CN109022309A - 一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用，该嗜麦芽寡养单胞菌的菌株编号为YZH001，该嗜麦芽寡养单胞菌的保藏号为CGMCC No.5690。该嗜麦芽寡养单胞菌YZH001在微生物发酵过程中产生了含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉，游离脂肪酸组合物主要是异十五烷酸、棕榈酸、油酸、亚油酸与亚麻酸。本发明由该嗜麦芽寡养单胞菌发酵培养后经提取后而得的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉具有抑制肿瘤生长作用。

Description

一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物菌株及应用领域，具体涉及一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用。
背景技术
癌症是威胁人类生命健康的最重大的疾病之一。在各种疾病中,恶性肿瘤的死亡率高居第二位。传统的抗癌药物研究主要着眼于细胞毒药物，这类抗癌药具有难以避免的选择性差、毒副作用大、易产生耐药性等缺点。生命科学的迅速发展为肿瘤治疗提供了许多新的策略，肿瘤的血管系统、癌基因产物及信号转导通路等成为抗癌药物作用的新靶点。近年的研究表明，血管生成是肿瘤生长、发展的必经之路，且与实体瘤的发生和转移有着密切的关系，许多肿瘤仅在新的血管生成之后才出现临床症状。如果没有血管生成，肿瘤很少超过1.0mm，实体瘤的生长、发育以及转移都依赖于新生血管生成提供营养，阻断肿瘤的血管生成成为新型抗肿瘤药物研究的重要方向，抑制肿瘤新生血管生成的肿瘤治疗方法特异性高、疗效好、不易产生耐药性且毒副作用低，成为治疗癌症的一种重要策略。
对于此种情况，加强癌症预防工作，对人们特别是癌症的高危人群，给予适当的补充营养，提高身体的抵抗有毒化学物质的侵袭，防止癌症的发生发展更为重要。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提出一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用，由该嗜麦芽寡养单胞菌发酵培养后经提取后而得的游离脂肪酸组合物具有抑制肿瘤生长作用。
所采用的技术方案为：
一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌，该嗜麦芽寡养单胞菌的菌株编号为YZH001，该嗜麦芽寡养单胞菌的保藏号为CGMCC No.5690。
一种含游离脂肪酸的大豆发酵液的生产工艺，其特征在于，包括如下步骤：首先将权利要求1所述的能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌接种至大豆发酵培养基中，该大豆发酵培养基组成为大豆浆10％，磷酸氢二钾0.02％，碳酸钙0.02％，酵母抽提物0.02％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，大豆油0.5％,其余为水；该大豆发酵培养基组成的“％”表示的是质量体积浓度g/L；然后在28-37℃条件下，培养基通入无菌空气，连续培养发酵24-48小时；发酵结束后于100-110℃灭菌，得到含游离脂肪酸的大豆发酵液。
一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉，其是将上述方案所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后，将发酵液浓缩后经喷雾干燥或冷冻干燥获得的，获得的大豆发酵粉按照质量百分数计，含有异十五烷酸0.1-0.5％、棕榈酸0.1-0.5％、油酸0.1-0.8％、亚油酸0.1-1.2％与亚麻酸0.02-0.15％。
上述五种游离脂肪酸的化学分子式和结构式为：
异十五烷酸
分子式：C15H30O2结构式：(CH3)2CH(CH2)11COOH
棕榈酸
分子式：C16H32O2，结构式：CH3(CH2)14COOH
油酸
分子式：C18H34O2，结构式：CH3(CH2)7CH＝CH(CH2)7COOH
亚油酸
分子式：C18H32O2，结构式：CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7COOH
亚麻酸
分子式：C18H32O2，
结构式：CH3CH2CH＝CHCH2CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7COOH
本说明书所述亚麻酸为α-亚麻酸。本说明书所述的异十五烷酸、棕榈酸、油酸、亚油酸与亚麻酸均分别对应具有上述化学分子式和结构式。
一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉，其是将上述方案所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后，加入2.1—3倍体积量的95％乙醇，取上清液，浓缩，蒸除乙醇，所得浓缩液用5％HCl调节到pH＝4,离心沉淀，收集沉淀物，加入95％乙醇，取上清液浓缩后冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计，含有异十五烷酸1-5％、棕榈酸0.5-3％、油酸0.5-3％、亚油酸1-5％与亚麻酸0.1-2％。
一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉，其是将上述方案所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后，加入2.1—3倍体积量的95％乙醇，取上清液，浓缩，蒸除乙醇，所得浓缩液用乙酸乙脂提取，取乙酸乙脂层，蒸干后用95％乙醇溶解，分取上清液浓缩后冷冻干燥获得的，获得的大豆发酵粉按照质量百分数计，含有异十五烷酸1.5-6％、棕榈酸0.5-3％、油酸0.5-3％、亚油酸0.8-5％与亚麻酸0.1-0.8％。
一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉，其是将上述方案所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后，经喷雾干燥或冷冻干燥后得到固体粉末，将此粉末用乙酸乙酯用渗漉法提取，蒸除乙酸乙酯溶剂后用60-95％的乙醇溶解，分除不溶性的油层后蒸除乙醇，经冷冻干燥获得的，获得的大豆发酵粉按照质量百分数计，含有异十五烷酸1.5-6％、棕榈酸1-3.5％、油酸1-3.5％、亚油酸2-8％与亚麻酸0.3-1.8％。
上述方案任一所述的由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉在制备具有抑制肿瘤生长作用的制品中的应用。
进一步地，制品可以为口服液制品。
本发明的有益效果在于：
本发明的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001在发酵过程中(可参见图1所示)是经过微生物代谢产生了游离脂肪酸组合物，该游离脂肪酸组合物主要是异十五烷酸、棕榈酸、油酸、亚油酸与亚麻酸。该组合物具有特定范围的含量。
嗜麦芽寡养单胞菌发酵培养后经提取后而得的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉具有抑制肿瘤生长作用，将其制成制品时，有利于补充人体的需要和吸收，提高人体抵抗化学毒物致癌的能力，预防癌症的发生。
附图说明
图1为实施例5的大豆发酵过程中游离脂肪酸的含量变化图。
图2为实施例5的游离脂肪酸的高效液相色谱含量测定图谱。
图3为实施例7的抑制大鼠动脉环的萌芽(4.0×)图。
具体实施方式
下面通过优选的实施例进一步详细阐述本发明，但不应理解为对本发明保护范围的限制。
生物保藏
本发明所用的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)，于2011年12月31日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，菌株编号：YZH001，保藏编号为CGMCC No.5690。
另附有证明文件：
证明文件1：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏证明文件。
实施例1
将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中，该培养基组成为大豆浆10％，磷酸氢二钾0.02％，碳酸钙0.02％，酵母抽提物0.02％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，大豆油0.5％,其余为水。该培养基组成的“％”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下，培养基通入无菌空气，连续培养发酵24-48小时，发酵结束后于100-110℃灭菌，浓缩，喷雾干燥得到黄色粉末的大豆发酵粉，该粉末含有异十五烷酸0.13％，棕榈酸0.21％，油酸0.18％，亚油酸0.34％，亚麻酸0.08％。该粉末的余量为大豆发酵培养基中的其他组分。该组成的“％”表示的是质量浓度g/g，即该组分占整体质量的百分比，以下同。
由于本发明主要是通过嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中，产生的5种游离酸，并测定5种游离酸的含量。其余组分均是大豆发酵培养基里的组分，例如当最终的产品是固体粉末时，除了含有异十五烷酸、棕榈酸、油酸、亚油酸与亚麻酸的五种主要成分的游离酸外，其余为原大豆培养基发酵后剩余留下的组分，例如蛋白质、氨基酸、脂肪、碳水化合物、无机盐等。
本发明主要是通过嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中，产生的5种游离酸，该游离脂肪酸组合物具有抑制肿瘤生长作用。因此，主要测定的是这5种组分的含量。
以下实施例均是如此，没有再表明大豆发酵粉除了5种游离脂肪酸组合物之外的其他组分。本发明其他描述粉末含有5种游离脂肪酸组合物的地方均可参照本实施例理解。
实施例2
将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中，该培养基组成为大豆浆10％，磷酸氢二钾0.02％，碳酸钙0.02％，酵母抽提物0.02％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，大豆油0.5％,其余为水。该培养基组成的“％”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下，培养基通入无菌空气，连续培养发酵24-48小时，发酵结束后于100-110℃灭菌，浓缩，加入2.1—3倍体积量的95％乙醇，取上清液，浓缩，蒸除乙醇，所得浓缩液得到大豆发酵提取液用5％HCl调节到PH＝4,离心沉淀，收集沉淀物，加入95％乙醇，取上清液浓缩后冷冻干燥获得到黄褐色粉末的大豆发酵粉。该粉末含有异十五烷酸1.7％，棕榈酸0.86％，油酸1.03％，亚油酸1.62％，亚麻酸0.19％。
实施例3
将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中，该培养基组成为大豆浆10％，磷酸氢二钾0.02％，碳酸钙0.02％，酵母抽提物0.02％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，大豆油0.5％,其余为水。该培养基组成的“％”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下，培养基通入无菌空气，连续培养发酵24-48小时，发酵结束后于100-110℃灭菌，浓缩，加入2.1—3倍体积量的95％乙醇，取上清液，浓缩，蒸除乙醇，所得浓缩液得到大豆发酵提取液用5％HCl调节到PH＝4,离心沉淀，收集沉淀物，该沉淀物用水溶解后，5-15倍水溶解后加入乙酸乙酯，分离出上层清液浓缩，蒸干后用95％乙醇溶解，分取上清液浓缩后冷冻干燥获得到黄褐色粉末的大豆发酵粉。该粉末含有异十五烷酸2.12％，棕榈酸1.25％，油酸0.87％，亚油酸1.09％，亚麻酸0.13％。
实施例4
将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中，该培养基组成为大豆浆10％，磷酸氢二钾0.02％，碳酸钙0.02％，酵母抽提物0.02％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，大豆油0.5％,其余为水。该培养基组成的“％”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下，培养基通入无菌空气，连续培养发酵24-48小时，发酵结束后于100-110℃灭菌，浓缩，经喷雾干燥后得到淡黄色固体粉末，将此粉末用5倍重量的乙酸乙酯用渗漉法提取，蒸除乙酸乙酯溶剂后用60-95％的乙醇溶解，分除油层后蒸除乙醇，经冷冻干燥获得到固体粉末的大豆发酵粉。该粉末含有异十五烷酸2.43％，棕榈酸1.51％，油酸1.9％，亚油酸3.16％，亚麻酸0.95％。
实施例5
一、发酵过程：将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中，该培养基组成为大豆浆10％，磷酸氢二钾0.02％，碳酸钙0.02％，酵母抽提物0.02％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，大豆油0.5％,其余为水。该培养基组成的“％”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下，培养基通入无菌空气，连续培养发酵24-48小时。在过程中连续检测游离脂肪酸的含量，见表1与图1。
表1发酵过程游离脂肪酸变化曲线
二、游离脂肪酸的检测方法为：
1.液相色谱条件：
色谱柱：120c18柱(4.6*250mm,5μm)，保护柱：120，2.1*10mm,5μm,120A0，柱温：30℃，检测波长：242nm，流速：1mL/min，运行梯度程序。
2.标准曲线的制备
2.1标准溶液的配制：取SBA对照品约20mg，油酸对照品约100mg，亚油酸对照品约20mg，亚麻酸对照品约20mg，棕榈酸对照品约20mg，十八酸对照品约20mg，置于50mL的容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，为对照品贮备液。
2.2内标溶液的配制：取十三酸100mg，精密称定，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，为内标贮备液。
2.3对照液衍生化
100μl混合对照液加入十三酸内标40μl，N2吹干，精密加入ω-溴代苯乙酮(20mg/mL)和三乙胺(25mg/mL)各180μL，乙腈900μL，试管加盖密封，混合摇匀，于55℃水浴锅中加热15min，冷却至室温后，精密加入乙酸溶液260μL，于55℃水浴锅中加热5min，N2吹干，精密加入甲醇2mL，超声溶解振摇混匀，用0.45μm的过滤头过滤到进样小瓶中。
3.样品处理：
3.1精密称取大豆发酵液约10.0g至50mL的具塞比色管中，加入内标溶液1mL，加萃取剂(异丙醇：正已烷:0.5M硫酸＝40：10：1)提取，冰浴超声30min，回至室温，定容50mL，摇匀，待上清液澄清时，用滤纸进行过滤，取滤液备用。
3.2取上述滤液1mL，N2吹干，依照2.3N2吹干后，加入ω-溴代苯乙酮相同步骤处理。
4.含量测定：照高效液相色谱法测定
色谱条件
选用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂色谱柱，以水：乙腈：甲醇(20：65：15)为初始流动相，检测波长为242nm，流速：1.0ml/min，柱温：30℃条件下以梯度程序运行。
测定法
分别取混合对照液和大豆发酵液衍生化样品1μl，进液相色谱仪，记录色谱图，以内标法计算发酵液样品中各游离脂肪酸含量。
三、游离脂肪酸的高效液相色谱含量测定图谱如图2所示。
实施例6:实施例2-4冻干大豆发酵粉对PC-3细胞的增殖抑制活性
试验目的：评价实施例2-4冻干大豆发酵粉对PC-3细胞增殖效应的影响。
测试细胞株：PC-3(人前列腺癌细胞)
观察指标：实施例2-4冻干大豆发酵粉对PC-3细胞增殖抑制率
检测方法：SRB法
作用时间：72hr
试验批次：2批次
试剂、耗材与仪器：
实验用水为国药集团产蒸馏水；所用试剂均购自国药集团化学试剂有限公司；实验读板用全波长型酶标仪为Molecular Device公司产品，型号：SpectraMax 190。阳性对照物阿霉素(ADR)购买自大连美仑生物技术有限公司。
样品配制：
准确称取10.0g实施例2或实施例3或实施例4的冻干大豆发酵粉到烧杯中，加水100ml，0.1M氢氧化钠调节pH8，烧杯置于80℃水浴加热1小时，冷却至室温，10000r/min离心20分钟，取上清液用滤纸过滤，收集滤液，118℃/30分钟高压灭菌后，常温保存。
试验方法：
PC-3细胞的生长抑制检测采用SRB方法。
具体步骤如下：处于对数生长期的细胞按合适密度接种至96孔培养板，每孔90μL，培养过夜后，加入不同浓度的药物作用72h，每个浓度设三复孔，并设相应浓度的溶媒对照及无细胞调零孔。作用结束后，贴壁细胞倾去培养液，加入10％(w/v)三氯乙酸(100酸(三孔)于4℃固定1h，随后用蒸馏水冲洗五次，室温干燥后，每孔加入SRB溶液(Sigma，St.Louis，MO，U.S.A)(4mg/mL，溶于1％冰乙酸)100μL，室温下孵育染色15min后，用1％冰乙酸冲洗五次洗去未结合的SRB，室温干燥后，每孔加入10mM Tris溶液100μL，SpectraMax190酶标仪测定560nm波长下的光密度(OD值)。采用以下列公式计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率(％)：
抑制率(％)＝(OD对照孔-OD给药孔)/OD对照孔×100％
IC50值采用酶标仪随机附带软件以四参数法回归求得。
实验结果：
1.该批次化合物对PC-3细胞增殖抑制率如表2所示；
2.阳性化合物ADR活性与文献报导相近。阳性化合物ADR活性对PC-3细胞增殖抑制活性如表3所示。
表2.冻干大豆发酵粉对PC-3细胞的增殖抑制活性(％)
表3.阳性化合物对PC-3细胞增殖抑制活性(％)
实施例7：大豆发酵粉对大鼠动脉环萌芽的抑制作用
摘要：在大鼠动脉环血管新生模型上，大豆发酵粉溶液不同浓度(每孔0.11μL、0.33μL、1.1μL、3.3μL、10.0μL)作用7天后，对大鼠动脉环微血管新生有剂量依赖的抑制作用，0.33μL每孔的大豆发酵粉水溶液即可抑制血管萌芽的发生。
1.试验目的：选用大鼠动脉环模型评价大豆发酵粉对的肿瘤新生血管生成抑制作用。
2.仪器：荧光显微镜Olympus(BX-51，Olympus,Tokyo)产品。
3.动物及试剂：
SD(Sprague Dawley)大鼠，由上海实验动物中心提供，许可证编号：SCXK(沪)2007-0005。M199培养基购自Gibco公司。Matrigel为BD(Becton Dickinson Labware,MA,USA)公司产品。
4.受试物：
实施例1-4任一的大豆发酵粉溶于水配制成为棕色的大豆发酵粉溶液。
5.阳性对照药：
Su11248购自LC LabORATORIES公司
配制方法：用DMSO溶解成10-2mol/L，-40℃保存，临用时稀释至所需浓度。
6.实验方法：
选用6周龄SD大鼠，乙醚麻醉后，分离主动脉。用无血清M199培养液冲洗至无残存血迹。用手术刀将动脉切成1mm厚的薄片置于96孔板中，每孔加入70μl Matrigel包埋，37℃孵育1h。每孔加入含有不同体积的大豆发酵粉水溶液(0、0.11μL、0.33μL、1.1μL、3.3μL、10.0μL)的M199完全培养液，培养箱内常规培养，第7天取出，显微镜下观察，并拍照，如图3所示。
7.结果与讨论：
大鼠动脉环试验可以模拟血管生成的多个步骤，包括内皮细胞增殖、迁移和管腔形成多个环节，因此应用这一模型进一步验证大豆发酵粉溶液的抗新生血管生成的能力。大鼠动脉环包埋于基质胶内，用含20％血清的M199培养基培养2-3天后，动脉环外侧就会出现血管萌芽，随着培养时间的延长，微血管数量不断增多，长度也不断增加。
如图3所示，动脉环包埋于Matrigel内7天后，对照组中动脉环上生出的微血管呈现浓密的状态。大豆发酵粉水溶液与大鼠动脉环共培养后则能剂量依赖的抑制动脉环血管萌芽和生长，其中0.33μL、1.1μL、3.3μL、10.0μL作用后对大鼠动脉环新生血管的生成具有非常显著的抑制活性，基本能完全抑制血管萌芽的发生，每孔0.11μL的大豆发酵粉溶液对大鼠动脉环微血管生长没有抑制作用。阳性对照Su11248在5.0μM浓度与大鼠动脉环共同培养后，动脉环上的血管萌生及出芽的长度显著减少。
本实验提示大豆发酵粉有抑制肿瘤新生血管生成，防止肿瘤生长的作用。
实施例8：大豆发酵粉对小鼠S180肉瘤的实验治疗作用
实验目的：观察不同浓度大豆发酵粉对小鼠S180肉瘤的生长抑制作用及作用强度。
受试物：
将实施例3冻干大豆发酵粉和实施例2冻干大豆发酵粉，按所需浓度溶于纯水，115℃蒸汽灭菌，均为粘稠液体。
剂量设置：
实施例3冻干大豆发酵粉30％(质量体积浓度g/L,下同)、实施例3冻干大豆发酵粉20％、实施例3冻干大豆发酵粉10％、实施例2冻干大豆发酵粉30％、实施例2冻干大豆发酵粉20％、实施例2冻干大豆发酵粉10％，液体样品，均按每只小鼠0.4ml给药。
动物：
KM小鼠，雌性，42±2日龄，体重20±2g，由中国科学院上海实验动物中心提供。合格证编号：SCXK(沪)(2008－0049)。每组动物数：10只。
移植瘤：
小鼠肉瘤S180，由KM小鼠腹水传代保存。
实验方法：
取生长良好的7-11天的S180瘤种，将瘤组织制成1－2×107/ml细胞悬液，小鼠右侧腋部皮下接种0.2ml/只。接种24小时后随机分笼，实施例3冻干大豆发酵粉30％、实施例3冻干大豆发酵粉20％、实施例3冻干大豆发酵粉10％、实施例2冻干大豆发酵粉30％、实施例2冻干大豆发酵粉20％、实施例2冻干大豆发酵粉10％于接种第1天开始每天口服给药1次；5-Fu组于肿瘤接种后第1、4天静脉注射给药2次，50mg/kg每鼠。第0、9天逐个称量小鼠体重。第9天处死动物，称瘤重，计算各组平均瘤重，按下列公式求出肿瘤抑制率并进行t检验。肿瘤抑制率(％)＝(空白对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重)×100％
疗效评价标准：
肿瘤抑制率<40％为无效；肿瘤抑制率≥40，并经统计学处理p<0.05为有效。
结果和结论：
结果显示于肿瘤接种后第1日开始每天口服给药一次，连续给药9天后，实施例3冻干大豆发酵粉30％组对小鼠S180肉瘤有较显著的抑制作用，在第八天的抑制率为57.21％，实施例3冻干大豆发酵粉20％组(表4简称实施例3的30％，下同)能够一定程度地减缓小鼠S180肉瘤的生长，在第八天的抑制率为43.02％。实施例2冻干大豆发酵粉10％组对小鼠S180肉瘤有较显著的抑制作用，在第八天的抑制率为52.30％。每天口服给药不同浓度大豆发酵粉对小鼠S180的实验性治疗结果见表4、5所示。各组小鼠在实验期间均生长良好，体重无下降，未出现腹泻。
表4.不同浓度大豆发酵粉对小鼠S180肉瘤的实验治疗作用
注：以溶剂对照组为对照计算抑瘤率；student’s t test,vs溶剂对照组
表5.不同浓度大豆发酵粉对S180肉瘤小鼠体重的影响
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌，其特征在于，该嗜麦芽寡养单胞菌的菌株编号为YZH001，该嗜麦芽寡养单胞菌的保藏号为CGMCC No.5690。
2.一种含游离脂肪酸的大豆发酵液的生产工艺，其特征在于，包括如下步骤：首先将权利要求1所述的能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌接种至大豆发酵培养基中，该大豆发酵培养基组成为大豆浆10％，磷酸氢二钾0.02％，碳酸钙0.02％，酵母抽提物0.02％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，大豆油0.5％,其余为水；该培养基组成的“％”表示的是质量体积浓度g/L；然后在28-37℃条件下，该大豆发酵培养基通入无菌空气，连续培养发酵24-48小时；发酵结束后于100-110℃灭菌，得到含游离脂肪酸的大豆发酵液。
3.一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉，其特征在于，其是将权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后，将发酵液浓缩后经喷雾干燥或冷冻干燥获得的，获得的大豆发酵粉按照质量百分数计，含有异十五烷酸0.1-0.5％、棕榈酸0.1-0.5％、油酸0.1-0.8％、亚油酸0.1-1.2％与亚麻酸0.02-0.15％。
4.一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉，其特征在于，其是将权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后，加入2.1—3倍体积量的95％乙醇，取上清液，浓缩，蒸除乙醇，所得浓缩液用5％HCl调节到pH＝4,离心沉淀，收集沉淀物，加入95％乙醇，取上清液浓缩后冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计，含有异十五烷酸1-5％、棕榈酸0.5-3％、油酸0.5-3％、亚油酸1-5％与亚麻酸0.1-2％。
5.一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉，其特征在于，其是将权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后，加入2.1—3倍体积量的95％乙醇，取上清液，浓缩，蒸除乙醇，所得浓缩液用乙酸乙脂提取，取乙酸乙脂层，蒸干后用95％乙醇溶解，分取上清液浓缩后冷冻干燥获得的，获得的大豆发酵粉按照质量百分数计，含有异十五烷酸1.5-6％、棕榈酸0.5-3％、油酸0.5-3％、亚油酸0.8-5％与亚麻酸0.1-0.8％。
6.一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉，其特征在于，其是将权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后，经喷雾干燥或冷冻干燥后得到固体粉末，将此粉末用乙酸乙酯用渗漉法提取，蒸除乙酸乙酯溶剂后用60-95％的乙醇溶解，分除不溶性的油层后蒸除乙醇，经冷冻干燥获得的，获得的大豆发酵粉按照质量百分数计，含有异十五烷酸1.5-6％、棕榈酸1-3.5％、油酸1-3.5％、亚油酸2-8％与亚麻酸0.3-1.8％。
7.权利要求3-6任一所述的由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉在制备具有抑制肿瘤生长作用的制品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述制品为口服液体制品。
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