CN109091662A - 一种生物活性肽水凝胶及其制备方法和应用 - Google Patents

一种生物活性肽水凝胶及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种生物活性肽水凝胶，属于医药技术领域，该生物活性肽水凝胶通过生物活性肽、透明质酸和交联剂三者混合后经过交联反应得到凝胶产品。该技术方案制备的生物活性肽水凝胶具有可塑性好、稳定性良好、安全性好和生物学效价高的优点，可以制备任意形态的水凝胶或是注射颗粒，可以制成生物相容性好的材料使用。本发明还提供了一种上述生物活性肽水凝胶的制备方法，包括以下步骤：步骤一，生物活性肽的提取与制备；步骤二，加入透明质酸；步骤三，加入交联剂。本发明还提供了一种生物活性肽水凝胶在药物递送领域的应用，适合于抗肿瘤辅助治疗，用于局部控制的药物递送，能够明显抑制肿瘤细胞增殖，间接杀死肿瘤细胞。

Description

一种生物活性肽水凝胶及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种生物活性肽水凝胶，以及该生物活性肽水凝胶的制备方法和应用，属于医药技术领域。
背景技术
如今，化疗在各种癌症的治疗中发挥了重要作用。化疗药物的发展大大提高了患者的生存率。当前，化疗成为治疗癌症有效的手段之一，其与手术、放疗并称癌症的三大治疗手段。手术和放疗属于局部治疗，只对治疗部位的肿瘤有效，对于潜在的转移病灶和已经发生临床转移的癌症就难以发挥有效治疗了。而化疗是一种全身治疗的手段，无论采用什么途径给药(口服、静脉和体腔给药等)，化疗药物都会随着血液循环遍布全身的绝大部分器官和组织。
因此，对一些有全身播撒倾向的肿瘤及已经转移的中晚期肿瘤，化疗成为主要的治疗手段。但是，由于化疗药物为细胞毒药物，因此存在治疗中伴随的毒副作用。由于化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，又杀伤正常组织的细胞，尤其是杀伤人体中生长发育旺盛的血液、淋巴组织细胞等。而这些细胞与组织是人体重要的免疫防御系统，破坏了人体的免疫系统，癌症就可能迅速发展，造成严重后果。
由于化疗存在的不足，探讨新的给药途径及靶向性制剂的研究成为世界范围内的热点。为了实现更有效和更安全的药物递送，许多研究集中在使用水凝胶局部递送化疗药物。研究显示，亲水和疏水药物都可以在肿瘤部位局部释放出水凝胶，导致肿瘤内药物用量增加，正常组织药物分布减少。在低温下作为溶胶存在并在体温下变成凝胶的热敏水凝胶可能是在局部药物递送领域中应用的最常见的生物医学材料。水凝胶是一种高分子网络体系，性质柔软，能保持一定的形状，能吸收大量的水。因此，基于现有水凝胶材料的研究，将应用到癌症治疗技术中，探寻有效的癌细胞抑制产品，具有重要意义。
发明内容
本发明实施例首先提供了一种生物活性肽水凝胶，具有生物相容性好和安全性高的优点。具体技术方案如下：
一种生物活性肽水凝胶，该生物活性肽水凝胶通过生物活性肽、透明质酸和交联剂三者混合后经过交联反应得到凝胶产品，生物活性肽、透明质酸和交联剂三者的体积比为1:1～3:1～9。
作为上述技术方案的改进，所述生物活性肽为木瓜多肽、鱼骨胶原蛋白、牛骨胶原蛋白或从山羊肝脏提取的生物活性多肽。
作为上述技术方案的改进，所述生物活性肽为从健康雄性山羊肝脏提取的生物活性肽。
作为上述技术方案的改进，所述交联剂为1，4-丁二醇二缩水甘油醚。
上述技术方案制备的生物活性肽水凝胶具有可塑性好、稳定性良好、安全性好和生物学效价高的优点，可以制备任意形态的水凝胶或是注射颗粒，可以制成生物相容性好的材料使用。
本发明实施例还提供了一种生物活性肽水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，生物活性肽的提取与制备，从木瓜中提取木瓜多肽、或从鱼骨中提取鱼骨胶原蛋白、或从牛骨中提取牛骨胶原蛋白、或从山羊肝脏、脾脏中提取生物活性多肽；
步骤二，加入透明质酸，向步骤一中处理后的生物活性肽中加入透明质酸，在20℃～30℃的温度条件下搅拌1h～3h后静置；
步骤三，加入交联剂，向步骤二中静置后的混合溶液中加入交联剂，放入45℃～55℃的恒温水浴锅中3h～6h，然后置于无热源蒸馏水中透析2天～5天，得到生物活性肽水凝胶。
作为上述技术方案的改进，在步骤一中，生物活性肽为从健康雄性山羊肝脏、脾脏提取的生物活性肽，将从健康雄性山羊肝脏、脾脏提取的生物活性肽溶于磷酸盐缓冲溶液中，然后加入氢氧化钠溶液，在0℃～25℃温度条件下搅拌1h～3h。
作为上述技术方案的改进，在步骤一中，从健康雄性山羊肝脏、脾脏提取的生物活性肽的具体步骤为：
①将剥取的组织以超纯水冲洗后快速粉碎；
②加入研磨装置中研磨搅拌，得粗研磨料液；
③将粗研磨料液－40℃反复冻融三次；
④冻融三次后解冻粗研磨料液，再次研磨搅拌，400目筛网过滤，得细研磨料液；
⑤将细研磨料液离心，取上清后超滤，超滤后所得液体，在无菌环境下过0.22um滤器，封口膜封口，4℃保存。
作为上述技术方案的改进，在步骤①中，剥取的组织与超纯水的料液比为1：2。
作为上述技术方案的改进，在步骤三中，交联剂为1，4-丁二醇二缩水甘油醚。
上述技术方案以生物活性肽类物质为原料，在进行与透明质酸结合，采用物理搅拌法制得聚合物，在制备的溶液中加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚，通过交联反应完成后通过溶剂交换、透析等步骤制得水凝胶材料，合成路线短、工艺简单，市场前景广阔。
本发明实施例还提供了一种生物活性肽水凝胶在药物递送领域的应用方法，主要采用上述生物活性肽水凝胶作为抑制肿瘤细胞增殖的药物递送材料。
上述生物活性肽水凝胶完全无毒副作用，适合于抗肿瘤辅助治疗，用于局部控制的药物递送，能够明显抑制肿瘤细胞增殖，间接杀死肿瘤细胞，具有较好的生物相容性和组织相容性，可以作为治疗肿瘤、胃癌、肝癌等疾病的药物递送材料使用。
附图说明
图1为本发明实施例一中生物活性肽水凝胶的红外光谱图，图中横轴为波数(cm-1)，纵轴为透过率(％)，四种来源不同的生物活性肽制备的水凝胶的红外光谱图，A图中，1号线为生物活性肽(ACBP)的红外光谱图，2号线为制备的水凝胶(Gel1)的红外光谱图，B图中，1号线为为植物多肽(ZWT)的红外光谱图，2号线为制备的水凝胶(Gel2)的红外光谱图，C图中，1号线为鱼骨胶原蛋白(FBC)的红外光谱图，2号线为制备的水凝胶(Gel3)的红外光谱图，D图中，1号线为牛骨胶原蛋白(BATC)的红外光谱图，2号线为制备的水凝胶(Gel4)的红外光谱图，E图中，1号线和2号线分别为透明质酸(HA)和BDDE(交联剂)的红外图谱。图中显示水凝胶在交联剂作用下，形成的水凝胶在1600和1400附近有新的吸收峰，并且与原有的透明质酸吸收峰不同，证明交联形成了一种新的聚合物。
图2为本发明实施例一至四中得到的水凝胶的样品图，其中Gel1为生物活性多肽制备的水凝胶，Gel2为植物多肽制备的水凝胶，Gel3为鱼骨胶原蛋白制备的水凝胶，Gel4为牛骨胶原蛋白制备的水凝胶。
图3为本发明实施例一至四中得到的水凝胶的扫描电镜图，A，E，I为生物活性多肽制备的水凝胶，B，F，J为木瓜多肽制备的水凝胶，C，G，K为鱼骨胶原蛋白制备的水凝胶，D，H，L为牛骨胶原蛋白制备的水凝胶。第一排为水凝胶的内部孔径结构，显示不同的孔的排列；第二排为水凝胶的颗粒的粒径分布，显示出不同的大小和分布均匀性。第三排为水凝胶的体外降解后的内部孔径排布，四种水凝胶呈现不同的降解率，内部孔径逐渐消失。
图4为本发明实施例一至四中得到的水凝胶的细胞实验图，图中第一排是3T3-L1细胞培养于四种不同来源的水凝胶表面后的细胞生长情况，培养时间为24h；第二排是HepG2细胞培养于四种不同来源的水凝胶表面后的细胞生长情况，培养时间为24h；第三排是L929细胞培养于四种不同来源的水凝胶表面后的细胞生长情况，培养时间为24h；第四排是MKN-45细胞培养于四种不同来源的水凝胶表面后的细胞生长情况，培养时间为24h。
图5为应用本发明实施例一至四中得到的水凝胶后的细胞扫描电镜图，图中第一排是3T3-L1细胞培养于四种不同来源的水凝胶表面后的细胞生长情况的扫描电镜图，培养时间为24h；第二排是HepG2细胞培养于四种不同来源的水凝胶表面后的细胞生长情况的扫描电镜图，培养时间为24h；第三排是L929细胞培养于四种不同来源的水凝胶表面后的细胞生长情况的扫描电镜图，培养时间为24h；第四排是MKN-45细胞培养于四种不同来源的水凝胶表面后的细胞生长情况的扫描电镜图，培养时间为24h。
图6为本发明实施例一至四中得到的水凝胶的皮下注射后的透射电镜图，Gel1为生物活性肽制备的水凝胶，Gel2为木瓜多肽制备的水凝胶，Gel3为鱼骨胶原蛋白制备的水凝胶，Gel4为牛骨胶原蛋白制备的水凝胶，Control为空白对照。图中显示皮下组织中各个组织和器官发生变化，其中Gel1的炎症反应接近于空白对照，因此，以上实验验证了生物活性多肽水凝胶的生物相容性较好，具有可控的降解速率。
图7为本发明实施例一至四中得到的水凝胶在注射于小鼠皮下后1(第一列和第二列)和3周(第三列和第四列)后，取皮下组织及材料的H&E染色图，Gel1为生物活性多肽制备的水凝胶，Gel2为木瓜多肽制备的水凝胶，Gel3为鱼骨胶原蛋白制备的水凝胶，Gel4为牛骨胶原蛋白制备的水凝胶，Control为空白对照。图中显示皮下组织中各个组织和炎症细胞发生变化，其中Gel1的炎症反应接近于空白对照，因此，以上实验验证了生物活性多肽水凝胶的抗炎症效果较好。
图8为本发明实施例一中的生物活性肽水凝胶注射于载有人胃癌MKN45细胞的荷瘤裸鼠的肿瘤旁，生理盐水作为对照。观察每只裸鼠的体重，瘤直径，瘤重，经过15天的作用，脱臼断颈，剥取肿瘤进行H&E染色，观察肿瘤细胞的存活状态和形态的变化。
具体实施方式
本发明实施例首先提供了一种生物活性肽水凝胶，该生物活性肽水凝胶通过生物活性肽、透明质酸和交联剂三者混合后经过交联反应得到凝胶产品，生物活性肽、透明质酸和交联剂三者的体积比为1:1～3:1～9，其中生物活性肽为木瓜多肽、鱼骨胶原蛋白、牛骨胶原蛋白或从山羊肝脏提取的生物活性多肽，交联剂可以采用现有技术中常见的交联剂，例如1，4-丁二醇二缩水甘油醚。
上述方案中木瓜多肽从木瓜中提取得到的木瓜小分子肽，鱼骨胶原蛋白从鱼骨中提取得到，牛骨胶原蛋白从牛骨中提取得到。
上述生物活性肽水凝胶的制备方法如下：
步骤一，生物活性肽的提取与制备，从木瓜中提取木瓜多肽、或从鱼骨中提取鱼骨胶原蛋白、或从牛骨中提取牛骨胶原蛋白、或从山羊肝脏、脾脏中提取生物活性多肽；
步骤二，加入透明质酸，向步骤一中处理后的生物活性肽中加入透明质酸，在20℃～30℃的温度条件下搅拌1h～3h后静置；
步骤三，加入交联剂，向步骤二中静置后的混合溶液中加入交联剂，放入45℃～55℃的恒温水浴锅中3h～6h，然后置于无热源蒸馏水中透析2天～5天，得到生物活性肽水凝胶。
上述步骤中，将1，4-丁二醇二缩水甘油醚作为原始材料的良好交联溶剂，透明质酸可以增加水凝胶材料的组织相容性和降解性，透明质酸具有较高临床价值的生化药物，广泛应用于各类眼科手术，如晶体植入、角膜移植和抗青光眼手术等。还可用于治疗关节炎和加速伤口愈合。因此，为了拓展、增强生物活性肽的抗肿瘤作用，将山羊肝脏来源的生物活性肽制备成水凝胶，其中结合了作为医药用高分子材料透明质酸，后者具有独特的特性，即生物兼容性、可吸收性，无免疫反应。本发明中加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚，以达到充分溶解生物活性肽，改变生物活性肽的螺旋结构的目的。1，4-丁二醇二缩水甘油醚在水凝胶体系中的作用是辅助交联透明质酸和多肽分子链。
其中生物活性肽可以是直接从健康雄性山羊肝脏、脾脏中提取的生物活性肽，具体的提取方法是：
①取出新鲜的山羊肝脏、脾脏快速粉碎，以料液1：2比例快速粉碎；
②置于RETSCH GM300刀式研磨仪中研磨搅拌，搅拌参数为2000rpm、2min，得粗研磨料液；
③将粗研磨料液－40℃反复冻融三次；
④冻融三次后解冻粗研磨料液，再次加入GM300研磨仪，2000rpm，2min，400目筛网过滤，得细研磨料液；
⑤将细研磨料液离心，冷冻离心机9000转离心15min，取上清，上清液置Spectrum(Kros Flo RESEARCH II/TFF SYSTERM)超滤设备进行超滤，收集<10KD滤液，在无菌环境下过0.22um滤器，得到提取的生物活性肽，封口膜封口，4℃保存。
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例一
按照以下方法制备上述生物活性肽水凝胶。
步骤一，生物活性肽的提取，称取健康雄性山羊肝脏提取的生物活性肽溶于磷酸盐缓冲溶液中，然后向溶液中加入氢氧化钠溶液，生物活性肽溶液与氢氧化钠的体积比为1：1，氢氧化钠溶液的浓度为0.5mol/L，反应温度控制为25℃，在搅拌条件下反应2h；
步骤二，加入透明质酸，透明质酸的分子量为4000万，生物活性肽与透明质酸的质量比为1：3，反应温度控制为20℃，在搅拌条件下反应2h，静置2h；
步骤三，加入交联剂，加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚(质量分数为202.25g/moL，纯度大于90％)，1，4-丁二醇二缩水甘油醚与生物活性肽的体积比为6：1，将反应液放于50℃恒温水浴锅中5h，然后置于无热源蒸馏水中透析2天，最终制得水凝胶Gel1。
实施例二
步骤一，称取木瓜中提取的木瓜多肽溶于磷酸盐缓冲溶液中，然后向溶液中加入氢氧化钠溶液，木瓜多肽与氢氧化钠的体积比为1：1，反应温度控制为4℃，在搅拌条件下反应2h；
步骤二，加入透明质酸，木瓜多肽与透明质酸的质量比为1：3，反应温度控制为25℃，在搅拌条件下反应2h，静置2h；
步骤三，加入交联剂，加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚，1，4-丁二醇二缩水甘油醚与木瓜多肽的体积为7：1，将反应液放于50℃恒温水浴锅中5h，然后置于无热源蒸馏水中透析3天，最终制得水凝胶Gel2。
实施例三
步骤一，称取鱼骨提取的鱼骨胶原蛋白溶于磷酸盐缓冲溶液中，然后向溶液中加入氢氧化钠溶液，令鱼骨胶原蛋白溶液与氢氧化钠的体积比为1：1，反应温度控制为0℃，在搅拌条件下反应2h；
步骤二，加入透明质酸，鱼骨胶原蛋白与透明质酸的质量比为1：3，反应温度控制为27℃，在搅拌条件下反应3h，静置2h；
步骤三，加入交联剂，加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚，1，4-丁二醇二缩水甘油醚与鱼骨胶原蛋白的体积比为8：1，将反应液放于50℃恒温水浴锅中5h，然后置于无热源蒸馏水中透析4天，最终制得水凝胶Gel3。
实施例四
步骤一，称取牛骨提取的牛骨胶原蛋白溶于磷酸盐缓冲溶液中，然后向溶液中加入氢氧化钠溶液，令牛骨胶原蛋白溶液与氢氧化钠的体积比为1：1，反应温度控制为25℃，在搅拌条件下反应2h；
步骤二，加入透明质酸，牛骨胶原蛋白与透明质酸的质量比为1：3，反应温度控制为30℃，在搅拌条件下反应3h，静置2h；
步骤三，加入交联剂，加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚，1，4-丁二醇二缩水甘油醚与牛骨胶原蛋白的体积比为9：1，将反应液放于50℃恒温水浴锅中5h，然后置于无热源蒸馏水中透析5天，最终制得水凝胶Gel4。
对以上实施例的产物进行红外光谱分析、扫描电镜分析、样品观察、细胞粘附实验、动物皮下注射填充，其分析结果如下：
水凝胶的红外光谱分析如图1所示。图A中，与纯的生物活性多肽的C＝O吸收峰(1635cm-1，1419cm-1)相比，水凝胶的C＝O(1616cm-1，1459cm-1)吸收峰发生蓝移，且在1330cm-1处有新的吸收峰，是酰胺键(-RCONHR’)的C-N伸缩振动的吸收峰。在图B中，与纯的木瓜多肽的C＝O吸收峰(1607cm-1，1411cm-1)相比，水凝胶的C＝O(1620cm-1，1409cm-1)吸收峰发生蓝移，且在1330cm-1处附近有新的吸收峰，是酰胺键(-RCONHR’)的C-N伸缩振动的吸收峰。在图C中，与纯的鱼骨胶原蛋白的C＝O吸收峰相比，水凝胶的C＝O(1645cm-1，1416cm-1)吸收峰发生蓝移，且在1330cm-1处附近有新的吸收峰，是酰胺键(-RCONHR’)的C-N伸缩振动的吸收峰。在图D中，与纯的牛骨胶原蛋白的C＝O吸收峰相比，水凝胶的C＝O(1617cm-1，1407cm-1)吸收峰发生蓝移，且在1330cm-1处附近有新的吸收峰，是酰胺键(-RCONHR’)的C-N伸缩振动的吸收峰。在图中，与纯的透明质酸的吸收峰相比，Gel1，Gel2，Gel3和Gel4的吸收峰都发生改变，与纯的透明质酸的吸收峰不一样。说明在1，4-丁二醇二缩水甘油醚交联的过程中形成新的聚合物。
水凝胶的样品如图2所示。表面形貌结果显示：四种水凝胶表面光滑，有弹性，而且水凝胶柔性适中，趋向透明的类似果冻状水凝胶。
水凝胶的扫描电镜分析如图3所示。四种水凝胶的断面结构呈现不同，其中Gel1和Gel的断面结构呈均匀分布的多孔结构，孔的连续性较好。Gel3和Gel4不均匀的多孔结构，孔的连续性较差。
水凝胶的细胞生长情况的光学图片如图4所示。图中细胞在四种来源不同的多肽制备的水凝胶上进行粘附实验，观察了在24h细胞生长情况。
水凝胶的细胞形态的扫描电镜图如图5所示。图中细胞在四种来源不同的多肽制备的水凝胶上进行粘附实验，可以观察在24h，细胞形态的变化。其中，3T3-L1和L929细胞在Gel1，Gel2，Gel3和Gel4中的形态接近于成纤维细胞和内皮细胞的正常形态，而对于MKN45和HepG2细胞，细胞形态已经发生改变。提示四种水凝胶在抑制肿瘤细胞中首先改变了细胞的表型，进一步抑制肿瘤细胞的增殖。
图6为水凝胶注射于小鼠皮下后1(第一行)和3周(第三行)后，取皮下组织及材料的透射电镜图。第一列为注射Gel1后的皮下组织和材料的透射电镜图，第二列为注射Gel2后的皮下组织和材料的透射电镜图，第三列为注射Gel3后的皮下组织和材料的透射电镜图，第四列为注射生理盐水后的皮下组织和材料的透射电镜图。图中第1周，水凝胶材料对小鼠皮下有轻微的炎症反应，在3周，水凝胶已经完全适应皮下组织，具有良好的生物相容性。
图7为水凝胶注射于小鼠皮下后1(第一列和第二列)和3周(第三列和第四列)后，取皮下组织及材料的H&E染色图。第一行为注射Gel1后的皮下组织和材料的H&E染色图，第二行为注射Gel2后的皮下组织和材料的H&E染色图，第三行为注射Gel3后的皮下组织和材料的H&E染色图，第四行为注射生理盐水后的皮下组织和材料的H&E染色图。在第一周，可以看到炎症细胞聚集在材料的周围，处于急性炎症期，有大量的中性粒细胞、嗜酸细胞和组织细胞。在第三周取材后，炎性细胞明显减少，见到少量的中性粒细胞、成纤维细胞，浆细胞和巨噬细胞。所以，与空白对照组比较，该四种水凝胶呈现不同的炎症反应，其中Gel1和Gel2的炎症细胞较少，经过三周与组织的反应，已经逐渐适应并渐渐降解。
图8为生物活性肽水凝胶(Gel1)注射于移植瘤裸鼠肿瘤旁，注射生理盐水作为对照，经过15天的作用，剥取肿瘤后进行测量瘤重和大小，观察生物活性多肽水凝胶(Gel1)对来源与人的MKN45细胞的抑制作用。结果显示，生物活性多肽水凝胶(Gel1)对肿瘤的抑制率达到40％，图8A和B中显示从第9天后，空白组裸鼠体重呈下降趋势，肿瘤渐进性生长，水凝胶组裸鼠体重呈上升趋势，肿瘤生长受抑制。图8C中，在15天取肿瘤称量瘤重，显示空白组肿瘤重量要高于生物活性多肽水凝胶(Gel1)重量。图8D中，空白组中肿瘤要比生物活性多肽水凝胶组(Gel1)中大。图8E中，肿瘤的H&E染色结果显示：空白组中，肿瘤细胞的异质性强，细胞分裂，细胞形态大。在Gel1中，可以清楚看到水凝胶包裹肿瘤细胞，空泡细胞较多。以上结果显示，生物活性多肽水凝胶(Gel1)可以抑制肿瘤细胞的增殖，并间接杀死肿瘤细胞。
本发明制备的生物活性肽水凝胶药物递送系统用于成年雌性、雄性裸鼠的动物移植瘤实验表明：生物活性肽水凝胶(Gel1)无毒副作用，具有较好的生物相容性和组织相容性，并且可以一定程度上抑制肿瘤细胞的增殖。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种生物活性肽水凝胶，其特征在于，该生物活性肽水凝胶通过生物活性肽、透明质酸和交联剂三者混合后经过交联反应得到凝胶产品，生物活性肽、透明质酸和交联剂三者的体积比为1:1～3:1～9。
2.如权利要求1所述的一种生物活性肽水凝胶，其特征在于，所述生物活性肽为木瓜多肽、鱼骨胶原蛋白、牛骨胶原蛋白或从山羊肝脏提取的生物活性多肽。
3.如权利要求2所述的一种生物活性肽水凝胶，其特征在于，所述生物活性肽为从健康雄性山羊肝脏提取的生物活性肽。
4.如权利要求1所述的一种生物活性肽水凝胶，其特征在于，所述交联剂为1，4-丁二醇二缩水甘油醚。
5.如权利要求1所述的一种生物活性肽水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，生物活性肽的提取与制备，从木瓜中提取木瓜多肽、或从鱼骨中提取鱼骨胶原蛋白、或从牛骨中提取牛骨胶原蛋白、或从山羊肝脏、脾脏中提取生物活性多肽；
步骤二，加入透明质酸，向步骤一中处理后的生物活性肽中加入透明质酸，在20℃～30℃的温度条件下搅拌1h～3h后静置；
步骤三，加入交联剂，向步骤二中静置后的混合溶液中加入交联剂，放入45℃～55℃的恒温水浴锅中3h～6h，然后置于无热源蒸馏水中透析2天～5天，得到生物活性肽水凝胶。
6.如权利要求5所述的一种生物活性肽水凝胶的制备方法，其特征在于，在步骤一中，生物活性肽为从健康雄性山羊肝脏、脾脏提取的生物活性肽，将从健康雄性山羊肝脏、脾脏提取的生物活性肽溶于磷酸盐缓冲溶液中，然后加入氢氧化钠溶液，在0℃～25℃温度条件下搅拌1h～3h。
7.如权利要求6所述的一种生物活性肽水凝胶的制备方法，其特征在于，在步骤一中，从健康雄性山羊肝脏、脾脏提取的生物活性肽的具体步骤为：
①将剥取的组织以超纯水冲洗后快速粉碎；
②加入研磨装置中研磨搅拌，得粗研磨料液；
③将粗研磨料液－40℃反复冻融三次；
④冻融三次后解冻粗研磨料液，再次研磨搅拌，400目筛网过滤，得细研磨料液；
⑤将细研磨料液离心，取上清后超滤，超滤后所得液体，在无菌环境下过0.22um滤器，封口膜封口，4℃保存。
8.如权利要求7所述的一种生物活性肽水凝胶的制备方法，其特征在于，在步骤①中，剥取的组织与超纯水的料液比为1：2。
9.如权利要求5所述的一种生物活性肽水凝胶的制备方法，其特征在于，在步骤三中，交联剂为1，4-丁二醇二缩水甘油醚。
10.一种生物活性肽水凝胶在药物递送领域的应用，其特征在于，采用权利要求1-4之一的生物活性肽水凝胶作为抑制肿瘤细胞增殖的药物递送材料。
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