CN109125351A - 生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用 - Google Patents
生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109125351A CN109125351A CN201811243194.2A CN201811243194A CN109125351A CN 109125351 A CN109125351 A CN 109125351A CN 201811243194 A CN201811243194 A CN 201811243194A CN 109125351 A CN109125351 A CN 109125351A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- powder
- bear gall
- gallbladder
- bioconversion
- gall powder
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000843 powder Substances 0.000 title claims abstract description 80
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 206010069767 H1N1 influenza Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 7
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 claims description 51
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 14
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 7
- BHTRKEVKTKCXOH-UHFFFAOYSA-N Taurochenodesoxycholsaeure Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)C1(C)CC2 BHTRKEVKTKCXOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims description 7
- BHTRKEVKTKCXOH-BJLOMENOSA-N taurochenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 BHTRKEVKTKCXOH-BJLOMENOSA-N 0.000 claims description 7
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 102100039358 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010014831 7-alpha-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 6
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 claims description 6
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 claims description 6
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 claims description 6
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 108010032887 7 beta-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 claims description 4
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 claims description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 2
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 claims 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 abstract description 15
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 9
- 230000003902 lesion Effects 0.000 abstract description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 26
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 10
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 5
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 3
- 241000606124 Bacteroides fragilis Species 0.000 description 2
- 241001147706 Clostridium sardiniense Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000011805 ball Substances 0.000 description 2
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 2
- 239000007986 glycine-NaOH buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000011806 microball Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- BHTRKEVKTKCXOH-LBSADWJPSA-N tauroursodeoxycholic acid Chemical group C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 BHTRKEVKTKCXOH-LBSADWJPSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000961092 Collinsella aerofaciens ATCC 25986 Species 0.000 description 1
- 241001269238 Data Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282443 Ursidae Species 0.000 description 1
- 241000282453 Ursus americanus Species 0.000 description 1
- 241000282454 Ursus arctos Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000003809 bile pigment Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- -1 comprising: moisture Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003777 experimental drug Substances 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- BHTJEPVNHUUIPV-UHFFFAOYSA-N pentanedial;hydrate Chemical compound O.O=CCCCC=O BHTJEPVNHUUIPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000013139 quantization Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 235000019832 sodium triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/37—Digestive system
- A61K35/413—Gall bladder; Bile
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/57—Birds; Materials from birds, e.g. eggs, feathers, egg white, egg yolk or endothelium corneum gigeriae galli
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用。本发明对生物转化熊胆粉的抗病毒药效活性进行了研究，对H1N1流感病毒感染小鼠给药生物转化熊胆粉，并进行了给药后的小鼠生存率观察实验和小鼠肺部病变观察实验。实验结果提示了生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用、特别是生物转化熊胆粉在制备抗H1N1流感病毒药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及制药技术领域，尤其涉及生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用。
背景技术
熊胆，由熊科动物黑熊或棕熊干燥胆囊胆汁得到，具有清热、平肝、明目的功效，其主要成分是牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)。熊胆是四大名贵动物药之一，有2000余年的入药历史，有大量的处方都含有熊胆成分。我国每年熊胆粉产量约30吨，仍然满足不了人类健康的需求。目前高端熊胆粉供需矛盾的日益突出和低端原料用熊胆粉市场需求的持续增加，使得熊胆粉的价格节节攀升，市场价格已经超过了5000元/kg。更为严峻的是，国内外动物保护组织对活熊取胆的长期抵制，特别是最近的“归真堂”事件再次引起了国际国内社会的广泛关注，给国内熊胆粉的生产和相关产业的发展带来了前所未有的阻力。因此，加快人工熊胆的研发是促进熊胆产业可持续发展的关键。
本发明的申请人已于2015年3月4日向专利局提交了发明名称为“一种人工熊胆粉及其制备方法(申请号201410588581.5、申请公布号CN104382941)”的发明专利申请，该发明专利申请的内容以全文引用的方式并入本申请中。
上述发明专利申请201410588581.5中，提供了一种人工熊胆粉及其制备方法，在不添加其他化学成分的前提下，将禽畜胆汁体外模拟生物催化转化，并通过一定工艺制成人工熊胆。本申请所提供的就是该种生物转化熊胆粉在制药中的用途。
发明内容
本发明的目的在于提供生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用。本发明所述的生物转化熊胆粉即为发明专利申请201410588581.5中公开的人工熊胆粉。
本发明通过以下技术方案实现：
本发明提供生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用。
在本发明所提供的应用中，所述病毒为H1N1流感病毒。
所述生物转化熊胆粉是通过如下方法制备的熊胆粉：
a)将禽畜胆粉用pH＝7～9的缓冲液溶解后，在11000g条件下离心10min，多次过滤，得到滤渣和滤液，所述滤渣冷冻干燥保存；
b)将所述滤液加入装有7α-羟基类固醇脱氢酶、7β-羟基类固醇脱氢酶和辅酶I或辅酶II的反应器中进行反应；所述7α-羟基类固醇脱氢酶、7β-羟基类固醇脱氢酶在反应器中以固定化的方式存在；
c)将反应完毕后的反应液冷冻干燥48h后与所述滤渣混合，得到人工熊胆粉。
本发明所述的禽畜胆粉是鸡胆粉、鸭胆粉、鹅胆粉、牛胆粉、兔胆粉、狗胆粉、羊胆粉中的一种或多种混合物。
所述禽畜胆粉的主要成分和质量百分比如下：总胆酸：40～65％,氨基酸：4～9％,微量元素：0.5～1％,其中，所述总胆酸中含有TCDCA，所述TCDCA占禽畜胆粉的质量百分比为40～50％。
本发明对生物转化熊胆粉进行了抗H1N1流感病毒药效活性的研究，具体来说，对H1N1流感病毒感染小鼠进行了生物转化熊胆粉给药，并进行了给药后的小鼠生存率观察实验和小鼠肺部病变观察实验。实验结果提示了生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用、特别是生物转化熊胆粉在制备抗H1N1流感病毒药物中的应用。
具体实施方式
实施例1生物转化熊胆粉的制备
按照发明专利申请201410588581.5中的制备方法进行生物转化熊胆粉的制备。本发明所采用的制备原料禽胆可以为(且不局限于)鸡胆、鸭胆、鹅胆、牛胆、兔胆、狗胆、羊胆等。本发明中所述的禽畜胆粉可以为(且不局限于)鸡胆粉、鸭胆粉、鹅胆粉、牛胆粉、兔胆粉、狗胆粉、羊胆粉等禽畜胆粉中的一种或多种混合物。较佳地，禽畜胆粉的主要成分和质量百分比如下：胆酸：40～65％，氨基酸：4～9％，微量元素：0.5～1％；其中，所述总胆酸中含有TCDCA，所述TCDCA占禽畜胆粉的质量百分比为40～50％。除上述主要成分外，禽畜胆粉还含有其他成分，包括：水分、胆色素、维生素、胆固醇、脂肪酸等。
本实施例以鸡胆粉制备生物转化熊胆粉为例，步骤具体如下：
1、鸡胆粉的制备
鸡胆从屠宰场购买得到。首先确定胆的数量和重量。用75％酒精对鸡胆局部进行消毒，然后分别剖取胆汁。将取出的胆汁冷冻干燥48h，得到鸡胆粉，放置干燥器中保存备用。
2、生物转化熊胆粉的制备
(1)鸡胆粉的处理
使用pH 7.0～9.0的缓冲液溶解鸡胆粉，配制1L溶液，超声充分溶解，所述缓冲液优选磷酸盐缓冲液(PBS)、Tris-HCl缓冲液(三羟甲基氨基甲烷)或甘氨酸-氢氧化钠缓冲液(Gly-NaOH)；将鸡胆粉溶液在11000g条件下离心10min后，多次过滤，上清液(滤液)作为禽畜胆粉处理液在4℃保存，备用；滤渣冷冻干燥，保存备用
(2)固定化酶的制备
在1％的壳聚糖(水溶性)溶液中加入适量醋酸，磁力搅拌30min制得壳聚糖醋酸溶液。将上述溶液用高压注射泵注入到100mL 3％(w/v)的三聚磷酸钠溶液中固化1～2h，得到粒度均匀、形状规则的白色的壳聚糖球，然后过滤，用去离子水洗涤多次。将制备好的壳聚糖球放入盛有0.125％戊二醛水溶液的烧杯中，并置于37℃，170g下的摇床中，活化2～4h，即得活化壳聚糖微球。称取10g活化好的壳聚糖微球，装入小型层析柱，加入适量的7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶液，所述7α-羟基类固醇脱氢酶(7α-HSDH)和7β-羟基类固醇脱氢酶(7β-HSDH)来自于微生物，如撒丁岛梭菌(Clostridium sardiniense，DSM599/ATCC27555)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis ATCC25825)或产气柯林斯菌(Collinsella aerofaciens ATCC25986)。采用垂直混合方式结合4～6h，固定完毕，放出酶液，并用PBS缓冲液冲洗固定后酶柱3～5次。结果检测表明7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶的固定率大于90％。
(3)生物催化转化
在固定化酶柱中加入第(1)步制备好的鸡胆粉溶液处理后的滤液作为反应底物溶液，加入辅酶I或辅酶II，使辅酶I(或辅酶II):TCDCA＝1:2～1:4(摩尔比)，在20～30℃下，反应2～6h。
(4)反应液的处理
将反应完毕后的反应液冷冻干燥48h，得固体反应产物。最后将在第(1)步得到的滤渣与反应产物混合均匀，即得生物转化熊胆粉。
实施例2体内抗病毒实验
1.材料与方法
1.1实验动物：
Babl/C小鼠,SPF级别，雄性，初始体重16-18g，从西普尔-必凯实验动物有限公司购买(合格证：2008001667220)。
1.2病毒感染：
H1N1FM1毒株，为鼠肺适应株，本实验室保存。临用前，配制成10-3次方稀释液，小鼠麻醉后，鼻腔吸入感染30ul。感染小鼠按照体重区间，随机分组。
1.3药物配制：
实验药物用0.5％CMC溶解配制成不同浓度。
1.4给药方案：
生存率分析：口服灌胃给药，一天一次，7次给药(0-6天)后，停药，观察14天。
肺病变分析：口服灌胃给药，一天一次，6次给药(0-5天)后，解剖，观察肺部病变和肺指数。
1.5分组给药：
首次给药时间为病毒滴鼻感染后2小时，后续给药间隔24h。
正常组Normal：0.5％CMC
病毒组Virus：0.5％CMC
生物转化熊胆粉组ABBP:0.2g/kg；0.1g/kg；0.05g/kg
1.6生存率实验，观察指标：
每2天称量体重(0,2,4,6天)，每天观察小鼠死亡情况，进行记录。1.7肺部病变观察：
每天称量小鼠体重，按照体重改变和小鼠发病状态，解剖。小鼠断颈处死后，解剖，打开胸腔，观察全肺的充血实质化病变程度，按照0,25％，50％，75％，100％，对无病变，轻微，中度，重度，全肺病变进行打分，如在两相区间内，进行相应增减。摘取小鼠全肺，吸去残血后，称量全肺重，根据肺重/体重*100公式计算肺指数，对病变进行数据量化校正。
2.实验结果
实验1：生存率观察实验
1.1小鼠体重改变情况如下表1所示：
表1小鼠体重改变
1.2生存率观察
感染后小鼠死亡情况(14天观察)如下表2所示：
表2感染后小鼠死亡情况
用药期间生存率观察(感染后5-6天)数据如下表3所示：
表3用药期间生存率观察(感染后5-6天)
小鼠平均生存时间对比(14天)见下表4所示：
表4小鼠平均生存时间对比(14天)
| 平均生存天数Mean | 标准偏差SD | 延长天数 | 延长率％ | |
| Normal | 13.30 | 2.21 | ||
| Virus | 5.70 | 1.57 | ||
| ABBP0.2 | 6.90 | 1.97 | 1.20 | 21.1％ |
| ABBP0.1 | 6.80 | 1.55 | 1.10 | 19.3％ |
| ABBP0.05 | 6.00 | 1.41 | 0.30 | 5.3％ |
实验2：肺病变观察
2.1给药期间小鼠体重改变数据见下表5所示：
表5给药期间小鼠体重改变
小鼠5天死亡率数据见下表6所示：
表6小鼠5天死亡率
| 0d | 5d | 5d死亡率 | |
| Normal | 4 | 4 | 0.0％ |
| Virus | 16 | 4 | 75.0％ |
| ABBP0.2 | 5 | 5 | 0.0％ |
| ABBP0.1 | 6 | 5 | 16.7％ |
| ABBP0.05 | 5 | 3 | 40.0％ |
小鼠5天肺病变(死亡小鼠计算为100％病变)数据见下表7所示：
表7小鼠5天肺病变
| 肺病变％M | SD | 肺病变改善％ | |
| Normal | 0 | 0 | |
| virus | 67.31％ | 37.34％ | |
| ABBP0.05 | 37.00％ | 39.94％ | 45.03％ |
| ABBP0.1 | 35.00％ | 36.06％ | 48.00％ |
| ABBP0.2 | 37.00％ | 25.64％ | 45.03％ |
存活小鼠肺指数观察数据见下表8所示：
表8存活小鼠肺指数观察
| 肺指数(肺重/体重*100％) | SD | 肺指数改善％ | |
| Normal | 0.69％ | 0.04％ | |
| virus | 1.89％ | 0.80％ | |
| ABBP0.05 | 1.40％ | 0.68％ | 25.6％ |
| ABBP0.1 | 1.19％ | 0.40％ | 36.8％ |
| ABBP0.2 | 1.44％ | 0.54％ | 23.6％ |
3.实验结论
生存率观察实验和肺指数观察实验数据提示：生物转化熊胆粉对H1N1流感病毒感染小鼠具有保护作用(该作用明显优于天然熊胆粉)，由此提示了生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用、特别是生物转化熊胆粉在制备抗H1N1流感病毒药物中的应用。
Claims (5)
1.生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒为H1N1流感病毒。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的应用，其特征在于，所述生物转化熊胆粉是通过如下方法制备的熊胆粉：
a)将禽畜胆粉用pH＝7～9的缓冲液溶解后，在11000g条件下离心10min，多次过滤，得到滤渣和滤液，所述滤渣冷冻干燥保存；
b)将所述滤液加入装有7α-羟基类固醇脱氢酶、7β-羟基类固醇脱氢酶和辅酶I或辅酶II的反应器中进行反应；所述7α-羟基类固醇脱氢酶、7β-羟基类固醇脱氢酶在反应器中以固定化的方式存在；
c)将反应完毕后的反应液冷冻干燥48h后与所述滤渣混合，得到人工熊胆粉。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述禽畜胆粉是鸡胆粉、鸭胆粉、鹅胆粉、牛胆粉、兔胆粉、狗胆粉、羊胆粉中的一种或多种混合物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述禽畜胆粉的主要成分和质量百分比如下：
总胆酸：40～65％,
氨基酸：4～9％,
微量元素：0.5～1％,
其中，所述总胆酸中含有TCDCA，所述TCDCA占禽畜胆粉的质量百分比为40～50％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811243194.2A CN109125351A (zh) | 2018-10-24 | 2018-10-24 | 生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811243194.2A CN109125351A (zh) | 2018-10-24 | 2018-10-24 | 生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109125351A true CN109125351A (zh) | 2019-01-04 |
Family
ID=64809707
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811243194.2A Pending CN109125351A (zh) | 2018-10-24 | 2018-10-24 | 生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109125351A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111012754A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-04-17 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 熊胆滴丸在制备抗病毒药物中的应用 |
| CN112190597A (zh) * | 2019-07-08 | 2021-01-08 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种生物转化熊胆粉在制备解热药物中的应用 |
| CN112641805A (zh) * | 2021-01-13 | 2021-04-13 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 熊胆粉在制备治疗上呼吸道感染药物中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101229317A (zh) * | 2006-10-30 | 2008-07-30 | 杨文龙 | 一种清热化痰止咳润肺药物及其制备方法 |
| CN104382941A (zh) * | 2014-10-28 | 2015-03-04 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种人工熊胆粉及其制备方法 |
-
2018
- 2018-10-24 CN CN201811243194.2A patent/CN109125351A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101229317A (zh) * | 2006-10-30 | 2008-07-30 | 杨文龙 | 一种清热化痰止咳润肺药物及其制备方法 |
| CN104382941A (zh) * | 2014-10-28 | 2015-03-04 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种人工熊胆粉及其制备方法 |
Non-Patent Citations (9)
| Title |
|---|
| 于淑贤等: "天然与人工熊胆粉的药效学实验研究", 《吉林中医药》 * |
| 冯海燕等: "中成药在甲型H1N1流感治疗中的作用", 《疾病监控与控制杂志》 * |
| 张学延等: "熊胆及其潜在替代资源研究概况", 《上海中医药杂志》 * |
| 朱建凤等: "痰热清注射液治疗老年人甲型H1N1流感并肺炎临床疗效观察", 《山西医药杂志》 * |
| 李政等: "天然熊胆粉与人工合成熊胆粉的红外吸收特征比较", 《中草药》 * |
| 杨婷等: "熊胆贝母止咳胶囊体内抗病毒作用研究", 《中药药理与临床》 * |
| 王雪等: "中药抗流感病毒作用及机制的研究概况", 《中国医药导报》 * |
| 申玲玲等: "中成药治疗甲型H1N1流感的研究进展", 《医药医导》 * |
| 韩进庭: "痰热清注射液结合奥司他韦治疗甲型H1N1流感临床观察", 《吉林医学》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112190597A (zh) * | 2019-07-08 | 2021-01-08 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种生物转化熊胆粉在制备解热药物中的应用 |
| CN111012754A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-04-17 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 熊胆滴丸在制备抗病毒药物中的应用 |
| CN112641805A (zh) * | 2021-01-13 | 2021-04-13 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 熊胆粉在制备治疗上呼吸道感染药物中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104382941B (zh) | 一种人工熊胆粉及其制备方法 | |
| CN109125351A (zh) | 生物转化熊胆粉在制备抗病毒药物中的应用 | |
| CN104623122B (zh) | 一种具有抗疲劳功能的生物制剂及其制作方法 | |
| CN106262866A (zh) | 植菌素及其用途 | |
| CN102920655A (zh) | 氟苯尼考混悬注射液及其制备工艺 | |
| CN101317904B (zh) | 乌梅提取物在制备抗畜禽病毒药物中的用途 | |
| CN109010373A (zh) | 生物转化熊胆粉在制备抗菌药物中的应用 | |
| CN109125352A (zh) | 生物转化熊胆粉在制备镇咳药物中的应用 | |
| CN103641889B (zh) | 一种降糖肽及其药物用途 | |
| CN108904537A (zh) | 一种家禽胆转化物在制备抗胆汁淤积性肝病药物中的应用 | |
| CN101618213B (zh) | 麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗及其制备方法 | |
| CN101904856A (zh) | 1，6-二磷酸果糖及其衍生物在制备动物医疗保健品中的应用 | |
| CN105456185A (zh) | 一种复方黄芪多糖注射液及其制备方法 | |
| TWI750737B (zh) | 生物轉化熊膽粉在製備治療ｌｐｓ誘導的肺部炎症之藥物中的應用 | |
| CN104208089B (zh) | 一种用于治疗家禽腺胃炎的胃漂浮制剂及其制备方法 | |
| CN112641805A (zh) | 熊胆粉在制备治疗上呼吸道感染药物中的应用 | |
| CN102327239A (zh) | 鲑鱼降钙素纳米脂质体注射剂及制备方法 | |
| CN101081227B (zh) | 甘草酸二铵的组合物 | |
| CN112843080A (zh) | 抗甲3型流感病毒的组合物及其制备方法 | |
| CN107164144B (zh) | 蛹虫草鹿鞭酒的制备方法 | |
| CN111265594A (zh) | 用于修复伤口的药物制剂及制备方法 | |
| CN110339169A (zh) | 包覆维生素d和维生素k的纳米囊泡制剂及其应用 | |
| CN110075131A (zh) | 寨卡病毒减毒株在治疗脑胶质瘤中的应用 | |
| CN103550286B (zh) | 一种鸡传染性法氏囊病活疫苗泡腾片免疫佐剂 | |
| CN104998262B (zh) | Dpp4抑制剂在防治辐射诱导骨髓抑制药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190104 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |