CN109081850A - 一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法 - Google Patents
一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109081850A CN109081850A CN201811260128.6A CN201811260128A CN109081850A CN 109081850 A CN109081850 A CN 109081850A CN 201811260128 A CN201811260128 A CN 201811260128A CN 109081850 A CN109081850 A CN 109081850A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phosphatide
- tuna
- lipid
- high bioactivity
- methanol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 101
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 46
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 73
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 29
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 29
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 27
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 21
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 17
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 16
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 15
- YPWFISCTZQNZAU-UHFFFAOYSA-N Thiane Chemical compound C1CCSCC1 YPWFISCTZQNZAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 10
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 8
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 claims description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 8
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 8
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 7
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 7
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 7
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 5
- 125000002346 iodo group Chemical group I* 0.000 claims description 5
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 4
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 abstract description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 238000000199 molecular distillation Methods 0.000 abstract description 2
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 7
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 4
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 2
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 1
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241001125831 Istiophoridae Species 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
- C07F9/103—Extraction or purification by physical or chemical treatment of natural phosphatides; Preparation of compositions containing phosphatides of unknown structure
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,该方法以金枪鱼眼部为原料,低温匀浆后,室温利用超声波辅助乙醇萃取法提取分离金枪鱼眼部的脂质,低温低压蒸馏获得脂质成分,脂质上硅胶柱层析,先后经二氯甲烷、丙酮、甲醇进行洗脱,收集甲醇洗脱液,经分子蒸馏后可获得金枪鱼眼部活性磷脂,该方法促进金枪鱼加工产业的良性发展,又可以丰富海洋生物活性脂质的市场空间,对人类的身体健康和海洋保健食品行业的发展具有积极的意义。
Description
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域,具体涉及一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法。
背景技术
金枪鱼主要分布在太平洋、大西洋和印度洋广阔的海域,是一种长距离洄游性远洋经济鱼类,我国每年对金枪鱼的捕捞量约为8万吨左右,按照加工产生50%-70%的实际下脚料计算,每年约为4-5.6万吨的金枪鱼下脚料。在这些下脚料中,金枪鱼眼部是脂质含量最高的部位,包括大量的活性磷脂成分。在磷脂中,结合有丰富的不饱和脂肪酸,如EPA、DHA等。这些磷脂对提高记忆力和改善代谢综合症等方面具有很好的生物活性。
目前,对金枪鱼脂质的利用仅仅是用于制备深海鱼油,对其磷脂的研究尚未见报道。
发明内容
本发明目的是:提供一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,以解决上述问题。
本发明的技术方案是:
一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,该方法包括如下步骤:
(1)以金枪鱼眼部为原料,去除鱼骨,加入95%碱性乙醇溶液,在温度为4℃的条件下匀浆15-20min,获得金枪鱼眼部混合液;
(2)在超声波作用下,搅拌所述金枪鱼眼部混合液,并从中萃取含有磷脂的脂质,在萃取期间,每隔30min间歇性以超声波辅助萃取,获得含有磷脂的脂质混合液;
(3)在萃取结束后,分别用三层纱布和三层滤纸过滤所述含有磷脂的脂质混合液,取滤液于40-45℃的温度下减压蒸馏以收集脂质部分,乙醇回收重复利用;
(4)取所述脂质部分,在30-45℃的温度下,低流速滴加0.9%NaCl溶液,边滴加边搅拌,在滴加结束后继续搅拌直至出现絮状沉淀,在温度为4℃的条件下12,000×g离心15-20min,取沉淀物即为粗磷脂;
(5)将所述粗磷脂溶解于二氯甲烷中,用硅胶柱层析法进行分离,其中硅胶需用3倍甲醇清洗30min,干燥后于110℃下活化2h、洗脱获得含有磷脂的洗脱液;
(6)收集所述含有磷脂的洗脱液,在温度为40-45℃的条件下减压蒸馏获得纯度较高的磷脂。
进一步的,步骤(1)中所述原料为从金枪鱼鱼眼中心至金枪鱼鱼眼直径的10-15倍部分,所述原料重量与95%碱性乙醇溶液体积之比为1:5-1:10。
进一步的,步骤(1)中所述95%碱性乙醇溶液为向95%乙醇中加入NaOH,使其pH值在10.0-11.0之间。
进一步的,步骤(2)中所述萃取时间为2-5h,萃取温度为40-60℃。
进一步的,步骤(2)中所述超声波处理时间为5-10min,超声声场强度为60-100W/cm2,超声频率为25kHz。
进一步的,步骤(4)中所述边滴加边搅拌的搅拌速度为30-80r/min,滴加速度为0.2-0.6mL/min。
进一步的,步骤(4)中所述0.9%NaCl溶液用量为所述脂质部分重量的2%-5%。
进一步的,步骤(5)中所述洗脱具体为:先用一位柱体积的环已烷洗脱以除去小分子极性杂质,再用环已烷和甲醇的混合液洗脱,所述环已烷和甲醇的体积比为2:3,所述洗脱速度为7ml/min,每10mL收集洗脱液,用薄层色谱法检测洗脱液中的磷脂。
进一步的,所述薄层色谱法的展开剂为A展开剂和B展开剂,先用所述A展开剂展开至2/3,再用所述B展开剂展开。
进一步的,所述A展开剂由氯仿、甲醇和氨水组成,所述氯仿、甲醇、氨水的体积比为65:30:5,所述B展开剂由氯仿、甲醇、冰醋酸和蒸馏水组成,所述氯仿、甲醇、冰醋酸和蒸馏水的体积比为170:25:25:6,再用碘蒸汽显色法检测磷脂。
本发明提供了一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,该方法开发金枪鱼眼部活性磷脂产品既可以充分利用金枪鱼加工下脚料中的鱼眼部分,获得高价值的金枪鱼活性磷脂,促进金枪鱼加工产业的良性发展,又可以丰富海洋生物活性脂质的市场空间,对人类的身体健康和海洋保健食品行业的发展具有积极的意义。
具体实施方式
本发明提供一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,包括以下步骤:
以金枪鱼眼部为原料,低温匀浆后,室温利用超声波辅助乙醇萃取法提取分离金枪鱼眼部的脂质,低温低压蒸馏获得脂质成分,脂质上硅胶柱层析,先后经二氯甲烷、丙酮、甲醇进行洗脱,收集甲醇洗脱液,经分子蒸馏后可获得金枪鱼眼部活性磷脂。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,包括:
步骤一:以金枪鱼眼部为原料,去除鱼骨,加入95%碱性乙醇溶液,在温度为4℃的条件下匀浆15-20min,获得金枪鱼眼部混合液;
该步骤可以具体如下执行:以金枪鱼眼部为原料,去除鱼骨,加入95%碱性乙醇溶液,所述原料重量与95%碱性乙醇溶液体积之比为1:5-1:10,在温度为4℃的条件下匀浆15-20min,获得金枪鱼眼部混合液。其中,95%碱性乙醇溶液为向95%乙醇中加入NaOH,使其pH值在10.0-11.0之间。
步骤二:在超声波作用下,搅拌所述金枪鱼眼部混合液,并从中萃取含有磷脂的脂质,在萃取期间,每隔30min间歇性以超声波辅助萃取,获得含有磷脂的脂质混合液;
该步骤可以具体如下执行:在超声波作用下,搅拌所述金枪鱼眼部混合液,并从中萃取含有磷脂的脂质,萃取时间为2-5h,萃取温度为40-60℃,在萃取期间,每隔30min间歇性以超声波辅助萃取,超声波处理时间为5-10min,超声声场强度为60-100W/cm2,超声频率为25kHz,获得含有磷脂的脂质混合液。
步骤三:在萃取结束后,分别用三层纱布和三层滤纸过滤所述含有磷脂的脂质混合液,取滤液于40-45℃的温度下减压蒸馏以收集脂质部分,乙醇回收重复利用;
步骤四:取所述脂质部分,在30-45℃的温度下,低流速滴加0.9%NaCl溶液,边滴加边搅拌,在滴加结束后继续搅拌直至出现絮状沉淀,在温度为4℃的条件下12,000×g离心15-20min,取沉淀物即为粗磷脂;
该步骤可以具体如下执行:取所述脂质部分,在30-45℃的温度下,低流速滴加0.9%NaCl溶液,所述0.9%NaCl溶液用量为所述脂质部分重量的2%-5%,边滴加边搅拌,搅拌速度为30-80r/min,滴加速度为0.2-0.6mL/min,在滴加结束后继续搅拌直至出现絮状沉淀,在温度为4℃的条件下12,000×g离心15-20min,取沉淀物即为粗磷脂。
步骤五:将所述粗磷脂溶解于二氯甲烷中,用硅胶柱层析法进行分离,其中硅胶需用3倍甲醇清洗30min,干燥后于110℃下活化2h、洗脱获得含有磷脂的洗脱液;
该步骤可以具体如下执行:将所述粗磷脂溶解于二氯甲烷中,用硅胶柱层析法进行分离,其中硅胶需用3倍甲醇清洗30min,干燥后于110℃下活化2h、洗脱,洗脱方法为:先用一位柱体积的环已烷洗脱以除去小分子极性杂质,再用环已烷和甲醇的混合液洗脱,所述环已烷和甲醇的体积比为2:3,所述洗脱速度为7ml/min,每10mL收集洗脱液,用薄层色谱法检测洗脱液中的磷脂,先用A展开剂(氯仿、甲醇、氨水的体积比为65:30:5)展开至2/3,再用所述B展开剂(氯仿、甲醇、冰醋酸和蒸馏水的体积比为170:25:25:6)展开,再用碘蒸汽显色法检测磷脂获得含有磷脂的洗脱液。
步骤六:收集所述含有磷脂的洗脱液,在温度为40-45℃的条件下减压蒸馏获得纯度较高的磷脂。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合实施例进一步说明本发明的技术方案。但是本发明不限于所列出的实施例,还应包括在本发明所要求的权利范围内其他任何公知的改变。
此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例,也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
实施例1
本实施案例按如下步骤展示一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法:
取金枪鱼眼部(金枪鱼鱼眼直径的10倍部分),去除鱼骨,加入95%碱性乙醇溶液(鱼眼部重量:溶液体积为1:5),4℃匀浆15min,其中95%碱性乙醇溶液为向95%乙醇中加入NaOH,使其pH 10.0。在超声波作用下,搅拌萃取金枪鱼眼部的含有磷脂的脂质,萃取时间为2h,萃取温度为40℃,萃取期间,每隔30min间歇性以超声波辅助萃取,超声波处理时间为5min,超声声场强度为60W/cm2,超声频率为25kHz。萃取结束后,分别用三层纱布和三层滤纸过滤,取滤液于40℃减压蒸馏以收集脂质部分,乙醇可回收重复利用。取脂质部分,30℃下,低流速滴加0.9%NaCl溶液,边滴加边搅拌,搅拌速度为30r/min,0.9%NaCl溶液用量为脂质部分重量的2%,滴加速度为0.2mL/min,滴加结束后继续搅拌直至出现絮状沉淀,4℃下12,000×g离心15min,取沉淀物即为粗磷脂。将磷脂溶解于少量的二氯甲烷中,用硅胶柱层析法进行分离,其中硅胶需用3倍甲醇清洗30min,干燥后于110℃下活化2h。先用一位柱体积的环已烷洗脱以除去小分子极性杂质,再用环已烷/甲醇=2:3(v/v)洗脱,洗脱速度为7ml/min,每10mL收集洗脱液,用薄层色谱法检测洗脱液中的磷脂。收集含有磷脂的洗脱液,40℃减压蒸馏获得纯度较高的磷脂。薄层色谱法展开剂为A展开剂展开至2/3,再用B展开剂展开,其中A展开剂为:氯仿/甲醇/氨水=65:30:5(v/v/v),B展开剂为:氯仿/甲醇/冰醋酸/蒸馏水=170:25:25:6(v/v/v/v),用碘蒸汽显色法检测磷脂。
实施例2
本实施案例按如下步骤展示一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法:
取金枪鱼眼部(金枪鱼鱼眼直径的12倍部分),去除鱼骨,加入95%碱性乙醇溶液(鱼眼部重量:溶液体积为1:8),4℃匀浆18min,其中95%碱性乙醇溶液为向95%乙醇中加入NaOH,使其pH 10.5。在超声波作用下,搅拌萃取金枪鱼眼部的含有磷脂的脂质,萃取时间为3h,萃取温度为50℃,萃取期间,每隔30min间歇性以超声波辅助萃取,超声波处理时间为8min,超声声场强度为80W/cm2,超声频率为25kHz。萃取结束后,分别用三层纱布和三层滤纸过滤,取滤液于42℃减压蒸馏以收集脂质部分,乙醇可回收重复利用。取脂质部分,40℃下,低流速滴加0.9%NaCl溶液,边滴加边搅拌,搅拌速度为50r/min,0.9%NaCl溶液用量为脂质部分重量的4%,滴加速度为0.4mL/min,滴加结束后继续搅拌直至出现絮状沉淀,4℃下12,000×g离心18min,取沉淀物即为粗磷脂。将磷脂溶解于少量的二氯甲烷中,用硅胶柱层析法进行分离,其中硅胶需用3倍甲醇清洗30min,干燥后于110℃下活化2h。先用一位柱体积的环已烷洗脱以除去小分子极性杂质,再用环已烷/甲醇=2:3(v/v)洗脱,洗脱速度为7ml/min,每10mL收集洗脱液,用薄层色谱法检测洗脱液中的磷脂。收集含有磷脂的洗脱液,42℃减压蒸馏获得纯度较高的磷脂。薄层色谱法展开剂为A展开剂展开至2/3,再用B展开剂展开,其中A展开剂为:氯仿/甲醇/氨水=65:30:5(v/v/v),B展开剂为:氯仿/甲醇/冰醋酸/蒸馏水=170:25:25:6(v/v/v/v),用碘蒸汽显色法检测磷脂。
实施例3
本实施案例按如下步骤展示一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法:
取金枪鱼眼部(金枪鱼鱼眼直径的15倍部分),去除鱼骨,加入95%碱性乙醇溶液(鱼眼部重量:溶液体积为1:10),4℃匀浆20min,其中95%碱性乙醇溶液为向95%乙醇中加入NaOH,使其pH11.0。在超声波作用下,搅拌萃取金枪鱼眼部的含有磷脂的脂质,萃取时间为5h,萃取温度为60℃,萃取期间,每隔30min间歇性以超声波辅助萃取,超声波处理时间为10min,超声声场强度为100W/cm2,超声频率为25kHz。萃取结束后,分别用三层纱布和三层滤纸过滤,取滤液于45℃减压蒸馏以收集脂质部分,乙醇可回收重复利用。取脂质部分,45℃下,低流速滴加0.9%NaCl溶液,边滴加边搅拌,搅拌速度为80r/min,0.9%NaCl溶液用量为脂质部分重量的5%,滴加速度为0.6mL/min,滴加结束后继续搅拌直至出现絮状沉淀,4℃下12,000×g离心20min,取沉淀物即为粗磷脂。将磷脂溶解于少量的二氯甲烷中,用硅胶柱层析法进行分离,其中硅胶需用3倍甲醇清洗30min,干燥后于110℃下活化2h。先用一位柱体积的环已烷洗脱以除去小分子极性杂质,再用环已烷/甲醇=2:3(v/v)洗脱,洗脱速度为7ml/min,每10mL收集洗脱液,用薄层色谱法检测洗脱液中的磷脂。收集含有磷脂的洗脱液,45℃减压蒸馏获得纯度较高的磷脂。薄层色谱法展开剂为A展开剂展开至2/3,再用B展开剂展开,其中A展开剂为:氯仿/甲醇/氨水=65:30:5(v/v/v),B展开剂为:氯仿/甲醇/冰醋酸/蒸馏水=170:25:25:6(v/v/v/v),用碘蒸汽显色法检测磷脂。
下述表1为三个实施例与现在技术的对比,具体如下:
表1
实施例4
改善代谢综合症
选择雄性C57BL/6J小鼠进行实验,按体重随机分为低脂组(LF,含5%玉米油),高脂模型组(HF,含5%玉米油和25%猪油)和磷脂组(PL,饲喂高脂饲料和2%食物添加量的磷脂),每组10只。饲喂8w,测定小鼠血糖、葡萄糖耐受量(AUC)、血清胰岛素、血清总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-c)、肿瘤坏死因子а(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)。结果如表2,显示,金枪鱼鱼眼磷脂能降低模型组小鼠的血糖和胰岛素水平,提高小鼠葡萄糖耐受性,抑制小鼠体内脂质增加,并降低小鼠炎症因子水平。提示,金枪鱼鱼眼磷脂能显著改善小鼠的代谢综合症。
表2金枪鱼鱼眼磷脂对小鼠代谢综合症的影响
注:#p<0.05,##p<0.01,与LF比较;*p<0.05,**p<0.01,与HF比较。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:弥补了我国金枪鱼加工产业在活性磷脂方面的空白,该方法采用超声波辅助乙醇萃取法提取分离金枪鱼眼部的脂质,最大限度地保护了脂质中易氧化的磷脂和不饱和脂肪酸,采用硅胶柱分离技术分离活性磷脂成分,获得的活性磷脂具有改善代谢综合症的高生物活性。
应说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
(1)以金枪鱼眼部为原料,去除鱼骨,加入95%碱性乙醇溶液,在温度为4℃的条件下匀浆15-20min,获得金枪鱼眼部混合液;
(2)在超声波作用下,搅拌所述金枪鱼眼部混合液,并从中萃取含有磷脂的脂质,在萃取期间,每隔30min间歇性以超声波辅助萃取,获得含有磷脂的脂质混合液;
(3)在萃取结束后,分别用三层纱布和三层滤纸过滤所述含有磷脂的脂质混合液,取滤液于40-45℃的温度下减压蒸馏以收集脂质部分,乙醇回收重复利用;
(4)取所述脂质部分,在30-45℃的温度下,低流速滴加0.9%NaCl溶液,边滴加边搅拌,在滴加结束后继续搅拌直至出现絮状沉淀,在温度为4℃的条件下12,000×g离心15-20min,取沉淀物即为粗磷脂;
(5)将所述粗磷脂溶解于二氯甲烷中,用硅胶柱层析法进行分离,其中硅胶需用3倍甲醇清洗30min,干燥后于110℃下活化2h、洗脱获得含有磷脂的洗脱液;
(6)收集所述含有磷脂的洗脱液,在温度为40-45℃的条件下减压蒸馏获得纯度较高的磷脂。
2.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于:步骤(1)中所述原料为从金枪鱼鱼眼中心至金枪鱼鱼眼直径的10-15倍部分,所述原料重量与95%碱性乙醇溶液体积之比为1:5-1:10。
3.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于:步骤(1)中所述95%碱性乙醇溶液为向95%乙醇中加入NaOH,使其pH值在10.0-11.0之间。
4.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于:步骤(2)中所述萃取时间为2-5h,萃取温度为40-60℃。
5.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于:步骤(2)中所述超声波处理时间为5-10min,超声声场强度为60-100W/cm2,超声频率为25kHz。
6.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于:步骤(4)中所述边滴加边搅拌的搅拌速度为30-80r/min,滴加速度为0.2-0.6mL/min。
7.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于:步骤(4)中所述0.9%NaCl溶液用量为所述脂质部分重量的2%-5%。
8.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于,步骤(5)中所述洗脱具体为:先用一位柱体积的环已烷洗脱以除去小分子极性杂质,再用环已烷和甲醇的混合液洗脱,所述环已烷和甲醇的体积比为2:3,所述洗脱速度为7ml/min,每10mL收集洗脱液,用薄层色谱法检测洗脱液中的磷脂。
9.根据权利要求8所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于:所述薄层色谱法的展开剂为A展开剂和B展开剂,先用所述A展开剂展开至2/3,再用所述B展开剂展开。
10.根据权利要求9所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法,其特征在于:所述A展开剂由氯仿、甲醇和氨水组成,所述氯仿、甲醇、氨水的体积比为65:30:5,所述B展开剂由氯仿、甲醇、冰醋酸和蒸馏水组成,所述氯仿、甲醇、冰醋酸和蒸馏水的体积比为170:25:25:6,再用碘蒸汽显色法检测磷脂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811260128.6A CN109081850A (zh) | 2018-10-26 | 2018-10-26 | 一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811260128.6A CN109081850A (zh) | 2018-10-26 | 2018-10-26 | 一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109081850A true CN109081850A (zh) | 2018-12-25 |
Family
ID=64844357
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811260128.6A Pending CN109081850A (zh) | 2018-10-26 | 2018-10-26 | 一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109081850A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3974825A4 (en) * | 2019-05-20 | 2022-12-07 | Beijing Sanyuan Foods Co., Ltd. | METHODS FOR EXTRACTING LIPIDS IN FOOD AND METHODS FOR DETECTING LIPIDS IN FOOD |
Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0677505B2 (ja) * | 1986-12-26 | 1994-10-05 | 焼津水産化学工業株式会社 | ドコサヘキサエン酸を多量に含有するリン脂質の製造法 |
CN1151833A (zh) * | 1995-12-13 | 1997-06-18 | 杨艳秋 | 粉末磷脂制备方法及其设备 |
CN1560057A (zh) * | 2004-03-10 | 2005-01-05 | 山东师范大学 | 高纯度磷脂酰肌醇的制备方法 |
US20080021000A1 (en) * | 2006-07-19 | 2008-01-24 | Su Chen | Mixtures of and methods of use for polyunsaturated fatty acid-containing phospholipids and alkyl ether phospholipids species |
US20120116104A1 (en) * | 2006-07-19 | 2012-05-10 | Su Chen | Mixtures of and methods of use for polyunsaturated fatty acid-containing phospholipids and alkyl ether phospholipids species |
CN102964380A (zh) * | 2012-01-10 | 2013-03-13 | 广东省微生物研究所 | 一种磷脂酰肌醇的化学制备方法 |
CN104447856A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-03-25 | 河南省农科院农副产品加工研究所 | 一种甘油磷脂酰肌醇的制备方法 |
CN104558022A (zh) * | 2014-12-31 | 2015-04-29 | 福建农林大学 | 一种利用超声波逆流提取海洋动物磷脂的方法 |
CN104961764A (zh) * | 2015-06-02 | 2015-10-07 | 燕京理工学院 | 用革胡子鲶下脚料提取卵磷脂的工艺 |
CN106588977A (zh) * | 2016-12-13 | 2017-04-26 | 山东省科学院生物研究所 | 一种从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法 |
CN107383187A (zh) * | 2017-07-10 | 2017-11-24 | 华中农业大学 | 一种从鸡蛋黄中联合提取IgY、卵黄高磷蛋白、卵磷脂、蛋黄油及脱脂蛋黄粉的方法 |
CN107557138A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-01-09 | 浙江海洋大学 | 一种超声波辅助酶解法制备南极磷虾油的方法 |
CN107760439A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-03-06 | 浙江海洋大学 | 一种超声波辅助乙醇萃取制备南极磷虾油的方法 |
-
2018
- 2018-10-26 CN CN201811260128.6A patent/CN109081850A/zh active Pending
Patent Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0677505B2 (ja) * | 1986-12-26 | 1994-10-05 | 焼津水産化学工業株式会社 | ドコサヘキサエン酸を多量に含有するリン脂質の製造法 |
CN1151833A (zh) * | 1995-12-13 | 1997-06-18 | 杨艳秋 | 粉末磷脂制备方法及其设备 |
CN1560057A (zh) * | 2004-03-10 | 2005-01-05 | 山东师范大学 | 高纯度磷脂酰肌醇的制备方法 |
US20080021000A1 (en) * | 2006-07-19 | 2008-01-24 | Su Chen | Mixtures of and methods of use for polyunsaturated fatty acid-containing phospholipids and alkyl ether phospholipids species |
US20120116104A1 (en) * | 2006-07-19 | 2012-05-10 | Su Chen | Mixtures of and methods of use for polyunsaturated fatty acid-containing phospholipids and alkyl ether phospholipids species |
CN102964380A (zh) * | 2012-01-10 | 2013-03-13 | 广东省微生物研究所 | 一种磷脂酰肌醇的化学制备方法 |
CN104447856A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-03-25 | 河南省农科院农副产品加工研究所 | 一种甘油磷脂酰肌醇的制备方法 |
CN104558022A (zh) * | 2014-12-31 | 2015-04-29 | 福建农林大学 | 一种利用超声波逆流提取海洋动物磷脂的方法 |
CN104961764A (zh) * | 2015-06-02 | 2015-10-07 | 燕京理工学院 | 用革胡子鲶下脚料提取卵磷脂的工艺 |
CN106588977A (zh) * | 2016-12-13 | 2017-04-26 | 山东省科学院生物研究所 | 一种从南极磷虾中提取高纯度海洋磷脂的方法 |
CN107383187A (zh) * | 2017-07-10 | 2017-11-24 | 华中农业大学 | 一种从鸡蛋黄中联合提取IgY、卵黄高磷蛋白、卵磷脂、蛋黄油及脱脂蛋黄粉的方法 |
CN107557138A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-01-09 | 浙江海洋大学 | 一种超声波辅助酶解法制备南极磷虾油的方法 |
CN107760439A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-03-06 | 浙江海洋大学 | 一种超声波辅助乙醇萃取制备南极磷虾油的方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
张丽: "鲣鱼脑的磷脂提取及活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3974825A4 (en) * | 2019-05-20 | 2022-12-07 | Beijing Sanyuan Foods Co., Ltd. | METHODS FOR EXTRACTING LIPIDS IN FOOD AND METHODS FOR DETECTING LIPIDS IN FOOD |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4633204B2 (ja) | アラキドン酸含有食用油脂およびそれを含有する食品 | |
CN104651422B (zh) | 一种从深海鱼中提取甘油三酯型dha和epa的方法 | |
CN104431939B (zh) | 一种蜂蜜香精及其制备方法 | |
CN105601666B (zh) | 一种从鲢鱼鱼头中提取磷脂的方法及其产品 | |
CN109706208A (zh) | 一种水酶解法提取牡丹籽油和牡丹蛋白肽的方法 | |
CN102586009A (zh) | 一种氮气保护生产调味亚麻籽油的方法 | |
WO2021143654A1 (zh) | 一种从磷虾中提取高品质磷虾油的方法 | |
CN109362967A (zh) | 一种缓解猪氧化应激、改善肉品质的植物提取物饲料添加剂及应用 | |
CN103859243A (zh) | 一种海藻类脱腥剂的制备方法 | |
CN1331422C (zh) | 蛹油及其生产工艺 | |
CN109081850A (zh) | 一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法 | |
CN114752637A (zh) | 一种甘油二酯食用油及其制备方法及即食米饭保鲜剂 | |
CN106728257A (zh) | 一种高效提取龙眼核多酚的方法 | |
CN107954969B (zh) | 高质量维生素e的提取工艺 | |
US4810424A (en) | Method for the recovery of 12-(S)-hydroxyeicosapentaenoic acid from the red alga murrayella periclados | |
CN112210437B (zh) | 一种藻油的提纯方法 | |
CN102304191B (zh) | 一种海肠废弃内脏中粗多糖的提取方法 | |
US5077202A (en) | Process for producing a glycolipid having a high eicosapentaenoic acid content | |
CN106720915A (zh) | 火龙果的加工方法 | |
CN107549859B (zh) | 一种大蒜精油复方增强免疫软胶囊及其制备方法 | |
CN113804788B (zh) | 基于代谢组学的陈年六堡茶防治肥胖症作用机理研究方法 | |
JP2005120321A (ja) | スフィンゴ糖脂質の製造方法 | |
CN105456277B (zh) | 灵芝三萜酸活性部位在制备降血脂保健品和药物中的应用 | |
CN104606164B (zh) | 一种红花精华素胶囊的制备方法 | |
AU2018100981A4 (en) | Sweet potato sitosterol glucoside saturated fatty acid ester, extract, preparation methods and application thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181225 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |