CN109055314B - 一种促进cik细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物 - Google Patents

一种促进cik细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物 Download PDF

Info

Publication number
CN109055314B
CN109055314B CN201811008611.5A CN201811008611A CN109055314B CN 109055314 B CN109055314 B CN 109055314B CN 201811008611 A CN201811008611 A CN 201811008611A CN 109055314 B CN109055314 B CN 109055314B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cik
cells
cik cell
killing activity
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811008611.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109055314A (zh
Inventor
卢珊珊
何丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHANDONG XINRUI BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.
Original Assignee
Shandong Xinrui Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Xinrui Biotechnology Co ltd filed Critical Shandong Xinrui Biotechnology Co ltd
Priority to CN201811008611.5A priority Critical patent/CN109055314B/zh
Publication of CN109055314A publication Critical patent/CN109055314A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109055314B publication Critical patent/CN109055314B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明涉及一种促进CIK细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物。CIK细胞介导的免疫治疗在提高患者治愈率、减少肿瘤复发、改善患者生活质量、延长生存时间方面可起重要的作用，具有良好的应用前景。提高CIK细胞培养效率、增强CIK细胞杀瘤活性成为当前研究所急需解决的问题。本发明可以促进CIK细胞增殖、提高其对肿瘤细胞的杀伤活性。

Description

一种促进CIK细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物
技术领域
本发明涉及细胞免疫，尤其涉及CIK细胞。
背景技术
CIK细胞介导的免疫治疗在提高患者治愈率、减少肿瘤复发、改善患者生活质量、延长生存时间方面可起重要的作用，具有良好的应用前景。
提高CIK细胞培养效率、增强CIK细胞杀瘤活性成为当前研究所急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种促进CIK细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物。
为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
如下结构的生物碱在制备增强CIK细胞增殖能力的试剂或培养基方面的应用；
Figure BDA0001781174720000011
R＝H时，该生物碱为白羽扇豆碱；R＝OH时，该生物碱为13α-羟基白羽扇豆碱。
上述生物碱在增强CIK细胞杀瘤活性方面的应用。
鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱、罗默碱对CIK细胞体外培养的影响总结如下：鹰爪豆碱：对CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性均无明显增强；白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；13α-羟基白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；17-氧代白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；2-硫代鹰爪豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；罗默碱：对CIK细胞的增殖能力无明显增强，但可以显著增强CIK细胞的杀瘤活性。结合鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱的化学结构可以推测这类生物碱的2位氧杂化或硫杂化对活性至关重要。
附图说明
图1是化合物结构式。
图2是培养12天CIK细胞体外增殖倍数。
图3是培养12天CD3+CD56+表型细胞占比。
图4是培养12天CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤活性测定结果。
具体实施方式
一、实验材料
鹰爪豆碱(spartein)、白羽扇豆碱(lupanine)、13α-羟基白羽扇豆碱(13α-hydroxy-lupanine)、17-氧代白羽扇豆碱(17-oxo-lupanine)、2-硫代鹰爪豆碱(2-thionosparteine)、罗默碱(roemerine)自制或购买，纯度不低于98％，化学结构式如图1所示。
在无菌条件下，收集健康成年人外周血(肝素抗凝)50ml。淋巴细胞分离液购自北京索莱宝科技有限公司。RPMI-1640培养基和胎牛血清购自Gibco。
二、实验方法
1、核细胞的分离、分组和CIK细胞诱导培养
取肝素抗凝的健康成年人外周血50ml，加入淋巴细胞分离液15ml，2000r/min离心30min，分离单个核细胞。用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基调整细胞浓度为1×106/ml，接种于24孔板，每孔930μl。然后按下述进行实验分组：
细胞因子组：γ干扰素、白细胞介素1α、白细胞介素2、CD3单抗；
细胞因子+生物碱组：用生物碱、γ干扰素、白细胞介素1α、白细胞介素2、CD3单抗；
对照组：只用培养液；
实验组与对照组均设4个复孔。
按分组情况，第1天，细胞因子组、细胞因子+生物碱组加入γ干扰素1000U/ml，细胞因子+生物碱组加入生物碱5μM；培养24h后，细胞因子组、细胞因子+生物碱组加入白细胞介素1α100U/ml、白细胞介素2250U/ml、CD3单抗40ng/ml，细胞因子+生物碱组加入生物碱5μM，继续培养；第4天更换培养基，调整细胞浓度为1×106/ml，细胞因子组、细胞因子+生物碱组补加白细胞介素2250U/ml、CD3单抗40ng/ml，细胞因子+生物碱组补加生物碱5μM；第8天，细胞因子组、细胞因子+生物碱组补加白细胞介素2250U/ml、CD3单抗40ng/ml，细胞因子+生物碱组补加生物碱5μM，继续培养至第12天。
2、细胞表型分析及细胞增殖测定
各组于培养第12天，用台盼蓝拒染法计数细胞，用流式细胞仪检测CIK细胞的比例及细胞表型，并计数CIK细胞总数，每组每次各查4个复孔，计算平均值。
3、肿瘤杀伤力测定
用MTT显色法测定CIK细胞杀瘤活性，各组以培养12天的CIK细胞为效应细胞，以对数生长期K562细胞为靶细胞，效靶比为15:1。杀瘤活性(％)＝(1－效靶细胞组OD值－单独效应细胞组OD值)/单独靶细胞组OD值×100％
4、统计学方法
用SPSS 17.0统计软件进行数据统计，计量资料以均值±标准差表示，进行多组数据计量资料单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计意义。
三、实验结果
1、CIK细胞体外增殖及细胞表型分析
各组培养至第12天时CIK细胞相对于第0天的增殖倍数如表1和图2所示；各组0天和培养至第12天时CD3+CD56+表型细胞的百分比如表1和图3所示。
表1 CIK细胞体外增殖倍数和CD3+CD56+表型细胞占比
Figure BDA0001781174720000031
2、肿瘤杀伤力测定结果
各组培养至第12天的CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤活性测定结果如表2和图4所示。
表2 CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤活性测定结果
杀伤活性/％
对照组 25.97±5.12
细胞因子组 48.25±5.71
细胞因子+鹰爪豆碱组 49.18±5.24
细胞因子+白羽扇豆碱组 72.38±5.68
细胞因子+13α-羟基白羽扇豆碱组 70.67±5.53
细胞因子+17-氧代白羽扇豆碱组 68.85±5.19
细胞因子+2-硫代鹰爪豆碱组 72.19±5.87
细胞因子+罗默碱组 81.95±5.62
鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱、罗默碱对CIK细胞体外培养的影响总结如下：
鹰爪豆碱：对CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性均无明显增强；
白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；
13α-羟基白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；
17-氧代白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；
2-硫代鹰爪豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；
罗默碱：对CIK细胞的增殖能力无明显增强，但可以显著增强CIK细胞的杀瘤活性。
结合鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱的化学结构可以推测这类生物碱的2位氧杂化或硫杂化对活性至关重要。

Claims (1)

1.如下化学结构的生物碱用于制备增强CIK细胞增殖能力或用于制备增强CIK细胞杀瘤活性的培养基的用途：
Figure FDA0003067981640000011
其中：
R＝H，所述生物碱为白羽扇豆碱；
或R＝OH，所述生物碱为13α-羟基白羽扇豆碱。
CN201811008611.5A 2018-08-29 2018-08-29 一种促进cik细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物 Active CN109055314B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811008611.5A CN109055314B (zh) 2018-08-29 2018-08-29 一种促进cik细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811008611.5A CN109055314B (zh) 2018-08-29 2018-08-29 一种促进cik细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109055314A CN109055314A (zh) 2018-12-21
CN109055314B true CN109055314B (zh) 2021-11-02

Family

ID=64758823

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811008611.5A Active CN109055314B (zh) 2018-08-29 2018-08-29 一种促进cik细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109055314B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107523541A (zh) * 2017-10-19 2017-12-29 南京盖斯夫医药科技有限公司 一种以白术内酯ⅱ为促增殖剂的cik细胞培养基

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107523541A (zh) * 2017-10-19 2017-12-29 南京盖斯夫医药科技有限公司 一种以白术内酯ⅱ为促增殖剂的cik细胞培养基

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Influence of the quinolizidine alkaloid content of Lupinus Albus of the feeding choice of Helix Aspersa(GAstropoda:Pulmonata);L.CHEVALIER等;《J.Moll.Stud》;20001231;第66卷;第61-68页 *
Isolation of alkaloids and anti-tumor activity of the crude methanolic extract of algerian cytisus purgans;Ghania B等;《Oriental journal of chemistry》;20151231;第31卷(第4期);第1943-1948页 *
植物生物碱在医药领域的研究与应用;沈以红等;《蚕学通讯》;20081231;第28卷(第1期);第25-31页 *
苦参碱对NK细胞杀伤HL60细胞的影响及其机制研究;雷秦等;《陕西医学杂志》;20151031;第44卷(第10期);第1275-1277页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109055314A (zh) 2018-12-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3441460B1 (en) Ex vivo expansion method for cord blood nk cell, and kit and application thereof
KR101077912B1 (ko) 제대혈로부터 효율적인 자연살해세포의 증식 및 분화 방법
KR101948534B1 (ko) 세포밀도 조절을 이용한 자연살해세포의 대량증식방법
CN107083361B (zh) 一种细胞培养方法
CN104815323A (zh) 一种树突状细胞肿瘤疫苗及其制备方法
KR20150020263A (ko) 수지상세포 성숙화 조성물 및 이를 이용하여 항원 특이적 수지상세포를 제조하는 방법
CN110643574A (zh) 用于肿瘤浸润性淋巴细胞快速培养的饲养细胞的制备方法
CN115505567A (zh) 临床级混合型免疫细胞的制备方法
CN109055314B (zh) 一种促进cik细胞增殖并增强其杀瘤活性的化合物
CN109055313B (zh) 一种生物碱在增强cik细胞增殖能力和杀瘤活性方面的应用
CN113564117B (zh) 一种冻存脐带血来源调节性t细胞体外扩增优化方法
CN109097330B (zh) 一种化合物用于促进cik细胞增殖并增强其杀瘤活性的用途
CN109097329B (zh) 增强cik细胞杀瘤活性的化合物
CN107523541B (zh) 一种以白术内酯ⅱ为促增殖剂的cik细胞培养基
CN111235107B (zh) 一种用于免疫细胞培养的添加剂、培养基及免疫细胞的培养方法
CN111117958A (zh) 一种人外周血调节性t细胞的体外扩增试剂盒及扩增方法
KR20120100207A (ko) 제대혈 ｃｄ14 양성 단핵세포로부터 자연살해세포 분화 및 증식 방법
CN104109653A (zh) 利用无动物血清培养体系大规模扩增人外周血dnt细胞的方法
CN110195041B (zh) 利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法
CN110862962A (zh) 一种没食子酸在体外培养扩增nk细胞的方法
CN108486055B (zh) 培养基及其在中央记忆型t淋巴细胞培养中的应用
CN105695405A (zh) Cik细胞扩增方法
CN115404215A (zh) 一种体外高效活化、扩增nk免疫细胞方法
CN108004213B (zh) 一种cik细胞快速扩增的方法及试剂盒
CN105713876A (zh) Cik细胞培养基及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20200924

Address after: No.42, Xingmin North Road, Jiangning District, Nanjing City, Jiangsu Province

Applicant after: Nanjing saierjian Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 810003, 7, No. three, biological park, Chengbei District, Qinghai City, Xining Province

Applicant before: QINGHAI QICAIHUA BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20211013

Address after: 261500 high tech Industrial Development Zone, Gaomi City, Weifang City, Shandong Province

Applicant after: SHANDONG XINRUI BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

Address before: 211199 Jiangning high tech park, No.42, Xingmin North Road, Jiangning District, Nanjing City, Jiangsu Province

Applicant before: Nanjing saierjian Biotechnology Co.,Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: A compound that promotes CIK cell proliferation and enhances its tumoricidal activity

Effective date of registration: 20220919

Granted publication date: 20211102

Pledgee: Industrial and Commercial Bank of China Co.,Ltd. Gaomi Sub branch

Pledgor: SHANDONG XINRUI BIOTECHNOLOGY CO.,LTD.

Registration number: Y2022370010140

PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right