CN109045239B - 一种中药提取物及其制备方法和在制备抗癌药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种现有中药组方的提取物，按照重量份数计算，是由葛根380～420份、甘草130～170份、砂仁130～170份、枳椇子300～340份、乌梅280～320份、大枣280～320份所制成的提取物，优选为正丁醇提取物或乙酸乙酯提取物或正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物的混合物，经发明人验证该提取物能够抑制肿瘤细胞的增殖，具有制备抗癌药物、尤其是抗白血病药物的前景。本发明还提供了该提取物的制备方法，该制备方法简单易行，具有良好的开发前景。

Description

一种中药提取物及其制备方法和在制备抗癌药物中的用途
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药提取物及其制备方法和在制备抗癌药物中的用途。
背景技术
发明人在前期工作中开发了一种主要成分包括葛根、枳椇子、乌梅、甘草、大枣和砂仁的保护化学性肝损伤的中药保健品制剂，专利申请号为201510551064.5，对化学性肝损伤有辅助保护功能，被用于止渴除烦，消湿热，解酒毒，润肾，补肝，补命门，和脾胃，开郁结。其中葛根和枳椇子内含丰富葛根素、大豆黄酮苷、花生素、皂苷、糖苷、生物碱和脂肪酸等成分对癌细胞增殖有较好的抑制活性，因此，可考虑该中药保健品制剂的组方是否具有开发成抗癌药物的前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种中药提取物及其制备方法和在制备抗癌药物中的用途，是在原有组方上开发出的新的用途，并且制备方法简单易行。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种中药提取物，按照重量份数计算，是由葛根380～420份、甘草130～170份、砂仁130～170 份、枳椇子300～340份、乌梅280～320份、大枣280～320份所制成的提取物。
优选的，前述的中药提取物中，按照重量份数计算，是由葛根400份、甘草150份、砂仁150份、枳椇子320份、乌梅300份、大枣300份所制成的提取物。
优选的，前述的中药提取物中，所述的提取物为正丁醇提取物或乙酸乙酯提取物或正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物的组合物。所述的组合物为两种提取物按照相应重量比混合而成。
优选的，前述的中药提取物中，所述的组合物中正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物的重量比为1:1。
前述的中药提取物在制备抗癌药物中的用途。
优选的，前述的中药提取物在制备抗癌药物中的用途中，所述的抗癌药物为抗白血病药物。
优选的，前述的中药提取物在制备抗癌药物中的用途中，所述的抗癌药物的剂型为胶囊剂、口服液、注射剂、片剂或滴丸剂。
前述的中药提取物的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)煎煮：按照重量份数称取原料药葛根、甘草、砂仁、枳椇子、乌梅、大枣，加6～10倍水浸泡1～2小时，煎煮1～1.5小时，过滤并保留滤液，药渣加5～7倍水继续煎煮1～1.5小时，过滤，合并滤液；
(2)萃取：取三份滤液，将第一份滤液按照萃取溶剂极性从大到小的顺序萃取，依次用正丁醇、乙酸乙酯、石油醚萃取，得到正丁醇萃取液1-1，乙酸乙酯萃取液1-2、石油醚萃取液1-3，萃取剩余的部分为水提取液1-4；再取第二份滤液按照萃取溶剂极性从小到大的顺序，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚萃取液2-1，乙酸乙酯萃取液2-2，正丁醇萃取液2-3，萃取剩余的部分为水提取液2-4；第三份滤液无需萃取，即为水提取液3-1；
(3)干燥：将步骤(2)得到的各萃取液和水提取液分别减压浓缩为稠膏，再经减压干燥，粉碎，得干膏粉，即为正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物1-2、石油醚提取物1-3，水提取物1-4，石油醚提取物2-1，乙酸乙酯提取物2-2，正丁醇提取物2-3，水提取物2-4和水提取物3-1。
优选的，前述的中药提取物的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)煎煮：按照重量份数称取原料药葛根、甘草、砂仁、枳椇子、乌梅、大枣，加6～10倍水浸泡1～2小时，煎煮1～1.5小时，过滤并保留滤液，药渣加5～7倍水继续煎煮1～1.5小时，过滤，合并滤液；
(2)萃取：取三份滤液，每份各300～400mL，将第一份滤液按照萃取溶剂极性从大到小的顺序萃取，依次用100～150mL的正丁醇萃取1～4次、100～150mL的乙酸乙酯萃取1～4次、 100～150mL的石油醚萃取萃取1～4次，合并相同萃取剂所得的萃取液得到正丁醇萃取液1-1，乙酸乙酯萃取液1-2、石油醚萃取液1-3，萃取剩余的水相为水提取液1-4；再取第二份滤液按照萃取溶剂极性从小到大的顺序，依次用100～150mL的石油醚萃取1～4次、100～150mL 的乙酸乙酯萃取1～4次、100～150mL的正丁醇萃取萃取1～4次，合并相同萃取剂所得的萃取液得到石油醚萃取液2-1，乙酸乙酯萃取液2-2，正丁醇萃取液2-3，萃取剩余的部分为水提取液2-4；第三份滤液无需萃取，即为水提取液3-1；
(3)干燥：将步骤(2)得到的各萃取液和水提取液分别在70℃、真空度-0.07MPa下减压浓缩为相对密度1.25～1.28的稠膏，再继续在70℃、真空度-0.07MPa下减压干燥5～7个小时，粉碎，得干膏粉，即为正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物1-2、石油醚提取物1-3，水提取物1-4，石油醚提取物2-1，乙酸乙酯提取物2-2，正丁醇提取物2-3，水提取物2-4和水提取物3-1。
优选的，前述的中药提取物的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)煎煮：按照重量份数称取原料药葛根、甘草、砂仁、枳椇子、乌梅、大枣，加8倍水浸泡1小时，煎煮1小时，过滤并保留滤液，药渣加6倍水继续煎煮1小时，过滤，合并滤液；
(2)萃取：取三份滤液，每份各300mL，将第一份滤液按照萃取溶剂极性从大到小的顺序萃取，依次用100mL的正丁醇萃取4次、100mL的乙酸乙酯萃取4次、100mL的石油醚萃取萃取4次，合并相同萃取剂所得的萃取液得到正丁醇萃取液1-1，乙酸乙酯萃取液1-2、石油醚萃取液1-3，萃取剩余的部分为水提取液1-4；再取第二份滤液按照萃取溶剂极性从小到大的顺序，依次用100mL的石油醚萃取4次、100mL的乙酸乙酯萃取4次、100mL的正丁醇萃取萃取4次，合并相同萃取剂所得的萃取液得到石油醚萃取液2-1，乙酸乙酯萃取液 2-2，正丁醇萃取液2-3，萃取剩余的部分为水提取液2-4；第三份滤液无需萃取，即为水提取液3-1；
(3)干燥：将步骤(2)得到的各萃取液和水提取液分别在70℃、真空度-0.07MPa下减压浓缩为相对密度1.25～1.28的稠膏，再继续在70℃、真空度-0.07MPa下减压干燥5～7个小时，粉碎，得干膏粉，即为正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物1-2、石油醚提取物1-3，水提取物1-4，石油醚提取物2-1，乙酸乙酯提取物2-2，正丁醇提取物2-3，水提取物2-4和水提取物3-1。
为验证本发明所得提取物的效果，发明人进行了对上述提取的正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物1-2、石油醚提取物1-3，水提取物1-4，石油醚提取物2-1，乙酸乙酯提取物2-2，正丁醇提取物2-3，水提取物2-4和水提取物3-1共9种提取物进行了如下效果实验：
1、细胞及试剂
人前列腺癌细胞PC3、DU145；人红白细胞白血病细胞HEL；人慢性髓系白血病细胞K562；人乳腺癌细胞MDA-MB-231；人黑色素瘤细胞wm9均为贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室保存，DMEM及RPMI购于Corning公司，0.25％胰酶、DMSO、青链霉素混合液、 MTT均购于北京索莱宝科技有限公司，胎牛血清购于浙江天杭生物科技股份有限公司。
2、体外抗肿瘤活性检测
MTT溶液配制：称取MTT粉末0.25g，加入灭菌的PBS 50ml，超声溶解，过0.22μm滤膜除菌，4℃保存备用。
分别取对数生长期的PC3、DU145、wm9、MDA-MB-231、HEL、K562细胞，以每孔密度为7000个活细胞接种于96孔板，每孔加入180μL细胞悬液，设置空白组与阴性对照组，于37℃、5％CO2恒温饱和湿度下培养至贴壁细胞1贴壁，悬浮细胞稳定，分别加入浓度为 1200μg/mL的九种提取物20μL，阴性对照组为同体积的溶剂，空白组加入等体积培养基，每组设5个复孔。分别继续培养48小时后，加入20μL浓度为5mg/mL MTT，继续培养4h后， 3200r/min离心20min，弃去孔中培养基，每孔加150μL DMSO溶解结晶物，摇床震荡溶解 15min，采用多功能酶标仪于490nm处检测其OD值，计算其细胞增殖抑制率，试验重复三次，结果如表1所示。
表1九种提取物作用于六种细胞的增殖抑制率比较(n＝3，％)
Figure BDA0001856841180000041
注：与对照组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
根据表1可以看出提取物1-1和提取物2-2对HEL、K562、MDA-MB231、PC3、wm9、DU145均有一定的抑制作用，对K562和HEL的抑制效果较为突出。为了进一步确定这两种提取部对HEL和K562的效果，检测不同浓度的提取物1-1与提取物2-2(100μg/mL、200μg/mL、 400μg/mL、800μg/mL、1600μg/mL)在不同时间段(24小时、48小时、72小时)对K562和 HEL两种细胞生长的抑制作用，利用上述MTT法，每组设5个复孔，实验重复三次，结果如图1、图2、图3、图4所示，可以看出，提取物1-1和提取物2-2对HEL，K562细胞的生长具有较为明显的抑制作用，并成浓度梯度和时间梯度依赖，IC50值如表2所示。由以上数据可以看出正丁醇提取物1-1和乙酸乙酯提取物2-2拥有作为抗癌产品开发的前景，尤其是作为抗白血病的潜在药物，具有良好的效果，并且二种提取物联合使用能够起到更加全面和良好的作用，尤其在二者重量比为1:1时抗肿瘤作用最为全面。
表2 IC50值(μg/mL)
Figure BDA0001856841180000051
本发明所采用的原有组分是保肝护肝的保健食品，经发明人研究发现其正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物对癌细胞有抑制作用，尤其是可以作为抗白血病的潜在药物，对两种人的白血病细胞HEL和K562效果尤为明显，这一发现为将原有组方开发为新的抗癌药物提供了新思路。而且原组方保健食品上市多年，技术成熟、产品稳定，本发明中提取物的制备方法简单易行，具有良好的开发前景。
附图说明
图1为不同浓度的提取物1-1处理HEL细胞24小时、48小时、72小时后对细胞生长的抑制作用；
图2为不同浓度的提取物1-1处理K562细胞24小时、48小时、72小时后对细胞生长的抑制作用；
图3为不同浓度的提取物2-2处理HEL细胞24小时、48小时、72小时后对细胞生长的抑制作用；
图4为不同浓度的提取物2-2处理K562细胞24小时、48小时、72小时后对细胞生长的抑制作用。
图1～4中：与对照组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
具体实施方式
实施例1
一种中药提取物，按照重量份数计算，是由葛根380份、甘草130份、砂仁130份、枳椇子300份、乌梅280份、大枣280份所制成的提取物。
实施例2
一种中药提取物，按照重量份数计算，葛根420份、甘草170份、砂仁170份、枳椇子340份、乌梅320份、大枣320份所制成的正丁醇提取物。
实施例3
一种中药提取物，按照重量份数计算，葛根400份、甘草150份、砂仁150份、枳椇子320份、乌梅300份、大枣300份所制成的乙酸乙酯提取物。
实施例4
一种中药提取物，按照重量份数计算，葛根400份、甘草150份、砂仁150份、枳椇子320份、乌梅300份、大枣300份所制成的正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物的组合物，其中正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物重量比为1:1。
实施例5
实施例1～4所得提取物或组合物在制备抗癌药物中的用途。
实施例6
实施例1～4所得提取物或组合物在制备抗白血病药物中的用途。
实施例7
实施例5～6所制备的抗癌药物的剂型为胶囊剂、口服液、注射剂、片剂或滴丸剂。
实施例8
实施例1～4所得提取物或组合物的制备方法：
按照如下步骤进行：
(1)煎煮：按照重量份数称取原料药葛根、甘草、砂仁、枳椇子、乌梅、大枣，加6倍水浸泡1.5小时，煎煮1.5小时，过滤并保留滤液，药渣加5倍水继续煎煮1.5小时，过滤，合并滤液；
(2)萃取：取两份滤液，将第一份滤液正丁醇萃取，得到正丁醇萃取液1-1；再取第二份滤液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取液2-2；
(3)干燥：将步骤(2)得到的各萃取液分别减压浓缩为稠膏，再经减压干燥，粉碎，即得干膏粉，即得正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物2-2。
如需制备组合物，将两种提取物按照相应重量比混合即得。
实施例9
实施例1～4所得提取物或组合物的制备方法：
按照如下步骤进行：
(1)煎煮：按照重量份数称取原料药葛根、甘草、砂仁、枳椇子、乌梅、大枣，加10 倍水浸泡2小时，煎煮1小时，过滤并保留滤液，药渣加7倍水继续煎煮1.5小时，过滤，合并滤液；
(2)萃取：取两份滤液，每份各400mL，将第一份滤液用150mL的正丁醇萃取1次，得到正丁醇萃取液1-1；再取第二份滤液，依次用150mL的石油醚萃取1次、150mL的乙酸乙酯萃取1次，得到乙酸乙酯萃取液2-2；
(3)干燥：将步骤(2)得到的各萃取液分别在70℃、真空度-0.07MPa下减压浓缩为相对密度1.25的稠膏，再继续在70℃、真空度-0.07MPa下减压干燥5个小时，粉碎，即得干膏粉，即得正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物2-2。
如需制备组合物，将两种提取物按照相应重量比混合即得。实施例10
实施例1～4所得提取物或组合物的制备方法：
按照如下步骤进行：
(1)煎煮：按照重量份数称取原料药葛根、甘草、砂仁、枳椇子、乌梅、大枣，加8倍水浸泡1小时，煎煮1小时，过滤并保留滤液，药渣加6倍水继续煎煮1小时，过滤，合并滤液；
(2)萃取：取两份滤液，每份各300mL，将第一份滤液用100mL的正丁醇萃取4次，合并所得的萃取液得到正丁醇萃取液1-1；再取第二份滤液，依次用100mL的石油醚萃取4 次、100mL的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取所得的萃取液得到乙酸乙酯萃取液2-2；
(3)干燥：将步骤(2)得到的各萃取液分别在70℃、真空度-0.07MPa下减压浓缩为相对密度1.28的稠膏，再继续在70℃、真空度-0.07MPa下减压干燥7个小时，粉碎，即得干膏粉，即得正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物2-2。
如需制备组合物，将两种提取物按照相应重量比混合即得。

Claims (7)

1.一种中药提取物在制备抗癌药物中的用途，按照重量份数计算，所述中药提取物是由葛根380～420份、甘草130～170份、砂仁130～170份、枳椇子300～340份、乌梅280～320份、大枣280～320份所制成的正丁醇提取物或乙酸乙酯提取物，所述正丁醇提取物是将上述中药的水煎液用正丁醇萃取制得，所述乙酸乙酯提取物是将上述中药的水煎液先用石油醚萃取，然后用乙酸乙酯萃取制得。
2.根据权利要求1所述的中药提取物在制备抗癌药物中的用途，其特征在于，所述的抗癌药物为抗白血病药物。
3.根据权利要求1或2所述的中药提取物在制备抗癌药物中的用途，其特征在于，所述的抗癌药物的剂型为胶囊剂、口服液、注射剂、片剂或滴丸剂。
4.根据权利要求1所述的中药提取物在制备抗癌药物中的用途，其特征在于，各原料重量份为葛根400份、甘草150份、砂仁150份、枳椇子320份、乌梅300份、大枣300份。
5.根据权利要求1或4所述的中药提取物在制备抗癌药物中的用途，其特征在于，所述中药提取物的制备方法，按照如下步骤进行：
（1）煎煮：按照重量份数称取原料药葛根、甘草、砂仁、枳椇子、乌梅、大枣，加6～10倍水浸泡1～2小时，煎煮1～1.5小时，过滤并保留滤液，药渣加5～7倍水继续煎煮1～1.5小时，过滤，合并滤液；
（2）萃取：取两份滤液，将第一份滤液用正丁醇萃取，得到正丁醇萃取液1-1；再取第二份滤液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取液2-2；
（3）干燥：将步骤（2）得到的各萃取液分别减压浓缩为稠膏，再经减压干燥，粉碎，得干膏粉，即为正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物2-2。
6.根据权利要求5所述的中药提取物在制备抗癌药物中的用途，其特征在于，所述中药提取物的制备方法，按照如下步骤进行：
（1）煎煮：按照重量份数称取原料药葛根、甘草、砂仁、枳椇子、乌梅、大枣，加6～10倍水浸泡1～2小时，煎煮1～1.5小时，过滤并保留滤液，药渣加5～7倍水继续煎煮1～1.5小时，过滤，合并滤液；
（2）萃取：取两份滤液，每份各300～400mL，将第一份滤液用100～150mL的正丁醇萃取1～4次，合并所得的萃取液得到正丁醇萃取液1-1；再取第二份滤液，依次用100～150mL的石油醚萃取1～4次、100～150mL的乙酸乙酯萃取1～4次，合并乙酸乙酯萃取所得的萃取液得到乙酸乙酯萃取液2-2；
（3）干燥：将步骤（2）得到的各萃取液分别在70℃、真空度-0.07MPa下减压浓缩为相对密度1.25～1.28的稠膏，再继续在70℃、真空度-0.07MPa下减压干燥5～7个小时，粉碎，得干膏粉，即为正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物2-2。
7.根据权利要求6所述的中药提取物在制备抗癌药物中的用途，其特征在于，所述中药提取物的制备方法，按照如下步骤进行：
（1）煎煮：按照重量份数称取原料药葛根、甘草、砂仁、枳椇子、乌梅、大枣，加8倍水浸泡1小时，煎煮1小时，过滤并保留滤液，药渣加6倍水继续煎煮1小时，过滤，合并滤液；
（2）萃取：取两份滤液，每份各300mL，将第一份滤液用100mL的正丁醇萃取4次，合并所得的萃取液得到正丁醇萃取液1-1；再取第二份滤液，依次用100mL的石油醚萃取4次、100mL的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取所得的萃取液得到乙酸乙酯萃取液2-2；
（3）干燥：将步骤（2）得到的各萃取液分别在70℃、真空度-0.07MPa下减压浓缩为相对密度1.25～1.28的稠膏，再继续在70℃、真空度-0.07MPa下减压干燥5～7个小时，粉碎，得干膏粉，即为正丁醇提取物1-1，乙酸乙酯提取物2-2。
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芊玖舒胶囊体外抗癌活性初筛;吴琼等;《云南化工》;20181031;第45卷(第10期);第35-37、43页，尤其是摘要、说明书表1-2、第35页单方水提物的制备 *

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