CN108998572A - 用于扩增犬瘟热病毒全基因组序列的通用引物组及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一套用于扩增犬瘟热病毒全基因组序列的通用引物组及其应用。所述的引物组由11对引物组成，每对引物由上游引物和下游引物组成，所述的11对引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑22所示。本发明分析比对了GenBank中已公布的23株犬瘟热病毒的全基因组序列，针对保守区设计了11对特异性通用引物。研究结果表明，这11对通用引物能够方便、精准扩增犬瘟热病毒野毒和疫苗毒株的全基因组序列，显著提高了获得犬瘟热病毒不同毒株全基因组序列的效率，缩短了获得其他犬瘟热病毒未知毒株全序列的时间。这将有助于明确犬瘟热野毒适应细胞前后病毒核苷酸变异情况，从而为人类认识犬瘟热病毒野毒的致病机制，寻找犬瘟热病毒野毒关键毒力位点提供技术手段。

Description

用于扩增犬瘟热病毒全基因组序列的通用引物组及其应用

技术领域

本发明涉及一种用于扩增犬瘟热病毒全基因组序列的通用引物组及其应用。本发明属于生物技术领域。

背景技术

犬瘟热(Canine Distemper)是由犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus)感染犬、狐貉和水貂等食肉动物而引起的一种急性热性、高度接触性传染病。该病发病率高，临床症状多样，感染后期容易继发混合感染，死亡率高达30％-100％。近年来CDV自然感染宿主不断增多，随着人类对犬猫等宠物拥有数量的增多，犬瘟热病毒在给动物养殖业、生物多样化带来了极大损失和危害的同时，还威胁着社会公共安全。

CDV是副黏病毒科麻疹病毒属成员，其基因组为单股负链不分节段RNA。从3’到5’端依次是3’端前导序列、核蛋白(N)基因、磷蛋白(P)基因、基质蛋白(M)基因、融合蛋白(F)基因、血凝素蛋白(H)基因、聚合酶蛋白(L)基因和5’尾随序列。其中，H基因是变异率最高的，是CDV野毒株分子流行病学调查的主要靶基因。基于H基因的多样性，CDV可分为Asia 1、Asia 2、Europe、European wildlife、America-2、Arctic和America-1型(又称疫苗型)。我国流行毒株主要是Asia 1，但国内犬瘟热野毒分离株之间均存在核苷酸序列变异，与CDV3、Lederle、Onderstepoort等疫苗株的核苷酸序列同源率较低，为89％-90％。由于犬瘟热病毒野毒株难以适应Vero细胞，而且经过细胞上连续传代之后，经常毒力降低或丢失，因此学者们构建了稳定表达犬瘟热病毒受体-信号淋巴细胞激活因子(Signalling lymphocyteactivation Molecule，SLAM)的Vero-SLAM细胞，大大提高了犬瘟热病毒野毒的分离效率，因此成为目前分离犬瘟热病毒的首选细胞。但犬瘟热病毒野毒分离株在Vero-SLAM细胞上连续传代之后是否会发生毒力下降尚无报道。因此，设计特异性通用引物，能够同时扩增犬瘟热病毒野毒和疫苗毒株全基因组序列，明确犬瘟热野毒适应细胞前后病毒核苷酸变异情况，为人类认识犬瘟热病毒野毒的致病机制，寻找犬瘟热病毒野毒关键毒力位点提供分子依据。另外，及时准确地获取犬瘟热病毒不同毒株全基因组基因序列，有利于追溯犬瘟热发病病源和开展病毒遗传进化分析。同时，也为反向遗传学进行病毒拯救奠定了基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一套用于扩增犬瘟热病毒全基因组序列的通用引物组及其应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明发明人分析比对了GenBank中已公布的23株犬瘟热病毒全基因组序列，针对保守区设计了11对特异性通用引物，用于扩增犬瘟热病毒野毒株和疫苗株的全基因组序列。通过优化设计的11对引物的工作浓度及退火温度等条件，对本室保存的3株疫苗毒CDV3株、OR12株、CDV/R-20/8株，和两株野毒HBF-1株和SD(14)07株进行了全基因组序列扩增。取5μL扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，结果显示，11对通用引物对以上五株犬瘟热病毒扩增后，均获得11个大小符合预期的特异性条带。选取疫苗毒OR12株和野毒HBF-1株进行全基因组序列测定，与GenBank中已公布的序列进行比对，同源性均大于99.0％，证实本发明设计的11对特异性引物能够实现犬瘟热病毒野毒株和疫苗株的全长序列的准确扩增，并获得准确的全长序列。此外，HBF-1是貉源犬瘟热病毒野毒株，SD14(07)是狐源犬瘟热病毒野毒株，可见，本发明设计的11对通用引物能对不同宿主来源的犬瘟热病毒全基因组进行有效扩增，并获得准确的全长序列。

本发明的一套用于扩增犬瘟热病毒全基因组序列的引物组，所述的引物组由11对引物组成，每对引物由上游引物和下游引物组成，所述的11对引物的核苷酸序列分别如SEQID NO.1以及SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3以及SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5以及SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7以及SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9以及SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11以及SEQ IDNO.12、SEQ ID NO.13以及SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15以及SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17以及SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19以及SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21以及SEQ ID NO.22所示。

进一步的，本发明还提出了所述的引物组在扩增犬瘟热病毒全基因组序列中的应用。

其中，优选的，所述的犬瘟热病毒包括犬瘟热病毒野毒和犬瘟热病毒疫苗毒。

更进一步的，本发明还提出了一种扩增犬瘟热病毒全基因组序列的方法，按照以下步骤进行：

(1)提取犬瘟热病毒的RNA；

(2)以步骤(1)提取的犬瘟热病毒的RNA为模板合成cDNA；

(3)以步骤(2)合成的cDNA为模板，分别以所述的11对引物进行PCR扩增，分别获得11条扩增产物；

(4)将步骤(4)获得的11个PCR扩增片段进行凝胶回收后，所有片段均分别连接至平端载体，利用双酶切鉴定出正确的重组子，进行片段序列测定，最后利用SeqMan进行全长拼接，得到犬瘟热病毒的全基因组序列。

其中，优选的，步骤(3)中所述的PCR扩增的反应总体系中包含以下组分， Fast Pfu PCR SuperMix 25μL，上游引物1μL，下游引物1μL，病毒cDNA2μL，ddH₂O补齐至50μL；设定PCR程序为：95℃2min，95℃20sec、按照每对引物相应的退火温度退火20sec，72℃30sec，共进行40个循环，72℃7min；每对引物相应的退火温度如下所示：

SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2：退火温度53℃

SEQ ID NO.3以及SEQ ID NO.4：退火温度49℃

SEQ ID NO.5以及SEQ ID NO.6：退火温度61℃

SEQ ID NO.7以及SEQ ID NO.8：退火温度68℃

SEQ ID NO.9以及SEQ ID NO.10：退火温度58℃

SEQ ID NO.11以及SEQ ID NO.12：退火温度55℃

SEQ ID NO.13以及SEQ ID NO.14：退火温度57℃

SEQ ID NO.15以及SEQ ID NO.16：退火温度52℃

SEQ ID NO.17以及SEQ ID NO.18：退火温度54℃

SEQ ID NO.19以及SEQ ID NO.20：退火温度54℃

SEQ ID NO.21以及SEQ ID NO.22：退火温度57℃

其中，优选的，步骤(3)中所述的平端载体为pEASY-Blunt vector。

相较于现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明提出了一种可用于扩增犬瘟热病毒野毒和犬瘟热病毒疫苗毒全基因组序列的通用引物组。使用该引物组能够方便、精准扩增犬瘟热病毒野毒和疫苗毒株的全基因组序列，显著提高了获得犬瘟热病毒不同毒株全基因组序列的效率，缩短了获得其他犬瘟热病毒未知毒株全序列的时间。这将有助于明确犬瘟热野毒适应细胞前后病毒核苷酸变异情况，从而为人类认识犬瘟热病毒野毒的致病机制，寻找犬瘟热病毒野毒关键毒力位点提供技术手段。

附图说明

图1为犬瘟热病毒野毒HBF-1株的扩增结果；

图2为犬瘟热病毒野毒SD14(07)株的扩增结果；

图3为犬瘟热病毒疫苗毒CDV3的扩增结果；

图4为犬瘟热病毒疫苗毒OR12的扩增结果；

图5为犬瘟热病毒疫苗毒CDV/R-20/8的扩增结果。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

实施例1用于扩增犬瘟热病毒全基因组序列的通用引物组的设计及合成

根据网上GenBank中公布的23个犬瘟热病毒全基因组序列，具体毒株和GenBank号如下：01-2689(AY649446)、007Lm/B(AB490680)、Onderstepoort(AF378705)、CDV SY(KJ466106)、LN(10)1(KP765764)、98-2654(AY466011)、00-2601(AY443350)、SD(14)7(KP765763)、HLJ1-06(JX681125)、98-2646(AY542312)、98-2645(AY445077)、CDV2784-2013(KF914669)、A75 17(AF164967)、Hebei(KC427278)、CDV3(EU726268)、M25CR/H(AB490681)、50CBI/H(AB490678)、011C/H(AB490674)、PS(JN896331)、Snyder Hill(GU138403)、164071(EU716337)、CDV-RD-JL(KJ848781)、CDV-ZC(KJ994343)。对上述所有毒株的全基因组序列进行比对分析，利用软件Primer Premier 5.0设计了11对特异性通用引物(序列见表1)，用于不同毒株犬瘟热病毒全基因组序列的扩增和测定，预期11个目的条带大小分别为：1100bp、1450bp、1400bp、1900bp、1500bp、1700bp、1500bp、1800bp、1300bp、2100bp和1800bp。

表1.扩增用引物序列

注：W＝A或T；Y＝C或T；R ＝A或G；H＝A、C或T；M＝A或C；S＝C或G；K＝G或T；

实施例2通用引物在扩增犬瘟热病毒全基因组序列中的应用

1材料与方法

1.1材料

1.1.1毒株

犬瘟热病毒野毒HBF-1株、SD14(7)株，和犬瘟热病毒疫苗毒CDV3株、OR12株、CDV/R-20/8株，均由中国农业科学院特产研究所疫病防控研究室保存。

1.1.2主要试剂和仪器

普通PCR扩增仪GeneAmp PCR System 2700和分光光度计Nanodrop 2000购自Thermo；RNeasy Mini Kit购自Qiagen公司；SuperScriptⅢFirst-Strand SynthesisSuperMix购自Invitrogen公司；质粒小量提取试剂盒购自Axygen；普通PCR试剂盒 Fast Pfu PCR SuperMix购自Transgen；DNA Marker 5000和DNA Marker2000购自Takara公司。

1.2方法

1.2.1不同毒株犬瘟热病毒RNA提取

根据RNeasy Mini Kit操作说明，对不同毒株犬瘟热病毒进行RNA提取。具体操作如下：取含有细胞碎片的犬瘟热病毒液200μL，加入350μL RLT使其充分裂解。之后加入等体积的70％乙醇，吹打混匀。取700μL加入到RNeasy spin column中，置于2mL收集管中，8000g(10000r/min)，离心15s，弃流出液。700μL Buffer RW1到RNeasy spin column中，8000g(10000r/min)离心15s，弃流出液。500μL Buffer RPE到RNeasy spin column中，8000g(10000r/min)离心15s，弃流出液。500μL Buffer RPE到RNeasy spin column中，8000g(10000r/min)离心15s，将RNeasy spin column置于新的2mL收集管中，全速离心1min。将RNeasy spin column置于新的1.5mL收集管中，在滤膜中间加入40μL RNase free water8000g(10000r/min)离心1min，洗脱获得病毒细胞悬液的总RNA。

1.2.2不同毒株犬瘟热病毒cDNA合成

利用SuperScriptⅢFirst-Strand Synthesis SuperMix试剂盒反转录合成cDNA。以1.2.2中获得的总RNA为模板5μL，50mM Oligo(dT)1μL，50ng/μL Random Hexamers1μL，Annealing Buffer 1μL，混匀之后在65℃孵育5min，立即放冰上1min。之后加入2×First-Strand Reaction Mix 10μL和SuperscriptⅢRNase Out Enzyme Mix 2μL吹打混匀，短离心，在50℃孵育50min。

1.2.3犬瘟热病毒全基因组扩增

根据普通PCR试剂盒 Fast Pfu PCR SuperMix的说明操作，进行PCR扩增。50μL PCR反应总体系中包含以下组分， Fast Pfu PCR SuperMix25μL，上游引物1μL，下游引物1μL，病毒cDNA2μL，ddH₂O补齐至50μL。设定PCR程序，95℃2min，95℃20sec、退火温度(参照表1中预先摸索好的不同引物对的退火温度)20sec，72℃30sec，共进行40个循环，72℃7min。犬瘟热病毒不同毒株所有PCR产物5μL进行1％琼脂糖凝胶电泳，判断条带大小。

1.2.4犬瘟热病毒全基因组序列测定

将野毒HBF-1株和疫苗毒OR12株的11个PCR扩增片段进行凝胶回收后，所有片段连接至平端载体pEASY-Blunt vector，利用双酶切鉴定出正确的重组子，送上海生工进行片段序列测定，最后利用SeqMan进行全长拼接。将HBF-1全基因组序列与GenBank公布的HeBei株序列的同源性进行比对。

2结果

2.1犬瘟热病毒全长PCR扩增结果

利用11对通用引物对犬瘟热病毒野毒HBF-1株、SD14(7)株，和犬瘟热病毒疫苗毒CDV3株、OR12株、CDV/R-20/8株的cDNA进行扩增。取5μL扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，结果显示：不同毒株均获得11个目的条带，片段大小与预期一致(见图1-5)。

2.2犬瘟热病毒野毒HBF-1株全基因组序列的测定

对扩增获得的11个片段，琼脂糖凝胶电泳后，进行胶回收纯化。将片段连接至平端载体pEASY-Blunt vector上，挑取阳性克隆子送上海生工进行序列测定，每个碱基至少测序6次以上，确保序列的准确性。最后，利用SeqMan软件将11个片段进行序列拼接，分别获得犬瘟热病毒野毒HBF-1株、SD14(7)株，和犬瘟热病毒疫苗毒CDV3株、OR12株、CDV/R-20/8株的全基因组序列。与已公开的序列相比，同源率均在99％以上。

其中，获得的犬瘟热病毒野毒HBF-1株适应Vero-dSlam细胞后的全基因组序列如SEQ ID NO.23所示。与2012年GenBank公布的HeBei株进行全序列比对，发现同源率高达99.8％。

其中，获得的犬瘟热病毒疫苗毒OR12株全基因组序列如SEQ ID NO.24所示。与2012年GenBank公布的onderstproot株进行全序列比对，发现同源率高达99.3％。

以上结果证实，本发明设计的11对引物，能针对犬瘟热病毒野毒和疫苗毒全基因组进行准确扩增，获得准确的全基因组序列。

序列表

<110>中国农业科学院特产研究所

<120>用于扩增犬瘟热病毒全基因组序列的通用引物组及其应用

<160>24

<170>Patent-In 3.5

<210>1

<211>23

<212>DNA

<213>artificial sequence

<220>n=a or t

<221>mutation

<400>1

accagacaaa gttggctang gat 23

<210>2

<211>23

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<213>artificial sequence

<220>n=c or t

<221>mutation

<400>2

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aatatcccca gttagatgaa g 21

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<220>n=c or t

<221>mutation

<400>6

tccaaatgtt cttccaatng ggggtcc 27

<210>7

<211>26

<212>DNA

<213>artificial sequence

<220>n=a or c or t；n=a or c

<221>mutation

<400>7

gagcctaagt cctctccnna aaaatg 26

<210>8

<211>25

<212>DNA

<213>artificial sequence

<220>n=a or g

<221>mutation

<400>8

gccttngaac aaagaaagag actgg 25

<210>9

<211>24

<212>DNA

<213>artificial sequence

<220> n=a or g; n=a or g; n=c or g; n=c or t；

<221>mutation

<400>9

agaccangac ctcccnagna cgan 24

<210>10

<211>25

<212>DNA

<213>artificial sequence

<400>10

ggtatcggag gcaataaatg tcagc 25

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<211>25

<212>DNA

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<220>n=c or t

<221>mutation

<400>11

caagcacaat tatcaatnag agtcc 25

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<211>26

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<400>12

ccatccaggt tactattgag tctttt 26

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<211>25

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<400>13

acaaancacc gtggnttnat naaag 25

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<211>25

<212>DNA

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<400>14

tgcgacagtt gtgagtagag gattt 25

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<211>25

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<220>n=a or g

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<211>25

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<220>n=a or g

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tatttgagag ttagggactg tnttc 25

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<211>25

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<220>n=c or t

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ggttccnaaa ganaagaaag actcc 25

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<400>18

gggatttgga ctgttgataa ggac 24

<210>19

<211>21

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ctgtgtccag agcataaccc g 21

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gntccactct cantcttatc tgctt 25

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cgtgattgtc cccagattcg tg 22

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<400>22

accagacaaa gctgggtatg ataact 26

<210>23

<211>15690

<212>DNA

<213> Canine Distemper Virus HBF-1

<400>23

accagacaaa gttggctaag gatagttaaa ttattggata ttttattaaa aacttagggt 60

caatgatcct accttagaga acaaggtcag ggttcagacc taccagtatg gctagccttc 120

tcaagagcct cacattgttc aagaggactc gggaccaacc cccacttgcc tcgggctccg 180

gaggagcaat aagagggata aagcatgtca ttatagtcct aatcccgggt gattcaagca 240

ttgttacaag gtctcgacta ctggatagac ttgttagatt ggtcggtgat ccggaaatca 300

acggacctaa attaactggg attttaatca gtatcctctc cttgttcgtg gaatcccctg 360

gacagttgat ccagaggatc atagacgacc ctgatgtaag catcaagtta gtagaggtaa 420

tcccaagcat caactctggt tgtggtctta catttgcatc cagaggagca agtttggatt 480

ctgaggcaga tgagttcttc aaaattgtag acgaagggtc gaaagctcaa ggacaattag 540

gctggttgga gaataaggat attgtagaca tagaagttga tgatgctgag caattcaata 600

tattgctagc ttccatcttg gcccaaattt ggatcctgct cgctaaagca gtgactgctc 660

ctgatactgc agccgactcg gaaatgagga ggtggattaa gtatacccaa cagagacgtg 720

tggtcgggga atttagaatg aacaaaatct ggcttgatat tgttagaaac aggattgctg 780

aggacctatc tttgaggcga ttcatggtgg cactcatctt ggacatcaaa cgatccccag 840

ggaacaagcc tagaattgct gaaatgattt gtgatataga taactacatt gtggaagctg 900

gattagctag tttcatctta actatcaaat ttggcattga aactatgtat ccggctcttg 960

ggttgcatga gttttccgga gagttaacaa ctattgaatc ccttatgatg ctatatcaac 1020

agatgggtga aacagcaccg tacatggtta ttctggaaaa ttctgttcag aacaaattta 1080

gtgcaggatc ctacccactg ctctggagtt atgctatggg agttggtgtt gaacttgaaa 1140

actccatggg agggttaaat ttcggtagat cctactttga tccggcctat ttcaggctcg 1200

ggcaagaaat ggtgagaaga tctgccggca aagtaagctc tgcacttgcc gccgagcttg 1260

gcatcaccaa ggaagaggct cagctagtgt cagaaatagc atccaagaca acggaggacc 1320

ggacgattcg cactgctggt cccaagcaat ctcaaatcac ttttctgcac tcagaaagat 1380

ccgaagtcac caatcaacaa cccccaacca tcaacaagag gtccgaaaac caaggaggag 1440

acaaataccc catccacgtc aatgatgaac ggtttccagg gtacacccct gatgtcaaca 1500

gctccgaatg gagtgaatca cgctatgata cccagactat tcaagatgat ggaaacgacg 1560

atgaccggaa atcgatggaa gcaatcgcca agatgagaat gcttactaag atgctcagtc 1620

aacctgggac cagtgaagag agttctcctg tctataatga tagagagcta ctcaattaaa 1680

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taggacccag gtccaacaat cccgatcaac cattcatccg accaaccatt ctatctctaa 1800

atggcagaag agcaggccta tcatgtcaat aaagggctgg aatgcctcaa agccctcaga 1860

gagaatcctc ctgacattga ggagattcaa gaggtcagca gtatcagaga tcaaacccgc 1920

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aagggaatcg aagatgctga cagtctcgtg gtacctgcag gcgctgtcag taatcgagga 2220

ttcgagagag gagaaggaag ccttgatgat agcactgagg attctggcga agattattcc 2280

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gatgtgagca tgctgatgga agaggaattg agtactctgc tcaagacaag cagaaatgtg 2400

gggattaaga aaagggatgg gatgactctg cagttcccac acagtcccga aggtaagaca 2460

gaggatccgg agtgtggatc cattaaaaag ggcacaggag agaggtcagc ctcacatgga 2520

atggggatag ttgctggatc gacaagtggt gcaacccaat ctgcactcaa gtcaactggg 2580

ggatcatcag ggccaagtgt gtctgcggag aatgtccgcc aacctgcaat gaatgcaaag 2640

atgacccaga aatgcaaacc cgagtctggt acgcaactcc ctgccaggac ctcaaatgag 2700

gctgaatctg acagtgagta tgacgatgag cttttttctg aaatacaaga aattcgatct 2760

gctatcacta agctaatgga agataatcaa gcaatacttt ctaaactgga taccctatta 2820

ctgcttaaag gagagactga ttcaattaag aaacaaatta gcaagcaaaa tattgctatt 2880

tccacgattg aggggcatct atcaagcatt atgatagcta tacctggttt tgggaaggac 2940

actggagacc ctacggcaaa tgtcgacatt aacccagagc tccgccctat aatagggagg 3000

gattcaggaa gagcactggc ggaagttctc aagcaacccg catcatcccg cggtaatcgg 3060

aaggacagtg gtatcgcctt gggttcaaaa ggtcaactat tgagagacct ccagctgaaa 3120

cctattgaca aagagtctag ttcggcaatc ggatacaaac cgaaggatac cgcaccttcc 3180

aaagctgtac ttgcatcatt gattagatca agcaaaattg atcaaagtca caaacacaac 3240

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atcaagagta tcacacatgc ttaagctgta gcatttacta atctattaac aggctcaaaa 3360

ctgctttcac tatcgcttaa aagcaattat aaaaaactta ggacacaaga gcctaagtcc 3420

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gattagagtg caaaatagta agaatccaag cagtcttgca accatcagtc ccacaagatt 4380

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ctgactgtct atctttctat caccaatcgt taataattaa tcaaaactta ggatccagga 4860

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tggagccaat caaccaagct ttgactctaa tgaccaataa tgtgaagccc ctacagtcag 5580

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catagcaaca tatgatatat cccggggcga tcatgcaatt gtttattatg tttatgaccc 8700

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cctaaggatt gaatgttttg tgtgggatga cgatttgtgg tgtcatcaat tttaccgatt 8820

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ttgttaatca gaccttgtta tcttatccca aacacaacca tgtgatatat ccaaattgca 9300

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ttaatcttag tattggttta ggaggtgcat tggataagac tattggggcc aaagttgatg 9480

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attgtgatgt gatagaaggg agattaatga ctgataccgc tatggcaatt gatcaccgtt 9780

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agctttatca tgtactagct aaatctactg ctatgtctat ggttgagatg attacaaagt 13380

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<210>24

<211>15690

<212>DNA

<213> Canine Distemper Virus OR12

<400>24

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tattcaagac cagtcttgca tcagtcaaca attatcattc taaactcatt ataaaaaact 1740

taggacccag gtccaacaaa cccgatcaat cattcatccg accacccgtt ctatccctaa 1800

atggcagagg aacaggccta ccatgtcagc aaagggctgg aatgcctcaa agccctcaga 1860

gagaatcctc ccgacattga ggagattcaa gaggtcagca gcctcagaga ccaaacctgc 1920

aacccaggcc aagagaatgg aaccacaggc atgcaggaag aggaggactc tcagaatctc 1980

gatgaatcac acgagccaac aaaaggatca aactatgtcg gccatgtacc ccaaaataat 2040

ccgggatgtg gagaacgcaa cactgcgctt gtggaggcag agcagccccc caaagaggac 2100

atccaaccag gacctggaat acgatgtgat catgtttatg atcacagcgg tgaagaggtt 2160

aagggaatcg aagatgctga cagtctcgtg gtacctgcag gcactgtcgg taatcgagga 2220

ttcgagagag gagaaggaag ccttgatgat agcactgagg attctggcga agattattcc 2280

gaaggaaatg cttcatctaa ctggggatat tctttcggcc ttaaaccgga cagagcagct 2340

gatgtgagca tgctgatgga agaggaatta agtgctctac tcaggacaag cagaaatgta 2400

gggattcaga aaagggatgg gaagactctg cagttcccac ataatcccga aggtaagaca 2460

agggatccgg agtgtggatc cattaaaaag ggcacagaag agaggtcagt ctcacatgga 2520

atggggatag ttgctggatc gacaagtggt gcaacccaat ctgcactcaa gtcaactggg 2580

ggatcatcag agccaagtgt ttctgcgggg aatgtccgcc aacctgcaat gaatgcaaag 2640

atgacccaga aatgcaaact cgagtctggt acgcaactcc ctcccaggac ctcaaatgag 2700

gctgagtctg acagtgagta cgatgatgag cttttctctg agatacaaga aattcgatct 2760

gccattacta aactaactga agataatcaa gcaatactta ctaaactgga taccttatta 2820

ctgcttaaag gagagactga ttcaattaag aaacaaatca gcaaacaaaa tattgctatt 2880

tccacgattg aggggcatct atcaagcatt atgatagcta tacctggttt tggaaaggac 2940

acgggagatc ctacggcaaa tgtcgacatt aacccagagc tccgccctat catagggaga 3000

gattcaggaa gagcactagc agaagttctc aagcagcccg catcatcccg cggtaatcgg 3060

aaggacagtg gtattactct gggctcaaaa ggtcaactat tgagagacct ccagctgaaa 3120

cccattgaca aggagtctag ctcggcaatc ggatacaaac cgaaggatac cgcaccttcc 3180

aaagctgtac ttgcatcatt gattagatca agcagagttg atcaaagtca caaacataac 3240

atgctggctc tgctcaaaaa tatcaagggg gatgacaacc taaacgagtt ctaccaaatg 3300

gtcaaaagta ttactcatgc ttaatctgta gcgttgacta atctactaac cggcgcaaaa 3360

ctgctttcac tatcgcttaa aagcaattat aaaaaactta ggacacaaga gcctaagtcc 3420

tctcctaaaa aatgactgag gtgtacgact tcgatcagtc ctcttgggac accaaaggct 3480

cattggcccc tattttgcct accacttatc ccgatggtag gctcataccc caagtcagag 3540

taatagatcc aggactcggc gatcggaaag atgaatgctt catgtatatt tttttactgg 3600

gtataataga agacaatgat ggcctcggac ccccaattgg aagaacattt ggatcgctgc 3660

ctttaggagt tgggcgtact acagccagac ctgaggagtt attgaaagaa gccaccctgt 3720

tggatattgt ggtaaggcga actgcaggtg tcaaggaaca actggtattt tataataaca 3780

ccccattgca catcttaact ccgtggaaaa aggtccttac gagtggaagt gtgttcagtg 3840

caaatcaagt ctgtaacgca gtcaatctaa taccattaga catagcacaa agatttaggg 3900

tggtatatat gagcctcact cgactatcag acgatggaag ttacagaatt ccccgcggga 3960

tgtttgaatt ccgctccagg aatgctttag catttaacat tttagtcacc attcaagttg 4020

agggagatgt cgattcaagc cgaggtaatt tgagcatgtt caaagatcac caagcgacat 4080

tcatggtaca tatcggcaat ttcagccgca agaaaaacca agtctactct gctgattatt 4140

gtaaactgaa aattgaaaag atgggattag tgtttgctct aggagggata ggaggaacga 4200

gtcttcacat acgatgtact ggtaagatga gcaaggcctt gaatgcccag ctaggtttca 4260

agaaaatcct gtgttacccg ctcatggaga tcaatgaaga tttgaatcga tttctatgga 4320

gatcagagtg caaaatagta agaatccaag cagtcctgca accatcagtc ccacaagatt 4380

tcagagttta taatgatgtt atcatcagcg atgatcaggg tcttttcaaa attctctaaa 4440

tcatcagttc atgaactaaa aagcaaacgc cttagtagca ctgcccaaga tcccttgatc 4500

cccgcaagcg aggattgagg gtataagcac cgaccatcca gacgttgctc ctgcattttg 4560

agtgtgtccc ataagcctcc aaaccgctca ctcgtgccca caactccagt gacgcctcga 4620

tacgaaagca gccgaaccaa aacagctctt gcccaagatt aggttgatca ttataggacc 4680

aagaaatgaa tggatgcctg gggtttttag cttcgcttct aggtatctca ctttaacaat 4740

tatactccca cgcacttgcc tgatctcaag ctatcactag tagtcctgtt tcacggaact 4800

atgactatcc atctttctat cacagctcat taataattaa tcaaaactta gggtccagga 4860

catagcaagc caacaggtca accaggtcca ccagccaggg gctggacagg aacccccaca 4920

aacagccgag ccccatgcac aagggaatcc ccaaaagctc caaaacccaa acacataccc 4980

aacaagaccg ccccccacaa cccagcaccg aactcgaaga gaccaggacc tcccgagcac 5040

gacacagcac aacatcagct cagcgatcca cgcactctga tcctcgaaca tcggacagac 5100

ccgtctccta caccatgaac aggatcaggt cccgcaagca aactagccac agattgaaga 5160

acatcccagt tcacggaaac cacgaggcta ttatccagca catgccagag agtgtctcaa 5220

aaggagcgag atcccagatc gaaaggcggc aacccaatgc aatcaactca ggctctcagt 5280

gcacctggtt agtcctgtgg tgcctcggaa tagccagtct ctttctgtgt tccaaggctc 5340

agatacattg gaataatttg tcaactattg ggattatcgg gactgatagt gtccattaca 5400

agatcatgac taggcccagt caccagtact tggtcataaa actgatgcct aatgtttcac 5460

ttatagataa ttgtaccaaa gcagaattag gtgagtatga gaaattattg aattcagtcc 5520

tcgaaccaat caaccaagct ttgactctaa tgaccaagaa tgtgaagccc ctgcagtcat 5580

tagggtcagg taggagacaa aggcgttttg taggagtggt acttgcaggt gcagctttag 5640

gagtggctac agctgcacaa atcactgcag gaatagcttt acatcaatcc aacctcaatg 5700

ctcaagcaat ccaatctctt agaaccagcc ttgaacagtc taacaaagct atagaagaaa 5760

ttagggaggc cacccaagaa accgtcattg ccgttcaggg agtccaggac tacgtcaaca 5820

acgaactcgt ccctgccatg caacatatgt catgtgaatt agttgggcag agattagggt 5880

taagactgct tcggtattat actgagttgt tgtcaatatt tggcccgagt ttacgtgacc 5940

ctatttcagc cgagatatca attcaggcac tgagttatgc tcttggagga gaaattcata 6000

agatacttga gaagttggga tattctggag gtgatatgat tgcaatcttg gagagtcggg 6060

ggataaaaac aaaaataact catgttgatc tccccgggaa attcatcatc ctaagtatct 6120

catacccaac tttatcagaa gtcaaggggg ttatagtcca caggctggaa gcagtttctt 6180

acaacatagg atcacaagag tggtacacca ctgtcccgag gtatattgca actaatggtt 6240

acttaatatc taattttgat gagtcatctt gtgtattcgt ctcaaagtca gccatttgta 6300

gccagaactc cctgtatccc atgagcccac tcttacaaca atgtattagg ggcgacactt 6360

catcttgtgc tcggaccttg gtatctggga ctatgggcaa caaatttatt ctgtcaaaag 6420

gtaatatcgt cgcaaattgt gcttctatac tatgtaagtg ttatagcaca agcacaatta 6480

ttaatcagag tcctgataag ttgctgacat ttattgcctc cgatacctgc ccactggttg 6540

aaatagatgg tgttactatc caagttggag gcaggcaata ccctgatatg gtatacgaag 6600

gcaaagttgc cttaggccct gctatatcac ttgagaggtt agatgtaggt acaaatttag 6660

ggaacgccct taagaaactg gatgatgcta aggtactgat agactcctct aaccagatcc 6720

ttgagactgt taggcgctct tcctttaatt ttggcagtct cctcagcgtt cctatattaa 6780

gttgtacagc cctggctttg ttgttgctga tttactgttg taaaagacgc taccaacaga 6840

cactcaagca gcatactaag gtcgatccgg catttaaacc tgatctaact ggaacttcga 6900

aatcctatgt gagatcactc tgaagtattc tggtcatata tctcgcttga ttgccaggtt 6960

tgaaatctat tgaccccgcc caattttctt caaaagtcac tcaactgcaa taaacattgg 7020

aaaagactga ccatgattat cgtgattaaa gaaaacttag ggctcaggta gtccagcaat 7080

gctctcctac caagacaagg tgggtgcctt ctacaaggat aatgcaagag ccaattcaac 7140

caagctgtcc ttagtgacag aagaacatgg gggcaggaga ccaccttatt tgttgtttgt 7200

ccttctcatc ttattggttg gaatcctggc cttgcttgct atcactggag ttcgatttca 7260

ccaagtatca actagcaata tggaatttag cagattgctg aaagaggata tggagaaatc 7320

agaggccgta catcaccaag tcatagatgt cttgacaccg ctcttcaaga ttattggaga 7380

tgagattggg ttacggttgc cacaaaagct aaacgagatc aaacaattta tccttcaaaa 7440

gacaaatttc ttcaatccga acagagaatt cgacttccgc gatctccact ggtgcattaa 7500

cccgcctagt aaggtcaagg tgaattttac taattactgt gagtcaattg ggatcagaaa 7560

agctattgca tcggcagcaa atcctatcct tttatcagcc ctatctgggg gcagaagtga 7620

catattccca ccacacagat gcagtggagc tactacttca gtaggcaaag ttttccccct 7680

atcagtctca ttatccatgt ctttgatctc aagaacctca gagataatca atatgctgac 7740

cgctatctca gacggcgtgt atggcaaaac ttacttgcta gtgcctgatg atatagaaag 7800

agagttcgac actcaagaga ttcgagtctt tgaaataggg ttcatcaaaa ggtggctgaa 7860

tgacatgcca ttactccaaa caaccaacta tatggtactc ccggagaatt ccaaagccaa 7920

ggtatgtact atagcagtgg gtgagttgac actggcttcc ttgtgtgtag aagagagcac 7980

tgtattatta tatcatgaca gcagtggttc acaagatggt attctagtag tgacactggg 8040

gatattttgg gcaacaccta tggatcacat tgaggaagtg atacctgtcg ctcacccatc 8100

aatggagaaa atacatataa caaaccaccg gggttttata aaagattcaa ttgcaacctg 8160

gatggtgcct gccctggcct ctgagaaaca agaagaacaa aaaggttgtc tggagtcagc 8220

ttgtcaaaga aaaacctacc ccatgtgcaa ccaaacgtca tgggaaccct tcggaggaag 8280

acagttgcca tcttatgggc ggttgacatt acctctagat gcaagtgttg accttcaact 8340

taacatatcg ttcacatacg gtccggttat actgaatgga gatggtatgg attattatga 8400

aagcccactt ttgaactccg gatggcttac cattcctccc aaaaacggaa caatctctgg 8460

attgataaac aaagcaggta gaggagacca gttcactgta ctcccccatg tgttaacatt 8520

tgcgcccagg gaatcaagtg gaaattgtta tttacctatt cagacatctc aaattataga 8580

tagagatgtc ctcattgagt ccaatatagt ggtgttgcct acacagagtt ttagatatgt 8640

catagcaacg tatgacatat cacgaagtga tcatgcgatt gtttattatg tttatgaccc 8700

aatccggacg atttcttata cgcacccatt tagactaact accaagggta gacctgattt 8760

cctaaggatt gaatgttttg tgtgggataa caatttgtgg tgtcaccaat tttacagatt 8820

cgaggctgac atcgccaact ctacaaccag tgttgagaat ttagtccgta taagattctc 8880

atgtaaccgt taaaatccct gacagtatga tgatacacat ctcaattggc cttaggcatg 8940

ataactgtgg tgagaaatcc cttacagacg attgaattaa accatctcta gcattataaa 9000

aaaactaagg atccaagatc ctttcagcca tggactctgt atcagtgaac cagattctat 9060

accctgaggt ccatctagat agcccaattg taaccaataa gctagtatct attttagaat 9120

acgcacgaat tagacataac tatcagctcc ttgatacaac attagtgcgt aatatcaaag 9180

agagaatttc agaagggttc tcaaaccaga tgatcattaa ctgcatcgaa cttgggagca 9240

ttattaatca gaccttgtta tcttatccca aacacaacca tgtgatatac ccaaattgca 9300

acaaacttct atttcatgca caggatcgag tcatctctct gaggctgaga aatatattca 9360

aaagaggaaa tagcatctat agcaaaataa cagacggggt caaaaaatgc ttaaacgata 9420

ttaatcttaa tattggttta gggggtgcac tggacaagac tattgggacc aaaattgatg 9480

aagcaggcat aattatgcaa agctcacagt ggttcgaacc tttccttcta tggtttacaa 9540

ttaaaacaga aatgagatca gtgattaaat cctctactca caactgtcgc aagcggaggc 9600

agaaccctgt ctttgtaaaa ggtgaatcat tgaatgtgtt agtctctagg gaccttgtat 9660

gtattattga cctcaccagt cacattgttt attacctaac atttgaaatg gtcctgatgt 9720

actgtgatgt aatagaaggg aggctaatga ctgatactgc tatggcaatt gatcaacgtt 9780

actcaacttt gcatgtcagg atcaggtatc tctgggatct aattgacgga tttttcccgg 9840

atctgggaaa ttcaacctat caattggtgg ctctactgga gcctctctca ttggcttact 9900

tgcaattaaa agacatcacc ttctctctca ggggtgcttt tctgagtcac tgctttgctg 9960

aaattcagga gattttacag gacaatggct tctatactga agagacgttc caaactttaa 10020

cccaagctct agacttcgtt ttcatcacag aggatataca tataacagga gaaatctttt 10080

ccttctttag aagtttcggt cacccaaggt tagaagcaat aacagcagca gagaacgtac 10140

ggaaacacat gaatcaaccc aaagttgtct cctatgagac tatgatgaag ggacacgcta 10200

tattctgtgg gataatcatt aacggttatc gggatagaca tggggggact tggcctccga 10260

tggatcttcc tgttcatgca tctcctatca tcagaaatgc tcatgcctca ggggagggaa 10320

tcacatatag tcaatgtata gaaaattgga aatccttcgc aggaattcga tttaaatgct 10380

ttatgcctct tagcctagac agtgatttga ccatgtacct gaaagataag gctttggcag 10440

ccctaagaaa agagtgggac tcagtgtacc caaaagaatt cctcaggtac aatccacctc 10500

gctccactga gtctcggaga cttgttaatg tgtttctaga ggactctcag tttgaccctt 10560

ataacatgat tatgtacgtt atctcaggtc aatatctaga agatcctgat ttcaacctat 10620

catacagtct caaagagaaa gagattaaag aggtagggag attattcgct aaaatgacct 10680

acaaaatgcg agcctgtcag gtcatagcag aaaacttgat atctaatgga attgggaagt 10740

acttcaagga caatgggatg gcaaaggatg aacacgatct cactaaatca ttgcacactc 10800

tggctgtgtc cggggttccg aaagacaaga aagattccca tcgtggcctc actaaccagc 10860

gtaaatccct gaagcctgca ccttatcgag gagcccttca ctccgtctct tccccaagta 10920

gtagatatat agacccaaac ccaaattttt gcaccagtag aagagaagac aatgacatag 10980

agatctatga aactgtaagt gcatttataa ctacagatct caaaaagtac tgtctgaatt 11040

ggcgttatga gaccatcagt atttttgctc agagattaaa tgaaatctat ggtctcccct 11100

catttttcca atggttgcac agaagattgg aacagtcgat cttatacgta agtgaccccc 11160

actgccctcc agatctcgat cgtcatgtgg acttgaatac agcccctaac tctcaaatat 11220

tcatcaaata cccaatggga ggggtggagg ggtattgtca gaagttatgg actattagca 11280

ccatacctta tctgtacttg gcggcacatg agagtggtgt cagaattgca tcacttgtcc 11340

aaggtgataa ccaaactatt gctgtcacta aaagagtacc aagcacctgg tcctatgcct 11400

tgaagaaatc tgaagccagt cgagtgacca cagaatactt tatagccttg agacagaggt 11460

tacatgatgt cggacatcat ttgaaagcaa atgaaacaat aatctcttcc cacttttttg 11520

tatactcaaa aggaatctat tatgatggaa tgttaatttc acaatccctg aagagtatag 11580

ctaggtgtgt attttggtca gaaacaatag tggatgagac ccgagccgcg tgcagcaaca 11640

tttcaacaac attagcgaaa gccattgaga aagggtttga ccgatattta gcctacacgc 11700

tgaacatttt aaaaatcatc caacaagtat taatttcatt aggattcact atcaattcag 11760

cgatgacacg ggatgtgata gaacccctct tacaagatca ctgtctcttg accaagatgg 11820

caattctccc cgcacccatt ggcggtttta attacctcaa tatgagtagg ctctttgtca 11880

ggaatatcgg ggatcccgtg acatcttcta ttgctgacct caaacgaatg atccgatcag 11940

gccttcttgg agtggagatt ctacatcagg tcatgactca atacccaggt gactcttctt 12000

atttagattg ggcaagtgac ccttattctg ccaatctgcc ctgtgtccag agcataaccc 12060

gactccttaa aaatatcaca gctaggcatg tccttatcaa cagtccaaat ccgatgctga 12120

gaggattgtt ccatgatgaa agtcaggatg aggatgaagc tttagcagct ttcttgatgg 12180

ataggaaaat tattatccca agggctgcac atgaaattct agataacacg atcacgggtg 12240

caagagaggc aattgccgga atgctagaca ccacaaaggg gttgataaga gcaagcatga 12300

aaagaggagg tctaacccct agaataataa cccgtttgtc aacttacgat tatgagcaat 12360

ttagggcagg tatcagactg ttgtcaggga aggggcatga tccgctcatc gatcaagact 12420

catgttccgt ccagttagcg agagcattaa ggaaccacat gtgggccaag ctggcgaagg 12480

gtcgtcctat ttatggtcta gaagtcccgg atatccttga atcaatgaag ggttatatga 12540

tcagaagaca tgaatcctgt ttgctttgcg catcaggctc tcataactat ggttggtttt 12600

ttataccagc gaattgccaa ttggatagta ttacagaggg aacatctgca ctgagggtgc 12660

catacatagg gtccacaaca gaagaaagaa cagacatgaa actagcattc gtcaaatctc 12720

ctagtaggtc tctaaaatca gcagtgagaa tagcaactgt gtactcatgg gcctatggtg 12780

atgatgacga atcttggcaa gaggcttgga ccttggcaaa acagagagcg aacatctcac 12840

ttgaggaatt acggatgatt accccaattt ccacttctac taatctagct caccgactaa 12900

gagacaagag tactcaagtc aaatactcag ggacctctct catcagagta gcacgttatg 12960

caactatctc gaatgataat ctttctttta ttatagatga caagaaagtg gacacaaatt 13020

ttatttatca acaaggtatg ctcctgggcc tggggatcct tgagcactta tttagattgt 13080

cttcaaccac cggcgactct aacaccgtgt tacatttaca tgttgaaaca gattgttgcg 13140

taatacccat gagtgaccat ccaagagtcc cagggctcag aaaggtcgtc ataccaagaa 13200

atgtttgtac aaatcctttg atttatgaca gtaaccctat tattgagaaa gatgcagtca 13260

gactttataa ccagagtcac agaaagcaca ttgtagagtt tgtcacatgg acaacagggc 13320

agctttatca tgtgctagct aaatctactg ctatgtctat ggttgagatg attacaaagt 13380

ttgaaaagga ccacctaaat gaagtcactg cgttaattgg cgatgatgat atcaatagtt 13440

ttatcactga gtttcttcta gttgagccta gattatttac tgtatatcta ggtcaatgtg 13500

ctgcaatcaa ctggggcttt gaaattcatt atcaccgacc ttctggaaag taccaaatgg 13560

gtgagttgtt gttctctttc ctgagtagaa tgagtaaagg agtcttcaaa attttaacca 13620

atgcattgag ccatcctaaa gtatatagac ggttttggga cagtgggatg attgaacctg 13680

ttcatggacc ctctcttgac tcccaaaacc tacatataac tgtatgcaac ctgatctata 13740

actgttacat gatttaccta gaccttctgt taaatgatga attagatgat ttctcattca 13800

ttttatgcga aagtgacgag gatgtcatac ctgaaagatt tgacaacata caagccaggc 13860

acctatgcat cttatctgac ctttattgta accctcgtga ttgtccccag attcgtgggt 13920

tgacaccaac acagaaatgt gctgtgttgt cggggtactt aaaatcaaaa gccctagaat 13980

cccatgttgg tctgacatgg aatgacaaac ctatcttaat agatcaatat tcatgttccc 14040

tgacatatct tagaagaggc tcaatcaagc agataagatt gagagtggat cccggattca 14100

tcactgatgc tgttggatgc ttagaaaggc gtcctctaag aaataattct acctctaagg 14160

cctcagaatt aaagtcagaa tttgacccac cgaaagatga cttggctaaa cttctgagtc 14220

agctgtcaac aaggacacat aacttaccta ttacaggatt aggagtccgg aactatgagg 14280

ttcactcatt cagaagaatt gggatcaact ctactgcatg ttacaaggcc gttgaaatag 14340

cttctgtgat taagaacgaa tttacgtctg aagaacacgg attattccta ggagaaggtt 14400

caggtgcaat gttgacagta tataaagagc tattaagatt gtcaagatgt tattataaca 14460

gtggtgtgtc ggtagaatcc agaactggac aacgagagat ttcaccttac ccttctgagg 14520

tcagtctggt ggaacatcaa ttaggactcg ataaattggt gactgtgctt ttcaatggga 14580

gaccagaagt aacttgggtt gggagtgttg attgttacaa gtacatactg agccagatct 14640

ctgctagcag tcttgggttg attcactcgg atatagagtc actaccggat aaagacataa 14700

ttgaaaagtt ggaagaattg tctgctatat tatcaatgac tttgatatta gggaaggtag 14760

ggtcagtgtt agtaattaag atcatgccag ttagtggcga ctgggttcaa ggatttattt 14820

tgtatgcact cccacatttt cttcgaagtt tcatggttta cccaagatac agcaattttg 14880

tgtcaacaga ggcctacctt gtttttaccg gtcttagagc agggagacta gtcaatcctg 14940

aggggattaa acaacagatt ttgcgagtcg gtattcgaac ttcacccggg ttggtagggc 15000

acatcctttc atcaaagcag acagcatgtg tgcagtcttt gcatggacct ccatttcatg 15060

ctaaatcttt caatcctcac cttcagggtt taacaagtat tgagaaggta ttaatcaatt 15120

gtgggcttac aattaatggt cttaaagtat gtaagaacct gcttcaccat gatatttcgt 15180

caggcgagga agggctgaaa ggatctatca cgatccttta ccgggaactc gcaaggttca 15240

aggataacca ccaatcttca catggaatgt tccatgcata ccctgtgtta atcgcaagtc 15300

aggaaaggga gctcgtatct atcattgcaa agaagtactg tggctatatt ttgctttact 15360

cgggagactt atacgaaatt accaggattg tccgaaacct gaaagccaac cacataattt 15420

tcgacctgca tcgtaattta ttcatggata atctgtccag atctgacagg tctctcatcc 15480

taacgacaat ccccaaaaag aattggctct ttcagctcaa gacaaaagag ataaaggagt 15540

ggttcaaatt attaggttat agtgcactga ttagaaatca ctgacaggtt agtctggctc 15600

ctagccccct tctattcatt gctattaaac ttagttatac gaaaaaaaac aacggttatt 15660

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Claims (6)

1.用于扩增犬瘟热病毒全基因组序列的通用引物组，其特征在于，所述的引物组由11对引物组成，每对引物由上游引物和下游引物组成，所述的11对引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3以及SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5以及SEQ IDNO.6、SEQ ID NO.7以及SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9以及SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11以及SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13以及SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15以及SEQ ID NO.16、SEQ IDNO.17以及SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19以及SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21以及SEQ IDNO.22所示。

2.权利要求1所述的通用引物组在扩增犬瘟热病毒全基因组序列中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的犬瘟热病毒包括犬瘟热病毒野毒和犬瘟热病毒疫苗毒。

4.一种扩增犬瘟热病毒全基因组序列的方法，其特征在于，按照以下步骤进行：

(1)提取犬瘟热病毒的RNA；

(2)以步骤(1)提取的犬瘟热病毒的RNA为模板合成cDNA；

(3)以步骤(2)合成的cDNA为模板，分别以权利要求1所述的11对引物进行PCR扩增，分别获得11条扩增产物；

(4)将步骤(4)获得的11个PCR扩增片段进行凝胶回收后，所有片段均分别连接至平端载体，利用双酶切鉴定出正确的重组子，进行片段序列测定，最后利用SeqMan进行全长拼接，得到犬瘟热病毒的全基因组序列。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的PCR扩增的反应总体系中包含以下组分， Fast Pfu PCR SuperMix 25μL，上游引物1μL，下游引物1μL，病毒cDNA 2μL，ddH₂O补齐至50μL；设定PCR程序为：95℃2min，95℃20sec、按照每对引物相应的退火温度退火20sec，72℃30sec，共进行40个循环，72℃7min；每对引物相应的退火温度如下所示：

SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2：退火温度53℃

SEQ ID NO.3以及SEQ ID NO.4：退火温度45℃

SEQ ID NO.5以及SEQ ID NO.6：退火温度61℃

SEQ ID NO.7以及SEQ ID NO.8：退火温度68℃

SEQ ID NO.9以及SEQ ID NO.10：退火温度58℃

SEQ ID NO.11以及SEQ ID NO.12：退火温度55℃

SEQ ID NO.13以及SEQ ID NO.14：退火温度57℃

SEQ ID NO.15以及SEQ ID NO.16：退火温度52℃

SEQ ID NO.17以及SEQ ID NO.18：退火温度54℃

SEQ ID NO.19以及SEQ ID NO.20：退火温度54℃

SEQ ID NO.21以及SEQ ID NO.22：退火温度57℃。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的平端载体为pEASY-Bluntvector。