CN109010391A - 一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术 - Google Patents

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Abstract

本技术方案公开了一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，所述新鲜榛子叶活性成分是按如下方法制备的：以新鲜榛子叶为原料，用富锗矿泉水提取，分离，纯化，即得榛子素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素组成的新鲜榛子叶活性成分。

Description

一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，具体是涉及一种中药新鲜榛子叶中新鲜榛子叶活性成分的提取纯化技术。
背景技术
榛子叶为桦木科植物榛 Corylus heterophyllaFi sch. ex Bess. 的叶,广泛分布于东北、华北及陕西、甘肃等地。本品的果实用于调中,开胃,明目等,据资料记载其叶中含大量的鞣质成分,但至今尚未见详细报道。该植物叶中的鞣质成分进行了研究已有文献报道,从中分得十多个化合物，但尚未总含量50%以上总鞣质的提取技术报道。尤其是新鲜榛子叶中成分的提取分离更无相关报道。
矿泉水是含有溶解的矿物质或较多气体的水，国家标准中规定的九项界限指标包括锂、锶、锌、硒、溴化物、碘化物、偏硅酸、游离二氧化碳和溶解性总固体，矿泉水中必须有一项或一项以上达到界限指标的要求，其要求含量分别为（单位：mg/L）：锂、锶，锌、碘化物均≥0.2，硒≥0.01，溴化物≥1.0，偏硅酸≥25，游离二氧化碳≥250和溶解性总固体≥1000。市场上大部分矿泉水属于锶（Sr）型和偏硅酸型，同时也有其他矿物质成份的矿泉水。富锗矿泉水目前资源极少，锗是一种稀有元素，在自然界以有机锗及无机锗的形态存在着。自锗被发现之后，一直被用于制造工业。直到近年，科学家发现锗不仅具有半导体的功能，还具有许多医学、保健功效。而且这些有益于人体的功效，往往可以挽救人的生命。锗在人体中的主要功效包括增强和调节免疫力，抗突变，防癌抗癌。 抗自由基、抗氧化，延缓衰老，防治老年痴呆，提高生命活力，美容减肥。改善微循环，调节神经及内分泌系统的功能，防治动脉硬化，缓解三高和糖尿病症状。 消炎止痛，治疗骨质疏松症，消除肢体麻木等症状。因而锗有了“二十一世纪救命锗”的美誉，可谓得“锗”者得健康，锗终于揭开神秘的面纱，走进了人们的生活。
现代中药材重金属问题已比较突出，因此中药提取物去除有害重金属的研究急需加强。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新鲜榛子叶中活性成分的提取纯化技术。本发明是通过如下技术方案实现的：
本发明所用新鲜榛子叶为桦木科植物榛 Corylus heterophyllaFi sch. ex Bess.的叶。
一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，是通过如下步骤实现的:
（1）取新鲜榛子叶，破碎，用富锗矿泉水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液A；提取后的药渣再用富锗矿泉水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液B；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液E；
（2）将步骤（1）得到的提取液A在30℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液A，将步骤（1）得到的提取液B在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液B，将浓缩液A与浓缩液B合并，得浓缩液C；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-ToyopearHW40C凝胶-MCIgelCQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比10:90、20:80、30:70、40:60、50:50的乙醇-富锗矿泉水依次洗脱，每个梯度洗脱量为混合树脂重量的5倍，收集20:80、30:70、50:50的乙醇-富锗矿泉水洗脱液，回收溶剂，低温干燥得提取物A；
（4）将步骤（3）得到的提取物A加提取物A重量3倍的体积比7:3乙醇-富锗矿泉水溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得提取物B；
（5）将步骤（1）得到的提取液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比60:40的乙醇-富锗矿泉水洗脱，每次洗脱量为1倍混合树脂重量，洗脱总量为混合树脂重量的15倍，收集第2-12混合树脂重量的洗脱液，回收溶剂，低温干燥，得提取物E；
（6）将步骤（4）得到的提取物B与步骤（5）得到的提取物E合并，即得新鲜榛子叶活性成分提取物。
一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，其特征在于所述的新鲜榛子叶活性成分提取物同时含有榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素
一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，其特征在于用该提取纯化技术得到的新鲜榛子叶活性成分提取物中榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素的总含量占总提取物的60%以上。
一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，其特征在于按如下步骤制备:
（1）取新鲜榛子叶，破碎，用富锗矿泉水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液A；提取后的药渣再用富锗矿泉水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液B；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液E；
（2）将步骤（1）得到的提取液A在30℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液A，将步骤（1）得到的提取液B在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液B，将浓缩液A与浓缩液B合并，得浓缩液C；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比10:90、20:80、30:70、40:60、50:50的乙醇-富锗矿泉水依次洗脱，每个梯度洗脱量为混合树脂重量的5倍，收集20:80、30:70、50:50的乙醇-富锗矿泉水洗脱液，回收溶剂，低温干燥得提取物A；
（4）将步骤（3）得到的提取物A加提取物A重量3倍的体积比7:3乙醇-富锗矿泉水溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得新鲜榛子叶活性成分提取物。
一种含有新鲜榛子叶活性成分提取物的无糖制剂及其制备方法，其特征在于制成该无糖制剂的原料组成和重量份为：新鲜榛子叶活性成分提取物2-20重量份 异麦芽酮糖醇80-230重量份 薄荷脑0.1-0.3重量份 富锗矿泉水100-200重量份；制备方法为：按照原料配比取新鲜榛子叶活性成分提取物、异麦芽酮糖醇、富锗矿泉水，置搅拌锅中，加热至105-115℃，搅拌5-45分钟，60-100目筛网滤过，真空减压去除水分至水分<1%，稍冷却，按照原料配比加入薄荷脑，经调和翻拌均匀得料坯，采用多功能保温拉条机，匀条，控制保温辊床温度85-95℃，拉条，拉条机转速800-1200转/分钟，冲压成型，成型机转速1000-1400转/分钟，塑压成型0.1-3g/粒，即得含有新鲜榛子叶活性成分提取物的无糖制剂。
一种含有榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素的提取物。
一种榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素总含量60%以上的提取物及其制剂。
一种新鲜榛子叶活性成分提取物的制备方法，其特征在于采用富锗矿泉水为溶剂或加工助剂，所述的富锗矿泉水中锗含量0.003-0.01mg/L。
发明点：本发明首次建立了新鲜榛子叶中活性成分的提取纯化技术，技术方案的创新在于下列多个关键技术的组合：以榛子叶鲜品为起始原料，首次采用富锗矿泉水作为提取溶剂或加工助剂；采用烷基硫脲功能化硅胶去除有害重金属；采用Sephadex LH20凝胶- Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶三项混合树脂；榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素的总含量60%以上；以异麦芽酮糖醇为载体制备含新鲜榛子叶中活性成分的无糖制剂。
具体实施方式
下面通过具体实验例和实施例对新鲜榛子叶中新鲜榛子叶活性成分的提取纯化技术做进一步说明，但不限于本发明。
实施例1：新鲜榛子叶中活性成分的提取纯化
（1）取新鲜榛子叶，破碎，用富锗矿泉水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液A；提取后的药渣再用富锗矿泉水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液B；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液E；
（2）将步骤（1）得到的提取液A在30℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液A，将步骤（1）得到的提取液B在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液B，将浓缩液A与浓缩液B合并，得浓缩液C；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比10:90、20:80、30:70、40:60、50:50的乙醇-富锗矿泉水依次洗脱，每个梯度洗脱量为混合树脂重量的5倍，收集20:80、30:70、50:50的乙醇-富锗矿泉水洗脱液，回收溶剂，低温干燥得提取物A；
（4）将步骤（3）得到的提取物A加提取物A重量3倍的体积比7:3乙醇-富锗矿泉水溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得提取物B；
（5）将步骤（1）得到的提取液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比60:40的乙醇-富锗矿泉水洗脱，每次洗脱量为1倍混合树脂重量，洗脱总量为混合树脂重量的15倍，收集第2-12混合树脂重量的洗脱液，回收溶剂，低温干燥，得提取物E；
（6）将步骤（4）得到的提取物B与步骤（5）得到的提取物E合并，即得新鲜榛子叶活性成分提取物。
新鲜榛子叶活性成分的成分分离及结构鉴定：
取新鲜榛子叶活性成分提取物，经Sephadex LH20凝胶、Toyopear HW40C凝胶反复分离纯化，结合高分辨质谱，分别得到或鉴定4个化合物，经过理化常数、质谱及核磁共振色谱等光谱数据等方法,分别确证为榛叶素B(heterophylliin B)、栗木鞣花素（castalagin）、大麻黄鞣亭（casuarictin）、新哨纳草鞣素（tellimag randin Ⅱ）。经HPLC检测，新鲜榛子叶活性成分中榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素的总含量占总提取物的60%以上。
实施例2：新鲜榛子叶中活性成分的提取纯化
（1）取新鲜榛子叶，破碎，用富锗矿泉水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液A；提取后的药渣再用富锗矿泉水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液B；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液E；
（2）将步骤（1）得到的提取液A在30℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液A，将步骤（1）得到的提取液B在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液B，将浓缩液A与浓缩液B合并，得浓缩液C；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比10:90、20:80、30:70、40:60、50:50的乙醇-富锗矿泉水依次洗脱，每个梯度洗脱量为混合树脂重量的5倍，收集20:80、30:70、50:50的乙醇-富锗矿泉水洗脱液，回收溶剂，低温干燥得提取物A；
（4）将步骤（3）得到的提取物A加提取物A重量3倍的体积比7:3乙醇-富锗矿泉水溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得新鲜榛子叶活性成分提取物。
取新鲜榛子叶活性成分提取物，经Sephadex LH20凝胶、Toyopear HW40C凝胶反复分离纯化，结合高分辨质谱，分别得到或鉴定4个化合物，经过理化常数、质谱及核磁共振色谱等光谱数据等方法,分别确证为榛叶素B(heterophylliin B)、栗木鞣花素（castalagin）、大麻黄鞣亭（casuarictin）、新哨纳草鞣素（tellimag randin Ⅱ）。经HPLC检测，新鲜榛子叶活性成分中榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素的总含量占总提取物的75%以上。
实施例3：含有新鲜榛子叶活性成分提取物的无糖制剂及其制备方法
新鲜榛子叶活性成分提取物2重量份 异麦芽酮糖醇230重量份 薄荷脑0.3重量份 富锗矿泉水200重量份；制备方法为：按照原料配比取新鲜榛子叶活性成分提取物、异麦芽酮糖醇、富锗矿泉水，置搅拌锅中，加热至105℃，搅拌45分钟，60目筛网滤过，真空减压去除水分至水分<1%，稍冷却，按照原料配比加入薄荷脑，经调和翻拌均匀得料坯，采用多功能保温拉条机，匀条，控制保温辊床温度95℃，拉条，拉条机转速800转/分钟，冲压成型，成型机转速1000转/分钟，塑压成型3g/粒，即得含有新鲜榛子叶活性成分提取物的无糖制剂。
经检测，无糖制剂中含有锗。
实施例4：含有新鲜榛子叶活性成分提取物的无糖制剂及其制备方法
新鲜榛子叶活性成分提取物20重量份 异麦芽酮糖醇80重量份 薄荷脑0.1重量份 富锗矿泉水100重量份；制备方法为：按照原料配比取新鲜榛子叶活性成分提取物、异麦芽酮糖醇、富锗矿泉水，置搅拌锅中，加热至115℃，搅拌5分钟，100目筛网滤过，真空减压去除水分至水分<1%，稍冷却，按照原料配比加入薄荷脑，经调和翻拌均匀得料坯，采用多功能保温拉条机，匀条，控制保温辊床温度85℃，拉条，拉条机转速1200转/分钟，冲压成型，成型机转速1400转/分钟，塑压成型0.1g/粒，即得含有新鲜榛子叶活性成分提取物的无糖制剂。
经检测，无糖制剂中含有锗。
实施例5：新鲜榛子叶中活性成分的提取纯化（纯净水提取）
（1）取新鲜榛子叶，破碎，用纯净水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，纯净水用量为新鲜榛子叶总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液A；提取后的药渣再用纯净水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，纯净水用量为新鲜榛子叶总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液B；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液E；
（2）将步骤（1）得到的提取液A在30℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液A，将步骤（1）得到的提取液B在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液B，将浓缩液A与浓缩液B合并，得浓缩液C；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比10:90、20:80、30:70、40:60、50:50的乙醇-纯净水依次洗脱，每个梯度洗脱量为混合树脂重量的5倍，收集20:80、30:70、50:50的乙醇-纯净水洗脱液，回收溶剂，低温干燥得提取物A；
（4）将步骤（3）得到的提取物A加提取物A重量3倍的体积比7:3乙醇-纯净水溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得提取物B；
（5）将步骤（1）得到的提取液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比60:40的乙醇-纯净水洗脱，每次洗脱量为1倍混合树脂重量，洗脱总量为混合树脂重量的15倍，收集第2-12混合树脂重量的洗脱液，回收溶剂，低温干燥，得提取物E；
（6）将步骤（4）得到的提取物B与步骤（5）得到的提取物E合并，即得新鲜榛子叶活性成分提取物。
取新鲜榛子叶活性成分提取物，经Sephadex LH20凝胶、Toyopear HW40C凝胶反复分离纯化，结合高分辨质谱，分别得到或鉴定4个化合物，经过理化常数、质谱及核磁共振色谱等光谱数据等方法,分别确证为榛叶素B(heterophylliin B)、大麻黄鞣亭（casuarictin）、新哨纳草鞣素（tellimag randin Ⅱ），结果表明，用纯净水（未用富锗矿水）提取制备得到的新鲜榛子叶活性成分提取物中未检测到栗木鞣花素（castalagin）。经HPLC检测，新鲜榛子叶活性成分中榛叶素B、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素的总含量占总提取物的49%。
实验例1 烷基硫脲功能化硅胶去除Pb、Cd、Cu、Hg测定实验
精密量取烷基硫脲功能化硅胶吸附前后溶液，参照文献【郭红丽, 张硕, 高秀丽,等.ICP-MS法测定注射用灯盏花素等10种常用中药注射剂中13种金属元素 [J].中草药,2015, 46(17): 2568-2572.）】方法的微波消解法前处理样品。同法制备双份空白样品溶液，用 ICP-MS 同时对以上Pb、Cd、Cu、Hg 4 种重金属元素进行定量分析，结果表明4种重金属经烷基硫脲功能化硅胶吸附处理后，Pb去除率91.5%、Cd去除率92.1%、Cu去除率90.5%、Hg去除率91.1%。
实验例2：富锗矿泉水主要成分检测
本技术方案所用富锗矿泉水，按照《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》（GB5838-2016）检测，同时增加锗检测项，检测结果为：富锗矿泉水的水质主要成分包括：偏硅酸含量25-120mg/L，锗含量0.003-0.01mg/L，锶含量0.2-0.6mg/L，锌含量>0.0001-0.0002mg/L，硒含量0.0001-0.001mg/L，钼含量0.0001-0.002mg/L ，锂含量0.2-0.9mg/L，溴含量0.0005-0.08mg/L，镍含量0.002-0.02mg/L，锰含量0.01-0.1mg/L。
实验例3：实施例3及实施例4制备的无糖制剂还原糖测定
本技术方案实施例3及实施例4制备的无糖制剂按照《食品安全国家标准 食品中还原糖的测定》（GB 5009.7-2016）第一法及第二法检测，第一法检测结果为实施例3及实施例4制备的无糖制剂中还原糖总含量均低于0.5%，第二法检测结果为实施例3及实施例4制备的无糖制剂中蔗糖、葡萄糖、果糖、乳糖总含量均低于0.5%。
实验例4：新鲜榛子叶活性成分对链脲霉素糖尿病大鼠的治疗作用
链脲霉素糖尿病动物模型造模：将链脲霉素（STZ）溶于0.1mol/L柠檬酸缓冲液(pH4.5)中，临用前配制。大鼠常用量为70mg/kg(ip)。一次足量给予动物链脲霉素，造成β细胞大量损伤，胰岛素合成和分泌减少，引起糖代谢紊乱，导致糖尿病。将STZ溶液用0.1 mol/L 无菌枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液新鲜配制成2%溶液，调节pH至4.5，滤菌器过滤除菌。大鼠禁食10h按60mg/kg 体重腹腔内或尾静脉一次性注射STZ溶液，24h内随机血糖≥16.7 mmol/L，稳定5d即可作为成功模型。
药物：实施例1新鲜榛子叶活性成分、实施例4新鲜榛子叶活性成分、实施例5新鲜榛子叶活性成分。药物配制：研成粉末，各取5mg溶于30ml蒸馏水中，制成混悬液。
阳性药：降糖灵，山东省医药工业研究所制药厂出品。链脲霉素(STREPTOZOCIN，STZ)，规格：1g/瓶，SIGMA公司。
仪器：日本京都II型GLUCOCARO血糖仪，全自动生化测定仪，美国产12孔γ-放免测定仪。
试剂：京都血糖仪所用血糖电极片、全自动生化仪所用血脂试剂，天津德普公司(DPC) 提供的胰岛素放免试剂盒。
动物：Wistar大鼠，购于山东省实验动物中心。
链脲霉素糖尿病大鼠的试验：取Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重180-200g。稳定饲料1w，期间取血测空腹血糖2次，以3.8-5.2mmol/L为入选动物标准。其中10只作为正常对照备用。其余40只用链脲霉素 (STZ)造模，造模后7-10d复测空腹血糖，以大于14.0mmol/L作为模型成功大鼠。
将链脲霉素性糖尿病(STZ--DM)大鼠40只随机分为造模、实施例1组、实施例4组、实施例5组、降糖灵共4组，每组各10只，并设正常对照组10只。实施例1组、实施例4组、实施例5组，均按0.5mg/kg给药，降糖灵组7mg/kg给药，连续口服葡萄糖耐量试验(1.5 g/kg)，尾静脉取血分别测空腹、口服葡萄糖后30min，60min，90min，120min的血糖水平，计算空腹血糖及葡萄糖灌胃后60min血糖区线面积(AUC)。
试验结果：实施例1、实施例4新鲜榛子叶活性成分对STZ-DM大鼠空腹血糖升高有明显的降低作用，与造模组比较有极显著差异。对STZ-DM大鼠糖代谢有显著的改善作用，对葡萄糖引起的血糖升高有显著的降低作用，明显降低血糖区线面积，与造模组比较均有极显著差异。实施例5新鲜榛子叶活性成分对STZ-DM大鼠空腹血糖升高无明显的降低作用，与造模组比较均无显著差异。提示除了榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素对功效的影响之外，锗也是影响功效的关键因素之一。

Claims (8)

1.一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，其特征在于按如下步骤制备:
（1）取新鲜榛子叶，破碎，用富锗矿泉水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液A；提取后的药渣再用富锗矿泉水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液B；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液E；
（2）将步骤（1）得到的提取液A在30℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液A，将步骤（1）得到的提取液B在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液B，将浓缩液A与浓缩液B合并，得浓缩液C；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-ToyopearHW40C凝胶-MCIgelCQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比10:90、20:80、30:70、40:60、50:50的乙醇-富锗矿泉水依次洗脱，每个梯度洗脱量为混合树脂重量的5倍，收集20:80、30:70、50:50的乙醇-富锗矿泉水洗脱液，回收溶剂，低温干燥得提取物A；
（4）将步骤（3）得到的提取物A加提取物A重量3倍的体积比7:3乙醇-富锗矿泉水溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得提取物B；
（5）将步骤（1）得到的提取液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比60:40的乙醇-富锗矿泉水洗脱，每次洗脱量为1倍混合树脂重量，洗脱总量为混合树脂重量的15倍，收集第2-12混合树脂重量的洗脱液，回收溶剂，低温干燥，得提取物E；
（6）将步骤（4）得到的提取物B与步骤（5）得到的提取物E合并，即得新鲜榛子叶活性成分提取物。
2.根据权利要求1所述一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，其特征在于所述的新鲜榛子叶活性成分提取物同时含有榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素。
3.根据权利要求1所述一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，其特征在于用该提取纯化技术得到的新鲜榛子叶活性成分提取物中榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素的总含量占总提取物的60%以上。
4.一种新鲜榛子叶活性成分的提取纯化及制备技术，其特征在于按如下步骤制备:
（1）取新鲜榛子叶，破碎，用富锗矿泉水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液A；提取后的药渣再用富锗矿泉水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，富锗矿泉水用量为新鲜榛子叶总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液B；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液E；
（2）将步骤（1）得到的提取液A在30℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液A，将步骤（1）得到的提取液B在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.09的浓缩液B，将浓缩液A与浓缩液B合并，得浓缩液C；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液C中加入烷基硫脲功能化硅胶，搅拌吸附10小时，去除有害重金属，滤过，滤除烷基硫脲功能化硅胶，滤液中加入重量比3:2:1的Sephadex LH20凝胶-Toyopear HW40C凝胶-MCI gel CQP凝胶组成的混合树脂，搅拌吸附1小时，滤过，取吸附后的混合树脂，用纯净水冲洗3次，纯净水洗脱液弃去，混合树脂再用体积比10:90、20:80、30:70、40:60、50:50的乙醇-富锗矿泉水依次洗脱，每个梯度洗脱量为混合树脂重量的5倍，收集20:80、30:70、50:50的乙醇-富锗矿泉水洗脱液，回收溶剂，低温干燥得提取物A；
（4）将步骤（3）得到的提取物A加提取物A重量3倍的体积比7:3乙醇-富锗矿泉水溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得新鲜榛子叶活性成分提取物。
5.一种含有新鲜榛子叶活性成分提取物的无糖制剂及其制备方法，其特征在于制成该无糖制剂的原料组成和重量份为：新鲜榛子叶活性成分提取物2-20重量份 异麦芽酮糖醇80-230重量份 薄荷脑0.1-0.3重量份 富锗矿泉水100-200重量份；制备方法为：按照原料配比取新鲜榛子叶活性成分提取物、异麦芽酮糖醇、富锗矿泉水，置搅拌锅中，加热至105-115℃，搅拌5-45分钟，60-100目筛网滤过，真空减压去除水分至水分<1%，稍冷却，按照原料配比加入薄荷脑，经调和翻拌均匀得料坯，采用多功能保温拉条机，匀条，控制保温辊床温度85-95℃，拉条，拉条机转速800-1200转/分钟，冲压成型，成型机转速1000-1400转/分钟，塑压成型0.1-3g/粒，即得含有新鲜榛子叶活性成分提取物的无糖制剂。
6.一种含有榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素的提取物。
7.一种榛叶素B、栗木鞣花素、大麻黄鞣亭、新哨纳草鞣素总含量60%以上的提取物及其制剂。
8.一种新鲜榛子叶活性成分提取物的制备方法，其特征在于采用富锗矿泉水为溶剂或加工助剂，所述的富锗矿泉水中锗含量0.003-0.01mg/L。
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