CN109045163A - 一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种蒲棒‑鸡腿菇发酵制剂的制备方法，包括以下步骤：步骤(1)，制备蒲棒浸提液；步骤(2)，制备蒲棒发酵培养液；在步骤(1)制备的蒲棒浸提液中加入碳源、氮源和无机盐，所述碳源为蒲棒浸提液质量的2‑7％，氮源为蒲棒浸提液质量的2‑5％，所述无机盐为蒲棒浸提液质量的0.1‑0.3％；步骤(3)，将鸡腿菇液体发酵菌种接种至步骤(2)制备的蒲棒发酵培养液中，接种量为8％至15％，24‑25℃振荡培养5天，获得蒲棒‑鸡腿菇发酵制剂。通过对蒲棒浸提液发酵培养基的优化选择，使鸡腿菇在蒲棒浸提液培养基中达到最好发酵效果，鸡腿菇菌球鲜重最大，本发明蒲棒‑鸡腿菇发酵制剂具有增强免疫力、延缓衰老的功效，并且能够较好地被人体吸收利用。
Description
技术领域
本发明属于中药现代化开发的技术领域，具体涉及蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法和应用，即采用药材蒲棒，及其上方部位的雄蕊花粉，又名蒲黄，通过其浸提液进行食药用真菌鸡腿菇的发酵方法和应用。
背景技术
鸡腿菇(Coprinus comatus)，学名毛头鬼伞。是一种分布广泛的的草腐类珍稀食用菌。整个子实体呈白色，外形好似鸡腿，因此称为鸡腿菇。鸡腿菇含有较高的蛋白质、多糖多种矿物质和丰富的维生素，鸡腿菇多糖还可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性和促进机体T淋巴细胞数量增多，提高免疫力[1]等，食药用价值极高。
蒲棒，又名蒲包草，是香蒲的果穗，其茸毛可药用，具有消炎止血功效。其上方部位的雄蕊花粉，又名蒲黄。研究表明，低剂量蒲黄煎剂和醇提取物可以使得兔、豚鼠心率减慢和血压降低；家兔口服蒲黄，可以有效抑制其食饵性高胆固醇的形成；其水煎剂可调节免疫功能，浓缩外敷亦有杀菌消炎作用，极具药用价值。
随着社会发展，人们对物质的需求日益增长，保健领域也收到越来越多的人关注，而食用菌极具保健开发价值。因此,如何有效的开发食药用真菌的新功能产品是目前急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于研发出一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法,利用该方法进行鸡腿菇发酵获得蒲棒-鸡腿菇发酵制剂,及该蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法在功能食品或者药品中的应用。
为了实现本发明所述目的，本发明采用以下技术方案：
蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法,包括以下步骤：
步骤(1)，制备蒲棒浸提液；
步骤(2)，制备发酵培养液；在步骤(1)制备的蒲棒浸提液中加入碳源、氮源和无机盐，所述碳源为蒲棒浸提液质量的2-7％，氮源为蒲棒浸提液质量的2-5％，所述无机盐为蒲棒浸提液质量的0.1-0.3％；
步骤(3)，将鸡腿菇发酵菌种接种至步骤(2)制备的发酵培养液中，接种量为8％至15％，24-25℃振荡培养5天，获得蒲棒-鸡腿菇发酵制剂。
本发明的有益效果是：本发明开发的以蒲棒为原料制备的鸡腿菇发酵制剂，创造性的将鸡腿菇于蒲棒浸提液中进行发酵获得的蒲棒-鸡腿菇发酵制剂，该发酵制剂利于吸收具有增强免疫力、抗菌消炎、延缓衰老的多重功效。采用蒲棒浸提液发酵鸡腿菇获得蒲棒-鸡腿菇发酵制剂，可以提高鸡腿菇多糖的利用率，鸡腿菇多糖具有增强免疫力、抗衰老、降血糖、降血脂的作用，该鸡腿菇发酵制剂具有多种抗氧化营养成分能够较好地被人体吸收利用。
进一步，所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、玉米粉或可溶性淀粉中的一种或者任意几种。
进一步，所述碳源为葡萄糖和玉米粉。
进一步，所述葡萄糖用量为蒲棒浸提液质量的2.5％，所述玉米粉用量为蒲棒浸提液质量的4％。
采用上述进一步的有益效果是：上述比例的葡萄糖和玉米粉于蒲棒浸提液培养液中，可以有效提高菌球鲜重，菌球直径符合液体菌种感官指标,培养出来的菌种符合液体菌种感官指标，白色、均匀、致密、无角变，有鸡腿菇菌株特有的香味，无酸、臭、霉等异味。
进一步，所述氮源为豆饼粉、酵母膏、酵母浸粉、蛋白胨或麸皮中的一种或者任意几种。
进一步，所述氮源为豆饼粉；所述豆饼粉用量为蒲棒浸提液质量的3％。
采用上述进一步的有益效果是：上述比例的豆饼粉于蒲棒浸提液培养液中，菌丝鲜重较高，培养出来的菌种符合液体菌种感官指标，白色、均匀、致密、无角变，有鸡腿菇菌株特有的香味，无酸、臭、霉等异味。无酸、臭、霉等异味,菌球直径符合液体感官指标，豆饼粉为最优蒲棒浸提液鸡腿菇发酵培养液的氮源。
进一步，所述无机盐为磷酸二氢钾和硫酸镁，所述磷酸二氢钾用量为蒲棒浸提液质量的0.1％，所述硫酸镁用量为蒲棒浸提液质量的0.1％。
采用上述进一步的有益效果是：在本发明蒲棒浸提液中加入上述配比的无机盐有利于鸡腿菇的发酵和生长。
进一步，所述蒲棒浸提液为蒲棒水提取物，所述蒲棒浸提液的生药含量为：8克/100毫升。
采用上述进一步的有益效果是：由于蒲棒、蒲黄属于中药材，众所周知的中药提取物的成分较为复杂，且对不同的真菌等都有不同程度的抑制作用，发明人实验过程发现，采用生药含量8克/100毫升的蒲棒浸提液进行鸡腿菇发酵具有良好的生长状态，且发酵液具有优异的抗衰老作用，蒲棒浸提液中生药含量较低可能影响发酵液的功能，生药含量过高会导致鸡腿菇生长可能受到抑制。
上述的蒲棒水提取物所述将蒲棒置于水中浸泡，蒲棒与水的重量比为1:8-12，浸泡时间为10-12h，第一次煎煮，煎煮温度为100-120℃，煎煮时间为20-40min，将滤渣置于水中，蒲棒与水的重量比为1:6-10，第二次煎煮，煎煮温度为100-120℃，煎煮时间为20-40min，过滤，合并两次的滤液得蒲棒浸提液。
进一步，步骤(3)所述接种量为10％。
本发明的有益效果是：本发明将鸡腿菇发酵菌种置于蒲棒浸提液下发酵培养，可以使获得的蒲棒-鸡腿菇发酵制剂能够较好地被人体吸收利用，具有显著增强免疫力、抗衰老的功效。
本发明还提供一种上述蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法在延缓衰老的食品、保健品或者药品中的应用。
本发明利用蒲棒制成蒲棒水煎剂，对食药兼用的鸡腿菇进行发酵培养，既充分发挥了香蒲的药用价值，又为鸡腿菇新型功能性食品的开发提供了新思路，获得的发酵醪液获得了显著超出香蒲和鸡腿菇的抗衰老功效。
附图说明
图1为本发明实施例1中的鸡腿菇发酵生长曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述内容做进一步详细的说明，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
本发明以下实施例使用的鸡腿菇菌种，市购。
本发明以下实施例鸡腿菇发酵菌种可以通过以下方法获得：
步骤(1)，将冰箱0-6℃保藏的鸡腿菇试管菌种活化获得活化菌种。具体活化过程可以选择为放置于室温或25℃左右的恒温培养箱中活化24小时。
步骤(2)，将活化的菌种在无菌环境条件下接种至斜面培养基中放入25℃左右的培养箱中培养待菌丝长满培养基斜面，获得斜面培养菌种，大约需要培养8-10天。该斜面培养基的配方为：马铃薯20％、葡萄糖2％、磷酸二氢钾0.1％，无水硫酸镁0.1％、琼脂2％，pH自然；
步骤(3)，将斜面培养菌种接种至摇瓶中的液体菌种培养基中培养获得鸡腿菇发酵菌种；具体摇瓶培养条件可以为：25℃恒温培养箱静置24h后，25℃180r/min振荡培养6天，获得鸡腿菇发酵菌种。该液体菌种培养基为：马铃薯20％、葡萄糖2％、磷酸二氢钾0.1％、无水硫酸镁0.1％，pH自然；
本发明以下实施例使用的蒲棒浸提液均通过以下方法获得：将蒲棒置于水中浸泡，蒲棒与水的重量比为1:10，浸泡时间为11h，第一次煎煮，100℃下煎煮30min，将滤渣置于水中，滤渣与水的重量比为1:8，第二次煎煮，煎煮温度为100℃，煎煮时间为30min，过滤，合并两次的滤液得蒲棒浸提液，所述蒲棒浸提液的生药含量为：8克/100毫升。
实施例1
蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法：
1)蒲棒浸提液下鸡腿菇发酵培养液为：蒲棒浸提液100g，葡萄糖2.5g，玉米粉4g，豆饼粉3g，磷酸二氢钾0.1g，硫酸镁0.1g。
2)将鸡腿菇发酵菌种接种至上述的蒲棒浸提液下鸡腿菇发酵培养液中，接种量为10％，25℃振荡培养128h，菌丝鲜重达到34.72±0.82g，菌球直径3.83±0.25mm，获得蒲棒-鸡腿菇发酵制剂。
实施例2
蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法：
1)蒲棒浸提液下鸡腿菇发酵培养液为：蒲棒浸提液100g，葡萄糖5g，豆饼粉3g，磷酸二氢钾0.1g，硫酸镁0.1g。
2)将鸡腿菇发酵菌种接种至上述的蒲棒浸提液下鸡腿菇发酵培养液中，接种量为10％，25℃振荡培养128h，菌丝鲜重达到33.77±0.76g，菌球直径3.00±0.18mm，获得蒲棒浸提液下鸡腿菇发酵制剂。
实施例3
蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法：
1)蒲棒浸提液下鸡腿菇发酵培养液为：蒲棒浸提液100g，玉米粉5g，豆饼粉3g，磷酸二氢钾为蒲棒浸提液质量的0.1g，硫酸镁为蒲棒浸提液质量的0.1g。
2)将鸡腿菇发酵菌种接种至上述的蒲棒浸提液下鸡腿菇发酵培养液中，接种量为10％，25℃振荡培养128h，菌丝鲜重达到33.30±0.60g，菌球直径2.93±0.18，获得蒲棒-鸡腿菇发酵制剂。
对比例1
基础发酵培养基：蔗糖2％、玉米粉2％，麸皮4％、磷酸二氢钾0.1％，无水硫酸镁0.1％，pH自然；
将鸡腿菇发酵菌种接种至上述的基础发酵培养基中，接种量为10％，25℃振荡培养128h，菌丝鲜重达到30.18±0.75g，获得鸡腿菇发酵制剂。
如图1所示：本发明实施例1和对比例1的鸡腿菇发酵生长曲线图。
实施例1与对比例1结果相比，表明鸡腿菇蒲棒浸提液发酵培养基在128h达到最高菌球鲜重34.97g，较基础发酵培养基提前8h。因此，选择鸡腿菇在发酵时间为128h时，制备蒲棒-鸡腿菇发酵制剂，效果最佳。
效果试验例
将实施例1制备的鸡腿菇蒲棒浸提液发酵醪液添加至果蝇基础培养基中，添加量为果蝇基础培养基质量的10至40％；设置空白对照组，即果蝇基础培养基：琼脂1.5％，蔗糖10％，玉米粉15％，丙酸1％；用于果蝇寿命试验。
对照组，即果蝇基础培养基：琼脂1.5％，蔗糖10％，玉米粉15％，丙酸1％，余量水；
蒲棒浸提液下果蝇基础培养基组：将蒲棒浸提液添加至果蝇基础培养基中，添加量为果蝇基础培养基质量的30％；
普通鸡腿菇发酵制剂组:鸡腿菇发酵培养液：葡萄糖2.5％，玉米粉4％，豆饼粉3％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％，余量水；将鸡腿菇发酵菌种接种至上述的鸡腿菇发酵培养液中,接种量为10％，25℃振荡培养128h，获得鸡腿菇发酵制剂，添加至果蝇基础培养基中，添加量为果蝇基础培养基质量的30％；
蒲棒-鸡腿菇发酵制剂组：于蒲棒浸提液中添加葡萄糖2.5％，玉米粉4％，豆饼粉3％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％。；将鸡腿菇发酵菌种接种至上述的蒲棒浸提液下发酵培养液中，接种量为10％，25℃振荡培养128h，获得蒲棒-鸡腿菇发酵制剂，添加至果蝇基础培养基中，添加量为果蝇基础培养基质量的10至40％；
用于果蝇寿命试验。
实验过程：采用50ml试管制成斜面，取12h内孵化的野生型果蝇，乙醚麻醉后鉴定性别，选取形态大小一致的进行培养，每只斜面试管装10只，加入上述4组培养基对雌雄果蝇各设三个重复(在无菌条件下进行)。处理后置于25℃的光照培养箱中培养(自然光)。每日观察记录果蝇存活情况，统计平均寿命，计算寿命延长率。试验结果如下：
表1雌性果蝇寿命试验
注：与对照组比较，*P＜0.05.
由表1可以看出，与对照组相比，当在培养基中添加不同量蒲棒-鸡腿菇发酵制剂时，对雌性果蝇寿命均有不同延长。当添加30％的蒲棒-鸡腿菇发酵制剂时，雌性果蝇的半数死亡期延长最大，延长率达到13.95％；平均寿命延寿率达到11.63％；最高寿命延寿率达到9.48％。并且，均与对照组有显著性差异(P＜0.05)。
表2雄性果蝇寿命试验
注：与对照组比较，*P＜0.05.
由表2可以看出，与对照组相比，当在果蝇基础培养基中添加不同量蒲棒-鸡腿菇发酵制剂时，对雄性果蝇寿命均有不同延长。当添加量增加至30％时，雄性果蝇的半数死亡期延长最大，延长率达到15.11％；平均寿命延寿率达到13.78％；最高寿命延寿率达到9.59％。并且，均与对照组有显著性差异(P＜0.05)。
研究表明，在本实验条件下，蒲棒-鸡腿菇发酵制剂对果蝇无毒副作用，延长果蝇寿命的效果明显。在果蝇基础培养基中，添加蒲棒-鸡腿菇发酵制剂添加量为果蝇基础培养基质量的30％时，能够使得果蝇寿命显著提高，本研究为鸡腿菇新型功能食品的开发提供了新思路。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法,其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)，制备蒲棒浸提液；
步骤(2)，制备发酵培养液；在步骤(1)制备的蒲棒浸提液中加入碳源、氮源和无机盐，所述碳源为蒲棒浸提液质量的2-7％，氮源为蒲棒浸提液质量的2-5％，所述无机盐为蒲棒浸提液质量的0.1-0.3％；
步骤(3)，将鸡腿菇发酵菌种接种至步骤(2)制备的发酵培养液中，接种量为8％至15％，24-25℃振荡培养5天，获得蒲棒-鸡腿菇发酵制剂。
2.根据权利要求1所述一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法，其特征在于，所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、玉米粉或可溶性淀粉中的一种或者任意几种。
3.根据权利要求2所述一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法，其特征在于，所述碳源为葡萄糖和玉米粉。
4.根据权利要求3所述一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法，其特征在于，所述葡萄糖用量为蒲棒浸提液质量的2.5％，所述玉米粉用量为蒲棒浸提液质量的4％。
5.根据权利要求1至4任一项所述一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法，其特征在于，所述氮源为豆饼粉、酵母膏、酵母浸粉、蛋白胨或麸皮中的一种或者任意几种。
6.根据权利要求5所述一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法，其特征在于，所述氮源为豆饼粉；所述豆饼粉用量为蒲棒浸提液质量的3％。
7.根据权利要求6所述一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法，其特征在于，所述无机盐为磷酸二氢钾和硫酸镁，所述磷酸二氢钾用量为蒲棒浸提液质量的0.1％，所述硫酸镁用量为蒲棒浸提液质量的0.1％。
8.根据权利要求1至4、6至7任一项一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法，其特征在于，所述蒲棒浸提液为蒲棒水提取物，所述蒲棒浸提液的生药含量为：8克/100毫升。
9.根据权利要求1至4、6至7任一项一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述接种量为10％。
10.一种权利要求1至9所述任一项所述一种蒲棒-鸡腿菇发酵制剂的制备方法在延缓衰老的食品、保健品或者药品中的应用。
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