CN109061005A - 一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法 - Google Patents

一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109061005A
CN109061005A CN201811107455.8A CN201811107455A CN109061005A CN 109061005 A CN109061005 A CN 109061005A CN 201811107455 A CN201811107455 A CN 201811107455A CN 109061005 A CN109061005 A CN 109061005A
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
volatile fatty
fatty acid
tobacco leaf
measuring method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811107455.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109061005B (zh
Inventor
薛聪
王冰
余晶晶
张晓兵
蔡君兰
赵晓东
刘克建
秦亚琼
刘绍锋
刘惠民
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhengzhou Tobacco Research Institute of CNTC
Original Assignee
Zhengzhou Tobacco Research Institute of CNTC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhengzhou Tobacco Research Institute of CNTC filed Critical Zhengzhou Tobacco Research Institute of CNTC
Priority to CN201811107455.8A priority Critical patent/CN109061005B/zh
Publication of CN109061005A publication Critical patent/CN109061005A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109061005B publication Critical patent/CN109061005B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material

Abstract

本发明涉及一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法。该测定方法包括以下步骤：1)向烟叶样品中加入二氯甲烷进行萃取，分离得到萃取液；2)向萃取液中加入衍生化试剂，经衍生化反应后进行气相色谱－串联质谱测定。本发明提供的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，以二氯甲烷在常温下对烟叶样品进行萃取，可有效提取C1‑C10挥发性脂肪酸，经衍生化反应后进行检测分析；整个测定过程步骤少、流程紧凑，减少了挥发性成分损失，实现了甲酸、乙酸、丁酸、2‑甲基丁酸、2‑丁烯酸、异戊酸、戊酸、异戊烯酸、惕各酸、3‑甲基戊酸、4‑甲基戊酸等17种挥发性脂肪酸的测定，对烟叶中挥发性脂肪酸的测定结果更加全面、准确。

Description

一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法
技术领域
本发明属于烟草化学成分分析领域，具体涉及一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法。
背景技术
烟叶中含有大量的脂肪酸，约占其干重的10％。脂肪酸具有独特的香气和酸性，其不仅是卷烟香气质量和风格特征的重要组成部分，还可以改变烟气的酸碱平衡，进而对卷烟的劲头、刺激性和口感等方面产生明显的影响作用。按挥发性能的强弱，脂肪酸可分为挥发性、半挥发性和非挥发性脂肪酸，通常情况下，挥发性脂肪酸是指C10以下的低级脂肪酸，其约占烟叶干重的0.1％-0.2％。
挥发性脂肪酸对烟草的感官质量有很大的影响，例如：C1-C3脂肪酸具有辛辣、刺激的味道；C4-C6脂肪酸能产生果香、奶香、木香等；C7-C10脂肪酸具有醇和舒适的余味。研究烟草中挥发性有机酸的种类和含量对了解烟草的内在品质和改进卷烟配方具有重要的指导意义。
公开号为CN101131378A的中国专利申请公开了一种烟叶或烟丝中挥发性和半挥发性有机酸的测定方法，其是以CH2Cl2和CH3CN的混合溶剂为萃取剂，在高温高压(1500psi、200℃)下对烟叶样品进行萃取，萃取液经衍生化反应后，经GC-MS检测，实现了C1-C18的挥发性和半挥发性有机酸共26个目标化合物的同时测定。
该测定方法虽然实现了对甲酸、乙酸等低分子量脂肪酸和高级脂肪酸同时进行准确的定量分析，但萃取溶剂、高温高压的萃取条件的选择可能会造成挥发性成分有损失或发生转化，导致不能对烟叶中的挥发性脂肪酸进行全面、准确的分析测定。
发明内容
本发明的目的在于提供一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，从而解决现有测定方法会引起挥发性成分损失，不能对烟叶样品中的挥发性脂肪酸进行全面、准确测定的问题。
为实现上述目的，本发明的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法所采用的技术方案是：
一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，包括以下步骤：
1)向烟叶样品中加入二氯甲烷进行萃取，分离得到萃取液；
2)向萃取液中加入衍生化试剂，经衍生化反应后进行气相色谱－串联质谱测定。
本发明提供的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，以二氯甲烷在常温下对烟叶样品进行萃取，可有效提取C1-C10挥发性脂肪酸，经衍生化反应后进行检测分析；整个测定过程步骤少、流程紧凑，减少了挥发性成分损失，实现了甲酸、乙酸、丁酸、2-甲基丁酸、2-丁烯酸、异戊酸、戊酸、异戊烯酸、惕各酸、3-甲基戊酸、4-甲基戊酸、己酸、庚酸、辛酸、2-辛烯酸、壬酸、癸酸等17种挥发性脂肪酸的测定，首次实现了烟叶中2-丁烯酸、异戊烯酸、惕各酸、2-辛烯酸等挥发性脂肪酸的测定，对烟叶中挥发性脂肪酸的测定结果更加全面、准确。
步骤1)中，为了获得更好的萃取效率，优化后续分析测定的效果，每0.1-1g烟叶样品对应二氯甲烷的加入量为2-5mL。萃取时保证二氯甲烷和烟叶样品充分混合即可，为简化萃取操作，优选的，所述萃取在涡旋混合的条件下进行，所述涡旋混合时的转速为2000-3000rpm，时间为10-50min。
步骤2)中，为避免基质干扰，提高后续测定过程的有效性，优选的，所述衍生化试剂为N,O-双(三甲硅基)三氟乙酰胺(BSTFA)。为保证目标化合物充分进行衍生化反应，优选的，每1-1.5mL萃取液对应衍生化试剂的用量为50-250μL。为提高衍生化反应效率，最大程度降低挥发性成分损失，优选的，所述衍生化反应是在30-70℃反应10-40min。
步骤2)中，为避免挥发性成分损失，可向色谱瓶中加入萃取液，然后加入衍生化试剂，衍生化反应后直接进GC-MS/MS分析。为进一步提高检测结果的准确性，优选的，所述气相色谱－串联质谱测定的色谱分析条件为：采用DB-5MS毛细管色谱柱分离，进样口温度：280℃，进样量1μL，分流比10：1，载气：氦气，恒流流速1.0mL/min，升温程序：40℃保持3min，以4℃/min的升温速率升至280℃保持40min；
质谱分析条件为：EI源，传输线温度：280℃；离子源温度：300℃，扫描方式：多反应监测模式，CID气体压力为2.0mTorr；对每个离子的监测时间为75ms。
步骤2)中，采用内标法定量，所使用的内标物可选择反-2-己烯酸。为最大程度减少定量误差，可在步骤1)萃取前，向体系中加入内标溶液，每0.1-1g烟叶样品，内标溶液的用量可以为20-200μL，内标溶液的浓度可以为10-30μg/mL。
本发明的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，萃取溶剂用量少，检测过程简单便捷，重现性较好，分析测定灵敏度高，可以实现烟叶样品中挥发性脂肪酸的全面、准确测定。
附图说明
图1为本发明实施例的标准溶液中甲酸(1)的色谱图；
图2为本发明实施例的标准溶液中乙酸(2)的色谱图；
图3为本发明实施例的标准溶液中丁酸(3)的色谱图；
图4为本发明实施例的标准溶液中2-甲基丁酸(4)的色谱图；
图5为本发明实施例的标准溶液中2-丁烯酸(5)和异戊酸(6)的色谱图；
图6为本发明实施例的标准溶液中戊酸(7)的色谱图；
图7为本发明实施例的标准溶液中异戊烯酸(8)和惕各酸(9)的色谱图；
图8为本发明实施例的标准溶液中3-甲基戊酸(10)和4-甲基戊酸(11)的色谱图；
图9为本发明实施例的标准溶液中己酸(12)的色谱图；
图10为本发明实施例的标准溶液中庚酸(13)的色谱图；
图11为本发明实施例的标准溶液中辛酸(14)的色谱图；
图12为本发明实施例的标准溶液中2-辛烯酸(15)的色谱图；
图13为本发明实施例的标准溶液中壬酸(16)的色谱图；
图14为本发明实施例的标准溶液中癸酸(17)的色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的实施方式作进一步说明。
本发明的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法实施例1，选取烤烟C3F样品，采用以下步骤：
1)将烟叶粉碎并过40目筛，称取0.5g烟叶粉末并加入3mL CH2Cl2作为萃取溶剂，再加入50μL浓度为20μg/mL的反-2-己烯酸内标溶液，于2500rpm下涡旋30min，然后用0.45μm的滤膜过滤，得到萃取液。
2)取1.0mL萃取液于色谱瓶中，加入衍生化试剂(N,O-双(三甲硅基)三氟乙酰胺(BSTFA))200μL并震荡均匀，在60℃水浴衍生化反应30分钟，冷却至室温后直接进GC-MS/MS进行检测。
GC-MS/MS分析条件为：采用DB-5MS(60m×0.25mm×0.25μm)毛细管色谱柱分离，进样口温度：280℃，进样量1μL，分流比10：1，载气：氦气，恒流流速1.0mL/min，升温程序：40℃保持3min，以4℃/min的升温速率升至280℃保持40min，质谱条件：EI源，传输线温度：280℃；离子源温度：300℃，扫描方式：多反应监测(MRM)模式，CID气体压力为2.0mTorr；对每个离子的监测时间为75ms。
17种挥发性脂肪酸及内标化合物的保留时间、母离子、子离子以及优化后的碰撞能量(CE)值如表1所示。
表1 17种挥发性脂肪酸及内标化合物的质谱分析参数
该步骤中，配制含有相同内标含量的系列混合标准溶液，然后依据GC-MS/MS分析建立工作曲线，利用内标法测定样品溶液中各目标化合物的含量。GC-MS/MS分析中，各目标化合物的色谱图如图1-图14所示。通过图1-图14的色谱图可以看出，各目标化合物之间的出峰界限明显，出峰干扰少。
将同一烟叶样品一天内进行5次平行测定及分5天测定，以测定结果的相对标准偏差(RSD)来表示该方法的日内精密度和日间精密度，同时进行回收率实验，取标准工作溶液，进行10次平行测定，计算标准偏差，以3倍标准偏差为检测限，10倍标准偏差为定量限，结果如表2所示。
表2方法的精密度、回收率、检测限和定量限
由表2的结果可知，实施例1的测定方法的精密度和回收率好，适用于大批量样品的分析，同时，该方法的灵敏度高，能够对微量的挥发性脂肪酸进行有效测定，实现烟叶中挥发性有机酸的全面、准确测定。
本发明的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法实施例2，选取白肋烟C3F样品，测定过程与实施例1基本相同，区别仅在于：
步骤1)中，烟叶粉末的质量为0.2g，CH2Cl2的用量为2mL，内标溶液的加入量为20μL，萃取时，在2000rpm下涡旋40min。
步骤2)中，取1.2mL萃取液于色谱瓶中，衍生化试剂的用量为80μL，在30℃水浴反应40min，冷却至室温后进行GC-MS/MS检测。
本发明的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法实施例3，选取香料烟C3F样品，测定过程与实施例1基本相同，区别仅在于：
步骤1)中，烟叶粉末的质量为0.8g，CH2Cl2的用量为4mL，内标溶液的加入量为100μL，萃取时，在3000rpm下涡旋15min。
步骤2)中，取1.5mL萃取液于色谱瓶中，衍生化试剂的用量为150μL，在50℃水浴反应35min，冷却至室温后进行GC-MS/MS检测。
本发明的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法实施例4，选取晒红烟C3F样品，测定过程与实施例1基本相同，区别仅在于：
步骤1)中，烟叶粉末的质量为1.0g，CH2Cl2的用量为5mL，内标溶液的加入量为150μL，萃取时，在2700rpm下涡旋20min。
步骤2)中，取1.5mL萃取液于色谱瓶中，衍生化试剂的用量为240μL，在70℃水浴反应10min，冷却至室温后进行GC-MS/MS检测。
实施例1-4中17种挥发性脂肪酸的测定结果如表3所示。
表3实施例1-4中17种挥发性脂肪酸的测定结果(μg/g)
由表3的检测结果可知，实施例的方法实现了烟叶样品中多种挥发性脂肪酸的测定，证明了实施例的方法具有良好的提取效果，非常适用于C1-C10挥发性脂肪酸的同时定量分析，可以为后续研究提供良好的数据基础。

Claims (7)

1.一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)向烟叶样品中加入二氯甲烷进行萃取，分离得到萃取液；
2)向萃取液中加入衍生化试剂，经衍生化反应后进行气相色谱－串联质谱测定。
2.如权利要求1所述的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，其特征在于，步骤1)中，每0.1-1g烟叶样品对应二氯甲烷的加入量为2-5mL。
3.如权利要求1或2所述的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，其特征在于，所述萃取在涡旋混合的条件下进行，所述涡旋混合时的转速为2000-3000rpm，时间为10-50min。
4.如权利要求1所述的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，其特征在于，所述衍生化试剂为N,O-双(三甲硅基)三氟乙酰胺。
5.如权利要求1所述的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，其特征在于，每1-1.5mL萃取液对应衍生化试剂的用量为50-250μL。
6.如权利要求1或4或5所述的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，其特征在于，所述衍生化反应是在30-70℃反应10-40min。
7.如权利要求1所述的烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法，其特征在于，所述气相色谱－串联质谱测定的色谱分析条件为：采用DB-5MS毛细管色谱柱分离，进样口温度：280℃，进样量1μL，分流比10：1，载气：氦气，恒流流速1.0mL/min，升温程序：40℃保持3min，以4℃/min的升温速率升至280℃保持40min；
质谱分析条件为：EI源，传输线温度：280℃；离子源温度：300℃，扫描方式：多反应监测模式，CID气体压力为2.0mTorr；对每个离子的监测时间为75ms。
CN201811107455.8A 2018-09-21 2018-09-21 一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法 Active CN109061005B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811107455.8A CN109061005B (zh) 2018-09-21 2018-09-21 一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811107455.8A CN109061005B (zh) 2018-09-21 2018-09-21 一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109061005A true CN109061005A (zh) 2018-12-21
CN109061005B CN109061005B (zh) 2021-06-18

Family

ID=64762370

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811107455.8A Active CN109061005B (zh) 2018-09-21 2018-09-21 一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109061005B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111307961A (zh) * 2019-11-28 2020-06-19 广东中烟工业有限责任公司 同时测定卷烟主流烟气中10种酸香成分的方法
CN115219602A (zh) * 2021-04-14 2022-10-21 湖南中烟工业有限责任公司 一种烟草及烟草制品中挥发性有机酸的测定方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001004622A1 (en) * 1999-07-13 2001-01-18 The Dow Chemical Company Method for chemical analysis of biological material
US20040126891A1 (en) * 2002-12-26 2004-07-01 Brunswick Laboratories Method for assaying reactive oxidants in smoke
CN101131378A (zh) * 2007-09-29 2008-02-27 中国烟草总公司郑州烟草研究院 烟叶或烟丝中挥发性和半挥发性有机酸的测定方法
US20150377841A1 (en) * 2014-06-27 2015-12-31 Eastman Chemical Company Fibers with chemical markers and physical features used for coding
CN106353429A (zh) * 2016-09-30 2017-01-25 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种基于有机酸的烟草代谢组学中新鲜烟叶样品质量的判别方法
CN106556665A (zh) * 2017-01-23 2017-04-05 中国烟草总公司郑州烟草研究院 同时测定卷烟主流烟气中14种酸味成分的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001004622A1 (en) * 1999-07-13 2001-01-18 The Dow Chemical Company Method for chemical analysis of biological material
US20040126891A1 (en) * 2002-12-26 2004-07-01 Brunswick Laboratories Method for assaying reactive oxidants in smoke
CN101131378A (zh) * 2007-09-29 2008-02-27 中国烟草总公司郑州烟草研究院 烟叶或烟丝中挥发性和半挥发性有机酸的测定方法
US20150377841A1 (en) * 2014-06-27 2015-12-31 Eastman Chemical Company Fibers with chemical markers and physical features used for coding
CN106353429A (zh) * 2016-09-30 2017-01-25 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种基于有机酸的烟草代谢组学中新鲜烟叶样品质量的判别方法
CN106556665A (zh) * 2017-01-23 2017-04-05 中国烟草总公司郑州烟草研究院 同时测定卷烟主流烟气中14种酸味成分的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LAY-KEOW NG 等: "Characterization of Cigar Tobaccos by Gas Chromatographic/Mass Spectrometric Analysis of Nonvolatile Organic Acids: Application to the Authentication of Cuban Cigars", 《 J. AGRIC. FOOD CHEM.》 *
张迎春 等: "卷烟主流烟气气相物和总粒相物中有机酸的分析研究", 《分析科学学报》 *
葛少林 等: "烟草中挥发性与半挥发性有机酸的GC-MS法快速检测", 《香料香精化妆品》 *
陈飞钦 等: "超声波提取-气相色谱/质谱联用分析烟叶中挥发性和半挥发性有机酸", 《分析科学学报》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111307961A (zh) * 2019-11-28 2020-06-19 广东中烟工业有限责任公司 同时测定卷烟主流烟气中10种酸香成分的方法
CN111307961B (zh) * 2019-11-28 2023-03-14 广东中烟工业有限责任公司 同时测定卷烟主流烟气中10种酸香成分的方法
CN115219602A (zh) * 2021-04-14 2022-10-21 湖南中烟工业有限责任公司 一种烟草及烟草制品中挥发性有机酸的测定方法
CN115219602B (zh) * 2021-04-14 2023-09-26 湖南中烟工业有限责任公司 一种烟草及烟草制品中挥发性有机酸的测定方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109061005B (zh) 2021-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101131378B (zh) 烟叶或烟丝中挥发性和半挥发性有机酸的测定方法
CN107764917B (zh) 一种卷烟爆珠中关键挥发性成分的测定方法
CN104569197B (zh) 同时测定烟草中的糖、1,2-丙二醇和甘油的硅烷化gc/ms检测方法
CN106353419B (zh) 一种卷烟主流烟气中香味成分的测定方法
CN109061017B (zh) 一种卷烟加香均匀性的评价方法
CN103293245B (zh) 同时分析卷烟主流烟气中四种烟草特有亚硝胺(TSNAs)的GC-MS/MS方法
CN109212066B (zh) 一种烟草及烟草制品中非脂肪类有机酸的测定方法
CN109061005A (zh) 一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法
CN107505411A (zh) 一种合相色谱‑串联质谱法测定电子烟烟液中降烟碱对映异构体含量的方法
CN107290458A (zh) 一种同时测定烟草及烟草制品中12种生物碱的方法
CN104792895B (zh) 一种烟用香精香料中薄荷醇的测定方法
CN107064362B (zh) 口含烟中对羟基苯甲酸酯类物质的测定
CN109470789B (zh) 一种烟草及烟草制品中降烟碱、假木贼碱与新烟草碱的手性分析方法
CN106442753B (zh) 一种测定卷烟主流烟气中TSNAs含量的方法
CN102944636A (zh) 蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的高效液相色谱-质谱检测方法
CN107966518B (zh) 一种无烟气烟草制品的处理方法及无烟气烟草制品中小分子醛的测定方法
CN103969385A (zh) 荜茇及胡椒中的五种生物碱的鉴定及含量同步测定方法
CN112505227A (zh) 一种同时测定电子烟烟液中11种成分的分析方法
CN112285263A (zh) 一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法
CN104165958A (zh) 一种测定三醋酸甘油酯中苯及苯系物含量的方法
CN110568101B (zh) 基于hs-spme-gc-ms/ms对烟丝中挥发性、半挥发性成分测定方法
CN104897836B (zh) 检测样品中奎尼酸的方法、试剂盒及其用途
CN104101677B (zh) 液相色谱串联质谱法测定香精香料中香叶醇的方法
CN112557521A (zh) 硬脂醇甘草亭酸酯含量的检测方法
CN110487929A (zh) 一种利用顶空瓶内反应测定人体血清中氧化三甲胺含量的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant