CN109022309A - 一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用 - Google Patents
一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109022309A CN109022309A CN201810843909.1A CN201810843909A CN109022309A CN 109022309 A CN109022309 A CN 109022309A CN 201810843909 A CN201810843909 A CN 201810843909A CN 109022309 A CN109022309 A CN 109022309A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acid
- fermented soybean
- unit cell
- fermentation
- oligotrophy unit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 title claims abstract description 20
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims abstract description 112
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims abstract description 112
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 77
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 34
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 28
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 26
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 claims abstract description 22
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 claims abstract description 21
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 20
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 claims abstract description 19
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- YAQXGBBDJYBXKL-UHFFFAOYSA-N iron(2+);1,10-phenanthroline;dicyanide Chemical compound [Fe+2].N#[C-].N#[C-].C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1.C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 YAQXGBBDJYBXKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 claims abstract description 14
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 35
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 19
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 10
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 7
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 7
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 4
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 4
- 238000005325 percolation Methods 0.000 claims description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 claims description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 claims 1
- XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N ethyl acetoacetate Chemical compound CCOC(=O)CC(C)=O XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000013588 oral product Substances 0.000 claims 1
- 229940023486 oral product Drugs 0.000 claims 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 11
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 9
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 8
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- SZHOJFHSIKHZHA-UHFFFAOYSA-N tridecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(O)=O SZHOJFHSIKHZHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 3
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 125000002457 octadec-9-ynoyl group Chemical group C(CCCCCCCC#CCCCCCCCC)(=O)* 0.000 description 2
- LIGACIXOYTUXAW-UHFFFAOYSA-N phenacyl bromide Chemical compound BrCC(=O)C1=CC=CC=C1 LIGACIXOYTUXAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- BNRRFUKDMGDNNT-JQIJEIRASA-N (e)-16-methylheptadec-2-enoic acid Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCC\C=C\C(O)=O BNRRFUKDMGDNNT-JQIJEIRASA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000122973 Stenotrophomonas maltophilia Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000008236 heating water Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000010813 internal standard method Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940100688 oral solution Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- OSFBJERFMQCEQY-UHFFFAOYSA-N propylidene Chemical compound [CH]CC OSFBJERFMQCEQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
- A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
- A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
- A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明公开了一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用,该嗜麦芽寡养单胞菌的菌株编号为YZH001,该嗜麦芽寡养单胞菌的保藏号为CGMCC No.5690。该嗜麦芽寡养单胞菌YZH001在微生物发酵过程中产生了含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉,游离脂肪酸组合物主要是异十五烷酸、棕榈酸、油酸、亚油酸与亚麻酸。本发明由该嗜麦芽寡养单胞菌发酵培养后经提取后而得的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉具有抑制肿瘤生长作用。
Description
技术领域
本发明属于微生物菌株及应用领域,具体涉及一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用。
背景技术
癌症是威胁人类生命健康的最重大的疾病之一。在各种疾病中,恶性肿瘤的死亡率高居第二位。传统的抗癌药物研究主要着眼于细胞毒药物,这类抗癌药具有难以避免的选择性差、毒副作用大、易产生耐药性等缺点。生命科学的迅速发展为肿瘤治疗提供了许多新的策略,肿瘤的血管系统、癌基因产物及信号转导通路等成为抗癌药物作用的新靶点。近年的研究表明,血管生成是肿瘤生长、发展的必经之路,且与实体瘤的发生和转移有着密切的关系,许多肿瘤仅在新的血管生成之后才出现临床症状。如果没有血管生成,肿瘤很少超过1.0mm,实体瘤的生长、发育以及转移都依赖于新生血管生成提供营养,阻断肿瘤的血管生成成为新型抗肿瘤药物研究的重要方向,抑制肿瘤新生血管生成的肿瘤治疗方法特异性高、疗效好、不易产生耐药性且毒副作用低,成为治疗癌症的一种重要策略。
对于此种情况,加强癌症预防工作,对人们特别是癌症的高危人群,给予适当的补充营养,提高身体的抵抗有毒化学物质的侵袭,防止癌症的发生发展更为重要。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提出一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用,由该嗜麦芽寡养单胞菌发酵培养后经提取后而得的游离脂肪酸组合物具有抑制肿瘤生长作用。
所采用的技术方案为:
一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌,该嗜麦芽寡养单胞菌的菌株编号为YZH001,该嗜麦芽寡养单胞菌的保藏号为CGMCC No.5690。
一种含游离脂肪酸的大豆发酵液的生产工艺,其特征在于,包括如下步骤:首先将权利要求1所述的能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌接种至大豆发酵培养基中,该大豆发酵培养基组成为大豆浆10%,磷酸氢二钾0.02%,碳酸钙0.02%,酵母抽提物0.02%,硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,大豆油0.5%,其余为水;该大豆发酵培养基组成的“%”表示的是质量体积浓度g/L;然后在28-37℃条件下,培养基通入无菌空气,连续培养发酵24-48小时;发酵结束后于100-110℃灭菌,得到含游离脂肪酸的大豆发酵液。
一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉,其是将上述方案所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后,将发酵液浓缩后经喷雾干燥或冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计,含有异十五烷酸0.1-0.5%、棕榈酸0.1-0.5%、油酸0.1-0.8%、亚油酸0.1-1.2%与亚麻酸0.02-0.15%。
上述五种游离脂肪酸的化学分子式和结构式为:
异十五烷酸
分子式:C15H30O2结构式:(CH3)2CH(CH2)11COOH
棕榈酸
分子式:C16H32O2,结构式:CH3(CH2)14COOH
油酸
分子式:C18H34O2,结构式:CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH
亚油酸
分子式:C18H32O2,结构式:CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH
亚麻酸
分子式:C18H32O2,
结构式:CH3CH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH
本说明书所述亚麻酸为α-亚麻酸。本说明书所述的异十五烷酸、棕榈酸、油酸、亚油酸与亚麻酸均分别对应具有上述化学分子式和结构式。
一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉,其是将上述方案所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后,加入2.1—3倍体积量的95%乙醇,取上清液,浓缩,蒸除乙醇,所得浓缩液用5%HCl调节到pH=4,离心沉淀,收集沉淀物,加入95%乙醇,取上清液浓缩后冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计,含有异十五烷酸1-5%、棕榈酸0.5-3%、油酸0.5-3%、亚油酸1-5%与亚麻酸0.1-2%。
一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉,其是将上述方案所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后,加入2.1—3倍体积量的95%乙醇,取上清液,浓缩,蒸除乙醇,所得浓缩液用乙酸乙脂提取,取乙酸乙脂层,蒸干后用95%乙醇溶解,分取上清液浓缩后冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计,含有异十五烷酸1.5-6%、棕榈酸0.5-3%、油酸0.5-3%、亚油酸0.8-5%与亚麻酸0.1-0.8%。
一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉,其是将上述方案所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后,经喷雾干燥或冷冻干燥后得到固体粉末,将此粉末用乙酸乙酯用渗漉法提取,蒸除乙酸乙酯溶剂后用60-95%的乙醇溶解,分除不溶性的油层后蒸除乙醇,经冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计,含有异十五烷酸1.5-6%、棕榈酸1-3.5%、油酸1-3.5%、亚油酸2-8%与亚麻酸0.3-1.8%。
上述方案任一所述的由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉在制备具有抑制肿瘤生长作用的制品中的应用。
进一步地,制品可以为口服液制品。
本发明的有益效果在于:
本发明的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001在发酵过程中(可参见图1所示)是经过微生物代谢产生了游离脂肪酸组合物,该游离脂肪酸组合物主要是异十五烷酸、棕榈酸、油酸、亚油酸与亚麻酸。该组合物具有特定范围的含量。
嗜麦芽寡养单胞菌发酵培养后经提取后而得的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉具有抑制肿瘤生长作用,将其制成制品时,有利于补充人体的需要和吸收,提高人体抵抗化学毒物致癌的能力,预防癌症的发生。
附图说明
图1为实施例5的大豆发酵过程中游离脂肪酸的含量变化图。
图2为实施例5的游离脂肪酸的高效液相色谱含量测定图谱。
图3为实施例7的抑制大鼠动脉环的萌芽(4.0×)图。
具体实施方式
下面通过优选的实施例进一步详细阐述本发明,但不应理解为对本发明保护范围的限制。
生物保藏
本发明所用的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),于2011年12月31日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮政编码:100101)(保藏单位的缩写为CGMCC),菌株编号:YZH001,保藏编号为CGMCC No.5690。
另附有证明文件:
证明文件1:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏证明文件。
实施例1
将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中,该培养基组成为大豆浆10%,磷酸氢二钾0.02%,碳酸钙0.02%,酵母抽提物0.02%,硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,大豆油0.5%,其余为水。该培养基组成的“%”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下,培养基通入无菌空气,连续培养发酵24-48小时,发酵结束后于100-110℃灭菌,浓缩,喷雾干燥得到黄色粉末的大豆发酵粉,该粉末含有异十五烷酸0.13%,棕榈酸0.21%,油酸0.18%,亚油酸0.34%,亚麻酸0.08%。该粉末的余量为大豆发酵培养基中的其他组分。该组成的“%”表示的是质量浓度g/g,即该组分占整体质量的百分比,以下同。
由于本发明主要是通过嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中,产生的5种游离酸,并测定5种游离酸的含量。其余组分均是大豆发酵培养基里的组分,例如当最终的产品是固体粉末时,除了含有异十五烷酸、棕榈酸、油酸、亚油酸与亚麻酸的五种主要成分的游离酸外,其余为原大豆培养基发酵后剩余留下的组分,例如蛋白质、氨基酸、脂肪、碳水化合物、无机盐等。
本发明主要是通过嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中,产生的5种游离酸,该游离脂肪酸组合物具有抑制肿瘤生长作用。因此,主要测定的是这5种组分的含量。
以下实施例均是如此,没有再表明大豆发酵粉除了5种游离脂肪酸组合物之外的其他组分。本发明其他描述粉末含有5种游离脂肪酸组合物的地方均可参照本实施例理解。
实施例2
将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中,该培养基组成为大豆浆10%,磷酸氢二钾0.02%,碳酸钙0.02%,酵母抽提物0.02%,硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,大豆油0.5%,其余为水。该培养基组成的“%”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下,培养基通入无菌空气,连续培养发酵24-48小时,发酵结束后于100-110℃灭菌,浓缩,加入2.1—3倍体积量的95%乙醇,取上清液,浓缩,蒸除乙醇,所得浓缩液得到大豆发酵提取液用5%HCl调节到PH=4,离心沉淀,收集沉淀物,加入95%乙醇,取上清液浓缩后冷冻干燥获得到黄褐色粉末的大豆发酵粉。该粉末含有异十五烷酸1.7%,棕榈酸0.86%,油酸1.03%,亚油酸1.62%,亚麻酸0.19%。
实施例3
将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中,该培养基组成为大豆浆10%,磷酸氢二钾0.02%,碳酸钙0.02%,酵母抽提物0.02%,硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,大豆油0.5%,其余为水。该培养基组成的“%”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下,培养基通入无菌空气,连续培养发酵24-48小时,发酵结束后于100-110℃灭菌,浓缩,加入2.1—3倍体积量的95%乙醇,取上清液,浓缩,蒸除乙醇,所得浓缩液得到大豆发酵提取液用5%HCl调节到PH=4,离心沉淀,收集沉淀物,该沉淀物用水溶解后,5-15倍水溶解后加入乙酸乙酯,分离出上层清液浓缩,蒸干后用95%乙醇溶解,分取上清液浓缩后冷冻干燥获得到黄褐色粉末的大豆发酵粉。该粉末含有异十五烷酸2.12%,棕榈酸1.25%,油酸0.87%,亚油酸1.09%,亚麻酸0.13%。
实施例4
将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中,该培养基组成为大豆浆10%,磷酸氢二钾0.02%,碳酸钙0.02%,酵母抽提物0.02%,硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,大豆油0.5%,其余为水。该培养基组成的“%”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下,培养基通入无菌空气,连续培养发酵24-48小时,发酵结束后于100-110℃灭菌,浓缩,经喷雾干燥后得到淡黄色固体粉末,将此粉末用5倍重量的乙酸乙酯用渗漉法提取,蒸除乙酸乙酯溶剂后用60-95%的乙醇溶解,分除油层后蒸除乙醇,经冷冻干燥获得到固体粉末的大豆发酵粉。该粉末含有异十五烷酸2.43%,棕榈酸1.51%,油酸1.9%,亚油酸3.16%,亚麻酸0.95%。
实施例5
一、发酵过程:将嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种的大豆发酵培养基中,该培养基组成为大豆浆10%,磷酸氢二钾0.02%,碳酸钙0.02%,酵母抽提物0.02%,硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,大豆油0.5%,其余为水。该培养基组成的“%”表示的是质量体积浓度g/L。在28-37℃条件下,培养基通入无菌空气,连续培养发酵24-48小时。在过程中连续检测游离脂肪酸的含量,见表1与图1。
表1发酵过程游离脂肪酸变化曲线
二、游离脂肪酸的检测方法为:
1.液相色谱条件:
色谱柱:120c18柱(4.6*250mm,5μm),保护柱:120,2.1*10mm,5μm,120A0,柱温:30℃,检测波长:242nm,流速:1mL/min,运行梯度程序。
2.标准曲线的制备
2.1标准溶液的配制:取SBA对照品约20mg,油酸对照品约100mg,亚油酸对照品约20mg,亚麻酸对照品约20mg,棕榈酸对照品约20mg,十八酸对照品约20mg,置于50mL的容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,为对照品贮备液。
2.2内标溶液的配制:取十三酸100mg,精密称定,置于100mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,为内标贮备液。
2.3对照液衍生化
100μl混合对照液加入十三酸内标40μl,N2吹干,精密加入ω-溴代苯乙酮(20mg/mL)和三乙胺(25mg/mL)各180μL,乙腈900μL,试管加盖密封,混合摇匀,于55℃水浴锅中加热15min,冷却至室温后,精密加入乙酸溶液260μL,于55℃水浴锅中加热5min,N2吹干,精密加入甲醇2mL,超声溶解振摇混匀,用0.45μm的过滤头过滤到进样小瓶中。
3.样品处理:
3.1精密称取大豆发酵液约10.0g至50mL的具塞比色管中,加入内标溶液1mL,加萃取剂(异丙醇:正已烷:0.5M硫酸=40:10:1)提取,冰浴超声30min,回至室温,定容50mL,摇匀,待上清液澄清时,用滤纸进行过滤,取滤液备用。
3.2取上述滤液1mL,N2吹干,依照2.3N2吹干后,加入ω-溴代苯乙酮相同步骤处理。
4.含量测定:照高效液相色谱法测定
色谱条件
选用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂色谱柱,以水:乙腈:甲醇(20:65:15)为初始流动相,检测波长为242nm,流速:1.0ml/min,柱温:30℃条件下以梯度程序运行。
测定法
分别取混合对照液和大豆发酵液衍生化样品1μl,进液相色谱仪,记录色谱图,以内标法计算发酵液样品中各游离脂肪酸含量。
三、游离脂肪酸的高效液相色谱含量测定图谱如图2所示。
实施例6:实施例2-4冻干大豆发酵粉对PC-3细胞的增殖抑制活性
试验目的:评价实施例2-4冻干大豆发酵粉对PC-3细胞增殖效应的影响。
测试细胞株:PC-3(人前列腺癌细胞)
观察指标:实施例2-4冻干大豆发酵粉对PC-3细胞增殖抑制率
检测方法:SRB法
作用时间:72hr
试验批次:2批次
试剂、耗材与仪器:
实验用水为国药集团产蒸馏水;所用试剂均购自国药集团化学试剂有限公司;实验读板用全波长型酶标仪为Molecular Device公司产品,型号:SpectraMax 190。阳性对照物阿霉素(ADR)购买自大连美仑生物技术有限公司。
样品配制:
准确称取10.0g实施例2或实施例3或实施例4的冻干大豆发酵粉到烧杯中,加水100ml,0.1M氢氧化钠调节pH8,烧杯置于80℃水浴加热1小时,冷却至室温,10000r/min离心20分钟,取上清液用滤纸过滤,收集滤液,118℃/30分钟高压灭菌后,常温保存。
试验方法:
PC-3细胞的生长抑制检测采用SRB方法。
具体步骤如下:处于对数生长期的细胞按合适密度接种至96孔培养板,每孔90μL,培养过夜后,加入不同浓度的药物作用72h,每个浓度设三复孔,并设相应浓度的溶媒对照及无细胞调零孔。作用结束后,贴壁细胞倾去培养液,加入10%(w/v)三氯乙酸(100酸(三孔)于4℃固定1h,随后用蒸馏水冲洗五次,室温干燥后,每孔加入SRB溶液(Sigma,St.Louis,MO,U.S.A)(4mg/mL,溶于1%冰乙酸)100μL,室温下孵育染色15min后,用1%冰乙酸冲洗五次洗去未结合的SRB,室温干燥后,每孔加入10mM Tris溶液100μL,SpectraMax190酶标仪测定560nm波长下的光密度(OD值)。采用以下列公式计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率(%):
抑制率(%)=(OD对照孔-OD给药孔)/OD对照孔×100%
IC50值采用酶标仪随机附带软件以四参数法回归求得。
实验结果:
1.该批次化合物对PC-3细胞增殖抑制率如表2所示;
2.阳性化合物ADR活性与文献报导相近。阳性化合物ADR活性对PC-3细胞增殖抑制活性如表3所示。
表2.冻干大豆发酵粉对PC-3细胞的增殖抑制活性(%)
表3.阳性化合物对PC-3细胞增殖抑制活性(%)
实施例7:大豆发酵粉对大鼠动脉环萌芽的抑制作用
摘要:在大鼠动脉环血管新生模型上,大豆发酵粉溶液不同浓度(每孔0.11μL、0.33μL、1.1μL、3.3μL、10.0μL)作用7天后,对大鼠动脉环微血管新生有剂量依赖的抑制作用,0.33μL每孔的大豆发酵粉水溶液即可抑制血管萌芽的发生。
1.试验目的:选用大鼠动脉环模型评价大豆发酵粉对的肿瘤新生血管生成抑制作用。
2.仪器:荧光显微镜Olympus(BX-51,Olympus,Tokyo)产品。
3.动物及试剂:
SD(Sprague Dawley)大鼠,由上海实验动物中心提供,许可证编号:SCXK(沪)2007-0005。M199培养基购自Gibco公司。Matrigel为BD(Becton Dickinson Labware,MA,USA)公司产品。
4.受试物:
实施例1-4任一的大豆发酵粉溶于水配制成为棕色的大豆发酵粉溶液。
5.阳性对照药:
Su11248购自LC LabORATORIES公司
配制方法:用DMSO溶解成10-2mol/L,-40℃保存,临用时稀释至所需浓度。
6.实验方法:
选用6周龄SD大鼠,乙醚麻醉后,分离主动脉。用无血清M199培养液冲洗至无残存血迹。用手术刀将动脉切成1mm厚的薄片置于96孔板中,每孔加入70μl Matrigel包埋,37℃孵育1h。每孔加入含有不同体积的大豆发酵粉水溶液(0、0.11μL、0.33μL、1.1μL、3.3μL、10.0μL)的M199完全培养液,培养箱内常规培养,第7天取出,显微镜下观察,并拍照,如图3所示。
7.结果与讨论:
大鼠动脉环试验可以模拟血管生成的多个步骤,包括内皮细胞增殖、迁移和管腔形成多个环节,因此应用这一模型进一步验证大豆发酵粉溶液的抗新生血管生成的能力。大鼠动脉环包埋于基质胶内,用含20%血清的M199培养基培养2-3天后,动脉环外侧就会出现血管萌芽,随着培养时间的延长,微血管数量不断增多,长度也不断增加。
如图3所示,动脉环包埋于Matrigel内7天后,对照组中动脉环上生出的微血管呈现浓密的状态。大豆发酵粉水溶液与大鼠动脉环共培养后则能剂量依赖的抑制动脉环血管萌芽和生长,其中0.33μL、1.1μL、3.3μL、10.0μL作用后对大鼠动脉环新生血管的生成具有非常显著的抑制活性,基本能完全抑制血管萌芽的发生,每孔0.11μL的大豆发酵粉溶液对大鼠动脉环微血管生长没有抑制作用。阳性对照Su11248在5.0μM浓度与大鼠动脉环共同培养后,动脉环上的血管萌生及出芽的长度显著减少。
本实验提示大豆发酵粉有抑制肿瘤新生血管生成,防止肿瘤生长的作用。
实施例8:大豆发酵粉对小鼠S180肉瘤的实验治疗作用
实验目的:观察不同浓度大豆发酵粉对小鼠S180肉瘤的生长抑制作用及作用强度。
受试物:
将实施例3冻干大豆发酵粉和实施例2冻干大豆发酵粉,按所需浓度溶于纯水,115℃蒸汽灭菌,均为粘稠液体。
剂量设置:
实施例3冻干大豆发酵粉30%(质量体积浓度g/L,下同)、实施例3冻干大豆发酵粉20%、实施例3冻干大豆发酵粉10%、实施例2冻干大豆发酵粉30%、实施例2冻干大豆发酵粉20%、实施例2冻干大豆发酵粉10%,液体样品,均按每只小鼠0.4ml给药。
动物:
KM小鼠,雌性,42±2日龄,体重20±2g,由中国科学院上海实验动物中心提供。合格证编号:SCXK(沪)(2008-0049)。每组动物数:10只。
移植瘤:
小鼠肉瘤S180,由KM小鼠腹水传代保存。
实验方法:
取生长良好的7-11天的S180瘤种,将瘤组织制成1-2×107/ml细胞悬液,小鼠右侧腋部皮下接种0.2ml/只。接种24小时后随机分笼,实施例3冻干大豆发酵粉30%、实施例3冻干大豆发酵粉20%、实施例3冻干大豆发酵粉10%、实施例2冻干大豆发酵粉30%、实施例2冻干大豆发酵粉20%、实施例2冻干大豆发酵粉10%于接种第1天开始每天口服给药1次;5-Fu组于肿瘤接种后第1、4天静脉注射给药2次,50mg/kg每鼠。第0、9天逐个称量小鼠体重。第9天处死动物,称瘤重,计算各组平均瘤重,按下列公式求出肿瘤抑制率并进行t检验。肿瘤抑制率(%)=(空白对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重)×100%
疗效评价标准:
肿瘤抑制率<40%为无效;肿瘤抑制率≥40,并经统计学处理p<0.05为有效。
结果和结论:
结果显示于肿瘤接种后第1日开始每天口服给药一次,连续给药9天后,实施例3冻干大豆发酵粉30%组对小鼠S180肉瘤有较显著的抑制作用,在第八天的抑制率为57.21%,实施例3冻干大豆发酵粉20%组(表4简称实施例3的30%,下同)能够一定程度地减缓小鼠S180肉瘤的生长,在第八天的抑制率为43.02%。实施例2冻干大豆发酵粉10%组对小鼠S180肉瘤有较显著的抑制作用,在第八天的抑制率为52.30%。每天口服给药不同浓度大豆发酵粉对小鼠S180的实验性治疗结果见表4、5所示。各组小鼠在实验期间均生长良好,体重无下降,未出现腹泻。
表4.不同浓度大豆发酵粉对小鼠S180肉瘤的实验治疗作用
注:以溶剂对照组为对照计算抑瘤率;student’s t test,vs溶剂对照组
表5.不同浓度大豆发酵粉对S180肉瘤小鼠体重的影响
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明,它们并非用以限制本发明的保护范围,凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌,其特征在于,该嗜麦芽寡养单胞菌的菌株编号为YZH001,该嗜麦芽寡养单胞菌的保藏号为CGMCC No.5690。
2.一种含游离脂肪酸的大豆发酵液的生产工艺,其特征在于,包括如下步骤:首先将权利要求1所述的能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌接种至大豆发酵培养基中,该大豆发酵培养基组成为大豆浆10%,磷酸氢二钾0.02%,碳酸钙0.02%,酵母抽提物0.02%,硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,大豆油0.5%,其余为水;该培养基组成的“%”表示的是质量体积浓度g/L;然后在28-37℃条件下,该大豆发酵培养基通入无菌空气,连续培养发酵24-48小时;发酵结束后于100-110℃灭菌,得到含游离脂肪酸的大豆发酵液。
3.一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉,其特征在于,其是将权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后,将发酵液浓缩后经喷雾干燥或冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计,含有异十五烷酸0.1-0.5%、棕榈酸0.1-0.5%、油酸0.1-0.8%、亚油酸0.1-1.2%与亚麻酸0.02-0.15%。
4.一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉,其特征在于,其是将权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后,加入2.1—3倍体积量的95%乙醇,取上清液,浓缩,蒸除乙醇,所得浓缩液用5%HCl调节到pH=4,离心沉淀,收集沉淀物,加入95%乙醇,取上清液浓缩后冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计,含有异十五烷酸1-5%、棕榈酸0.5-3%、油酸0.5-3%、亚油酸1-5%与亚麻酸0.1-2%。
5.一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉,其特征在于,其是将权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后,加入2.1—3倍体积量的95%乙醇,取上清液,浓缩,蒸除乙醇,所得浓缩液用乙酸乙脂提取,取乙酸乙脂层,蒸干后用95%乙醇溶解,分取上清液浓缩后冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计,含有异十五烷酸1.5-6%、棕榈酸0.5-3%、油酸0.5-3%、亚油酸0.8-5%与亚麻酸0.1-0.8%。
6.一种由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉,其特征在于,其是将权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌YZH001菌接种在大豆发酵培养基中发酵后将发酵液浓缩后,经喷雾干燥或冷冻干燥后得到固体粉末,将此粉末用乙酸乙酯用渗漉法提取,蒸除乙酸乙酯溶剂后用60-95%的乙醇溶解,分除不溶性的油层后蒸除乙醇,经冷冻干燥获得的,获得的大豆发酵粉按照质量百分数计,含有异十五烷酸1.5-6%、棕榈酸1-3.5%、油酸1-3.5%、亚油酸2-8%与亚麻酸0.3-1.8%。
7.权利要求3-6任一所述的由大豆发酵产生的含有游离脂肪酸组合物的大豆发酵粉在制备具有抑制肿瘤生长作用的制品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述制品为口服液体制品。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810843909.1A CN109022309B (zh) | 2018-07-27 | 2018-07-27 | 一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810843909.1A CN109022309B (zh) | 2018-07-27 | 2018-07-27 | 一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109022309A true CN109022309A (zh) | 2018-12-18 |
CN109022309B CN109022309B (zh) | 2023-04-18 |
Family
ID=64647189
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810843909.1A Active CN109022309B (zh) | 2018-07-27 | 2018-07-27 | 一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109022309B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3815546A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-05 | Biomillenia SAS | Medical compositions and their use in treating pancreatic cancer |
EP3815545A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-05 | Biomillenia SAS | Medical compositions and their uses |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1251296A (zh) * | 1998-10-16 | 2000-04-26 | 杨振华 | 一种抗癌物质的应用及其生产方法 |
-
2018
- 2018-07-27 CN CN201810843909.1A patent/CN109022309B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1251296A (zh) * | 1998-10-16 | 2000-04-26 | 杨振华 | 一种抗癌物质的应用及其生产方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
WOO-RI KANG等: "Stenotrophomonas maltophili", 《APPL ENVIRON MICROBIOL》 * |
朱友平: "脂肪酸的抗肿瘤作用", 《国际肿瘤学杂志》 * |
李静等: "植物油脂生物合成表面活性剂及产物分析", 《现代食品科技》 * |
桑萍等: "生物催化生成对苯二甲酸微生物协同作用的代谢途径分析", 《分析化学》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3815546A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-05 | Biomillenia SAS | Medical compositions and their use in treating pancreatic cancer |
EP3815545A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-05 | Biomillenia SAS | Medical compositions and their uses |
WO2021083975A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-06 | Biomillenia Sas | Medical compositions and their use in treating pancreatic cancer |
WO2021083948A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-06 | Biomillenia Sas | Medical compositions and their uses |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109022309B (zh) | 2023-04-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102366432B (zh) | 雪莲培养物提取物及其新用途 | |
CN103222988B (zh) | 一种美洲大蠊提取物及其制备方法和应用 | |
CN105193876B (zh) | 一种马齿苋提取物及其制备方法 | |
CN103190621A (zh) | 一种蜂胶软胶囊及其制备方法 | |
CN109022309A (zh) | 一种能够产游离脂肪酸的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用 | |
CN105287552B (zh) | 阿西替尼的应用 | |
CN108713447A (zh) | 一种高海拔地区太岁肉灵芝养殖方法及其保健品制备方法 | |
CN101365421A (zh) | 恢复lox和nrage蛋白质正常共同表达和相互作用的物质 | |
CN102018718B (zh) | 一种文冠果壳苷化合物的应用 | |
CN104789488A (zh) | 具有降胆固醇作用的鼠李糖乳杆菌及用途 | |
CN103301110A (zh) | 高良姜素类衍生物在制备防治白癜风药物中的用途 | |
CN110693880A (zh) | 一种尿石素制剂及其应用 | |
CN111544440A (zh) | 地奥司明及组合物在制备抗肥胖的产品方面中的应用 | |
CN106109536B (zh) | 用于神经退行性疾病或神经再生的中药组合物 | |
CN108992450A (zh) | 环黄芪醇衍生物在制备抗肝纤维化作用药物中的应用 | |
CN106966887A (zh) | 胶孢炭疽菌中分离的化合物及其制备方法与用途 | |
CN100408034C (zh) | 一种治疗白癜风、银屑病的中药制剂及其制备方法 | |
CN113546070A (zh) | 低聚茋类单体化合物Isohop在制备提高动物脂肪沉积的产品中的用途 | |
CN106074668B (zh) | 用于神经退行性疾病或神经再生的中药制剂 | |
CN108938709A (zh) | 一种烟豆水提取物及其用途 | |
CN116869867B (zh) | 一种具有ppar激动的天然油脂组合物及其制备方法和用途 | |
CN104922268A (zh) | 一种从天然植物中提取活性物质的方法 | |
CN117599095B (zh) | 一种白耙齿菌的应用 | |
CN113143945B (zh) | 一种天然产物在制备治疗肥胖及相关代谢性疾病药物中的应用 | |
CN111995603B (zh) | 一种具有抗氧化活性的倍半萜类化合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |