CN108982334A - 细胞计数仪及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种细胞计数仪及其应用，涉及生物微粒检测技术领域，该细胞计数仪包括正压控制单元、负压控制单元、计数模块、处理系统、废液容器和鞘液容器，其中，计数模块包括微流控芯片，通过在微流控芯片上进液孔、加样孔、废液孔和微流道的设置以及微流道上电脉冲信号检测区的设置，使得整个液流系统更加紧凑和有效，并且实现了全样品量的绝对计数，从而使得细胞计数的结果准确性和一致性优于现有方法，改善了现有技术中仪器整体的集成度不高，且检测样品量少和细胞分层悬浮导致的结果不准确问题；同时，将计数模块设计为可拆卸的形式，增加了细胞计数仪系统的灵活性，可以适配用户不同的检测需求。本发明还提供了细胞计数仪的应用。

Description

细胞计数仪及其应用

技术领域

本发明涉及生物微粒检测技术领域，尤其是涉及一种细胞计数仪及其应用。

背景技术

在大量的细胞生物研究实验中，需要对细胞或其他生物微粒进行浓度检测(定量计数)，细胞悬液浓度(或数量)既是细胞培养的监测参数，也是很多实验项目中的必要参数，对于成功完成实验是非常基础但却很重要的过程条件。现有的计数手段主要包括采用细胞计数板的人工计数方法，基于图像分析技术的自动化计数仪器，以及利用电阻法(库尔特原理)的自动化计数仪器。

其中，人工计数方法最为普遍，实验人员将悬浮细胞样品注入细胞计数板计数池，在显微镜下以肉眼观察并按规则进行人工计数。此方法的主要缺点是：(1)由于计数池本身的深度数倍于细胞尺度，这样就会造成细胞样品注入后在其中分层悬浮，从而观察到的细胞形态会有所差别，造成计数结果的不准确和细胞活性判断错误；(2)按规则注入细胞计数板的样品为10μL，但是在显微镜观察区域内的样品量仅仅是一小部分，不足1μL，这样细胞样品在计数池内分布是否均匀就会对结果造成很大的影响；(3)计数时是按照一定规则来人工计数的，操作人员水平的差异以及肉眼观察导致的疲劳度就引入很大的人为误差。

基于图像分析技术的自动化仪器虽避免了肉眼观察的困难，但是仍然存在以下不足：(1)引入了一次性计数片耗材的使用，增加了用户检测成本；(2)计数片在结构上与细胞计数板类似，所以也存在计数板上细胞分层悬浮导致结果不准确和活性误判的问题；(3)同人工计数一样，大部分基于图像法的仪器存在检测样品量少导致的结果偏差大的问题。

传统的库尔特计数仪器整体的集成度都不高，比如要单独配电脑，操作起来不够简捷。另外就是传统库尔特计数仪不具备细胞样品活率评判的功能。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种细胞计数仪，通过采用微流控芯片技术，使得整个液流系统更加紧凑和有效，并且实现了全样品量的绝对计数，从而使得细胞计数的结果准确性和一致性优于现有装置，改善了现有技术中仪器整体的集成度不高，且检测样品量少和细胞分层悬浮导致的结果不准确问题。

本发明的第二目的在于提供一种细胞计数仪的应用。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

一种细胞计数仪，包括正压控制单元、负压控制单元、计数模块、处理系统、废液容器和鞘液容器，所述正压控制单元与所述鞘液容器相连，所述负压控制单元与所述废液容器相连，所述鞘液容器和所述废液容器分别与计数模块相连，所述正压控制单元、负压控制单元和计数模块分别与所述处理系统电性连接；

所述计数模块可拆卸，所述计数模块包括微流控芯片；

所述微流控芯片上开设有进液孔、加样孔和废液孔，所述微流控芯片的内部设置有微流道，所述进液孔、加样孔和废液孔之间通过所述微流道进行连通，所述微流道通过所述进液孔与所述鞘液容器连通，所述微流道通过所述废液孔与所述废液容器连通；

所述微流道包括电脉冲信号检测区，利用内置于所述微流控芯片的电极对流经所述电脉冲信号检测区的样品的电脉冲信号进行采集；

所述处理系统用于控制所述正压控制单元产生正压，控制所述负压控制单元产生负压，以使所述鞘液容器中的鞘液通过进液孔进入到所述微流道，并携带从所述加样孔添加的样品通过所述废液孔流向所述废液容器，所述处理系统对所述计数模块产生的数据信息进行处理。

进一步的，所述细胞计数仪还包括清洗液容器，所述正压控制单元与所述清洗液容器相连，所述清洗液容器通过所述进液孔与所述微流道连通；

所述处理系统用于控制所述正压控制单元产生正压，控制所述负压控制单元产生负压，以使所述清洗液容器中的清洗液通过所述进液孔进入到所述微流道，并对所述微流道进行清洗，清洗后废液通过所述废液孔流向所述废液容器。

进一步的，所述进液孔的数量为一个，所述进液孔与所述加样孔之间的微流道设有两个流道分支，两个流道分支分别设于所述加样孔的两侧并与所述加样孔之后的微流道汇合，所述进液孔的鞘液经所述流道分支从所述加样孔的两侧流入，并包裹位于中间的从所述加样孔进入的样品一起流向所述电脉冲信号检测区，从而实现样品计数；

或，所述进液孔的数量不少于两个，分别设于所述加样孔的两侧，所述进液孔的鞘液从所述加样孔的两侧流入并包裹位于中间的从所述加样孔进入的样品一起流向所述电脉冲信号检测区，从而实现样品计数。

进一步的，所述微流道还包括图像采集区，所述图像采集区位于所述电脉冲信号检测区之前或者之后。

进一步的，所述计数模块还包括图像采集模块；

所述图像采集模块用于采集流经所述图像采集区的所述样品的多张图像，所述处理系统用于对所述图像采集模块的数据信息进行处理。

进一步的，所述正压控制单元与正压压力源连接；

所述负压控制单元与负压压力源连接。

进一步的，所述细胞计数仪还包括若干个电磁阀，通过控制电磁阀的开闭组合来实现样品、鞘液、清洗液或废液在所述微流道中的流动。

进一步的，所述微流道的管径处于微米级别或纳米级别。

所述加样孔将所述微流道与所述微流控芯片的外部连通，在所述加样孔上方还设置有顶盖；

所述顶盖上还设有真空吸头，所述真空吸头与所述加样孔相适配。

本发明还提供了一种细胞计数仪在生物微粒浓度检测中的应用。

与现有技术相比，本发明提供的细胞计数仪具有如下有益效果：

(1)本发明提供的细胞计数仪，包括正压控制单元、负压控制单元、计数模块、处理系统、废液容器和鞘液容器，其中，计数模块包括微流控芯片，通过在微流控芯片上进液孔、加样孔、废液孔和微流道的设置以及微流道上电脉冲信号检测区的设置，使得整个液流系统更加紧凑和有效，并且实现了全样品量的绝对计数(即加入检测系统的细胞样品全部被检测到)，从而使得细胞计数的结果准确性和一致性优于现有装置，改善了现有技术中仪器整体的集成度不高，且检测样品量少和细胞分层悬浮导致的结果不准确问题；同时，将计数模块设计为可拆卸的形式，增加了细胞计数仪系统的灵活性，可以适配用户不同的检测需求。

(2)本发明提供的细胞计数仪还设置有清洗液容器，可对细胞检测之后的微流控芯片进行清洗，避免样品残留影响仪器检测稳定性和准确性。

(3)本发明细胞计数仪的微流控芯片上设置有图像采集区和电脉冲信号检测区，当细胞样品流经图像采集区过程中细胞计数仪会自动采集多张细胞图像，当细胞样品流经电脉冲信号检测区过程中利用内置于微流控芯片的电极对样品的电脉冲信号进行采集，通过对上述细胞图像以及电脉冲信号的分析，可准确检测出细胞样品的浓度、粒径、活率等信息。

(4)鉴于本发明细胞计数仪所具有的优势，使得其在微生物微粒浓度检测中具有广泛的应用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例提供的一种细胞计数仪的连接框图；

图2为本发明实施例提供的一种微流控芯片的位置示意图；

图3为本发明实施例提供的另一种微流控芯片的位置示意图；

图4为本发明实施例提供的一种微流控芯片的结构示意图；

图5为本发明实施例提供的另一种微流控芯片的结构示意图；

图6为本发明实施例提供的细胞计数仪的结构示意图；

图7为图6细胞计数仪不同角度的结构示意图；

图8为图6细胞计数仪不同角度的结构示意图；

图9为图6细胞计数仪不同角度的结构示意图；

图10为计数模块的结构示意图。

附图标记：

110-正压控制单元；111-正压压力源；120-负压控制单元；121-负压压力源；130-计数模块；131-微流控芯片；132-进液孔；133-加样孔；134-废液孔；135-微流道；136-电极；140-鞘液容器；150-废液容器；160-清洗液容器；170-处理系统；181-第一电磁阀；182-第二电磁阀；183-第三电磁阀；184-第四电磁阀；185-第五电磁阀；186-第六电磁阀；187-第七电磁阀；188-第八电磁阀；189-第九电磁阀；190-机身；191-顶盖；192-真空吸头；193-锁扣；194-显示屏；195-电源输入口；196-电源开关；197-USB口；1351-流道分支。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在本发明的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下方”、“一侧”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

根据本发明的一个方面，提供了一种细胞计数仪，具体如图1所示，包括正压控制单元110、负压控制单元120、计数模块130、处理系统170、废液容器150和鞘液容器140。

正压控制单元110与鞘液容器140相连，负压控制单元120与废液容器150相连，鞘液容器140和废液容器150分别与计数模块130相连，正压控制单元110、负压控制单元120和计数模块130分别与处理系统170电性连接。

具体的，计数模块130包括微流控芯片131。微流控芯片131上开设有进液孔132、加样孔133和废液孔134，微流控芯片131的内部设置有微流道135，进液孔132、加样孔133和废液孔134之间通过微流道135进行连通，微流道135通过进液孔132与鞘液容器140连通，微流道135通过废液孔134与废液容器150连通。

作为本发明的一种可选实施方式，计数模块130设计为可拆卸的形式，具体如图10所示。

由于待检测液体样品的大小是不同的，比如细菌小到数百纳米到数微米，而常见的细胞大小则是数微米到数十微米。为满足对不同测试对象的检测需求，计数模块130的可更换设计形式，可针对不同大小的检测对象设计不同结构的微流控芯片131来适配不同的检测对象。上述计数模块130的可拆卸设计大大增加了系统的灵活性，可以适配用户不同的检测需求。

微流道135包括电脉冲信号检测区，可利用内置于微流控芯片131的电极136对流经电脉冲信号检测区的样品的电脉冲信号进行采集，从而测量出样品中细胞的数量和大小。

处理系统170用于控制正压控制单元110产生正压，控制负压控制单元120产生负压，以使鞘液容器140中的鞘液通过进液孔132进入到微流道135，并携带从加样孔133添加的样品通过废液孔134流向废液容器150，处理系统170对计数模块130产生的数据信息进行处理。

本发明提供的细胞计数仪，通过对计数模块130以及微流控芯片131的特殊结构设计，使得整个液流系统更加紧凑和有效，改善了现有技术中仪器整体集成度不高的问题。同时，电脉冲信号检测区的设置，可以使得样品全部都流过检测区域，实现了全样品量的绝对计数，即加入检测系统的样品全部被检测到，从而使得细胞计数的结果准确性和一致性更为优异。

其中，本发明中的处理系统170实际上是一系列控制和处理部件的总称，可以包括控制阀等机电部件的控制器，电脉冲信号和/或图像信号的采集处理存储器，用于完成屏幕显示和交互操作的屏幕显示器等。

利用微流控芯片131的电极136对流经电脉冲信号检测区的样品的电脉冲信号进行采集的原理是基于库尔特原理。库尔特原理是指悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时，取代相同体积的电解液，在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化，产生电脉冲信号。电脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。

依据库尔特原理，微流控芯片131可以实现对流经电脉冲信号检测区的样品的电脉冲信号的采集，进而实现全样品量的绝对计数。

微流控芯片131上的电极136可以有不同的设置方式。例如，电极136可以同时作为激励电极和检测电极，可以位于微流道135同侧，也可以位于微流道135两侧；或者，电极136分为激励电极和检测电极，激励电极分别设置在进液孔132和废液孔134处，检测电极位于微流道135同侧或者微流道135两侧。

作为本发明的一种可选的实施方式，细胞计数仪还包括清洗液容器160，正压控制单元110与清洗液容器160相连，清洗液容器160通过进液孔132与微流道135连通。

处理系统170用于控制正压控制单元110产生正压，控制负压控制单元120产生负压，以使清洗液容器160中的清洗液通过进液孔132进入到微流道135，并对微流道135进行清洗，清洗后废液通过废液孔134流向废液容器150。

清洗液容器160中盛装的清洗液可对样品检测之后的微流控芯片131进行清洗，避免样品残留从而影响仪器检测稳定性和准确性。

作为本发明的一种可选的实施方式，进液孔132的数量为一个，进液孔132与加样孔133之间的微流道135设有两个流道分支1351，具体如图4所示。两个流道分支1351分别设于加样孔133的两侧并与加样孔133之后的微流道135汇合，进液孔132的鞘液经流道分支1351从加样孔133的两侧流入，并包裹位于中间的从加样孔133进入的样品一起流动，由于流体动力学聚焦的特性，被包裹的样品如微粒、细胞等被汇聚成稳定的一条核心流线流经电脉冲信号检测区，从而实现样品计数；上述流道分支1351的特殊结构设计，可使得样品中的细胞样品趋于一层，减少细胞在微流道135中的分层现象，有利于后续电脉冲信号的检测。

或，进液孔132的数量不少于两个，分别设于加样孔133的两侧，具体如图5所示。进液孔132的鞘液从加样孔133的两侧流入并包裹位于中间的从加样孔133进入的样品一起流动，由于流体动力学聚焦的特性，被包裹的样品如微粒、细胞等被汇聚成稳定的一条核心流线流经电脉冲信号检测区，从而实现样品计数。将至少两个进液孔132分置于加样孔133的两侧，有利于进液孔132的鞘液与加样孔133中的样品充分混合，以避免由于样品和鞘液构成的悬浮液不均匀造成的测量误差，同时减少细胞在微流道135中的分层现象，便于电脉冲信号的检测。

作为本发明的一种可选的实施方式，微流道135还包括图像采集区，图像采集区位于电脉冲信号检测区之前或者之后，具体如图2-3所示。

图像采集区主要是为了采集样品流动过程中的多张细胞图像，增加了总的细胞检测样本量。

计数模块130还包括与图像采集区相对应的图像采集模块(在图中未标识)；图像采集模块用于采集流经图像采集区的样品的多张图像，并采用处理系统170用于对图像采集模块的数据信息进行处理。

图像采集模块可采用现有的图像采集手段即可实现，此处不作具体限定。例如，图像采集模块可以包括光源、相机和光学镜头。光源和相机分别与处理系统电性连接，光学镜头通过一标准镜头接口与相机连接。其中，光学镜头可以是单一镜头或者多个镜头的组合。其中，光源设置于微流控芯片的一侧，且朝向上述图像采集区，相机设置于微流控芯片的另一侧，且光学镜头面对上述图像采集区。通过上述设计，使得光源能够在处理系统的控制下向上述图像采集区透射光线，相机能够在处理系统的控制下采集流经上述图像采集区的样品的多张图像，并发送到处理系统进行处理。

正压控制单元110、负压控制单元120均需要一定的压力源为其提供动力。作为本发明的一种可选的实施方式，正压控制单元110与正压压力源111连接；

负压控制单元120与负压压力源121连接。

根据实际需求，可选地，正压压力源111可以为正压气泵或者液泵，当正压压力源111为正压气泵时，正压气泵可以是隔膜气泵。当正压压力源111为液泵时，可以有，但不限于，如下选择：蠕动泵、隔膜泵以及线性泵。负压压力源121为负压气泵。

作为本发明的一种可选的实施方式，细胞计数仪还包括若干个电磁阀，通过控制各电磁阀的开闭组合来实现样品、鞘液、清洗液或废液在微流道135中的流动。

具体的，第一电磁阀181设置于正压控制单元110和清洗液容器160之间，第四电磁阀184设置于清洗液容器160与计数模块130之间，通过控制第一电磁阀181和第四电磁阀184的开闭来控制清洗液向计数模块130上的进液孔132流动；第二电磁阀182设置于正压控制单元110和鞘液容器140之间，第五电磁阀185设置于鞘液容器140与计数模块130之间，通过控制第二电磁阀182和第五电磁阀185的开闭来控制鞘液向计数模块130上的进液孔132流动；第七电磁阀187设置于负压控制单元120和废液容器150之间，第六电磁阀186设置于计数模块130与废液容器150之间，通过控制第七电磁阀187和第六电磁阀186来控制计数模块130中的废液经废液孔134排出废液容器150。在第二电磁阀182与废液孔134之间还设有第三电磁阀183，在第二电磁阀182和进液孔132之间还设置有第八电磁阀188，在加样孔133与废液容器150之间还设有第九电磁阀189。

作为本发明的一种可选的实施方式，微流道135的管径处于微米级别或纳米级别。通过对微流道135管径的限定，使得其适合于处理不同微粒尺寸的样品。

根据图6-9所示，加样孔133将微流道135与微流控芯片131的外部连通，在加样孔133上方且位于机身190上还设置有顶盖191，顶盖191可沿机身翻转。顶盖191上还设有真空吸头192，真空吸头192与加样孔133相适配。该细胞计数仪中，样品流经的管路、器件共同组成液路系统。真空吸头192通过管路与液路系统连通，用于控制样品的流动。在顶盖191上还设置有锁扣193。

机身190上还设置有显示屏194，用户通过显示屏194上对细胞计数仪进行操作以及测量结果检查。在机身190上还设置有电源输入口195、电源开关196以及USB口197。

由于本发明提供的细胞计数仪采用定量加样的操作方式，同时采用全样品绝对计数的计数模式，上述特点使得细胞计数的结果准确性和一致性均优于现有装置。需要说明的是，本发明提供的细胞计数仪的加样量可以是10μL、20μL或者其他用量，可根据实际需要进行设定。

根据本发明的另一个方面，还提供了一种细胞计数仪的应用。鉴于本发明细胞计数仪所具有的优势，使得其在微生物微粒浓度检测中具有广泛的应用。

细胞计数仪不仅仅用于细胞的检测，还可以用于其他微生物颗粒，例如真菌孢子、藻、精子等的浓度检测。该细胞计数仪可实现上述微生物颗粒的精准计数，为微生物颗粒浓度检测提供了良好的检测平台。

采用本发明提供的细胞计数仪的检测方法，包括如下步骤：

(1)通过正压压力源产生一定的正压压力，经过正压控制单元输出设定的气压，通过负压压力源产生一定的负压压力，经过负压控制单元输出设定的气压，通过控制各电磁阀的开闭组合来使得鞘液充满微控芯片的微流道。

(2)然后将样品加入到加样孔。将仪器顶盖盖上后，同样的仪器通过调整不同的气压压力和控制第二电磁阀、第五电磁阀、第六电磁阀、第七电磁阀，实现样品按一定速度流过图像采集区和电脉冲信号检测区(这里不限先后顺序)，通过软件算法分析所采集的图像和电脉冲信号，可得出样品的浓度、粒径、活率等信息。

另外，仪器会通过一些电信号自动检测样品是否全部流过检测区域，此时仪器软件会计算出结果，并且后台自动进入清洗芯片流程。通过一定气压压力和控制所有电磁阀的开闭组合来使清洗液对微控芯片的微流道按一定程序进行清洗，清洗结束等待进入下一次检测流程。

最后应说明的是：以上各实施方式仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施方式对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施方式所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施方式技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种细胞计数仪，其特征在于，包括正压控制单元、负压控制单元、计数模块、处理系统、废液容器和鞘液容器，所述正压控制单元与所述鞘液容器相连，所述负压控制单元与所述废液容器相连，所述鞘液容器和所述废液容器分别与计数模块相连，所述正压控制单元、负压控制单元和计数模块分别与所述处理系统电性连接；

所述计数模块可拆卸，所述计数模块包括微流控芯片；

所述微流控芯片上开设有进液孔、加样孔和废液孔，所述微流控芯片的内部设置有微流道，所述进液孔、加样孔和废液孔之间通过所述微流道进行连通，所述微流道通过所述进液孔与所述鞘液容器连通，所述微流道通过所述废液孔与所述废液容器连通；

所述微流道包括电脉冲信号检测区，利用内置于所述微流控芯片的电极对流经所述电脉冲信号检测区的样品的电脉冲信号进行采集；

所述处理系统用于控制所述正压控制单元产生正压，控制所述负压控制单元产生负压，以使所述鞘液容器中的鞘液通过进液孔进入到所述微流道，并携带从所述加样孔添加的样品通过所述废液孔流向所述废液容器，所述处理系统对所述计数模块产生的数据信息进行处理。

2.根据权利要求1所述的细胞计数仪，其特征在于，还包括清洗液容器，所述正压控制单元与所述清洗液容器相连，所述清洗液容器通过所述进液孔与所述微流道连通；

所述处理系统用于控制所述正压控制单元产生正压，控制所述负压控制单元产生负压，以使所述清洗液容器中的清洗液通过所述进液孔进入到所述微流道，并对所述微流道进行清洗，清洗后废液通过所述废液孔流向所述废液容器。

3.根据权利要求1所述的细胞计数仪，其特征在于，所述进液孔的数量为一个，所述进液孔与所述加样孔之间的微流道设有两个流道分支，两个流道分支分别设于所述加样孔的两侧并与所述加样孔之后的微流道汇合，所述进液孔的鞘液经所述流道分支从所述加样孔的两侧流入，并包裹位于中间的从所述加样孔进入的样品一起流经所述库尔特信号检测区，从而实现样品计数；

或，所述进液孔的数量不少于两个，分别设于所述加样孔的两侧，所述进液孔的鞘液从所述加样孔的两侧流入并包裹位于中间的从所述加样孔进入的样品一起流经所述库尔特信号检测区，从而实现样品计数。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的细胞计数仪，其特征在于，所述微流道还包括图像采集区，所述图像采集区位于所述电脉冲信号检测区之前或者之后。

5.根据权利要求4所述的细胞计数仪，其特征在于，所述细胞计数仪还包括图像采集模块；

所述图像采集模块用于采集流经所述图像采集区的所述样品的多张图像，所述处理系统用于对所述图像采集模块的数据信息进行处理。

6.根据权利要求1-3任意一项所述的细胞计数仪，其特征在于，所述正压控制单元与正压压力源连接；

所述负压控制单元与负压压力源连接。

7.根据权利要求1-3任意一项所述的细胞计数仪，其特征在于，所述细胞计数仪还包括若干个电磁阀，通过控制所述电磁阀的开闭组合来实现样品、鞘液、清洗液或废液在所述微流道中的流动。

8.根据权利要求1-3任意一项所述的细胞计数仪，其特征在于，所述微流道的管径处于微米级别或纳米级别。

9.根据权利要求1-3任意一项所述的细胞计数仪，其特征在于，所述加样孔将所述微流道与所述微流控芯片的外部连通，在所述加样孔上方还设置有顶盖；

所述顶盖上还设有真空吸头，所述真空吸头与所述加样孔相适配。

10.权利要求1-9任意一项所述的细胞计数仪在微生物颗粒浓度检测中的应用。