CN109045062B - 泥鳅多糖在制备治疗或预防乙肝药物中的用途 - Google Patents
泥鳅多糖在制备治疗或预防乙肝药物中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109045062B CN109045062B CN201811215231.9A CN201811215231A CN109045062B CN 109045062 B CN109045062 B CN 109045062B CN 201811215231 A CN201811215231 A CN 201811215231A CN 109045062 B CN109045062 B CN 109045062B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- loach
- polysaccharide
- hepatitis
- hbv
- treating
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本公开内容涉及采用泥鳅多糖治疗或预防乙肝和乙肝相关病症的方法,以及泥鳅多糖在制备用于治疗或预防乙肝和乙肝相关病症的药物中的用途。
Description
技术领域
本发明涉及采用泥鳅多糖治疗或预防乙肝的方法,以及泥鳅多糖在制备用于治疗或预防乙肝的药物中的用途。
背景技术
泥鳅多糖是从泥鳅中提取的中性粗多糖,该多糖由1个高聚糖和1个寡糖组成,据报道具有抗氧化、免疫调节、清除氧自由基等活性功能。
乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是乙型病毒性肝炎(简称乙型肝炎)的病原体,通过血液与体液传播,具有慢性携带状态的传染性疾病,主要引起肝脏损害。HBV的感染是世界范围内严重的公共卫生问题之一。HBV感染呈世界性流行,据WHO报道,全球约20亿人感染HBV,其中3.5亿人为慢性HBV感染者,每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。HBV感染严重危害健康,影响生活质量。
乙肝治疗的选择目前主要限于干扰素以及以下抗病毒药:替诺福韦(tenofovir)、拉米夫定(lamivudine)、阿德福韦(adefovir)、恩替卡韦(entecavir)以及替比夫定(telbivudine)。
采用这些直接的HBV抗病毒药可能遇到的问题包括毒性、致突变性、缺乏选择性、疗效差、生物利用度差以及合成困难。
目前没有将多糖,特别是泥鳅多糖用于治疗乙肝的产品。因此,有必要开发安全有效、副作用小、不易产生耐药性的另外的药物。
发明内容
意想不到地,本申请发明人首次发现泥鳅多糖能够高效抑制乙肝病毒,并且相对于现有的抗病毒药例如拉米夫定,泥鳅多糖的细胞毒性显著减小。
因此,在一个方面,提供了治疗或预防乙肝和乙肝相关病症的方法,所述方法包括向有需要的患者施用有效量的泥鳅多糖。
在一个方面,提供了泥鳅多糖在制备用于治疗或预防乙肝和乙肝相关病症的药物中的用途。
在一个方面,乙肝为慢性乙肝。
在一个方面,乙肝相关病症为肝硬化、肝纤维化和肝癌。
在一个方面,肝癌为原发性肝癌。
在另一个方面,提供了泥鳅多糖在制备用于减少个体对乙肝和乙肝相关病症的易感性的药物中的用途。
在一个方面,所述个体为乙肝病毒携带者。
在另一个方面,提供了一种药物组合物,其包含泥鳅多糖和任选至少一种药学上可接受的赋形剂。在优选的方面,药物组合物中泥鳅多糖的含量为1-100%。
泥鳅多糖作为乙肝治疗药物的优势包括安全有效、毒性和副作用小、不易产生耐药性等。
附图说明
图1图示用泥鳅多糖处理9天后对HepG2.2.15细胞合成HBV DNA的抑制率(n=9,x±s,%)。
具体实施方式
除非另外定义,本文所用的所有技术和科学术语具有本领域技术人员通常理解的相同含义。在冲突的情况下,以本申请说明书为准。下面描述优选的方法和材料,但是与本文所述那些类似或等同的方法和材料可用于实施或测试本发明。本文公开的材料、方法和实例仅是说明性的,而非旨在限制。
本申请发明人首次意想不到地发现,泥鳅多糖能够高效抑制乙肝病毒,并且相对于现有的抗病毒药例如拉米夫定,泥鳅多糖的细胞毒性显著减小。
在一个方面,提供了治疗或预防乙肝和乙肝相关病症的方法,所述方法包括向有需要的患者施用有效量的泥鳅多糖。
在一个实施方案中,乙肝可以为慢性乙肝。
在一个实施方案中,乙肝相关病症为肝硬化、肝纤维化和肝癌例如原发性肝癌。
在另一个方面,提供了治疗乙肝病毒携带者的方法,所述方法包括向有需要的个体施用有效量的泥鳅多糖。
一般而言,如本公开内容所述的治疗或预防乙肝和乙肝相关病症通过以有效量施用泥鳅多糖来实现。有效量的泥鳅多糖是指在必要的剂量和时间段内有效达到所需治疗或预防效果的量。本公开内容的泥鳅多糖的治疗有效量可以根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及泥鳅多糖在个体中引起期望的反应的能力等因素而变化。预防有效量是指在必要的剂量和时间段内有效达到所需预防效果的量。
在一个方面,提供了泥鳅多糖在制备用于治疗或预防乙肝和乙肝相关病症的药物中的用途。
在一个实施方案中,乙肝可以为慢性乙肝。
在一个实施方案中,乙肝相关病症为肝硬化、肝纤维化和肝癌。
在一个优选实施方案中,肝癌为原发性肝癌。
在一个方面,提供了泥鳅多糖在制备用于减少个体对乙肝和乙肝相关病症例如肝硬化、肝纤维化和肝癌的易感性的药物中的用途。
在一个实施方案中,所述个体为乙肝病毒携带者。
在另一个方面,提供了一种药物组合物,其包含泥鳅多糖和任选至少一种药学上可接受的赋形剂。
在一个实施方案中,药物组合物中泥鳅多糖的含量可以为1-100%,例如1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%。
药物组合物可按照本领域已知的技术制备。术语“赋形剂”概括地指活性成分外的任何组分。赋形剂可为惰性物质、无活性物质和/或无药物活性的物质。赋形剂可用作多种目的,例如,用作载体、溶媒、稀释剂、片剂辅助剂,和/或改善活性物质的给药和/或吸收。药学活性成分与各种赋形剂的配制为本领域已知,参见例如Remington: The Science andPractice of Pharmacy (例如第19版(1995), 和任何之后的版本)。赋形剂的非限制性实例为:溶剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂、张度调节剂、螯合剂和稳定剂。
本发明的泥鳅多糖可以以药物组合物的形式给予。其不仅可以制备成为注射液、冻干制剂、喷雾剂等液体制剂,还可以制备成为胶囊剂等固体制剂。给药途径可为,例如,静脉内注射、口服或局部给药,例如经皮,经结膜,和/或经眼睛等。在具体的实施方案中,给药途径为经口服。
泥鳅多糖作为乙肝治疗药物的优势包括相对于现有的抗病毒药例如拉米夫定,泥鳅多糖更加安全有效、毒性和副作用更小等。
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明,参考以下的非限制性实施例进一步描述本发明。
实施例
实施例1. 泥鳅多糖的检测
硫酸-苯酚法标准曲线:精密称取葡萄糖对照品100mg,置于1000mL容量瓶中,加适量水溶解,稀释至刻度,摇匀,即得0.1mg/ml葡萄糖母液。分别吸取葡萄糖母液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml至25ml加塞试管中,加水补足至2.0ml,加入5%苯酚水溶液1.0ml并混匀。随后快速加入5ml浓硫酸,10min后摇匀30s,30℃水浴20min。准确吸取150μl葡萄糖溶液至96孔板中,在490nm波长处以试剂空白溶液为参比,测定吸光度。以吸光度为横坐标,葡萄糖浓度为纵坐标,绘制标准曲线,得到回归方程:Y=0.1707X+0.0007(R2=0.9997)。
样品配制:精密称取适量样品,置于25mL容量瓶中,加适量水溶解,稀释至刻度,摇匀,即得样品溶液。吸取样品1ml至25ml加塞试管中,加水补足至2.0ml,加入5%苯酚水溶液1.0ml混匀。随后快速加入5ml浓硫酸,10min后摇匀30s,30℃水浴20min。准确吸取150μl葡萄糖溶液至96孔板中,在490nm波长处以试剂空白溶液为参比,测定吸光度。
泥鳅多糖浓度={0.1707* (A样品-A空白)+0.0007}/1*2*25/M取样量×100%
其中,A样品:样品吸光度,A空白:空白试剂吸光度,M取样量:样品的取样质量(mg)。
实施例2. 泥鳅多糖的制备
方法1:
经浸养干净的泥鳅2kg,置于带盖不锈钢桶中,将70℃1倍泥鳅重量体积的热水倒入桶中,盖好盖子,搅拌1分钟,过滤,收集热水液;收集液放冷后加入泥鳅重量0.05%的木瓜蛋白酶(800 u/mg),60℃水浴保温酶解6小时;加热至沸腾,保持20分钟;向酶解液加入泥鳅重量0.2%的硅藻土,搅拌均匀后4℃静置4小时,过滤,滤液用1000D纳滤膜浓缩,浓缩至200ml左右,加4倍95%乙醇,使醇浓度大于70%,混合均匀,4℃静置8小时;4℃、10000r/min离心10min,得白色或类白色沉淀,沉淀用95%乙醇洗涤2次,然后在60℃经鼓风干燥,得到1.5g白色粉末。根据实施例1所述的方法对样品进行检测,泥鳅多糖含量为19.9%。用DMEM配制成适当浓度的原液,过滤除菌备用。
方法2:
经浸养干净的泥鳅2kg,置于带盖不锈钢桶中,将80℃0.75倍泥鳅重量体积的热水倒入桶中,盖好盖子,搅拌1分钟,过滤,用0.25倍泥鳅重量体积的室温水冲洗,收集热水液及冲洗液;放冷后加入泥鳅重量0.1%的碱性蛋白酶(200u/mg),55℃水浴保温酶解4小时;加热至沸腾,保持20分钟;向酶解液加入泥鳅重量0.2%的硅藻土,搅拌均匀后4℃静置4小时,过滤,滤液用800D反渗透膜浓缩,浓缩至200ml左右,加5倍90%乙醇,使醇浓度大于60%,混合均匀,4℃静置8小时;4℃、10000r/min离心10min,得到棕色或浅棕色沉淀,沉淀用95%乙醇洗涤2次,沉淀用纯化水溶解后经冷冻干燥,得到1.6g棕色粉末。根据实施例1所述的方法对样品进行检测,泥鳅多糖含量为13.7%。用DMEM配制成适当浓度的原液,过滤除菌备用。
方法3:
经浸养干净的泥鳅2kg,置于带盖不锈钢桶中,将80℃0.75倍泥鳅重量体积的热水倒入桶中,盖好盖子,搅拌1分钟,过滤,用0.25倍泥鳅重量体积的室温水冲洗,收集热水液及冲洗液;放冷后加入泥鳅重量0.2%的中性蛋白酶(100u/mg),45℃水浴保温酶解4小时;加热至沸腾,保持20分钟;向酶解液加入泥鳅重量0.2%的硅藻土,搅拌均匀后4℃静置4小时,过滤,真空浓缩,浓缩至200ml左右,加入5倍90%乙醇,使醇浓度大于60%,混合均匀,4℃静置8小时;4℃、10000r/min离心10min,得到棕色或浅棕色沉淀,沉淀用95%乙醇洗涤2次,然后在60℃经鼓风干燥,得到1.6g棕色粉末。根据实施例1所述的方法对样品进行检测,泥鳅多糖含量为13.4%。用DMEM配制成适当浓度的原液,过滤除菌备用。
实施例3. HepG2.2.15细胞实验
1. 材料
1.1. 细胞:HBV DNA克隆转染的人肝癌细胞HepG2.2.15细胞(上海美轩生物科技有限公司)。
1.2. 试剂:胎牛血清(四季青),DMEM培养基、胰酶、青-链霉素(GIBCO公司),HBsAg、HBeAg抗原检测试剂盒(上海西塘生物)、HBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒(上海科华生物工程公司),MTT检测试剂盒(碧云天生物),拉米夫定(Lamivudine,3TC) (葛兰素-史克制药苏州有限公司)。
1.3. 仪器设备:CO2细胞培养箱(Thermo公司),超净工作台(苏州医药净化设备厂),实时荧光定量PCR(Bio-Rad),CYTATION I5酶标仪(美国BioTek公司)。
2. 细胞培养
HepG2.2.15细胞复苏后,以DMEM培养基(每1000ml含100万单位青霉素、1.0g链霉素和10%灭活胎牛血清)培养于细胞瓶中,置于37℃、5%CO2环境中培养。细胞生长到70%-80%时,用0.25%胰酶消化3min,用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,按适当比例接种到另外的细胞瓶中继续培养,2-3天传代1次。每次换液时,留取上清液,检测HBsAg、HBeAg和HBV-DNA分泌情况,待表达稳定后开始实验。
3. 细胞毒性检测
HepG2.2.15细胞以2×104个细胞/mL密度接种于96孔培养板中,每孔100μL,置于细胞培养箱中,37℃、5%CO2培养24h,贴壁后,加入含有浓度为4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL泥鳅多糖的DMEM培养液。每种浓度重复3孔。设无药的细胞对照组3孔及空白对照组3孔,每孔加入100μL DMEM。并于第3、6天更换新鲜的含泥鳅多糖的培养液培养。培养9天之后,向各孔中加入10μL的MTT并继续培养4h。弃去原液,以100μL/孔立即加入二甲基亚砜(DMSO),轻度振荡10-15min,然后用酶标仪检测570nm处各孔的吸光度值。重复3次实验,如下计算泥鳅多糖在各浓度下对细胞增殖的抑制百分率并计算半数细胞毒性浓度(50%,CC50):
细胞增殖抑制率=[(A细胞对照-A实验样品)/(A细胞对照-A空白对照)]×100%
结果
泥鳅多糖对HepG2.2.15细胞的毒性作用的MTT试验结果显示,泥鳅多糖对HepG2.2.15细胞生长有一定的抑制作用,且浓度越大,抑制作用越明显,结果见表1。
表1 泥鳅多糖处理9天后对HepG2.2.15细胞增殖的影响(n=9,x±s,%)
泥鳅多糖质量浓度为4 mg/mL时,细胞抑制率为35.48%,与空白细胞对照组相比有统计学意义(P<0.05)。对于HepG2.2.15细胞,泥鳅多糖的CC50为(5.460 ±0.039)mg/mL。
4. 泥鳅多糖对细胞分泌的HBsAg、HBeAg的抑制作用
将HepG2.2.15细胞接种到24孔培养板,每孔1mL,37℃、5%CO2培养,24h后替换为含泥鳅多糖的培养液,并设拉米夫定(Lamivudine,3TC)为阳性对照组。根据药物毒性实验结果,以对细胞无明显毒性的浓度为起始浓度,依次10倍稀释成5种浓度。每种浓度的泥鳅多糖/拉米夫定加3孔,同时设不加药细胞对照3孔及培养液空白对照3孔,并于第3、6天更换新鲜的含泥鳅多糖的培养液,培养9天。第9天收集各孔的细胞上清液,-80℃冷冻备用。重复3次实验,采用ELISA法检测上清液中的HBsAg和HBeAg。按HBsAg和HBeAg检测试剂盒说明操作,
操作如下:
(1).所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,做复孔。
(2).配制试剂盒各种组分的工作液。
(3).从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
(4).设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,样本孔加待测样本50μL,空白孔不加。
(5).除空白孔外,标准品孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。
(6).用封板膜盖住反应板,37℃培养箱温育60min。
(7).揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干。
(8).如此重复4次(共洗板5次)。若使用自动洗板机,按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,需要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。
(9).将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育15min。
(10).所有孔加入终止液50μL,在酶标仪450nm读取各孔吸光度(A值)。
用酶标仪检测上述收集得到的培养液上清液在450nm时的吸光度值。药物对抗原的抑制百分率=[(A细胞对照-A实验样)/(A细胞对照-A空白对照)]×100%。IC50为HBsAg、HBeAg抑制率为50%时的药物浓度。
结果
泥鳅多糖对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg分泌的影响
泥鳅多糖对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制率均呈剂量和时间依赖性,见表2。最大质量浓度2mg/mL的泥鳅多糖作用9天后,对HBsAg分泌抑制率为(51.864±0.201)%;泥鳅多糖的最大质量浓度2mg/mL作用9天后,HBeAg抑制率为(87.261±0.192)%。泥鳅多糖处理组和3TC处理组的抑制率差异通过t检验均有统计学意义(P<0.05)。泥鳅多糖对HBsAg抑制9天的IC50为(4.814±0.129)mg/mL,对HBeAg抑制9天的IC50为(0.806±0.030)mg/mL。
表2 泥鳅多糖及拉米夫定对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg分泌的影响(n=9,x±s,%)
注:*与空白对照组相比P<0.05;**与空白对照组相比P<0.01。
5. 定量检测细胞上清液中的HBV DNA
按照HBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒的说明提取不同质量浓度泥鳅多糖和3TC(0.1mg/mL)处理第9天各组细胞上清液及空白细胞对照组中的DNA,然后按照HBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒的说明进行操作。操作如下:
(1).样本提取
取待测细胞上清液各100μL,分别加到0.5ml离心管中;加入100μL溶液A和5μL内标,振荡混匀,13,000rpm离心10min;吸弃上清(尽可能吸弃上清且不碰沉淀);再加入25μL溶液B(溶液B中含有微球,在加液前尽可能混匀),并在移液器取样前吹打均匀后吸取;剧烈振荡,尽可能使沉淀分散;100℃沸水浴10min;13,000rpm离心10min,保留上清备用。提取液保存于-20℃。
(2). PCR 反应
(2.1)试剂配制:将试剂盒中的HBV PCR反应液、标准品及提取好的对照品进行室
温解冻。试剂配制前,将所有试剂振荡后短暂离心。按样本的数量加上标准品和对照品的数
量进行PCR反应配置,配置如下:
试剂 | PCR反应液 | Taq酶 | UDG酶 |
用量 | 37.7 μL | 0.3 μL | 0.1μL |
混合好上述反应液后,以每管38μL分装于0.2ml的PCR反应管中。将分装好的PCR反应管转移至样本处理区。
(2.2)加样:分装好的反应管分别加入已提取好的样本、对照品及标准品各2μL。
(2.3PCR)反应(在PCR检测区进行)
反应程序设置如下:
仪器检测通道选择:荧光信号收集设定为F1(FAM)和F2(HEX)通道。运行之前,设置程序在60℃运行15秒,检测荧光本底值,调节增益使荧光F1(FAM)通道本底值在10-20之间,F2(HEX)通道本底值在30-40 之间。
计算泥鳅多糖和3TC处理对HBV-DNA的抑制率和泥鳅多糖处理9天后的IC50。
结果
泥鳅多糖对HepG2.2.15细胞培养上清液中HBV DNA合成抑制率
给药9天后,0.1mg/mL 3TC对HepG2.2.15细胞HBV DNA的合成抑制率为92.13%。而泥鳅多糖对HBV DNA的合成抑制率呈剂量依赖性,见表3、图1。与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.5),IC50为(0.662±0.013)mg/mL。泥鳅多糖对HBV DNA的合成抑制作用具有剂量依赖性,所用的最大质量浓度2mg/mL达到了与0.1mg/mL 3TC的相似抑制水平。
表3 泥鳅多糖及拉米夫定对HBV DNA 的抑制作用
注:*与空白对照组相比P<0.05;**与空白对照组相比P<0.01。
统计学处理方法
采用SPSS11.5软件处理,计量资料齐性检验后进行方差分析(ANOVA)。以治疗指数(TI =CC50/IC50)评价药物临床应用前景。当TI<1时,受试药物为低效有毒,当1<TI<2时受试药物有效有毒,当TI>2时,受试药物高效低毒,TI越大,则表明该药对HBV的抑制作用越强,细胞毒越小。
6. 结论
给药9天后,泥鳅多糖对HepG2.2.15分泌HBsAg、HBeAg及合成HBV DNA的TI50分别为3.178,6.149和8.248。根据前述对TI值判断结果提示,泥鳅多糖在抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg及合成HBV DNA方面具有高效低毒作用。
实施例4. 泥鳅多糖治疗HBV转基因小鼠的研究
1.材料
1.1 药物:拉米夫定(Lamivudine,3TC) (葛兰素-史克制药苏州有限公司)。
1.2 实验动物HBV转基因小鼠购置于解放军第四五八医院全军肝病中心动物室,生产许可证号:SCXK(军) 2012-0018。
1.3 试剂:人乙肝病毒表面抗原(HBsAg)检测试剂盒(上海西塘生物),HBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒(上海科华生物工程公司)。
1.4 仪器设备:超净工作台(苏州医药净化设备厂),实时荧光定量PCR(Bio-Rad),CYTATION I5酶标仪(美国BioTek公司)。
2.方法
2.1 分组及给药
将HBV转基因小鼠50只(6-8周龄,雌雄各半)随机分为5组:模型对照组、拉米夫定对照组、高剂量泥鳅多糖组、中剂量泥鳅多糖组、低剂量泥鳅多糖组。对于模型对照组的小鼠:给予同体积生理盐水灌胃;对于拉米夫定对照组:给予同体积含150mg/(kg·d)拉米夫定混悬液;对于高、中、低剂量泥鳅多糖组:分别给予同体积含10、3、1g /(kg·d)泥鳅多糖混悬液,疗程5周。
2.2 检测指标
2.2.1 血清及肝脏组织HBsA 从股动脉取血,经离心得到血清。处理肝组织,得到匀浆。类似于实施例3所述的,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测。
2.2.2 血清及肝组织HBV DNA 从股动脉取血,经离心得到血清。处理肝组织,得到匀浆。类似于实施例3所述的,用HBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒检测。
3.结果
3.1 HBsAg水平与模型对照组比较,拉米夫定组、高、中、低剂量泥鳅多糖组HBV转基因小鼠肝组织HBsAg水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组比较,高、中、低剂量泥鳅多糖组的小鼠血清HBsAg明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);而拉米夫定组血清HBsAg差异有统计学意义( P<0.05)。见表4。
表4 小鼠HBsAg水平
组别 | 肝组织HBsAg水平 | 血清HBsAg水平 |
模型对照组 | 21.95±1.14 | 19.35±1.04 |
拉米夫定对照组 | 21.06±1.36<sup>**</sup> | 18.16±1.59<sup>*</sup> |
泥鳅多糖高剂量组 | 10.43±0.85<sup>**</sup> | 8.45±0.74<sup>**</sup> |
泥鳅多糖中剂量组 | 14.09±0.85<sup>**</sup> | 11.66±0.83<sup>**</sup> |
泥鳅多糖低剂量组 | 18.42±0.94<sup>**</sup> | 16.88±0.87<sup>**</sup> |
注:*与模型对照组相比P<0.05;**与模型对照组相比P<0.01。
3.2 HBV DNA水平与模型对照组比较,拉米夫定组、高、中、低剂量泥鳅多糖组HBV转基因小鼠肝组织及血清HBVDNA 水平明显下降,差异有统计学意义( P<0.01)。见表5。
表5 小鼠HBV DNA水平
组别 | 肝组织HBV DNA水平 | 血清HBV DNA水平 |
模型对照组 | 1370720.00±32144.72 | 19687.20±1317.56 |
拉米夫定对照组 | 674760.00±54761.75<sup>**</sup> | 2442.90±263.66<sup>**</sup> |
泥鳅多糖高剂量组 | 786700.00±53230.48<sup>**</sup> | 2872.90±288.73<sup>**</sup> |
泥鳅多糖中剂量组 | 944600.00±73496.26<sup>**</sup> | 9888.40±1386.40<sup>**</sup> |
泥鳅多糖低剂量组 | 1160170.00±74511.77<sup>**</sup> | 15686.60±1029.21<sup>**</sup> |
注:*与模型对照组相比P<0.05;**与模型对照组相比P<0.01。
4.结论
高、中、低剂量泥鳅多糖均可以显著降低小鼠肝脏和血清中的HBsAg、HBV DNA水平,提示泥鳅多糖具有确切的抗HBV作用。
虽然本发明某些特征已经在本文中阐释和描述,但本领域技术人员将想到许多修改、替代、变更和等同。因此,应理解的是,所附权利要求书意在涵盖落入本发明真实精神范围之内的所有此类修改和变更。
Claims (2)
1.泥鳅多糖在制备用于治疗乙肝的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其中所述疾病是慢性乙肝。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811215231.9A CN109045062B (zh) | 2018-10-18 | 2018-10-18 | 泥鳅多糖在制备治疗或预防乙肝药物中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811215231.9A CN109045062B (zh) | 2018-10-18 | 2018-10-18 | 泥鳅多糖在制备治疗或预防乙肝药物中的用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109045062A CN109045062A (zh) | 2018-12-21 |
CN109045062B true CN109045062B (zh) | 2021-06-15 |
Family
ID=64764226
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811215231.9A Active CN109045062B (zh) | 2018-10-18 | 2018-10-18 | 泥鳅多糖在制备治疗或预防乙肝药物中的用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109045062B (zh) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105085699A (zh) * | 2015-08-13 | 2015-11-25 | 重庆都好生物科技有限公司 | 一种泥鳅分泌多糖的提取方法 |
-
2018
- 2018-10-18 CN CN201811215231.9A patent/CN109045062B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105085699A (zh) * | 2015-08-13 | 2015-11-25 | 重庆都好生物科技有限公司 | 一种泥鳅分泌多糖的提取方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
泥鳅高值化开发利用研究进展;党晓妍等;《食品安全质量检测学报》;20170131;第20-23页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109045062A (zh) | 2018-12-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN114191553B (zh) | 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的药物及其应用 | |
US20230143345A1 (en) | Pharmaceutical composition for prevention or treatment of diseases caused by sars-cov-2 | |
CN110882255A (zh) | 齐墩果烷三萜类化合物在抗乙型肝炎病毒中的应用 | |
CN112675174B (zh) | 多聚adp核糖聚合酶抑制剂治疗乙肝病毒相关疾病的新用途 | |
CN101214285B (zh) | 虎杖提取物用于制备抗艾滋病毒和抗乙肝病毒产品的用途 | |
CN105418410A (zh) | 大黄素衍生物及其在制备抗hiv-1药物中的应用 | |
CN101190211B (zh) | 芳香硝基化合物在制备治疗病毒性肝炎药物中的应用 | |
EP2116253A1 (en) | Novel phyllanthus extract | |
CN109045062B (zh) | 泥鳅多糖在制备治疗或预防乙肝药物中的用途 | |
CN109364074A (zh) | 6-氨基烟酰胺作为有效成分在制备乙型肝炎治疗药物中的用途 | |
CN106491680B (zh) | 一种预防或治疗老年痴呆的中药组合物及其制备方法 | |
CN113304165B (zh) | 单体化合物Ciliatoside A在制备乙型肝炎治疗药物中的用途 | |
CN105399794A (zh) | 罗汉果三萜皂甙及其盐和其制备方法、应用及包含该罗汉果三萜皂甙及其盐的药物组合物 | |
WO2023044967A1 (zh) | 化合物kya1797k制备抗hbv病毒药物中的应用 | |
CN104208070A (zh) | 蒲公英甾醇在制备抗hbv的药物中的应用 | |
CN102050780B (zh) | 喹啉衍生物,其药物组合物及其用途 | |
CN115105519A (zh) | 用于治疗乙型肝炎的药物组合物及其制备方法 | |
WO2014129884A2 (en) | Composition with inhibitory effect on viral integrase activity | |
CN115813921B (zh) | 化合物16f16及其衍生物在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用 | |
CN114796256B (zh) | 环腺苷酸类化合物在制备抗寨卡病毒药物中的应用 | |
CN104161799B (zh) | 一种复方丹参提取物及其制备方法 | |
CN108569953B (zh) | 茵陈三炔醇类化合物及其药物组合物和其用途 | |
CN109106712B (zh) | 短叶苏木酚酸甲酯在制备抗流感病毒药物中的应用 | |
CN108785296B (zh) | 二萜类化合物在制备抗病毒药物中的应用 | |
CN108530292B (zh) | 茵陈三炔酸类化合物及其药物组合物和其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |