CN109134584B - 一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，属于医药生物技术领域。本发明的制备方法包括以下步骤：(1)制备枇杷叶粉；(2)将枇杷叶粉经超声波提取10～15min，超声波提取完成后经减压浓缩去除乙醇，得到浸膏；(3)将浸膏溶解后置于超临界CO2流体中进行萃取；(4)将萃取后的分离液经大孔吸附树脂吸附，待吸附饱和后，采用乙醇进行解析，经减压回收乙醇，得到科罗索酸浓缩液；(5)将科罗索酸浓缩液调pH值至6‑7，静置后结晶即得到科罗索酸成品。本发明提供的制备方法能够实现快速高效提取科罗索酸，其简化制备工艺简单，提取纯化时间大大缩短，降低了生产成本，制备所得科罗索酸的纯度高、色度低。

Description

一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法
技术领域
本发明属于医药生物技术领域，涉及植物活性成分科罗索酸的分离和纯化方法，具体涉及一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法。
背景技术
科罗索酸(Corosolic acid)，又称2α-羟基熊果酸，是存在于大叶紫薇、枇杷等植物中的五环三萜类化合物，其基本骨架为多氢蒎的五环母核。科罗索酸为白色无定型粉末，可溶于石油醚、苯、氯仿等有机溶剂，不溶于水，可溶于热乙醇、甲醇。在无水条件下与强酸(硫酸、磷酸、高氯酸)、中强酸(三氯乙酸)或Lewis酸(氯化锌、三氯化铝、三氯化锑)作用，会出现颜色反应或荧光。科罗索酸在植物体内可游离存在，也可以皂甙的形式存在。在植物体内，常常与其同分异构体山楂酸共同存在，结构和化学性质相似，分离较难。
近年来研究人员发现科罗索酸具有降血糖、减肥、抗肿瘤、抗炎、抗病毒和抗心血管疾病作用，尤其是其较好的降血糖活性，具有类似胰岛素的生理作用，被称为“植物胰岛素”，受到人们广泛关注，目前在国内外已被开发出多种保健品。
由于科罗索酸结构复杂，人工合成困难，因而国内外均自中草药或植物中提取该物质。目前国内外已经开展了对植物中三萜酸及科罗索酸进行了分离纯化的研究。如中国专利ZL 200410061929.7，孙宏斌等报道了科罗索酸的化学合成制备方法；美国专利US6485760和US 6716459分别报道了采用大叶紫薇提取物降血糖的方法和配方；中国专利文献200710009556.7，陈剑峰等报道了从枇杷叶中分离制备科罗索酸的方法。中国专利文献20081007981.7，孙步祥等报道了一种从植物中提取科罗索酸的方法。
由于中国是世界上主要的枇杷生产国，枇杷栽种面积和产量达到全球的2/3以上，而枇杷叶为传统的药食同源性中药材，枇杷叶中富含丰富的科罗索酸、熊果酸等三萜酸类物质，因而从枇杷叶中提取分离科罗索酸具有重要的社会效益和经济价值。
现有的从枇杷叶中提取分离科罗索酸的方法，大多是采用亲水性有机溶剂提取枇杷叶总三萜酸，然后在碱性条件下过滤除杂，提取液再采用大孔吸附树脂富集纯化科罗索酸，科罗索酸粗品进一步采用亲水性有机溶剂进行结晶和重结晶，制得高纯度的科罗索酸晶体。采用这一方法分离纯化得到的科罗索酸的纯度低，需要经过多次除杂和反复结晶，才能获得纯度较高的科罗索酸成品，其制备工艺复杂，提高效率不高，提取纯化时间长，且经过多次除杂和反复结晶步骤，会导致科罗索酸的损失量大，收率不高。更为重要的是，现有的科罗索酸的提取分离方法，都未经过脱色处理，而这些溶剂提取法往往会提取到较多含量的叶绿素，导致科罗索酸的色度较高，现有的报道采用活性炭吸附进行脱色，然而该方法会导致提取效率不高，收率较低。
因此，需要开发出一种新的用于科罗索酸提取分离的方法，以更好解决上述问题。
发明内容
本发明的目的就是为了解决上述技术问题，而提供一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，以实现快速高效的提取科罗索酸、简化制备工艺、缩短提取纯化的时间、降低生产成本，并能很好保证制备所得科罗索酸的收率和纯度高，且其色度低。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，包括以下步骤：
(1)以枇杷叶为原料，经真空干燥处理，粉碎后得到枇杷叶粉；
(2)将枇杷叶粉置于乙醇溶液中经超声波提取10～15min，所述乙醇溶液中含质量浓度为0.5～2％的甲酸；超声波提取完成后将提取液过滤，减压浓缩提取液至去除乙醇，得到浸膏；
(3)将浸膏用乙酸溶解，置于超临界CO2流体中进行萃取，萃取的温度为30～40℃，压力为60～80MPa，萃取时间为8～12min；
(4)将萃取后的分离液经大孔吸附树脂吸附，所述大孔吸附树脂采用经马来松香丙烯酸甘油酯交联得到的松香基大孔吸附树脂，待吸附饱和后，采用乙醇进行解析，经减压回收乙醇，得到科罗索酸浓缩液；
(5)将科罗索酸浓缩液调pH值至6-7，静置后结晶即得到科罗索酸成品。
本发明提供的上述科罗索酸的制备方法，不同于新鲜的枇杷叶原料是经过水煮提取，而是先干燥粉碎后制成枇杷叶粉，该处理有利于后续的提取纯化，步骤(2)在超声波下进行提取，提取效率高，无需加热，在常温下即可提取，对有效成分无损耗，但现有的超声波提取时间较长，提取效率不高，本发明创造性的在乙醇提取液中加入了质量浓度为0.5～2％的甲酸，发现提取液的提取效率大大提升，提取时间仅需10～15min即可完全提取枇杷叶粉中的科罗索酸，可能是在少量甲酸环境下，枇杷叶中的酸性成分更容易溶于提取液中，科罗索酸的提取也更高效。步骤(3)中进一步采用超临界萃取的方法，能够很好去除提取液中的杂质和色素，采用超声波提取和超临界萃取的混合提取方法，大大提升了提取效率，后续的纯化过程简单高效，且产品的色度得到了很好保障。
本发明的提取纯化体系均在弱酸性条件下进行，正是由于提取液中质量浓度为0.5～2％的甲酸加入，后续的溶解和纯化过程均选择在弱酸性条件下完成，发现其对产品的纯度和色度均更为有利，并使得整个提取过程的时间大大缩短。
根据本发明的提取液和除杂效果，本发明选择采用松香基大孔吸附树脂进行纯化吸附，该树脂是一种绿色环保型树脂，但其吸附量往往小于市售的AB-8和D101树脂，然而将该环保型树脂应用于本发明，起到了很好的吸附效果，该树脂对科罗索酸的选择性吸附强，吸附量大，经该树脂吸附处理后的提取浓缩液直接经一次结晶即可得到成品科罗索酸，其纯度能够很好达到标准，而无需反复的重结晶操作。
作为优选的，步骤(2)中所述乙醇的质量浓度为88～90％。提取液的浓度对提取效果产生影响，选择该提取液浓度配合甲酸环境，能够起到更佳的提取效果。
作为优选的，所述乙醇溶液的用量为枇杷叶粉重量的4～6倍。提取液的用量与原料的重量成比例搭配，在该重量倍数下，提取效率和收率更高。
作为优选的，所述超声波提取的功率为40～50kHz，超声波搅拌速度为300-350r/min。在该超声波条件下，提取渗透效率更适宜，提取过程更平稳，枇杷叶中的科罗索酸成分被大量提取出来。
作为优选的，所述步骤(2)中减压浓缩的条件为：压力-0.02～-0.05MPa，温度55～65℃。
作为优选的，步骤(3)中所述乙酸的加入量为浸膏质量的1.5～2倍，乙酸的质量浓度为30～35％。乙酸的浓度不能过高，既要保持提取液的弱酸性环境，又不能影响有效成分的提取。在该范围内能够获得更佳的效果。
作为优选的，步骤(4)中采用质量浓度55％的乙醇溶液进行解析，解析液的用量为树脂用量的3～5倍，解析的pH条件为5～6。该条件下更利于吸附到松香基大孔吸附树脂上的科罗索酸被完全解析出来。
作为优选的，步骤(1)中所述枇杷叶粉的粒度为10～200μm。所述枇杷叶粉的含水量为5％以下。
作为优选的，步骤(1)中所述真空干燥的温度为40～60℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
(1)本发明的提取纯化方法操作工艺简单，无需经过复杂的纯化操作和反复重结晶处理，提取纯化效率高，能够在较短时间内实现枇杷叶中科罗索酸的提取；
(2)本发明提取纯化制备得到的科罗索酸纯度高、收率高，且其色度较低，产品质量好；
(3)本发明采用环保型松香基大孔吸附树脂进行吸附纯化，对环境污染小，更利于工业化应用。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体描述，有必要指出的是，以下实施例仅仅用于对本发明进行解释和说明，并不用于限定本发明。本领域技术人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，包括以下步骤：
(1)以枇杷叶为原料，经40℃真空干燥处理至其含水量为5％以下，然后经粉碎机粉碎至粒度为100～200μm，得到10kg枇杷叶粉；
(2)将步骤(1)所得枇杷叶粉置于4倍重量份的质量浓度为90％的乙醇溶液中(乙醇溶液总重为40kg，包含0.2kg甲酸)，在超声波功率为40kHz，搅拌速度为300r/min下超声提取15min；超声波提取完成后将提取液过滤，减压浓缩提取液至去除乙醇，得到浸膏；减压浓缩的条件为：压力-0.02MPa，温度55℃；
(3)将浸膏用质量浓度为30％的乙酸溶解，乙酸的加入量为浸膏质量的1.5倍，然后将溶解液置于超临界CO2流体中进行萃取，萃取的温度为30℃，压力为60MPa，萃取时间为8min；
(4)将萃取后的分离液经大孔吸附树脂吸附，所述大孔吸附树脂为聚甲基丙烯酸-马来松香丙烯酸甘油酯-大孔吸附树脂，其用量为浸膏质量的0.5倍，待树脂吸附饱和后，采用质量浓度55％的乙醇溶液进行解析，解析液用量为树脂用量的3倍，解析的pH条件为5，解析完成后经减压回收乙醇，得到科罗索酸浓缩液；
(5)将科罗索酸浓缩液调pH值至7，静置后结晶即得到科罗索酸成品。
对终产物进行称重，得科罗索酸成品650g，成品总收率为6.5％，按专利文献CN101143887A中的理化参数测定方法，测得科罗索酸的纯度为98.3％，采用GB3143中规定的铂钴比色法测定其色度，测得色度为2.1，色度去除率为91％。
实施例2
一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，包括以下步骤：
(1)以枇杷叶为原料，经60℃真空干燥处理至其含水量为2％，然后经粉碎机粉碎至粒度为60～120μm，得到5kg枇杷叶粉；
(2)将步骤(1)所得枇杷叶粉置于6倍重量份的质量浓度为88％的乙醇溶液中(乙醇溶液总重为30kg，包含0.6kg甲酸)，在超声波功率为50kHz，搅拌速度为350r/min下超声提取10min；超声波提取完成后将提取液过滤，减压浓缩提取液至去除乙醇，得到浸膏；减压浓缩的条件为：压力-0.05MPa，温度65℃；
(3)将浸膏用质量浓度为35％的乙酸溶解，乙酸的加入量为浸膏质量的2倍，然后将溶解液置于超临界CO2流体中进行萃取，萃取的温度为40℃，压力为80MPa，萃取时间为12min；
(4)将萃取后的分离液经大孔吸附树脂吸附，所述大孔吸附树脂为聚甲基丙烯酸-马来松香丙烯酸甘油酯-苯乙烯-大孔吸附树脂，其用量与浸膏质量一致，待树脂吸附饱和后，采用质量浓度55％的乙醇溶液进行解析，解析液用量为树脂用量的5倍，解析的pH条件为6，解析完成后经减压回收乙醇，得到科罗索酸浓缩液；
(5)将科罗索酸浓缩液调pH值至7，静置后结晶即得到科罗索酸成品。
对终产物进行称重，得科罗索酸成品340g，成品总收率为6.8％，按专利文献CN101143887A中的理化参数测定方法，测得科罗索酸的纯度为97.8％，采用GB3143中规定的铂钴比色法测定其色度，测得色度为2.6，色度去除率为89％。
实施例3
一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，包括以下步骤：
(1)以枇杷叶为原料，经50℃真空干燥处理至其含水量为3％，然后经粉碎机粉碎至粒度为10～60μm，得到1kg枇杷叶粉；
(2)将步骤(1)所得枇杷叶粉置于5倍重量份的质量浓度为90％的乙醇溶液中(乙醇溶液总重为5kg，包含0.5kg甲酸)，在超声波功率为45kHz，搅拌速度为320r/min下超声提取12min；超声波提取完成后将提取液过滤，减压浓缩提取液至去除乙醇，得到浸膏；减压浓缩的条件为：压力-0.03MPa，温度60℃；
(3)将浸膏用质量浓度为32％的乙酸溶解，乙酸的加入量为浸膏质量的1.8倍，然后将溶解液置于超临界CO2流体中进行萃取，萃取的温度为35℃，压力为70MPa，萃取时间为10min；
(4)将萃取后的分离液经大孔吸附树脂吸附，所述大孔吸附树脂为聚甲基丙烯酸-马来松香丙烯酸甘油酯-大孔吸附树脂，其用量为浸膏质量的0.8倍，待树脂吸附饱和后，采用质量浓度55％的乙醇溶液进行解析，解析液用量为树脂用量的4倍，解析的pH条件为5，解析完成后经减压回收乙醇，得到科罗索酸浓缩液；
(5)将科罗索酸浓缩液调pH值至6，静置后结晶即得到科罗索酸成品。
对终产物进行称重，得科罗索酸成品672g，成品总收率为6.72％，按专利文献CN101143887A中的理化参数测定方法，测得科罗索酸的纯度为98.5％，采用GB3143中规定的铂钴比色法测定其色度，测得色度为2.0，色度去除率为92％。

Claims (10)

1.一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)以枇杷叶为原料，经真空干燥处理，粉碎后得到枇杷叶粉；
(2)将枇杷叶粉置于乙醇溶液中经超声波提取10～15min，所述乙醇溶液中含质量浓度为0.5～2％的甲酸；超声波提取完成后将提取液过滤，减压浓缩提取液至去除乙醇，得到浸膏；
(3)将浸膏用乙酸溶解，置于超临界CO2流体中进行萃取，萃取的温度为30～40℃，压力为60～80MPa，萃取时间为8～12min；
(4)将萃取后的分离液经大孔吸附树脂吸附，所述大孔吸附树脂采用经马来松香丙烯酸甘油酯交联得到的松香基大孔吸附树脂，待吸附饱和后，采用乙醇进行解析，经减压回收乙醇，得到科罗索酸浓缩液；
(5)将科罗索酸浓缩液调pH值至6-7，静置后结晶即得到科罗索酸成品。
2.根据权利要求1所述的从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述乙醇的质量浓度为88～90％。
3.根据权利要求2所述的从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，所述乙醇溶液的用量为枇杷叶粉重量的4～6倍。
4.根据权利要求1所述的从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，所述超声波提取的功率为40～50kHz，超声波搅拌速度为300-350r/min。
5.根据权利要求1所述的从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中减压浓缩的条件为：压力-0.02～-0.05MPa，温度55～65℃。
6.根据权利要求1所述的从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述乙酸的加入量为浸膏质量的1.5～2倍，乙酸的质量浓度为30～35％。
7.根据权利要求1所述的从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述大孔吸附树脂的用量为浸膏质量的0.5～1倍。
8.根据权利要求7所述的从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，步骤(4)中采用质量浓度55％的乙醇溶液进行解析，解析液的用量为树脂用量的3～5倍，解析的pH条件为5～6。
9.根据权利要求1所述的从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述枇杷叶粉的粒度为10～200μm，枇杷叶粉的含水量为5％以下。
10.根据权利要求1所述的从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述真空干燥的温度为40～60℃。
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SE01 Entry into force of request for substantive examination
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GR01 Patent grant
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