CN108956568A - 一种用于检测赭曲霉毒素a的生物传感器的制备方法 - Google Patents

一种用于检测赭曲霉毒素a的生物传感器的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108956568A
CN108956568A CN201810792034.7A CN201810792034A CN108956568A CN 108956568 A CN108956568 A CN 108956568A CN 201810792034 A CN201810792034 A CN 201810792034A CN 108956568 A CN108956568 A CN 108956568A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
graphene oxide
ochratoxin
biosensor
detecting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810792034.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108956568B (zh
Inventor
杨兆琪
康宇
羊杜涛
秦兰
谢筱娟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201810792034.7A priority Critical patent/CN108956568B/zh
Publication of CN108956568A publication Critical patent/CN108956568A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108956568B publication Critical patent/CN108956568B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其包括，氧化石墨烯的修饰：将吐温20与氧化石墨烯溶液混合，进行反应；混合溶液中，吐温20的浓度为0.001～0.1％，氧化石墨烯的浓度为100～350ug/ml；赭曲霉毒素A与适配体结合：将赭曲霉毒素A溶液与荧光素标记的核酸适配体溶液混匀、孵育；荧光检测：向赭曲霉毒素A与适配体的混合溶液中加入经过吐温20修饰的氧化石墨烯、孵育，得到待检测溶液，用荧光光谱仪检测荧光光谱。本发明方法操作简单、检测快速且灵敏度高，对OTA的检出限达3.12×10‑9mol/L，本发明检测OTA具有非常高的特异性，特异性几乎达到100％。

Description

一种用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法
技术领域
本发明属于赭曲霉毒素A检测技术领域，具体涉及一种用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法。
背景技术
赭曲霉毒素A(mycotoxin ochratoxin A，OTA)是一种普遍存在于谷物、香料、葡萄酒、啤酒和动物饲料中的一种霉菌毒素，主要由赭曲霉、炭黑曲霉和青霉菌等真菌通过代谢活动产生。OTA的毒性极强，仅次于黄曲霉毒素，其会导致动物及人的肝脏、肾脏、神经系统及免疫系统的损伤，同时也具有致畸变、致突变和致癌变癌变的作用。OTA不仅毒性强，而且化学性质稳定，需要在250℃以上温度才会分解。我国食品安全标准规定，赭曲霉毒素A在食品中的含量不得高于5ug/kg，欧盟则规定成人食用的谷物中OTA含量不得高于3ug/kg，婴儿食用的谷物中OTA含量不得高于0.5ug/kg。检测OTA的传统方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、薄层层析法、和酶联免疫吸附法。气相色谱法和高效液相色谱法虽然灵敏准确，可是仪器设备昂贵，样品的前处理也较为复杂。薄层层析法和酶联免疫吸附法操作简单，但存在灵敏度不足、重复性差、耗费试剂多、检测周期长、无法自动化检测等问题。
氧化石墨烯作为一种平面二维材料，不仅具有与石墨烯类似的荧光淬灭功能，还具有吸附单链DNA的能力，但是氧化石墨烯的表面结构较为复杂，存在部分区域对单链DNA有强吸引作用，这会导致有部分结合了靶向物质的核酸适配体依然会被氧化石墨烯所吸附，从而使得该生物传感器检测灵敏度下降。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其包括，
氧化石墨烯的修饰：将吐温20与氧化石墨烯溶液混合，进行反应；混合溶液中，吐温20的浓度为0.001～0.1％，氧化石墨烯的浓度为100～350ug/ml；
赭曲霉毒素A与适配体结合：将赭曲霉毒素A溶液与荧光素标记的核酸适配体溶液混匀、孵育；
荧光检测：向赭曲霉毒素A与适配体的混合溶液中加入经过吐温20修饰的氧化石墨烯、孵育，得到待检测溶液，用荧光光谱仪检测荧光光谱。
作为本发明所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法的一种优选方案：所述氧化石墨烯的修饰，包括，将浓度为400ug/ml的氧化石墨烯溶液超声分散30min，超声功率为300W，将体积分数为0.02％的吐温20与等体积氧化石墨烯溶液混合，使得混合溶液中吐温20的浓度为0.01％，氧化石墨烯浓度为200ug/ml。
作为本发明所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法的一种优选方案：所述氧化石墨烯的修饰，其中，所述进行反应，温度为室温，反应时间为1h。
作为本发明所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法的一种优选方案：所述荧光素标记的核酸适配体溶液，其中，所述荧光素，包括5-羧基荧光素。
作为本发明所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法的一种优选方案：所述荧光素标记的核酸适配体溶液，其中，所述适配体，序列为5’-FAM-GAT CGG GTGTGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-3’。
作为本发明所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法的一种优选方案：所述荧光素标记的核酸适配体溶液的浓度为400×10-9mol/L，所述荧光素标记的核酸适配体溶液是将所述荧光素标记的核酸适配体溶解于Tris Buffer，并经过95℃温浴5min。
作为本发明所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法的一种优选方案：所述将赭曲霉毒素A溶液与荧光素标记的核酸适配体溶液混匀、孵育，其中，所述孵育，温度为室温，时间为30min。
作为本发明所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法的一种优选方案：所述向赭曲霉毒素A与适配体的混合溶液中加入经过吐温20修饰的氧化石墨烯，其中，所述经过吐温20修饰的氧化石墨烯的体积占所述待检测溶液体积的10％。
作为本发明所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法的一种优选方案：所述荧光检测，激发波长为484nm，激发和发射狭缝均为5nm，检测525nm的荧光强度。
本发明的有益效果：本发明方法操作简单、检测快速且灵敏度高，对OTA的检出限达3.12×10-9mol/L，本发明检测OTA具有非常高的特异性，特异性几乎达到100％。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
图1为本发明工作原理示意图。
图2为为氧化石墨烯生物传感器对不同浓度OTA的检测图。
图3为氧化石墨烯生物传感器对不同浓度OTA检测的荧光光谱图。
图4为CTAB、寡核苷酸A15分别修饰氧化石墨烯对检测OTA灵敏度影响图。
图5为本发明对OTA检测的的特异性实验结果图。
图6为本发明吐温20浓度对检测灵敏度影响图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
实施例1：
实验步骤：
1.首先用超纯水将氧化石墨烯稀释至400ug/ml，然后超声30min，超声功率300W，使其充分分散。
2.取适量0.02％(体积分数)的吐温20与等量氧化石墨烯溶液混合，使得最终混合溶液中吐温20的浓度为0.01％，氧化石墨烯浓度为200ug/ml，并置于室温1h。
3.用Tris Buffer溶解被荧光素标记的核酸适配体(适配体序列：5’-FAM-GAT CGGGTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-3’)，配置成400×10-9mol/L的溶液，然后95℃温浴5min，室温冷却20min。
4.用Tris Buffer配置不同浓度的OTA标准溶液，分别为20×10-9mol/L、40×10- 9mol/L、80×10-9mol/L、160×10-9mol/L、320×10-9mol/L、400×10-9mol/L、800×10-9mol/L。
5.取OTA标准溶液50ul、适配体溶液100ul混匀，室温下孵育30min。
6.加入20ul吐温20修饰的氧化石墨烯溶液，适量体积Tris Buffer，使得溶液最终体积为200ul，室温下孵育30min，用Fluoro Max4荧光光谱仪检测混合溶液的荧光光谱，并得到525nm的荧光强度。其中激发波长设置为484nm，激发和发射狭缝均为5nm。
本发明Tris Buffer配方：10×10-6mol/L Tris，5×10-6mol/L KCl，20×10-6mol/LCaCl2，120×10-6mol/L NaCl，pH值为8.0。
本发明方法操作简单、检测快速且灵敏度高，对OTA的检出限达3.12×10-9mol/L。
实施例2：
实验步骤：
1.红酒：Tris Buffer＝1：100混合，并加入OTA，使得OTA在红酒中的最终浓度分别为20×10-9mol/L、200×10-9mol/L、400×10-9mol/L、800×10-9mol/L。
2.用超纯水将氧化石墨烯稀释至400ug/ml，然后超声30min，超声功率300W，使其充分分撒。
3.取0.02％(体积分数)的吐温20与等体积的氧化石墨烯溶液混合，使得最终混合溶液中吐温20的浓度为0.01％，氧化石墨烯浓度为200ug/ml，并置于室温1h。
4.用Tris Buffer溶解被荧光素标记的核酸适配体(适配体序列：5’-FAM-GAT CGGGTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-3’)，配置成400×10-9mol/L的溶液，然后95℃温浴5min，室温冷却20min。
5.取混有不同浓度OTA的红酒稀释液50ul、适配体溶液100ul混匀，室温下孵育30min。
6.加入20ul吐温20修饰的氧化石墨烯溶液，适量体积Tris Buffer，使得溶液最终体积为200ul，室温下孵育30min，用Fluoro Max4荧光光谱仪检测混合溶液的荧光光谱，并得到525nm的荧光强度。其中激发波长设置为484nm，激发和发射狭缝均为5nm。
加标试验结果见表1。
表1
实施例3：
实验步骤：
1.取10g咖啡，用200ml，80℃超纯水萃取两分钟，过滤，并用7000r/min速度离心20min，取上清，制得咖啡原液。
2.分别取7份咖啡原液100ul，与Tris Buffer混合(1:100)，制得咖啡稀释液，并加入OTA，使得最终咖啡稀释液中OTA的浓度分别为20×10-9mol/L、200×10-9mol/L、400×10- 9mol/L、800×10-9mol/L。
3.用超纯水将氧化石墨烯稀释至400ug/ml，然后超声30min，超声功率300W，使其充分分撒。
4.取适量0.02％的吐温20与等量氧化石墨烯溶液混合，使得最终混合溶液中吐温20的浓度为0.01％，氧化石墨烯浓度为200ug/ml，并置于室温1h。
5.用Tris Buffer溶解被荧光素标记的核酸适配体(适配体序列：5’-FAM-GAT CGGGTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-3’)，配置成400×10-9mol/L的溶液，然后95℃温浴5min，室温冷却20min。
6.取混有不同浓度OTA的咖啡稀释液50ul、适配体溶液100ul混匀，室温下孵育30min。
7.加入20ul吐温20修饰的氧化石墨烯溶液，适量体积Tris Buffer，使得溶液最终体积为200ul，室温下孵育30min，用Fluoro Max4荧光光谱仪检测混合溶液的荧光光谱，并得到525nm的荧光强度。其中激发波长设置为484nm，激发和发射狭缝均为5nm。
加标试验结果见表2。
表2
图1为本发明工作原理图，氧化石墨烯在荧光共振能量转移的作用下，核酸适配体所带的荧光会被淬灭掉，但是当反应体系存在靶向物质时，核酸适配体会与靶向物质结合，其三维结构亦会发生改变，进而从氧化石墨烯上解析下来，此时荧光又会恢复。图2为氧化石墨烯生物传感器对不同浓度OTA(5×10-9mol/L，10×10-9mol/L,20×10-9mol/L,40×10- 9mol/L,80×10-9mol/L,100×10-9mol/L,200×10-9mol/L)的检测，其线性范围为5×10- 9mol/L至200×10-9mol/L，检测限为3.12×10-9mol/L。图3为氧化石墨烯生物传感器对不同浓度OTA检测的荧光光谱图。
实施例4：
CTAB、寡核苷酸A15分别修饰氧化石墨烯对检测OTA灵敏度影响：
CTAB修饰氧化石墨烯：
实验步骤：
1.首先用超纯水将氧化石墨烯稀释至400ug/ml，然后超声30min，超声功率300W，使其充分分撒。
2.用Tris Buffer溶解被荧光素标记的核酸适配体，配置成400×10-9mol/L的适配体溶液，然后95℃温浴5min，室温冷却20min。
3.CTAB修饰氧化石墨烯：取适量0.02％的CTAB与等量氧化石墨烯溶液混合，使得最终混合溶液中吐温20的浓度为0.01％，氧化石墨烯浓度为200ug/ml，并置于室温1h。
4.取4×10-6mol/L的OTA标准溶液50ul、适配体溶液100ul混匀，室温下孵育30min。
5.分别加入不同阻塞剂修饰的氧化石墨烯溶液20ul，并加入适量Tris Buffer使得最终溶液体积为200ul，室温下孵育30min，用Fluoro Max4荧光光谱仪检测混合溶液的荧光光谱，并得到525nm的荧光强度。其中激发波长设置为484nm，激发和发射狭缝均为5nm。
寡核苷酸A15修饰氧化石墨烯：
实验步骤：
1.首先用超纯水将氧化石墨烯稀释至400ug/ml，然后超声30min，超声功率300W，使其充分分撒。
2.用Tris Buffer溶解被荧光素标记的核酸适配体，配置成400×10-9mol/L的适配体溶液，然后95℃温浴5min，室温冷却20min。
3.寡核苷酸A15修饰氧化石墨烯：取适量200×10-9mol/L的寡核苷酸A15与等量氧化石墨烯溶液混合，使得混合溶液中A15的最终浓度为100×10-9mol/L，氧化石墨烯浓度为200ug/ml，并置于室温1h。
4.取4×10-6mol/L的OTA标准溶液50ul、适配体溶液100ul混匀，室温下孵育30min。
5.分别加入不同阻塞剂修饰的氧化石墨烯溶液20ul，并加入适量Tris Buffer使得最终溶液体积为200ul，室温下孵育30min，用Fluoro Max4荧光光谱仪检测混合溶液的荧光光谱，并得到525nm的荧光强度。其中激发波长设置为484nm，激发和发射狭缝均为5nm。
实验结果见图4，从图4可知，与CTAB和A15相比较，吐温20的荧光增强效果显著更优，图4中，每组数据左侧代表不加入OTA的荧光值，右侧代表加入OTA的荧光值。
经过研究发现，氧化石墨烯表面具有较多的含氧官能团如羧基和羟基，这些含氧官能团具有较强的亲水活性，使得氧化石墨烯能够均匀的分散在水相当中，氧化石墨烯并不像大多数纳米材料一样，它具有各向异性，在氧化石墨烯的二维分子结构平面上，含氧官能团区域因为其携带负电荷，与同样携带负电荷的核酸适配体产生静电斥力，所以对核酸适配体的吸附能力较弱。相反，其他不具有含氧官能团的区域，对核酸适配体的吸附能力较强。正是因为氧化石墨烯表面对适配体吸附力大小的不均匀，导致和目标检测物结合的核酸适配体并不能完全从氧化石墨烯表面解析下来，大约只有20％的适配体能够顺利从氧化石墨烯表面解析。
而本发明采用分子阻塞剂修饰氧化石墨烯，覆盖氧化石墨烯表面的强吸附区域，减弱氧化石墨烯对适配体的吸附力，进而提高氧化石墨烯生物传感器对目标检测物的检测灵敏度。研究发现不同的阻塞剂修饰氧化石墨烯能够明显影响目标物的检测。如果阻塞剂的阻碍功能过强，会导致氧化石墨烯不能吸附适配体；如果阻塞剂的阻碍功能太弱，则不能有效的减弱氧化石墨烯对适配体的吸附，从而不能提高氧化石墨烯生物传感器的检测灵敏度。因此，选择合适的阻塞剂种类是尤为关键的。本发明中，吐温20作为表面活性剂，因为疏水作用能够和氧化石墨烯表面不具有含氧官能团的区域紧密结合，从而使得氧化石墨烯和适配体之间距离增大，吸附力减少。
实施例5：
本发明对OTA检测的的特异性：
1.首先用超纯水将氧化石墨烯稀释至400ug/ml，然后超声30min，超声功率300W，使其充分分撒。
2.取适量0.02％的吐温20与等量氧化石墨烯溶液混合，使得最终混合溶液中吐温20的浓度为0.01％，石墨烯浓度为200ug/ml，并置于室温1h。
3.用Tris Buffer溶解被荧光素标记的核酸适配体，配置成400×10-9mol/L的溶液，然后95℃温浴5min，室温冷却20min。
4.用Tris Buffer配置4×10-6mol/L浓度的OTA、OTB、AFM1、AFB1、ZEN标准溶液.
5.分别取OTA、OTB、AFM1、AFB1、ZEN标准溶液50ul、适配体溶液100ul混匀，室温下孵育30min。
6.加入20ul吐温20修饰的氧化石墨烯溶液，适量体积Tris Buffer，使得溶液最终体积为200ul，室温下孵育30min，用Fluoro Max4荧光光谱仪检测混合溶液的荧光光谱，并得到525nm的荧光强度。其中激发波长设置为484nm，激发和发射狭缝均为5nm。
实验结果如图5所示，从图5可以看出，相对于OTA，加入其它四种真菌毒素并不能使荧光信号显著恢复，说明本发明检测OTA具有非常高的特异性，本发明发明检测OTA特异性几乎达到100％。
实施例6：
实验步骤：
1.首先用超纯水将氧化石墨烯稀释至400ug/ml，然后超声30min，超声功率300W，使其充分分撒。
2.用Tris Buffer溶解被荧光素标记的核酸适配体，配置成400×10-9mol/L的适配体溶液，然后95℃温浴5min，室温冷却20min。
3.分别用0.002％、0.01％、0.02％、0.1％、0.2％的适量吐温20溶液与等量的氧化石墨烯溶液混合，使得最终混合溶液中的吐温20浓度分别为：0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.1％，氧化石墨烯的浓度为200ug/ml，并置于室温1h。
4.取4×10-6mol/L的OTA标准溶液50ul、适配体溶液100ul混匀，室温下孵育30min。
5.分别加入不同浓度吐温20修饰的氧化石墨烯溶液20ul，并加入适量TrisBuffer使得最终溶液体积为200ul，室温下孵育30min，用Fluoro Max4荧光光谱仪检测混合溶液的荧光光谱，并得到525nm的荧光强度。其中激发波长设置为484nm，激发和发射狭缝均为5nm。
实验结果如图6所示，从图6可以看出，随着吐温20浓度升高，荧光信号会显著增大，但从对照组可以看出，若吐温20浓度太高，会导致氧化石墨烯对初始未结合OTA的适配体吸附能力显著减弱，从而使得加入OTA之后的荧光信号增幅减小。而吐温20浓度过低则增强荧光信号恢复能力不足，因此，吐温20的最适浓度为0.01％。图6中，每组数据左侧代表不加入OTA的荧光值，右侧代表加入OTA的荧光值。
本发明方法操作简单、检测快速且灵敏度高，对OTA的检出限达3.12×10-9mol/L，本发明检测OTA具有非常高的特异性，特异性几乎达到100％。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (9)

1.一种用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于：包括，
氧化石墨烯的修饰：将吐温20与氧化石墨烯溶液混合，进行反应；混合溶液中，吐温20的浓度为0.001～0.1％，氧化石墨烯的浓度为100～350ug/ml；
赭曲霉毒素A与适配体结合：将赭曲霉毒素A溶液与荧光素标记的核酸适配体溶液混匀、孵育；
荧光检测：向赭曲霉毒素A与适配体的混合溶液中加入经过吐温20修饰的氧化石墨烯、孵育，得到待检测溶液，用荧光光谱仪检测荧光光谱。
2.如权利要求1所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述氧化石墨烯的修饰，包括，将浓度为400ug/ml的氧化石墨烯溶液超声分散30min，超声功率为300W，将体积分数为0.02％的吐温20与等体积氧化石墨烯溶液混合，使得混合溶液中吐温20的浓度为0.01％，氧化石墨烯浓度为200ug/ml。
3.如权利要求1或2所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述氧化石墨烯的修饰，其中，所述进行反应，温度为室温，反应时间为1h。
4.如权利要求1或2所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述荧光素标记的核酸适配体溶液，其中，所述荧光素，包括5-羧基荧光素。
5.如权利要求4所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述荧光素标记的核酸适配体溶液，其中，所述适配体，序列为5’-FAM-GAT CGG GTG TGGGTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-3’。
6.如权利要求5所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述荧光素标记的核酸适配体溶液的浓度为400×10-9mol/L，所述荧光素标记的核酸适配体溶液是将所述荧光素标记的核酸适配体溶解于Tris Buffer，并经过95℃温浴5min。
7.如权利要求1、2、5或6任一所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述将赭曲霉毒素A溶液与荧光素标记的核酸适配体溶液混匀、孵育，其中，所述孵育，温度为室温，时间为30min。
8.如权利要求6所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述向赭曲霉毒素A与适配体的混合溶液中加入经过吐温20修饰的氧化石墨烯，其中，所述经过吐温20修饰的氧化石墨烯的体积占所述待检测溶液体积的10％。
9.如权利要求1、2、5、6或8任一所述的用于检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述荧光检测，激发波长为484nm，激发和发射狭缝均为5nm，检测525nm的荧光强度。
CN201810792034.7A 2018-07-18 2018-07-18 一种用于检测赭曲霉毒素a的生物传感器的制备方法 Active CN108956568B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810792034.7A CN108956568B (zh) 2018-07-18 2018-07-18 一种用于检测赭曲霉毒素a的生物传感器的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810792034.7A CN108956568B (zh) 2018-07-18 2018-07-18 一种用于检测赭曲霉毒素a的生物传感器的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108956568A true CN108956568A (zh) 2018-12-07
CN108956568B CN108956568B (zh) 2021-04-13

Family

ID=64497446

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810792034.7A Active CN108956568B (zh) 2018-07-18 2018-07-18 一种用于检测赭曲霉毒素a的生物传感器的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108956568B (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109668864A (zh) * 2018-12-14 2019-04-23 福建中医药大学 氮化碳纳米片耦合适配体传感的赭曲霉毒素a荧光检测方法
CN109725165A (zh) * 2018-12-20 2019-05-07 江苏大学 一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法
CN110261362A (zh) * 2019-08-06 2019-09-20 青岛农业大学 一种同时检测玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素a的生物传感器、其制备方法及其检测方法
CN110702914A (zh) * 2019-09-17 2020-01-17 江苏大学 一种检测赭曲霉毒素a的荧光生物传感器的制备方法
CN111424072A (zh) * 2020-04-09 2020-07-17 济南大学 一种检测赭曲霉毒素a的电化学生物传感器及其制备方法
CN111537483A (zh) * 2020-05-08 2020-08-14 青岛农业大学 检测冈田酸的荧光核酸适配体传感器、其制备方法与使用该传感器检测冈田酸的方法
CN113049562A (zh) * 2021-03-19 2021-06-29 苏州健雄职业技术学院 一种快速定量检测bpa的荧光方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103525927A (zh) * 2013-10-11 2014-01-22 南京师范大学 一种检测赭曲霉毒素a的方法
CN106066316A (zh) * 2016-05-25 2016-11-02 江南大学 一种基于核壳型上转换发光标记与氧化石墨烯发光共振能量转移检测赭曲霉毒素a的方法
CN106596483A (zh) * 2016-12-09 2017-04-26 中国人民大学 一种赭曲霉毒素a的生物传感检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103525927A (zh) * 2013-10-11 2014-01-22 南京师范大学 一种检测赭曲霉毒素a的方法
CN106066316A (zh) * 2016-05-25 2016-11-02 江南大学 一种基于核壳型上转换发光标记与氧化石墨烯发光共振能量转移检测赭曲霉毒素a的方法
CN106596483A (zh) * 2016-12-09 2017-04-26 中国人民大学 一种赭曲霉毒素a的生物传感检测方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AI-LI SUN ET AL.: "Homogeneous electrochemical detection of ochratoxin A in foodstuff using aptamer–graphene oxide nanosheets and DNase I-based target recycling reaction", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *
WENBO LU ET AL.: "Synthesis of Au nanoparticles decorated graphene oxide nanosheets: Noncovalent functionalization by TWEEN 20 in situ reduction of aqueous chloroaurate ions for hydrazine detection and catalytic reduction of 4-nitrophenol", 《JOURNAL OF HAZARDOUS MATERIALS》 *
喻理等: "基于石墨烯的真菌毒素检测方法研究进展", 《分析测试学报》 *
盛琳峰: "基于氧化石墨烯在生物传感器方面的应用研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 信息科技辑》 *
谭杰等: "食品中霉菌毒素样品前处理及分析方法研究进展", 《分析测试学报》 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109668864A (zh) * 2018-12-14 2019-04-23 福建中医药大学 氮化碳纳米片耦合适配体传感的赭曲霉毒素a荧光检测方法
CN109725165A (zh) * 2018-12-20 2019-05-07 江苏大学 一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法
CN109725165B (zh) * 2018-12-20 2022-03-22 江苏大学 一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法
CN110261362A (zh) * 2019-08-06 2019-09-20 青岛农业大学 一种同时检测玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素a的生物传感器、其制备方法及其检测方法
CN110702914A (zh) * 2019-09-17 2020-01-17 江苏大学 一种检测赭曲霉毒素a的荧光生物传感器的制备方法
CN111424072A (zh) * 2020-04-09 2020-07-17 济南大学 一种检测赭曲霉毒素a的电化学生物传感器及其制备方法
CN111424072B (zh) * 2020-04-09 2022-10-18 济南大学 一种检测赭曲霉毒素a的电化学生物传感器及其制备方法
CN111537483A (zh) * 2020-05-08 2020-08-14 青岛农业大学 检测冈田酸的荧光核酸适配体传感器、其制备方法与使用该传感器检测冈田酸的方法
CN111537483B (zh) * 2020-05-08 2021-05-21 青岛农业大学 检测冈田酸的荧光核酸适配体传感器、其制备方法与使用该传感器检测冈田酸的方法
CN113049562A (zh) * 2021-03-19 2021-06-29 苏州健雄职业技术学院 一种快速定量检测bpa的荧光方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108956568B (zh) 2021-04-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108956568A (zh) 一种用于检测赭曲霉毒素a的生物传感器的制备方法
Zhou et al. DNA functionalized metal and metal oxide nanoparticles: Principles and recent advances in food safety detection
Hua et al. Recent advances in gold nanoparticles-based biosensors for food safety detection
He et al. Highly selective, sensitive and rapid detection of Escherichia coli O157: H7 using duplex PCR and magnetic nanoparticle-based chemiluminescence assay
Huang et al. A molecular beacon and graphene oxide-based fluorescent biosensor for Cu2+ detection
Fu et al. Rapid colorimetric gene-sensing of food pathogenic bacteria using biomodification-free gold nanoparticle
Li et al. An ultrasensitive and switch-on platform for aflatoxin B1 detection in peanut based on the fluorescence quenching of graphene oxide-gold nanocomposites
Zhu et al. A non-enzymatic electrochemical immunoassay for quantitative detection of Escherichia coli O157: H7 using Au@ Pt and graphene
Wang et al. The gold-nanoparticle-based surface plasmon resonance light scattering and visual DNA aptasensor for lysozyme
Kim et al. Glucose oxidase-like activity of cerium oxide nanoparticles: Use for personal glucose meter-based label-free target DNA detection
Wang et al. A simple and sensitive colorimetric detection of silver ions based on cationic polymer-directed AuNPs aggregation
Wang et al. A label-free and enzyme-free fluorescent assay for mercury ions based on T-Hg (II)-T nanoladders and DNA-templated silver nanoclusters/graphene oxide nanocomposites
Xu et al. Sensitive colorimetric detection of Salmonella enteric serovar typhimurium based on a gold nanoparticle conjugated bifunctional oligonucleotide probe and aptamer
Schmitz et al. Colorimetric detection of Pseudomonas aeruginosa by aptamer-functionalized gold nanoparticles
Wang et al. Improving the detection limit of Salmonella colorimetry using long ssDNA of asymmetric-PCR and non-functionalized AuNPs
Wang et al. Electrochemiluminescent (ECL) biosensor for Burkholderia pseudomallei based on cobalt-doped MOF decorated with gold nanoparticles and N-(4-aminobutyl)-N-(ethylisoluminol)
Wang et al. A lateral flow assay for copper (II) utilizing catalytic and stem-loop based signal amplification
Li et al. Review of paper-based microfluidic analytical devices for in-field testing of pathogens
Zhao et al. Determination of carbendazim by aptamer-based fluorescence resonance energy transfer (FRET)
Qin et al. Homogeneous label-free colorimetric strategy for convenient bleomycin detection based on bleomycin enhanced Fe (ii)–H 2 O 2–ABTS reaction
He et al. A versatile and smartphone-integrated detection platform based on Exo III-assisted recycling and DNAzyme amplification
Lv et al. Trypsin-gold nanoparticle conjugates: binding, enzymatic activity, and stability
Wen et al. A G-triplex and G-quadruplex concatemer-enhanced fluorescence probe coupled with hybridization chain reaction for ultrasensitive aptasensing of ochratoxin A
Fan et al. A near-infrared-II fluorescence anisotropy strategy for separation-free detection of adenosine triphosphate in complex media
Yan et al. Yellow pigment of Metarhizium anisopliae and its application to the dyeing of fabrics

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant