使用Harvoni/Sovaldi)可以重新激活潜伏的HBV感染。本文所述化合物与HCV治疗的共同施用可以防止潜伏的HBV感染的重新激活，或治疗重新激活的HBV感染。
VII.替代疗法的组合
在一个实施方案中，本发明化合物可与至少一种其他抗病毒剂一起使用，其他抗病毒剂包括但不限于聚合酶抑制剂、抗HBV核苷及其前药、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、文献描述的衣壳组装调节剂、IMPDH抑制剂、蛋白酶抑制剂、基于免疫的治疗剂、逆转录酶抑制剂、TLR激动剂和不同或未知机制的剂。它们还可以与使用AAV作为人类递送载体的CRISPR/CAS9方法结合使用。
例如，当用于治疗或预防HBV感染时，活性化合物或其前药或药学上可接受的盐可以与另一种抗HBV剂组合或交替施用，所述另一种抗HBV剂包括但不限于上式的那些。通常，在组合疗法中，一起施用有效剂量的两种或更多种剂，而在交替疗法期间，连续施用有效剂量的每种剂。剂量将取决于药物的吸收、失活和排泄速率，以及本领域技术人员已知的其他因素。应注意，剂量值也将随待缓解的病况的严重程度而变化。还应理解的是，对于任意特定受试者，应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断随时间调整具体的剂量方案和时间表。
可与本文公开的化合物组合使用的抗病毒剂的非限制性实例包括下表中的那些。
乙型肝炎疗法
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可以组合或交替使用的其他抗HBV治疗
除了本文所述的可以通过抑制cccDNA起作用的化合物，以及上述将本文所述的化合物与批准的抗HBV药物如TAF组合的组合疗法之外，也可以使用诸如siRNA、shRNA、Talens、Crisper/Cas9的方法和mir(microRNA)化合物。
siRNA和shRNA疗法
例如，Chen和Mahato，“siRNA Pool Targeting Different Sites of HumanHepatitis B Surface Antigen Efficiently Inhibits HBV Infection；”J DrugTarget.2008 Feb；16(2):140–148以及Morrissey等人，“Potent and persistent in vivoanti-HBV activity of chemically modified siRNAs,”Nature Biotechnology 23,1002-1007(2005)描述了用于治疗HBV的siRNA疗法。
RNAi是序列特异性的转录后基因沉默机制，其由双链合成siRNA或从载体细胞内表达的短发夹RNA(shRNA)触发。通过施用合成的siRNA或内源表达的shRNA可以抑制HBV复制和表达。参见，例如，Giladi等人，“Small interfering RNAinhibits hepatitis Bvirus replication in mice,”Mol Ther.2003；8(5):769–76；McCaffrey等人，“Inhibition of hepatitis B virus in mice by RNA interference,”NatBiotechnol.2003；21(6):639–44；以及Shlomai和Shaul，“Inhibition of hepatitis Bvirus expression and replication by RNA interference,”Hepatology.2003；37(4):764–70)。HBV基因沉默可以依赖于例如siRNA给药和序列，并且基因沉默的目标包括例如抑制病毒复制和抑制HBsAg表达。
在一个实施方案中，使用几种siRNA和/或shRNA的组合，靶向HBV S、C、P和X基因中的两种或更多种。以这种方式，可以获得用于抑制HBV复制和基因表达的多个靶标。
一旦确定了合适的靶标，例如，人类乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)(Gene BankAccession#NM_U95551)，就可以根据Ambion(http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html)和Invitrogen(https://rnaidesigner.invitrogen.com/rnaiexpress/design.do)提供的指南来设计siRNA。可以通过进行BLAST搜索(www.ncbi.nlm.nih.gov)来检查siRNA的序列特异性。
一旦确定了siRNA序列，就可以将它们转化为shRNA。为了表达shRNA，可以构建对照载体，例如，使用psiSTRIKETM，它是一种线性化质粒并含有U6RNA聚合酶启动子。这些shRNA含有两个互补的寡核苷酸，其可以使用合适的连接酶(如T4DNA连接酶)，在合适的启动子(如U6启动子)下退火形成双链DNA，用于连接到psiSTRIKETM载体相应位点。可以使用例如
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Plasmid Mini Kit(QIAGEN，Valencia，CA)纯化质粒。
Talens/CRISPR
如上所述，由于感染细胞中存在持久(long-lived)形式的病毒DNA，所以通常持续存在慢性HBV病毒感染。目前的疗法可以抑制病毒复制，但对长期存活的DNA形式影响很小或没有影响，因此一旦停止治疗，病毒复制就会恢复。
除了使用本文所述的衣壳抑制剂靶向持久DNA形式外，还可以使用靶向核酸内切酶如归巢核酸内切酶、锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)和CRISPR(成簇的、规律间隔的短回文重复)系统。例如，Weber等人，“TALENs Targeting HBV:Designer Endonuclease Therapies for Viral Infections,”Molecular Therapy(2013)；21 10,1819–1820；http://www.nature.com/mt/journal/v21/n10/full/mt2013208a.html描述了使用TALENS来靶向HBV。
这些核酸酶通过特异性识别并切割选定的DNA序列而起作用，导致在不精确DNA修复时基因破坏。靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因组的TALEN可导致持久的HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)中的TALEN诱导的突变。cccDNA的突变和/或破坏通过阻断功能性病毒蛋白的表达来阻止病毒复制。
CRISPR
通过提供靶向基因组编辑，CRISPR或成簇的、规律间隔的短回文重复序列是突变HBV DNA的另一种方法。除了可编程编辑工具，如锌指核酸酶和上述转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)，CRISPR(成簇的、规律间隔的短回文重复序列)/Cas9技术也允许基因组编辑，并允许HBV中的位点特异性基因组靶向。
II型CRISPR/Cas系统是原核适应性免疫应答系统，其使用非编码RNA来引导Cas9核酸酶诱导位点特异性DNA切割。经由非同源末端连接DNA修复途径(NHEJ)或同源定向修复(HDR)途径，通过细胞DNA修复机制修复该DNA损伤。
CRISPR/Cas9系统提供简单的RNA可编程方法以产生基因敲除(通过插入/缺失)或敲入(通过HDR)，并允许HBV中的位点特异性基因组靶向。II型CRISPR/Cas系统是原核适应性免疫应答系统，其使用非编码RNA来引导Cas9核酸酶诱导位点特异性DNA切割。
为了产生基因破坏，形成了单个指导RNA(sgRNA)以将Cas9核酸酶导向特定的基因组位置。通过NHEJ DNA修复途径修复Cas9诱导的双链断裂。该修复容易出错，因此可能引入可能破坏基因功能的插入和缺失(INDEL)。
因此，使用CRISPR/Cas9核酸酶靶向乙型肝炎病毒cccDNA可以有效地抑制病毒复制。
Mir/MicroRNA
MicroRNA(miRNA)是微小的非编码RNA，其通过与mRNA结合而主要在转录后水平上调节基因表达。miRNA有助于各种生理和病理过程。已发现许多miRNA在宿主-HBV相互作用中起关键作用。HBV感染可以改变细胞miRNA表达模式，HBV相关疾病的不同阶段显示出独特的miRNA谱。差异表达的miRNA参与HBV相关疾病的进展。例如，一些miRNA参与肝肿瘤发生和肿瘤转移。血清或血浆中的循环miRNA可以是用于HBV相关疾病的诊断和预后的非常有用的生物标志物。此外，基于miRNA的疗法可用于治疗、预防或治愈HBV相关疾病。参见例如Ying-Feng Wei，“MicroRNAs may solve the mystery of chronic hepatitis B virusinfection,”World J Gastroenterol.2013Aug 14；19(30):4867–4876。http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3740416/
在病毒和宿主之间的相互作用中，miRNA可以分为细胞miRNA和病毒miRNA。细胞miRNA的表达谱在感染状态下发生变化，并且异常miRNA通常与病毒生命周期以及宿主病症密切相关。病毒miRNA可以进化以调节病毒和细胞基因表达。
有时，病毒利用细胞miRNA来促进其生命周期的某些步骤。例如，miR-122在HBV生命周期中起抗病毒作用。MiR-122过表达抑制HBV表达，而内源miR-122的消耗导致转染细胞中HBV产生增加。MiR-122抑制剂引起细胞血红素加氧酶-1的增加，其可通过降低HBV核心蛋白的稳定性来降低HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)水平。与健康对照相比，HBV感染患者肝脏中MiR-122的表达可显著下调。MiR-122在HBV感染的患者中显著上调，并且可以抑制Huh7和HepG2细胞中的HBV复制。细胞周期蛋白G1是与p53特异性相互作用的miR-122靶标，导致p53与HBV增强子元件特异性结合，同时消除p53介导的HBV转录抑制。
HBV是一种非致细胞病变的病毒，它可在肝细胞中优先复制。cccDNA充当在HBVDNA进入肝细胞核后合成的所有病毒RNA转录的模板。HBV基因组长度为3.2kb，包含四个重叠的开放阅读框。它可以转录病毒前基因组RNA(这逆转了转录)，以合成病毒DNA基因组并编码乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒核心蛋白、病毒反向DNA聚合酶(Pol)和X蛋白。
Hsa-miR-125a-5p干扰HBV翻译并下调HBV表面抗原的表达。因此，细胞miRNA可以通过靶向HBV转录物来改变HBV基因表达。
细胞miRNA可以影响病毒翻译并改变病毒复制。除了miR-122抑制HBV复制的实例外，还有宿主miRNA改变HBV复制的其他实例。MiR-141通过下调过氧化物酶体增殖物激活受体α来降低HBV启动子活性，从而抑制HBV复制。DNA高甲基化可能与HBV cccDNA转录的抑制密切相关，并且miR-152可能是参与HBV cccDNA甲基化调控的因子。
因此，miRNA可以直接或间接改变HBV复制。miRNA与HBV相关疾病之间的密切关系提供了在联合疗法中使用miRNA或拮抗剂(antagomir)来治疗、治愈或预防HBV的机会。
VII.药物组合物
可以通过向患者施用有效量的、在药学上可接受的载体或稀释剂存在下的活性化合物或其药学上可接受的前药或盐，来治疗感染HBV的宿主(包括但不限于人类)。活性物质可以通过任意合适的途径施用，例如以液体或固体形式口服、胃肠外、静脉内、皮内、皮下或局部施用。
优选的化合物剂量范围为每天约0.01至约10mg/kg，更通常为约0.1至5mg/kg，优选约0.5至约2mg/kg接收者的体重。药学上可接受的盐和前药的有效剂量范围可以基于待递送的母体化合物的重量来计算。如果盐或前药本身表现出活性，则可以使用盐或前药的重量或通过本领域技术人员已知的其他方法如上估算有效剂量。
化合物可方便地以任意合适的剂型单位施用，包括但不限于每单位剂型含有7至600mg，优选70至600mg活性成分的剂型。1-400mg的口服剂量通常是方便的。
药物组合物中活性化合物的浓度将取决于药物的吸收、失活和排泄速率以及本领域技术人员已知的其他因素。应注意，剂量值也将随待缓解的病况的严重程度而变化。还应理解的是，对于任意特定受试者，应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断随时间调整具体的剂量方案，并且本文所述的浓度范围仅是示例性的，并非旨在限制要求保护的组合物的范围或实践。活性成分可以一次施用，或者可以分成许多较小的剂量，以不同的时间间隔施用。
活性化合物的优选施用方式是口服，但对于某些患者，可以皮下、腹膜内或静脉内给予无菌可注射形式。口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可以封装在明胶胶囊中或压制成片剂。为了治疗性口服施用的目的，可以将活性化合物与赋形剂合并，并以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。可以包含药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。
片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可含有任意下列成分或类似性质的化合物：粘合剂如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂如胶体二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精；或调味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂。当剂量单位形式是胶囊时，除了上述类型的材料外，它还可以含有液体载体如脂肪油。另外，单位剂型可含有改变剂量单位的物理形式的各种其他物质，例如糖、虫胶或其他肠溶剂的包衣。
该化合物可以作为酏剂、悬浮液、糖浆、薄片剂(wafer)、口香糖等的组分施用。除活性化合物外，糖浆还可含有作为甜味剂的蔗糖和某些防腐剂、染料和着色剂和调味剂。
化合物或其药学上可接受的前药或盐也可以与不损害所需作用的其它活性物质混合，或与补充所需作用的物质混合，例如抗生素、抗真菌剂、抗炎剂或其它抗病毒化合物。用于肠胃外、皮内、皮下或局部施用的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂如注射用水、盐溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及调节张力的剂，如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可以封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。
如果静脉内施用，则优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。
透皮制剂
在一些实施方案中，组合物以透皮制剂的形式存在，例如在FDA批准的激动剂rotigitine透皮(Neupro贴剂)中使用的制剂。另一种合适的制剂描述于题为“TransdermalTherapeutic System for Treating Parkinsonism”的美国公开号20080050424中。该制剂包括基于硅氧烷或丙烯酸酯的粘合剂，并且可包括增加活性物质的溶解度的添加剂，其量能有效增加基质对活性物质的溶解能力。
透皮制剂可以是单相基质(matrices)，其包括背衬层、含活性物质的自粘基质和在使用前要除去的保护膜。更复杂的实施方案包含多层基质，其也可含有非粘性层和控制膜。如果使用聚丙烯酸酯粘合剂，它可以与多价金属离子如锌、钙、铝或钛离子交联，例如乙酰丙酮铝和乙酰丙酮钛。
当使用有机硅粘合剂时，它们通常是聚二甲基硅氧烷。然而，原则上可能存在其他有机残基，例如乙基或苯基，而不是甲基。因为活性化合物是胺，所以使用耐胺粘合剂可能是有利的。代表性的耐胺粘合剂描述于例如EP 0 180 377中。
代表性的基于丙烯酸酯的聚合物粘合剂包括丙烯酸、丙烯酰胺、丙烯酸己酯、丙烯酸2-乙基己酯、丙烯酸羟乙酯、丙烯酸辛酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸甲酯、丙烯酸缩水甘油酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸己酯、甲基丙烯酸2-乙基己酯、甲基丙烯酸辛酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮及其组合。
粘合剂必须具有适合于活性物质的溶解能力，并且活性物质必须能够在基质内移动，并且能够穿过接触表面到达皮肤。本领域技术人员可以容易地配制具有活性物质的适当透皮转运的透皮制剂。
某些药学上可接受的盐倾向于更优选用于透皮制剂，因为它们可以帮助活性物质通过角质层的屏障。实例包括脂肪酸盐，例如硬脂酸盐和油酸盐。油酸盐和硬脂酸盐是相对亲脂性的，甚至可以作为皮肤中的渗透增强剂。
也可以使用渗透增强剂。代表性的渗透增强剂包括脂肪醇、脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪酸酰胺、甘油或其脂肪酸酯、N-甲基吡咯烷酮、萜烯如柠檬烯、α-蒎烯(pinene)、α-萜品醇、香芹酮、香芹醇、柠檬烯氧化物、蒎烯氧化物和1,8-桉叶油素。
贴剂通常可以通过将活性剂溶解或悬浮在乙醇或另一种合适的有机溶剂中，然后在搅拌下加入粘合剂溶液来制备。可以向粘合剂溶液、活性物质溶液或含活性物质的粘合剂溶液中添加另外的辅助物质。然后可以将溶液涂覆到合适的片材上，除去溶剂，将背衬层层压到基质层上，并从整个层压材料中冲出贴剂。
纳米颗粒组合物
本文所述的化合物还可以以纳米颗粒组合物的形式施用。
在一个实施方案中，控释纳米颗粒制剂包含待施用的纳米颗粒活性剂和速率控制聚合物，其用于延长药剂在施用后的释放。在该实施方案中，组合物可在施用后释放活性剂持续约2至约24小时或多达30天或更长的时间。包含纳米颗粒形式的活性剂的代表性控释制剂描述于例如美国专利号8,293,277中。
纳米颗粒组合物包含本文所述活性剂的颗粒，其具有吸附在其表面上或与其表面结合的非交联表面稳定剂。
纳米颗粒的平均粒度通常小于约800nm，更通常小于约600nm，更通常小于约400nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约100nm，或小于约50nm。在该实施方案的一个方面，当通过光散射技术测量时，至少50％的活性剂颗粒的平均粒度分别小于约800、600、400、300、250、100或50nm。
多种表面稳定剂通常与纳米颗粒组合物一起使用，以防止颗粒结块或聚集。代表性的表面稳定剂包括但不限于明胶、卵磷脂、葡聚糖、阿拉伯树胶、胆固醇、黄蓍胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十八十六醇、聚西托醇(cetomacrogol)乳化蜡、脱水山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚乙二醇、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶体二氧化硅、磷酸酯、十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非结晶纤维素、硅酸铝镁、三乙醇胺、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、泰洛沙泊(tyloxapol)、泊洛沙姆(poloxamer)、泊洛沙胺(poloxamine)、泊洛沙胺908、磺基琥珀酸钠二烷基酯、月桂基硫酸钠、烷基芳基聚醚磺酸酯、蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物、对异壬基苯氧基聚-(缩水甘油)、SA9OHCO、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺、正癸基-D-吡喃葡萄糖苷、正癸基-D-吡喃麦芽糖苷、正十二烷基-D-吡喃葡萄糖苷、正十二烷基-D-麦芽糖苷、庚酰基-N-甲基葡糖酰胺、正庚基-D-吡喃葡萄糖苷、正庚基-D-硫代葡萄糖苷、正己基-D-吡喃葡糖苷、壬酰基-N-甲基葡糖酰胺、正壬基-D-吡喃葡萄糖苷、辛酰基-N-甲基葡糖酰胺、正辛基-D-吡喃葡萄糖苷和辛基-D-硫代吡喃葡萄糖苷。溶菌酶也可用作纳米颗粒组合物的表面稳定剂。已知某些纳米颗粒如聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)-纳米颗粒在通过静脉内(IV)或皮下(SQ)给药时靶向肝脏。
因为在一个实施方案中HBV对肝脏造成损伤并且存在于肝脏中，所以纳米颗粒或其他药物递送媒介物靶向肝脏。Park等人，Mol Imaging.Feb 2011；10(1):69–77描述了一种这样的肝靶向药物递送媒介物，其使用磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)作为分子靶标。Park教导了使用该靶标治疗肝细胞癌(HCC)，这是一种常常由慢性持续性肝炎引起的原发性肝癌。
在该实施方案的一个方面，该药物递送媒介物还用于将治疗剂靶向肝脏以治疗病毒感染。此外，由于本文所述的化合物具有间接抗癌用途，因此这类系统可将化合物靶向肝脏并治疗肝癌或逆转癌症。GPC3是硫酸乙酰肝素蛋白多糖，其在正常成人组织中不表达，但在高达80％的人HCC中显著过表达。例如，可以使用抗体介导的靶向和结合来靶向GPC3(参见Hsu等人，Cancer Res.1997；57:5179–84)。
用于靶向肝脏的另一种药物递送系统描述于美国专利号7,304,045中。该‘045专利公开了一种双颗粒肿瘤或癌症靶向系统，其包括与半乳糖胺缀合的第一配体介导的靶向纳米颗粒，其中配体位于靶细胞上。第一纳米颗粒包括聚(γ-谷氨酸)/聚(丙交酯)嵌段共聚物和抗病毒化合物，在这种情况下所述抗病毒化合物是本文所述的化合物，在‘045专利中是更昔洛韦(ganciclovir)。第二纳米颗粒包括聚(γ-谷氨酸)/聚(丙交酯)嵌段共聚物、内皮细胞特异性启动子和(单纯疱疹病毒)-(胸苷激酶)基因构建的质粒，并提供增强的渗透和滞留介导的靶向。将第一和第二纳米颗粒在用于递送至肝脏的溶液中混合。当待治疗的病症是肝肿瘤或癌症时，可以直接递送到肝肿瘤或癌症或与肝肿瘤或癌症相邻。
可将纳米颗粒配制到其中的代表性速率控制聚合物包括壳聚糖、聚环氧乙烷(PEO)、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、阿拉伯树胶、琼脂、瓜尔胶、谷物胶、葡聚糖、酪蛋白、明胶、果胶、角叉菜胶、蜡、虫胶、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素(HPC)、羟乙基纤维素(HEC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(CMC)、聚(乙烯)氧化物、烷基纤维素、乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、亲水性纤维素衍生物、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、乙酸偏苯三酸纤维素、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、乙酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚乙烯醇缩乙醛二乙氨基乙酸酯、聚(甲基丙烯酸烷基酯)、聚(乙酸乙烯酯)、衍生自丙烯酸或甲基丙烯酸及其各自的酯的聚合物和衍生自丙烯酸或甲基丙烯酸及其各自的酯的共聚物。
制备纳米颗粒组合物的方法描述于例如美国专利号5,518,187和5,862,999，均关于“Method of Grinding Pharmaceutical Substances”；美国专利号5,718,388，关于“Continuous Method of Grinding Pharmaceutical Substances”；和美国专利号5,510,118关于“Process of Preparing Therapeutic Compositions ContainingNanoparticles”。
纳米颗粒组合物还描述于例如美国专利号5,298,262关于“Use of Ionic CloudPoint Modifiers to Prevent Particle Aggregation During Sterilization”；美国专利号5,302,401关于“Method to Reduce Particle Size Growth DuringLyophilization”；美国专利号5,318,767关于“X-Ray Contrast Compositions Useful inMedical Imaging”；美国专利号5,326,552关于“Novel Formulation ForNanoparticulate X-Ray Blood Pool Contrast Agents Using High Molecular WeightNon-ionic Surfactants”；美国专利号5,328,404关于“Method of X-Ray Imaging UsingIodinated Aromatic Propanedioates”；美国专利号5,336,507关于“Use of ChargedPhospholipids to Reduce Nanoparticle Aggregation”；美国专利号5,340,564forFormulations Comprising Olin 10-G to Prevent Particle Aggregation andIncrease Stability”；美国专利号5,346,702关于“Use of Non-Ionic Cloud PointModifiers to Minimize Nanoparticulate Aggregation During Sterilization”；美国专利号5,349,957关于“Preparation and Magnetic Properties of Very SmallMagnetic-Dextran Particles”；美国专利号5,352,459关于“Use of Purified SurfaceModifiers to Prevent Particle Aggregation During Sterilization”；美国专利号5,399,363和5,494,683，均关于“Surface Modified Anticancer Nanoparticles”；美国专利号5,401,492关于“Water Insoluble Non-Magnetic Manganese Particles as MagneticResonance Enhancement Agents”；美国专利号5,429,824关于“Use of Tyloxapol as aNanoparticulate Stabilizer”；美国专利号5,447,710关于“Method for MakingNanoparticulate X-Ray Blood Pool Contrast Agents Using High Molecular WeightNon-ionic Surfactants”；美国专利号5,451,393关于“X-Ray Contrast CompositionsUseful in Medical Imaging”；美国专利号5,466,440关于“Formulations of OralGastrointestinal Diagnostic X-Ray Contrast Agents in Combination withPharmaceutically Acceptable Clays”；美国专利号5,470,583关于“Method ofPreparing Nanoparticle Compositions Containing Charged Phospholipids toReduce Aggregation”；美国专利号5,472,683关于“Nanoparticulate Diagnostic MixedCarbamic Anhydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and LymphaticSystem Imaging”；美国专利号5,500,204关于“Nanoparticulate Diagnostic Dimers asX-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging”；美国专利号5,518,738关于“Nanoparticulate NSAID Formulations”；美国专利号5,521,218关于“Nanoparticulate Iododipamide Derivatives for Use as X-Ray Contrast Agents”；美国专利号5,525,328关于“Nanoparticulate Diagnostic Diatrizoxy Ester X-RayContrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging”；美国专利号5,543,133关于“Process of Preparing X-Ray Contrast Compositions ContainingNanoparticles”；美国专利号5,552,160关于“Surface Modified NSAID Nanoparticles”；美国专利号5,560,931关于“Formulations of Compounds as NanoparticulateDispersions in Digestible Oils or Fatty Acids”；美国专利号5,565,188关于“Polyalkylene Block Copolymers as Surface Modifiers for Nanoparticles”；美国专利号5,569,448关于“Sulfated Non-ionic Block Copolymer Surfactant as StabilizerCoatings for Nanoparticle Compositions”；美国专利号5,571,536关于“Formulationsof Compounds as Nanoparticulate Dispersions in Digestible Oils or FattyAcids”；美国专利号5,573,749关于“Nanoparticulate Diagnostic Mixed CarboxylicAnydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic SystemImaging”；美国专利号5,573,750关于“Diagnostic Imaging X-Ray Contrast Agents”；美国专利号5,573,783关于“Redispersible Nanoparticulate Film Matrices WithProtective Overcoats”；美国专利号5,580,579关于“Site-specific Adhesion Withinthe GI Tract Using Nanoparticles Stabilized by High Molecular Weight,LinearPoly(ethylene Oxide)Polymers”；美国专利号5,585,108关于“Formulations of OralGastrointestinal Therapeutic Agents in Combination with PharmaceuticallyAcceptable Clays”；美国专利号5,587,143关于“Butylene Oxide-Ethylene Oxide BlockCopolymers Surfactants as Stabilizer Coatings for NanoparticulateCompositions”；美国专利号5,591,456关于“Milled Naproxen with HydroxypropylCellulose as Dispersion Stabilizer”；美国专利号5,593,657关于“Novel Barium SaltFormulations Stabilized by Non-ionic and Anionic Stabilizers”；美国专利号5,622,938关于“Sugar Based Surfactant for Nanocrystals”；美国专利号5,628,981关于“Improved Formulations of Oral Gastrointestinal Diagnostic X-Ray ContrastAgents and Oral Gastrointestinal Therapeutic Agents”；美国专利号5,643,552关于“Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carbonic Anhydrides as X-Ray ContrastAgents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging”；美国专利号5,718,388关于“Continuous Method of Grinding Pharmaceutical Substances”；美国专利号5,718,919关于“Nanoparticles Containing the R(-)Enantiomer of Ibuprofen”；美国专利号5,747,001关于“Aerosols Containing Beclomethasone Nanoparticle Dispersions”；美国专利号5,834,025关于“Reduction of Intravenously Administered NanoparticulateFormulation Induced Adverse Physiological Reactions”；美国专利号6,045,829“Nanocrystalline Formulations of Human Immunodeficiency Virus(HIV)ProteaseInhibitors Using Cellulosic Surface Stabilizers”；美国专利号6,068,858关于“Methods of Making Nanocrystalline Formulations of Human ImmunodeficiencyVirus(HIV)Protease Inhibitors Using Cellulosic Surface Stabilizers”；美国专利号6,153,225关于“Injectable Formulations of Nanoparticulate Naproxen”；美国专利号6,165,506关于“New Solid Dose Form of Nanoparticulate Naproxen”；美国专利号6,221,400关于“Methods of Treating Mammals Using Nanocrystalline Formulations ofHuman Immunodeficiency Virus(HIV)Protease Inhibitors”；美国专利号6,264,922关于“Nebulized Aerosols Containing Nanoparticle Dispersions”；美国专利号6,267,989关于“Methods for Preventing Crystal Growth and Particle Aggregation inNanoparticle Compositions”；美国专利号6,270,806关于“Use of PEG-DerivatizedLipids as Surface Stabilizers for Nanoparticulate Compositions”；美国专利号6,316,029关于“Rapidly Disintegrating Solid Oral Dosage Form”，美国专利号6,375,986关于“Solid Dose Nanoparticulate Compositions Comprising a SynergisticCombination of a Polymeric Surface Stabilizer and Dioctyl SodiumSulfosuccinate”；美国专利号6,428,814关于“Bioadhesive nanoparticulatecompositions having cationic surface stabilizers”；美国专利号6,431,478关于“Small Scale Mill”；和美国专利号6,432,381关于“Methods for targeting drugdelivery to the upper and/or lower gastrointestinal tract”，所有这些都通过引用具体并入。此外，于2002年1月31日公开的美国专利申请号20020012675 A1，关于“Controlled Release Nanoparticulate Compositions”，描述了纳米颗粒组合物，并且其通过引用具体并入。
包含本文所述化合物以及前药或盐形式的纳米颗粒制剂可用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染。
无定形小颗粒组合物描述于例如美国专利号4,783,484关于“ParticulateComposition and Use Thereof as Antimicrobial Agent”；美国专利号4,826,689关于“Method for Making Uniformly Sized Particles from Water-Insoluble OrganicCompounds”；美国专利号4,997,454关于“Method for Making Uniformly-SizedParticles From Insoluble Compounds”；美国专利号5,741,522关于“Ultrasmall,Non-aggregated Porous Particles of Uniform Size for Entrapping Gas Bubbles Withinand Methods”；和美国专利号5,776,496，关于“Ultrasmall Porous Particles forEnhancing Ultrasound Back Scatter”。
控释制剂
在一个优选的实施方案中，活性化合物与载体一起制备，所述载体将保护化合物免于从体内快速消除，例如控释制剂，包括但不限于植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。例如，肠溶包衣的化合物可用于保护胃酸的裂解。制备这种制剂的方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。合适的材料也可以商购获得。
脂质体悬浮液(包括但不限于用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向感染细胞的脂质体)也是优选的药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法制备，例如，如美国专利号4,522,811(通过引用并入)所述。例如，脂质体制剂可以通过如下方法制备：将适当的脂质(例如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、花生四烯酰磷脂酰胆碱(arachadoyl phosphatidyl choline)和胆固醇)溶解在无机溶剂中，然后蒸发无机溶剂，在容器的表面上留下干燥的脂质薄膜。然后将活性化合物的水溶液引入容器中。然后用手旋转容器以从容器的侧面释放脂质材料并分散脂质聚集体，从而形成脂质体悬浮液。
用于描述本发明的术语是本领域技术人员通常使用和已知的。如本文所用，以下缩写具有所指示的含义：
ACN 乙腈
Boc2O 二碳酸二叔丁酯
CDI 羰基二咪唑
DCC N,N'-二环己基碳二亚胺
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙基胺(Hünig碱)
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐
EtOAc 乙酸乙酯
h 小时
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-氧化物六氟磷酸酯
M 摩尔
min 分钟
rt或RT 室温
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
DMA 二甲基乙酰胺
IX.制备活性化合物的一般方法
容易制备活性化合物的方法是本领域已知的，并且是由已知方法的选择性组合而产生。本文公开的化合物可以如下详述或通过本领域技术人员已知的其他方法制备。本领域普通技术人员将理解，在不脱离本发明精神的情况下可以进行细节上的变化，并且决不限制本发明的范围。
各种反应方案总结如下。
方案1是本发明活性化合物的合成，特别是化合物A的合成方法的非限制性实例。
方案2是本发明活性化合物的合成，特别是化合物B的替代合成方法的非限制性实例。
方案3是本发明活性化合物的合成，特别是化合物C的合成方法的非限制性实例。
方案4是本发明活性化合物的合成，特别是化合物D的合成方法的非限制性实例。
方案5是本发明活性化合物的合成，特别是化合物E的合成方法的非限制性实例。
方案6是本发明活性化合物的合成，特别是化合物F和G的合成方法的非限制性实例。
方案7是本发明活性化合物的合成，特别是化合物H的合成方法的非限制性实例。
式A化合物可以通过首先使苯胺衍生物与通式I的羧酰氯在有机碱如Et3N或DIPEA的存在下进行选择性反应来制备。然后使中间体III与通式IV的胺反应，例如在有机溶剂如CH2Cl2中，在有机碱如Et3N的存在下。
Figure BDA0001848657530000691
方案1化合物A的合成方法
式B化合物可以通过首先使胺衍生物与通式V的羧酰氯在有机碱如Et3N或DIPEA的存在下进行选择性反应来制备。然后使中间体VI与通式IV的胺反应，例如在有机溶剂如CH2Cl2中，在有机碱如Et3N的存在下。
Figure BDA0001848657530000692
方案2化合物B的合成方法
通式C化合物的合成可如方案3中所述进行。通式VII的羧酸可以是N-保护的，例如，通过在碱如NaHCO3存在下用Boc2O处理。可以在有机胺碱如DMAP的存在下，使用肽偶联试剂例如EDC，使中间体VIII与通式II的胺偶联。然后可以将所得的通式IX化合物脱保护，例如，当Boc用作保护基团时，在TFA的存在下进行脱保护，然后在有机胺碱如Et3N存在下与通式X的磺酰氯反应。
Figure BDA0001848657530000701
方案3化合物C的合成方法
通式D化合物的合成可如方案4中所述进行。通式XI的酯可以在路易斯酸例如AlCl3的存在下与通式XII的草酰氯单烷基酯反应，得到中间体XIII。用无机碱例如NaOH进行选择性水解，然后在肽偶联试剂例如CDI的存在下将所得的α-酮酸XIV与通式IV的胺偶联，得到通式XV的化合物。用无机碱例如NaOH水解酯部分，然后在肽偶联试剂例如HATU的存在下，在有机胺碱如DIPEA的存在下将所得羧酸与通式II的胺偶联，得到通式D的化合物。
Figure BDA0001848657530000702
方案4化合物D的合成方法
通式E化合物的合成可如方案5中所述进行。可以在有机胺碱如DIPEA的存在下，使用肽偶联试剂例如HATU，使通式XVII的羧酸与通式II的胺偶联。中间体XVIII可以在路易斯酸例如AlCl3的存在下与通式XII的草酰氯单烷基酯反应，得到中间体XIX。用无机碱例如NaOH选择性水解，然后在肽偶联试剂例如DCC的存在下，在有机胺碱如DMAP的存在下将所得的α-酮酸XX与通式XXI的醇偶联，得到通式E的化合物。
Figure BDA0001848657530000711
方案5化合物E的合成方法
通式F和G化合物的合成可如方案6中所述进行。可以在有机胺碱如DIPEA的存在下，使用肽偶联试剂例如HATU，使通式XXII的羧酸与通式II的胺偶联。在甲酸存在下使用例如Zn还原化合物XXIII得到通式XXIV的氨基衍生物，其可以在肽偶联试剂例如DCC的存在下与通式XXV的氧代乙酸衍生物反应，或者在有机胺碱如Et3N的存在下与通式X的磺酰氯反应，分别得到通式F和G的化合物。
Figure BDA0001848657530000721
方案6化合物F和G的合成方法
通式H化合物的合成可如方案7中所述进行。通式XXVI的溴衍生物可以使用有机锂试剂例如n-BuLi进行锂-卤素交换，并与二烷基草酸酯例如草酸二乙酯反应。然后可以将所得化合物水解形成通式XXVIII的羧酸，其可以在有机胺碱如DIPEA的存在下使用肽偶联试剂例如HATU与通式II的胺偶联。用无机碱例如NaOH水解化合物XXIX，然后在肽偶联试剂例如CDI的存在下，在有机胺碱如DIPEA的存在下将所得的α酮酸XXX与通式IV的胺偶联，得到通式H的化合物。
Figure BDA0001848657530000731
方案7化合物H的合成方法
具体实施例
根据以下实施例和反应顺序制备了代表本发明的具体化合物；通过举例说明的方式提供了描述反应顺序的实施例和附图，以帮助理解本发明，并且不应解释为以任何方式限制在随后的权利要求中阐述的本发明。本发明化合物还可用作后续实施例中的中间体，以产生本发明的另外的化合物。没有必要尝试优化在任何反应中获得的产率。本领域技术人员将知道如何通过反应时间、温度、溶剂和/或试剂的常规变化来增加这样的产率。
无水溶剂购自Aldrich化学有限公司(Milwaukee，WI)和EMD化学品有限公司(Gibbstown，NJ)。试剂购自商业来源。除非另有说明，否则实施例中使用的材料是从易于获得的商业供应商获得的或通过化学合成领域技术人员已知的标准方法合成的。1H和13C NMR光谱在室温下在Bruker AscendTM400MHz傅里叶变换光谱仪上获得，并以内部四甲基硅烷的低场ppm报告。进行了氘交换、去耦实验或2D-COSY以确认质子分配。信号多重性由s(单重峰)、d(双重峰)、dd(双重峰的双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、br(宽峰)、bs(宽单峰)、m(多重峰)表示。所有J值均以Hz为单位。使用电喷雾技术在Micromass Platform LC光谱仪上测定质谱。在Sigma-
Figure BDA0001848657530000742
铝支撑的硅胶(25μm)板上进行分析性TLC。在硅胶上或通过反相高效液相色谱进行柱层析。
实施例1
Figure BDA0001848657530000741
试剂和条件：a)MeI，KOH，DMSO；b)ClCOCOOEt，AlCl3，CH2Cl2；c)NaOH 5％，MeOH，RT，10min；d)CDI，HCCCH2NH2，DMF，3h，RT；e)NaOH 5％，MeOH，16h，RT；f)3,4-二氟苯胺，HATU，DIPEA，DMF，16h，RT；或SOCl2，3-氰基-4-氟苯胺，DMA，回流；g)i)溴环丙烷，NaN3，H2O，120℃，MW，30min；ii)CuSO4，抗坏血酸钠，ACN，80℃，MW，30min。
1,3,5-三甲基吡咯-2-羧酸乙酯(2)
将3,5-二甲基吡咯-2-羧酸乙酯(100.0g，0.59mol)加入到氢氧化钾(100.6g，1.79mol)的二甲基亚砜(1L)溶液中并在氮气和0℃下搅拌30分钟。然后加入甲基碘(55.9mL，0.89mol)，将反应混合物温热至室温，并搅拌4小时。然后用二乙醚(3×1L)萃取反应，最后将合并的有机层用水(2×150mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物缓慢结晶，得到1,3,5-三甲基吡咯-2-羧酸乙酯2(102.4g，0.56mol，94％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.32(t,3H),2.20(s,3H),2.30(s,3H),3.75(s,3H),4.22(q,2H),5.75(s,1H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C9H14NO2：182.2，实测值：182.3。
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸(6)
在0℃，向1,3,5-三甲基吡咯-2-羧酸乙酯(10.0g，55.2mmol)的CH2Cl2(250mL)溶液中滴加2-氯-2-氧代乙酸乙酯(9.3mL，82.8mmol)的CH2Cl2(100mL)溶液，然后分批加入AlCl3(22.1g，165.7mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用冰淬灭。加入水(300mL)后，将混合物在硅藻土上过滤并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。将合并的有机层用饱和碳酸钠溶液(250mL)和饱和氯化铵溶液(250mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩。向得到的油状物中加入甲醇(100mL)和5％氢氧化钠溶液(100mL)，并将混合物在室温下搅拌15分钟。在真空下除去甲醇后，将混合物用乙酸乙酯(2×100mL)洗涤，用1N HCl溶液(pH＝1)酸化并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的固体用二乙醚(100mL)和己烷(100mL)洗涤，得到2-(5-乙氧基羰基-1,3,5-三甲基-吡咯-3-基)-2-氧代-乙酸4(8.1g，32.0mmol，58％)，为灰白色粉末。向2-(5-乙氧基羰基-1,3,5-三甲基-吡咯-3-基)-2-氧代-乙酸4(2.0g，7.9mmol)在DMF(15mL)和CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入1,1'-羰基二咪唑(1.92g，11.8mmol)和炔丙基胺(0.607mL，9.5mmol)。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。
将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到5，为淡黄色油状物。向溶解在甲醇(10mL)和THF(10mL)中的粗4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸乙酯5中加入5％氢氧化钠溶液(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，在真空蒸发甲醇和THF后，将水溶液用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，用1N HCl溶液(pH＝1)酸化并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的固体用二乙醚(50mL)和己烷(50mL)洗涤，得到4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(1.8g，6.9mmol，87％)，为白色粉末。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.77(s,1H),9.14(t,J＝5.7Hz,1H),3.99(dd,J＝5.7,2.6Hz,2H),3.75(s,3H),3.18(t,J＝2.4Hz,1H),2.37(s,6H)。13C NMR(101MHz,DMSO)δ188.0,167.2,163.0,142.8,129.7,121.8,117.5,80.5,73.8,33.3,28.1,12.3,12.0。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C13H15N2O4：263.1032，实测值：263.1025。
4-[(炔丙基氨基)(氧代)乙酰基]-N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2- 甲酰胺(7a)。
在室温下，向4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(750mg，2.7mmol)、3,4-二氟苯胺(410mg，3.2mmol)和DIPEA(746μL，4.3mmol)的DMF(15mL)溶液中加入HATU(1.63g，4.3mmol)。将混合物在50℃下搅拌3h。为了完成反应，加入更多的3,4-二氟苯胺(410mg，3.2mmol)并将混合物在65℃下进一步搅拌过夜。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。
将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物7a，为白色粉末(47％，503mg，1.4mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.49(s,1H),8.22–8.07(m,1H),8.07–7.95(m,1H),7.59–7.43(m,1H),7.33(q,J＝9.4Hz,1H),4.21–4.07(m,2H),3.69(s,3H),2.73(s,1H),2.43(s,3H),2.29(s,3H)。13C NMR(101MHz,丙酮)δ188.9,167.9,162.1,152.7,152.6,150.3,150.2,149.3,149.2,146.9,146.8,142.8,137.9,137.9,128.5,124.6,119.1,118.9,118.8,117.5,117.5,117.4,117.4,110.7,110.5,81.4,73.2,33.2,29.7,12.8,12.7。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-139.8–-140.0(m),-147.1–-147.2(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C19H18F2N3O3：374.1316，实测值：374.1309。
4-(2-(((1-环丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4- 二氟苯基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(8)
将溴环丙烷(0.4mL，3.3mmol)和叠氮化钠(430mg，6.6mmol)的水(1mL)溶液在微波辐照下在120℃下加热30分钟。然后加入化合物7(0.05g，0.1mmol)的乙腈(1mL)溶液，接着加入抗坏血酸钠(10mg，0.05mmol)和硫酸铜(20mg，0.12mmol)。将混合物在80℃下在微波辐照下加热30分钟，然后倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。得到的混合物通过快速色谱纯化(己烷：乙酸乙酯＝6:4v/v)，得到化合物8，为白色粉末(61％，31mg，0.06mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.50(s,1H),8.29–8.18(m,1H),8.06–7.94(m,1H),7.87(s,1H),7.57–7.48(m,1H),7.39–7.28(m,1H),6.16–5.98(m,1H),5.31–5.20(m,1H),5.09–5.00(m,2H),4.58(d,J＝5.9Hz,2H),3.67(d,J＝1.4Hz,3H),2.38(d,J＝1.3Hz,3H),2.24(d,J＝1.3Hz,3H)。13C NMR(101MHz,丙酮)δ187.4,166.3,160.3,150.9,150.8,148.5,148.4,147.5,147.4,145.1,144.9,144.4,144.4,140.9,136.2,136.1,136.1,136.0,132.7,126.6,122.9,122.5,118.3,117.3,117.1,117.1,115.7,115.7,115.7,115.7,108.9,108.7,51.9,34.4,31.4,11.1,11.0。19FNMR(377MHz,丙酮-d6)δ-139.8–-140.1(m),-147.0–-147.2(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C22H23F2N6O3：457.1800，实测值：457.1790。
Figure BDA0001848657530000771
N-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰 基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(7b)。
在室温下，向4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(0.1g，0.38mmol)的甲苯(5mL)溶液中加入0.1mL的SOCl2，并将混合物回流1.5小时。在真空中除去SOCl2后，将残留的油溶解在DMA(5mL)中并加入3-氰基-4-氟苯胺(0.1g，0.7mmol)。将混合物在100℃下搅拌3小时，然后冷却至室温。然后将溶液倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中并用EtOAc(3×25mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。
通过快速色谱法(己烷/EtOAc＝6：4v/v)纯化得到的残余物，得到N-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺7b(48％，0.7g，0.2mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.61(s,1H),8.37–8.27(m,1H),8.15(s,1H),8.13–8.04(m,1H),7.45(t,J＝9.1Hz,1H),4.21–4.06(m,2H),3.70(s,3H),2.77–2.70(m,1H),2.43(s,3H),2.30(s,3H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ188.9,167.8,162.3,160.7(d,J＝252.7Hz)143.0,138.0(d,J＝3.1Hz),128.4(d,J＝8.1Hz),128.2,125.5,125.0,118.9,118.6(d,J＝20.9Hz),115.3,102.6(d,J＝16.5Hz),81.4,73.3,33.3,29.7,12.9,12.8。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-115.9(dd,J＝9.6,4.7Hz).LCMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C20H19FN4O3：381.1，实测值：381.3。
Figure BDA0001848657530000791
试剂和条件：a)HSO3Cl，0℃，1h；b)i)SOCl2，80℃，1.5h；ii)3,4-二氟苯胺，甲苯，100℃，4h；c)炔丙基胺，Et3N，DMF，RT，过夜；d)i)溴环丙烷，NaN3，H2O，120℃，MW，30min；ii)CuSO4，抗坏血酸钠，CH3CN，80℃，MW，30min。
5-(N-((1-环丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨磺酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-2- 氟苯甲酰胺(13)
在0℃下将2-氟苯甲酸9(10.0g，71.4mmol)加入到氯磺酸(50mL)中并将混合物在0℃下搅拌1小时。然后将反应混合物缓慢倒入冰中。将形成的沉淀物过滤，用水(3×100mL)冲洗并在真空下干燥过夜，得到5-(氯磺酰基)-2-氟苯甲酸10，为褐色固体(10.5g，44.0mmol)。在室温下将5-(氯磺酰基)-2-氟苯甲酸10(10.0g，41.9mmol)加入到60mL的SOCl2中并将混合物回流1.5小时。在真空中除去SOCl2后，将残余油状物溶解在甲苯(150mL)中并加入3,4-二氟苯胺(6.5g，50.3mmol)。将混合物在100℃下搅拌4小时，然后冷却至室温。然后将溶液倒入饱和氯化铵溶液(200mL)中并用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的残余物通过快速色谱法(己烷/EtOAc＝6：4v/v)纯化，得到3-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-4-氟苯-1-磺酰氯11(92％，13.51g，38.6mmol)。在0℃下，向3-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-4-氟苯-1-磺酰氯11(10.0g，28.6mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液中加入炔丙胺盐酸盐(3.1g，34.3mmol)和Et3N(7.8mL，57.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后倒入饱和氯化铵溶液(250mL)中。用CH2Cl2(3×100mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并最终真空浓缩。将得到的固体用二乙醚(50mL)和己烷(50mL)洗涤，得到N-(3,4-二氟苯基)-2-氟-5-(N-(丙-2-炔-1-基)氨磺酰基)苯甲酰胺12(74％，7.8g，21.1mmol)，为白色粉末。将溴环丙烷(0.6mL，4.9mmol)和叠氮化钠(483mg，7.4mmol)的水(1mL)溶液在微波辐照下在120℃下加热30分钟。向该溶液中加入化合物12(0.1g，0.3mmol)的乙腈(1mL)溶液、抗坏血酸钠(10mg，0.05mmol)和硫酸铜(20mg，0.12mmol)。
然后将反应混合物在80℃下在微波辐照下加热30分钟，然后倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中。用EtOAc(3×50mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将所得残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝6：4v/v)纯化，得到化合物13，为白色粉末(19％，23mg，0.05mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.92(s,1H),8.25(dd,J＝6.6,2.5Hz,1H),8.06–7.95(m,2H),7.77(s,1H),7.58–7.52(m,1H),7.48(dd,J＝10.1,8.7Hz,1H),7.37(dt,J＝10.6,9.0Hz,1H),7.21(brs,1H),6.11–5.94(m,1H),5.32–5.16(m,1H),4.99(dt,J＝6.0,1.5Hz,2H),4.32(s,2H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ188.9,167.9,162.1,150.2,149.2(d,J＝12.9Hz),146.8(d,J＝13.0Hz),142.8,137.9(d,J＝5.9Hz),128.5,124.6,120.4–118.2(m),117.5(dd,J＝6.0,3.6Hz),110.6(d,J＝22.1Hz),81.5,73.3,33.2,29.7,12.8(d,J＝9.6Hz)。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-110.6(s),-139.6–-139.7(m),-146.1–-146.3(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C19H17F3N5O3S：452.1004，实测值：452.0999。
Figure BDA0001848657530000811
试剂和条件：a)HSO3Cl，0℃，1h；b)i)SOCl2，100℃，1.5h；ii)3,4-二氟苯胺，甲苯，RT，48h；c)炔丙基胺，DIPEA，DMF，RT，过夜。
N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(N-(丙-2-炔-1-基)氨磺酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺 (17)
在0℃下，将1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(10.0g，80mmol)加入到氯磺酸(50mL)中，并将所得溶液在0℃下搅拌1小时。然后将反应混合物缓慢倒入冰中。然后将形成的沉淀物过滤，用水(3×100mL)冲洗并在真空下干燥过夜，得到4-(氯磺酰基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸15，为褐色固体(10.7g，47.8mmol)。在室温下，将4-(氯磺酰基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸15(1.0g，4.4mmol)加入到SOCl2中，并将混合物在100℃下加热1.5小时。在真空中除去亚硫酰氯后，将残余的油溶解在甲苯(50mL)中并加入3,4-二氟苯胺(650mg，5.0mmol)。
将溶液在室温下搅拌48小时，然后倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中。将该溶液用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，并将合并的有机层用硫酸钠干燥。真空浓缩后，将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-磺酰氯16(775mg，2.3mmol)。向5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-磺酰氯16(100mg，0.3mmol)的DMF(5mL)溶液中加入炔丙胺盐酸盐(33mg，0.4mmol)和DIPEA(78μL，0.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。
将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(N-(丙-2-炔-1-基)氨磺酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺17(77％，81mg，0.2mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.56(s,1H),8.05–7.87(m,1H),7.62–7.48(m,2H),7.38–7.25(m,1H),7.22(d,J＝1.9Hz,1H),6.57(s,1H),4.03(s,3H),3.79(s,2H),2.70(t,J＝2.5Hz,1H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ160.9,152.6(d,J＝13.0Hz),150.1(d,J＝13.2Hz),149.1(d,J＝12.7Hz),146.7(d,J＝12.8Hz),137.9(dd,J＝9.1,3.0Hz),132.2,128.4,123.7,119.7–118.4(m),117.8(dd,J＝5.9,3.5Hz),114.0,110.8(d,J＝22.1Hz),80.8,74.5,38.5,34.2。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-138.4–-138.7(m),-145.4–-146.1(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C15H14F2N3O3S：354.0724，实测值：354.0717。
Figure BDA0001848657530000821
试剂和条件：a)HSO3Cl，0℃至RT，4h；b)HCCCH2NH2，Et3N，DMF，RT，2h；c)NaOH 5％，MeOH，16h，RT至60℃，18h；d)3,4-二氟苯胺，HATU，DIPEA，DMF，50℃，16h。
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸(20)
在0℃下将1,3,5-三甲基吡咯-2-羧酸乙酯2(2.0g，11.0mmol)加入到氯磺酸(10mL)中并将混合物在0℃下搅拌1小时，然后在室温下搅拌3小时。然后将反应混合物缓慢倒入冰中。将混合物用5％氢氧化钠溶液(pH>7)碱化，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机层，用Na2SO4干燥并真空浓缩，得到粗制深棕色固体(69％，2.1g，7.5mmol)。向溶解于DMF(10mL)中的粗4-(氯磺酰基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯中间体18中加入炔丙基胺(0.72mL，11.3mmol)和三乙胺(3.1mL，22.5mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时并倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中。用EtOAc(3×50mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将所得油状物在甲醇(5mL)中稀释，并加入5％氢氧化钠溶液(15mL)。混合物在60℃搅拌过夜。在真空下除去甲醇后，将混合物用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，用1N HCl溶液(pH＝1)酸化并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的固体用二乙醚(20mL)和己烷(20mL)洗涤，得到1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸20(28％，0.8g，0.3mmol)，为灰白色粉末。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.70(s,1H),7.64(t,J＝5.9Hz,1H),3.73(s,3H),3.58(dd,J＝6.0,2.6Hz,2H),3.04(t,J＝2.5Hz,1H),2.43(s,3H),2.41(s,3H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.0,138.9,127.6,120.8,118.1,80.1,74.3,33.4,31.8,12.0,11.5.
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)- 1H-吡咯-2-甲酰胺(21)
在室温下，向1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸20(0.1g，0.3mmol)、3,4-二氟苯胺(96mg，7.4mmol)和DIPEA(746μL，1.1mmol)的DMF(15mL)溶液中加入HATU(0.211g，0.5mmol)。将混合物在50℃搅拌过夜。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物21，为白色粉末(36％，51mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.44(s,1H),8.24–7.80(m,1H),7.74–7.44(m,1H),7.40–7.22(m,1H),6.51(d,J＝6.3Hz,1H),3.77–3.70(m,2H),3.68(s,3H),2.68–2.60(m,1H),2.51(s,3H),2.37(s,3H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ160.2,150.9(d,J＝13.1Hz),148.4(d,J＝13.0Hz),147.5(d,J＝12.9Hz),145.1(d,J＝12.6Hz),137.1,126.1,120.7,117.2(d,J＝18.1Hz),117.0,115.8(d,J＝3.9Hz),108.9(d,J＝22.2Hz),79.1,72.3,31.7,10.4(d,J＝32.3Hz)。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-139.8–-139.9(m),-147.0–-147.1(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C17H18F2N3O3S：382.1037，实测值：382.1027。
Figure BDA0001848657530000841
试剂和条件：a)HATU，3,4-二氟苯胺，DIPEA，DMF，65℃，过夜；b)草酰氯乙酯，AlCl3，CH2Cl2，0℃至RT，过夜；c)i)NaOH 5％，MeOH，RT，15min；ii)HCl 1N；d)CDI，R1R2NH，DMF，CH2Cl2，RT，2h。
2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸(24)
在室温下，向1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(4g，32mmol)、3,4-二氟苯胺(6.2g，48mmol)和DIPEA(13mL，96mmol)的DMF(150mL)溶液中加入HATU(18.2g，48mmol)。将混合物在65℃加热过夜并倒入饱和氯化铵溶液中。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。所得混合物通过快速色谱(己烷：EtOAc＝6:4v/v)纯化，得到化合物22，为白色粉末(82％，6.2g，26.2mmol)。
在0℃，向N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺22(3g，12.7mmol)的CH2Cl2(150mL)溶液中滴加2-氯-2-氧代乙酸乙酯(2.12mL，19.1mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液，然后分批加入AlCl3(5.1g，38.1mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌过夜，然后倒入碎冰中。加入水(300mL)后，将混合物在硅藻土上过滤，水层用CH2Cl2(3×100mL)萃取。将合并的有机层用饱和碳酸钠溶液(100mL)和饱和氯化铵溶液(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩。将所得油状物在甲醇/THF(v/v＝1/2，30mL)中稀释，并加入5％氢氧化钠溶液(30mL)。在室温下搅拌15分钟后，将混合物真空浓缩。将混合物用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，用1N HCl溶液(pH＝1)酸化并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将所得固体用二乙醚(20mL)和己烷(20mL)洗涤，得到2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸24(3.48g，11.3mmol)，为灰白色粉末。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.28(s,1H),8.02(d,J＝1.9Hz,1H),7.94–7.81(m,1H),7.60(d,J＝1.9Hz,1H),7.56–7.47(m,1H),7.44–7.24(m,1H),3.96(s,3H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ181.1,165.3,159.5,150.5(d,J＝13.1Hz),148.0(d,J＝13.1Hz),147.0(d,J＝12.5Hz),144.6(d,J＝12.6Hz),136.6,136.4(dd,J＝9.2,2.8Hz),127.9,119.0,117.7(d,J＝17.7Hz),116.8(dd,J＝5.8,3.2Hz),114.9,109.4(d,J＝21.7Hz),37.7。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-138.0–-138.2(m),-145.5–-145.6(m).
Figure BDA0001848657530000851
4-(2-(烯丙基氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲 酰胺(25)
在室温下，向2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸24(0.1g，0.3mmol)在DMF(4mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(79mg，0.05mmol)和烯丙基胺(29μL，0.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液中。用CH2Cl2(3×20mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到4-(2-(烯丙基氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺25，为灰白色粉末(81％，91mg，0.2mmol)。1HNMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.60(s,1H),8.23(s,1H),8.14(s,1H),8.04–7.90(m,1H),7.58(s,1H),7.57–7.49(m,1H),7.30(q,J＝9.6Hz,1H),6.25–5.68(m,1H),5.22(d,J＝16.8Hz,1H),5.11(dt,J＝10.3,1.4Hz,1H),4.06(s,3H),3.99–3.92(m,2H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ182.7,163.7,161.1,152.6(d,J＝13.1Hz),150.2(d,J＝12.9Hz),149.1(d,J＝12.8Hz),146.7(d,J＝12.9Hz),138.9,137.9,136.2,129.0,120.9,118.8(d,J＝18.0Hz),117.9–117.4(m),117.0,116.6,110.7(d,J＝22.1Hz),42.9,38.7。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-138.5–-138.8(m),-145.9–-146.2(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C17H16F2N3O3：348.1260，实测值：348.1158。
Figure BDA0001848657530000861
N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2- 甲酰胺(26)
在室温下，向2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸24(0.1g，0.3mmol)在DMF(4mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(79mg，0.05mmol)和噻唑-2-胺(33mg，0.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液中。用CH2Cl2(3×20mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺26，为褐色粉末(79％，101mg，0.2mmol)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.74(s,1H),10.33(s,1H),8.20(s,1H),7.94–7.83(m,1H),7.69(s,1H),7.60(d,J＝3.6Hz,1H),7.56–7.49(m,1H),7.48–7.38(m,1H),3.98(s,3H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ180.6,162.5,159.5,150.5(d,J＝12.9Hz),148.1(d,J＝12.5Hz),138.6,137.2,136.4(d,J＝12.0Hz),127.9,118.7,117.8(d,J＝17.6Hz),116.8,109.5(d,J＝21.7Hz),60.2,37.8,17.9(d,J＝672.1Hz)。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-137.3–-137.4(m),-144.5–-144.7(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C17H13F2N4O3S：391.0676，实测值：391.0669。
Figure BDA0001848657530000871
4-(2-((环戊基氧基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡 咯-2-甲酰胺(27)
在室温下，向2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸24(0.1g，0.3mmol)在DMF(4mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(79mg，0.05mmol)和O-环戊基羟胺盐酸盐(44mg，0.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液中。用CH2Cl2(3×20mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到4-(2-((环戊基氧基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺27，为褐色粉末(26％，33mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ10.83(s,1H),9.63(s,1H),8.14(d,J＝1.7Hz,1H),8.03–7.90(m,1H),7.65–7.46(m,2H),7.40–7.20(m,1H),4.69–4.57(m,1H),4.06(s,3H),1.95–1.85(m,2H),1.79–1.65(m,4H),1.57(s,2H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ181.0,161.2(d,J＝178.9Hz),159.7,159.3,150.8(d,J＝13.2Hz),148.3(d,J＝13.2Hz),147.3(d,J＝12.8Hz),144.9(d,J＝12.7Hz),136.8,136.2(dd,J＝9.1,3.0Hz),127.4,119.2,117.0(d,J＝18.0Hz),116.5–115.7(m),114.5,109.1(d,J＝22.2Hz),87.4,87.0,37.0,30.9,23.4。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-138.6–-138.7(m),-146.0–-146.1(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C19H20F2N3O4：392.1422，实测值：392.1415。
Figure BDA0001848657530000872
N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰 胺(28)
在室温下，向2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸24(0.1g，0.3mmol)在DMF(4mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(79mg，0.05mmol)和苯胺(35μL，0.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液中。用CH2Cl2(3×20mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺28，为白色粉末(32％，40mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.79(s,1H),9.64(s,1H),8.30(s,1H),8.04–7.94(m,1H),7.93(s,1H),7.91(s,1H),7.63(d,J＝1.8Hz,1H),7.60–7.52(m,1H),7.44–7.37(m,2H),7.36–7.27(m,1H),7.22–7.14(m,1H),4.10(s,3H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ182.4,162.0,161.1,152.6(d,J＝13.0Hz),150.2(d,J＝13.2Hz),149.1(d,J＝12.5Hz),146.7(d,J＝12.8Hz),139.7,139.1,138.0(dd,J＝9.2,2.9Hz),130.6,129.2,126.3,121.8,120.5,118.9(d,J＝17.9Hz),117.8(dd,J＝5.9,3.5Hz),116.7,110.9(d,J＝22.3Hz),38.8。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-138.6–-138.9(m),-146.1–-146.2(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C20H16F2N3O3：384.116，实测值：384.1153。
Figure BDA0001848657530000881
N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰 胺(29)
在室温下，向2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸24(0.1g，0.3mmol)在DMF(4mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(79mg，0.05mmol)和苄胺(42μL，0.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液中。用CH2Cl2(3×20mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺29，为白色粉末(99％，126mg，0.2mmol)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ182.7,163.9,161.1,159.9,152.6(d,J＝13.0Hz),150.1(d,J＝13.3Hz),149.1(d,J＝12.7Hz),146.7(d,J＝12.8Hz),142.8,140.7,139.0,138.0(d,J＝12.1Hz),130.2,130.0,129.4,129.0,128.9,128.4,120.9,118.8(d,J＝18.3Hz),118.3–117.5(m),116.7,110.8(d,J＝22.2Hz),45.3,44.3,38.8。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-138.7–-138.8(m),-146.1–-146.4(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C21H18F2N3O3：398.1316，实测值：398.1312。
Figure BDA0001848657530000891
4-(2-((氰基甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯- 2-甲酰胺(30)
在室温下，向2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸24(0.1g，0.3mmol)在DMF(4mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(79mg，0.05mmol)和2-氨基乙腈盐酸盐(36mg，0.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液中。用CH2Cl2(3×20mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到4-(2-((氰基甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺30，为褐色粉末(30％，34mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.43(s,1H),8.07(s,1H),8.06–7.71(m,1H),7.54–7.40(m,1H),7.37–7.12(m,1H),6.93(s,1H),6.88–6.84(m,1H),3.93(s,3H),3.66–3.43(m,1H),1.99–1.93(m,3H),1.79–1.68(m,2H),1.67–1.55(m,2H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ181.1,164.1,161.1,139.0,129.3,120.5,118.9(d,J＝17.6Hz),118.0,117.8(dd,J＝6.0,3.2Hz),116.6,110.9(d,J＝22.1Hz),38.8,28.8。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-138.7–-138.8(m),-145.9–-146.2(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C17H20F2N3O3S：384.1193，实测值：384.1186。
Figure BDA0001848657530000901
N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(2-吗啉-2-氧代乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(31)
在室温下，向2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸24(0.1g，0.3mmol)在DMF(4mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(79mg，0.05mmol)和吗啉(34μL，0.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液中。用CH2Cl2(3×20mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(2-吗啉-2-氧代乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺31，为白色粉末(80％，97mg，0.2mmol)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.28(s,1H),8.19–7.80(m,2H),7.57–7.47(m,2H),7.46–7.36(m,1H),3.95(s,3H),3.81–3.67(m,2H),3.64–3.59(m,2H),3.58–3.49(m,2H),3.34–3.25(m,2H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ185.9,165.8,159.5,150.5(d,J＝13.1Hz),148.1(d,J＝13.2Hz),147.1(d,J＝12.8Hz),144.7(d,J＝12.8Hz),136.4(dd,J＝9.1,3.0Hz),135.9,128.1,119.8,117.8(d,J＝17.7Hz),117.2–116.3(m),114.0,109.5(d,J＝21.7Hz),66.5(d,J＝30.5Hz),46.3,41.5,37.8。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-137.2–-137.4(m),-144.5–-144.6(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C18H18F2N3O4：378.1265，实测值：378.1257。
Figure BDA0001848657530000902
4-(2-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基- 1H-吡咯-2-甲酰胺(32)
在室温下，向2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸24(0.1g，0.3mmol)在DMF(4mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(79mg，0.05mmol)和3,3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐(50mg，0.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液中。用CH2Cl2(3×20mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到4-(2-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺32，为白色粉末(48％，60mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.60(s,1H),8.06(d,J＝1.7Hz,1H),8.01–7.86(m,1H),7.70–7.47(m,2H),7.34–7.26(m,1H),4.98–4.79(m,2H),4.65–4.31(m,2H),4.05(s,3H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ182.6,163.7,161.1,152.6(d,J＝13.1Hz),150.2(d,J＝13.6Hz),149.1(d,J＝12.8Hz),146.7(d,J＝13.1Hz),138.4,138.2–137.6(m),129.2,121.4,121.0,118.9(d,J＝17.9Hz),118.3,118.0–117.5(m),116.2,115.6,110.8(d,J＝22.2Hz),65.8(t,J＝28.6Hz),61.9(t,J＝28.7Hz),38.8。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-102.1(p,J＝12.3Hz),-138.7–-138.8(m),-146.0–-146.2(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C17H14F4N3O3：384.0971，实测值：384.0964。
Figure BDA0001848657530000911
试剂和条件：a)HNO3，Ac2O，-25℃至RT，2h；b)HATU，DIPEA，3,4-二氟苯胺，DMF，50℃，过夜；c)Zn，HCOOH，MeOH，RT，10min；d)RSO2Cl，Et3N，DMF，RT，过夜。
N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-(苯基磺酰氨基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(36)
在-25℃下，向1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸14(4g，32mmol)的乙酸酐(40mL)溶液中加入70％硝酸(3.2mL)。将反应温热至室温，并搅拌2小时。在-25℃下加入水(200mL)后，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取混合物。
将合并的有机层用饱和碳酸钠溶液(3×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝4:6v/v)，得到化合物33，为深色油状物(14％，770mg，4.5mmol)。在室温下，向1-甲基-4-硝基-1H-吡咯-2-羧酸33(0.77g，4.5mmol)、3,4-二氟苯胺(1.16g，9.0mmol)和DIPEA(1.85mL，13.6mmol)的DMF(20mL)溶液中加入HATU(1.89g，5.0mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌过夜，然后倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱法(己烷：EtOAc＝7：3v/v)纯化，得到N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡咯-2-甲酰胺34(64％，820mg，2.9mmol)。向N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡咯-2-甲酰胺34(250mg，0.9mmol)在甲醇(20mL)和甲酸(0.5mL，13.3mmol)的悬浮液中加入Zn粉(250mg，3.8mmol)。将混合物在室温下搅拌10分钟，并在硅藻土上过滤。将溶液用1N HCl(3×50mL)萃取并用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤。然后将水层用5％氢氧化钠溶液(pH>8)碱化，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。
将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到4-氨基-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺35，为棕色/淡黄色固体(68％，153mg，0.6mmol)。向4-氨基-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺35(25mg，0.1mmol)的DMF(3mL)溶液中加入苯磺酰氯(14μL，0.1mmol)和Et3N(20μL，0.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后倒入饱和氯化铵溶液(20mL)中。用EtOAc(3×20mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝1:1v/v)，得到化合物36(51％，20mg，0.05mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.37(s,1H),8.53(s,1H),8.05–7.85(m,1H),7.81–7.71(m,2H),7.68–7.58(m,1H),7.58–7.51(m,2H),7.45–7.41(m,1H),7.35–7.17(m,1H),6.77(d,J＝2.0Hz,1H),6.72(d,J＝2.0Hz,1H),3.86(s,3H)。13C NMR(101MHz,丙酮-d6)δ161.3,141.9,134.3,130.6,128.8,125.6,124.2,121.9,118.7(d,J＝17.9Hz),118.1–117.4(m),110.7(d,J＝22.1Hz),110.2,38.0。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-140.2–-140.4(m),-147.9–-148.1(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C18H16F2N3O3S：392.0880，实测值：392.0872。
4-(环戊烷磺酰氨基)-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(37)
向4-氨基-N-(3,4-二氟苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺35(50mg，0.2mmol)的DMF(5mL)溶液中加入环戊基磺酰氯(51μL，0.1mmol)和Et3N(40μL，0.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后倒入饱和氯化铵溶液(30mL)中。用EtOAc(3×30mL)萃取后，将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝1:1v/v)，得到化合物37(56％，43mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.43(s,1H),8.07(s,1H),8.06–7.71(m,1H),7.54–7.40(m,1H),7.37–7.12(m,1H),6.93(s,1H),6.88–6.84(m,1H),3.93(s,3H),3.66–3.43(m,1H),1.99–1.93(m,3H),1.79–1.68(m,2H),1.67–1.55(m,2H)。19FNMR(377MHz,丙酮-d6)δ-140.2–-140.4(m),-148.0–-148.1(m)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C17H20F2N3O3S：384.1193，实测值：384.1186。
Figure BDA0001848657530000931
4-(2-(((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)- 1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(38)
向7a在ACN/H2O混合物(2mL，1：1)中的溶液中加入叠氮化钠(26mg，0.4mmol)，CuSO4.5H2O(5mg)和抗坏血酸钠(12mg)。将反应混合物在150℃下和微波辐照下加热1小时。将溶液用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。使用DCM/MeOH(95：5)通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到38，产率为41％(23mg)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C19H19F2N6O3：417.1487，实测值：417.1476。
Figure BDA0001848657530000941
试剂和条件：a)MeI，KOH，DMSO；b)NaOH，EtOH，100℃，6h；c)3,4-二氟苯胺，HATU，DIPEA，DMF，60℃；d)乙基草酰氯，AlCl3，DCM，0℃至rt，16,h；e)NaOH，EtOH，rt，1h；f)胺，CDI，DMF，DCM，rt，1h。
1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸(39)
向2(3g，72mmol)的EtOH(100mL)溶液中加入NaOH 20％(70mL)。将反应在100℃加热6h。真空蒸发EtOH，并将混合物用DCM(3×30mL)洗涤。用1m HCl将水层小心酸化至pH 3-4。用DCM(3×30mL)萃取混合物。将合并的有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。所得固体用冷Et2O洗涤，得到39，产率为61％(6.7g)，为粉红色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.88(s,1H),5.75(s,1H),3.68(s,3H),2.19(s,3H),2.15(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C8H12NO2：154.1，实测值：154.5。
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(40)
在0℃下，向39(2.9g，18.9mmol)的DMF(20mL)溶液中加入3,4-二氟苯胺(4.5mL，22.7mmol)、HATU(8.6g，22.7mmol)和DIPEA(6.6mL，37.8mmol)。将混合物在60℃加热2天。然后将反应混合物用EtOAC稀释，并用1M HCl、水和盐水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。使用己烷/EtOAc(8：2)通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到40，产率为37％(1.85g)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.76–7.65(m,1H),7.19–7.07(m,2H),5.80(s,1H),3.77(s,3H),2.38(s,3H),2.24(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C14H14F2N2O：264.1，实测值：265.5。
2-(5-((3,4-二氟苯基)氨甲酰基)-1,2,4-三甲基-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙酸 (42)
在0℃下，向40(860mg，3.26mmol)的DCM(30mL)溶液中加入乙基草酰氯(980μL，8.80mmol)和AlCl3(1.08g，8.15mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时并倒入碎冰中。用DCM萃取混合物，并在硅藻土上过滤合并的有机层。浓缩滤液，所得残余物不经进一步纯化用于下一步。向粗41的EtOH溶液中加入NaOH 10％(25mL)。混合物在室温下搅拌1h。真空蒸发EtOH，并将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。用1M HCl酸化水层。用EtOAc(3×10mL)萃取混合物。将合并的有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。所得固体用Et2O洗涤，得到42，两步的产率为59％(646mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.13(s,1H),10.46(s,1H),8.04–7.71(m,1H),7.59–7.28(m,2H),3.60(s,3H),2.46(s,3H),2.26(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C16H15F2N2O4：337.1，实测值：337.5。
合成43-48的一般程序
在室温下，向42(40mg，0.119mmol)在DMF/DCM混合物(2mL，1:1)中的溶液中加入CDI(29mg，0.178mmol)。15分钟后，加入胺(0.178mmol)并将混合物搅拌1小时。将反应混合物用EtOAc稀释并用H2O(3×5mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。使用DCM/MeOH(98：2)通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到化合物43-48。
Figure BDA0001848657530000961
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(吡啶-2-基氨基)乙酰基)-1H- 吡咯-2-甲酰胺(43)
产率：69％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.33(s,1H),8.45–8.38(m,1H),8.30(d,J＝8.3Hz,1H),7.85–7.67(m,2H),7.49(s,1H),7.22–7.12(m,3H),3.75(s,3H),2.45(s,3H),2.44(s,3H)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C21H19F2N4O3：413.1425，实测值：413.1416。
Figure BDA0001848657530000962
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰基)- 1H-吡咯-2-甲酰胺(44)
产率：74％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.98(s,1H),7.80–7.69(m,1H),7.43–7.32(m,1H),7.13(dt,J＝10.0,8.8Hz,1H),3.72–3.67(m,2H),3.66(s,3H),3.32(dd,J＝5.9,4.1Hz,2H),2.46(t,J＝5.2Hz,2H),2.42(s,3H),2.35(t,J＝5.1Hz,2H),2.31(s,3H),2.30(s,3H)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C21H25F2N4O3：419.1895，实测值：419.1886。
Figure BDA0001848657530000971
4-(2-(二乙基氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-1H-吡 咯-2-甲酰胺(45)
产率：71％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.07(s,1H),7.87–7.73(m,1H),7.45–7.36(m,1H),7.13(dt,J＝10.0,8.8Hz,1H),3.66(s,3H),3.48(q,J＝7.1Hz,2H),3.22(q,J＝7.0Hz,2H),2.42(s,3H),2.31(s,3H),1.21(t,J＝7.1Hz,3H),1.14(t,J＝7.0Hz,3H)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C20H24F2N3O3：392.1786，实测值：392.1776。
Figure BDA0001848657530000972
4-(2-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1,3, 5-三甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(46)
产率：46％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.42(s,2H),10.45(s,1H),8.03–7.76(m,1H),7.56–7.38(m,4H),7.18(dd,J＝5.9,3.2Hz,2H),3.61(s,3H),2.45(s,3H),2.27(s,3H)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C23H20F2N5O3：452.1534，实测值：452.1525。
Figure BDA0001848657530000981
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-((吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰 基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(47)
产率：55％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.28(t,J＝6.1Hz,1H),8.53(d,J＝4.8Hz,1H),7.94–7.77(m,2H),7.46–7.41(m,2H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.34–7.26(m,1H),4.50(d,J＝5.9Hz,2H),3.59(s,3H),2.38(s,3H),2.21(s,3H)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C22H21F2N4O3：427.1582，实测值：427.1572。
Figure BDA0001848657530000982
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-(((1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基)氨基)- 2-氧代乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(48)
产率：63％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.48(s,2H),7.77–7.66(m,1H),7.26–7.20(m,1H),7.13(dt,J＝9.9,8.7Hz,1H),6.93(d,J＝1.3Hz,1H),6.85(d,J＝1.3Hz,1H),4.53(d,J＝5.7Hz,2H),3.72(s,3H),3.64(s,3H),2.30(s,3H),2.24(s,3H)。HRMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C21H22F2N5O3：430.1691，实测值：430.1681。
Figure BDA0001848657530000991
a)苯胺，HATU，DIPEA，DMF，60℃，16h；b)乙基草酰氯，AlCl3，DCM，0℃至RT，16,h；c)NaOH，EtOH，rt，1h；d)胺，HATU，DIPEA，DMF，rt，2h。
1,3,5-三甲基-N-苯基-1H-吡咯-2-甲酰胺(49)
在0℃下，向39(2.0g，13mmol)的DMF(50mL)溶液中加入苯胺(2.4mL，26mmol)、HATU(5.93g，15.6mmol)和DIPEA(4.5mL，26mmol)。将混合物在60℃加热2天。然后将反应混合物用EtOAc稀释，并用1M HCl、水和盐水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。使用己烷/EtOAc(8：2)通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到49，产率为58％(1.72g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.60(s,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,2H),7.31(t,J＝7.7Hz,2H),7.04(t,J＝7.4Hz,1H),5.73(s,1H),3.57(s,3H),2.17(s,6H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C14H17N2O：229.1，实测值：229.5。
2-氧代-2-(1,2,4-三甲基-5-(苯基氨甲酰基)-1H-吡咯-3-基)乙酸(51)
在0℃下，向49(695mg，3.05mmol)的DCM(30mL)溶液中加入乙基草酰氯(916μL，8.23mmol)和AlCl3(1.01g，7.62mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时并倒入碎冰中。用DCM萃取混合物，并在硅藻土上过滤合并的有机层。浓缩滤液，所得残余物不经进一步纯化用于下一步。向粗50的EtOH溶液中加入NaOH 10％(30mL)。混合物在室温下搅拌1h。真空蒸发EtOH，并将混合物用EtOAc(3×10mL)洗涤。用1M HCl酸化水层。用EtOAc(3×10mL)萃取混合物。将合并的有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。所得固体用Et2O洗涤，得到51，两步的产率为70％(642mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.18(s,1H),10.26(s,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,2H),7.35(t,J＝7.8Hz,2H),7.10(td,J＝7.4,1.1Hz,1H),3.61(s,3H),2.46(s,3H),2.26(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C16H17N2O4：301.1，实测值：301.5。
合成化合物52和53的一般程序
在0℃下，向51(50mg，0.17mmol)的DMF(2mL)溶液中加入胺(0.25mmol)、HATU(76mg，0.20mmol)和DIPEA(58μL，0.33mmol)。将混合物室温下搅拌2h。然后将溶液用EtOAc稀释并用水和盐水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。使用DCM/MeOH(98：2)通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到所需化合物52和53。
Figure BDA0001848657530001001
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(吡啶-2-基氨基)乙酰基)-N-苯基-1H-吡咯-2-甲酰 胺(52)
产率：75％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.47(s,1H),8.43–8.35(m,1H),8.30(d,J＝8.3Hz,1H),7.86–7.74(m,1H),7.68–7.57(m,3H),7.46–7.34(m,1H),7.22–7.10(m,2H),3.73(s,3H),2.44(s,3H),2.43(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C21H21N4O3：377.2，实测值：377.4。
Figure BDA0001848657530001011
4-(2-((5-氟吡啶-2-基)氨基)-2-氧代乙酰基)-1,3,5-三甲基-N-苯基-1H-吡咯- 2-甲酰胺(53)
产率：68％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.16(s,1H),10.26(s,1H),8.61–8.47(m,1H),8.40–8.19(m,1H),7.76–7.66(m,2H),7.34(dd,J＝8.5,7.4Hz,2H),7.25(dd,J＝8.8,3.2Hz,1H),7.15–7.04(m,1H),3.62(s,3H),2.44(s,3H),2.26(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C21H20FN4O3：395.2，实测值：395.5。
Figure BDA0001848657530001012
试剂和条件：a)胺，HATU，DIPEA，DMF，16h，rt；或者i)SOCl2，甲苯，110℃，1h，ii)胺，DMA，0℃，2h。
Figure BDA0001848657530001013
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-N-(4-(三氟甲氧基) 苯基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(54)
室温下，向4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(250mg，1.0mmol)、4-(三氟甲氧基)苯胺(227mg，1.3mmol)和DIPEA(330μL，2.0mmol)的吡啶(10mL)溶液中加入HATU(0.65g，1.8mmol)。将混合物在65℃下搅拌18h。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物54，为白色粉末(35％，141mg，0.3mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.51(s,1H),8.17(s,1H),7.95(d,J＝9.1Hz,2H),7.36(d,J＝8.1Hz,2H),4.17(dd,J＝5.9,2.6Hz,2H),3.70(s,3H),2.75(t,J＝2.5Hz,1H),2.45(s,3H),2.31(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C20H19F3N3O4：422.4，实测值：422.4。
Figure BDA0001848657530001021
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-N-(3-(三氟甲氧基) 苯基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(55)
室温下，向4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(250mg，1.0mmol)、3-(三氟甲氧基)苯胺(227mg，1.3mmol)和DIPEA(330μL，2.0mmol)的吡啶(10mL)溶液中加入HATU(0.65g，1.8mmol)。将混合物在65℃下搅拌18h。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物55，为白色粉末(34％，135mg，0.3mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.57(s,1H),8.18(s,1H),8.02(s,1H),7.81–7.67(m,1H),7.50(t,J＝8.2Hz,1H),7.16–7.06(m,1H),4.17(dd,J＝5.8,2.6Hz,2H),3.71(s,3H),2.75(t,J＝2.5Hz,1H),2.45(s,3H),2.32(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C20H19F3N3O4：422.4，实测值：422.4。
Figure BDA0001848657530001022
N-(2-(3,4-二氟苯基)丙烷-2-基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基 氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(56)
室温下，向4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)、2-(3,4-二氟苯基)丙-2-胺(65mg，0.4mmol)和DIPEA(132μL，0.8mmol)的DMF(5mL)溶液中加入HATU(0.218g，0.6mmol)。将混合物在65℃下搅拌18h。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物56(38％，61mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ8.11(s,1H),7.59(s,1H),7.47–7.38(m,1H),7.37–7.31(m,1H),7.26(dt,J＝10.5,8.5Hz,1H),4.14(dd,J＝5.8,2.5Hz,2H),3.53(s,3H),2.72(t,J＝2.6Hz,1H),2.37(s,3H),2.30(s,3H),1.77(s,6H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C22H24F2N3O3：416.4，实测值：416.5。
Figure BDA0001848657530001031
N-(1-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨 基)乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(57)
室温下，向4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(75mg，0.3mmol)、1-(3,4-二氟苯基)环丙胺(50mg，0.3mmol)和DIPEA(100μL，0.6mmol)的DMF(5mL)溶液中加入HATU(0.163g，0.4mmol)。将混合物在65℃下搅拌18h。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物57(46％，55mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ8.11(s,1H),8.06(s,1H),7.35–7.28(m,1H),7.27–7.17(m,2H),4.13(dd,J＝5.8,2.5Hz,2H),3.60(s,3H),2.72(t,J＝2.6Hz,1H),2.38(s,3H),2.23(s,3H),1.41–1.30(m,4H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C22H22F2N3O3：414.4，实测值：414.5。
Figure BDA0001848657530001041
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-N-苯基-1H-吡咯-2- 甲酰胺(58)
室温下，向4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)、苯胺(53mg，0.6mmol)和DIPEA(100μL，0.6mmol)的DMF(5mL)溶液中加入HATU(0.163g，0.4mmol)。将混合物在65℃下搅拌18h。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2v/v)，得到化合物58，为淡黄色粉末(66％，82mg，0.2mmol)。1HNMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.32(s,1H),8.18(s,1H),7.88–7.79(m,2H),7.44–7.32(m,1H),7.20–7.08(m,1H),4.16(dd,J＝5.9,2.5Hz,2H),3.69(s,3H),2.75(t,J＝2.5Hz,1H),2.44(s,3H),2.31(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C19H20N3O3：338.4，实测值：338.5。
Figure BDA0001848657530001042
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-N-(4-(五氟硫烷)苯 基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(59)
将4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液加热回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到4-五氟硫烷基苯胺(167mg，0.8mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入1N盐酸溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物59，为白色粉末(47％，83mg，0.2mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.72(s,1H),8.19(s,1H),8.03(d,J＝8.8Hz,2H),7.88(d,J＝9.3Hz,2H),4.16(dd,J＝5.9,2.6Hz,2H),3.71(s,3H),2.75(t,J＝2.5Hz,1H),2.45(s,3H),2.32(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C20H19F3N3O4：464.4，实测值：464.4。
Figure BDA0001848657530001051
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-N-(3-(五氟硫烷)苯 基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(60)
将4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液加热回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到3-五氟硫烷基苯胺(167mg，0.8mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入1N盐酸溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物60，为白色粉末(40％，71mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.68(s,1H),8.54(s,1H),8.20(s,1H),8.00(m,1H),7.63(m,1H),4.16(dd,J＝5.9,2.6Hz,2H),3.71(s,3H),2.75(t,J＝2.5Hz,1H),2.45(s,3H),2.33(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C19H19F5N3O3S：464.4，实测值：464.4。
Figure BDA0001848657530001061
N-(6-氟吡啶-3-基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)- 1H-吡咯-2-甲酰胺(61)
将4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液加热回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到6-氟吡啶-3-胺(85mg，0.8mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物61，为白色粉末(68％，92mg，0.2mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.56(s,1H),8.62(s,1H),8.47–8.36(m,1H),8.18(s,1H),7.14(dd,J＝8.9,3.4Hz,1H),4.24–4.15(m,2H),3.72(s,3H),2.78–2.74(m,1H),2.46(s,3H),2.34(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C18H18FN4O3：357.4，实测值：357.4。
Figure BDA0001848657530001071
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-N-(嘧啶-5-基)-1H- 吡咯-2-甲酰胺(62)
将4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液加热回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到嘧啶-5-胺(73mg，0.8mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物62，为白色粉末(31％，40mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.61(s,1H),9.21(s,2H),8.93(s,1H),8.19(s,1H),4.19(dd,J＝5.8,2.6Hz,2H),3.75(s,3H),2.77(t,J＝2.6Hz,1H),2.47(s,3H),2.37(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C17H18N5O3：340.4，实测值：340.5。
Figure BDA0001848657530001072
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)-N-(吡啶-4-基)-1H- 吡咯-2-甲酰胺(63)
将4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液加热回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到4-氨基吡啶(53mg，0.6mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2v/v)，得到化合物63(71％，92mg，0.3mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.60(s,1H),8.49(d,J＝6.5Hz,2H),8.19(s,1H),7.75(d,J＝6.5Hz,2H),4.15(dd,J＝5.7,2.5Hz,2H),3.70(s,3H),2.74(t,J＝2.6Hz,1H),2.44(s,3H),2.30(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C18H19N4O3：339.4，实测值：339.5。
Figure BDA0001848657530001081
N-(4-氟-3-甲基苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰 基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(64)
将4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到4-氟-3-甲基苯胺(71mg，0.6mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物64，为白色固体(67％，95mg，0.2mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.25(s,1H),8.14(s,1H),7.72(dd,J＝6.9,2.5Hz,1H),7.68–7.59(m,1H),7.05(t,J＝9.2Hz,1H),4.15(dd,J＝5.9,2.6Hz,2H),3.68(s,3H),2.73(t,J＝2.6Hz,1H),2.42(s,3H),2.28(s,3H),2.27(d,J＝2.0Hz,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C20H21FN3O3：370.4，实测值：370.5。
Figure BDA0001848657530001091
N-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰 基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(65)
将4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到5-氨基-2-氟苄腈(78mg，0.6mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物65，为白色固体(42％，61mg，0.2mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.61(s,1H),8.32(dd,J＝5.7,2.7Hz,1H),8.16(s,1H),8.13–8.07(m,1H),7.46(t,J＝9.1Hz,1H),4.15(dd,J＝5.8,2.5Hz,2H),3.70(s,3H),2.74(t,J＝2.5Hz,1H),2.44(s,3H),2.30(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C20H18FN4O3：381.4，实测值：381.3。
Figure BDA0001848657530001101
N-(3-氯-4-氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(丙-2-炔-1-基氨基)乙酰基)- 1H-吡咯-2-甲酰胺(66)
将4-[2-(炔丙基氨基)-2-氧代-乙酰基]-1,3,5-三甲基-吡咯-2-羧酸6(100mg，0.4mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到3-氯-4-氟苯胺(83mg，0.6mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物66，为白色固体(20％，30mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.45(s,1H),8.29–8.03(m,2H),7.84–7.64(m,1H),7.32(t,J＝9.0Hz,1H),4.15(dd,J＝5.9,2.6Hz,2H),3.69(s,3H),2.73(s,1H),2.43(s,3H),2.29(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C19H18ClFN3O3：390.8，实测值：390.4。
Figure BDA0001848657530001111
试剂和条件：a)CDI，苯胺，DMF，3h，rt；b)NaOH 5％，MeOH，16h，rt；c)3,4-二氟苯胺，HATU，DIPEA，DMF，16h，rt。
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸(68)
向2-(5-乙氧基羰基-1,3,5-三甲基-吡咯-3-基)-2-氧代-乙酸4(2.5g，9.9mmol)在DMF(15mL)和CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入1,1'-羰基二咪唑(2.4g，11.8mmol)和苯胺(1.35mL，9.5mmol)。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液上并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到67，为白色固体。向溶解在甲醇(10mL)和THF(10mL)中的粗1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯67中加入5％氢氧化钠溶液(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，在真空蒸发甲醇和THF后，将水溶液用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，用1N HCl溶液(pH＝1)酸化并再次用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的固体用二乙醚(50mL)和己烷(50mL)洗涤，得到1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸68(1.8g，6.0mmol，62％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),7.75–7.67(m,2H),7.37(t,J＝7.9Hz,2H),7.20–7.11(m,1H),3.77(s,3H),2.41(s,6H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C16H17N2O4：301.3，实测值：301.4。
Figure BDA0001848657530001121
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙酰基)-1H-吡咯- 2-甲酰胺(69)
在室温下，向1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸68(200mg，0.7mmol)、3,4-二氟苯胺(129mg，1.0mmol)和DIPEA(231μL，4.3mmol)的DMF(15mL)溶液中加入HATU(304mg，0.8mmol)。将混合物在50℃下搅拌3h。为了完成反应，加入更多的3,4-二氟苯胺(65mg，0.5mmol)并将混合物在65℃下进一步搅拌过夜。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物69，为白色粉末(35％，110mg，0.3mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.73(s,1H),9.52(s,1H),8.02–7.94(m,1H),7.87–7.80(m,2H),7.56–7.48(m,1H),7.43–7.36(m,2H),7.32(dt,J＝10.6,9.0Hz,1H),7.20–7.13(m,1H),3.70(s,3H),2.46(s,3H),2.31(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C22H20F2N3O3：412.4，实测值：412.5。
Figure BDA0001848657530001122
试剂和条件：a)CDI，吗啉，DMF，3h，rt；b)NaOH 5％，MeOH，16h，rt；d)3,4-二氟苯胺，HATU，DIPEA，DMF，16h，rt。
1,3,5-三甲基-4-(2-吗啉-2-氧代乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸(71)
向2-(5-乙氧基羰基-1,3,5-三甲基-吡咯-3-基)-2-氧代-乙酸4(0.5g，2.0mmol)在DMF(15mL)和CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入1,1'-羰基二咪唑(0.53g，3.2mmol)和吗啉(0.25mL，3.2mmol)。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液上并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到70，为淡黄色油状物。向溶解在甲醇(10mL)和THF(10mL)中的粗1,3,5-三甲基-4-(2-吗啉-2-氧代乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯70中加入5％氢氧化钠溶液(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，在真空蒸发甲醇和THF后，将水溶液用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，用1N HCl溶液(pH＝1)酸化并再次用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的固体用二乙醚(50mL)和己烷(50mL)洗涤，得到1,3,5-三甲基-4-(2-吗啉-2-氧代乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸71(0.41g，1.3mmol，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),3.75(s,3H),3.71–3.63(m,2H),3.59–3.51(m,4H),3.33–3.25(m,2H),2.44(s,3H),2.42(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C14H19N2O5：295.3，实测值：295.4。
Figure BDA0001848657530001131
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-吗啉-2-氧代乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰 胺(72)
将1,3,5-三甲基-4-(2-吗啉-2-氧代乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸71(100mg，0.3mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液加热回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到3,4-二氟苯胺(66mg，0.5mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2v/v)，得到化合物72，为褐色固体(29％，40mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.53(s,1H),8.03–7.93(m,1H),7.58–7.44(m,1H),7.33(dt,J＝10.6,9.0Hz,1H),3.74–3.67(m,6H),3.66–3.61(m,3H),3.39(t,J＝4.8Hz,2H),2.51(s,3H),2.33(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C20H22F2N3O4：406.4，实测值：406.5。
Figure BDA0001848657530001141
试剂和条件：a)CDI，烯丙基胺，DMF，3h，RT；b)NaOH 5％，MeOH，16h，rt；c)3,4-二氟苯胺，HATU，DIPEA，DMF，16h，rt。
4-(2-(烯丙基氨基)-2-氧代乙酰基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸(74)
向2-(5-乙氧基羰基-1,3,5-三甲基-吡咯-3-基)-2-氧代-乙酸4(0.5g，2.0mmol)在DMF(15mL)和CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入1,1'-羰基二咪唑(0.53g，3.2mmol)和烯丙基胺(0.18，3.2mmol)。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液上并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到73，为白色固体。向溶解在甲醇(10mL)和THF(10mL)中的粗4-(2-(烯丙基氨基)-2-氧代乙酰基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯73中加入5％氢氧化钠溶液(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，在真空蒸发甲醇和THF后，将水溶液用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，用1N HCl溶液(pH＝1)酸化并再次用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的固体用二乙醚(50mL)和己烷(50mL)洗涤，得到4-(2-(烯丙基氨基)-2-氧代乙酰基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸74(270mg，1.0mmol，51％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.74(s,1H),8.86(t,J＝5.8Hz,1H),5.99–5.66(m,1H),5.36–5.05(m,2H),3.85–3.80(m,2H),3.75(s,3H),2.36(s,6H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C13H17N2O4：265.3，实测值：265.4。
Figure BDA0001848657530001151
4-(2-(烯丙基氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-1H-吡 咯-2-甲酰胺(75)
将4-(2-(烯丙基氨基)-2-氧代乙酰基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸74(100mg，0.4mmol)和亚硫酰氯(210μL，2.7mmol)的甲苯(5mL)溶液回流1小时。将所得溶液真空浓缩，溶解在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，并在0℃下加入到3,4-二氟苯胺(73mg，0.6mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中。将混合物在0℃下搅拌2小时，倒入饱和氯化铵溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物75，为白色固体(18％，25mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.48(s,1H),8.09–7.94(m,1H),7.89(s,1H),7.59–7.48(m,1H),7.32(dt,J＝10.2,9.0Hz,1H),6.02–5.86(m,1H),5.28(dd,J＝17.2,1.6Hz,1H),5.12(dd,J＝10.2,1.4Hz,1H),3.99–3.94(m,2H),3.68(s,3H),2.42(s,3H),2.28(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C19H20F2N3O3：376.4，实测值：376.4。
Figure BDA0001848657530001161
试剂和条件：a)CDI，2-氨基噻唑，DMF，3h，rt；b)NaOH 5％，MeOH，16h，rt；c)3,4-二氟苯胺，HATU，DIPEA，DMF，16h，rt。
1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸(77)
向2-(5-乙氧基羰基-1,3,5-三甲基-吡咯-3-基)-2-氧代-乙酸4(2.0g，7.9mmol)在DMF(15mL)和CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入1,1'-羰基二咪唑(1.92g，11.8mmol)和2-氨基噻唑(0.95g，9.5mmol)。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液上，通过烧结漏斗过滤，在真空下干燥，得到76，为黄色固体。向溶解在甲醇(10mL)和THF(10mL)中的粗1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯76中加入5％氢氧化钠溶液(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，在真空蒸发甲醇和THF后，将水溶液用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，用1N HCl溶液(pH＝1)酸化并再次用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的固体用二乙醚(50mL)和己烷(50mL)洗涤，得到1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸77(1.9g，6.1mmol，78％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.96(s,1H),7.58(s,1H),7.38(s,1H),3.77(s,3H),2.37(s,3H),2.33(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C13H14N3O4：308.3，实测值：308.4。
Figure BDA0001848657530001171
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙酰基)-1H- 吡咯-2-甲酰胺(78)
在室温下，向1,3,5-三甲基-4-(2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙酰基)-1H-吡咯-2-羧酸77(250mg，0.8mmol)、3,4-二氟苯胺(158mg，1.2mmol)和DIPEA(283μL，1.6mmol)的DMF(15mL)溶液中加入HATU(0.37g，1.0mmol)。将混合物在50℃下搅拌3h。为了完成反应，加入更多的3,4-二氟苯胺(80mg，0.6mmol)并将混合物在65℃下进一步搅拌过夜。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2v/v)，得到化合物78，为淡黄色粉末(55％，187mg，0.4mmol)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.01(s,1H),10.47(s,1H),7.88(dd,J＝13.3,7.5Hz,1H),7.58(d,J＝3.6Hz,1H),7.54–7.35(m,3H),3.62(s,3H),2.41(s,3H),2.19(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C19H18F2N3O3：419.4，实测值：419.4。
Figure BDA0001848657530001181
试剂和条件：a)CDI，氨基乙腈盐酸盐，Et3N，DMF，3h，rt；b)NaOH 5％，MeOH，16h，rt；c)3,4-二氟苯胺，HATU，DIPEA，DMF，16h，rt；d)NaN3，ZnBR2，iPrOH，110℃MW，20min。
4-(2-((氰基甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸(80)
向2-(5-乙氧基羰基-1,3,5-三甲基-吡咯-3-基)-2-氧代-乙酸4(3.0g，11.8mmol)在DMF(20mL)和CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入1,1'-羰基二咪唑(2.3g，14.2mmol)和2-氨基乙腈盐酸盐(1.63g，17.8mmol)和二异丙基乙胺(4.12mL，23.7mmol)。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液上并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到79，为固体。向溶解在甲醇(10mL)和THF(10mL)中的粗4-(2-((氰基甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯79中加入5％氢氧化钠溶液(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，在真空蒸发甲醇和THF后，将水溶液用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，用1N HCl溶液(pH＝1)酸化并再次用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将得到的固体用二乙醚(50mL)和己烷(50mL)洗涤，得到4-(2-((氰基甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸80(0.41g，15.5mmol，13％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(s,1H),9.46(s,1H),4.32(d,J＝5.7Hz,2H),3.76(s,3H),2.37(s,3H),2.36(s,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C12H14N3O4：264.3，实测值：264.4。
Figure BDA0001848657530001191
4-(2-((氰基甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-1H- 吡咯-2-甲酰胺(81)
在室温下，向4-(2-((氰基甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-羧酸80(2g，7.6mmol)、3,4-二氟苯胺(1.47g，11.4mmol)和DIPEA(1.98mL，11.4mmol)的DMF(30mL)溶液中加入HATU(3.18g，8.3mmol)。将混合物在65℃下搅拌18h。然后将反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(己烷：EtOAc＝6:4v/v)，得到化合物81，为白色粉末(30％，840mg，2.2mmol)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.52(s,1H),8.52(s,1H),8.09–7.90(m,1H),7.58–7.45(m,1H),7.40–7.23(m,1H),4.49–4.36(m,2H),3.74–3.65(m,3H),2.46–2.40(m,3H),2.34–2.25(m,3H)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C18H17F2N4O3：375.3，实测值：375.4。
Figure BDA0001848657530001201
4-(2-(((2H-四唑-5-基)甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5- 三甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(82)
向4-(2-((氰基甲基)氨基)-2-氧代乙酰基)-N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺81(50mg，0.1mmol)的异丙醇(2mL)悬浮液中加入叠氮化钠(26mg，0.4mmol)和溴化锌(90mg，0.4mmol)。在微波辐照下将混合物加热至110℃保持20分钟。然后将反应混合物倒入饱和碳酸钠溶液(50mL)上并用乙酸乙酯(3×20mL)洗涤。然后将水相酸化至pH～1并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥并真空浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝95:5v/v)纯化，得到化合物82，为白色粉末(48％，27mg，0.1mmol)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),9.46(t,J＝5.8Hz,1H),7.92–7.83(m,1H),7.50–7.37(m,2H),4.69(d,J＝5.7Hz,2H),3.58(s,3H),2.33(s,3H),2.17(s,3H)。LCMS(ESI):m/z[M+H]+计算值C18H18F2N7O3：418.4，实测值：418.4。
Figure BDA0001848657530001202
试剂和条件：a)2-溴-1-甲基-1H-咪唑，Et3N，DMF，CuI，双(三苯基膦)二氯化钯，70℃MW，20min。
N-(3,4-二氟苯基)-1,3,5-三甲基-4-(2-((3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)丙-2-炔- 1-基)氨基)-2-氧代乙酰基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(83)
将化合物7a(100mg，268μmol)、2-溴-1-甲基-1H-咪唑(65mg，402μmol)、三乙胺(73μL，541μmol)和二甲基甲酰胺(2mL)在密封管中合并。将混合物用氮气喷射2分钟，加入双(三苯基膦)二氯化钯(19mg，27μmol)，然后加入碘化铜(10mg，53μmol)。将混合物再次用氮气喷射并在微波辐照下在70℃下搅拌20分钟。将反应用乙酸乙酯(50mL)稀释，用饱和氯化铵溶液(50mL)洗涤。将有机相经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，并在硅胶上通过快速色谱法(DCM/MeOH:96/4)纯化，得到化合物83(62mg，137μmol，51％)。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.51(s,1H),8.35(s,1H),7.99(ddd,J＝13.2,7.4,2.6Hz,1H),7.57–7.48(m,1H),7.34(dt,J＝10.5,9.0Hz,1H),7.14(d,J＝1.2Hz,1H),6.92(d,J＝1.2Hz,1H),4.46(d,J＝5.8Hz,2H),3.75(s,3H),3.70(s,3H),2.46(s,3H),2.32(s,3H)。19F NMR(377MHz,丙酮-d6)δ-139.91–-140.01(dt,J＝22.1,11.6Hz),-147.12–-147.23(dt,J＝20.5,10.4Hz)。MS(ESI):m/z[M+H]+计算值C23H22F2N5O3：454.4，实测值：454.4。
实施例2
细胞毒性检测
如前所述(参见Schinazi R.F.,Sommadossi J.-P.,Saalmann V.,Cannon D.L.,Xie M.-Y.,Hart G.C.,Smith G.A.&Hahn E.F.Antimicrob.Agents Chemother.1990,34,1061-67)，在Vero、人PBM、CEM(人淋巴母细胞样)、MT-2和HepG2细胞中评估了化合物的毒性。环己酰亚胺作为阳性细胞毒性对照，暴露于溶剂的未处理细胞作为阴性对照。使用先前描述的中值有效方法(参见Chou T.-C.&Talalay P.Adv.Enzyme Regul.1984,22,27-55；Belen’kii M.S.&Schinazi R.F.Antiviral Res.1994,25,1-11)从浓度-响应曲线获得细胞毒性IC50。结果如下表1所示：
表格1
细胞毒性，CC50，μM(抑制％)
Figure BDA0001848657530001221
Figure BDA0001848657530001231
Figure BDA0001848657530001241
实施例3
HepG2细胞中的线粒体毒性测定：
i)化合物对细胞生长和乳酸产生的影响：通过在0μM、0.1μM、1μM、10μM和100μM药物的存在下孵育细胞来确定对HepG2细胞生长的影响。将细胞(每孔5×104个)接种到最低必需培养基(其含有补充有10％胎牛血清、1％丙酮酸钠和1％青霉素/链霉素的非必需氨基酸)中的12孔细胞培养簇中，并在37℃孵育4天。在孵育期结束时，使用血细胞计数器测定细胞数。同样由Pan-Zhou X-R,Cui L,Zhou X-J,Sommadossi J-P,Darley-Usmer VM."Differential effects of antiretroviral nucleoside analogs on mitochondrialfunction in HepG2 cells,"Antimicrob.Agents Chemother.2000；44:496-503所教导。
为了测量化合物对乳酸产生的影响，将来自储备培养物的HepG2细胞稀释并以每孔2.5×104个细胞接种在12孔培养板中。添加各种浓度(0μM、0.1μM、1μM、10μM和100μM)的化合物，并将培养物在37℃下在潮湿的5％CO2气氛中孵育4天。在第4天，测定每个孔中的细胞数并收集培养基。然后过滤培养基，并使用比色乳酸测定法(Sigma-Aldrich)测定培养基中的乳酸含量。由于乳酸产物可被认为是线粒体功能受损的标志物，因此在测试化合物存在下在生长的细胞中检测到乳酸产生水平升高将表明药物诱导的细胞毒性作用。
ii)化合物对线粒体DNA合成的影响：已经开发了用于准确定量线粒体DNA含量的实时PCR测定法(参见Stuyver LJ,Lostia S,Adams M,Mathew JS,Pai BS,Grier J,Tharnish PM,Choi Y,Chong Y,Choo H,Chu CK,Otto MJ,Schinazi RF.Antiviralactivities and cellular toxicities of modified 2',3'-dideoxy-2',3'-didehydrocytidine analogs.Antimicrob.Agents Chemother.2002；46:3854-60)。该测定法用于本申请中描述的确定化合物对线粒体DNA含量的影响的所有研究中。在该测定中，将低传代数HepG2细胞以5,000个细胞/孔接种在胶原包被的96孔板中。将测试化合物添加至培养基中，得到0μM、0.1μM、10μM和100μM的终浓度。在培养第7天，通过使用市售柱(RNeasy96试剂盒；Qiagen)制备细胞核酸。这些试剂盒共纯化RNA和DNA，因此从柱中洗脱出的是总核酸。使用多重Q-PCR方案，使用用于靶标扩增和参照扩增的合适引物和探针，从5μl洗脱核酸扩增线粒体细胞色素c氧化酶亚基II(COXII)基因和β-肌动蛋白或rRNA基因。对于COXII，分别使用以下正义引物、探针和反义引物：5'-TGCCCGCCATCATCCTA-3'、5'-四氯-6-羧基荧光素-TCCTCATCGCCCTCCCATCCC-TAMRA-3'和5'-CGTCTGTTATGTAAAGGATGCGT-3'。对于β-肌动蛋白基因(GenBank登录号E01094)的外显子3，正义引物、探针和反义引物分别是5'-GCGCGGCTACAGCTTCA-3'、5'-6-FAMCACCACGGCCGAGCGGGATAMRA-3'和5'-TCTCCTTAATGTCACGCACGAT-3'。rRNA基因的引物和探针可从Applied Biosystems商购获得。由于对所有基因的扩增效率相等，因此使用比较CT法来研究线粒体DNA合成的潜在抑制。比较CT法使用这样的算术公式，其中靶标(COXII基因)的量相对于内源参照(β-肌动蛋白或rRNA基因)的量进行标准化，并且是相对于校准物(第7天的无药物对照)的。该方法的算术公式由2-ΔΔCT给出，其中ΔΔCT是(平均靶标测试样品的CT-靶标对照的CT)-(平均参照测试的CT-参照对照的CT)(参见Johnson MR,K Wang,JB Smith,MJ Heslin,RBDiasio.Quantitation of dihydropyrimidine dehydrogenase expression by real-time reverse transcription polymerase chain reaction.Anal.Biochem.2000；278:175-184)。在药物的存在下在生长的细胞中线粒体DNA含量的降低表示线粒体毒性。
在HepG2细胞中评估了化合物7和9对线粒体DNA和核DNA水平以及乳酸产生的影响(14天测定)，数据列于下表2中：
表2
Figure BDA0001848657530001261
Figure BDA0001848657530001271
数据显示，如本文所述，化合物7a在高达25μM时是无毒的，并且甚至在50μM时仅观察到非常低的毒性，类似于阴性对照3TC。
实施例4
Neuro2A细胞中的线粒体毒性测定
为了估计本发明化合物引起神经元毒性的可能性，使用小鼠Neuro2A细胞(美国典型培养物保藏中心131)作为模型系统(参见Ray AS,Hernandez-Santiago BI,Mathew JS,Murakami E,Bozeman C,Xie MY,Dutschman GE,Gullen E,Yang Z,Hurwitz S,Cheng YC,Chu CK,McClure H,Schinazi RF,Anderson KS.Mechanism of anti-humanimmunodeficiency virus activity of beta-D-6-cyclopropylamino-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxyguanosine.Antimicrob.Agents Chemother.2005,49,1994-2001)。如所述，可以使用基于3-(4,5-二甲基-噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物染料的测定来测量抑制50％细胞生长(CC50)所需的浓度。可以如上所述进行在确定的药物浓度下细胞乳酸和线粒体DNA水平的扰动。ddC和AZT可用作对照核苷类似物。
实施例5
骨髓细胞毒性的测定
原代人骨髓单核细胞可以从Cambrex Bioscience(Walkersville，MD)商购获得。在50单位/mL人重组粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子的存在下，使用双层软琼脂进行CFU-GM测定，而BFU-E测定使用含有1单位/mL促红细胞生成素的乙基纤维素基质(参见SommadossiJP,Carlisle R.Toxicity of3’-azido-3’-deoxythymidine and 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanine for normal human hepatopoietic progenitor cells invitro.Antimicrob.Agents Chemother.1987；31:452-454；Sommadossi,JP,Schinazi,RF,Chu,CK,and Xie,MY.Comparison of cytotoxicity of the(-)and(+)enantiomer of 2’,3’-dideoxy-3’-thiacytidine in normal human bone marrow progenitorcells.Biochem.Pharmacol.1992；44:1921-1925)。每个实验可以在来自三个不同供体的细胞中一式两份进行。AZT用作阳性对照。细胞可以在化合物的存在下在37℃、5％CO2下孵育14-18天，并且可以使用倒置显微镜计数大于50个细胞的集落以确定IC50。通过药物浓度的对数与BFU-E存活分数的最小二乘法线性回归分析可以获得50％抑制浓度(IC50)。可以使用学生t检验对独立的非配对样品进行统计分析。
实施例6
抗HBV测定
通过在四环素的控制下处理携带野生型HBV的AD-38细胞系来测定化合物的抗HBV活性(参见Ladner S.K.,Otto M.J.,Barker C.S.,Zaifert K.,Wang G.H.,Guo J.T.,Seeger C.&King R.W.Antimicrob.Agents Chemother.1997,41,1715-20)。从培养基中除去四环素[Tet(-)]导致产生HBV。将用化合物处理的细胞的培养上清液中的HBV水平与未处理对照的进行比较。还维持了含有四环素的对照培养物[Tet(+)]以确定HBV表达的基础水平。3TC作为阳性对照。
本文所述的几种化合物抗HBV的中值有效浓度(EC50)范围示于表3中：
A＝1-9μM
B＝0.1-0.9μM
C＝0.01-0.09μM
D＝0.001-0.009μM
E＝0.0001-0.0009μM
表3
Figure BDA0001848657530001291
Figure BDA0001848657530001301
Figure BDA0001848657530001311
实施例7
在HepAD38细胞中，分泌型HBeAg的产生主要是cccDNA依赖性的，因此可作为cccDNA的替代标记物(Ladner,S.K.,Otto,M.J.,Barker,C.S.,Zaifert,K.,Wang,G.H.,Guo,J.T.,Seeger,C.,King,R.W.Antimicrob Agents Chemother 1997,41,1715-1720；Zhou T,Guo H,Guo JT,Cuconati A,Mehta A,Block TM.Antiviral Res.2006；72(2):116-24)。使用基于细胞的测定评估对cccDNA形成水平的影响，该测定测量HepAD38系统中作为cccDNA依赖性标记的HBV e抗原(HBeAg)。将HepAD38细胞以50,000个细胞/孔接种在胶原包被的96孔板中，96孔板中含有补充有10％热灭活的胎牛血清的DMEM/F12培养基(LifeTechnologies)。根据需要用0.3μg/ml四环素处理细胞。向细胞中加入测试化合物和对照至终浓度为10μM或以0.001至10μM的剂量响应方式加入。在培养中每5天补充培养基和测试化合物。在第14天收获上清液，5000rpm离心5分钟以使其澄清，并储存在-70℃直至使用。ELISA—将培养基以1:15稀释在DMEM/F12中，并使用HBeAg ELISA试剂盒(BioChainInstitute有限公司，Hayward，CA)根据制造商的方案测量培养基中分泌的HBeAg的水平。通过线性回归确定降低50％分泌型HBeAg水平的化合物浓度(EC50)。
表4
Figure BDA0001848657530001321
实施例8
有趣的是，一些合成的且发现具有体外抗HBV活性的化合物也出乎意料地具有抗西尼罗病毒(WNV)活性。WNV是一种蚊子传播的、人畜共患的虫媒病毒，属于黄病毒科(Flaviviridae)中的黄病毒属(Flavivirus)。WNV的遗传物质是正义单链的RNA，长度在11,000到12,000个核苷酸之间；这些基因编码七种非结构蛋白和三种结构蛋白。RNA链保持在由12kDa蛋白质组件形成的核衣壳内；衣壳包含在由两种病毒糖蛋白改变的宿主衍生的膜内。
使用西尼罗病毒(WNV)的荧光素酶报告复制子进行抗病毒筛选。
使用含有WNV的荧光素酶报告复制子的幼仓鼠肾(BHK)细胞(参见Shi PY,TilgnerM,Lo MK.Virology.2002；296(2):219-33)进行高通量筛选。将作为选择标记基因的海肾荧光素酶和杀螨素抗性基因工程化在复制子中以替代病毒结构蛋白。使用海肾荧光素酶测定系统(Promega)在孵育48小时后测量荧光素酶活性。
也可以使用如下文献中先前描述的测定来评估西尼罗病毒对本文所述化合物的敏感性：Song,G.Y.,Paul,V.,Choo,H.,Morrey,J.,Sidwell,R.W.,Schinazi,R.F.,Chu,C.K.Enantiomeric synthesis of D-and L-cyclopentenyl nucleosides and theirantiviral activity against HIV and West Nile virus.J.Med.Chem.2001,44,3985-3993。
实施例9
也可以如以下文献中先前描述的来测定黄热病对本文所述化合物的敏感性：Julander,J.G.,Furuta,Y.,Shafer,K.,Sidwell,R.W.Activity of T-1106 in a HamsterModel of Yellow Fever Virus Infection.Antimicrob.Agents Chemother.2007,51,1962-1966。
实施例10
可以使用Lim等人，A scintillation proximity assay for dengue virus NS52′-O-methyltransferase—kinetic and inhibition analyses，Antiviral Research，第80卷，第3期，2008年12月，第360-369页公开的高通量测定来评估登革热对本文所述化合物的敏感性。
登革病毒(DENV)NS5在其N-末端氨基酸序列上具有甲基转移酶(MTase)活性，并且负责病毒基因组RNA中1型帽结构m7GpppAm2'-O的形成。可以使用纯化的重组蛋白和短的生物素化的GTP-加帽的RNA模板来表征DENV22'-O-MTase活性的最佳体外条件。源自初始速度的稳态动力学参数可用于建立稳健的闪烁邻近测定以用于化合物测试。Lim等人，Antiviral Research，第80卷，第3期，2008年12月，第360-369页的预孵育研究表明，MTase-AdoMet和MTase-RNA复合物具有同等的催化能力并且该酶支持随机双向动力学机制。Lim用竞争性抑制剂、S-腺苷-同型半胱氨酸和两种同源物西奈芬净(sinefungin)和脱氢西奈芬净(dehydrosinefungin)验证了该测定。DENV2MTase的N-末端上存在的GTP结合口袋先前被假定为帽结合位点。该测定允许2'-O-MTase活性的快速、高度灵敏检测，并且可以容易地适用于抑制性化合物的高通量筛选。它还适用于测定各种RNA加帽MTase的酶活性。
实施例11
抗诺如病毒(Norovirus)活性
化合物通过抑制诺如病毒聚合酶和/或解旋酶、通过抑制复制周期中所需的其它酶或通过其他途径而表现出抗诺如病毒活性。
目前还没有批准的用于诺如病毒感染的药物治疗，这可能至少部分是由于缺乏可用的细胞培养系统。最近，已经开发了用于原始Norwalk G-I株的复制子系统(Chang,K.O.等人(2006)Virology 353:463-473)。
诺如病毒复制子和丙型肝炎复制子都需要病毒解旋酶、蛋白酶和聚合酶来起作用，以便发生复制子的复制。最近，已经报道了使用诺如病毒基因组I和II接种物的体外细胞培养感染性测定法(Straub,T.M等人(2007)Emerg.Infect.Dis.13(3):396-403)。该测定在旋转壁生物反应器中进行，其利用了微载体珠上的小肠上皮细胞。感染性测定可用于筛选进入抑制剂。
实施例12
抗基孔肯雅病(Chikungunya)活性
可以如“Anti-Chikungunya Viral Activities of Aplysiatoxin-RelatedCompounds from the Marine Cyanobacterium Trichodesmium erythraeum”Gupta,D.K.；Kaur,P.；Leong,S.T.；Tan,L.T.；Prinsep,M.R.；Chu,J J.H.Mar Drugs.Jan2014；12(1):115–127；10.3390/md12010115和其中引用的参考文献所列举的方法评估抗基孔肯雅病活性。
实施例13
抗HCV活性
本文所述化合物的抗HCV活性可以例如使用如例如Stuyver L等人，Ribonucleoside analogue that blocks replication or bovine viral diarrhea andhepatitis C viruses in culture.Antimicrob.Agents Chemother.2003,47,244-254所述的HCV复制子测定法测量。
在该测定中，可以以5000个细胞/孔将含有HCV复制子RNA的Huh 7克隆B细胞接种在96孔板中，并且在接种后立即以10μM一式三份测试化合物。孵育5天(37℃、5％CO2)后，可以使用Gentra的versaGene RNA纯化试剂盒分离总细胞RNA。可以在单步多重实时RT-PCR测定中扩增复制子RNA和内部对照(TaqMan rRNA对照试剂，Applied Biosystems)。通过从无药对照的阈值RT-PCR循环中减去测试化合物的阈值RT-PCR循环(ΔCt HCV)，可以计算化合物的抗病毒效力。ΔCt为3.3等于复制子RNA水平降低1-log(相当于起始材料减少90％)。还可以通过使用ΔCt rRNA值来计算化合物的细胞毒性。2'-C-Me-C可用作阳性对照。为了确定EC90和IC50值，可以首先将ΔCt：值转换成起始材料的分数，然后用于计算％抑制。
为了具体观察化合物是否抑制HCV NS5B，可以使用例如“A complex network ofinteractions between S282 and G283 of HCV NS5B and the template strand affectsusceptibility to Sofosbuvir and Ribavirin”，Kulkarni等人，Antimicrob AgentsChemother.2016Jan 11.pii:AAC.02436-15中描述的测定法。
实施例14
用于监测HBV衣壳组装的衣壳形成测定
在不存在破坏衣壳形成的化合物的情况下，乙型肝炎病毒核心C末端截短蛋白质(HBV Cp149，由[Zlotnick,A等人；Biochem 1996,35,7412-7421]报告的方法分离的蛋白质)通常组装成HBV Cp149衣壳。该实施例的目的是确定推定的活性剂是否会破坏衣壳形成，并因此作为抗-HBV剂起作用。将25μM浓度的推定的活性剂在4℃下与10μM浓度的HBVCp149孵育1小时。然后通过加入300mM NaCl促进衣壳组装，并将混合物在4°下保存过夜。使用JEOL JEM-1400 120kV电子显微镜、使用乙酸双氧铀作为造影剂，收集负染色电子显微照片。这些图像显示是否形成了衣壳，以及如果形成了衣壳，是否形成完整的空心球体，或者变形的(即，例如，错误组装或不完整的)球体。
当用媒介物处理时，衣壳形成按预期进行，形成直径约40nm的完整空心球。当加入化合物GLS4时，衣壳形成被破坏，如形成相对较大(约80-100nm)的错误组装的空心球所示。当加入化合物7a时，衣壳形成被破坏，如形成相对较小(小于约40nm)且紧密堆积的不完整空心球所示。结果显示在图1中。
下一个问题是这些化合物是否会破坏已经形成的衣壳。因此，如上所述形成衣壳(将分离的HBV Cp149与300mM NaCl一起孵育，在4℃下储存过夜)。然后，将衣壳与推定的化合物一起孵育(4°过夜)，然后拍摄电子显微照片。图2显示了用媒介物、25μM GLS4和25μM化合物7a孵育的衣壳的电子显微照片。图3显示了使用GLS4的结果，其中衣壳被破坏。显微照片显示衣壳被打破，像破裂的蛋壳一样。图4显示了使用化合物7a的结果，其中衣壳的浓度明显且显著降低，并且剩余的衣壳相对较小且紧密堆积。
本文引用了各种出版物，其公开内容出于所有目的通过引用整体并入。
本发明不限于本文所述的具体实施方案的范围。实际上，除了所描述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员来说从前面的描述和附图中是显而易见的。这些修改旨在落入所附权利要求的范围内。

Claims (13)

1.下式化合物：
Figure FDA0003759227000000011
或其药学上可接受的盐，其中：
R1为甲基，
R1’为氢、卤素、SF5、CF3、羟基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C2-6烯基、氰基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、C1-6烷基或C1-6羟烷基；
U为3且v为0、1、2、3、4或5；
I是苯基；
J是吡咯基，
W是
Figure FDA0003759227000000012
R12是H；并且
R13是C2-6烯基，C2-6炔基或苯基；
R13任选地被一个或多个取代基取代，每个所述取代基独立地选自由以下组成的组：氢、卤素、CF3、SF5、羟基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、叠氮基、C2-6炔基、C3-6烷氧基烷基、C1-6烷基或C1-6羟烷基。
2.选自由以下组成的组的化合物：
Figure FDA0003759227000000021
Figure FDA0003759227000000022
及其药学上可接受的盐。
3.一种化合物或其药学上可接受的盐，其是：
Figure FDA0003759227000000023
及其药学上可接受的盐。
4.一种化合物或其药学上可接受的盐，其是：
Figure FDA0003759227000000031
及其药学上可接受的盐。
5.一种化合物或其药学上可接受的盐，其是：
Figure FDA0003759227000000032
及其药学上可接受的盐。
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R13是C2-6烯基。
7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R13是C2-6炔基。
8.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R13是苯基。
9.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中v是2。
10.根据权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1’是卤素。
11.根据权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1’是氟。
12.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
13.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗HBV感染、预防HBV感染或降低HBV感染的生物学活性的药物中的用途。
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